DE1001260B

DE1001260B - Process for the production of pure tetracyclines

Info

Publication number: DE1001260B
Application number: DE1955P0013644
Authority: DE
Original assignee: Pfizer Inc
Current assignee: Pfizer Inc
Priority date: 1954-02-24
Filing date: 1955-02-24
Publication date: 1957-01-24
Also published as: DK101966C; AT219196B

Description

DEUTSCHESGERMAN

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Reinigung von Tetracyclin und Chlortetracyclin, welche einen breiten Wirkungsbereich besitzende Antibiotika darstellen, über bestimmte Komplexverbindungen mit mehrwertigen Metallen und Aminen.The invention relates to a method for purifying tetracycline and chlortetracycline, which have a broad Represent antibiotics possessing a range of action, via certain complex compounds with polyvalent ones Metals and amines.

Chlortetracyclin (»Aureomycinec) und Tetracyclin (»Tetracyn«) sind zwei einen breiten Wirkungsbereich besitzende Antibiotika, die strukturell eng miteinander verwandt sind. Sie werden im folgenden als Tetracycline bezeichnet. Dieser Ausdruck bezieht sich nicht nur auf die amphoteren Verbindungen, sondern auch auf deren Metallsalze, wie die Alkali- oder die Erdalkalisalze, und deren Salze mit Säuren, z. B. Mineralsäuren. Diese Verbindungen besitzen die FormelChlortetracycline (»Aureomycinec) and Tetracycline ("Tetracyn") are two broad areas of action Possessing antibiotics that are structurally closely related. They are hereinafter referred to as tetracyclines designated. This term refers not only to the amphoteric compounds, but also on their metal salts, such as the alkali or alkaline earth metal salts, and their salts with acids, e.g. B. mineral acids. These compounds have the formula

Verfahren zur Herstellung
von reinen TetracyclinenMethod of manufacture
of pure tetracyclines

Zusatz zur Patentanmeldung P 10395 IVb/12 οAddition to patent application P 10395 IVb / 12 ο

Anmelder:Applicant:

Chas. Pfizer & Co., Inc., Brooklyn, N. Y.
(V. St. A.)Chas. Pfizer & Co., Inc., Brooklyn, NY
(V. St. A.)

Vertreter: Dr. W. Beil, Rechtsanwalt,
Frankfurt/M.-Höchst, Antoniterstr. 36Representative: Dr. W. Beil, lawyer,
Frankfurt / M.-Höchst, Antoniterstr. 36

Beanspruchte Priorität:
V. St. v. Amerika vom 24. Februar 1954Claimed priority:
V. St. v. America February 24, 1954

— CONH,- CONH,

OHOH

In der R₂ = Cl oder H bedeutet.In which R ₂ = Cl or H means.

Diese Tetracycline werden oft durch Gärung hergestellt. In diesem Fall liegen die Antibiotika in Form verdünnter wäßriger Lösungen vor, die mit verschiedenen organischen und anorganischen Stoffen stark verunreinigt sind, von denen sie vor ihrer Anwendung als Arzneimittel befreit werden müssen. Auch wenn Tetracycline für bestimmte Zwecke, z. B. als Kraftfutter für Tiere, verwendet werden sollen, ist es oft erwünscht, wenigstens eine teilweise Reinigung vorzunehmen.These tetracyclines are often made through fermentation. In this case, the antibiotics are in shape dilute aqueous solutions that are heavily contaminated with various organic and inorganic substances from which they must be freed before they can be used as medicinal products. Even if tetracyclines for certain purposes, e.g. B. as concentrated feed for animals, it is often desirable at least to carry out a partial cleaning.

In der Patentanmeldung P 10 395 IVb/12o wurde gezeigt, daß Oxytetracyclin durch Fällung mittels organischer Basen in Gegenwart mehrwertiger Metallionen aus unreinen verdünnten wäßrigen Lösungen abgetrennt und gereinigt werden kann. Es wurde nun gefunden, daß dieses Verfahren nicht nur auf Oxytetracyclin, sondern auch auf Chlortetracyclin und Tetracyclin in gleicher Weise anwendbar ist.In the patent application P 10 395 IVb / 12o was showed that oxytetracycline by precipitation by means of organic bases in the presence of polyvalent metal ions can be separated from impure dilute aqueous solutions and purified. It has now been found that this procedure applies not only to oxytetracycline, but also to chlortetracycline and tetracycline in is equally applicable.

Die Fällung der in Wasser schwer löslichen Tetracyclinkomplexverbindungen wird dadurch erreicht, daß die wäßrige Antibiotikalösung mit verhältnismäßig wasserlöslichen organischen Aminen und quaternären Ammoniumsalzen mit mindestens 8 Kohlenstoffatomen im Molekül in Gegenwart von mehrwertigen Metallionen behandelt wird.The precipitation of the tetracycline complex compounds, which are sparingly soluble in water is achieved in that the aqueous antibiotic solution with relatively water-soluble organic amines and quaternary Ammonium salts with at least 8 carbon atoms in the molecule in the presence of polyvalent metal ions is treated.

Die ausgefällte Komplexverbindung aus Tetracyclin bzw. Chlortetracyclin, organischen Basen und mehrwertigen Metallionen kann als solche für verschiedene Zwecke, z. B. als Zusatz zu Tierfutter, als therapeutisches Mittel, z. B. als Bakterizid, oder auch als Pflanzenbakterizid verwendet werden. Einige der Reaktions- The precipitated complex compound of tetracycline or chlortetracycline, organic bases and polyvalent ones Metal ions can be used as such for various purposes, e.g. B. as an additive to animal feed, as a therapeutic Means, e.g. B. can be used as a bactericide, or as a plant bactericide. Some of the reaction

produkte, welche mit Hilfe von höhermolekularen quaternären Ammoniumsalzen gewonnen wurden, sind ungewöhnlich wirksam gegenüber einer großen Anzahl verschiedener Organismen, und zwar in viel stärkerem Maße, als es auf Grund der bekannten Wirksamkeit der einzelnen Bestandteile zu erwarten gewesen wäre.products that have been obtained with the help of higher molecular weight quaternary ammonium salts unusually effective against a large number of different organisms, and in much stronger ways Measures than would have been expected based on the known effectiveness of the individual components.

Die reinen Tetracycline lassen sich aus den Komplexverbindungen auf verschiedene Weise als freie amphotere Verbindung oder Salz, ζ. B. als Hydrochlorid, abtrennen.The pure tetracyclines can be derived from the complex compounds in various ways as free amphoteric Compound or salt, ζ. B. as the hydrochloride, separate.

Dabei wird die ausgefällte Komplexverbindung z. B. in einem Lösungsmittel mit einer starken löslichen Säure, vorzugsweise einer Mineralsäure, behandelt. Bei richtiger Wahl des Lösungsmittels können auch amphotere Tetracycline aus der erhaltenen Lösung ausgefällt werden. Niedermolekulare aliphatische Alkohole, z. B. Methanol und Äthanol und niedermolekulare Ketone (ζ. B. Aceton), sind für diesen Zweck besonders brauchbar. Die Komplexverbindung kann aber auch in einem niedermolekularen aliphatischen Alkohol mit Salzsäure oder Calciumchlorid behandelt, anschließend gegebenenfalls mittels eines entfärbend wirkenden Absorptionsmittels geklärt und durch Zugabe von weiterer Salzsäure in reines kristallines Tetracyclin- bzw. Chlortetracyclinhydrochlorid übergeführt werden.The precipitated complex compound is z. B. in a solvent with a strong soluble acid, preferably a mineral acid. With the right choice of solvent, amphoteric Tetracyclines are precipitated from the resulting solution. Low molecular weight aliphatic alcohols, e.g. B. Methanol and ethanol and low molecular weight ketones (e.g. acetone) are particularly useful for this purpose. However, the complex compound can also be used in a low molecular weight aliphatic alcohol with hydrochloric acid or calcium chloride, then optionally clarified by means of a decolorizing absorbent and by adding more hydrochloric acid be converted into pure crystalline tetracycline or chlortetracycline hydrochloride.

Das Verfahren läßt sich auf verschiedene Arten verunreinigter Tetracyclinlösungen anwenden. Zum Beispiel können unreine Tetracyclinlösungen, die durch katalytische Reduktion von Chlortetracyclin erhalten wurden, als Ausgangslösung verwendet werden. Es können aberThe method can be applied to various types of contaminated tetracycline solutions. For example impure tetracycline solutions obtained by catalytic reduction of chlortetracycline can can be used as a starting solution. But it can

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auch tetracyclinhaltige Gärlösungen verwendet werden. stigsten Mengenverhältnisse kann der Fachmann leicht Diese besitzen gewöhnlich eine Wirksamkeit von 50Oy ermitteln. Ein Zusatz von mehr als 11 Säure je kg je ml und enthalten bereits mehrwertige Metallionen als Antibiotikum empfiehlt sich jedoch meistens nicht. Verunreinigungen aus der ursprünglichen Nährlösung. Die Kristallisation wird am zweckmäßigsten bei Zimmer-Solchen Lösungen wird dann lediglich ein organisches 5 temperatur durchgeführt, eine niedrigere Temperatur Amin oder ein quaternäres Ammoniumsalz, das sich kann jedoch etwas bessere Ausbeuten bewirken. Bei wenigstens teilweise in einer solchen Nährlösung löst, höheren Temperaturen sinkt die Ausbeute etwas, hinzugefügt und die Lösung anschließend vorzugsweise Die Wiedergewinnung der Tetracycline kann nicht alkalisch gemacht oder auf einen neutralen bis basischen nur durch direkte Kristallisation seiner sauren Salze p_H-Wert eingestellt. Die gebildete Fällung wird dann io aus den metallorganischen Komplexverbindungen erabgetrennt. Das Tetracyclinkomplexsalz enthält sowohl folgen, sondern diese können auch mit Hilfe einer Säure Metallionen als auch die zugesetzte organische Base und in einem organischen Lösungsmittel, z. B. Methanol, besitzt eine Wirksamkeit von etwa 300 bis 500 γ je mg. gelöst werden, wobei die Gegenwart kleinerer Mengen Es ist aber möglich, in einem Einstufenverfahren gleich- Wasser nicht schädlich ist. Für diesen Zweck wird meist zeitig eine weitgehende Abtrennung und Reinigung der 15 Schwefelsäure verwendet. Ausgefällte Verunreinigungen, Tetracycline zu erzielen. z. B. Calciumsulfat, werden durch Filtrieren entfernt, Wie zuvor erwähnt, können aus den Komplexsalzen und der p_H-Wert der Lösung wird auf einen Wert von der Tetracycline z. B. Salze hergestellt werden. Zu etwa 5 bis 7 erhöht. Auf diese Weise wird eine Fällung diesem Zweck werden sie vorzugsweise nach der Ent- erhalten, die eine große Menge des freien amphoteren fernung von überschüssiger Feuchtigkeit in nieder- 20 Tetracyclins enthält. Ein Teil der Fällung kann in molekularen Alkoholen oder Ketonen gelöst. Methanol Verbindung mit mehrwertigen Metallen vorliegen. Die ist besonders gut geeignet, weil es wohlfeil und leicht Gegenwart eines Trennmittels, z. B. Äthylendiamintetrawiederzugewinnen ist und dazu beiträgt, daß ein Produkt essigsäure, begünstigt die Herstellung von amphoterem von hoher Reinheit erhalten wird. Im allgemeinen wird Antibiotikum in größerer Reinheit. Dieses kann dann eine methanolische Lösung, die etwa 4 bis 81 Lösungs- 25 gewünschtenfalls in üblicher Weise in ein kristallines mittel je kg Tetracyclin enthält, hergestellt, und dann Säuresalz umgewandelt werden. Das organische Lösungsmit konzentrierter Salzsäure behandelt. In diesem Fall mittel kann durch Destillation entfernt und vor dem kann das freie amphotere Tetracyclin die Neigung Filtrieren durch Wasser ersetzt werden. Hierdurch haben, auszufallen, bevor das Antibiotikum in sein wird die Ausbeute etwas erhöht. Das Produkt kann aber Hydrochlorid umgewandelt ist. Durch weiteren Zusatz 30 auch zuerst filtriert und dann das Lösungsmittel zur Ervon Säure wird der größte Teil des Niederschlags jedoch zielung einer zweiten Fällung etwas geringerer Wirksamwieder gelöst, ein kleiner Rückstand kann jedoch zurück- keit verwendet werden, die dann weiter behandelt wird, bleiben. Um solche Verluste zu vermeiden, wird die Eine Vielzahl von organischen Aminen und quater-Komplexverbindung vorzugsweise dem Methanol züge- nären Ammoniumverbindungen kann im vorliegenden setzt, während der p_H-Wert der Lösung durch Zusatz von 35 Verfahren zur Herstellung der neuen Tetracyclinkonzentrierter Salzsäure ständig bei etwa 2 bis 2,5 ge- komplexverbindungen verwendet werden. Es werden halten wird. Auf diese Weise wird eine klare Lösung jedoch lediglich solche organischen Basen verwendet, die erhalten. Calciumchlorid kann auch zur Erhöhung mindestens 8 Kohlenstoffatome im Molekül besitzen der Löslichkeit der Tetracyclinkomplexverbindung in und zu schwerlöslichen Komplexverbindungen führen, Methanol und zur Verhinderung seiner vorzeitigen 40 die praktisch die Gesamtmenge des Tetracyclins ent-Ausfällung verwendet werden. Aus den auf diese Weise halten. Gärlösungen haben im allgemeinen eine Wirksamgewonnenen klaren Lösungen kann dann durch Zugabe keit von mindestens 500y je Liter. Die organische Base einer konzentrierten Säure, z. B. Salzsäure, das gewünschte oder ihre Salze sollten in Wasser verhältnismäßig löslich einfache saure Salz der Tetracycline ausgefällt werden. sein, damit die Reaktion zur Bildung der unlöslichen Wenn vorher Salzsäure zur leichteren Lösung des Korn- 45 Tetracyclinkomplexverbindungen innerhalb einer angeplexsalzes verwendet wird, sind etwa 0,4 bis 0,7 ecm messenen Zeit durchgeführt werden kann. Beispiele für konzentrierte Säure (36%) erforderlich, die eine 1 g bevorzugte organische Basen sind primäre, sekundäre Tetracyclin entsprechende Menge der Komplexver- und tertiäre Amine und quaternäre Ammoniumsalze, bindung lösen. Die erhaltenen Lösungen besitzen eine Besonders geeignet sind langkettige Alkyltrimethyl-Wirksamkeit von etwa 60 000 bis 150 000 y Tetracyclin 50 ammoniumchloride, deren Alkylgruppe 8 Kohlenstoffjß ml. Die klare Lösung kann dann mit einem Ad- atome oder mehr enthält. An Stelle der einzelnen Versorptionsmittel, z. B. Entfärbungskohle, zur Entfernung bindungen können auch technische, im Handel befindverschiedener färbender Verunreinigungen behandelt liehe Gemische dieser Verbindungen verwendet werden, werden. Etwa 0,5 bis 1,5 g Kohle werden im allgemeinen Hierzu gehören Alkyl- und Alkenyltrimethylammoniumje g antibiotisch wirksamen Tetracyclins verwendet, 55 chloride, deren Kohlenstoffketten 8 bis 18 Kohlenstoffwobei eine größere Menge ein Produkt größerer Reinheit atome enthalten. Längere Alkylketten oder Arylalkylohne große Verluste infolge Adsorption des Antibiotikums reste können an Stelle eines oder mehrerer Alkylreste liefert. Das Adsorptionsmittel kann mittels Filtrierhilfe stehen. Unter den Aminen sind die langkettigen alientfernt und zur Entfernung von anhaftendem Material phatischen Amine, z. B. Octylamin, Nonylamin oder mit einem angesäuerten Lösungsmittel gewaschen werden. 60 Decylamin oder technische Gemische dieser Substanzen, Kristallines Tetracyclinhydrochlorid wird aus der besonders wertvoll. Andere organische Basen, z. B. erhaltenen geklärten Lösung dann durch Zusatz von heterocyclische Verbindungen und Cycloalkylamine, oder konzentrierter Salzsäure hergestellt. Gewünschtenfalls quaternäre Basen dieser Verbindungen können ebenfalls kann die Lösung vor dem Kristallisieren eingeengt verwendet werden.fermentation solutions containing tetracycline can also be used. The person skilled in the art can easily determine the most efficient proportions. These usually have an effectiveness of 50%. An addition of more than 11 acid per kg per ml and already contain polyvalent metal ions as an antibiotic is usually not recommended. Impurities from the original nutrient solution. The crystallization is most expedient in the case of room solutions such as this, then only an organic temperature is carried out, a lower temperature amine or a quaternary ammonium salt, which can, however, lead to somewhat better yields. At least partially dissolves in such a nutrient solution, higher temperatures decreases the yield slightly, and the solution then preferably Recovery of tetracyclines can not alkalized or p to a neutral to basic only by direct crystallization of its acidic salts _H value set. The precipitate formed is then separated off from the organometallic complex compounds. The tetracycline complex salt contains both the following, but these can also with the help of an acid metal ions and the added organic base and in an organic solvent, e.g. B. methanol, has an effectiveness of about 300 to 500 γ per mg. However, it is possible in a one-step process to equal- water is not harmful. For this purpose, extensive separation and purification of the sulfuric acid is usually used at an early stage. Precipitated impurities to achieve tetracyclines. z. B. calcium sulfate, are removed by filtration, As mentioned above, may consist of the complex salts and the _pH value of the solution is such to a value of the tetracyclines. B. Salts are produced. Increased to about 5 to 7. In this way, a precipitate is obtained for this purpose, preferably after removal, which contains a large amount of the free amphoteric removal of excess moisture in low tetracycline. Part of the precipitation can be dissolved in molecular alcohols or ketones. Methanol is a compound with polyvalent metals. This is particularly suitable because it is cheap and easy to use a release agent such. B. Ethylenediamine tetra is recovered and contributes to the fact that a product is obtained acetic acid, favors the production of amphoteric of high purity. Generally, antibiotic is made in greater purity. This can then be a methanolic solution containing about 4 to 81% solution, if desired, in the usual way in a crystalline agent per kg of tetracycline, and then converted into an acid salt. Treated the organic solution with concentrated hydrochloric acid. In this case the medium can be removed by distillation and before the free amphoteric tetracycline the tendency can be replaced by water filtration. By doing this, having to fail before the antibiotic will be in will increase the yield somewhat. The product can but is converted to hydrochloride. With further additive 30 also first filtered and then the solvent for acid erosion, most of the precipitate is redissolved somewhat less effectively with the aim of a second precipitation, however a small residue can be used, which is then treated further. To such losses to be avoided, is preferably A variety of organic amines and quater-complex compound which methanol züge- nary ammonium compounds can is in the present, while the _pH value of the solution by the addition of 35 A process for the preparation of the new Tetracyclinkonzentrierter hydrochloric acid constantly at about 2 to 2.5 complex compounds can be used. It will hold up. In this way, however, a clear solution is used only those organic bases that are obtained. Calcium chloride can also have at least 8 carbon atoms in the molecule to increase the solubility of the tetracycline complex compound in and lead to poorly soluble complex compounds, methanol and to prevent its premature 40 the practically the total amount of tetracycline de-precipitation can be used. Hold off that way. Fermentation solutions generally have a clear solution can then be effectively obtained by adding at least 500y per liter. The organic base of a concentrated acid, e.g. B. hydrochloric acid, the desired salt or its salts should be precipitated in water relatively soluble simple acidic salt of the tetracyclines. If hydrochloric acid is used beforehand to more easily dissolve the grain tetracycline complex compounds within a complex salt, about 0.4 to 0.7 ecm measured time can be carried out. Examples of concentrated acid (36%) required that dissolve a 1 g of preferred organic bases are primary, secondary tetracycline corresponding amount of complex ver and tertiary amines and quaternary ammonium salts. The solutions obtained have a particularly suitable long-chain alkyltrimethyl activity of about 60,000 to 150,000. Instead of the individual absorption means, e.g. B. decolorizing charcoal, to remove bonds can also technical, commercially located various coloring impurities treated borrowed mixtures of these compounds can be used. About 0.5 to 1.5 g of charcoal are generally used.These include alkyl and alkenyltrimethylammonium per g of antibiotic tetracycline, 55 chlorides whose carbon chains contain 8 to 18 carbon atoms, a larger amount of which contain a product of greater purity. Longer alkyl chains or arylalkyls without major losses as a result of adsorption of the antibiotic residues can be used instead of one or more alkyl residues. The adsorbent can stand by means of a filter aid. Among the amines, the long-chain alien removed and phatic amines for the removal of adhering material, e.g. B. octylamine, nonylamine or be washed with an acidified solvent. 60 Decylamine or technical mixtures of these substances, crystalline tetracycline hydrochloride is particularly valuable. Other organic bases, e.g. B. obtained clarified solution then prepared by adding heterocyclic compounds and cycloalkylamines, or concentrated hydrochloric acid. If desired, quaternary bases of these compounds can also be used, the solution can be concentrated before crystallization.

werden. Im allgemeinen ist ein Verhältnis von mindestens 65 Ein besonders brauchbares basisches organischeswill. In general, a ratio of at least 65 is a particularly useful basic organic

etwa 200 ecm konzentrierter Salzsäure je kg des in der Fällungsmittel für Tetracyclingärlösungen ist das unterabout 200 ecm of concentrated hydrochloric acid per kg of that in the precipitant for tetracycline fermentation solutions is under

Lösung anwesenden Antibiotikums erforderlich; etwas der Bezeichnung »Arquad Cx bekannte Handelsprodukt,Solution of antibiotic present required; something known by the name »Arquad Cx ,

größere Mengen an Säure können die Ausbeute an das als 50gewichtsprozentige Lösung in Isopropanol oderLarger amounts of acid can lower the yield than 50 percent by weight solution in isopropanol or

Kristallen erhöhen. Besonders günstig ist ein Verhältnis als 33°/_oige wäßrige Lösung erhältlich ist. Es bestehtIncrease crystals. It is particularly favorable as a ratio of 33 / _o aqueous solution is available °. It exists

von 0,95 1 Säure je kg Tetracyclin. Die jeweils gün- 70 aus einem technischen Gemisch, das etwa 50% Dodecyl-of 0.95 1 acid per kg tetracycline. The green 70 made from a technical mixture containing about 50% dodecyl

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trimethylammoniumchlorid mit kleineren Mengen Octyl-, bei der Herstellung von Tetracyclinantibiotika durch Decyl-, Tetradecyl-, Hexadecyl-, Octadecyl- und Octa- Gärung verwendeten Lösungen in der Zusammendecenyltrimethylammoniumchloride enthält. Die kleine, setzung der Metallionen etwas voneinander abweichen, mit dieser Lösung eingeführte Menge Isopropanol be- ändert sich die Zusammensetzung der mit einem beeinträchtigt die Wirksamkeit der Fällung des Tetracyclin- 5 stimmten Amin oder quaternären Ammoniumsalz ersalzes nicht ernstlich. Bereits 0,5 Volumprozent der haltenen Fällung ebenfalls. Die normalen Tetracyclin-33°/_oigen wäßrigen Lösung können im vorliegenden gärlösungen enthalten mindestens so viel mehrwertige Verfahren erfolgreich angewendet werden, wobei die Metallionen, daß eine vollständige Fällung erzielbar ist, Wirksamkeit der Gärlösungen im allgemeinen auf wenn eine geeignete organische Base der filtrierten weniger als 100 γ verringert wird. Eine Verringerung io Gärlösung zugesetzt und diese anschließend alkalisch der Menge der angewandten Base bewirkt, daß mehr gemacht wird. Oft enthält die Gärlösung mehr metallische Tetracyclin in Lösung bleibt. Es ist gewöhnlich un- Bestandteile, als zur Fällung der Tetracycline notwendig praktisch, die Menge unnötig zu erhöhen, denn eine sind. In diesem Fall kann der Überschuß zuerst durch derartige Erhöhung vergrößert die Menge des ausge- irgendeine geeignete Maßnahme, z. B. nach dem in der fällten Tetracyclinkomplexsalzes nicht wesentlich. Diese 15 USA.-Patentschrift 2 658 078 beschriebenen Trennver-Tatsache zeigt, daß die Löslichkeitsgrenze erreicht fahren, entfernt werden. Nach diesem Verfahren wird worden ist. Tatsächlich kann die Verwendung über- die angesäuerte geklärte Tetracyclingärlösung mit Trennmäßiger Mengen des »Arquad.i-Fallungsmittels auch mitteln für mehrwertige Metallionen behandelt. Beiunzweckmäßig sein, da sie bisweilen die teilweise Auf- spiele für solche Mittel sind schwach ionisierte hydroxyllösung der Fällung zur Folge hat. Im allgemeinen 20 gruppenhaltige saure Verbindungen, wie Citronensäure, werden etwa 1 bis etwa 2,5 g Trockengewicht dieses Glukonsäure oder Natriumtetraphosphat, und Amino-Reaktionsmittels je Liter einer Standardgirlösung bevor- säuren, wie Äthylendiamintetraessigsäure und PoIyzugt. Andere gleichartige Fällungsmittel sind ebenfalls aminocarbonsäuresalze. Wenn die Tetracyclinlösung etwa in diesen Mengen wirksam. Es kann sich jedoch eine unzureichende Menge an Metallionen enthält, kann ergeben, daß Verbindungen mit niedrigerem Molekular- 25 z. B. Eisen, Zink oder Magnesium zugesetzt werden, um gewicht, ζ. B. solche mit 8 bis 12 Kohlenstoffatomen, in die Fällung weiter zu unterstützen. Solche Zusätze etwas kleineren Mengen und Stoffe mit höherem Mole- sind natürlich immer erforderlich, wenn es sich um eine kulargewicht in etwas größeren Mengen erforderlich sind. wäßrige Tetracyclinlösung handelt, die keine Gärlösung Die Vollständigkeit der Fällung des Tetracyclin- darstellt oder bereits Metalle enthält. Wie zu erwarten komplexsalzes aus wäßrigen Lösungen, insbesondere aus 30 ist, unterscheiden sich die verschiedenen organischen Gärlösungen, mittels organischer Basen in Gegenwart Basen in ihrem Verhalten bei der Fällung. Das bedeutet, von mehrwertigen Metallionen ändert sich je nach dem daß die Menge des in den ausgefällten Komplexverp_H-Wert, auf den die Lösung eingestellt ist. Die Ver- bindungen enthaltenen Antibiotikums bei den verwendung von p_H-Werten unterhalb etwa 5,5 ist un- schiedenen Fällungsmitteln nicht gleichbleibt. Die Zuzweckmäßig, während p_H-Werte zwischen etwa 6 und 10 35 sammensetzung der Niederschläge ändert sich offenausgezeichnete Ergebnisse liefern. Da die Beständigkeit sichtlich auch etwas in Abhängigkeit von dem angedes Tetracyclins mit höheren p_H-Werten abnimmt, wird wendeten p_H-Wert.trimethylammonium chloride with minor amounts of octyl, solutions used in the manufacture of tetracycline antibiotics by decyl, tetradecyl, hexadecyl, octadecyl and octa fermentation in which together contains decenyltrimethylammonium chloride. The small amount of isopropanol introduced with this solution does not seriously change the composition of the amine or quaternary ammonium salt which impairs the effectiveness of the precipitation of the tetracycline salt. Already 0.5 percent by volume of the held precipitation also. The normal tetracycline 33 ° / _o aqueous solution may contain as much polyhydric method be successfully applied at least in the present gärlösungen, wherein the metal ions that complete precipitation is achieved, effectiveness of Gärlösungen generally if a suitable organic base of the filtered less than 100 γ is decreased. A decrease in the amount of fermentation solution added and then alkaline to the amount of base used causes more to be made. Often times, the fermentation solution contains more metallic tetracycline that remains in solution. It is usually inefficient, as necessary to precipitate the tetracyclines, to increase the amount unnecessarily, since they are one. In this case, the excess can first be increased by such an increase. B. after the precipitated tetracycline complex salt is not essential. This separating fact described in U.S. Pat. No. 2,658,078 shows that the solubility limit has been reached. Following this procedure will have been. In fact, the use can be treated with the acidified, clarified tetracycline fermentation solution with separating amounts of the »Arquad.i precipitant as well as agents for polyvalent metal ions. In the case of being unsuitable, since they are sometimes the partial loads for such agents are weakly ionized hydroxyl solution of the precipitation result. In general, acidic compounds containing groups, such as citric acid, about 1 to about 2.5 g dry weight of this gluconic acid or sodium tetraphosphate, and amino reactants per liter of a standard girl solution, such as ethylenediaminetetraacetic acid and poly are added. Other similar precipitants are also aminocarboxylic acid salts. If the tetracycline solution is about effective in these amounts. However, it may contain an insufficient amount of metal ions, may result in compounds with lower molecular 25 z. B. iron, zinc or magnesium can be added to weight, ζ. B. those with 8 to 12 carbon atoms to further support the precipitation. Such additives in somewhat smaller amounts and substances with a higher molar mass are, of course, always necessary if a somewhat larger amount is required. Aqueous tetracycline solution is, which is not a fermentation solution The completeness of the precipitation of the tetracycline or already contains metals. As is to be expected, complex salt from aqueous solutions, especially from 30 is, the different organic fermentation solutions differ in their behavior during precipitation by means of organic bases in the presence of bases. This means that of polyvalent metal ions changes depending on the amount of the precipitated complex Verp _H value to which the solution is adjusted. The encryption antibiotic compounds contained in the use of p _H values below about 5.5 is un- different precipitants not remains the same. The Zuzweckmäßig while p _H values of between about 6 and 10 35 of precipitation composition changes provide open excellent results. Since the resistance also visibly decreases somewhat depending on the amount of tetracycline with higher p _H values, the p _H value is used.

ein p_H-Wert zwischen 8 und 9,5 bevorzugt. Das im Es ist zwar möglich, einfache Lösungen oder Gärallgemeinen bei der Gewinnung von Tetracyclin aus lösungen mit einer Tetracyclinwirksamkeit von 500 y/ccm einer Mikroorganismen enthaltenden Gärlösung ange- 40 oder darunter zu verwenden, jedoch werden jene mit einer wendete Verfahren besteht darin, daß man das Mycel etwas höheren Wirksamkeit bevorzugt, um die Komplexaus der sauren Lösung abfiltriert, das gewünschte verbindung in guter Ausbeute und von hohem Reinheitsorganische basische Fällungsmittel zusetzt und dann grad zu erhalten. Im allgemeinen wird nur ein Teil des den p_H-Wert der Lösung mit einem löslichen Alkali- quaternären Ammoniumsalzes oder der organischen Base hydroxyd, z. B. Ätznatron oder Ätzkali, einstellt. Es 45 in der erhaltenen Fällung gefunden. Zur vollständigen wurde gefunden, daß die rasche Zugabe einer alkalischen Ausfällung des Antibiotikums sollte ein Überschuß Lösung die Ausfällung eines sehr feinen Produktes be- verwendet werden. Etwas mehr als ein dreifach molarer wirken kann, das schwierig zu nitrieren ist, während die Überschuß des Fällungsmittels ist am günstigsten, langsame Zugabe ein leichtes filtrierbares Produkt Bei der Gewinnung von reinem Tetracyclin oder seinena _pH value from 8 to 9.5 are preferred. Although it is possible to use simple solutions or general fermentation in the production of tetracycline from solutions with a tetracycline effectiveness of 500 μg / ccm of fermentation solution containing microorganisms or below, those with a method used are that one the mycelium prefers somewhat higher effectiveness in order to filter off the complex from the acidic solution, to add the desired compound in good yield and of high purity organic basic precipitating agents and then to obtain them. In general, only a part of the _pH value of the solution hydroxide with a soluble alkali metal or quaternary ammonium salt of the organic base, for example. B. caustic soda or caustic potash adjusts. It found 45 in the precipitate obtained. To complete it, it has been found that the rapid addition of an alkaline precipitate of the antibiotic should use an excess of solution to precipitate a very fine product. Slightly more than a triple molar can act, which is difficult to nitrate, while the excess of the precipitant is most beneficial, slowly adding an easily filterable product in the recovery of pure tetracycline or its

ergibt. 50 einfachen Salzen, wie dem Tetracyclinhydrochlorid,results. 50 simple salts, such as tetracycline hydrochloride,

Die Fällungen, die durch die Behandlung von Tetra- aus den Lösungen der metallorganischen Komplexcyclinlösungen mit verschiedenen organischen Basen verbindungen bleiben die als Fällungsmittel verwendete in Gegenwart von mehrwertigen Metallionen erhalten organische Base und ein Teil des Antibiotikums selbst werden, bestehen nicht aus einfachen Salzen des Anti- in der Mutterlauge und den Rückständen zurück. Es biotikums und der verwendeten Base, sondern es handelt 55 kann erwünscht sein, diese Stoffe wiederzugewinnen sich um Komplexverbindungen, die verschiedene während und wiederzuverwenden. Wenn z. B. die Mutterlauge der Behandlung anwesende Metallionen enthalten. zurückgeführt und dem nächsten Ansatz der Tetracyclin-Dies ergibt sich aus der Tatsache, daß keine Fällung lösung, die erfindungsgemäß zu behandeln ist, zugesetzt entsteht, wenn eine in ihrer Konzentration einer üblichen wird, kann die dann erforderliche Menge an organischer Tetracyclingärlösung entsprechende verdünnte wäßrige 60 Base wesentlich verringert werden, ohne daß die Ausreine Tetracyclinlösung mit einem Amin behandelt wird, beute an der Tetracyclinkomplexverbindung wesentlich von dem bekannt ist, daß es Tetracyclin aus Gärlösungen schlechter wird. Das Lösungsmittel kann vor der Zugabe ausfällt. Der Zusatz von kleinen Mengen zwei- oder zu dem nächsten Ansatz zunächst aus der Mutterlauge dreiwertiger Metallionen zu einer derartigen reinen ganz oder teilweise entfernt werden, was jedoch nicht Tetracyclinlösung verursacht jedoch eine Ausfällung 65 wesentlich ist. Gewisse färbende Verunreinigungen der Komplexsalze. Die Fällungen bestehen anscheinend kehren dabei in die Mutterlauge zurück und sind die aus Komplexverbindungen des Tetracyclins, der orga- Ursache für ein etwas dunkleres Tetracyclinsalz. Wird nischen Base und einem oder mehreren mehrwertigen die Rückführung zu oft wiederholt, kann dieses Dunkler-Metallionen. Wie bereits erwähnt, sind die letzteren werden des Produktes störend wirken, und die Ausbeute normalerweise stets in Gärlösungen anwesend. Da die 70 kann sinken. Wird die Rückführung der MutterlaugeThe precipitations produced by the treatment of tetra from the solutions of the organometallic complex cycline solutions with various organic bases compounds remain those used as precipitants in the presence of polyvalent metal ions, organic base and part of the antibiotic itself are obtained do not consist of simple salts of the anti-back in the mother liquor and the residues. It biotics and the base used, but it may be desirable to recover these substances about complex compounds that are different during and reuse. If z. B. the mother liquor contain metal ions present during the treatment. returned and the next batch of tetracycline dies results from the fact that no precipitation solution to be treated according to the invention is added arises when one becomes a usual in its concentration, the then required amount of organic can Dilute aqueous 60 base corresponding to tetracycline fermentation solution can be substantially reduced without the pure tetracycline solution being treated with an amine, yields to the tetracycline complex compound substantially which is known to deteriorate tetracycline from fermentation solutions. The solvent can before the addition fails. The addition of small amounts two or two to the next batch initially from the mother liquor trivalent metal ions are completely or partially removed to such a pure, but this is not However, tetracycline solution causes a precipitation 65 which is essential. Certain staining impurities the complex salts. The precipitates apparently return to the mother liquor and are the from complex compounds of tetracycline, the orga- cause of a somewhat darker tetracycline salt. Will If the recycle is repeated too often, this can cause darker metal ions. As already mentioned, the latter will interfere with the product and the yield usually always present in fermentation solutions. Because the 70 can go down. Will the recycling of the mother liquor

nur wenige Male vorgenommen, so ist die unter Umständen auftretende Färbung jedoch tragbar und schadet der Qualität des Produktes nicht.done only a few times, the staining that may occur is acceptable and is harmful the quality of the product is not.

Das erfindungsgemäße Verfahren hat viele Vorteile. Es verwendet wohlfeile, leicht zugängliche Fällungsmittel mit geringer Giftigkeit; ein kristallines Salz hoher Qualität wird aus stark verdünnten und bzw. oder rohen Tetracyclinlösungen in nur wenig Verfahrensstufen erhalten; das Verfahren liefert gute Ausbeuten.The method according to the invention has many advantages. It uses cheap, easily accessible precipitants with low toxicity; A high quality crystalline salt is made from highly diluted and / or raw Tetracycline solutions obtained in only a few process steps; the process gives good yields.

Die folgenden Beispiele dienen der Erläuterung der Erfindung.The following examples serve to illustrate the invention.

example 1

11 Gärlösung mit folgender Zusammensetzung: l°/₀ Dextrose, 20 bis 40% Sojamehl, 0,5% lösliche Destillationsrückstände, 0,1 bis 0,2% sekundäres Kaliumphosphat, 0,0003% Kupfersulfat, 0,0005% Zinksulfat, 0,0010% Ferrosulfat, 0,0003% Mangansulfat, 0,1% Magnesiumsulfat in vorzugsweise destilliertem Wasser, hergestellt bei einem p_H-Wert von 7,4 bis 8 durch Züchtung des Streptomyces aureofaciens unter aeroben Bedingungen und Rühren, der einen hohen Anteil Tetracyclin und kleinere Mengen anderer Antibiotika mit breitem Wirksamkeitsspektrum erzeugt, wurde mit Schwefelsäure auf einen p_H-Wert von 2,9 eingestellt. Das Gemisch wurde mittels einer kleinen Menge Filtrierhilfe filtriert. 11 des Filtrats, das 220 γ Tetracyclin je ecm enthielt, wurde mit 23 ecm einer Lösung von »Arquad O behandelt, die durch Verdünnen von 24 g der 33¹/₃%igen Lösung mit Wasser auf 200 ecm erhalten worden war. Gleichzeitig mit der »Arquad C«r-Lösung wurden 6 ecm einer 3%igen wäßrigen Calciumchloridlösung zugegeben. Das Gemisch wurde gerührt und mit 10%igem Natriumhydroxyd auf einen p_H-Wert von 9 eingestellt. Das ausgefallene feste Produkt wurde mittels einer kleinen Menge Filtrierhilfe abfiltriert, und der Filterkuchen wurde nach dem Trockensaugen in Wasser aufgeschlämmt. Das Gemisch wurde mit Schwefelsäure auf einen p_H-Wert von 2,5 eingestellt, und der feste Rückstand wurde abfiltriert. Das wäßrige Filtrat besaß eine Tetracyclinwirksamkeit von 2800 y/ccm. Die Lösung wurde dann mit Natronlauge auf einen p_H-Wert von 7 eingestellt. Reines Tetracyclin fiel als gelber Stoff aus. F. = 170 bis 175° (Zersetzung), Ausbeute etwa 25%. Dieses Produkt wurde abfiltriert, mit einem kleinen Volumen Wasser gewaschen und getrocknet. Es erwies sich als sehr aktiv gegen verschiedene Mikroorganismen und förderte wirksam das Wachstum von Tieren, wenn es in kleinen Mengen dem Futter zugesetzt wurde.11 fermentation broth with the following composition: l ° / ₀ dextrose, 20 to 40% soy flour, 0.5% soluble distillation residues, 0.1 to 0.2% potassium secondary phosphate, 0.0003% of copper sulfate, 0.0005% of zinc sulfate, 0, 0010% ferrous sulfate, 0.0003% manganese sulfate, 0.1% magnesium sulphate, preferably in distilled water, prepared at a _pH value from 7.4 to 8 by cultivation of Streptomyces aureofaciens under aerobic conditions and with stirring, of a high proportion of tetracycline and minor amounts of other antibiotics produced with a broad spectrum of activity, was adjusted with sulfuric acid to a _pH value of 2.9. The mixture was filtered using a small amount of filter aid. 11 of the filtrate, which contained 220 γ tetracycline per ecm, was treated with 23 ecm of a solution of »Arquad O, which had been obtained by diluting 24 g of the 33 ¹ / ₃ % solution with water to 200 ecm. At the same time as the "Arquad C" r solution, 6 ecm of a 3% aqueous calcium chloride solution were added. The mixture was stirred and adjusted with 10% sodium hydroxide to a _pH value of. 9 The precipitated solid product was filtered off with a small amount of filter aid, and the filter cake was slurried in water after being sucked dry. The mixture was adjusted with sulfuric acid to a _pH value of 2.5, and the solid residue was filtered off. The aqueous filtrate had a tetracycline activity of 2800 y / cc. The solution was then adjusted with sodium hydroxide to a _pH value of. 7 Pure tetracycline precipitated as a yellow substance. M.p. = 170 to 175 ° (decomposition), yield about 25%. This product was filtered off, washed with a small volume of water and dried. It was found to be very active against various microorganisms and was effective in promoting the growth of animals when added to feed in small amounts.

Example 2

Eine Chlortetracyclingärlösung mit folgender Zusammensetzung: 1 bis 2% Maisquellwasser, 1 bis 3% Saccharose, 0,5% sekundäres Ammoniumphosphat, 1,5% primäres Kaliumphosphat, 0,2% Magnesiumsulfat -7H₂0,0,00033% Mangan(II)-chlorid, 0,00033% Kupfersulfat · 5H₂0,0,005% Zinksulfat · 7H₂O in vorzugsweise destilliertem Wasser, wurde hergestellt, indem man den Chlortetracyclin erzeugenden Stamm Streptomyces aureofaciens in einer Nährlösung unter Rühren und aeroben Bedingungen züchtete. Die Lösung wurde filtriert, und das im Beispiel 1 beschriebene Verfahren wurde in gleicher Weise zur Fällung des Chlortetracyclins angewendet. Festes reines Chlortetracyclin wurde abgetrennt und durch seine charakteristischen Eigenschaften identifiziert. F. = 172 bis 174° unter Zersetzung, Ausbeute etwa 25%.A chlorotetracycline fermentation solution with the following composition: 1 to 2% corn steep liquor, 1 to 3% sucrose, 0.5% secondary ammonium phosphate, 1.5% primary potassium phosphate, 0.2% magnesium sulfate -7H ₂ 0.0.00033% manganese (II) Chloride, 0.00033% copper sulfate • 5H ₂ 0.0.005% zinc sulfate • 7H ₂ O in preferably distilled water, was prepared by growing the chlortetracycline producing strain Streptomyces aureofaciens in a nutrient solution with stirring and aerobic conditions. The solution was filtered and the procedure described in Example 1 was used in the same manner to precipitate the chlorotetracycline. Solid pure chlorotetracycline was separated and identified by its characteristic properties. F. = 172 to 174 ° with decomposition, yield about 25%.

Claims

Patent pending:

1. A process for the preparation of pure tetracyclines according to patent application P 10 395 IVb / 12o, characterized in that an aqueous tetracycline or chlorotetracycline solution with relatively water-soluble organic amines or quaternary ammonium salts containing at least 8 carbon atoms in the molecule, at a p _H - value treated of at least about 5.5 to about 10 in the presence of polyvalent metal ions, the precipitated metal and ammonium ion-containing complex compound is separated tetracycline or chlorotetracycline, they -value treated at a p _H below about 5 with dilute acid, the solution was filtered , its _pH value is adjusted to about 5 to 7, and separating the precipitated tetracycline or chlortetracycline.

2. The method according to claim 1, characterized in that there is used as a tetracycline or chlorotetracycline solution a tetracycline or chlorotetracycline fermentation solution is used.

Documents considered: French Patent Nos. 1 032 567, 1 028 786; Nature, Vol. 172, 1953, pp. 201 and 395; U.S. Patent No. 2,649,480.