DD268162B1 - PROCESS FOR THE PREPARATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO HUMAN IMMUNE LOBULIN M (IGM) - Google Patents

PROCESS FOR THE PREPARATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO HUMAN IMMUNE LOBULIN M (IGM) Download PDF

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DD268162B1 DD31218488A DD31218488A DD268162B1 DD 268162 B1 DD268162 B1 DD 268162B1 DD 31218488 A DD31218488 A DD 31218488A DD 31218488 A DD31218488 A DD 31218488A DD 268162 B1 DD268162 B1 DD 268162B1
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Description

Darlegung des Wesen» der ErfindungExplanation of the essence of the invention

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, solche monoklonalen Antikörper mit Verfahren aufzufinden, die eine frühestmögliche Auswahl der Antikörper erlauben. Das erfindungsgemäße Verfahren zur Herstellung von monoklonalen Antikörpern gegen humanes IgM Ist dadurch gekennzeichnet, daß aus dem Serum gesunder Spender humanes IgM nach an sich bekannten Methoden, wie Ammonlumsulfat-PrSzipitation, Ultrazentrifugation und lonenaustauschchromatografie, isoliert wird, mit dem 6-10 Wochen alte weibliche AJ-Mäuse durch mehrere Intraperitoneale Applikationen des Antigens immunisiert werden. Die Lymphozyten werden aus den Milzen der immunisierten Mäuse in bekannter Weise isoliert, mit Mausmyelomzellen der Linie P3-X63-AG 8.653 fusioniert und die Zeilsuspension in Selektionsmedium kultiviert. Die Zellkulturüberstände mit Hybridzellwachstum werden auf antigenspezifische Antikörperbildung im direkten EIA geprüft. Nach Klonselektion der positiv reagierenden Kavitäten und Überführung in die nächstgrößeren Zellkulturgefäße werden nur die Hybridzellen weiter vermehrt, die im direkten EIA mit humanem IgM, nicht aber mit den Immunglobulinen der Isotypen G und A reagieren. Die so erhaltenen Hybridome werden Moniert und rekloniert und die erhaltenen spezifischen Subklone nach an sich bekannten Verfahren in flüssigem Stickstoff kryokon3erviert.The invention has for its object to find such monoclonal antibodies with methods that allow earliest possible selection of antibodies. The process according to the invention for the production of monoclonal antibodies against human IgM is characterized in that human IgM is isolated from the serum of healthy donors by methods known per se, such as ammonium sulphate precipitation, ultracentrifugation and ion exchange chromatography, with the female AJ 6-10 weeks old Mice are immunized by multiple intraperitoneal applications of the antigen. The lymphocytes are isolated from the spleens of the immunized mice in a known manner, fused with mouse myeloma cells of the line P3-X63-AG 8.653 and cultured the cell suspension in selection medium. The cell culture supernatants with hybrid cell growth are tested for antigen-specific antibody formation in the direct EIA. After clone selection of the positively reacting cavities and transfer into the next larger cell culture vessels, only the hybrid cells are further increased, which react in the direct EIA with human IgM, but not with the immunoglobulins of the isotypes G and A. The hybridomas obtained in this way are cloned and recloned, and the specific subclones obtained are cryoconjugated by conventional methods in liquid nitrogen.

Für die Entscheidung, welche monoklonalen Antikörper geeignet sind, in einem Capture-EIA humanes IgM aus verdünnten Körperflüssigkeiten zu binden, wird ein indirekter EIA herangezogen.To determine which monoclonal antibodies are suitable for binding human IgM from diluted body fluids in a capture EIA, an indirect EIA is used.

Nach bekannten Methoden wird durch einen polyklonalen Anti-Human-lgM-Festphasen-Antikörper IgM aus einem verdünnten Serumpool gebunden und den monoklonalen Antikörpern der Zellkulturüberstände als „natives Antigen" präsentiert. Die gebundenen monoklonalen Antikörper werden wie im direkten Nßchweissystem bestimmt. Unter den etablierten Hybridomen befinden sich 4 ZellinienAccording to known methods, IgM from a diluted serum pool is bound by a polyclonal anti-human IgM solid-phase antibody and presented to the monoclonal antibodies of the cell culture supernatants as a "native antigen." The bound monoclonal antibodies are determined as in the direct NWD system There are 4 cell lines

Sifin-lgM-8D10 Sifin-lgM-9G1 Sifin-lgM-10F6 Sifin-lgM-11G4,Sifin-IgM-8D10 sifin-IgM-9G1 sifin-IgM-10F6 sifin-IgM-11G4,

0.3 im direkten und indirekten EIA gleichermaßen hochaktiv reagieren. Diese Hybridome wurden in der ZIM-Hinterlegungsstellefür Zellinien unter den Nummern ZIM-0254, ZIM-0253, ZIM-0252 und ZIM-0255 hinterlegt.0.3 in the direct and indirect EIA react equally highly active. These hybridomas have been deposited in the ZIM cell site depository under numbers ZIM-0254, ZIM-0253, ZIM-0252 and ZIM-0255.

Die monoklonalen Antikörper dieser Zellinien sind vom lgG,-lsotyp. Die μ-Kettenspezifität ist durch den ImmunoblottestThe monoclonal antibodies of these cell lines are of the IgG, isotype. The μ-chain specificity is by the immunoblot test

belegt.busy.

Der Hauptvorteil derartiger Antikörper liegt in der strikten Standardisierung der Herstellung von hochspezifischenThe main advantage of such antibodies is the strict standardization of the production of highly specific Testreagenzien, mit denen klinisch relevante Aussagen, wie die Ermittlung des akuten Infektionsstatus bei Schwangeren (Röteln,Test reagents that are clinically relevant statements, such as the determination of the acute infection status in pregnant women (rubella, Toxoplasmose), mit höchstmöglicher Präzision getroffen werden müssen.Toxoplasmosis), must be taken with the highest possible precision. Die nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellten monoklonalen Anti-Human-lgM-Antikörper weisen am Beispiel desThe monoclonal anti-human IgM antibodies produced by the method according to the invention have the example of Antikörpers der Zellinie Sifin-lgM-11G4 im indirekten EIA im Vergleich zum Antikörper der Zellinie BL-lgM/1 deutlich höhereAntibody of the cell line Sifin-IgM-11G4 in the indirect EIA compared to the antibody of the cell line BL-IgM / 1 significantly higher Bindungseigenschaften auf (Abb. 1).Binding properties on (Figure 1). Die Überprüfung der Fangeigenschaften des nach an sich bekannten Verfahren gereinigten monoklonalen AntikörpersThe verification of the trapping properties of the monoclonal antibody purified according to known methods Sifin-lgM-11G4 weist im Gegensatz zu den monoklonalen Antikörpern BL-lgM/1 und BL-lgM/11 auf eine wesentlicheSifin-IgM-11G4, in contrast to the monoclonal antibodies BL-IgM / 1 and BL-IgM / 11, has an essential Erhöhung der Empfindlichkeit für Capture-EIA in der Diagnostik akuter erregerbedingter Erkrankungen hin (Abb. 2).Increased sensitivity for capture EIA in the diagnosis of acute pathogen-related diseases (Figure 2). Im direkten IgM-Antikörper-capture-EIA können gegenüber polyklonalen Anti-Human-lgM mit dem monoklonalen AntikörperIn the direct IgM antibody capture EIA can be compared to polyclonal anti-human IgM with the monoclonal antibody Sifin- IgM-11G 4 sowohl für die Diagnostik akuter Cytomegalievirusinfektionen (Abb. 3) als auch akuterSifin IgM-11G 4 for the diagnosis of acute cytomegalovirus infections (Figure 3) as well as more acute Toxoplasmoseinfektionen deutlich empfindlichere Testbedingungen geschaffen werden.Toxoplasmosis infections significantly more sensitive test conditions are created. Ausführungsbeispielembodiment

1. Milzzellen von AJ-Mä'jsen werden nach 3 intraperitonealen Injektionen mit einer menschlichen IgM-Fraktion gewonnen und nach den bekannten Techniken (Kearney et al., J. Immunol. 123 [1979], 1548) mit Zellen der MyelomzellinieP3- X63-AG8.653 fusioniert. Die Zellsu3pension wird in HAT-Selektionsmedium (Littlefield, Science 145 [1964], 709) RPMI 1640, supplemented mit 20%fetalem Kälberserum, 2mMol/l Glutamin, 5 χ 10"6Mol/l2-Mercaptoethanol, 2g/l Natriumbicarbonat, 10mMol/l Hepes, 240IE/ml Penicillin, 150pg/ml Streptomycin, 4 x 10~7Mol/l Aminopterin, 1 χ 10"4Mol/IHypoxanthin,1,6 x 10"6Mol/IThymidin, unter Zusatz von 1 χ 106Maus-Peritonealexsudatzellen/ml Kulturmedium bei 370C in einer wassergesättigten 5-6%igen COj-Atmosphäre inkubiert.1. Spleen cells of AJ mice are obtained after 3 intraperitoneal injections with a human IgM fraction and isolated according to the known techniques (Kearney et al., J. Immunol., 123 [1979], 1548) with cells of the myeloma cell line P3-X63- AG8.653 merged. The Zellsu3pension is in HAT selective medium (Littlefield, Science 145 [1964], 709) RPMI 1640 supplemented with 20% fetal calf serum, 2 mmol / l glutamine, 5 χ 10 "6 mol / l 2-mercaptoethanol, 2 g / l sodium bicarbonate, 10 mmol / l Hepes, 240IE / ml penicillin, 150pg / ml streptomycin, 4 x 10 -7 mol / l aminopterin, 1 χ 10 "4 mol / IHypoxanthin, 1.6 x 10" 6 mol / IThymidin, χ with the addition of 1 10 6 mouse peritoneal sowing cells / ml culture medium at 37 0 C in a water-saturated 5-6% COj atmosphere incubated.

2. Zur Selektion von Hybridzellen, die spezifische Antikörper gegen humanes IgM in das Kulturmedium sezernieren, wird nach dem ersten Mediumwechsel ein direkter EIA durchgeführt. Unter sterilen Bedingungen werden 20 μΙ Zellkulturüberstand der Masterplatten in 80 μΙ Pufferlösung der mit einer humanen IgM-Fraktion beladenen EIA-Platten überführt. Die Hybridzellklone der Kavitäten mit positiver Reaktion wei den in die nächstgrößeren Gewebekulturplatten überführt und deren Zellkulturüberstände im direkten EIA auf Vorhandensein spezifischer Antikörper mit den Beschichtungsantigenen humanes IgG, IgA und IgM geprüft. Von den IgM-spezifischen Hybridzellen werden sowohl Kryokonserven als auch Reklonierungen angelegt.2. For the selection of hybrid cells which secrete specific antibodies to human IgM in the culture medium, a direct EIA is performed after the first medium change. Under sterile conditions, 20 .mu.l cell culture supernatant of the master plates are transferred into 80 .mu.l buffer solution of the human IgM fraction-loaded EIA plates. The hybrid cell clones of the positive reaction cavities are transferred to the next larger tissue culture plates and their cell culture supernatants in the direct EIA are checked for the presence of specific antibodies with the coating antigens human IgG, IgA and IgM. Of the IgM-specific hybrid cells, both cryopreserved and recloned are applied.

3. Zur Einschätzung der Eignung der IgM-spezifischen monoklonalen Antikörper für einen IgM-Antikörper-capture-EIA werden die Zellkulturüberstände mit einem indirekten EIA überprüft. Das Antigen, humanes IgM aus einem Serumpool, wird über einen adsorbtiv gebundenen polyklonalen Anti-Human-lgM-Antikörper (Ziege) den monoklonalen Antikörpern des Zellkulturüberstandes präsentiert und die Bindungsreaktion durch einen Peroxidase-markierten Anti-Maus-Antikörper (Ziege) angezeigt. Lediglich 20% der etablierten Hybridome zeigen in diesem Testsystem eine positive Reaktion.3. To assess the suitability of the IgM-specific monoclonal antibodies for an IgM antibody capture EIA, the cell culture supernatants are checked with an indirect EIA. The antigen, human IgM from a serum pool, is presented to the monoclonal antibodies of the cell culture supernatant via an adsorptively bound polyclonal anti-human IgM antibody (goat) and the binding reaction is indicated by a peroxidase-labeled anti-mouse antibody (goat). Only 20% of the established hybridomas show a positive reaction in this test system.

4. Die Zellinien der im direkten und indirekten Testsystem hochaktiv reagierenden Antikörper4. The cell lines of the highly active in the direct and indirect test system antibodies

Sifin-lgM-8D10 (ZIM-Nr. 0254) Sifin-lgM-9G1 (ZIM-Nr.0253) Sifin-lgM-1OF6(ZIM-Nr.O252) Sifin-lgM-11 Q4 (ZIM-Nr.0255)Sifin-IgM-8D10 (ZIM No. 0254) sifin-IgM-9G1 (ZIM No. 0253) sifin-IgM-1OF6 (ZIM No. O252) sifin-IgM-11 Q4 (ZIM No. 0255)

werden mit den bekannten Zellkulturtechniken vermehrt bzw. wachsen nach Zelltransfer in mit Pristane (2,6,10,14 — Tetramethylpentadecan) behandelten syngenen Mäusen als Ascitestumor.are propagated by the known cell culture techniques after cell transfer in Pristane (2,6,10,14-tetramethylpentadecane) treated syngeneic mice as ascites tumor.

Die sezernierten monoklonalen Antikörper werden sowohl aus dem Zellkulturüberstand als auch aus dem Ascitespunktat nach bekannten Verfahren gereinigt. Besonders geeignete Präparationen lassen sich nach Affinitätschromatografie über IgM-Sepharose darstellen.The secreted monoclonal antibodies are purified from both the cell culture supernatant and the ascites punctate by known methods. Particularly suitable preparations can be prepared by affinity chromatography over IgM-Sepharose.

Indirekte Enzymimmunbestimmung (EIA) von monoklonalen Anti-Human-lgM-Antikörpern (mAK) aus demIndirect enzyme immunoassay (EIA) of monoclonal anti-human lgM antibodies (mAb) from the Zellkulturüberstand.Cell culture supernatant. Mikrotestplatten werden mit polyklonalen Anti-Human-lgM-Antikörpern (SIFIN) absorbtiv beschichtet und nach Bindung vonMicrotest plates are coated with polyclonal anti-human IgM antibodies (SIFIN) and after binding of IgM aus einem humanen Serumpool bzw. aus Serum eines Myelompatienten mit den angezeigten Verdünnungen vonIgM from a human serum pool or from a serum of a myeloma patient with the indicated dilutions of Zellkulturüberständen stationärer Kulturen der Zeilinien Sifin—IgM — 11G4 und BL-lgM/1 in Kontakt gebracht. Die Bindung vonCell culture supernatants of stationary cultures of the cell lines Sifin-IgM - 11G4 and BL-IgM / 1 brought into contact. The bond of

monoklonalen Anti-Human-lgM-Antikörpern aus den Zellkulturüberständen wird mit einem Anti-Maus-Ig-Antikörper-Monoclonal anti-human IgM antibodies from the cell culture supernatants are incubated with an anti-mouse Ig antibody.

Peroxidasekonjugat (SIFIN) und Jem Substrat H]O2 und Orthophenylendiamin angezeigt und photometrisch bewertet.Peroxidase conjugate (SIFIN) and the substrate H] O 2 and orthophenylenediamine indicated and evaluated photometrically.

Abb. 2Fig. 2

Direkte Enzymimmunbestimmung (EIA) von humanem IgM mit monoklonalen Festphasenantikörpern.Direct enzyme immunoassay (EIA) of human IgM with monoclonal solid phase antibodies. Mikrotestplatten werden mit den Sättigungskonzentrationen der gereinigten monoklonalen Antikörper Sifin-lgM-11 G4,Microplates are incubated with the saturation concentrations of the purified monoclonal antibody sifin-IgM-11 G4, BL-lgM/1 und BL-lgM/11 absorbtiv beschichtet und mit den angezeigten Serumkonzentrationen eines Spenderpools (30 Proben)BL-IgM / 1 and BL-IgM / 11 adsorbed and coated with the indicated serum concentrations of a donor pool (30 samples)

in Kontakt gebracht. Die Bindung von humanem IgM wird mit einem polyklonalen Anti-Human-lgM-Antikörper-brought into contact. The binding of human IgM is monitored with a polyclonal anti-human IgM antibody

Peroxidasekonjugat und dem Substrat H2O2 und Orthophenyldiamin angezeigt und photometrisch bewertet.Peroxidase conjugate and the substrate H 2 O 2 and Orthophenyldiamin displayed and evaluated photometrically.

Abb. 3Fig. 3

Vergleich von polyklonelen und monoklonalen Festphasen-Antikörpern zur Bewertung von Cytomegalievirus-spezifischen IgM-Comparison of polyclonal and monoclonal solid phase antibodies for evaluation of cytomegalovirus-specific IgM Antikörpern in positiven Patientenseren.Antibodies in positive patient sera. Mikrotestplatten wurden parallel mit dem gereinigten monoklonalen Antikörper Sifin — IgM — 11G 4 und einem polyklonalenMicrotest plates were aligned in parallel with the purified monoclonal antibody Sifin - IgM - 11G 4 and a polyclonal antibody Anti-Human-lgM-Antikörper beschichtet und mit den angegebonen Serumkonzentrationen von 3 ausgewählten positivenAnti-human IgM antibody coated and selected with the indicated serum concentrations of 3 positive Patienten (Cytomegalievirus-spezifische IgM-AK) in Kontakt gebracht.Patients (cytomegalovirus-specific IgM-AK) were brought into contact. Die Bindung von erregerspezifischem IgM wird mit einem Peroxidase-markierten Cytomegalievirusantigen und dem SubstratThe binding of pathogen-specific IgM is with a peroxidase-labeled cytomegalovirus antigen and the substrate H2O2 und Orthophenylendiamin angezeigt und photometrisch bewertet.H 2 O 2 and orthophenylenediamine indicated and evaluated photometrically.

Claims (1)

Patentanspruch:Claim: Verfahren zur Herstellung von monoklonalen Antikörpern gegen humanes Immunglobulin M durch Fusionierung von Milzlymphozyten von AJ-Mäusen, die mit gereinigtem humanem Immunglobulin M immunisiert wurden, mit Mausmyelomzellen der Linie P3-X63-AG 8.653 und anschließende Selektierung der erhaltenen Zellhybride unter Anwendung direkter oder indirekter Enzymimmunbestimmungsmethoden sowie Klonierung, Kryokonservierung und Kultivierung der selektierten antikörperbildenden Hybridome, dadurch gekennzeichnet, daß für die Antikörperproduktion die mit den Hinterlegungsnummern ZIM 0254, ZIM 0253, ZIM 0252 oder ZIM 0255 gekennzeichneten Hybridome eingesetzt warden.A method for the production of monoclonal antibodies to human immunoglobulin M by fusing splenic lymphocytes of AJ mice immunized with purified human immunoglobulin M with mouse myeloma cells of the line P3-X63-AG 8.653 and subsequent selection of the obtained cell hybrids using direct or indirect enzyme immunoassay methods and cloning, cryopreservation and culturing of the selected antibody-forming hybridomas, characterized in that the hybridomas labeled with the accession numbers ZIM 0254, ZIM 0253, ZIM 0252 or ZIM 0255 are used for antibody production. Hierzu 3 Seiten ZeichnungenFor this 3 pages drawings Anwendungsgebiet der ErfindungField of application of the invention Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von monoklonalen Antikörpern gegen humanes IgM. Das Hauptanwendungsgeblet dieser monoklonalen Antikörper liegt in der Medizin z. B. in der Diagnostik akuter erregerbedingter Erkrankungen in klinisch-diagnostischen Einrichtungen des Gesundheitswesens.The invention relates to a method for the production of monoclonal antibodies to human IgM. The main application of these monoclonal antibodies is in medicine z. As in the diagnosis of acute pathogen-related diseases in clinical diagnostic institutions of the health care system. Charakteristik des bekannten Standes der TechnikCharacteristic of the known state of the art In der Diagnostik von akuten erregerbedingten Erkrankungen werden gegenwärtig der Bestimmung von spezifischen IgM-Antikörpern Prioritäten eingeräumt. Neben den klassischen Nachweismethoden der Auftrennung der Patientenseren mittels Dichtegradientenzentrifugation oder Gelfiltration und des anschließenden Nachweises des erregerspezifischen IgM mittels Hämagglutinationshemmtesten oder indirekten Fluoreszenzantikörpertesten haben sich gegenwärtig Enzymimmunbestimmungsmethoden (EIA) durchgesetzt (Voller et al.. Bull. World Health Organ. 53 [1976], 55; Blomberg et al., J.Clin. Microbiol. 17 (1983], 1081; Kurstaket al., Bull. World Health Organ. 64 [1986], 465). Die anfänglich gewählten indirekten EIA-Methoden, bei denen trägerfixiertes Antigen spezifische Antikörper aus dem Patientenserum bindet, wurden wegen ihrer häufigen falsch negativen Aussagen, hervorgerufen durch die Konkurrenz von erregerspezifischen IgG- und IgM-Antikörpern, zu Gunsten von direkten „IgM-capture-EIA'-Methoden zurückgedrängt.In the diagnosis of acute pathogen-related diseases, the determination of specific IgM antibodies is currently being prioritized. In addition to the classical detection methods of the separation of the patient sera by density gradient centrifugation or gel filtration and the subsequent detection of the pathogen-specific IgM by hemagglutination inhibition tests or indirect fluorescence antibody tests, enzyme immunoassay methods (EIA) have become established (Voller et al., Bull. World Health Organ. 53 [1976], 55 Blomberg et al., J.Clin Microbiol 17 (1983), 1081; Kurstak et al., Bull. World Health Organ. 64 [1986], 465). The initially selected indirect EIA methods, in which carrier-fixed antigen is specific Antibody from the patient serum binds has been pushed back in favor of direct 'IgM capture EIA' methods because of their frequent false-negative results caused by the competition of pathogen-specific IgG and IgM antibodies. Beim IgM-Antikörper-capture-EIA wird selektiv das IgM aus menschlichen Körperflüssigkeiten über einen trägerfixierten Anti-Human-IgM-Antikörper an die „fet. .e Phase" gebunden (Duermeyer et al., J. Clin. Microbiol. 12 [1980], 805; Schmitz et al., J. Gon. Virol. 50 [1980], 59; Isaac et al., J. Med. Virol. 64 [1982], 55; Nielsen et al., J. Med. Viral. 22 [1987], 67). Nichterfaßtes IgG wird durch Waschen ontfernt. Der erregerspezifische Nachweis wird über ein markiertes Antigen bzw. über einen markierten antigenspezifischen Antikörper geführt. Gegen die wichtigsten Infektionserkrankungen (Röteln, CMV, Hepatitis A und B, Toxoplasmose, Mumps, Masern, Lues etc.) liegen international indirekte und direkte Testsysteme vor. Der Aussagewert der IgM-capture-EIA hängt von der Qualität des trägergebundenen Anti-Human-Testreagens'ab. Die Produktion konventioneller polyklonaler Antikörper benötigt extensive Absorptionsprozeduren zur Eliminierung von kreuzreagierenden Antikörpern. Auch die Bindungscharakteristika schwanken teilweise erheblich von Tier zu Tier und Abnahme zu Abnahme, so daß eine Chargenstandardisierung große Schwierigkeiten bereitet. Diese Probleme können durch monoklonale Anti-Human-/Antikörper (μ-kettenspezifisch) überwunden werden.In the case of the IgM antibody capture EIA, the IgM from human body fluids is selectively transferred via a carrier-fixed anti-human IgM antibody to the "fet. "Phase" (Duermeyer et al., J. Clin. Microbiol., 12, 805; Schmitz et al., J. Gon. Virol. 50 [1980], 59; Isaac et al., J. Med Virol 64 (1982), 55, Nielsen et al., J. Med. Viral 22 [1987], 67) Unrecognized IgG is removed by washing The pathogen specific detection is via a labeled antigen or via a labeled antigen-specific Antibodies have been tested against the most important infectious diseases (rubella, CMV, hepatitis A and B, toxoplasmosis, mumps, measles, syphilis, etc.) The significance of the IgM-capture EIA depends on the quality of the carrier-bound anti-body The production of conventional polyclonal antibodies requires extensive absorption procedures for the elimination of cross-reacting antibodies, and the binding characteristics sometimes vary considerably from animal to animal and decrease to decrease, so that batch standardization causes great difficulties These problems can be overcome by monoclonal anti-human / antibody (μ-chain specific). Die nach Spezifität und Bindungsverhalten für ein derartiges Testsystem ausgewählten mAK garantieren die Standardisierung der Herstellung des Festphasenantikörpers und seines Verhaltens im Testsystem. Die bisher in der DDR vorliegenden monoklonalen Antikörper gegen humanes IgM, BL-lgM/1 (DD-PS 230879) und BL-lgM/11 (registriert in der ZIM-Hinterlegungsstelle unter den Nummern ZIM-0056 und ZIM-0093) sind für den genannten Anwendungsbereich nur bedingt einsetzbar. In vergleichenden Untersuchungen zum Toxoplasmose- und CMV-EIA war der BL-lgM/1 -Antikörper polyklonalen Antikörperpräparationen deutlich unterlegen.The mAbs selected for specificity and binding behavior for such a test system guarantee the standardization of the preparation of the solid phase antibody and its behavior in the test system. The monoclonal antibodies to human IgM presently available in the GDR, BL-IgM / 1 (DD-PS 230879) and BL-IgM / 11 (registered in the ZIM depository under the numbers ZIM-0056 and ZIM-0093) are for the mentioned scope of application only conditionally. In comparative studies of the toxoplasmosis and CMV EIA, the BL-IgM / 1 antibody was significantly inferior to polyclonal antibody preparations. Ziel der ErfindungObject of the invention Die Erfindung hat das Ziel, in leicht beherrschbarer Weise und kostengünstig monoklonale Antikörper gegen humanes IgM bereitzustellen, die in ihren Reaktionsparametern (Spezifität und Affinität) für einen IgM-Antikörper-capture-EIA geeignet sind und deren Stabilität in der Angebotsform .,Lyophilisat" gewährleistet ist.The object of the invention is to provide monoclonal antibodies to human IgM in an easily controllable and cost-effective manner, which are suitable for their IgM antibody capture EIA in their reaction parameters (specificity and affinity) and ensure their stability in the "lyophilisate" range is.
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