DD266811A1 - PROCESS FOR OBTAINING INDULSES BY CULTURING AGARICALES AND NUTRIENTS HEREFUER - Google Patents
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Abstract
Die Erfindung bezieht sich auf die mikrobielle Gewinnung von Indolen. Sie ist anwendbar zur Herstellung einer Modellsubstanz fuer die experimentelle, psychiatrische Forschung und fuer neurobiologische Untersuchungen. Die Erfindung besteht in der Verwendung eines neuen Naehrmediums, das aus natuerlichen Abfallstoffen mit Zusatz von Wasser mit oder ohne Zusatz von Harnstoff besteht. Die unsterile Fermentation von Psilocybe cyanescens erfolgt bei 2 bis 32C, die Extraktion und Isolierung des Wirkstoffes nach bekannter Weise. Die erfindungsgemaesse Loesung fuehrt zur weitgehend konstanten Ausbeute an Psilocybin bei einfacher Fermentation und Abtrennung.The invention relates to the microbial recovery of indoles. It is applicable for the production of a model substance for experimental, psychiatric research and neurobiological investigations. The invention consists in the use of a new nutrient medium, which consists of natural waste with the addition of water with or without the addition of urea. The non-sterile fermentation of Psilocybe cyanescens takes place at 2 to 32C, the extraction and isolation of the active ingredient in a known manner. The solution according to the invention leads to a largely constant yield of psilocybin with simple fermentation and separation.
Description
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Titeltitle
Verfahren zur Gewinnung von Indolen durch Kultivierung von Agariues und Nährboden hierfürProcess for obtaining indoles by cultivating agarics and nutrient medium therefor
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung von tndolen durch künstliche Anzucht von Pilzmycelien auf geeigneten Nährböden. Die Substanz Psilocybin ist in der neurobiologiechen Forschung als Modellsubstanz anwendbar.The invention relates to a method for obtaining Tndolen by artificial cultivation of mushroom mycelia on suitable nutrient media. The substance psilocybin is applicable as a model substance in neurobiological research.
Die Indolverbindung Psilocybin kommt in natürlichen Fruchtkörpern verschiedener Pilzarten der Agaricales aus den Gattungen Psilooybe, Strophariaj conocybe, Inocybe, Pluteus und Panaeolue vor.The indole compound psilocybin occurs in natural fruiting bodies of various fungus species of the agaricales of the genera Psilooybe, Strophariaj conocybe, Inocybe, Pluteus and Panaeolue.
Ee ist bekannt, daß aus den kultivierten Mycelien verschiedener Arten der Wirkstoff neben geringen Anteilen von Nebenalkaloiden wie Peilocin und Baeocyetin gewonnen worden kann»Ee is known that from the cultured mycelia of various species of the drug can be obtained in addition to small amounts of minor alkaloids such as Peilocin and Baeocyetin »
* So beschreibt ein Verfahren (DE-OS 1087321) die Gewinnung der Verbindung aus Mycel und Sklerotien, die durch Anzucht von Pilzarten der Gattungen Psilocybe und Stropharia in Oberflächenkulturen unter Einsatz von Malzextrakt bei Anwesenheit verschiedener Mineralsalze angezüchtet worden sind; Der Nachteil des Verfahrens ist, daß bei konstanten Temperatjren fermentiert werden muß, was zusätzliche apparative Aufwendungen erfordert. Schließlich ist ein sterileo Arbeiten nötig/ da das verwendete Substrat auch ein geeigneter Nährboden für eine Vielzahl von schnellerwüchsigen Bakterien und niederen Pilzen H darstellt.* Thus, a method (DE-OS 1087321) describes the recovery of the compound of mycelium and sclerotia, which have been grown by cultivating fungi of the genera Psilocybe and Stropharia in surface cultures using malt extract in the presence of various mineral salts; The disadvantage of the method is that must be fermented at constant temperatures, which requires additional equipment expenses. Finally, a sterile working is necessary / because the substrate used is also a suitable breeding ground for a variety of faster-growing bacteria and lower fungi H.
Diesen Naohteil hot auch ein bereite vorgeschlagenes Verf ahrenf das bei VerwendungThis Naohteil hot also a ready proposed method for that when using
synthetischer Nährmedien eine höhere Akkumulation der Indolalkaloide bei variablen Fermentationetemperaturen in den Mycelien ale beim ersteren Verfahren bewirkt« Die Ausgangsstoffe bei beiden Verfahren sind teuere eine Abtrennung der Mycelien vor der Extraktion der Biomasson ist als zusätzlicher Verfahrensschritt jedesmal nötig.Synthetic nutrient media causes a higher accumulation of indole alkaloids at variable fermentation temperatures in the mycelia ale in the former method. The starting materials in both methods are expensive separation of the mycelia prior to the extraction of biomass is required as an additional process step each time.
Ziel der Erfindung ist ein Verfahren zur Gewinnung von Indolen aus Pilzmycelien, bei welchem unter Anwendung von billigen» natürlichen Rohstoffen eine Kultivierung unter unsterilen Bedingungen und bei variablen Temperaturen bewirkt wird, wobei der zusätzllcho Verfahrenaschritt der vorherigen Abtrennung der Mycelien entfällt und weitgehend konstante Ausbeuten an Psilocybin trotz unterschiedlicher Substrate erreicht werden sollen.The aim of the invention is a process for obtaining indoles from fungus mycelia, in which using cheap »natural raw materials cultivation is effected under unsterile conditions and at variable temperatures, wherein the additional method step of the previous separation of the mycelia omitted and largely constant yields of psilocybin despite different substrates to be achieved.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Substrat als Nöhrmedium für die Kultur der Mycelien Psilocybin bildender Arten zu entwickeln und einzusetzen·' Erfindungegemäß erfolgt die Kultivierung der Pilzmycelien auf natürlichen Abfallstoffen im Sinne einer Festphasen·» fermentation.1 Die Substrate sind schimmelfest und werden von Bakterien in den üblichen Kultivierungszeiten nicht meßbar abgebaut;' Dadurch 1st eine unsterile Fermentation möglich.The object of the invention is to develop and use a substrate as a nutrient medium for the culture of the mycelia of psilocybin-producing species. According to the invention, the cultivation of the fungus mycelia is carried out on natural waste materials in the sense of a solid phase fermentation. 1 The substrates are mold-resistant and are not measurably degraded by bacteria during the usual cultivation times; This makes an unsterile fermentation possible.
Als Substrate werden verwendetAs substrates are used
- abgefallene Ästchen und Laub von Quercus, Titia'," Salix, Acer, Aeeculua, Populus, Betula, Carpinus, Alnus, Fagus- fallen branches and foliage of Quercus, Titia, Salix, Acer, Aeeculua, Populus, Betula, Carpinus, Alnus, Fagus
- abgefallonen Nadeln von Picea und Pinus- Dropped needles of Picea and Pinus
- am Standort abgestorbene Pflanzen von Urtica im beliebigen Gemisch oder als Monosubstrat mit oder ohne Zusatz von Harnstoff in Mengen von 0,01 bis 0^3 %.- Plant dead plants of Urtica in any mixture or as monosubstrate with or without the addition of urea in quantities of 0.01 to 0-3%.
Als kultivierte Pilzart wird Psilocybe oyanescens Wakefield emend Kriegisteiner verwendet,1 Durch den Einsatz dieser Pilzen* ist eine Kultivierung bei 2 bis 32 0C ohne jegliche Temoeraturregelung möglich.As a cultivated mushroom species Psilocybe oyanescens Wakefield emend Kriegisteiner is used, 1 Through the use of these mushrooms * is a cultivation at 2 to 32 0 C without any Temoeraturregelung possible.
Man verfährt so, daß die erwähnten organischen Abfallstoffe je nach Feuchtigkeitsgehalt mit 10 bis 100 % Wasser, bezogen auf das fest· Substrat, versetzt werden·1 Nach dem Autoklavieren und Abkühlen wird bei den obigen Temperaturen mit einer Suspension von Mycelflocken der Psilocybe cyanescens aus einer nach bekannten Verfahren gewonnenen Vorkultur beimpft und die Kultur unoteril 30 bis 50 Tage sich selbst überlassen· Danach werden die resultierenden Mycelien zusammen mit den durchwachsenen Resten des Nährmediums bei 20 bio 50 0C unter Vakuum oder Normaldruck getrocknet, zermahlen und nach bekannten Verfahren extrahiert und der Wirkstoff mittels bekannter ohromatographischer Methoden abgetrennt* Bei den Substraten von aus Pflanzenresten von Picea und Pinus bewirkt der Harnstoff eine erhöhte Einwachsgeschwindigkeit der Mycelien in das Substrat. Durch cli&se Arbeitsweise entfällt die Abtrennung der Mycelien aus Nährlösungen, eine Einstellung der Temperaturen und die Notwendigkeit der sterilen Arbeitsweise im Sinne einer Einfachtechnologie bei Anwundung natürlicher Abfallstoffe undThe procedure is such that the mentioned organic wastes, depending on the moisture content with 10 to 100 % water, based on the solid substrate, are added · 1 After autoclaving and cooling is at the above temperatures with a suspension of mycotic flakes of Psilocybe cyanescens from a Inoculated by known methods preculture and the culture unoterilically 30 to 50 days left to itself · Thereafter, the resulting mycelia are dried together with the mixed-up remains of the nutrient medium at 20 bio 50 0 C under vacuum or atmospheric pressure, ground and extracted by known methods and the Active substance separated by known oomatographic methods * In the case of the substrates of plant residues of Picea and Pinus, the urea causes an increased growth rate of the mycelia into the substrate. By cli & se operation eliminates the separation of mycelia from nutrient solutions, a setting of the temperatures and the need for sterile operation in the sense of a simple technology for the application of natural waste and
Erzielung weltgehend konstanter Ausbeuten an Wirkstoff. Durch die Bildung des Psilocybins alg einziges Ino'ol vereinfacht sich die Auftrennung bedeutend. Durch die nachfolgenden Beispiele soll die Erfindung näher erläutert werden»Achieving world-wide constant yields of active ingredient. The formation of psilocybin and the only Ino'ol simplify the separation significantly. The following examples are intended to explain the invention in more detail »
Man legt von Basidiosporen der Psilocybe cyanescens eine Primörkultur &uf 6 %lgem, festem Malzagar an, wobei dann auf ein autoklavlertas Gemisch au9 100 g Reiskörnern r.iit 200 ml Wasser steril überimpft wurde. Nach 30 Tagen Kultur wurde dieses Impfmaterial nach der Zugabe von 100 ml Wasser rcit dem Spatel zerfasert, 10 ml dieser Mycelauepension dienten zur Beimpfurg eines vorher autoklavieren Gemisches aus 100 g trockenen Abfallnadeln von Picea, 100 ml Wasser und 0,3 g Harnstoff, Nach 30 Tagen uneterller Fermentation bei 15 bis 25 0C wurde bei 40 0C getrocknet und die Masse zermahlenFrom basidiospores of Psilocybe cyanescens a primary culture of 6% solid malt agar is applied, after which an autoclaving mixture of 100 g rice grains and 200 ml water was sterile-inoculated. After 30 days of culture, this inoculum was fibrillated with the spatula after the addition of 100 ml of water, 10 ml of this mycelial suspension were used to inoculate a previously autoclaving mixture of 100 g of Picea dry waste needles, 100 ml of water and 0.3 g of urea, After 30 Days of uneterller fermentation at 15 to 25 0 C was dried at 40 0 C and ground the mass
Gehalt der Trockensubstanz an Psilocybini 0,28 % Dry matter content of Psilocybini 0.28 %
Mit 10 ml einer analogen Impfkultur eines 2, Stammes der gleichen Pilzart wie bei Beispiel 1 wurden 60 g einer natürlichen Mischung aus Falllaub, grob zerkleinerten, abgefallenen Ästchen von Tilla und 100 ml Wasser versetzt und autoklaviert· Nach 40 Tagen unsteriler Kultivierung bei 4 bis 6 0C wu<"de dio Mischung bei 50 0C im Vakuum getrocknet, dann zennahlen, mit Methanol erschöpfend extrahiert und an einer Cellulosesäule mit wassergesättigtem n-Butanol aufgetrennt, wobei mit Ehrlich-Reagenz bei dor DC die einzelnen Fraktionen auf Indolderivece geprüft wurden, Ausbeute an Psilocybin, bezogen auf das Trockenproduktt 0y35 % With 10 ml of an analogous seed culture of a 2 strain of the same fungal species as in Example 1, 60 g of a natural mixture of fallen leaves, coarsely shredded fallen branches of Tilla and 100 ml of water were added and autoclaved. After 40 days of nonsterile cultivation at 4 to 6 0 C wu <"de dio mixture at 50 0 C in vacuum dried, then zennahlen, exhaustively extracted with methanol and separated on a cellulose column with water-saturated n-butanol, and the individual fractions were tested for Indolderivece with Ehrlich reagent at dor DC, Yield of psilocybin based on the dry product 0y35 %
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