DD288395A5

DD288395A5 - PROCESS FOR THE PREPARATION OF ALPHA AMYLASE

Info

Publication number: DD288395A5
Application number: DD33344689A
Authority: DD
Inventors: Dieter Koerner; Peter Klingenberg; Rainer Radosta; Manfred Richter; Horst Anger; Friedrich Schierbaum
Original assignee: Akademie Der Wissenschaften,De; Adw,Zi F. Ernaehrung,De
Priority date: 1989-10-10
Filing date: 1989-10-10
Publication date: 1991-03-28

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur fermentationstechnischen Gewinnung einer alpha-Amylase aus Thermoactinomyces vulgaris, die sich insbesondere zur Hydrolyse von Staerkepolysacchariden eignet. Bevorzugt werden dabei Maltose und Maltotriose gebildet. Glucose entsteht nur in sehr geringen Mengen. Die Synthese des Enzyms erfolgt in einem 24stuendigen Fermentationsprozesz in einem komplexen Naehrmedium, wobei erfindungsgemaesz gewonnene Selektanten des Mikroorganismenstammes zum Einsatz gelangen.{Mikroorganismus; Thermoactinomyces vulgaris; Selektion; Vermehrung; Leistungssteigerung; Kultivation; alpha-Amylase; Staerkehydrolyse}The invention relates to a method for fermentation-related recovery of an alpha-amylase from Thermoactinomyces vulgaris, which is particularly suitable for the hydrolysis of starch polysaccharides. In this case, maltose and maltotriose are preferably formed. Glucose is produced only in very small quantities. The synthesis of the enzyme takes place in a 24-hour fermentation process in a complex nutrient medium, wherein selectors of the microorganism strain obtained according to the invention are used {microorganism; Thermoactinomyces vulgaris; Selection; proliferation; Performance increase; cultivation; alpha-amylase; starch hydrolysis}

Description

Field of application of the invention

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung einer alpha-Amylase aus Thermoactinomyces vulgaris mit besonderen Eigenschaften zur Spaltung von Stärkepolysacchariden in Maltose und Maltotriose, wobei Glucose nur in sehr geringen Mengen entsteht. Das Enzym kann vorteilhaft bei der heterogenen Hydrolyse von Stärken zu Maltosesirupen und für die Supplementierung von Glucoamylase bei der Traubenzuckerhersteliung eingesetzt werden.The invention relates to a method for producing an alpha-amylase from Thermoactinomyces vulgaris with particular properties for the cleavage of starch polysaccharides in maltose and maltotriose, wherein glucose is produced only in very small quantities. The enzyme can be used advantageously in the heterogeneous hydrolysis of starches to maltose syrups and for the supplementation of glucoamylase in the production of glucose.

Characteristic of the known state of the art

Verfahren zur Herstellung bakterieller und pilzlicher alpha-Amylasen sind zahlreich bekannt. Diese Enzyme spalten bevorzugt aus Stärkepolysacchariden Maltose ab. Aus thermophilen Mikroorganismen, zu denen Thermoactinomyces vulgaris zählt, gewinnt man ebenfalls verschiedene Amylasen mit unterschiedlichen Eigenschaften. M.J. KUO und P.A. HARTMANN (J.of Bacteriology, 92 [1966] 723-726) beschreiben die Synthese von thermostabiler alpha-Amylase aus Actinomyceten in einem Nährmedium, das Maltose und Stärke als Kohlenstoffquelle enthält.Methods for the production of bacterial and fungal alpha-amylases are well known. These enzymes preferentially split maltose from starch polysaccharides. Thermophilic microorganisms, including Thermoactinomyces vulgaris, also produce different amylases with different properties. MJ KUO and PA HARTMANN (J. of Bacteriology, 92 (1966) 723-726) describe the synthesis of thermostable actinomycete alpha-amylase in a nutrient medium containing maltose and starch as carbon source.

Eine lange Fermentationszeit von mehr als 36 Stunden sowie die Verwendung von teurer Maltose im Nährmedium sind als nachteilig anzusehen.A long fermentation time of more than 36 hours and the use of expensive maltose in the nutrient medium are to be regarded as disadvantageous.

Von M. SHIMUZU et al. (Agric. Biol.Chem., 42 [1978] 1681-1688) wird die Gewinnung einer alpha-Amylase aus einem Stamm von Thermoactinomyces vulgaris beschrieben. Das salzgefällte und durch Säulenchromatographie gereinigte Enzym hydrolysiert Pullulanan zu Pannose und Stärke unter Abspaltung von Maltose und Glucose. Nachteilig ist hierbei der entstehende hohe Glucoseanteil, der bei der Anwendung in thermischen Lebansmittelverarbeitungsprozessen infolge der Reaktion mit Aminosäuren zu unerwünschten Nebenprodukten führen kann. In Ergänzung zu den Ergebnissen von M. SHIMUZU et al. (1978) konnten F. G. PRIEST et al. (Stärke 40 [19(181 *36-429) nachweisen, daß sich d;e alpha-Amylase aus Thermoactinomyces putidus von dem Enzym des japanischen Thermoactinomyces vulgaris-Stammes durch das Fehlen der Pullulanaseaktivität unterscheidet und vergleichbar mit der von M. J. KUO und P.A. HARTMANN (1966) beschriebenen alpha Amylase ist. Über den Einfluß verschiedener C-Quellen in einem Fermentationsmedium mit Maismehl, Hefe und Salzen auf die extrazelluläre Enzymsynthese von alpha-Amylase durch Thermoactinomyces vulgaris berichtet I.A. TSAPLINA (Sixth Int.Symp. on Actinomycetes Biology, Debrecen [1985] Poster Abstr.). Nach Zugabe von 3% Maltose kommt es zu einem Anstieg der Enzymaktivität von 81 %. Von Y.TAKASAKI (Agric. Biol. Chem. 51 (1987] 9-16) wird ein Enzymkomplex (Pullulanase und alpha-Amylase) aus Bacillus subtilis beschrieben, wobei aus Pullulan Maltotriose und aus Stärke hauptsächlich Maltose und Maltotriose entstehen. Der Enzymkomplex eignet sich zur Herstellung von Maltotriosesirup mit einem Gehalt von 50 bis 55% Maltotriose, 20 bis 40% Maltose und 2 bis 5% Glucose. Optimale Hydrolysobedingungen sind bei pH6 bis 7 und 5O⁰C bis 6O⁰C. Demgegenüber beschreiben E. DOYLE (it al. (Appl. Microbiol. Biotechnol. 30 (1989] 492-496) eine alpha-Amylase aus Peniciilium expansum, die ohne entzweigende Nebenaktivitäten nach der Hydrolyse von Stärke 74% Maltose bei pH 4,5 und 6O⁰C abspalte?. Außerdem entstehen 21 % Glucose und 3% Maltotriose.M. SHIMUZU et al. (Agric Biol.Chem., 42 [1978] 1681-1688) describes the recovery of an alpha-amylase from a strain of Thermoactinomyces vulgaris. The salt precipitated and purified by column chromatography hydrolyzed pullulanan to pannose and starch with elimination of maltose and glucose. The disadvantage here is the resulting high proportion of glucose, which can lead to undesirable by-products when used in thermal Lebansmittelverarbeitungsprozessen as a result of the reaction with amino acids. In addition to the results of M. SHIMUZU et al. (1978) FG PRIEST et al. (Starch 40 [19 (181 * 36-429)] demonstrate that the alpha-amylase from Thermoactinomyces putidus differs from the enzyme of the Japanese Thermoactinomyces vulgaris strain by the absence of pullulanase activity and is comparable to that of MJ KUO and PA HARTMANN (1969) describes the influence of various C sources in a fermentation medium with maize meal, yeast and salts on the extracellular enzyme synthesis of alpha-amylase by Thermoactinomyces vulgaris IA TSAPLINA (Sixth Int.Symp. On Actinomycetes Biology, Debrecen) 1985] Poster Abstr.) After addition of 3% maltose there is an increase in the enzyme activity of 81% .Y.TAKASAKI (Agric. Biol. Chem. 51 (1987) 9-16) discloses an enzyme complex (pullulanase and alpha - amylase) from Bacillus subtilis, whereby pullulan maltotriose and starch mainly maltose and maltotriose are formed.The enzyme complex is suitable for the production of Maltotriosesirup with a Geh old from 50 to 55% maltotriose, 20 to 40% maltose and 2 to 5% glucose. Optimal Hydrolysobedingungen are at pH 6 to 7 and 5O ⁰ C to 6O ⁰ C. In contrast, describe E. Doyle (it al. (Appl. Microbiol. Biotechnol. 30 (1989], 492-496) an alpha-amylase from Peniciilium expansum, without the debranching secondary activities after the hydrolysis of starch 74% maltose at pH 4.5 and 6O ⁰ C split off. In addition, 21% glucose and 3% maltotriose.

Von Y. SUZUKi et al. (Stärke 39 [1987] 211-214) wird über maltogene und maltotriogone alpha-Amylasen aus Bac. thermoamyloliquefi. ciens KP 1071 berichtet, wobei die exogen wirkende maltogene alpha-Amylase in der Lage ist, die alpha-1,6-Bindungen im Amylopektin ;:u spalten.By Y. SUZUKi et al. (Stärke 39 [1987] 211-214) is described by maltogenic and maltotriogone alpha-amylases from Bac. thermoamyloliquefi. ciens KP 1071 reports that the exogenous maltogenic alpha-amylase is capable of cleaving the alpha-1,6 bonds in the amylopectin;: u.

Ein der Erfindung nahestehendes Verfahren zur Herstellung einer Protease mit alpha-amylolytischer Aktivität wird von RICHTER et al. vorgeschlagen (Wi'225711A1). Das Enzym aus einem Stamm von Thermoactinomyces vulgarls zeichnet sich durch die bevorzugte Spaltung von Störkepolysacchariden in Maltose und Maltotriose aus. Glucose entsteht nur zu einem sehr geringen Anteil. Das Verfahren besitzt jedoch verschiedene Nachteile, die sowohl bei der Herstellung des Enzyms als auch bei dessen Applikation zum Ausdruck kommen. Die verwendete Mutante (MET9515) produziert bevorzugt eine thermostabile Protease. Alpha-Amylase entsteht mit 0,73AE/ml Kulturlösung nur in sehr geringen Mengen. Nachteilig ist bei diesem Syntheseprozeß ferner, daß die gebildete Amylase nach einem Maximum wieder stark an Aktivität verliert, Die Notwendigkeit, während der Fermentation Nährstoffe zuzufüttern, bedeutet erhöhten Aufwand in der technologischen Ausstattung und Prozeßführung. Bei der Applikation kann der im Verhältnis zur Amylase sehr hohe Proteaseanteil störende Effekte hervorrufen und die wegen der geringen Amylaseaktivität erforderlichen Enzymmengen bedeuten ungünstige ökonomische Relationen beim Einsatz des Präparates.A method of the invention for producing a protease having alpha-amylolytic activity is described by RICHTER et al. proposed (Wi'225711A1). The enzyme from a strain of Thermoactinomyces vulgarls is characterized by the preferred cleavage of Störkepolysacchariden in maltose and maltotriose. Glucose is produced only to a very small extent. However, the process has several disadvantages, which are expressed both in the production of the enzyme and in its application. The mutant used (MET9515) preferably produces a thermostable protease. Alpha-amylase is produced with 0.73AE / ml culture solution only in very small amounts. A further disadvantage of this synthesis process is that the amylase formed loses a great deal of activity again after a maximum. The necessity of feeding nutrients during the fermentation means increased expenditure in terms of technological equipment and process control. When applied, the proportion of protease which is very high in relation to the amylase can cause disturbing effects, and the quantities of enzyme required because of the low amylase activity mean unfavorable economic relations when using the preparation.

Object of the invention

Ziel der Erfindung ist es, ein Verfahren zur Herstellung einer alpha-Amylase aus Thermoactinomyces vulgaris für die Spaltung von Stärkbpolysacchariden in Maltose und Maltotriose zu entwickeln, das die Nachteile der bekannten Verfahren vermeidet und durch höhere Enzymausbeuten und einfache technologische Realisierbarkeit zur Verbesserung der Ökonomie führt.The aim of the invention is to develop a process for the preparation of an alpha-amylase from Thermoactinomyces vulgaris for the cleavage of starch polysaccharides in maltose and maltotriose, which avoids the disadvantages of the known processes and leads by higher enzyme yields and simple technological feasibility to improve the economy.

Explanation of the essence of the invention

Dar Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, die speziellen Verfahrensbedingungen zur Herstellung einer Amylase aus Thermoactinomyces vulgaris mit hoher amylolytischer Aktivität aufzuzeigen.It is an object of the invention to disclose the specific process conditions for producing an amylase from Thermoactinomyces vulgaris with high amylolytic activity.

Es wurde gefunden, daß aus einem Stamm Thermoactinomyces vulgaris und/oder seiner Mutante- hinterlegt in der Zentralen Stammsammlung der DDR im Zentralinstitut für Mikrobiologie und experimentelleTherapie in Jena unter IMET9512 und für die Mutante IMET9515 - durch Isolation von Einzelkolonien auf stärkehaltigen Nährböden Selektanten gewonnen werden können, die bei dor weiteron Kultivation in flüssigen stärke- und maisquellwasserhaltigen Substraten große Mengen an Amylase bilden. Erfindungsgemäß wird dabei so vorgegangen, daß aus einer verdünnten Sporensuspension des Stammes oder der Mutante auf Nähragar, bestehend aus Maisstärke, Maisquellwasser und Salzen, Einzelkolonien angezogen, von diesen zur Vermehrung Schrägrohre beimpft und von diesen nach Bebrütung Sporenabschwemmungen gewonnen werden, die zur Beimpfung von Schüttelkulturen dienen, in denen in einem Medium aus Stärke, Maisquellwasser und Salzen Keimung und Wachstum des Mikroorganismus erfolgt und in dem nach 24stündiger Kultivation die Amylaseaktivität bestimmt wird. Weiter wird so vorgegangen, daß von den als Ausgangsmaterial dienenden Sporensuspensionen eine Mischung derjenigen hergestellt wird, die in der Schüttelkultur hohe Amylaseausbeuten gezeigt haben, und daß von dieser Mischung Nähragar der genannten Zusammensetzung in Kolleschalen beimpft und nach Bebrütung davon Sporenabschwemmungen hergestellt werden, die bei Kühlschranktemperatur für die Beimpfung von Fermentationsansätzen aufbewahrt werden können.It has been found that selectants can be obtained from a strain of Thermoactinomyces vulgaris and / or its mutant deposited in the central strain collection of the GDR in the Central Institute for Microbiology and Experimental Therapy in Jena under IMET9512 and for the mutant IMET9515 by isolating individual colonies on starchy nutrient media which, when further cultivated in liquid starch and corn steep liquor containing substrates, form large quantities of amylase. According to the invention, the procedure is such that attracted from a dilute spore suspension of the strain or mutant nutrient agar, consisting of corn starch, corn steep liquor and salts, single colonies, inoculated by these for propagation of slanted tubes and spore from these after incubation spore effluents, which are used to inoculate shake cultures serve in which takes place in a medium of starch, corn steep liquor and salts germination and growth of the microorganism and in which the amylase activity is determined after 24 hours of cultivation. Next, the procedure is that of serving as the starting material Sporensuspensionen a mixture of those is produced, which have shown high Amylaseausbeuten in the shaking culture, and that of this mixture Nähragar said composition inoculated in collaves and after incubation thereof spore effluents are prepared at refrigerator temperature for the inoculation of fermentation mixtures can be stored.

Erfindungsgemäß ist es vorgesehen, die Herstellung von Leistungsselektanten für die Gewinnung von alpha-Amylase nach dem aufgezeigten Schema ständig zu wiederholen und die Sporenabschwemmung direkt zur Beimpfung von Fermontationsansätzen zu verwenden oder die erzeugte Sporenabschwemmung der Leistungsselektanten durch Konservierung an Luvos-Heilerde in eine länger haltbare Form zu überführen und daraus bei Bedarf durch Beimpfung von Nähragar der o. g. Zusammensetzung in Kolleschalen nach Bebrütung frische Sporenabschwemmung für die Beimpfung von Fermentationsansätzen zu gewinnen. Es hat sich dabei gezeigt, daß Sporenabschwemmungen der Leistungsselektanten bis zu 3 Monaten ohne Leistungsverlust im Kühlschrank aufbewahrt werden können und daß an Luvos-Heilerde konservierte Sporen über mehrere Jahre zur Anzucht von frischen Sporensuspensionen geeignet sind. Nach diesem Verfahrensweg erfindungsgemäß hergestellte Leistungsselektanten sind daher jederzeit verfügbar.According to the invention, it is intended to repeat the production of Leistungsselektanten for the recovery of alpha-amylase according to the scheme shown and to use the Sporenabschwemmung directly for inoculation of Fermontationsansätzen or generated Sporenabschwemmung the Leistungsselektanten by preserving Luvos healing clay in a longer lasting form to convert and from if necessary by inoculation of Nähragar the above Composition in collets after incubation to recover fresh spore runoff for inoculation of fermentation batches. It has been shown that Sporenabschwemmungen the Leistungsselektanten can be stored up to 3 months without loss of power in the refrigerator and that preserved on Luvos healing clay spores over several years for the cultivation of fresh spore suspensions are suitable. Therefore, power selectors prepared according to this method are available at any time.

Erfindungsgemäß werden die Sporensuspensionen der Leistungsselektanten zwecks Gewinnung von alpha-Amylase in eine Vorkultur gemäß WP156714 eingeimpft, dort vorkultiviert und danach auf Produktionsfermentoren übertragen, in denen unter Kulturbedingungen entsprechend WP225711A1 die Synthese der alpha-Amylase erfolgt. Die Enzymbildung beginnt nach 3 bis 4 Stunden Fermentationszeit und setzt sich mit konstanter Syntheserate bis zum Ende der Fermentation nach 24 Stunden fort. Es werden alpha-Amylaseaktivitäten von 40 bis 60 AE/ml Kulturlösung reproduzierbar erreicht. Im Gegensatz zur Kultivierung nach WP225711A1 sind zusätzliche Nährstoffgaben während der Fermentation nicht erforderlich, und die gebildete alpha-Amylase bleibt erhaltenAccording to the spore suspensions of Leistungsselektanten in order to obtain alpha-amylase are inoculated into a preculture according to WP156714, there precultured and then transferred to Produktionsfermentoren in which takes place under culture conditions corresponding to WP225711A1 the synthesis of the alpha-amylase. The enzyme formation begins after 3 to 4 hours fermentation time and continues with constant rate of synthesis until the end of the fermentation after 24 hours. Alpha-amylase activities of 40 to 60 AU / ml culture solution are reproducibly achieved. In contrast to cultivation according to WP225711A1, additional nutrient inputs during the fermentation are not required, and the formed alpha-amylase is retained

Die Erfindung wird durch folgende Ausführungsbeispiele näher erläutert. The invention is explained in more detail by the following embodiments.

embodiments example 1

Durch fortlaufende Selektion von Einzelkolonien einer Stammvariante der Mutante IMET9515 ist es möglich, leistungsgesteigertes Inokulum in Form von Sporensuspensionen für Fermentationsansätze zu gewinnen. Im einzelnen geht man so vor, daß von einer Sporenkonserve mit einem Mikrospatel eine Aufschwemmung in 2 ml 0,01%iger Tween-80-Lösung hergestellt wird, die je nach Bedarf zur Anzucht von Einzelkolonien auf einem Nähragar, bestehend aus Maisstärke, Maisquellwasser und Salzen (s. WP227449), bis auf 1:100 verdünnt worden kann. Jeweils 30 bis 50 Einzelkolonien überimpft man auf Schrägrohren mit dem gleichen Nähragar und inkubiert 20 Stunden bei 50^cC. Von diesen Schrägrohren werden Sporenabschwemmungen hergestellt und mit einer Sporenkonzentration von 3 bis 5x 10⁷/ml eine entsprechende Anzahl von Schüttelkulturen in dem o. g. Medium ohne Zusatz von Agar beimpft. Nach einer Inkubationszeit von 24 Stunden bei 5O⁰C auf einem Rundschwingtisch (180 bis 2?.0U/min) wird die aipha-Amylaseaktivität bestimmt. Diese liegt im Bereich von 14 bis 70AE/ml. Zur Gewinnung eines leistungsstarken, stabilen Inokulums werden die Sporensuspensionen der Schrägrohre mitBy continuous selection of individual colonies of a strain variant of the mutant IMET9515, it is possible to obtain performance-enhanced inoculum in the form of spore suspensions for fermentation approaches. Specifically, it is done so that from a spore preserve with a micro spatula, a suspension in 2 ml of 0.01% Tween-80 solution is prepared, as needed for the cultivation of individual colonies on a Nähragar consisting of corn starch, corn steep liquor and Salts (see WP227449), diluted to 1: 100. In each case 30 to 50 individual colonies was inoculated on inclined tubes of the same nutrient agar and incubated for 20 hours at 50 ^c C. Of these inclined tubes Sporenabschwemmungen be prepared and with a spore concentration of 3 to 5 x 10 ⁷ / ml, a corresponding number of shake cultures in the above-mentioned medium without Inoculation of agar inoculated. After an incubation period of 24 hours at 5O ⁰ C on an orbital oscillating table (180-2? .0U / min) the aipha-amylase activity is determined. This is in the range of 14 to 70AE / ml. To obtain a powerful, stable inoculum, the spore suspensions of the inclined tubes with

>40AE/ml gemischt. Mit dieser Mischung werden Kolleschalen mit dem o.g. Nähragar beimpft und 24 Stunden bei 50°C inkubiert. Durch Abschwemmung der Kolleschalen mit der o.g. Tween-Lösung und nachfolgender Homogenisierung in einem Glaskugelhomogenisator steht das entsprechende Inokulum für Fermentationsansätze zur Verfügung. Dieses ist bis zu 3 Monaten ohne Leistungsverlust im Kühlschrank lagerbßr. Für eine Gewinnung neuer Sporensuspensionen ist immer wieder von einer Sporenkonserve auszugehen, und die beschriebenen Verfahrensschritte müssen eingehalten werden, da sonst nur eine Amylase-Leistung von s 14 AE/ml erreicht wird.> 40AE / ml mixed. With this mixture Kolleschalen with the o.g. Nutrient agar inoculated and incubated at 50 ° C for 24 hours. By draining the collials with the o.g. Tween solution and subsequent homogenization in a glass bead homogenizer is the appropriate inoculum for fermentation approaches available. This can be stored in the refrigerator for up to 3 months without loss of performance. It is always necessary to start from a spore preserve for a recovery of new spore suspensions, and the process steps described must be adhered to, since otherwise only an amylase performance of s14 AU / ml is achieved.

Example 2 A 300 L stirred fermentor is charged with 150 liters of the composition Corn starch 1.00 mass in% Corn steep liquor (50%) 1.00 mass in% Dry yeast 0.03 mass in% Skimmed milk powder 0,05 mass in% NaCl 0.50 mass in% CaCl ₂ 0.05 mass in%

befüllt und sterilisiert. Die Beimpfung erfolgt mit einer Sporenabschwemmung der gemäß Beispiel 1 hergestellten Leistungsselektante, die nach WP156714, Beispiel 1, vorkultiviert wird. Die Fermentationstemperatur beträgt 50°C ±1K. Luftmenge und Rührerdrehzahl werden stufenweise innerhalb von 6 Stunden von 20l/min auf 1401/min bzw. von 300min"¹ auf 500min'¹ erhöht. Als Entschäumer werden dem Medium vor der Beimpfung 0,51 Rapsöl zugesetzt. Die Amylasebildung beginnt nach 3 bis 4 Stunden Fermentationszeit und setzt sich bis zum Fermentationsende nach 24 Stunden mit konstanter Syntheserate fort. Nach 24 Stunden wird die Fermentation beendet und die alpha-amylasehaltige Kulturlösung geerntet. Sie enthält alpha-Amylase mit einer Konzentration von 40 bis 60 AE/ml. Protease ist nur in geringen Mengen von 3 bis 4TE/ml Kulturlösung enthalten.filled and sterilized. The inoculation is carried out with a Sporenabschwemmung the Leistungsselektante prepared according to Example 1, which is pre-cultured according to WP156714, Example 1. The fermentation temperature is 50 ° C ± 1K. The amount of air and the stirrer speed are gradually increased from 20 l / min to 1401 / min or from 300 min " ¹ to 500 min" ¹ as antifoams 0.51 rapeseed oil are added to the medium before inoculation The amylase formation begins after 3 to 4 After 24 hours, the fermentation is stopped and the alpha-amylase-containing culture solution is harvested, containing alpha-amylase at a concentration of 40 to 60 AU / ml. Protease is only in small quantities of 3 to 4 TE / ml of culture solution.

Claims

1. A process for the preparation of an alpha-amyla from Thermoactinomyces vulgaris with particular properties for the cleavage of starch polysr, chariden in maltose and maltotriose, wherein glucose is produced only in very small amounts, characterized in that from the strain Thermoactinomyces vulgaris and / or his Mutants - deposited in the Central Collection of the GDR in the Central Institute for Microbiology and Experimental Therapy in Jena under IMET9512 and for the mutant IMET9515- from diluted spore suspensions on nutrient agar from maize starch, corn steep liquor and salts attracted to individual colonies, of these for propagation inclined tubes with the same nutrient agar inoculated and from these after incubation spore effluents are obtained, of which, after a performance test in shake cultures, mixtures of those spore effluents are produced which showed a high alpha-amylase formation in the performance test, and that this mixture of the spore effluents of the power selenium ektante for propagation on nutrient agar from maize starch, corn steep liquor and salts inoculated and after incubation thereof spore effluents are produced, which are used for inoculation of fermentation approaches.

2. The method according to claim 1, characterized in that the Sporenabschwemmungen the Leistungsselektante from the strain Thermoactinomyces vulgaris each freshly prepared and used for the inoculation of fermentation approaches.

3. The method according to claim 1, characterized in that the Sporenabschwemmungen the Leistungsselektante preserved on Luvos healing clay and from it, if necessary, by incubation on Nähragar a Sporenabschwemmung is produced, which is used for inoculation of fermentation approaches.