DD270067A1 - PROCESS FOR THE PREPARATION OF 24R.25-DIHYDROXY CHOLECALCIFEROL - Google Patents

PROCESS FOR THE PREPARATION OF 24R.25-DIHYDROXY CHOLECALCIFEROL Download PDF

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DD270067A1
DD270067A1 DD31385788A DD31385788A DD270067A1 DD 270067 A1 DD270067 A1 DD 270067A1 DD 31385788 A DD31385788 A DD 31385788A DD 31385788 A DD31385788 A DD 31385788A DD 270067 A1 DD270067 A1 DD 270067A1
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Manfred Reichenbaecher
Sabine Gliesing
Gert Hopf
Ulrich Kempka
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Jenapharm Veb
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Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol durch Bestrahlung einer auf 30 bis 0C gekuehlten Loesung von 24R.25-Dihydroxyprovitamin D3 in einem aliphatischen Alkohol mit UV-Licht, Abtrennung des nicht umgesetzten 24R.25-Dihydroxy-provitamin D3 aus der konzentrierten Bestrahlungsloesung durch Kristallisation, Abtrennung des gebildeten 24R.25-Dihydroxy-praevitamin D3, 24R.25-Dihydroxy-lumisterol3 und noch vorhandenem 24R.25-Dihydroxy-provitamin D3 mittels Flash-Chromatographie an silberimpraegniertem Kieselgel, Rueckfuehrung von 24R.25-Dihydroxy-lumisterol3 und nicht umgesetzten 24R.25-Dihydroxy-provitamin D3 in den Bestrahlungsprozess, sowie Abtrennung des 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol von 24R.25-Dihydroxy-praevitamin D3 aus dem Gemisch der thermischen Isomerisierung mittels Flash-chromatographie.The invention relates to a process for the preparation of 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol by irradiation of a 30 to 0C cooled solution of 24R.25-dihydroxyprovitamin D3 in an aliphatic alcohol with UV light, separation of the unreacted 24R.25-dihydroxy- provitamin D3 from the concentrated irradiation solution by crystallization, separation of the formed 24R.25-dihydroxy-praevitamin D3, 24R.25-dihydroxy-lumisterol3 and remaining 24R.25-dihydroxy-provitamin D3 by flash chromatography on silver-impregnated silica gel, recycling of 24R .25-Dihydroxy-lumisterol3 and unreacted 24R.25-dihydroxy-provitamin D3 in the irradiation process, and separation of 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol from 24R.25-dihydroxy-previtamin D3 from the thermal isomerization mixture by flash chromatography ,

Description

Anwendungsgebiet der Erfindung _ > .. Field of application of the invention _> ..

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol. 24R.25-Dihydroxy-choleca!ciferol ist ein wichtiger Vertreter der Vitamin D3-Metabolit(.n: Jie in der Human- und Veterinärmedizin zum Einsatz kommen.The invention relates to a process for the preparation of 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol. 24R.25-dihydroxy-choleca! Ciferol is an important member of the vitamin D 3 metabolite (.n : Jie used in human and veterinary medicine.

Charakteristik des bekannten Standes der TechnikCharacteristic of the known state of the art

24R.25-Dihydroxy-cholecalclferol stellt eine bekannte Verbindung dar, deren Synthese In der am C-24 richtigen stereochemischen Konfiguration erstmals von rv.. Jeki et all., Tetrahedron Letters, 15 (1975) beschrieben wurde. Der Nachteil dieser Synthese besteht in der schwierigen Abtrennung des gewünschten 24R-lsomeren aus dem 24R/24S-lsomerengemisch sowie in der nur sehr geringen erreichbaren Ausbeute und ist daher als Verfahren für den präparativen Maßstab ungeeignet. Eine für den präparativen Maßstab geeignete Synthese ist in der US-PS 4021423 vorgeschlagen. Nach diesem Verfahren wird der fürc'io Herstellung von 24R.2S-Dihydroxy-cholecalciferol notwendige Precursor 3.24R.25-Trihydroxy-cholesta-5.7-dien (24R.26(Oh)2-Provitamin D3) bereits in der richtigen stereochemischen Konfiguration am C-24 erhalten. Zur Realisierung der bei der Synthese anfallenden Trennprozesse wird der Precursor derivatls'ort als 3.24R.26-Trlhydroxy-cholesta-5.7'dlen-3-acetat-24.25-acetonid oder 3.24R.25-Trihydroxy-cholesta-5.7-dien-24.25-aceionld eingesetzt, durch Bestrahlung mit UV-Licht in das entsprechend derivailsierte 24R.25-Dihydroxy-prävitamln D3 überführt und nachfolgend zum jeweiligen derivatisierten 24R.26-Dihydroxy-cholecalciferol thermisch isomerisiert. Nach Abspaltung der Schutzgruppen wird das nicht dorlvatisierte 24R.25-Oihydroxy-cholecalciferoi erhalten.24R.25-dihydroxy-cholecalclferol is a known compound whose synthesis was first described by rv. Jeki et al., Tetrahedron Letters, 15 (1975) in the stereochemical configuration proper to the C-24. The disadvantage of this synthesis consists in the difficult separation of the desired 24R isomers from the 24R / 24S isomer mixture and in the only very low achievable yield and is therefore unsuitable as a preparative scale process. A synthesis suitable for the preparative scale is suggested in US Patent 4021423. According to this method, the precursor 3.24R.25-trihydroxy-cholesta-5.7-diene (24R.26 (Oh) 2 -Provitamin D 3 ) necessary for the production of 24R.2S-dihydroxy-cholecalciferol is already in the correct stereochemical configuration received at C-24. To realize the separation processes involved in the synthesis, the precursor is derivatized as 3.24R.26-trl-hydroxy-cholesta-5,7'-dlen-3-acetate-24,25-acetonide or 3.24R.25-trihydroxy-cholesta-5,7-diene-24,25 -aceionld, converted by irradiation with UV light in the corresponding derivailized 24R.25-dihydroxy-pregitamln D 3 and subsequently thermally isomerized to the respective derivatized 24R.26-dihydroxy-cholecalciferol. After cleavage of the protecting groups, the non-dorlvated 24R.25-oihydroxy-cholecalciferic is obtained.

Dieser Syntheseweg beinhaltet außer den Stufen zur Ketalislerung an der 24R.25-Stellung und Veresterung in der 3-Stellung des Stercidmoleküls vier weitere Stufen, von denen die Hälfte zu Lasten der Verseifung geht. Die erreichbare Ausbeute mit etwa 25%, bezogen auf das jeweils derivatisierte 24R.25-Dihydroxy-provitamin D3 ist daher relativ klein und ist bei Einbeziehung der Verluste, die durch die Herstellung der jeweiligen Derivate entstehen, noch geringer. Die vorgeschlagene Synthese von 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol, ausgehend von einem derivatisierten Precursor, !st nachteiligerweise infolge der durch die Derivatisierung und Abspaltung der Schutzgruppen bedingten größeren Anzahl an Stufen nachteiligerweise sehr arbeits- und materialaufwendig, benötigt die HPLC zur Isolierung des Zielproduktes aus dem jeweiligen Produktgemisch mit dem damit verbundenen sehr geringen Stoffdurchsatz bzw. sehr hohen Kosten bei entsprechender Maßstabsvergrößerung, gestattet nicht das Recycling der im Bestrahlungsschritt anfallenden reversiblen, d.h. wieder in den Prozeß zurückführbaren Nebenprodukte und ermöglicht infolge des großen Substanzverlustes nur eine sehr geringe Ausbeute.In addition to the steps of ketalization at the 24R.25 position and esterification in the 3-position of the stercide molecule, this synthetic route involves four further stages, half of which are at the expense of saponification. The achievable yield of about 25%, based on the respective derivatized 24R.25-dihydroxy-provitamin D 3 is therefore relatively small and is even lower taking into account the losses incurred by the preparation of the respective derivatives. The proposed synthesis of 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol, starting from a derivatized precursor, disadvantageously requires a great deal of labor and materials as a result of the greater number of stages resulting from the derivatization and removal of the protective groups, requires HPLC for isolation of the target product the respective product mixture with the associated very low material throughput or very high costs with appropriate scale-up, does not allow the recycling of the resulting in the irradiation step reversible, ie recycled back into the process by-products and allows due to the large loss of substance only a very low yield.

Ziel der ErfindungObject of the invention

Es ist das Ziel der Erfindung, ein Verfahren zur Herstellung von 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol, ausgehend von 3.24R.25-Trihydroxycholesta-5.7-dien (24R.25(OH)2-Provitamin D3) zu finden, das nur die Mindestanzahl an dafür unbedingt notwendigen Verfahrensschritten erfordert, mit einem geringen apparativen Aufwand in beliebig großem Maßstab durchführbar ist, zu einer hohen Ausbeute führt, die bestehenden Nachteile überwindet und auf diese Weise die Herstellung dieses wichtigen Vitamin D3-Metaboliten ökonomisch günstig gestaltet.It is the object of the invention to find a process for the preparation of 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol, starting from 3.24R.25-Trihydroxycholesta-5.7-diene (24R.25 (OH) 2 D 3 -Provitamin), the only requires the minimum number of absolutely necessary process steps, with a small expenditure on equipment in any large scale feasible, leads to a high yield, overcomes the existing disadvantages and designed in this way the production of this important vitamin D 3 metabolites economically favorable.

Darlegung des Wesens der ErfindungExplanation of the essence of the invention

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zur Herstellung von 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol (24R.25(OH)2-Vitamin D3) ausgehend von 3.24R.25-Trihydroxy-cholesta-5.7-dien zu finden, das oine Derivatisierung nicht erforderlich macht und das unter Anwendung einfacher, schneller und im beliebig großen Maßstab durchführbarer Trennverfahren eine hohe Ausbeute erzieltThe invention has for its object to find a method for the preparation of 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol (24R.25 (OH) 2 -Vitamin D 3 ) starting from 3.24R.25-trihydroxy-cholesta-5.7-diene, the does not require derivatization and achieves a high yield using simple, faster, and scalable separation processes

Die Aufgabe wird erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß folgende Verfahrensschritte ausgeführt werden: The object is achieved in that the following method steps are performed:

a) Bestrahlung einer auf -3O0C bis O0C gekühlten Lösung von 24R.25(OH)2-Provitamin D3 in einem aliphatischen Alkohol mit UV-Licht;a) irradiation of a cooled to -3O 0 C to O 0 C solution of 24R.25 (OH) 2 -Provitamin D 3 in an aliphatic alcohol with UV light;

b) Abtrennung des überwiegenden Anteils an nicht umgesetzten 24R.25(OH)2-Provitamin D3 aus der konzentrierten Bestrahlungslösung durch Kristallisation;b) separation of the predominant amount of unreacted 24R.25 (OH) 2 -Provitamin D 3 from the concentrated irradiation solution by crystallization;

c) Abtrennung von 9.10-seco-Cholesta-6.8-10(5)-trien (24R.25(OH)2-Prävitamin D3), 24R.25(OH)2-Lumisterol3 und noch vorhandenem 24R.25(OH)2-Provitamin D3 aus dem Bestrahlungsgemisch mittels Flash-chromatogmphle unter Verwendung von silberimprägniertem Kieselgel;c) Separation of 9.10 seco-Cholesta-6.8-10 (5) -triene (24R.25 (OH) 2 -privitamin D 3 ), 24R.25 (OH) 2 -l listerol 3 and remaining 24R.25 (OH ) 2 -Provitamin D 3 from the irradiation mixture by flash chromatography using silver impregnated silica gel;

d) thermische Isor.v "sierung von 24R.25(OH)2-Prävitamin D3 In einem inerten organischen Lösungsr littel;d) thermal isolation of 24R.25 (OH) 2 -privitamin D 3 in an inert organic solvent;

e) Abtrennung von 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol aus dem Gemisch der thermischen Isomerisierung mittels Flashchromatographie.e) Separation of 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol from the thermal isomerization mixture by flash chromatography.

Die erfindungsgemäß für den photochemischen Schritt verwendbaren aliphatischen Alkohole, wie Methanol, Ethanol, n- oder iso-Propanol, besitzen eine gute Löslichkeit für 24R.25(OH)2-Provitamin D3 und dessen Bestrahlungsprodukte und haben die für den Ber trahlunqsprozeß erforderliche optische Transmission bzw. sind auf einfache Welse aus einem Produkt geringerer Qualität in eine solche Qualitätsstufe überführbar. Die Konzentration der Lösung kann 0,01 g/l bis 1 g/l betragen. Die Bestrahlung der Lösung kann in einem beliebigen Photoreaktor oder in einer einfachen Bestrahlungsapparatur ausgeführt werden. Die für einen relativ hohen Anteil an 24R.25(OH)2-Prävitamin D3 im Produktgemisch erforderliche Wellenlängenbereiche sind an sich bekannt und liegen bei 270 bis 310 nm. Vorteilhaft ist jedoch einne synchrone Bestrahlung mit UV-Licht im Wellenlängenbereich von 254 bis 300 nm und 310 bis 350 nm (DD-WP 213210). Die für die Erzeugung dieser am Reaktionsort erforderliche Kombination von Strahlungsquelle und Filterlösung ist bereits vorgeschlagen worden. So erzeugt beispielsweise eine dotierte Quecksi'berhochdrucklampe TQ150/Z1 der Fa. Heraeus, Hanau in Kombination mit einer Filterlösung, bestehend aus 0,001 bis 1 g/l 2.7-i')imethyl-3.6-d>oza-cycloheptadien-tetrafli>oroborat und 0,1 bis 10g/l Biphenyl in Ethanol, eine für die bevorzugte Bildung vo \ 24R.25(OH)2-Pravitamin D3 hohe aktinische Lichtintensität und ist praktisch beliebig lange verwendbar. Erfindungsgemäß betrl yt die Reaktionstemperatur -30 bis O0C, vorzugsweise -10 bis -50C. Bei dieser Temperatur ist der Anteil der gebildeten irreversiblen Nebenprodukte relativ gering/und die Reaktion kann voiteilhafterweise bis zu einem Umsatzgrad von 50 bis 60%, bezogen auf das Edukt, geführt werden. Nach Beendigung der 3estrahlung wird die Lösung eingeengt. Aus der konzentrierten Lösung wird bei -10 bis O0C überwiegende Anteil des nicht umgesetzten 24R.25(OH)2-Pro"i«qm!n n, t rlstallisiert und auf einfache Weise abgetrennt.The aliphatic alcohols which can be used according to the invention for the photochemical step, such as methanol, ethanol, n- or iso-propanol, have a good solubility for 24R.25 (OH) 2 -Provitamin D 3 and its irradiation products and have the optical properties required for the coating process Transmission or can be converted to simple catfish from a product of lower quality in such a quality level. The concentration of the solution may be 0.01 g / L to 1 g / L. The irradiation of the solution can be carried out in any photoreactor or in a simple irradiation apparatus. The wavelength ranges required for a relatively high proportion of 24R.25 (OH) 2 -Prävitamin D 3 in the product mixture are known per se and are 270 to 310 nm. Advantageously, however, is a synchronous irradiation with UV light in the wavelength range of 254-300 nm and 310 to 350 nm (DD-WP 213210). The combination of radiation source and filter solution required for the generation of these at the reaction site has already been proposed. Thus, for example, generates a doped high-pressure mercury lamp TQ150 / Z1 Fa. Heraeus, Hanau in combination with a filter solution consisting of 0.001 to 1 g / l 2.7-i ') imethyl-3.6-d>oza-cycloheptadien-tetrafli> oroborat and 0.1 to 10 g / l biphenyl in ethanol, one for the preferred formation vo \ 24R.25 (OH) 2 -Pravitamin D 3 high actinic light intensity and can be used practically any length. According to the invention betrl the reaction temperature yt -30 to 0 ° C, preferably -10 to -5 0 C. At this temperature, the percentage of irreversible side products formed relatively small / and the reaction can voiteilhafterweise related to a conversion degree of 50 to 60%, to the educt, be led. After completion of the irradiation, the solution is concentrated. Most of the unreacted 24R.25 (OH) 2 -Pro "i" qm! Nn, t rlstalled from the concentrated solution at -10 to O 0 C and separated in a simple manner.

-3- 21Ί 067-3- 21Ί 067

Überraschend wurde gefunden, daß mittels der einfachen, schnellen und in beliebig großem Maßstab durchführbaren Flash-Surprisingly, it has been found that by means of the simple, fast and to a large scale feasible Flash Chromatographie (W.C.Still et all., J.Organic Chemistry, 43 (1978] 2923) unter Verwendung von silberimprägniertem KieselgelChromatography (W. C. Still et al., J. Organic Chemistry, 43 (1978) 2923) using silver impregnated silica gel

aus dem aus vielen Komponenten mit weitgehend ähnlichem Trennverhalten bestehenden Bestrahlungsgemisch dasgewünschte 24R.25(OH)2-Präv!tamln D3 in sehr reiner Form und alle wieder verwendbaren Nebenprodukte sowie das nichtumgesetzte 24R.25(OH)2-Provltamln D3 praktisch quantitativ abgetrennt werden können, während beispielsweise mit der inselnerTrennloistung an sich überlegenen HPLC unter Verwendung der in der HPLC üblichen Trägermaterialien nur eine bedingteFrom the consisting of many components with substantially similar separation behavior irradiation mixture, the desired 24R.25 (OH) 2 -Präv! tamln D 3 in very pure form and all reusable by-products and the unreacted 24R.25 (OH) 2 -Provltamln D 3 practically quantitative can be separated, for example, with the island separation performance superior to HPLC using the usual support materials in HPLC only a conditional

Auftrennung des Produktgomisches möglich Ist.Separation of the product mixture is possible. Erfindungsgemäß wird für die flash-chromatographische Auftrennung des Bestrahlungsgemisches ein silberimprägniertesAccording to the invention, a silver-impregnated material is used for the flash-chromatographic separation of the irradiation mixture Kieselgel als stationäre Phase und als Elutionsmittel ein Lösungsmittelgemisch aus Essigester und Aceton, vorzugsweise in derSilica gel as stationary phase and as eluent a solvent mixture of ethyl acetate and acetone, preferably in the Zusammensetzung 60 bis 90 Vol.-% Essigester und 10 bis 40Vol.-% Aceton, verwendet. Das Trägermaterial kann beispielsweiseComposition 60 to 90% by volume of ethyl acetate and 10 to 40% by volume of acetone used. The carrier material may, for example

so hergestellt werden, daß Kieselgel von 30 bis 40 μω mit einer 0,5· bis 5%igen Lösung von Silbernitrat in Acetonitril innigvermischt, abfiltriert, mit η-Hexan gewaschen und bei 600C getrocknet wird.be prepared so that silica gel of 30 to 40 μω with a 0.5 to 5% solution of silver nitrate in acetonitrile intimately mixed, filtered off, washed with η-hexane and dried at 60 0 C.

Vorteilhafterweise werden vier Fraktionen abgenommen. Die erste Fraktion ist Vorlauf und enthält gegebenenfalls einen sehr enAdvantageously, four fractions are taken. The first fraction is preliminary and may contain a very en Anteil schnell laufender irreversibler Nebenprodukte. Die zweite Fraktion enthält reines 24R.25(OH)2-Prävitamin D3(OtWa 85% des imShare of high-speed irreversible by-products. The second fraction contains pure 24R.25 (OH) 2 -privitamin D 3 (OtWa 85% of im Gemisch vorhandenen Produktes). Die dritte Fraktion besteht aus dem restlichen Anteil an 24R.25(OH)2-Präv!tamin D3 und zweiMixture of existing product). The third fraction consists of the remaining fraction of 24R.25 (OH) 2 protamine D 3 and two

bis drei weiteren Nebenprodukten, gegebenenfalls 24R.25(OH2)-Tachysterol3, und die vierte Fraktion enthält nicht umgesetztes24R.25(OH)2-Provitamin D3 und 24R.25(OH)2-Lumisterol3. Letztere Fraktion wird, gegebenenfalls unter Zusatz einer geringerento three other by-products, optionally 24R.25 (OH 2 ) -tachysterol 3 , and the fourth fraction contains unreacted 24R.25 (OH) 2 -Provitamin D 3 and 24R.25 (OH) 2 -Luisterol 3 . The latter fraction is added, if appropriate with the addition of a lower

Mange Natriumchlorid zwecks Entfernung sehr geringer Silberspuren zur Trockene eingeengt. Der Rückstand wird In MethanolMange sodium chloride to remove very small traces of silver evaporated to dryness. The residue is dissolved in methanol

oder Ethanol aufgenommen, und diese 24R.25(OH)2-Provitamin D3 und 24R.2 5(OH)2-Lumisterol3 enthaltende Lösung wird einererneuten Bestrahlung zugeführt. Aus der dritten Fraktion wird mittels einer erneuten flash-chromatographischen Trennung derrestliche Anteil an 24R.25(OH)2-Prävitamin D3 abgetrennt, so daß mit der erfi idungsgemäßen Trennung mehr als 95% des imor ethanol, and this 24R.25 (OH) 2 -Provitamin D 3 and 24R.2 5 (OH) 2 -Luisterol 3 containing solution is fed to re-irradiation. From the third fraction, the remaining portion of 24R.25 (OH) 2 -Prävitamin D 3 is separated by means of a renewed flash-chromatographic separation, so that with the erfi inventive separation more than 95% of im

Bestrahlungsgemisches enthaltende 24R.25(OH)2-Prävitamin D3 in sehr reiner Form isoliert werden kann. Außerdem kannRadiation mixture containing 24R.25 (OH) 2 -Prävitamin D 3 can be isolated in a very pure form. In addition, can

gegebenenfalls das in dieser Fraktion enthaltene 24R,25(OH)2-Tachysterol3 abgetrennt und ebenfalls dem Bestrahlungsrecyclingzugeführt werden.optionally, the 24R, 25 (OH) 2 tachysterol 3 contained in this fraction is separated and also fed to the irradiation recycling.

Die vereinigten 24R.25(OH)2-Prävitamin D3 enthaltende Fraktionen werden eingeengt, mit Ethanol, n- oder iso-Propanol oderThe combined 24R.25 (OH) 2 -Prävitamin D 3 containing fractions are concentrated, with ethanol, n- or iso-propanol or Dioxan aufgenommen u.id thermisch isomerisiert. Erhalten wird nach Afaug des Lösungsmittels ein Öliges Produktgemisch,Dioxane absorbed and thermally isomerized. Obtained after Afaug of the solvent an oily product mixture,

bestehend aus etwa 80% 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol und 20% 24R.2B(OH)2-Prävitamin D3. Überraschend wurde gefunden,daß das Produktgemisch der thermischen Isomerisierung flash-chromatographisch praktisch quantitativ In die reinenconsisting of about 80% 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol and 20% 24R.2B (OH) 2 -privitamin D 3 . Surprisingly, it has been found that the product mixture of the thermal isomerization is flash-chromatographically virtually quantitatively pure

Komponenten auftrennbar ist, obwohl der auf einer Kieselgelplatte maximal erreichbare RrWert-Untorschied von nur 0,05 bisComponents is separable, although the maximum achievable on a silica gel plate RrWert-Untorschied of only 0.05 to

0,06 weit unterhalb der an sich bekannten unteren Grenze für flash-chromatographische Trennungen (W. C. Still et all, J.0.06 far below the known lower limit for flash chromatographic separations (W.C. Still et al., J. Biol.

Organ. Chem. 43 (1978) 2923) liegt.Organ. Chem. 43 (1978) 2923). Erfindungsgemäß wird als Stationäre Phase ein Kieselgel relativ einheitlicher Korngröße, vorzugsweise im Bereich von 15 bisAccording to the invention as a stationary phase, a silica gel of relatively uniform grain size, preferably in the range of 15 to

40Mm Korngröße verwendet, aber es ist auch das in der Flash-Chromatographie übliche KIe elgel mit 40 bis 63Mm Korngrößeanwendbar. Nachteiligerweise entsteht in diesem Fall ein höherer Anteil an einer nicht vollständig getrennten40 μm grain size, but also the gel elite of 40 to 63 μm grain size common in flash chromatography is applicable. Disadvantageously arises in this case, a higher proportion of a not completely separate

Überlappungsfraktion im Eluat.Overlap fraction in the eluate. Als Elutionsmittel ist das in der Flash-Chromatographie übliche Lösungsmittelgemisch, bestehend aus Essigester und n-Hexan,The eluent is the solvent mixture customary in flash chromatography, consisting of ethyl acetate and n-hexane,

vorzugsweise in der Zusammensetzung 50 bis 90Vol.-% Essigester und 10 bis 50Vol.-% η-Hexan, geeignet.preferably in the composition 50 to 90% by volume of ethyl acetate and 10 to 50% by volume of η-hexane.

Die als erste erhaltene Fraktion, bestehend aus reinem 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol, wird bei etwa 5CC eingeengt, und dieThe first obtained fraction, consisting of pure 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol, is concentrated at about 5 C C, and the

zweite Fraktion, die 24R.25(OH)2-Prävitamin D3 enthält, wird der erneuten thermischen Isomerisierung zugeführt. Auf diesesecond fraction 24R.25 (OH) 2 contains -Prävitamin D 3 is supplied to the re-thermal isomerization. To this

Weise wird eine praHisch quantitative Umwandlung von 24R.25(OH)2-Prävitamin D3 in 24R.25-Dihydroxy-cholec3lciferolWay, a quantitative quantitative conversion of 24R.25 (OH) 2 -privitamin D 3 into 24R.25-dihydroxy-choleclciferol

erreicht.reached.

Die 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol enthaltende Fraktion wird bei 5 bis 1O0C eingeengt und im Ölpumpenvakuum getrocknet.The 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol-containing fraction is concentrated at 5 to 1O 0 C and dried in an oil pump vacuum. Das erhaltene farblose bis schwach gelbliche, ölige Produkt kann in üblicher Weise kristallisiert oder aber erfindungsgemäßThe resulting colorless to pale yellowish, oily product can be crystallized in the usual manner or according to the invention

durch Zugabe von Methyl-tert. butylether (MTBE) und η-Hexan In das In Form weißer Nadeln leicht kristallisierbare undbedeutend stabilere MTBE· Addukt überführt werden.by adding methyl tert. butyl ether (MTBE) and η-hexane In the form of white needles easily crystallizable and significantly more stable MTBE · adduct are transferred.

Die mit dem erfindungsgamäßen Verfahren erhaltene Ausbeute an 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol beträgt 39%, bezogen aufThe yield of 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol obtained by the process according to the invention is 39%, based on

24R.25(OH)2-Provitamin D3.24R.25 (OH) 2 -Provitamin D 3 .

Erfindungsgemäß kann die Herstellung von 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol aber auch so durchgeführt werden, daß dieAccording to the invention, however, the preparation of 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol can also be carried out such that the

thermische Isomerisierung von 24R.25(OH)2-Prävitamin D3 ohne dessen vorherige Abtrennung aus dem Bestrahlungsgemischerfolgt.Thermal isomerization of 24R.25 (OH) 2 D 3 -Prävitamin without prior separation from the irradiation mixture takes place.

Vorteilhafterweise wird in diesem Fall als Lösungsmittel für den photochemischen Schritt Ethanol, n- oder Iso-Propanol verwendet, und das Einengen der Bestrahlungslösung wird unter Normaldruck, gegebenenfalls nur unter geringem Vakuum, durchgeführt, wobei die Tropfgeschwindigkeit des Destillats mittels eines geeignet starken Argon- oder Stickstoffstrotnes so eingestellt wird, daß die Zeitdauer für das Einengen der Bestrahlungslösung etwa derjenigen für die thermische Isomerisierung entspricht. Erhalten wird ein öliges ProduktgenVsch, bestehend aus den Photoprodukten, nicht umgesetztem 24R.25(OH)2-Provitamin D3 und 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol.Ethanol, n- or iso-propanol is advantageously used in this case as a solvent for the photochemical step, and the concentration of the irradiation solution is carried out under atmospheric pressure, optionally only under low vacuum, the dropping speed of the distillate by means of a suitably strong argon or Stickstoffstrotnes is adjusted so that the time for the concentration of the irradiation solution corresponds approximately to that for the thermal isomerization. Obtained is an oily ProduktgenVsch consisting of the photoproducts, unreacted 24R.25 (OH) 2 -Provitamin D 3 and 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol.

Überraschend wurde gefunden, daß dieses Produktgemisch flash-chromatographisch unter Verwendung von silberimprägniertem Kieselgel als Trägermaterial und eines Lösungsmittelgemisches aus Essigester und Aceton, vorzugsweise in der Zusammensetzung 50 bis 90Vol.-% Essigester und 10 bis 50 Vol.-% Aceton, als Elutionsmittel in drei Fraktionen aufgetrennt werden kann, von denen die erste 24R.25(OH)2-Prävitamin D3,24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol sowie eine geringe Menge eines Nebenproduktes, die zweite den geringen Anteil irreversibler Nebenprodukte und die dritte Fraktion ein Gemisch aus 24R.25(OH)2-Lumisterol3 nicht umgesetztem 24R.25(OH)2-Provitamin D3 und gegebenenfalls 24R.25(OH)2-Tachysterol2 enthält. Die dritte Fraktion wird nach der üblichen Aufarbeitung erneut der Bestrahlung zugeführt und aus der ersten Fraktion wird nach Einengen der Lösung 24R.25(OH)2-Dihydroxy-cholecalciferol flash-chromatographisch unter Verwendung eines Kieselgels relativ einheitlicher Korngröße, vorzugsweise im Bereich von 15mm bis 40μηι, und eines in der Flash-Chromatographie üblichen Lösungsmittelgemisches aus Essigester und η-Hexan, vorzugsweise inSurprisingly, it has been found that this product mixture is flash-chromatographed using silver-impregnated silica gel as support material and a solvent mixture of ethyl acetate and acetone, preferably in the composition 50 to 90Vol .-% ethyl acetate and 10 to 50 vol .-% acetone, as eluent in three Fractions can be separated, of which the first 24R.25 (OH) 2 -Prävitamin D 3 , 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol and a small amount of a by-product, the second the low proportion of irreversible by-products and the third fraction a mixture of 24R Contains 25 (OH) 2 -lustristerol 3 unreacted 24R.25 (OH) 2 -Provitamin D 3 and optionally 24R.25 (OH) 2 -Tachysterol 2 contains. The third fraction is re-irradiated after the usual work-up and from the first fraction after concentrating the solution 24R.25 (OH) 2 -dihydroxy-cholecalciferol flash chromatographisch using a silica gel of relatively uniform grain size, preferably in the range of 15mm to 40μηι, and a usual in flash chromatography solvent mixture of ethyl acetate and η-hexane, preferably in

der Zusammensetzung 60 bis 90Vol.-% Essigester und 10 bis 50Vol.-% η-Hexan, abgetrennt. Die 24R.25(OH)2-Prävitamln D3 enthaltende Fraktion wird auf bereits dargelegter Welse erneut thermisch zu 24R.26-Dlhydroxy-cholecalclferol isomerisiert und flash-chromatographisch Isoliert. Diese erfindungsgemäße Variante der Reaktionsführung hat den Vorteil, diiß bei gleicher erzielbarer Ausbeute an 24R,26-Dlhydroxy-cholecalclferol das zeltraubende Einengen der Bestrahlungslösung bei einer Temperatur unter B0C entfällt, kein Vakuum benötigt wird und daß ein erheblich geringerer Zeitaufwand erforderlich ist. Das erfindungsgemäße Verfahren zur Herstellung von 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol aus 24R.25(OH)2-Pro\ itamin D3 umgeht die Derivatisierung, erfordert daher nur die Mindestzahl der unbedingt notwendigen Verfahrensschritte, ist d aher arbeite· und kostengünstig, für einen beliebig großen Maßstab ohne wesentliche Erhöhung des materiellen und zeitlichen Aufwandes' gleichermaßen gut geeignet und erreicht eine höhere Ausbeute als gegenwärtig bekannt ist.the composition 60 to 90Vol .-% ethyl acetate and 10 to 50Vol .-% η-hexane, separated. The fraction containing 24R.25 (OH) 2 -Prävitamln D 3 is thermally re-isomerized to 24R.26-Dlhydroxy-cholecalclferol on already laid catfish and flash-chromatographically isolated. This variant of the reaction procedure according to the invention has the advantage that the same achievable yield of 24R, 26-Dlhydroxy-cholecalclferol zelfrabende concentration of the irradiation solution at a temperature below B 0 C omitted, no vacuum is needed and that a considerably less time is required. The process according to the invention for the preparation of 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol from 24R.25 (OH) 2 -Proitamin D 3 circumvents the derivatization, which therefore requires only the minimum number of absolutely necessary process steps, is therefore workable and cost-effective an arbitrarily large scale without substantial increase of the material and time effort 'equally well suited and achieves a higher yield than is currently known.

AusfuhrungsbeispieleExemplary embodiments Beispiel 1:24R.25-Dihydroxy-prävitamin D3 Example 1: 24R.25-Dihydroxy-previtamin D 3

a) Bestrahlung von 24R.25-Dihydroxy-provitamin D3 a) Irradiation of 24R.25-dihydroxy-provitamin D 3

160mg 24R.25-Dihydroxy-provitamin D3 werden In 450 ml mit Argon gespültem Methanol p. a. bei 3O0C bis 4O0C gelöst und unter160 mg of 24R.25-dihydroxy-provitamin D 3 are dissolved in 450 ml argon purged methanol pa at 3O 0 C to 40 0 C and under

Schutzgas in einen Photoreaktor gebracht. Als Photoreaktor wird ein 450ml Reaktor der Firma Heraeus, Hanau mit kühlbaremInert gas placed in a photoreactor. The photoreactor is a 450 ml reactor from Heraeus, Hanau with coolable Tauchlampeneinsatz, Mantelkühlung und Umwälzung mit einer magnefgekoppelten Kreiselpump» verwende1:. Die Kühlung derSubmersible lamp insert, jacket cooling and recirculation with a magnetically coupled centrifugal pump »use 1 :. The cooling of the Reaktorflüssigkeit und der Filterlösung erfolgt jeweils mittels eines Kryostaten MK 70.The reactor liquid and the filter solution are each carried out by means of a cryostat MK 70. Das aktinlsche Licht wird durch die Kombination des Quecksilberhochdruckstrahlers TQ 150/Z1 der Firma Heraeus, Hanau, mitThe actinic light is by the combination of the high pressure mercury radiator TQ 150 / Z1 from Heraeus, Hanau, with

einer Filterlösung, bestehend aus 160mg 2.7-Dlmethyl-3.6-diaza-cyclo-heptadien-teträiiuoroborat und 3,2g Biphenyl In 21a filter solution consisting of 160 mg of 2,7-dimethyl-3,6-diaza-cycloheptadiene-tetrafluoroborate and 3.2 g of biphenyl In 21

Ethanol p.a., realisiert.Ethanol p.a., realized. Die Lösung wird bei einer Temperatur von -10"C unter Umpumpen 40min bestrahlt. Der Umsatz beträgt etwa 65%, bezogen aufThe solution is irradiated for 40 minutes at a temperature of -10 ° C. with pumping over, the conversion is about 65%, based on

das eingesetzte Edukt. Nach dem Einengen der Lösung unter Schutzgas im Ölpumpenvakuum bei etwa 5°C v/ird der öligethe starting material used. After concentration of the solution under inert gas in an oil pump vacuum at about 5 ° C v / ird the oily

Rückstand in 5 ml Essigester/Aceton (v/v = 70/30) aufgenommen.Residue taken up in 5 ml of ethyl acetate / acetone (v / v = 70/30).

b) flash-chromatographische Trennungb) flash-chromatographic separation

Das für die flash-chromatographische Trennung des Bestrahlungsgemisches verwendete Trägermaterial wird wie folgt hergestellt: 50g Kieselgel Si 60,30 bis 40 pm Korngröße, werden 2 Stunden mit 150 ml einer 2%igen Lösung Von Silbernitrat in Acetonitril p.a. unter Lichtausschluß innig vermischt. Das QeI wird über eine G4-Fritte abgesaugt, mit je 30ml Acetonitril und Essigester/n-Hexan gewaschen und bei 60°C 2 Stunden getrocknet. Das so erhaltene Gel Ist ein weißes bis graues Pulver und ändert seine Farbe unter LichUusschluß nicht.The support material used for the flash chromatographic separation of the irradiation mixture is prepared as follows: 50 g of silica gel Si 60.30 to 40 μm grain size, are treated with 150 ml of a 2% solution of silver nitrate in acetonitrile p.a. intimately mixed with the exclusion of light. The QeI is filtered off with suction through a G4 frit, washed with 30 ml each of acetonitrile and ethyl acetate / n-hexane and dried at 60 ° C. for 2 hours. The gel thus obtained is a white to gray powder and does not change color under light exclusion.

Die chromatographische Säule (20mm χ 150mm) wird mit etwa 30g silberimprägniertem Kieselgut trocken gefüllt ^i nd mit etwa 150 ml Essigester/Aceton (v/v = 70/30) equilibriert. Nach Aufgabe der Probe wird mit 200 ml des gleichen Lösungsmittelgemisches bei einem Druck von 0,7atm eluiert. Es werden vier Fraktionen abgenommen:The chromatographic column (20 mm × 150 mm) is dry-filled with about 30 g of silver-impregnated silica and equilibrated with about 150 ml of ethyl acetate / acetone (v / v = 70/30). After application of the sample is eluted with 200 ml of the same solvent mixture at a pressure of 0.7 atm. Four fractions are taken:

1. Fraktion (40 ml) 2. Fraktion (25 ml) 3. Fraktion (15ml) 4. Fraktion (120ml)1st fraction (40 ml) 2nd fraction (25 ml) 3rd fraction (15 ml) 4th fraction (120 ml)

Die dritte Fraktion wird nach Einengung erneut flash-chromatographisch getrennt. Auf diese Weise wird pralctisch quantitativ Has im Bestrahlungsgemisch vorhandene 24R.25(OH)2-Präv!tamln D3 in reiner Form isoliert. Die in der letzte ί Fraktion der zweiten Trennung noch isolierte geringe Menge an 24R.25(OH)2-Provitamin D3 wird mit der vierten Fraktion dor ersten Trennung vereinigt, und nach Zugabe einer kleinen Spatelspitze Natriumchlorid wird die Lösung eingeengt, dreimal mit je 5ml Methanol digeriert und vom festen Rückstand abfiltriert. Es werden insgesamt 50 mg eines Gemisches aus 24R.25(OH)2· Provitamin D3 und 24R.25(OH)2-Lumisterol3 erhalten, die in 400ml Methano! gelöst und wie unter a) beschrieben, erneut bestrahlt und anschließend unter den oben dargelegten Bedingungen flash-chromatographisch getrennt werden. Es werden 18mg eines Gemisches aus 24R.25(OH)2-Provitamin D3 (etwa 80%) und 24R.25(OH)2-Lumisterol3 (etwa 20%) erneut erhalten. Dieses Produktgemisch kann einer erneuten Bestrahlung zugeführt werden.The third fraction is again separated by flash chromatography after concentration. In this way, the presence of 24R.25 (OH) 2 -preparate D 3 present in the irradiation mixture is quantitatively quantitatively isolated in pure form in pure form. In the last ί fraction of the second separation nor isolated small amount of 24R.25 (OH) 2 D 3 -Provitamin is combined with the fourth fraction dor first separation, and after addition of a small spatula tip of sodium chloride, the solution is concentrated, three times with 5ml of methanol digested and filtered from the solid residue. A total of 50 mg of a mixture of 24R.25 (OH) 2 · provitamin D 3 and 24R.25 (OH) 2 -lumisterol 3 are obtained which are dissolved in 400 ml of Methano! dissolved and as described under a), re-irradiated and then separated by flash chromatography under the conditions outlined above. 18 mg of a mixture of 24R.25 (OH) 2 -Provitamin D 3 (about 80%) and 24R.25 (OH) 2 -Luisterol 3 (about 20%) are again obtained. This product mixture can be re-irradiated.

Das isolierte 24R.25(OH)2-Prii\ itamin D3 wird mit der zweiten Fraktion der ersten Trennung vereinigt, und die Lösung wird nach Zugabe einer geringen Menge Natriumchlorid unter Schutzgas zur Trockene eingeengt. Der Rückstand wird dreimal mit je 10 ml Methyl-tert. butylether (MTBE) .^geriert. Nach Abzug des Lösungsmittels werden insgesamt 58mg 24R.25(OH)2-Prävitamin D3 als öliges Produkt erhalten; das sind 44%, bezogen auf das umgesetzte 24R.25(OH)2-Prov!tamin D3.The isolated 24R.25 (OH) 2 -Priititamin D 3 is combined with the second fraction of the first separation, and the solution is concentrated to dryness under inert gas after addition of a small amount of sodium chloride. The residue is washed three times with 10 ml of methyl tert. butyl ether (MTBE). ^. After removal of the solvent, a total of 58 mg 24R.25 (OH) 2 -Prävitamin D 3 are obtained as an oily product; that is 44%, based on the reacted 24R.25 (OH) 2 -Provatamin D 3 .

7W (Ethanol) = 261 nm; Rf = 0,28 (HPTLC -Fertigplatte, Merck; Essigester/n-Kaxan (v/v = 75/25])7W (ethanol) = 261 nm; R f = 0.28 (HPTLC finishing plate, Merck; ethyl acetate / n-Kaxan (v / v = 75/25))

Beispiel 2:24R.25-Dihydroxy-cholecalciferolExample 2: 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol

58 mg 24R.25(OH)2-Prävitamin D7 aus Beispiel 1 werden in 30 ml Dioxan unter Schutzgas 2,5 Stunden erhlta.t, und anschließend wird das Lösungsmittel eingeengt. Es wird ein schwach gelblicher, öliger Rückstand erhalten, der mit 5ml Esslgester/n-Hexan (v/v = 75/25) aufgenommen wird. Die flash-chromatographische Ab'rennung von 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol erfolgt unterfolgenden Bedingungen:58 mg 24R.25 (OH) 2 -Prävitamin D 7 from Example 1 are in 30 ml of dioxane under protective gas for 2.5 hours erhlta.t, and then the solvent is concentrated. A pale yellowish, oily residue is obtained, which is taken up in 5 ml of ethyl acetate / n-hexane (v / v = 75/25). The flash-chromatographic separation of 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol is carried out under the following conditions:

stationäre Phase: Kieselgel Si60, Korngröße 30 bis 40 \xm stationary phase: silica gel Si60, grain size 30 to 40 \ xm

Säule: 20x150mm(Trockenfüllung)Column: 20x150mm (dry filling)

mobile Phase: Essigester/n-Hexan (v/v = 75/25); 200mlmobile phase: ethyl acetate / n-hexane (v / v = 75/25); 200ml

Druck: 0,8atmPressure: 0,8 atm

Es werden 110ml Vorlauf abgenommen. Die folgende Fraktion (45rnl) enthält reines 24R.25-Dlhydroxy-cholecalclferol und die letzte Fraktion (30ml) besteht aus 24R.25(OH)2-Prävitam!n D3. Diese Fraktion wird nach Einengen wieder thermisch ieomerislert, und das gebildete 24R.25-Dlhydroxy-choiecalciferol wird ernout flash-chromatographisch abgetrennt. Die vereinigten 24R.25-Dlhydroxy-cholecatciferol enthaltenden Fraktionen werden bei 5*C Im Vakuum unter Schutzgas eingeengt. Erhalten werden 55mg reines 24R.25-Dihydroxy-cholecalclferol; das sind 41,6%, bezogen auf das umgesetzte 24R.25(OH)2-Provitamin D3. Die Identität der Verbindung wurde durch Vergleich mit einer authentischen Probe gesichert:There are 110ml flow removed. The following fraction (45rnl) contains pure 24R.25-Dlhydroxy-cholecalclferol and the last fraction (30ml) consists of 24R.25 (OH) 2 pravitam! N D 3 . This fraction is thermally etheromerized again after concentration, and the resulting 24R.25-Dlhydroxy-choiccalciferol is subjected to rapid flash chromatography separation. The combined 24R.25-Dlhydroxy-cholecatciferol-containing fractions are concentrated at 5 * C in vacuo under protective gas. 55mg of pure 24R.25-dihydroxy-cholecalclferol is obtained; that is 41.6%, based on the reacted 24R.25 (OH) 2 -Provitamin D 3 . The identity of the compound was verified by comparison with an authentic sample:

TLC(SOMg):TLC (Somg):

HPTLC-Fertigplatte, Merck; Essigester/n-Hexan (v/v = 75/25) Rf = 0,35 (Probe); R( = 0,35 (Vergleichsprobe)HPTLC precast board, Merck; Ethyl acetate / n-hexane (v / v = 75/25) R f = 0.35 (sample); R ( = 0.35 (comparative sample) UV-Spektrum (Ethanol):UV spectrum (ethanol):

(Probe) (Vergleichsprobe)(Sample) (comparative sample)

228 nm Xm1n = 228 nm228 nm Xm 1n = 228 nm

Massenspektrum:Mass Spectrum:

gef. 418,3288 (Probe); 416,3298 (Vergleichsprobe)gef. 418.3288 (sample); 416.3298 (comparative sample)

ber. für C27H44O3= ,3326calcd. for C 27 H 44 O 3 =, 3326

Beispiel 3: 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol-Methyltert.butyle!her-AdduktExample 3: 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol-methyl tert-butyl adduct

50 mg 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol werden in 5 ml Methyl-tert. butylether unter Schutzgas gelöst, und es werden langsam5ml η-Hexan zugefügt. Die Kristallisation wird im Kühlschrank vervollständigt. Es werden 64mg 24R.26-Dihydroxycholecalciferol-MTBE-Addukt in Form kleiner, weißer Nadeln erhalten. Die Produktanalyse erfolgt durch Kombination von1H-NMR und UV-Spektrum. Das erhaltene Addukt ist sehr stabil. Bei oiner ömonatigon Lagerung im Kühlschrank unter Schutzgasund Lichtausschluß können mittels Nano-Dünnschichtchromatographie (50Mm) keine Zusetzungsprodukte nachgewiesenwerden.50 mg of 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol are dissolved in 5 ml of methyl tert. Butyl ether dissolved under inert gas, and it is slowly added 5ml η-hexane. The crystallization is completed in the refrigerator. 64 mg of 24R.26-dihydroxycholecalciferol-MTBE adduct are obtained in the form of small, white needles. The product analysis is carried out by combining 1 H NMR and UV spectrum. The adduct obtained is very stable. In the case of omonatigon storage in the refrigerator under protective gas and light exclusion, nicked products can not be detected by nano-thin-layer chromatography (50 μm).

Beispiel 4: 24R.25-DihydroxycholecalciferolExample 4: 24R.25-Dihydroxycholecalciferol

Eine Lösung von 100 mg 24R.25(OH)2-Prqvitamin D3 in 400 ml Ethanol, spezialrein für die UV-Sp<>Mroskopie werden unter den im Beispiel 1 gegebenen Bedingungen bestrahlt. Anschließend wird die Lösung bei Normaldruck i'nd einer Badtemperatur von 85 bis 9O0C im Laufe von 3 Stunden eingeengt. Die erforderliche Tropfgeschwindigkeit (2,5 bis 3 mlAvin) wird mittels Argonstroms reguliert. Die restliche Menge Ethanol wird im Ölpumpenvakuum abgezogen und das zurückbleibende gelbliche öl wird in 5ml Essigester/Aceton (v/v = 70/30) aufgenommen und flash-chromatographisch unter folgenden Bedingungen getrennt:A solution of 100 mg 24R.25 (OH) 2 -Prvitamin D 3 in 400 ml of ethanol, specially pure for the UV-Sp <> microscopy are irradiated under the conditions given in Example 1. Subsequently, the solution at atmospheric pressure is concentrated i'nd a bath temperature of 85 to 9O 0 C in the course of 3 hours. The required drop rate (2.5 to 3 ml of Avin) is regulated by argon flow. The remaining amount of ethanol is stripped off in an oil pump vacuum and the remaining yellowish oil is taken up in 5 ml of ethyl acetate / acetone (v / v = 70/30) and separated by flash chromatography under the following conditions:

stationäre Phase: Kieselgel Si 60,40 pm bis 63 μη\ Korngröße, silberimprägniertstationary phase: silica gel Si 60.40 pm to 63 μη \ grain size, silver impregnated

Säule: 20 mm χ 150 mm, TrockenfüllungColumn: 20 mm χ 150 mm, dry filling

mobile Phase: Essigester/Acetonmobile phase: ethyl acetate / acetone

Druck: 0,3 atmPressure: 0.3 atm

Fraktionen: 1.60 ml; 2.45 ml; 3.50 m!Fractions: 1.60 ml; 2.45 ml; 3.50 m!

Die I.Fraktion ist Vorlauf. Die 2.Fraktion besteht aus einem Gemisch aus 24R.25(OH)2-Prävitamin D3, 24R.25-Dihydroxycholecalciferol und einem geringfügigen Anteil eines Nebenproduktes. Nach Zugabe einer geringen Menge Natriumchlorid und Einengen wird mit 5ml Essigester/n-Hexan (v/v - 75/25) aufgenommen und vom unlöslichen Rückstand abfiltriert. Aus dieser. Lösung wird, wie im Beispiel 2 beschrieben, 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol abgetrennt. Es werden ohne Berücksichtigung des Recycling der Bestrahlung und der thermischen Isomerisierung 26mg erhalten, das sind Z;i%, bezogen auf das eingesetzte 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol.The I.Fraktion is forward. The 2.Fraktion consists of a mixture of 24R.25 (OH) 2 D 3 -Prävitamin, 24R.25-dihydroxycholecalciferol and a minor proportion of a by-product. After addition of a small amount of sodium chloride and concentration is taken up with 5 ml of ethyl acetate / n-hexane (v / v - 75/25) and filtered from the insoluble residue. From this. Solution is, as described in Example 2, separated 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol. It will be obtained without consideration of the recycling of the irradiation and the thermal isomerization 26mg, which are Z ; i%, based on the 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol used.

Di6 3.Fraktion enthält 24R.25(OH)2-Provitamin D3 und 24R.25(OH)2-Lumisterol3 und kann nach der im Beispiel 1 dargelegten Aufarbeitung erneut dem Bestrahlungsrecycling zugeführt werden.The third fraction contains 24R.25 (OH) 2 -Provitamin D 3 and 24R.25 (OH) 2 -Luisterol 3 and can be recycled to the irradiation recycling after the work-up described in Example 1.

'• Vivivir^j;;;;*;:^'• Vivivir ^ j ;;;; *;: ^

Claims (11)

1. Verfahren zur Herstellung von 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol (24R.25-Dihydroxy-Vitamin D3)1. Process for the preparation of 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol (24R.25-dihydroxy-vitamin D 3 ) ausS^R^S-Trihydroxy-cholesta-SJ-dien, (24R.25.(OH)2-Provitamin D3), gekennzeichnet dadurch, daß folgende Verfahrensschritte ausgeführt werden:fromS ^ R ^ S-trihydroxy-cholesta-SJ-diene, (24R.25. (OH) 2 -Provitamin D 3 ), characterized in that the following process steps are carried out: a) Bestrahlung einer auf -30 bis O0C gekühlten Lösung von 24R.25(OH)2-Provitamin D3 in einem aliphatischen Alkohol mit UV-Licht;a) irradiation of a cooled to -30 to 0 0 C solution of 24R.25 (OH) 2 -Provitamin D 3 in an aliphatic alcohol with UV light; b) Abtrennung des überwiegenden Anteils an nicht umgesetztem 24R.25(OH)2-Provitamin D3 aus der konzentrierten Bestrahlungslösung durch Kristallisation;b) separation of the predominant amount of unreacted 24R.25 (OH) 2 -Provitamin D 3 from the concentrated irradiation solution by crystallization; c) Abtrennung von 9.10-seco-Chola-6.8-10(5)-trien (24R.25(OH)2-Prävitamin D3), 24R.25(OH)2-Lumisterola und noch vorhandenem 24R.25(OH)2-Provitamin D3 aus dem Bestrahlungsgemisch mittels Flash-Chromatographie unter Verwendung von silberimprägniertem Kieselgel;c) Separation of 9.10 seco-Chola-6.8-10 (5) -triene (24R.25 (OH) 2 -privitamin D 3 ), 24R.25 (OH) 2 -luministerol and remaining 24R.25 (OH) 2 -Provitamin D 3 from the irradiation mixture by flash chromatography using silver impregnated silica gel; d) thermische Isomerisierung von 24R.25(OH)2-Prävitamin D3 in einem inerten organischen Lösungsmittel;d) thermal isomerization of 24R.25 (OH) 2 -privitamin D 3 in an inert organic solvent; e) Abtrennung von 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol aus dem Gemisch der thermischen Isomerisierung mittels Flash-Chromatographie.e) Separation of 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol from the thermal isomerization mixture by flash chromatography. 2. Verfahren nach Anspruch 1, gekennzeichnet dadurch, daß als Lösungsmittel für die Bestrahlung Methanol, Ethanol, n- oder iso-Propanol verwendet wird.2. The method according to claim 1, characterized in that is used as the solvent for the irradiation of methanol, ethanol, n- or iso-propanol. 3. Verfahren nach Anspruch 1 und 2, gekennzeichnet dadurch, daß die 24R.25(OH)2-Provitamin D3-Lösung vorzugsweise auf -10 bis -50C gekühlt wird.3. The method according to claim 1 and 2, characterized in that the 24R.25 (OH) 2 -Provitamin D 3 solution is preferably cooled to -10 to -5 0 C. 4. Verfahren nach Anspruch 1 bis 3, gekennzeichnet dadurch, daß die Konzentration der Bestrahlungslösung 0,01 g/l bis 1 g/l beträgt.4. The method according to claim 1 to 3, characterized in that the concentration of the irradiation solution is 0.01 g / l to 1 g / l. 5. Verfahren nach Anspruch 1 bis 4, gekennzeichnet dadurch, daß als Elutionsmittel für die flashchromatographische Abtrennung von 24R.25(OH)2-Prävitamin D3,24R.25(OH)2-Lumisterol3, 24R.25(OH)2-Provitamin D3 und gegebenenfalls 24R.25(OH)2-Tachysterol3 aus dem Bestrahlungsgemisch ein Lösungsmittelgemisch aus Essigester und Aceton, vorzugsweise in der Zusammensetzung 50 bis 90Vol.-% Essigester und 10 bis 50Vol.-% Aceton, verwendet Wird.5. The method according to claim 1 to 4, characterized in that as eluent for the flash chromatographic separation of 24R.25 (OH) 2 -Prävitamin D 3 , 24R.25 (OH) 2 -Listerol 3 , 24R.25 (OH) 2nd Proitamin D 3 and optionally 24R.25 (OH) 2 -Tachysterol 3 from the irradiation mixture, a solvent mixture of ethyl acetate and acetone, preferably in the composition 50 to 90Vol .-% ethyl acetate and 10 to 50Vol .-% acetone used. 6. Vorfahren nach Anspruch 1 bis 5, gekennzeichnet dadurch, daß 24R.25(OH)2-Provitamin D3, 24R.25{OH)2-Lumisterol3 und gegebenenfalls 24R.25(OH)2-Tachysterol3 erneut dem Strahlungsprozeß zugeführt werden.6. An ancestor according to claim 1 to 5, characterized in that 24R.25 (OH) 2 -Provitamin D 3 , 24R.25 {OH) 2 -Luisterol 3 and optionally 24R.25 (OH) 2 -Tachysterol 3 again the radiation process be supplied. 7. Verfahren nach Anspruch 1 bis 6, gekennzeichnet dadurch, daß als Lösungsmittel für die thermische Isomerisierung von 24R.25(OH)2· Prävitamin D3 Dioxan, Ethanol, n- oder iso-Propanol verwendet wird.7. The method according to claim 1 to 6, characterized in that is used as a solvent for the thermal isomerization of 24R.25 (OH) 2 · previtamin D 3 dioxane, ethanol, n- or iso-propanol. 8. Verfahren nach Anspruch 1 bis 7, gekennzeichnet dadurch, daß zur flash-chromatographischen Abtrennung von 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol aus dem Gemisch der thermischen Isomerisierung ein Kieselgel relativ einheitlicher Korngröße, vorzugsweise im Bereich von 15μην bis 40 pm, verwendet wird.8. The method according to claim 1 to 7, characterized in that the flash-chromatographic separation of 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol from the mixture of thermal isomerization, a silica gel of relatively uniform grain size, preferably in the range of 15μην to 40 pm, is used. 9. Verfahren nach Anspruch 1 bis 4, gekennzeichnet dadurch, daß die thermische Isomerisierung von 24R.25\OH;2-Prävitamin D3 ohne vorherige Abtrennung aus dem Bestrahlungsgemisch erfolgt.9. The method according to claim 1 to 4, characterized in that the thermal isomerization of 24R.25 \ OH; 2 -Prävitamin D 3 without prior separation from the irradiation mixture. 10. Verfahren nach Anspruch 1 bis 4 und 9, gekennzeichnet dadurch, daß flach-chromatographisch unter Verwenduno von silberimprägniertem Kieselgel als Trägermaterial und als Elutionsmittel ein Lösungsmittelgemisch aus Essigester und Aceton, vorzugsweise in der Zusammensetzung 50 bis 90Vol.-% Essigesier und 10 bis 50Vol.-% Aceton, eine Fraktion, bestehend aus 24R.25(OH)2-Prävitamin D3 und 24R.25-Dihydroxy-cholecalciferol, und eine zweite Fraktion, bestehend aus 24R.25(OH)2-Provitamin D3,24R.25(OH)2-Lumisterol3, arxetrennt wird.10. The method according to claim 1 to 4 and 9, characterized in that flat-chromatographisch use of silver-impregnated silica gel as the carrier material and as eluent, a solvent mixture of ethyl acetate and acetone, preferably in the composition 50 to 90Vol .-% Essigesier and 10 to 50Vol % Acetone, a fraction consisting of 24R.25 (OH) 2 -privitamin D 3 and 24R.25-dihydroxy-cholecalciferol, and a second fraction consisting of 24R.25 (OH) 2 -Provitamin D 3 , 24R .25 (OH) 2 -l listerol 3 , is separated by aryloxygen. 11. Verfahren nach Anspruch 1 bis 10, gekennzeichnet dadurch, daß das ölige 24R.25-Dihydroxycholecalciferol gegebenenfalls als Methyl-tert. butylether-Addukt kristallisiert wird.11. The method according to claim 1 to 10, characterized in that the oily 24R.25-Dihydroxycholecalciferol optionally as methyl tert. Butyl ether adduct is crystallized.
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