DD276531A1 - TEST BUTTON FOR THE IMMUNE CYMOMETRIC DETERMINATION OF HUMAN GROWTH HORMONE (HGH) - Google Patents

TEST BUTTON FOR THE IMMUNE CYMOMETRIC DETERMINATION OF HUMAN GROWTH HORMONE (HGH) Download PDF

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DD276531A1
DD276531A1 DD32104788A DD32104788A DD276531A1 DD 276531 A1 DD276531 A1 DD 276531A1 DD 32104788 A DD32104788 A DD 32104788A DD 32104788 A DD32104788 A DD 32104788A DD 276531 A1 DD276531 A1 DD 276531A1
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DD
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enzyme
zim
mab
solid phase
chromogen
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DD32104788A
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German (de)
Inventor
Luise Pasternak
Franz Noll
Bernhard Neef
Original Assignee
Akad Wissenschaften Ddr
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  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Testbesteck zur immunenzymometrischen Bestimmung von humanem Wachstumshormon (hGH) fuer die medizinische Diagnostik sowie fuer das biotechnologisch hergestellte rekombinante hGH zur Prozesskontrolle. Das erfindungsgemaesse Testbesteck ist dadurch gekennzeichnet, dass es aus dem ersten, an der festen Phase fixierten monoklonalem AK (mAK) A64-D/E3 (ZIM-0199) oder A9 (ZIM-0289), dem zweiten mit einem Enzym markierten mAK A64-E/C8 (ZIM-0200) oder A64-E-/B12 (ZIM-0202), einem hGH-Standardpraeparat, dem Enzymsubstrat und einem Chromogen oder Fluorogen oder Luminogen besteht. Erfindungswesentlich ist die Auswahl des jeweiligen Antikoerper-Paares, wobei beide mAK an raeumlich distinkte antigene Determinanten binden, so dass eine quantitative hGH-Bestimmung im Bereich von 0,01 ng/ml bis 50 ng/ml durchfuehrbar ist und die Moeglichkeit der wahlweisen Messung der an der festen Phase gebundenen Enzymaktivitaet durch Photometrie, Fluoreszenz- oder Chemiluminiszenzmessung besteht.The invention relates to a test kit for the immunoenzymometric determination of human growth hormone (hGH) for medical diagnostics as well as for the biotechnologically produced recombinant hGH for process control. The test kit according to the invention is characterized in that it consists of the first solid phase fixed monoclonal AK (mAb) A64-D / E3 (ZIM-0199) or A9 (ZIM-0289), the second enzyme-labeled mAb A64- E / C8 (ZIM-0200) or A64-E / B12 (ZIM-0202), a standard hGH preparation, the enzyme substrate, and a chromogen or fluorogen or luminogen. Essential to the invention is the selection of the respective antibody pair, both mAb binding to spatially distinct antigenic determinants, so that a quantitative hGH determination in the range of 0.01 ng / ml to 50 ng / ml can be performed and the possibility of optional measurement of enzyme activity bound to the solid phase by photometry, fluorescence or chemiluminescence measurement.

Description

Anwendungsgebiet der ErfindungField of application of the invention

Die Erfindung betrifft ein Testbosteck für die Durchführung von quantitativen Bestimmungen von humanem Wachstumshormon in Lösungen, das für die medizinische Diagnostik und für die Prozeßkontrolle bei der biotechnologischen Herstellung von rekombinantem hGH benötigt wird.The invention relates to a test reservoir for carrying out quantitative determinations of human growth hormone in solutions, which is needed for medical diagnostics and for process control in the biotechnological production of recombinant hGH.

Charakteristik des bekannten Standes der TechnikCharacteristic of the known state of the art

hGH ist ein Polypeptidhormon, Has in der Hypophyse gebildet wird und das Körperwachstum reguliert. Regulationsstörungen in der hGH-Bildung bzw. -Ausschüttung führen zu Minderwuchs. Die Therapie des Minderwuchses erfolgt durch Substitution des hGH, wobei zunehmend gen'.echnisch hergestellte Produkte eingesetzt werden.hGH is a polypeptide hormone that is formed in the pituitary gland and regulates body growth. Regulatory disturbances in the formation or release of hGH lead to short stature. The therapy of the short stature takes place by substitution of the hGH, whereby increasingly gen'.echnisch manufactured products are used.

Für die Diagnostik und eine effektive Therapie sowie für die Produktionskontrolle bei der gentechnischen Herstellung von rekombinantem hGH ist ein empfindliches, quantitatives und schnelles Bestimmungsverfahren für hGH erforderlich. Bishei ige Testsysteme zum hGH-Nachweis beruhen in erster Linie auf konventionollen Radioimmunoassays (RIA) mit polyklonalen Antiseren (z. B. hGH-RIA Sebnitz IDDR]; hGH-RIA Kit der Fa.Cambridge Medical Diagnostics IUSA)). Polygonale Antikörper haben den Nachteil, daß ihre Herstellung zu Antikörpergemischen unterschiedlicher Quantität und Qualität führt. Unter diesem Gesichtspunkt wurden von verschiedenen Herstellern die polyklonalen Antikörper im RIA dur„h monoklonal Antikörper ersetzt (z.B. F. Gomez, G.Pirens, C.Schaus, J.CIosset, G.Hennen J.: Immunoassay 5,115-157 (1984]; R Aston, L. Cooper, A. Holder, I. Ivanji, M.Preece: Molec. Immunol. 22, 271-275(1985)). Besonders vorteilhaft sind dabei immunomctrische Tests nach dem Zweiseitenbindungsprinzip, die gegenüber kompetitiven Bindungstests eine erhöhte Empfindlichkeit und Präzision garantieren (z.B. Sucrosep™ immunoradiometric assay hGH der Fa.Boots-Celltech Diagnostics Ltd. (England); hGH TandemR Kit der Fa. Hybritech Europa S.A. !Belgien]). Trotz dieser verbesserten Qualitätsparameter haftet den immunoradiometrischen Tests dor Nachteil des Umgangs mit Radioaktivität und der relativ kurzen Verwendungszeit der Testkits an. Diese Nachteile können durch Verwendung nichtradioaktiver Markör (Enzyme/Fluorogene) umgegangen werden. Solche Tests wurden von verschiedenen Autoren beschrieben (S.Hashida, E.lshikawa: Anal. Letters 18 1143-1155 (10851; T. Torresani, E. Schuster, B. Dinosen, R. IlIig wird nachgereicht), jedoch kommen dabei nur polygonale Antikörper zum Einsatz. Von der Fa. Nordisk Gentofte A/S (Produkt) wird kommerziell ein immunoenzymometrischer Testkit zur Bestimmung von hGH auf Basis eines polyklonalon AS vom Meerschweinchon angeboten. Ein entsprechender Test mit luminometrischer Messung wurde von WEEKS beschrieben (I. Weeks: CNn. Chim. Acta 159 139-145 (1986)).For diagnosis and effective therapy, as well as for production control in the genetic engineering of recombinant hGH, a sensitive, quantitative and rapid assay for hGH is required. Current hGH detection assays are based primarily on conventional radioimmunoassays (RIA) with polyclonal antisera (eg, hGH-RIA Sebnitz IDDR], hGH-RIA Kit of the Cambridge Medical Diagnostics IUSA)). Polygonal antibodies have the disadvantage that their production leads to antibody mixtures of different quantity and quality. From this point of view, the polyclonal antibodies have been replaced in the RIA by monoclonal antibodies by various manufacturers (eg F. Gomez, G.Pirens, C. Schaus, J. Colosset, G. Hennen J .: Immunoassay 5, 157-157 (1984); R Aston, L. Cooper, A. Holder, I. Ivanji, M. Preece: Molec., Immunol., 22, 271-275 (1985)). Particularly advantageous are immuno-nuclear tests according to the two-sided binding principle, which have an increased sensitivity to competitive binding assays and precision (eg, Sucrosep ™ immunoradiometric assay hGH from Boats-Celltech Diagnostics Ltd. (England); hGH TandemR Kit from Hybritech Europa SA! Belgium]). Despite these improved quality parameters, the immunoradiometric assays are at a disadvantage in dealing with These disadvantages can be circumvented by using nonradioactive markers (enzymes / fluorogens) Such tests have been reported by several authors b Described (S.Hashida, E.lshikawa: Anal. Letters 18 1143-1155 (10851, T. Torresani, E. Schuster, B. Dinosen, R. IlIig will be submitted later), but only polygonal antibodies are used. The company Nordisk Gentofte A / S (product) commercially offers an immunoenzymometric test kit for the determination of hGH on the basis of a polyclonalone of guinea pig chert. A corresponding test with luminometric measurement has been described by WEEKS (I.Wests: CNn. Chim. Acta 159 139-145 (1986)).

oder es gehen nichtstandardisiorbare Testbestandteile wie polyklonalo Antikörper ein.or non-standardizable test components such as polyclonal antibodies.

Ziel der ErfindungObject of the invention

Die Erfindung hat das Ziel, ein Tastbar.er k zur Verfügung zu stellen, mit dem hGH quantitativ, schnell und präzise noch in sehr geringer Konzentration und ohne Einsatz ν on Radioaktivität routinemäßig bestimmbar ist.The object of the invention is to provide a tactile bar with which hGH can be routinely determined quantitatively, quickly and precisely even in very low concentration and without use of radioactivity.

Darlegung des Wesens der ErfindungExplanation of the essence of the invention

Das erfindungsgemäße Testbestock zur immunanzymomeidschen Bestimmung von humanem Wachstumshormon ist dadurch gekennzeichnet, daß es besteht ausThe Testbestock invention for immunanzymomeidschen determination of human growth hormone is characterized in that it consists of

- dem ersten, an der festen Phase fixierten mAK A64-D/E3 (ZIM-0199) oder dessen Fab-Fragmentethe first solid-phase mAb A64-D / E3 (ZIM-0199) or its Fab fragments

- dem zweiten, mit Enzym markiorton mAK A64-E/C8 (ZIM-0200) oder dessen enzymmsrkierten Fab-Fragmententhe second, with enzyme markiorton mAb A64-E / C8 (ZIM-0200) or its enzyme-mediated Fab fragments

- dom hGH-Standardpräparat- dom hGH standard preparation

- einem vom Standard unabhängigen Kontrollmaterial- a non-standard control material

- dem Chromogon oder gegebenenfalls an Stelle des Chromogens ein Luminogen und ein Verstärkerreagens oder ein Fluorogen- The chromogon or optionally in place of the chromogen, a luminogen and an amplifier reagent or a fluorogen

- dem Puffer zum Aufnohmon des markierten mAK- the buffer to the Aufnohmon of the marked MAK

- dem Enzymsubstrat- the enzyme substrate

- dem Substratpuffer- the substrate buffer

- einer Boschreibung für die Testdurchführung oder- a Bosch friction for the test execution or

daß es besteht austhat it consists of

- dem ersten, an der festen Phase fixierten mAK Il A9 (ZIM-0289) oder dessen Fab-Fragmente,the first MAK Il A9 (ZIM-0289) or its Fab fragments fixed on the solid phase,

- dem zweiten, mit Enzym markierten mAK A64-E/B12 (ZIM-0202) oder dessen enzyrnmarkierten Fab-Fragmententhe second enzyme-labeled mAb A64-E / B12 (ZIM-0202) or its enzyme-labeled Fab fragments

- demhGH-Standardpräparet- standard demhGH preparation

- einem vom Standard unabhängigen Kontrollmaterial- a non-standard control material

- dem Chromogen oder gegebenenfalls an Stelle des Chromogens ein Luminogen und ein Verstärkerreagens oder ein Fluorogen- The chromogen or optionally in place of the chromogen, a luminogen and an amplifier reagent or a fluorogen

- dem Puffer zum Aufnehmen des markierten mAK- the buffer for recording the marked MAC

- dem Enzymsubstrat- the enzyme substrate

- dem Substratpuffer- the substrate buffer

- einer Beschreibung für die 1 Ostdurchführung oder- a description for the 1 Eastern execution or

dafi es besteht austhat it consists of

- einer festen Phase- a solid phase

- dem ersten mAK A64-D/E 3 (ZIM-0199) oder dessen Fab-Fragmentethe first mAb A64-D / E3 (ZIM-0199) or its Fab fragments

- dem zweiten, mit Enzym markierten mAK A64-E/C8 (ZIM-0200) oder dessen enzymmarkierten Fab-Fragmententhe second enzyme-labeled mAb A64-E / C8 (ZIM-0200) or its enzyme-labeled Fab fragments

- dom hGH-Standardpräparat- dom hGH standard preparation

- einem vom Standard unabhängigen Kontrollpräparat- A control preparation independent of the standard

- dem Chromogen oder gegebenenfalls an Stelle des Chromogens ein Luminogen und ein Verstärkerreagens oder ein Fljorogen- The chromogen or optionally instead of the chromogen, a luminogen and a booster reagent or a flurogen

- ein Puffersubstanz zum Aufnehmen des ersten mAKa buffer substance for picking up the first MAK

- dem Puffer zum Aufnehmen des markierten mAK- the buffer for recording the marked MAC

- einer Lösung zum Blockieren freigebliebener proteinbindender Stellen an der festen Phasea solution for blocking residual protein binding sites on the solid phase

- dem Enzymsubstrat- the enzyme substrate

- dem Substratpuffor- the substrate puffor

- einer Beschreibung für die Testdurchführung odei- A description for the test procedure odei

daß es besteht austhat it consists of

- einer festen Phase- a solid phase

- dem ersten mAK Il A9 (ZIM-0289} oder dessen Fab-Fragmente- the first mAb Il A9 (ZIM-0289) or its Fab fragments

- dem zweiten, mit Enzym markierten mAK A64-E/B12 (ZIM-0202) odor dessen enzymmarkierten Fab-Fragmententhe second, enzyme-labeled mAb A64-E / B12 (ZIM-0202) or its enzyme-labeled Fab fragments

- dem hGH-Standardpräparat- the standard hGH preparation

- einem vom Standard unabhängigen Kontrollmaterial- a non-standard control material

- dem Chromogen oder gegebenenfalls an Stelle des Chromogens ein Luminogen und ein Verstärkerreagen· oder ein Fluorogen- The chromogen or optionally in place of the chromogen, a luminogen and a booster reagent · or a fluorogen

- einer Puffersubstanz zum Aufnehmen des ersten mAK- a buffer substance for picking up the first MAH

- dem Puffer zum Aufnehmen des markierten mAK- the buffer for recording the marked MAC

- einer Lösung zum Blockieren freigebliebener protoinbindender Stellen an dor festen Phasea solution for blocking free-standing proto-binding sites on the solid phase

- dem Enzymsubstrat- the enzyme substrate

- dem Substratpuffer- the substrate buffer

- einer Beschreibung für die Tostdurchführung.- a description for the completion of the tea.

Die jeweils paarweise eingesetzten mAK sind gegen räumlich distinkte antigene Determinanten gerichtet. Dadurch und durch dieThe mABs used in pairs are directed against spatially distinct antigenic determinants. Through this and through the

hohe Bindungsstärke der mAK an das hGH-Molekül ist die hohe Empfindlichkeit des Testes gegeben.high binding strength of the mAb to the hGH molecule is given by the high sensitivity of the test.

Für die Auswahl dor jeweiligen Antikörperpaaro sind darüber hinaus ihre Eigenschaften hinsichtlich ihrer AdsorptionsfähigkeitIn addition, their properties in terms of their adsorptive capacity for the selection dor respective antibody pair

an Plastoberflächen sowie ihre Markierbarkeit von entscheidender Bedeutung. Als mAK können entweder die natürlichenon plastic surfaces and their marking ability of crucial importance. As mAK can either the natural

Produkte der Zellinien ZIM-0199 (A64D/E3), ZIM-0200 (A64-E/C8), ZIM-0288 (IIA9) und ZIM-0202 (A64E/B12) eingesetztProducts of cell lines ZIM-0199 (A64D / E3), ZIM-0200 (A64-E / C8), ZIM-0288 (IIA9) and ZIM-0202 (A64E / B12) used

werden oder deren durch enzymatische Spaltung gewonnenen Fab-Fragmente.or their Fab fragments obtained by enzymatic cleavage.

Der jeweils arste mAK wird an die Oberfläche der Näpfe von Reaktionsgefäßen aus Plaste oder einem anderen Material,The hardest MAb is placed on the surface of the wells of reaction vessels made of plastic or other material,

vorzugswoiso an 96-Napf Mikrotostplatton (MTP) aus Polystyren adsorbiert. Solche mit mAK bereits vorbeschichtete MTP imPreferably, it is adsorbed on polystyrene 96-well microtome plate (MTP). Such with MAK already pre - coated MTP in the

Testbosteck sind besonders anwenderfreundlich. Der Anwender kann aber auch die Beschichtung der MTP mit dom ersten mAKTestbooster corners are particularly user-friendly. However, the user can also coat the MTP with the first mAK

selbst vornehmen. Zur Erhöhung der Proteinbindung an die feste Phase kann deren Oberfläche mit Haftvermittlern, z.B.make yourself. To increase protein binding to the solid phase, its surface may be coated with coupling agents, e.g.

siliciumorganische Verbindungen vorbehandelt werden (DD-WP/288647, DD-WP/305376).organosilicon compounds are pretreated (DD-WP / 288647, DD-WP / 305376).

Im Fall der Variante, daß der Anwender die Beschichtung der MTP selbst vornimmt, ist dem Testbesteck eineIn the case of the variant that the user undertakes the coating of the MTP itself, the test set is a Rlockierungssubstanz beigefügt, die NHj-Gruppen und/oder Proteine enthält, um die nach der Beschichtung der MTP mit demAdded blocking substance containing NHj groups and / or proteins to the after coating of the MTP with the

ersten mAK freigcbliebenon unspezifischen Adsorptionsstellen blockieren zu können. Hierfür eignet sich z.B. Gelafusal".the first mAb was able to block unspecific adsorption sites. For this purpose, e.g. Gelafusal ".

Der jeweils zweite Antikörper ist auf an sich bekannte Woise mit einem Markerenzym konjugiert, vorzugsweise mitThe second antibody in each case is conjugated to a marker enzyme in known manner, preferably with Meerrettichperoxydase. Dadurch kann wahlweise eine photometrische Auswertung oder oine weit empfindlichere,Horseradish peroxidase. This allows either a photometric evaluation or a far more sensitive,

luminometrische oder auch fluorometrisch^ Auswertung erfolgen.luminometric or fluorometric ^ evaluation done.

Je nach Auswertomodus kommen Chromogene, Luminogene oder Fluorogene für die Nachweisreaktion in Frage. AlsDepending on the evaluation mode, chromogens, luminogens or fluorogens are suitable for the detection reaction. When Chromogene wo'den vorzugsweise o-Phenylendiamin oder ABTS (2,2-Azino-di-3enthylbenzthiazolin-sulfat) eingesetzt. AlsChromogenic wo'den preferably o-phenylenediamine or ABTS (2,2-azino-di-3enthylbenzthiazolin sulfate) used. When Luminogen werden vorzugsweise Luminol oder dessen Derivate und als Verstärkerreagens Jodphenol eingesetzt. AlsLuminogens are preferably luminol or its derivatives and used as an amplifier reagent iodophenol. When Fluorogene eigenen vieh besonders p-Hydroxyphenylpropionsäure oder p-Hydroxylphenylessigsöure. Die empfindlichstenFluorogenic livestock especially p-hydroxyphenylpropionic acid or p-Hydroxylphenylessigsure. The most sensitive Nachweisrcdkürnen < »Orden mit Hilfe dor Chemilumineszenz und der Fluororeszenzmessung erhalten. So liogt der MeßbereichDetection orders are obtained by chemiluminescence and fluororescence. This is the meaning of the measuring range

entweder bei 0,1 ng/ml-12,5ng/ml oder bei 0,01 ng/mMOng/ml.either at 0.1 ng / ml-12.5ng / ml or at 0.01 ng / mMOng / ml.

.Der Vorteil des erfindungsgemäßen Testbesteckes liegt in der hohen Nachweisempfindlichkeit für hGH, die sich aus der Auswahl der mAK-Paare mit den vorteilhaften Eigenschaften für dio Adsorption an die feste Phase, für die Konjugation mit einemThe advantage of the test kit according to the invention lies in the high detection sensitivity for hGH, which results from the selection of the mAK pairs with the advantageous properties for dio adsorption to the solid phase, for conjugation with a

Markctcnzym und aus der Nutzung der Zwoiseitenbindungstechnik sowie den empfindlichen Nachweisreaktionen ergibt.Markctcnzym and from the use of Zwoiseitenbindungstechnik as well as the sensitive detection reactions results.

Der Testkit besticht durch seine hohe Anwenderfreundlichkeit, d. h. die einfache Durchführbarkeit des immunenzymometrischen Tests, die kurzen Testzeiten und die lange Verwendbarkeit (mind. 1 Jahr). Darüber hinaus ist dieses Testbesteck sehr umweltfreundlich und in einem beliebigen Laboratorium machbar ohne speziell geschultes Personal, ohne spezielle Ausrüstungen und Schutzvorrichtungen sowie ohne Abfallprobleme, da hierbei keine Radioaktivität zum Einsatz kommt. Außerdem ist die Verwendung dieses Testbestecks materialsparend, da alle Waschschritte bei der Durchführung des immunenzymometrischen Tests mit Leitungswasser vorgenommen werden können.The test kit captivates by its high user friendliness, d. H. the simple feasibility of the immunoenzymometric test, the short test times and the long useful life (at least 1 year). In addition, this test kit is very environmentally friendly and feasible in any laboratory without specially trained personnel, without special equipment and protection devices and without waste problems, since this is no radioactivity used. In addition, the use of this test kit is material-saving, since all washing steps can be carried out in the execution of the immunoenzymometric test with tap water.

Ausführungsbeispieleembodiments

1. Beispiel: Das Testbesteck besteht ausfolgenden Komponenten:Example 1: The test set consists of the following components:

- oiner Mikrot»stplatte, deren Näpfe beschichtet sind mit dem mAKA64-D/E3(ZIM-0199) und deren unspezifische Bindungsstel en für Proteine blockiert sind.- A microplate whose wells are coated with the mAKA64-D / E3 (ZIM-0199) and whose non-specific binding sites for proteins are blocked.

- dem zweiten niAK (A64-E/C8 [ZIM-0200]), der mit Meerrettich-Peroxydase markiert ist.the second niAK (A64-E / C8 [ZIM-0200]) labeled with horseradish peroxidase.

- den Puffer zum Aufnehmen des markierten mAK: 0.05M Tris/HCI-pH 7,4- 0,2 M NaCI -0,1 %, Tween 20-10% Gelafusal": davon 10mithe buffer to take up the labeled mAb: 0.05M Tris / HCl pH 7.4-0.2M NaCl -0.1%, Tween 20-10% Gelafusal ": 10mi thereof

- dem Substratpuffer: 0.15M Na2HPO4-0,07MZitronensäure-pH5,0; 25mlthe substrate buffer: 0.15M Na 2 HPO 4 -0.07M citric acid pH 5.0; 25ml

- dem Enzymsubstrat: 30% HjO2 - the enzyme substrate: 30% HjO 2

- dem Chromogeti: 8mg o-Phenylendiamin- Chromogeti: 8 mg o-phenylenediamine

- der Boschreibung für die Testdurchführung- the Bosch friction for the test procedure

- Kontrollmaterial mit deklariertem hGH-Gehalt- Control material with declared hGH content

- dem hGH-Standardpräparat in acht Konzentrationen zu jeweils 0,4ml: 0,1 ng/ml; 0,2ng/ml; 0,4ng/ml; 0,4ng/ml; 0,8ng/ml; 1,6ng/ml; 3,2ng/ml; 6,4ng/ml; 12,8ng/ml; 0ng/ml.- The standard hGH preparation in eight concentrations of 0.4 ml each: 0.1 ng / ml; 0,2ng / ml; 0,4ng / ml; 0,4ng / ml; 0,8ng / ml; 1,6ng / ml; 3,2ng / ml; 6,4ng / ml; 12,8ng / ml; 0ng / ml.

2. Beispiel: Da* Testbesteck besteht aus folgenden Bestandteilen:Example 2: Da * Testbesteck consists of the following components:

- einer Mikrotestplatte, deren Näpfe mit dem mAK IIA9 (ZIM-0289) beschichtet sind und deren unspezifische Bindungsstellen für Proteine blockiert sind.- A microplate whose wells are coated with mAb IIA9 (ZIM-0289) and whose non-specific binding sites for proteins are blocked.

- dem zweiten mAK (A64-E/B12 IZIM-0202]), der mit Meerrettich-Peroxydase markiert ist.the second mAb (A64-E / B12 IZIM-0202!) labeled with horseradish peroxidase.

- dem Puffer zum Aufnehmen des markierten mAK: 0.05M Tris/HCI-pH7,4- 0,2 M NaCI- 0,1 %, Tween 20-10% Gelafusal"; davon 10mlthe buffer to take up the labeled mAb: 0.05M Tris / HCl pH 7.4-0.2M NaCl 0.1%, Tween 20-10% Gelafusal, 10ml thereof

- dem hGH-Standardpräparat in acht Konzentrationen zu jeweils 0,4ml: 0,1 ng/ml; 0,2 ng/ml; 0,4 ng/ml; 0,8ng/ml; 1,6ng/ml; 3,2ng/ml; 6,4ng/ml; 12,8ng/ml; Ong/rnl.- The standard hGH preparation in eight concentrations of 0.4 ml each: 0.1 ng / ml; 0.2 ng / ml; 0.4 ng / ml; 0,8ng / ml; 1,6ng / ml; 3,2ng / ml; 6,4ng / ml; 12,8ng / ml; Ong / rnl.

- dem Substratpuffer: 0,15M Na2HPO4 -0,07 N Zitronensäure -pH 5,0; 25mlthe substrate buffer: 0.15M Na 2 HPO 4 -0.07 N citric acid-pH 5.0; 25ml

- dem Enzymsubstret: 30% H2O2 the enzyme substrate: 30% H 2 O 2

- dem Chromagen: 8mg o-Phenylendiamin- Chromagen: 8 mg of o-phenylenediamine

- der Beschreibung der Tostdurchführung- The description of the completion of the tea

- dom Kontrollmaterial mit deklariertem hGH-Gehalt.- dom control material with declared hGH content.

3. Beispiel: Das Tostbesteck besteht aus:Example 3: The cutlery consists of:

- einer Mikroplatte mit 96 Näpfen- a 96-well microplate

- dem ersten mAK A64-D/E 3 (ZIM-0199): 10ml (20pg Antikörper/ml 0,01 M Phosphat-0,15M NaCI, pH7,4-MerthiolatO,.02%)- the first mAb A64-D / E 3 (ZIM-0199): 10 ml (20 μg antibody / ml 0.01 M phosphate-0.15M NaCl, pH 7.4-merthiolato, .02%)

- einer Blockierungslösung: 0.05M Tris/HCI - pH 7,4 - 0,2 M NaCI - 0,1 % Tween 20-10% Gelafusal" davon 35ml- a blocking solution: 0.05M Tris / HCl - pH 7.4 - 0.2M NaCl - 0.1% Tween 20-10% Gelafusal "of which 35ml

- dem zweiten mAK (A64-E/C8 (ZIM-0200)), der mit Meerrettich-Peroxydase markiert ist;the second mAb (A64-E / C8 (ZIM-0200)) labeled with horseradish peroxidase;

- dem hGH-Standardpräparat in acht Konzentrationen zu jeweils 0,4ml: 0,1 ng/ml; 0,2 ng/ml; 0,4 ng/ml; 0,8ng/ml; 1,6ng/ml 3,2ng/ml; 6,4ng/ml; 12,8ng/ml; 0ng/ml.- The standard hGH preparation in eight concentrations of 0.4 ml each: 0.1 ng / ml; 0.2 ng / ml; 0.4 ng / ml; 0,8ng / ml; 1.6ng / ml 3.2ng / ml; 6,4ng / ml; 12,8ng / ml; 0ng / ml.

- dem Substratpuffer: 0,15M Na2HPO4 - 0,07 M Zitronensäure -pH5,0; 25mlthe substrate buffer: 0.15M Na 2 HPO 4 - 0.07M citric acid-pH5.0; 25ml

- dem Enzymsubstrat: 30% H2Ojthe enzyme substrate: 30% H 2 Oj

- dom Chromagen: 8mg o-Phenylendiamin- dom Chromagen: 8mg o-phenylenediamine

- der Beschreibung der Testdurchführung- the description of the test procedure

- dem Kontrollmaterial mit deklariertem hGH-Gehalt.- the control material with declared hGH content.

4. Beispiel: Das Tostbes' eck hat folgende Zusammensetzung:Example 4: The Tostbes' eck has the following composition:

- eine Mikrotestplatte rr it 96 Näpfen- One microplate with 96 wells

- eiern ersten mAK Il A9 (ZIM-0289): 10ml (20μρ Antikörper/ml 0,01 M Phosphat - 0,15M NaCI - pH 7,4 - Merthiolat 0,02%)- first mAb Il A9 (ZIM-0289): 10ml (20μg antibody / ml 0.01M phosphate - 0.15M NaCl - pH 7.4 - merthiolate 0.02%)

- einer Blockierungslösung: 0.05M Tris/HCI-pH 7,4 - 0,2M NaCI -0,1 % Tween 20-10% Gelafusal" davon 35ml- a blocking solution: 0.05M Tris / HCl pH 7.4 - 0.2M NaCl -0.1% Tween 20-10% Gelafusal "of which 35ml

- dom zweiten mAK (A64-E/B12 IZIM-0202)), der mit Meerrettich-Peroxydase markiort ist- dom second mAb (A64-E / B12 IZIM-0202)) labeled with horseradish peroxidase

- dem hGH-Standardpräparat in acht Konzentrationen zu jeweils 0,4ml: 0,1 ng/ml; 0,2 ng/ml; 0,4 ng/ml; G,8ng/ml; 1,6ng/ml; 3,2ng/ml; 6,4ng/ml; 12,8ng/ml; 0ng/ml.- The standard hGH preparation in eight concentrations of 0.4 ml each: 0.1 ng / ml; 0.2 ng / ml; 0.4 ng / ml; G, 8 ng / ml; 1,6ng / ml; 3,2ng / ml; 6,4ng / ml; 12,8ng / ml; 0ng / ml.

- dem Substratpuffer: 0.15M Na2HPO4 -0,07 M Zitronensäure -pH 5,0; 25ml- the substrate buffer: 0.15M Na 2 HPO 4 -0.07 M citric acid-pH 5.0; 25ml

- dem Enzymsubstrat: 30% H2O2 the enzyme substrate: 30% H 2 O 2

- dem Chromogen: 8mg o-Phenylendiamin- the chromogen: 8 mg of o-phenylenediamine

- der Beschreibung der Testdurchführung- the description of the test procedure

- dem Kontrollmaterial mit deklariertem hGH-Gehalt.- the control material with declared hGH content.

5. Beispiel: Das Testbesteck für luminometrische Auswertung bestoht aus:5th example: The test set for luminometric evaluation bestoht from:

- einer Mikrotestplatte, deren Näpfe beschichtet sind mit dem mAK A64-D/E 3 (ZIM-0199) und deren unspezifische Dindungsstellen für Protoine blockiert sind- A microplate whose wells are coated with the mAb A64-D / E 3 (ZIM-0199) and whose non-specific binding sites for protoins are blocked

- dem zweiten mAK (A64-E/C8IZIM-0200)), der mit Meerrettich-Peroxydase markiert istthe second mAb (A64-E / C8IZIM-0200) labeled with horseradish peroxidase

dem hGh-Standardpräparat (12,8ng/ml); 1 ml; Nullserum 5ml dem Luminogen: 2,5mg Na-Luminol dem Verstärkerreagens: 5mg Jodphenol dem Substratpuffer: 0,2 M Natriumborat, pH8,6,25ml dem Puffer zum Aufnehmen des markierten mAK: 0.05M Tris/HCI - pH 7,4 - 0,2 M NaCI -0,1 % Tween, 20-10% Gelafusal"; davon 10ml.the standard hGh preparation (12.8ng / ml); 1 ml; Null serum 5ml of the luminogen: 2.5mg of Na luminol to the booster reagent: 5mg of iodophenol to the substrate buffer: 0.2M sodium borate, pH8.6.25ml to the buffer to take the labeled mAb: 0.05M Tris / HCl - pH 7.4-0 , 2M NaCl -0.1 % Tween, 20-10% Gelafusal ", of which 10ml.

dem Enzymsubstrat: 30%ig H2Oj dam Kontrollmaterial mit deklariertem hGH-Gehalt der Beschreibung der Testdurchführung.the enzyme substrate: 30% H 2 Oj dam control material with declared hGH content of the description of the test procedure.

Claims (6)

1. Testbesteck zur immunenzymometrischen Bestimmung von humanem Wachstumshormon (hGH), dadurch gekennzeichnet, daß es besteht aus1. Test kit for immunoenzymometric determination of human growth hormone (hGH), characterized in that it consists of - einem Festphasenträger, an dem der erste mAK A64-D/E3 (ZIM 0199) oder dessen Fab-Fragmente fixiert sinda solid phase support to which the first mAb A64-D / E3 (ZIM 0199) or its Fab fragments are fixed - dem zweiten, mit Enzym markierten mAK A64-E/C8 (ZIM-0200) oder dessen enzymmarkierten Fab-Fragmententhe second enzyme-labeled mAb A64-E / C8 (ZIM-0200) or its enzyme-labeled Fab fragments - dem hGH-Standardpräparat- the standard hGH preparation -· einem vom Standard 'inabhängigen Kontrollmaterial- a standard in-dependent control material - dem Chromogen oder gegebenenfalls an Stelle des Chromogens ein Luminogen und ein Verstärkerreagens oder ein Fluorogen- The chromogen or optionally in place of the chromogen, a luminogen and an amplifier reagent or a fluorogen - dem Puffer zum Aufnehmen des markierten mAK- the buffer for recording the marked MAC - dem Enzymsubstrat- the enzyme substrate - dem Substratpuffer oder- the substrate buffer or daß es besteht austhat it consists of - einem Festphasenträger, an dem der erste mAK Il A9 (ZIM-0289) oder dessen Fab-Fragmente fixiert ist- A solid phase support to which the first mAb Il A9 (ZIM-0289) or its Fab fragments is fixed - dem zweiten, mit Enzym markierten mAK A64-E/B12 (ZIM-0202) oder dessen enzymmarkierten Fab-Fragmententhe second enzyme-labeled mAb A64-E / B12 (ZIM-0202) or its enzyme-labeled Fab fragments - dem hGH-Standardpräparat- the standard hGH preparation - einem vom Standard unabhängigen Kontrollmaterial- a non-standard control material - dem Chromogen oder gegebenenfalls an Stelle des Chromogens ein Luminogen und ein Verstärkerreagens oder ein Fluorogen- The chromogen or optionally in place of the chromogen, a luminogen and an amplifier reagent or a fluorogen - dem Puffer zum Aufnahmen des markierten mAK- the buffer for recording the marked MAC - dem Enzymsubstrat- the enzyme substrate - dem Substratpuffer daß es besteht aus- the substrate buffer that it consists of - einer festen Phase (Festphasenträger)a solid phase (solid phase carrier) - dem ersten mAK A64-D/E3 (ΖΙΜ-0Ί99) oder dessen Fab-Fragmente- the first mAb A64-D / E3 (ΖΙΜ-0Ί99) or its Fab fragments - dem zweiten, mit Enzym markierten mAK A64-E/C8 (ZIM-0200)the second enzyme-labeled MAb A64-E / C8 (ZIM-0200) - dem hGH-Standardpräparat- the standard hGH preparation - einem vom Standard unabhängigen Kontrollmaterial- a non-standard control material - dem Chromogen oder gegebenenfalls an Stelle des Chromogens ein u'jminogen und ein Verstärkerreagens oder ein Fluorogen- The chromogen or optionally in place of the chromogen u'jminogen and a booster reagent or a fluorogen - einer Puffersubstanz zum Aufnehmen des ersten mAK- a buffer substance for picking up the first MAH - dem Puffer zum Aufnehmen des markierten mAK- the buffer for recording the marked MAC - einer Lösung zum Blockieren freigebliebener protoinbindender Stellen an der festen Phasea solution for blocking free-standing proto-binding sites on the solid phase - dem Enzymsubstrat . - dem Substratpuffer- the enzyme substrate. - the substrate buffer oder
daß es besteht aus
or
that it consists of
- einer festen Phase (Festphasenträger)a solid phase (solid phase carrier) - dem ersten mAK Il A9 (ZIM-0289) oder dessen Fab-Fragmente- the first mAb Il A9 (ZIM-0289) or its Fab fragments - dem zweiten, mit Enzym markierten mAK A64-E/B12 (ZIM-0202) oder dessen enzymmarkierten Fab-Fragmententhe second enzyme-labeled mAb A64-E / B12 (ZIM-0202) or its enzyme-labeled Fab fragments - dem hGH-Standardpräparat- the standard hGH preparation - einem vom Standard unabhängigen Kontrollmaterial- a non-standard control material - dem Chromogen oder gegebenenfalls an Stelle des Chromogens ein Luminogen und ein Verstärkerreagens oder ein Fluorogen- The chromogen or optionally in place of the chromogen, a luminogen and an amplifier reagent or a fluorogen - einer Puffersubstanz zum Aufnehmen des ersten mAK- a buffer substance for picking up the first MAH - dem Puffer zum Aufnehmen des markierten mAK- the buffer for recording the marked MAC - einer Lösung zum Blockieren frei gebliebener proteinbindender Stellen an der festen Phasea solution to block free protein binding sites on the solid phase - dem Enzymsubstrat- the enzyme substrate - dem Substratpuffer- the substrate buffer
2. Testbesteck nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die feste Phase eine 96-Napf-Mikrotestplatto ist.2. Test kit according to claim 1, characterized in that the solid phase is a 96-well Mikrotestplatto. 3. Testbesteck nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Enzym am zweiten mAK Meerrettichperoxydase ist.3. Test kit according to claim 1, characterized in that the enzyme on the second mAK horseradish peroxidase. 4. Töstbesteck nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Chromogen o-Phenylendiamin, ABTS (2,2'-Azino-di-3-9thylbenzthiazclin-sulfünat (6) ist.4. A flatware according to claim 1, characterized in that the chromogen is o-phenylenediamine, ABTS (2,2'-azino-di-3-9thylbenzthiazclin-sulfünat (6). 5. Testbestock nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Luminogen, Luminol sowie dessen Derivate und das Verstärkerreagens Jodphenol oder Phenylphenol ist.5. Testbestock according to claim 1, characterized in that the luminogen, luminol and its derivatives and the booster reagent is iodophenol or phenylphenol. 6. Testbesteck nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Fluorogen p-Hydroxyphenylpropionsäure odor p-Hydroxyphenylossigsäure ist.6. Test kit according to claim 1, characterized in that the fluorogen is p-hydroxyphenylpropionic odor p-hydroxyphenylossigsäure.
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102006009534A1 (en) * 2006-02-28 2007-08-30 Mediagnost Gesellschaft für Forschung und Herstellung von Diagnostika GmbH Method for preserving somatostatin in samples of body fluid, particularly for subsequent quantitative analysis, by applying and binding the sample to a carrier
ITMI20101068A1 (en) * 2010-06-11 2011-12-12 Ho P E S R L METHOD FOR DETERMINING SOMATOTROPAL ACTIVITY

Cited By (2)

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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102006009534A1 (en) * 2006-02-28 2007-08-30 Mediagnost Gesellschaft für Forschung und Herstellung von Diagnostika GmbH Method for preserving somatostatin in samples of body fluid, particularly for subsequent quantitative analysis, by applying and binding the sample to a carrier
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