DD246546A5 - ACYLATED HEXOSEDERIVATES AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF - Google Patents
ACYLATED HEXOSEDERIVATES AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF Download PDFInfo
- Publication number
- DD246546A5 DD246546A5 DD28716186A DD28716186A DD246546A5 DD 246546 A5 DD246546 A5 DD 246546A5 DD 28716186 A DD28716186 A DD 28716186A DD 28716186 A DD28716186 A DD 28716186A DD 246546 A5 DD246546 A5 DD 246546A5
- Authority
- DD
- German Democratic Republic
- Prior art keywords
- acetyl
- compound
- hydrogen
- formula
- tri
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von acylierten Hexosederivaten fuer die Anwendung als Arzneimittel. Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung von strukturell verhaeltnismaessig einfachen und relativ leicht herstellbaren Muramylpeptid-Derivaten, die zur Prophylaxe und Therapie von Virusinfektionen bei Warmbluetern anwendbar sind. Erfindungsgemaess werden Verbindungen der Formel I hergestellt, worin sich der Hexoseteil von D-Glucose, D-Mannose oder D-Galactose ableitet und beispielsweise bedeuten: n 0 oder 1, R1, R4 und R6 unabhaengig voneinander Niederalkanoyl oder Benzoyl, R2 Niederalkyl oder Phenyl, R3, R5 und R7 unabhaengig voneinander Wasserstoff oder Niederalkyl, oder R5 mit R8 zusammen Trimethylen und R7 Wasserstoff, R8 Wasserstoff u. a., R9 und R12 unabhaengig voneinander Hydroxy, Amino, C1-10-Alkoxy, Arylniederalkoxy u. a., R10 Wasserstoff, Carboxy, Niederalkoxycarbonyl oder Arylniederalkoxycarbonyl und R11 Wasserstoff oder unsubstituiertes oder durch Amino u. a. substituiertes Niederalkyl. Formel IThe invention relates to a process for the preparation of acylated Hexosederivaten for use as a medicament. The aim of the invention is the provision of structurally relatively simple and relatively easy to prepare muramyl peptide derivatives which are applicable for the prophylaxis and therapy of viral infections in Warmbluetern. According to the invention, compounds of the formula I are prepared in which the hexose part is derived from D-glucose, D-mannose or D-galactose and is, for example: n is 0 or 1, R 1, R 4 and R 6 independently of one another are lower alkanoyl or benzoyl, R 2 is lower alkyl or phenyl, R3, R5 and R7 are each independently hydrogen or lower alkyl, or R5 with R8 together trimethylene and R7 is hydrogen, R8 is hydrogen and. a, R9 and R12 independently of one another hydroxy, amino, C1-10-alkoxy, aryl-lower alkoxy and. a., R10 is hydrogen, carboxy, lower alkoxycarbonyl or aryl-lower alkoxycarbonyl and R11 is hydrogen or unsubstituted or substituted by amino. a. substituted lower alkyl. Formula I
Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von acylierten Hexosederivaten, insbesondere von 1,4,6-tri:0-acylierten Muramylpeptid- und analoge D-Mannose- oder D-Galactosederivaten, pharmazeutische Präparate, enthaltend diese Derivate, und deren Verwendung als Arzneimittel.The invention relates to a process for the preparation of acylated hexose derivatives, in particular of 1,4,6-tri : O-acylated muramylpeptide and analogous D-mannose or D-galactose derivatives, pharmaceutical preparations containing these derivatives, and their use as medicaments.
Aus der Französischen Patentanmeldung Nr. 7422 909 mit der Publikationsnummer 2 292 486 sind Muramylpeptide vom Typ der '- Verbindung N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamin („MDP") bekannt. Diese Verbindungen sind als immunologische Adjuvanzien beschrieben, d. h., sie können in Mischung mit Impfstoffen dazu benutzt werden, den Impferfolg zu verbessern. Eigene Untersuchungen, z. B. bei mit Influenza-Viren infizierten Mäusen haben ergeben, daß N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamin per se ohne Beimengung von Impfstoffen, bei der Prophylaxe und Therapie von Virusinfektionen unwirksam ist. Auch die Verwendbarkeit strukturell einfacher Muramylpeptide und ihrer Analogen gegen Virusinfektionen bisher nicht beschrieben.Muramyl peptides of the type of the '- compound N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamine ("MDP") are known from French patent application No. 7422 909 with publication number 2 292 486. These compounds are described as immunological adjuvants, that is, they can be used in admixture with vaccines to improve vaccination success, and our own studies, for example, on influenza virus-infected mice have shown that N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamine per se without the addition of vaccines, in which prophylaxis and therapy of viral infections is ineffective.The applicability of structurally simple muramyl peptides and their analogues against viral infections has not been described so far.
Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung von strukturell verhältnismäßig einfachen und daher relativ leicht herstellbaren Muramylpeptid-Derivaten, die nach Verabreichung an Warmblüter hinsichtlich der Prophylaxe und Therapie von Virusinfektionen hochwirksam sind.The aim of the invention is to provide structurally relatively simple and therefore relatively easy to prepare muramyl peptide derivatives, which are highly effective after administration to warm-blooded animals with regard to the prophylaxis and therapy of viral infections.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, neue Muramylpeptid-Derivate und Verfahren zu ihrer Herstellung aufzufinden. Erfindungsgemäß werden Verbindungen der Formel I,The invention has for its object to find new muramyl peptide derivatives and processes for their preparation. According to the invention, compounds of the formula I,
OROR
·, O·, O
\ «l 2\ "L 2
NH-C-RNH-C-R
|R3-CH (D) . - R9| R 3 -CH (D). - R 9
7 \ -^ IO7 \ - ^ IO
R7O C RX R 7 OCR X
IH I 1IH I 1
C-N-C-C --NH -CH- CH - CH-C-C-N-C-C - NH-CH-CH - CH-C-
O RD R° (D) OL OOR D R ° (D) OL O
NH-CH-C-NH-CH-C
hergestellt, worin sich der. Hexoseteil von D-Glucose, D-Mannose oder D-Galactose ableitet, η für O oder 1 steht, und R1, R4 und R6 unabhängig voneinander Niederalkanoyl oder Benzoyl, R2 Niederalkyl oder Phenyl, R3, R5 und R7 unabhängig voneinander Wasserstoff oder Niederalkyl, oder R mit R8 zusammen Trimethylen und R7 Wasserstoff, R8 Wasserstoff oder unsubstituiertes oder durch Phenyl, Hydroxy, Mercapto oder Niederalkyithio substituiertes Niederalkyl, R9 und R12 unabhängig voneinander Hydroxy, Amino, Ci-C-io-Alkoxy, Arylniederalkoxy, Alkanoyloxyniederalkoxy mit bis zu 16C-Ätomen, Aroyloxyniederalkoxy, 3-Cholesteryloxy oder 2-Trimethylammonio-ethyloxy, R10 Wasserstoff, Carboxy, Niederalkoxycarbonyl oder .produced, wherein the. Hexose portion of D-glucose, D-mannose or D-galactose, η is O or 1, and R 1 , R 4 and R 6 are independently lower alkanoyl or benzoyl, R 2 is lower alkyl or phenyl, R 3 , R 5 and R 7 independently of one another are hydrogen or lower alkyl, or R with R 8 together are trimethylene and R 7 is hydrogen, R 8 is hydrogen or lower alkyl which is unsubstituted or substituted by phenyl, hydroxy, mercapto or lower alkylthio, R 9 and R 12 are each independently hydroxyl, amino, C 1 -C 4 -io-alkoxy, Arylniederalkoxy, Alkanoyloxyniederalkoxy with up to 16C-ethers, Aroyloxyniederalkoxy, 3-cholesteryloxy or 2-trimethylammonio-ethyloxy, R 10 is hydrogen, carboxy, lower alkoxycarbonyl or.
Arylniederaikoxycarbonyl und R11 Wasserstoff oder unsubstituiertes oder durch Amino, Hydroxy, Niederalkänoylamino,Aryl-lower alkoxycarbonyl and R 11 is hydrogen or unsubstituted or by amino, hydroxy, lower alkanoylamino,
Niederalkanoyloxy, 2-Benzyloxycarbonylamino-ethyl-sulfinyl, 2-Benzyloxycarbonylamino-ethyl-sulfonyl, 2- v Lower alkanoyloxy, 2-benzyloxycarbonylaminoethylsulfinyl, 2-benzyloxycarbonylaminoethylsulfonyl, 2- v
Niederalkoxycarbonylamino-ethyl-sulfinyl, 2-Niederalkoxycarbonyiamino-ethyl-sulfonyl oder Guanidino substituiertes Niederalkyl bedeuten, mit der Maßgabe, daß mindestens einer der Reste R9 und R12 von Hydroxy, Amino und C^7-Alkoxy oder R10von Wasserstoff, Carboxy und Alkoxycarbonyl mit bis zu 7 C-Atomen im Alkoxyteil verschieden ist, und Salze von solchen Verbindungen mit mindestens einer salzbildenden Gruppe.Lower alkoxycarbonylamino-ethyl-sulfinyl, 2-lower alkoxycarbonyiamino-ethyl-sulfonyl or guanidino substituted lower alkyl, with the proviso that at least one of R 9 and R 12 of hydroxy, amino and C ^ 7 alkoxy or R 10 of hydrogen, carboxy and alkoxycarbonyl having up to 7 carbon atoms in the alkoxy moiety, and salts of such compounds having at least one salt-forming group.
Vorzugsweise leitet sich der Hexoseteil von D-Glucose ab.Preferably, the hexose part is derived from D-glucose.
Im Falle asymmetrischer Substitution ist die Konfiguration an den Atomen C-R3, C-R8 beziehungsweise C-CO-R9 (D), (L) bzw. (D), wie in Formel I angegeben. Die Konfiguration am C-R11 ist im Falle asymmetrischer Substitution (L) oder (D), vorzugsweiseIn the case of asymmetric substitution, the configuration at the atoms is CR 3 , CR 8 or C-CO-R 9 (D), (L) and (D), respectively, as indicated in formula I. The configuration at CR 11 is in the case of asymmetric substitution (L) or (D), preferably
Niederalkanoyl R1, R4 und R6 ist insbesondere C2_6-Alkanoyl, z. B. n-Hexanoyl, vorzugsweise C^-Alkanoyl, z. B. Butyryl, Propionyl oder vorzugsweise Acetyl,Lower alkanoyl R 1 , R 4 and R 6 is especially C 2 _6 alkanoyl, z. B. n-hexanoyl, preferably C ^ alkanoyl, z. Butyryl, propionyl or, preferably, acetyl,
Niederalkyl R2 ist vorzugsweise C-^-, insbesondere C^-Alkyl.Lower alkyl R 2 is preferably C 1-4 -alkyl, especially C 1-4 -alkyl.
Niederalkyl R3, R5 und R7 ist vorzugsweise Ci_3-Alkyl, insbesondere Methyl.Lower alkyl R 3 , R 5 and R 7 is preferably C 1-3 -alkyl, in particular methyl.
Unsubstituiertes Niederalkyl R8 oder R11 ist vorzugsweise C^-Alkyl, z. B. Ethyl, Isopropyl, 2-Methylpropyl, sek. Butyl oder insbesondere Methyl.Unsubstituted lower alkyl R 8 or R 11 is preferably C 1-4 alkyl, e.g. Ethyl, isopropyl, 2-methylpropyl, sec. Butyl or especially methyl.
Durch Phenyl, Hydroxy, Mercapto oder Niederalkyithio, wie insbesondere Methylthio, substituiertes Niederalkyl R8 ist vorzugsweise entsprechend substituiertes Ci_2-Alkyl, z. B. Benzyl, Hydroxymethyl, 1-Hydroxy-ethyl, Mercaptomethyl oder 2-Methylthio-ethyl.Substituted by phenyl, hydroxy, mercapto or lower alkylthio, in particular methylthio, lower alkyl R 8 is preferably correspondingly substituted Ci_ 2 alkyl, z. B. benzyl, hydroxymethyl, 1-hydroxy-ethyl, mercaptomethyl or 2-methylthio-ethyl.
Alkoxy R9 oder R12 ist vorzugsweise Ci_4-Alkoxy, z. B. Methoxy, n-Butyloxy oder tert. Butyloxy.Alkoxy R 9 or R 12 is preferably C 1-4 -alkoxy, e.g. As methoxy, n-butyloxy or tert. Butyloxy.
Aryl als Teil von Arylniederalkoxy, Aryiniederalkoxycarbonyl oder Aroyloxyniederalkoxy ist insbesondere unsubstituiertes oder durch einen oder mehrere, z. B. 1-3, der untengenannten Arylsubstituenten substituiertes Phenyl oder Naphthyl, vorzugsweise unsubstituiertes Phenyl.Aryl as part of Arylniederalkoxy, Aryiniederalkoxycarbonyl or Aroyloxyniederalkoxy is especially unsubstituted or by one or more, for. 1-3, the below-mentioned aryl substituent substituted phenyl or naphthyl, preferably unsubstituted phenyl.
Arylsubstituenten sind insbesondere Niederalkyl, z. B. Methyl, Phenyl, Halogen, Hydroxy, Niederalkoxy, z. B. Methoxy, Niederalkanoyloxy, z. B. Acetoxy, Amino, Mono- oder Diniederalkylamino, z. B. Mono- oder Dimethylamine oder Niederalkänoylamino, z. B. Acetylamino.Aryl substituents are in particular lower alkyl, for. Methyl, phenyl, halo, hydroxy, lower alkoxy, e.g. Methoxy, lower alkanoyloxy, e.g. For example, acetoxy, amino, mono- or di-lower alkylamino, z. For example, mono- or dimethylamines or Niederalkänoylamino, z. B. acetylamino.
Arylniederalkoxy R9 und/oder R12 ist durch einen oder mehrere, z. B. 1-3, vorzugsweise 1 oder 2, Arylreste substituiertes Niederalkoxy, z. B. Arylmethoxy, wie insbesondere ßenzyloxy oder Benzhydryloxy.Arylniederalkoxy R 9 and / or R 12 is replaced by one or more, for. B. 1-3, preferably 1 or 2, aryl radicals substituted lower alkoxy, z. B. arylmethoxy, in particular ßenzyloxy or benzhydryloxy.
Aryiniederalkoxycarbonyl R10 ist durch einen oder mehrere, z.B. 1-3, vorzugsweise 1 oder 2, Arylreste substituiertes Niederalkoxycarbonyl, z. B. Arylmethoxycarbonyl, wie insbesondere Benzyloxycarbonyl oder Benzhydryloxycarbonyl.Aryl lower alkoxycarbonyl R 10 is substituted by one or more, for example 1-3, preferably 1 or 2, aryl substituted lower alkoxycarbonyl, z. B. arylmethoxycarbonyl, in particular benzyloxycarbonyl or benzhydryloxycarbonyl.
Niederalkoxycarbonyl R1C ist vorzugsweise Alkoxycarbonyl mit bis zu 5C-Atomen,-z. B. Methoxycarb.onyl, n-Butyloxycarbonyl oder tert. Butyloxycarbonyl.Lower alkoxycarbonyl R 1C is preferably alkoxycarbonyl having up to 5C atoms, -z. B. Methoxycarb.onyl, n-butyloxycarbonyl or tert. Butyloxycarbonyl.
Durch Amino oder Niederalkänoylamino substituiertes Niederalkyl R11 ist vorzugsweise 4-Amino-n-butyl oder 4-Niederalkanoylamino-n-butyl. Durch 2-Benzyloxycarbonylamino-ethyl-sulfinyl oder -sulfonyl oder durch 2-Niederalkoxycarbonylamino-ethyl-sulfinyl oder-sulfonyl substituiertes Niederalkyl R11 ist vorzugsweise entsprechend substituiertes Methyl, z. B. C6H5-CH2-O-Cl=O)-NH-CH2-CH2-Sf=O)-CH2-oder C6Hs-CH2-O-C(=)-NH-CH2-CH2-SO2-CH2--Durch Guanidino substituiertes Niederalkyl R11 ist vorzugsweise 3-Guanidino-n-propyl.Lower alkyl R 11 substituted by amino or lower alkanoylamino is preferably 4-amino-n-butyl or 4-lower alkanoylamino-n-butyl. By 2-benzyloxycarbonylamino-ethyl-sulfinyl or -sulfonyl or by 2-lower alkoxycarbonylamino-ethyl-sulfinyl or sulfonyl-substituted lower alkyl R 11 is preferably correspondingly substituted methyl, z. C 6 H 5 -CH 2 -O-Cl = O) -NH-CH 2 -CH 2 -Sf = O) -CH 2 or C 6 Hs-CH 2 -OC (=) - NH-CH 2 - CH 2 -SO 2 -CH 2 - Guanidino-substituted lower alkyl R 11 is preferably 3-guanidino-n-propyl.
Alkanoyloxyniederalkoxy R9I oder R12 ist insbesondere Niederalkanoyloxymethoxy, z. B. Pivaloyloxymethoxy.Alkanoyloxy lower alkoxy R 9 I or R 12 is especially lower alkanoyloxymethoxy, e.g. B. pivaloyloxymethoxy.
Aroyloxyniederalkoxy R9 oder R12 ist insbesondere Aroyloxymethoxy, z. B. Benzoyloxymethoxy.Aroyloxyniederalkoxy R 9 or R 12 is in particular aroyloxymethoxy, z. B. benzoyloxymethoxy.
Durch Hydroxy oder Niederalkanoyloxy substituiertes Niederalkyl R11 ist insbesondere entsprechend substituiertes Ci_2-Alkyl, z.B. Hydroxymethyl, 1-Hydroxy-ethyl, Niederalkanoyloxymethyl oder 1-Niederalkanoyloxy-ethyl.By hydroxy or lower alkanoyloxy substituted lower alkyl R 11 is in particular correspondingly substituted Ci_ 2 alkyl, for example hydroxymethyl, 1-hydroxy-ethyl, Niederalkanoyloxymethyl or 1-lower alkanoyloxy-ethyl.
3-Cholesteryloxy ist das durch Abstraktion von Wasserstoff von der Hydroxygruppe des Cholesterins gebildete Radikal.3-Cholesteryloxy is the radical formed by abstraction of hydrogen from the hydroxy group of cholesterol.
Die vor- und nachstehend verwendeten Allgemeinbegriffe haben vorzugsweise folgende Bedeutungen:The general terms used above and below preferably have the following meanings:
Das Präfix „Nieder" bezeichnet Reste bis und mit 7, insbesondere bis und mit 4, Kohlenstoffatomen.The prefix "lower" denotes radicals up to and including 7, in particular up to and including 4, carbon atoms.
Halogen ist insbesondere Chlor oder Brom, fern-er Fluor oder Iod.Halogen is especially chlorine or bromine, far-fluorine or iodine.
Salzbildende Gruppen in einer Verbindung der Formel I sind saure Gruppen, z. B. freie Carboxylgruppen, oder basische Gruppen,Salifying groups in a compound of formula I are acidic groups, e.g. Free carboxyl groups, or basic groups,
' wie insbesondere freie Amino- oder Guanidinogruppen. Verbindungen der Formel I, die eine Trimethylammoniogruppe aufweisen, liegen in Salzform vor. Je nach der Art der salzbildenden Gruppe bilden die Verbindungen der Formel I Metall- oder Ammoniumsalze oder Säureadditionssalze. Salze einer Verbindung der Formel I sind vorzugsweise pharmazeutisch verwendbar und nicht toxisch, z. B. Alkalimetall- oder Erdalkalimetallsalze, z. B. Natrium-, Kalium-, Magnesium- oder Calciumsalze, oder Salze mit Ammoniak oder geeigneten organischen Aminen, wobei in erster Linie aliphatische, cycloaliphatische, cycloaliphatischaliphatische oder araliphatische primäre, sekundäre oder tertiäre Mono-, Di- oder Polyamine, sowie heterocyclische Basen für die Salzbildung in Frage kommen, wie Niederalkylamine, z. B. Triethylamin, Hydroxyniederalkylamine, z. B. 2-Hydroxyethylamin, Bis-(2-hydroxyethyl)-amin, 2-Hydroxy-ethyl-diethyl-amin oder Tri-(2-hydroxyethyl)-amin, basische aliphatische Ester von Carbonsäuren, z. B. -l-Amino-benzoesäure^-diethylaminoethylester, Niederalkylenamine, z.B. 1-Ethylpiperidin, Cycloalkylamine, z. B. Dicyclohex'ylamin, oder Benzylamine, z. B. Ν,Ν'-Dibenzylethylendiamin, ferner Basen vom Pyridintyp, z. B. Pyridin, Collidin oder Chinoiin. Verbindungen der Formel I mit mindestens einer basischen Gruppe können Säureadditionssalze, z. B. mit anorganischen Säuren, wie Salzsäure, Schwefelsäure oder Phsophorsäure, oder mit geeigneten organischen Carbonoder Sulfonsäuren, z.B. Trifluoressigsäure, sowie mit Aminosäuren, wie Arginin und Lysin, bilden. Bei Anwesenheit von mehreren sauren oder basischen Gruppen können Mono- oder Polysalze gebildet werden. Verbindungen der Formel I mit einer sauren, z. B. freien Carboxylgruppe, und einer freien basischen, z.B. einer Aminogruppe, können auch in Form von inneren Salzen, d. h. in zwitterionischer Form vorliegen, oder es kann ein Teil des Moleküls als inneres Salz, und ein anderer Teil als normales Salz vorliegen.'Such as in particular free amino or guanidino. Compounds of the formula I which have a trimethylammonium group are in salt form. Depending on the nature of the salt-forming group, the compounds of the formula I form metal or ammonium salts or acid addition salts. Salts of a compound of formula I are preferably pharmaceutically acceptable and non-toxic, e.g. B. alkali metal or alkaline earth metal salts, for. As sodium, potassium, magnesium or calcium salts, or salts with ammonia or suitable organic amines, wherein primarily aliphatic, cycloaliphatic, cycloaliphatic-aliphatic or araliphatic primary, secondary or tertiary mono-, di- or polyamines, and heterocyclic bases for the salt formation come into question, such as lower alkylamines, z. Triethylamine, hydroxy-lower alkylamines, e.g. 2-hydroxyethylamine, bis (2-hydroxyethyl) amine, 2-hydroxyethyl-diethyl-amine or tri- (2-hydroxyethyl) -amine, basic aliphatic esters of carboxylic acids, e.g. For example, -l-aminobenzoic acid ^ -diethylaminoethyl ester, lower alkylene amines, e.g. 1-ethylpiperidine, cycloalkylamines, e.g. B. dicyclohex'ylamine, or benzylamines, eg. B. Ν, Ν'-dibenzylethylenediamine, also bases of the pyridine type, z. As pyridine, collidine or chinoiin. Compounds of formula I having at least one basic group can acid addition salts, for. With inorganic acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid or phosphoric acid, or with suitable organic carboxylic or sulfonic acids, e.g. Trifluoroacetic acid, as well as with amino acids such as arginine and lysine. In the presence of several acidic or basic groups, mono- or polysalts can be formed. Compounds of formula I with an acidic, z. Free carboxyl group, and a free basic, e.g. an amino group, may also be in the form of internal salts, i. H. in zwitterionic form, or it may be a part of the molecule as an inner salt, and another part as a normal salt.
Zur Isolierung oder Reinigung können auch pharmazeutisch ungeeignete Salze Verwendung finden. Zurtherapeutischen Anwendung gelangen jedoch nur die pharmazeutisch verwendbaren,-nicht-toxischen Salze, die deshalb bevorzugt werden. Erfindungsgemäß wurde überraschenderweise gefunden, daß die oben genannten Verbindungen der Formel I und ihreFor isolation or purification it is also possible to use pharmaceutically unsuitable salts. However, only the pharmaceutically acceptable, non-toxic salts, which are therefore preferred, are used for zosterapeutischen application. According to the invention, it has surprisingly been found that the abovementioned compounds of the formula I and their
' pharmazeutisch verwendbaren Salzesowohl zur Prophylaxe als auch zur Therapie von Virusinfektionen hervorragend geeignet sind, wie sich z. B. aus Tierversuchen, wie sie im Beispielteil exemplifiziert sind, ergibt. In diesen Tierversuchen werden Tiere, wie Mäuse oder Meerschweinchen, mit den verschiedensten Virusarten in einer Dosis, die für alle oder die große Mehrzahl der unbehandelten (Kontroll)-Tiere letal ist, z. B. LD3o_9o, infiziert und der Infektionsverlauf bei den unbehandelten Kontrolltieren im Vergleich zu Tieren beobachtet, die vor, gleichzeitig mit oder nach der Infektion mit einer der oben genannten Verbindungen oder einem Salz davon behandelt werden.'pharmaceutically acceptable salt are well suited both for the prophylaxis and for the treatment of viral infections, such as. B. from animal experiments, as exemplified in the example results. In these animal studies, animals, such as mice or guinea pigs, are infected with a variety of virus species in a dose that is lethal to all or the vast majority of untreated (control) animals, e.g. As LD 3o _ 9 o, infected and observed the course of infection in the untreated control animals compared to animals that are treated before, simultaneously or after infection with one of the above compounds or a salt thereof.
Dabei zeigt sich, daß ein prophylaktischer Effekt bei Verabreichung der Verbindungen der Formel! schon mehrere Tage bis zu einigen, z. B. vier Wochen vorder Infektion, und ein therapeutischer Effekt noch bei Verabreichung mehrere Tage, z. B. 1 Woche, nach der Infektion, eintritt.It shows that a prophylactic effect in administration of the compounds of formula! already several days to some, z. B. four weeks before infection, and a therapeutic effect even when administered several days, z. B. 1 week after the infection occurs.
Die Verbindungen der Formel I sind im oben genannten Test an der Maus bereits im Dosisbereich zwischen 0,0001 mg/kg und 0,1 mg/kg wirksam.The compounds of the formula I are effective in the abovementioned test on the mouse already in the dose range between 0.0001 mg / kg and 0.1 mg / kg.
Bemerkenswert ist auch das breite virale Spektrum, gegen das die obengenannten Verbindungen wirksam sind. Die Verbindungen der Formel I können insbesondere zur Prophylaxe und Therapie von Krankheiten verwendet werden, die durch die nachstehend näher bezeichneten Vi rerv hervorgerufen werden (zur Nomenklatur vgl. J. L. Melnick, Prog. med. Virol. 26, 214-232 [1980] und 28, 208-221 [1982]):Also noteworthy is the broad viral spectrum against which the above compounds are effective. The compounds of the formula I can be used, in particular, for the prophylaxis and treatment of diseases which are caused by the virus which is described in more detail below (for a nomenclature, see JL Melnick, Prog. Med. Virol., 26, 214-232 [1980] and 28 , 208-221 [1982]):
DNA-Viren mit kubischer Symmetrie und nacktem Nukleokapsid, DNA-Viren mit umhülltem Virion sowie RNA-Viren mit kubischer und solche mit helikaler Symmetrie des Kapsids.Cubic symmetry and naked nucleocapsid DNA viruses, enveloped virion DNA viruses, and cubic and capsid helical symmetry viruses.
Bevorzugterweise verwendet man die Verbindungen der Formel I im Falle von DNA-Viren mit umhülltem Virion und kubischer Symmetrie des Kapsids, im Falle von RNA-Viren mit kubischer Symmetrie des Kapsids und nacktem Virion und im Falle von RNA-Viren mit helikaler Symmetrie des Kapsids, in denen die Nukleokapsidhülle bei der Oberflächenmembran gelegen ist, aber auch im Falle von Adenoviridae, Poxviridae und Coronaviridae, wie insbesondere menschlichen Coronaviren. In erster Linie verwendet man die Verbindungen der Formel I im Falle von Herpesviridae, Picornaviridae und Myxoviren, aber auch im Falle von Mastadenoviren, wie insbesondere menschlichen Adenoviren, im Falle von Chordopoxvirinae, wie hauptsächlich Orthopoxviren, wie insbesondere z. B. Vacciniaviren, im Falle von Reoviridae, vornehmlich (insbesondere menschlichen) Rotaviren, sowie im Falle von Caliciviridae und Rhabdoviridae, wie in erster Linie Vesiculoviren des Menschen sowie von Pferden, Rindern und Schweinen.The compounds of the formula I are preferably used in the case of DNA viruses with enveloped virion and cubic symmetry of the capsid, in the case of RNA viruses with cubic symmetry of the capsid and naked virion and in the case of RNA viruses with a helical symmetry of the capsid, in which the nucleocapsid sheath is located at the surface membrane, but also in the case of Adenoviridae, Poxviridae and Coronaviridae, in particular human coronaviruses. In the first place, the compounds of the formula I are used in the case of Herpesviridae, Picornaviridae and Myxoviruses, but also in the case of mastadenoviruses, in particular human adenoviruses, in the case of Chordopoxvirinae, such as orthopoxviruses in particular z. As vaccinia viruses, in the case of Reoviridae, especially (especially human) rotavirus, as well as in the case of Caliciviridae and Rhabdoviridae, such as primarily vesiculoviruses in humans and horses, cattle and pigs.
Hauptsächlich verwendet man die Verbindungen der Formel I im Falle von Alphaherpesvirinae, wie Varicellaviren, z. B. menschlichen Varicella-Zoster-Viren, Rhinoviren, Cardioviren und Orthomyxoviridae, aber auch im Falle von Betaherpesvirinae, wie insbesondere menschlichen Cytomegaloviren, im Falle von Aphthoviren, in erster Linie Apthoviren von Paarhufern, wie hauptsächlich von Rindern, sowie im Falle von Paramyxoviridae, wie in erster Linie Pneumoviren, z. B. respiratorischen Syncitialviren des Menschen, und wie daneben Morbilliviren oder Paramyxoviren, wie Parainfluenzaviren, z. B. menschlichen Parainfluenzaviren, einschließlich der Sendaiviren sowie im Falle von Arboviren oder Vesiculoviren, z. B. Vesicular stomatitis Viren.Mainly used the compounds of formula I in the case of Alphaherpesvirinae, such as varicella viruses, z. Human varicella-zoster viruses, rhinoviruses, cardioviruses and orthomyxoviridae, but also in the case of betaherpesvirinae, in particular human cytomegaloviruses, in the case of aphthoviruses, primarily aupiviruses of ungulates, mainly of cattle, and in the case of paramyxoviridae, as primarily pneumoviruses, e.g. Human respiratory syncytial viruses, and, in addition, morbilliviruses or paramyxoviruses, such as parainfluenza viruses, e.g. Human parainfluenza viruses, including the Sendai viruses as well as in the case of arboviruses or vesiculoviruses, e.g. B. Vesicular stomatitis viruses.
In allererster Linie verwendet man die Verbindungen der Formel I im Falle von Simplexviren, z. B. menschlichen Herpes simplex Viren der Typen 1 und 2, im Falle von menschlichen Encephalomyocarditisviren, im Falle von Influenzaviren, wie hauptsächlich Influenza A und Influenza B Viren, im Falle von Vaccinia und Parainfluenza Viren und ganz besonders im Falle der in den Beispielen genannten Viren.First and foremost, the compounds of formula I are used in the case of simplex viruses, e.g. Human herpes simplex viruses of types 1 and 2, in the case of human encephalomyocarditis viruses, in the case of influenza viruses such as mainly influenza A and influenza B viruses, in the case of vaccinia and parainfluenza viruses, and more particularly in the case of the viruses mentioned in the examples ,
Die Verbindungen der Formel I können zur Prophylaxe und Therapie von Virusinfektionen, insbesondere bei Warmblütern einschließlich des Menschen, verwendet werden, indem man sie enteral oder parenteral, in erster Linie zusammen mit geeigneten Hi Ifs-oder Trägerstoffen, appliziert. Bevorzugterweise appliziert man sie auf die Schleimhaut, z.B. intranasal, rektal, vaginal oder auf die Bindehaut des Auges, oder oral. Der antivirale Effekt tritt jedoch auch bei Applikation auf anderen Wegen, z.B. subkutan, intravenös, intramuskulär oder bei Applikation auf die normale Haut ein.The compounds of the formula I can be used for the prophylaxis and therapy of viral infections, in particular in warm-blooded animals, including humans, by administering them enterally or parenterally, primarily together with suitable carriers or excipients. Preferably, they are applied to the mucosa, e.g. intranasally, rectally, vaginally or on the conjunctiva of the eye, or orally. However, the antiviral effect also occurs when applied by other routes, e.g. subcutaneously, intravenously, intramuscularly or when applied to normal skin.
Die Dosierung des Wirkstoffes hängt u.a. von der Warmblüterspezies, der Abwehrlage des Organismus, der Applikationsweise und der Art des Virus ab. Die Dosis-Wirkungsbeziehung ist relativ schwach ausgeprägt.The dosage of the active ingredient depends i.a. from the warm-blooded species, the defensive state of the organism, the mode of administration and the type of virus. The dose-response relationship is relatively weak.
Zur Vorbeugung appliziert man eine einmalige Dosis von etwa 0,01 mg bis etwa 10 mg, vorzugsweise 0,05 bis 1 mg, z.B. 0,2 mg, Wirkstoff an einen Warmblüter von etwa 70 kg Körpergewicht, z. B. den Menschen. Die prophylaktische Wirkung dieser Dosis erstreckt sich über mehrere Wochen. Bei Bedarf, z. B. in Zeiten erhöhter Ansteckungsgefahr, kann man die Verabreichung dieser Dosis wiederholen.For prevention, a single dose of about 0.01 mg to about 10 mg, preferably 0.05 to 1 mg, e.g. 0.2 mg, active ingredient to a warm-blooded animal of about 70 kg body weight, z. For example, humans. The prophylactic effect of this dose extends over several weeks. If necessary, z. As in times of increased risk of infection, one can repeat the administration of this dose.
Die therapeutische Dosis für Warmblüter von etwa 70 kg Körpergewicht liegt zwischen 0,1 mg und 25 mg, vorzugsweise zwischen 0,1 und 1 mg, ζ. B. bei 0,5 mg, insbesondere bei oraler Applikation. Die Dosierung bei topischer, insbesondere intranasaler Applikation, liegt bis zum Faktor 10 niedriger. Bei Bedarf kann man die Verabreichung der Verbindungen der Formel I bis zum Eintritt einer Besserung der Erkrankung wiederholen. Oft genügt jedoch eine einmalige Applikation.The therapeutic dose for warm-blooded animals of about 70 kg body weight is between 0.1 mg and 25 mg, preferably between 0.1 and 1 mg, ζ. B. at 0.5 mg, especially for oral administration. The dosage in topical, especially intranasal administration is lower by a factor of 10. If necessary, the administration of the compounds of formula I may be repeated until the onset of disease recovery. Often, however, a single application is sufficient.
Die Verbindungen der Formel I besitzen auße'rdem Antitumoreigenschaften. Diese beruhen auf ihrer Fähigkeit, z. B. inkorporiert in multilamellären Liposomen oder in phosphatgepufferter physiologischer Kochsalzlösung (PBS), Makrophagen derart zu aktivieren, daß diese körpereigenen Abwehrzellen in der Lage sind, Tumorzellen abzutöten (Zytotoxizität) oder an ihrem Wachstum zu hindern (Zytostase). Die Induktion tumorizide'r und tumoristatischer Alveolarmakrophagen der Ratte in vitro und in situ läßt sich z.B. mit folgendem Versuch zeigen:The compounds of formula I also have anti-tumor properties. These are based on their ability to As incorporated in multilamellar liposomes or in phosphate-buffered saline (PBS) to activate macrophages such that these body's defense cells are able to kill tumor cells (cytotoxicity) or to prevent their growth (cytostasis). The induction of tumoricidal and tumoristic alveolar macrophages of the rat in vitro and in situ can be determined e.g. show with the following experiment:
Alveolarmakrophagen werden durch Lungenspülung mit Kulturmedium erhalten. Diese Makrophagen werden entweder durch Injektion der Testsubstanzen in die Ratten (intravenös.oder intranasal, in situ-Aktivierung) oder durch eine 24stündige Vorinkubation mit einer Verbindung der Formel I im CGylnkubator (in vitro-Aktivierung) aktiviert. Die so aktivierten Makrophagen werden nun für weitere 72 Stunden mit Tumorzellen inkubiert.Alveolar macrophages are obtained by lung lavage with culture medium. These macrophages are activated either by injection of the test substances into the rats (intravenous or intranasal, in situ activation) or by preincubation for 24 hours with a compound of the formula I in the CGylncubator (in vitro activation). The thus activated macrophages are now incubated with tumor cells for a further 72 hours.
Um tumorizide Aktivitäten der Makrophagen zu messen, werden die Tumorzellen vor der 72-Stunden-lnkubation mit 125I-lododeoxyuridin markiert. Die nicht abgetöteten Tumorzellen können nach Wegwaschen der durch lysierte Tumorzellen freigewordenen Radioaktivität anhand der verbleibenden Radioaktivität gemessen werden.To measure tumoricidal activities of the macrophages, the tumor cells are labeled with 125 I-iododeoxyuridine before the 72 hour incubation. The non-killed tumor cells, after washing away the radioactivity released by lysed tumor cells, can be measured by residual radioactivity.
Um tumoristatische Aktivitäten der Makrophagen zu erfassen, wird den Kulturen 8 Stunden vordem Ende der 72-Stundenlnkubation 3H-Thymidin zugesetzt und danach die 3H-Thymidininkorporation in die Tumorzellen gemessen. In vitro können die Substanzen sowohl gelöst in PBS als auch inkorporiert in Liposomen bereits in Dosen von 20 Nanogramm/0,2ml Kultur tumorizide Ratten-Alveolarmakrophagen induzieren. Bei Ratten bewirkt eine einmalige intravenöse Applikation der Verbindungen inkorporiert in Liposomen bei einer Dosis von 160jLtg/Tier eine Induktion von tumoriziden und tumoristatischen Alveolarmakrophagen. Darüberhinaus bewirkt eine einmalige intranasale Applikation der S.ubstanzen in PBS bei einer Dosis von 25μg/Ratte die Induktion von tumoriziden Alveolarmakrophagen. ; ι "In order to detect tumoristatic activities of the macrophages, 3 H-thymidine is added to the cultures 8 hours before the end of the 72-hour incubation and thereafter the 3 H-thymidine incorporation into the tumor cells is measured. In vitro, the substances, both dissolved in PBS and incorporated into liposomes, can already induce tumoricidal rat alveolar macrophages at doses of 20 nanograms / 0.2 ml of culture. In rats, a single intravenous administration of the compounds incorporated into liposomes at a dose of 160 μl / animal causes induction of tumoricidal and tumoristatic alveolar macrophages. In addition, a single intranasal administration of the substances in PBS at a dose of 25 μg / rat causes the induction of tumoricidal alveolar macrophages. ; ι "
Die Verbindungen der Formel I können somit bei Warmblütern einschließlich des Menschen auch zur Therapie von Tumorerkrankungen verwendet werden, insbesondere z.B. zur Vermeidung der Bildung von Metastasen, z.B. bei operativer Entfernung des Primärtumors. " 'The compounds of the formula I can thus also be used in the treatment of tumor diseases in warm-blooded animals, including humans, in particular e.g. to prevent the formation of metastases, e.g. at surgical removal of the primary tumor. ''
Die Erfindung betrifft insbesondere solche Verbindungen der FormeJ I, worin sich der Hexoseteil von D-Glucose, D-Mannose oder D-Galactose ableitet, η für 0 oderr 1 steht, und R1, R4 und R5 unabhängig voneinander Niederalkanoyl oder Benzoyl, R2 Niederalkyl oder Phenyl, R3, R5 und R7 unabhängig voneinander Wasserstoff oder Niederalkyl, oder R5 mit R8 zusammen Trimethylen und R7 Wasserstoff, R8 Wasserstoff oder unsubstituiertes oder durch Phenyl, Hydroxy, Mercapto oder Niederalkylthio substituiertes Niederalkyl, R9 und R12 unabhängig voneinander Hydroxy, Amino, Ci_io-Alkoxy, Arylniederalkoxy, Alkanoyloxyniederalkoxy mit bis zu 16C-Atomen, Aroyloxyniederalkoxy oder 3-CholesterylOxy, R10 Wasserstoff, Carboxy, Niederalkoxycarbonyl oder Arylniederalkoxycarbonyl und R11 Wasserstoff oder unsubstituiertes oder durch Amino oder Hydroxy substituiertes Niederalkyl bedeuten, mit der Maßgabe, daß mindestens einer der Reste R9 und R12 von Hydroxy, Amino und Ci_7-Alkoxy oder R10 von Wasserstoff, Carboxy und Alkoxycarbonyl mit bis zu 7 C-Atomen im Alkoxyteil verschieden ist, und Salze von solchen Verbindungen mit mindestens einer salzbildenden Gruppe.The invention relates in particular to those compounds of the formula I in which the hexose part is derived from D-glucose, D-mannose or D-galactose, η is 0 or 1 and R 1 , R 4 and R 5 are independently lower alkanoyl or benzoyl, R 2 is lower alkyl or phenyl, R 3 , R 5 and R 7 are, independently of one another, hydrogen or lower alkyl, or R 5 is R 8 together with trimethylene and R 7 is hydrogen, R 8 is hydrogen or lower-alkyl which is unsubstituted or substituted by phenyl, hydroxyl, mercapto or lower alkylthio, R 9 and R 12 are independently hydroxy, amino, Ci_io-alkoxy, Arylniederalkoxy, Alkanoyloxyniederalkoxy with up to 16C atoms, Aroyloxyniederalkoxy or 3-CholesterylOxy, R 10 is hydrogen, carboxy, lower alkoxycarbonyl or Arylniederalkoxycarbonyl and R 11 is hydrogen or unsubstituted or by amino or Hydroxy-substituted lower alkyl, with the proviso that at least one of R 9 and R 12 of hydroxy, amino and Ci_ 7 alkoxy or R 10 is different from hydrogen, carboxy and alkoxycarbonyl having up to 7 C atoms in the alkoxy part, and salts of such compounds having at least one salt-forming group.
Bevorzugt sind die obengenannten Verbindungen der Formel I, worin R9 und R12 unabhängig voneinander Hydroxy, Amino, Ci_10-Alkoxy, Alkanoyloxyniederalkoxy mit bis zu 16 C-Atomen, 3-Cholesteryloxy oder im Phenylteil jeweils unsubstituiertes oder durch Niederalkyl,z. B. Methyl, Phenyl, Halogen, Hydroxy, Niederalkoxy,z. B. Methoxy, Niederalkanoyloxy,z. B. Acetoxy, Amino, Mono-oder Diniederalkylamino, z.B. Mono- oder Dimethylamino, oder Niederalkanoylamino, z.B. Acetylamino, substituiertes Phenyl- oder Benzoyloxy-niederalkoxy, und R10 Wasserstoff, Carboxy, Niederalkoxycarbonyl oder im Phenylteil unsubstituiertes oder durch Niederalkyl, z. B. Methyl, Phenyl, Halogen, Hydroxy, Niederalkoxy, z. B. Methoxy, Niederalkanoyloxy, z. B. Acetoxy, Amino, Mono- oder Diniederalkylamino, z. B. Mono- oder Dimethylamino, oder Niederalkanoylamino, z. B. Acetylamino, substituiertes Phenylniederalkoxycarbonyl bedeuten, und die übrigen Substituenten die obengenannten Bedeutungen haben, mit der Maßgabe, daß mindestens einer der Reste R9 und R12 von Hydroxy, Amino und NiederalkoxY oder R10 von Wasserstoff, Carboxy und Niederalkoxycarbonyl verschieden ist, und Salze von solchen Verbindungen mit mindestens einer salzbildenden Gruppe.The above-mentioned compounds of formula I, wherein R 9 and R 12 are independently hydroxy, amino, CI_ 10 alkoxy, Alkanoyloxyniederalkoxy having up to 16 carbon atoms, 3-cholesteryloxy or in each case unsubstituted or in the phenyl moiety by lower alkyl, such being preferred. Methyl, phenyl, halo, hydroxy, lower alkoxy, e.g. Methoxy, lower alkanoyloxy, e.g. For example, acetoxy, amino, mono- or di-lower alkylamino, for example mono- or dimethylamino, or lower alkanoylamino, for example acetylamino, substituted phenyl or benzoyloxy-lower alkoxy, and R 10 is hydrogen, carboxy, lower alkoxycarbonyl or unsubstituted in the phenyl or by lower alkyl, z. Methyl, phenyl, halo, hydroxy, lower alkoxy, e.g. Methoxy, lower alkanoyloxy, e.g. For example, acetoxy, amino, mono- or di-lower alkylamino, z. For example, mono- or dimethylamino, or lower alkanoylamino, e.g. Acetylamino, substituted phenyl-lower alkoxycarbonyl, and the remaining substituents have the abovementioned meanings, with the proviso that at least one of R 9 and R 12 of hydroxy, amino and NiederalkoxY or R 10 is different from hydrogen, carboxy and lower alkoxycarbonyl, and Salts of such compounds having at least one salt-forming group.
Besonders bevorzugt sind Verbindungen der Formel I, worin sich der Hexoseteil von D-Glucose oder D-Mannose ableitet, η für 0 oder 1 steht, R1, R4 und R6 unabhängig voneinander C2^-Alkanoyl oder Benzoyl, R2 C^-Alky! oder Phenyl, R3, R5 und R7 unabhängig voneinander Wasserstoff oder Methyl, oder Rs mit R8 zusammen Trimethylen und R7 Wasserstoff, R8 Wasserstoff, C-i^-Alkyl oder durch Phenyl, Hydroxy, Mercapto oder Methylthio substituiertes C^-Alkyl, Rs und R12 unabhängig voneinander Hydroxy, Amino, Niederalkoxy, Phenylniederalkoxy, Niederalkanoyloxyniederalkoxy, Benzoyloxyniederalkoxy oder 3-Cholesteryloxy, R10 Wasserstoff, Carboxy, Niederalkoxycarbonyl oder Phenylniederalkoxycarbonyl und R11 Wasserstoff oder unsubstituiertes oder durch Amino oder Hydroxy substituiertes C^-Alkyl bedeuten, mit der Maßgabe, daß mindestens einer der Reste R9 und R12 von Hydroxy, Amino und Niederalkoxy oder R10 von Wasserstoff, Carboxy und Niederalkoxycarbonyl . verschieden ist, und Salze von solchen Verbindungen mit mindestens einer salzbildenden Gruppe.Particular preference is given to compounds of the formula I in which the hexose part is derived from D-glucose or D-mannose, η is 0 or 1, R 1 , R 4 and R 6 independently of one another are C 2 -alkanoyl or benzoyl, R 2 C ^ -Alky! or phenyl, R 3 , R 5 and R 7 independently of one another are hydrogen or methyl, or R s with R 8 together are trimethylene and R 7 is hydrogen, R 8 is hydrogen, C 1-4 -alkyl or C 1 -C 4 -substituted by phenyl, hydroxyl, mercapto or methylthio Alkyl, R s and R 12 are each independently of one another hydroxy, amino, lower alkoxy, phenyl-lower alkoxy, lower alkanoyloxy-lower alkoxy, benzyloxy-lower alkoxy or 3-cholesteryloxy, R 10 is hydrogen, carboxy, lower alkoxycarbonyl or phenyl-lower alkoxycarbonyl and R 11 is hydrogen or unsubstituted or amino- or hydroxy-substituted C 1 - Alkyl, with the proviso that at least one of R 9 and R 12 of hydroxy, amino and lower alkoxy or R 10 of hydrogen, carboxy and lower alkoxycarbonyl. is different, and salts of such compounds having at least one salt-forming group.
Sehr bevorzugt sind Verbindungen der Formel I, worin sich der Hexoseteil von D-Glucose oder D-Mannose ableitet, η für 0 oder 1 steht, R1, R4 und R6 unabhängig voneinander C2-4-Alkanoyl oder Benzoyl, R2 Ci_2-Alkyl oder Phenyl, R3, R5 und R7 unabhängig voneinander Wasserstoff oder Methyl, R8 C-^-Alkyl, R9 und R12 unabhängig voneinander Hydroxy, Amino, C1^-AIkOXy, Phenylmethoxy, Niederalkanoyloxymethoxy, Benzoyloxymethoxy oder 3-Cholesteryloxy, R10 Wasserstoff, Carboxy, Alkoxycarbonyl mit bis zu 5C-Atomen oder Phenylmethoxycarbonyl und R11 Ci-4-Alkyl bedeuten, mit der Maßgabe, daß mindestens einer der Reste R9 und R12 von Hydroxy, Amino und C-4-Alkoxy oder R10 von Wasserstoff, Carboxy und Alkoxycarbonyl mit bis zu 5C-Atomen verschieden ist, und Salze von solchen Verbindungen mit mindestens einer salzbildenden Gruppe. Ganz besonders bevorzugt sind Verbindungen der Formel I, worin sich der Hexoseteil von D-Glucose ableitet, η für 0 oder 1 steht, R1, R4 und R6 Acetyl oder Butyryl, R2 d_2-Alkyl oder Phenyl, R3 Wasserstoff oder Methyl, R5 und R7 Wasserstoff, R8 C^-Alkyl, R9 Amino, C1^-AIkOXy, Pivaloyloxymethoxy oder Mono-oder Diphenylmethoxy, R10 Wasserstoff, R11 Methyl und R12 Mono-oder Diphenylmethoxy oder 3-Cholesteryloxy bedeuten.Very particular preference is given to compounds of the formula I in which the hexose part is derived from D-glucose or D-mannose, η is 0 or 1, R 1 , R 4 and R 6 independently of one another are C 2 -4-alkanoyl or benzoyl, R 2 Ci_2-alkyl or phenyl, R 3 , R 5 and R 7 are independently hydrogen or methyl, R 8 C - ^ - alkyl, R 9 and R 12 are independently hydroxy, amino, C 1 ^ -alkoxy, phenylmethoxy, lower alkanoyloxymethoxy, benzoyloxymethoxy or 3-cholesteryloxy, R 10 is hydrogen, carboxy, alkoxycarbonyl having up to 5C atoms or phenylmethoxycarbonyl and R 11 is Ci-4-alkyl, with the proviso that at least one of R 9 and R 12 of hydroxy, amino and C 4-alkoxy or R 10 is different from hydrogen, carboxy and alkoxycarbonyl having up to 5C atoms, and salts of such compounds having at least one salt-forming group. Very particular preference is given to compounds of the formula I in which the hexose part is derived from D-glucose, η is 0 or 1, R 1 , R 4 and R 6 are acetyl or butyryl, R 2 is d_ 2 -alkyl or phenyl, R 3 is hydrogen or methyl, R 5 and R 7 is hydrogen, R 8 is C ^ alkyl, R 9 is amino, C 1 ^ -alkoxy, Pivaloyloxymethoxy or mono or diphenylmethoxy, R 10 is hydrogen, R 11 is methyl and R 12 mono- or diphenylmethoxy or 3 -Cholesteryloxy mean.
Ganz besonders bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel I, worin sich der Hexoseteil von D-Glucose ableitet, η für 0 oder 1 steht, R1, R4 und R6 C2_6-Alkanoyl, R2 CM-Alkyl oder Phenyl, R3, R5 und R7 unabhängig voneinander Wasserstoff oder Methyl, R8 C!_4-Alkyl, R9 Amino, Niederalkoxy, Pivaloyloxymethoxy, Diphenylmethoxy, Benzyloxy oder 2-Trimethylammonio-ethoxy, R10 Very particular preference is also given to compounds of the formula I in which the hexose moiety is derived from D-glucose, η is 0 or 1, R 1 , R 4 and R 6 are C 2 -6-alkanoyl, R 2 is C M -alkyl or phenyl, R 3 , R 5 and R 7 are independently hydrogen or methyl, R 8 is C 1-4 alkyl, R 9 is amino, lower alkoxy, pivaloyloxymethoxy, diphenylmethoxy, benzyloxy or 2-trimethylammonioethoxy, R 10
Wasserstoff oder Niederalkoxycarbonyl, R11 C-^-Alkyl, Niederalkanoyloxymethyl oder (2-Benzyloxycarbonylamino-ethyl)-sulfonyl-methyl und R12 Amino, Niederalkoxy, Pivaloyloxymethoxy, Diphenylmethoxy, Benzyloxy, 2-Trimethylammonioethoxy, 3-Cholesteryloxy oder Benzoylbxymethoxy bedeuten, mit der Maßgabe, das mindestens einer der Reste R9 und R12 von Amino und Niederalkoxy verschieden ist, und Salze von solchen zur Salzbildung fähigen Verbindungen.R 12 is C 1-8 alkyl, lower alkanoyloxymethyl or (2-benzyloxycarbonylaminoethyl) sulfonylmethyl and R 12 is amino, lower alkoxy, pivaloyloxymethoxy, diphenylmethoxy, benzyloxy, 2-trimethylammonioethoxy, 3-cholesteryloxy or benzoylbxymethoxy, with the proviso that at least one of R 9 and R 12 is other than amino and lower alkoxy, and salts of such salt-forming compounds.
Ganz besonders bevorzugt sind vor allem Verbindungen der Formel I, worin mindestens einer der Reste R9 und R12 für Pivaloyloxymethoxy, Diphenylmethoxy, Benzyloxy, 2-Trimethylammonio-ethoxy, 3-Cholesteryloxy oder Benzoyloxymethoxy steht und der andere der Reste R9 und R12 die obengenannte Bedeutung hat, und Salze von solchen zur Salzbildung fähigen Verbindungen.Very particular preference is given in particular to compounds of the formula I in which at least one of the radicals R 9 and R 12 is pivaloyloxymethoxy, diphenylmethoxy, benzyloxy, 2-trimethylammonioethoxy, 3-cholesteryloxy or benzoyloxymethoxy and the other of the radicals R 9 and R 12 has the abovementioned meaning, and salts of such salt-forming compounds.
Am meisten bevorzugt sind die in den Beispielen beschriebenen Verbindungen der Formel I.Most preferred are the compounds of formula I described in the Examples.
Die Verbindungen der Formel I werden in an sich bekannter Weise hergestellt:The compounds of the formula I are prepared in a manner known per se:
Sie werden z. B. hergestellt, indem manThey are z. B. prepared by
A) eine Verbindung der Formel II,A) a compound of formula II,
CH2OR6 a CH 2 OR 6 a
n/vw\^QP_*n / vw \ ^ * QP_
•χί /• χί /
"1NH-R23 " 1 NH-R 23
R3 -CH (D)R 3 -CH (D)
7 8 T Γ 7 8 T Γ
-C—NH—CH—CH2—CH—Q- 5 R8 (D)-C-NH-CH-CH 2 -CH- Q- 5 R 8 (D)
(L)(L)
NH—CfNH Cf
[—C- NH—CEi—C-[-C-NH-CEi-C-
R12ηR 12 η
worin mindestens einer der Reste R1', R2', R4' und R6afür Wasserstoff steht und die übrigen dieser Reste die Bedeutungen von R1, der Gruppe R2-C(=O)-, R4 bzw. R6 haben, und die restlichen Substituenten die obengenannten Bedeutungen haben, wobei in einer Verbindung der Formel Il vorhandene freie funktioneile Gruppen mit Ausnahme der Gruppen, die an der Reaktion teilnehmen sollen, erforderlichenfalls durch leicht abspaltbare Schutzgruppen geschützt sind, mit einem den einzuführenden Rest R1, R2-C(=O)-, R4 oder R6 übertragenden Acylierungsmittel umsetzt und vorhandene Schutzgruppen erforderlichenfalls abspaltet, oder, b) eine Verbindung der Formel III,wherein at least one of the radicals R 1 ', R 2 ', R 4 'and R 6a is hydrogen and the remaining of these radicals are the meanings of R 1 , the group R 2 -C (= O) -, R 4 and R, respectively 6 , and the remaining substituents have the abovementioned meanings, wherein in a compound of formula II existing free functional groups, with the exception of the groups to participate in the reaction, if necessary protected by easily cleavable protecting groups, with a R 1 to be introduced , R 2 -C (= O) -, R 4 or R 6 reacting transferring acylating agent and eliminates any necessary protective groups, or, b) a compound of formula III,
CH2OR6 CH 2 OR 6
\Γ\ Γ
worin die Substituenten die obengenannten Bedeutungen haben, oder ein reaktionsfähiges Derivat davon mit einer Verbindung der Formel IV,wherein the substituents have the abovementioned meanings, or a reactive derivative thereof with a compound of the formula IV,
R9 .0R9 .0
f ? Sf? S
X-CH—C—N—C—€—NH—CH— R3 δX-CH-C-N-C- € -NH-CH- R 3 δ
Et5 R8 (L)Et 5 R 8 (L)
R1OR 1 O
CH2—CH—C-(D) öCH 2 -CH-C- (D) ö
NH—CH-C-NH-CH-C
R1 R 1
worin X eine reaktionsfähige veresterte Hydroxygruppe bedeutet, und die restlichen Substituenten die obengenannten Bedeutungen haben, wobei in einer Verbindung der Formel IV vorhandene freie funktioneile Gruppen mit Ausnahme von X erforderlichenfalls durch leicht abspaltbare Schutzgruppen geschützt sind, umsetzt und vorhandene Schutzgruppen erforderlichenfalls abspaltet, oder c) eine Verbindung der Formel V,wherein X is a reactive esterified hydroxy group, and the remaining substituents have the abovementioned meanings, which are protected in a compound of formula IV free functional groups with the exception of X if necessary protected by readily cleavable protecting groups, reacting and releasing existing protecting groups if necessary, or c) a compound of the formula V,
OHOH
worin q, r, s und t unabhängig voneinander für 0 oder 1 stehen und worin die Substituenten die obengenannten Bedeutungen haben, wobei in einer Verbindung der Formel V vorhandene freie funktionell Gruppen mit Ausnahme der Gruppe, die an der Reaktion teilnehmen soll, erforderlichenfalls durch leicht abspaltbare Schutzgruppen geschützt sind, oder ein reaktionsfähiges Carbonsäurederivat davon mit einer Verbindung der Formel Vl,wherein q, r, s and t are independently 0 or 1 and wherein the substituents have the abovementioned meanings, wherein in a compound of formula V existing free functional groups with the exception of the group to participate in the reaction, if necessary by light cleavable protecting groups are protected, or a reactive carboxylic acid derivative thereof with a compound of formula Vl,
;H—CH2-H-CH 2 -
NH-NH-
1JH—C- 1 JH-C
R12 R 12
fvfv
worin u, ν und. χ unabhängig voneinander für 0 oder 1 stehen und die übrigen Symbole und Substituenten die obengenannten Bedeutungen haben, wobei in einer Verbindung der Formel Vl vorhandene freie funktionelle Gruppen mit Ausnahme der Gruppe, die an der Reaktion teilnehmen soll, erforderlichenfalls durch leicht abspaltbare Schutzgruppen geschützt sind, wobei u, ν und χ für 1 stehen, wenn im Reaktionspartner der Formel Vq und tfür Ostehen, oder u für 0 und ν und χ für 1 stehen, wenn q für 1 und tfür Ostehen, oder u und vfürO und χ für 1 stehen,wenn q, rund tfür 1 und sfür 0 stehen oder (zur Herstellung von Verbindungen der Formel I, worin η für 1 steht) u und χ für 0 stehen, wenn q, r, s und t für 1 stehen, oder mit einem · reaktionsfähigen Derivat davon umsetzt und vorhandene Schutzgruppen erforderlichenfalls abspaltet, oder d) zur Herstellung einer Verbindung der Formel !,worin R9 eine der obengenannten Bedeutungen außer Hydroxy und Amino hat und/oder R10für Niederalkoxycarbonyl oder Arylniederalkoxycarbonyl steht und die übrigen Substituenten die obengenannten Bedeutungen haben, eine Verbindung der Formel VII,where u, ν and. χ independently of one another represent 0 or 1 and the other symbols and substituents have the abovementioned meanings, wherein, if necessary, free functional groups present in a compound of formula VI are protected by easily removable protective groups, with the exception of the group which is to take part in the reaction; where u, ν and χ are 1, if in the reactant of formula Vq and t are O, or u is 0 and ν and χ is 1, if q is 1 and t is O, or u and v are O and χ is 1, when q, round t is 1 and s is 0 or (for the preparation of compounds of formula I wherein η is 1) u and χ are 0 when q, r, s and t are 1, or with a reactive one Or d) for the preparation of a compound of formula! Wherein R 9 has one of the above meanings except hydroxy and amino and / or R 10 for lower alcohol xycarbonyl or aryl-lower alkoxycarbonyl and the remaining substituents have the abovementioned meanings, a compound of the formula VII,
CH2OR6 . CH 2 OR 6 .
xl /xl /
R3-R 3 -
1NH-C-R2 1 NH-CR 2
ί—CH—CH2-(D)ί-CH-CH 2 - (D)
NH-NH-
_»n γ/—_ »N γ / -
R12ηR 12 η
worin mindestens einer der Reste R1Oa) und R13 für Carboxy steht und der andere der Reste R1Oa und R13 die obengenannte Bedeutung von R10 beziehungsweise von der Gruppe R9-C(=O)-hat, und worin die übrigen Substituenten die obengenannten Bedeutungen haben, wobei in einer Verbindung der Formel VII vorhandene freie funktionell Gruppen mit Ausnahme der Gruppen, die an der Reaktion teilnehmen sollen, erforderlichenfalls durch leicht abspaltbare Schutzgruppen geschützt sind, oder ein reaktionsfähiges Carbonsäurederivat davon verestert und vorhandene Schutzgruppen erforderlichenfalls abspaltet, oderwherein at least one of R 10a ) and R 13 is carboxy and the other of R 10a and R 13 has the abovementioned meaning of R 10 or of the group R 9 -C (= O) -hat, and in which the other substituents have the abovementioned meanings, free functional groups present in a compound of the formula VII, with the exception of the groups which are to participate in the reaction, being protected by readily cleavable protective groups if necessary, or esterifying a reactive carboxylic acid derivative thereof and eliminating protective groups present if necessary, or
e) in einer Verbindung der Formel I, worin mindestens einer der Reste R8, C(=O)-R9, R10, R11 und Cf=O)-R12 in einer geschützten ' Form vorliegt, die nicht der Definition des gewünschten Endstoffes entspricht, die entsprechende(n) Schutzgruppe(n) abspaltet, odere) in a compound of formula I wherein at least one of R 8 , C (= O) -R 9 , R 10 , R 11 and C f = O) -R 12 is in a protected form other than that defined corresponds to the desired end product, the corresponding protective group (s) splits off, or
f) zur Herstellung einer Verbindung der Formel I, worin R9 Amino bedeutet und die übrigen Substituenten die obengenannten Bedeutungen haben, eine Verbindung der Formel VIII,f) for preparing a compound of the formula I in which R 9 is amino and the other substituents have the abovementioned meanings, a compound of the formula VIII
;— Ν— C—C—NH- CH—CH z - Ν- C-C-NH-CH-CH z
R3-^ (D)R 3 - ^ (D)
R11 R 11
H-C-H-C
NH-CH—C-NH-CH-C
(D(D
worin der Rest R14für Carboxy steht und die übrigen Substituenten die obengenannten Bedeutungen haben, wobei in einer Verbindung der Formel VIII vorhandene freie funktioneile Gruppen mit Ausnahme der Gruppen, die an der Reaktion teilnehmen sollen, erforderlichenfalls durch leicht abspaltbare Schutzgruppen geschützt sind, oder ein reaktionsfähiges Carbonsäurederivat davon amidiert und vorhandene Schutzgruppen erforderlichenfalls abspaltet, und, wenn erwünscht, nach Durchführung eines der Verfahren a-f) eine erhaltene Verbindung der Formel I mit mindestens einer salzbildenden Gruppe in ihr Salz überführtroder ein erhaltenes Salz einer Verbindung der Formel I in die freie Verbindung umwandelt, und/oder ein erhaltenes Isomerengemisch auftrennt.wherein the radical R 14 is carboxy and the remaining substituents have the abovementioned meanings, wherein in a compound of the formula VIII existing free functional groups, except for the groups to participate in the reaction, if necessary, are protected by readily cleavable protecting groups, or reactive carboxylic acid derivative thereof and eliminating protective groups present if necessary, and, if desired, after carrying out one of the processes af) converting a compound of formula I obtained with at least one salt-forming group into its salt or converting a salt of a compound of formula I obtained into the free compound , and / or a mixture of isomers obtained separates.
Bevorzugt sind die Verfahren a, c, d und e, ferner Verfahren f.Preference is given to the processes a, c, d and e, furthermore process f.
Die Durchführung der obengenannten Verfahrensvarianten wird im folgenden näher erläutert: Verfahrene:The implementation of the abovementioned process variants is explained in more detail below: Process:
Bevorzugterweise wird Verfahren a) zur Einführung eines Acylrestes R1, R4 und/oder R6 verwendet. Dabei geht man vorzugsweise von Verbindungen der Formel Il aus, worin der Rest R2a für die Gruppe R2-C( = O) steht. In einer Verbindung der Formel Il gegebenenfalls vorhandene freie funktioneile Gruppen, die vorzugsweise durch leicht abspaltbare Schutzgruppen geschützt werden, sind insbesondere freies Hydroxy oder Mercapto im Rest R8, freies Carboxy R9-C(=O)-, R10oder R12-C(=O)- sowie freies Amino, Hydroxy oder Guanidino im Rest R11. Fakultativ ist der Schutz von freiem Carbamoyl R9-C( = O)- oder R12-C(=O)-.Preferably, method a) is used to introduce an acyl radical R 1 , R 4 and / or R 6 . In this case, preference is given to compounds of the formula II, in which the radical R 2a is the group R 2 -C (= O). In a compound of the formula II optionally present free functional groups, which are preferably protected by readily removable protective groups, are in particular free hydroxy or mercapto in the radical R 8 , free carboxy R 9 -C (= O) -, R 10 or R 12 - C (= O) - and free amino, hydroxy or guanidino in the radical R 11 . Optional is the protection of free carbamoyl R 9 -C (= O) - or R 12 -C (= O) -.
Schutzgruppen, ihre Einführung und Abspaltung sind beispielsweise beschrieben in „Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London, New York 1973, und in „Methoden der organischen Chemie", Houben-Weyl, 4. Auflage, Bd. 15/1, Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart 1974 sowie in Theodora W. Greene, „Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York 1981. Charakteristisch für Schutzgruppen ist, daß sie leicht, d. h. ohne daß unerwünschte Nebenreaktionen stattfinden, z. B. solvolytisch, reduktiv, photolytisch oder auch unter physiologischen Bedingungen abspaltbar sind.Protecting groups, their introduction and cleavage are described for example in "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London, New York 1973, and in "Methods of Organic Chemistry", Houben-Weyl, 4th Edition, Vol. 15/1, Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart 1974 and in Theodora W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York 1981. It is characteristic of protecting groups that they are easily, i. H. without unwanted side reactions take place, for. B. solvolytic, reductive, photolytic or cleavable under physiological conditions.
Hydroxyschutzgruppen sind z.B. Acylreste, wie gegebenenfalls, z.B. durch Halogen, substituiertes Niederalkanoyl, wie 2,2-Dichloracetyl,oder Acylreste von Kohlensäurehalbestern, insbesondere tert.-Butyloxycarbonyl, gegebenenfalls substituiertes Benzyloxycarbonyl, z. B. 4-Nitro-benzyloxycarbonyl, oder Diphenylmethoxycarbonyl, oder 2-Halogen-niederalkoxycarbonyl, wie 2,2,2-Trichlorethoxycarbonyl, ferner Trityl oder Formyl, oder organische SiIyI- oder Stannylreste, ferner leicht abspaltbare verethernde Gruppen, wie tert.-Niederalkyl, z. B. tert.-Butyl, 2-oxa- oder 2-thia-aliphatische oder cycloaliphatische Kohlenwasserstoffreste, in erster Linie 1-Niederalkoxyniederalkyl oder 1-Niederalkylthio-niederalkyl, z. B. Methoxymethyl, 1-Methoxy-ethyl, 1-Ethoxy-ethyl, Methylthiomethyl, 1-Methylthioethyl oder 1-Ethylthioethyl, oder 2-Oxa- oder2-Thiacycloalkyl mit 5-6 Ringatomen, z. B. Tetrahydrofuryl oder 2-Tetrahydropyranyl oder entsprechende Thiaanaloge, sowie gegebenenfalls substituiertes 1-Phenylniederalkyl, wie gegebenenfalls substituiertes Benzyl oder Diphenylmethyl, wobei als Substituenten der Phenylreste z. B. Halogen, wie Chlor, Niederalkoxy, wie Methoxy und/oder Nitro in Frage kommen. Carboxylgruppen sind üblicherweise in veresterter Form geschützt, wobei solche Estergruppierungen unter schonenden Bedingungen leicht spaltbar sind. In dieser Art geschützte Carboxylgruppen enthalten als veresternde Gruppen in erster Linie in 1-Stellung verzweigte oder in 1-oder2-Stellung geeignet substituierte Niederalkylgruppen. Bevorzugte, in veresterter Form vorliegende Carboxylgruppen sind u.a. tert.-Niederalkoxycarbonyl, z. B. tert.-Butyloxycarbonyl, Arylmethoxycarbonyl mit einem oder zwei Arylresten, wobei diese gegebenenfalls z. B. durch Niederalkyl, wie tert.-Niederalkyl, z. B. tert.-Butyl, Niederalkoxy, wie Methoxy, Hydroxy, Halogen, z. B. Chlor, und/oder Nitro, mono- oder polysubstituierte Phenylreste darstellen, wie gegebenenfalls, z. B. wie oben erwähnt, substituiertes Benzyloxycarbonyl, z. B. 4-Methoxybenzyloxycarbony.l, oder 4-Nitrobenzyloxycarbonyl, oder gegebenenfalls, z. B. wie oben erwähnt, substituiertes Diphenylmethoxycarbonyl, z. B. Diphenylmethoxycarbonyl oder Di-(4-methoxyphenyl)-methoxycarbonyl, 1-Niederalkoxyniederalkoxycarbonyl, wie Methoxymethoxycarbonyl, 1-Methoxyethoxycarbonyl oder 1-Ethoxymethoxycarbonyl, 1-Niederalkylthioniederalkoxycarbonyl, wie 1-Methylthiomethoxycarbonyl oder 1-Ethylthioethoxycarbonyl, Aroylmethoxycarbonyl, worin die Aroylgruppe gegebenenfalls, z. B. Halogen, wie Brom, substituiertes Benzoyl darstellt, z. B. Phenacyloxycarbonyl, 2-Halogenniederalkoxycarbonyl, z. B. 2,2,2-Trichlorethoxycarbonyl, 2-Bromethoxycarbonyl oder 2-lodethoxycarbonyl, oder 2-(trisubstituiertes Silyl)-ethoxycarbonyl, worin die Substituenten unabhängig voneinander je einen gegebenenfalls substituierten, z. B. durch Niederalkyl, Niederalkoxy, Aryl, Halogen, und/oder Nitro substituierten, aliphatischen, araliphatischen, cycloaliphatischen oder aromatischen Kohlenwasserstoffrest, wie entsprechendes, gegebenenfalls substituiertes Niederalkyl, Phenylniederalkyl, Cycloalkyl oder Phenyl, bedeuten, z. B. 2-Triniederalkylsilylethoxycarbonyl, 2-Trimethylsilylethoxycarbonyl oder 2-(Di-n-butyl-methyl-silyl)-ethoxycarbonyl, oder 2-Triarylsilylethoxycarbonyl, wie 2-Triphenylsilylethoxycarbonyl. Die oben und im folgenden erwähnten organischen SiIyI- oder Stannylreste enthalten vorzugsweise Niederalkyl, insbesondere Methyl, als Substituenten der Silizium-oder Zinn-Atome. Entsprechende SiIyI-oder Stannylgruppen sind in erster Linie Triniederalkylsilyl, insbesondere Trimethylsilyl, ferner Dimethyl-tert.-butyl-silyl, oder entsprechend substituiertes Stannyl, ζ. Β. Tri-n-butylstannyl.Hydroxy protecting groups are e.g. Acyl radicals, as appropriate, e.g. by halogen, substituted lower alkanoyl, such as 2,2-dichloroacetyl, or acyl radicals of carbonic monoesters, especially tert-butyloxycarbonyl, optionally substituted benzyloxycarbonyl, e.g. 4-nitrobenzyloxycarbonyl, or diphenylmethoxycarbonyl, or 2-halo-lower alkoxycarbonyl, such as 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl, also trityl or formyl, or organic silyl or stannyl radicals, and also readily cleavable etherifying groups, such as tert-lower alkyl , z. For example, tert-butyl, 2-oxa or 2-thia-aliphatic or cycloaliphatic hydrocarbon radicals, primarily 1-Niederalkoxyniederalkyl or 1-lower alkylthio-lower alkyl, z. Methoxymethyl, 1-methoxyethyl, 1-ethoxyethyl, methylthiomethyl, 1-methylthioethyl or 1-ethylthioethyl, or 2-oxa or 2-thiacycloalkyl having 5-6 ring atoms, e.g. As tetrahydrofuryl or 2-tetrahydropyranyl or corresponding thia analogues, and optionally substituted 1-phenyl-lower alkyl, such as optionally substituted benzyl or diphenylmethyl, wherein as substituents of the phenyl radicals z. As halogen, such as chlorine, lower alkoxy, such as methoxy and / or nitro come into question. Carboxyl groups are usually protected in esterified form, such ester groups being readily cleavable under mild conditions. Carboxyl groups protected in this way contain, as esterifying groups, lower alkyl groups branched in the first position or suitably substituted in the 1 or 2 position. Preferred esterified carboxylic groups include i.a. tert-lower alkoxycarbonyl, e.g. B. tert-butyloxycarbonyl, arylmethoxycarbonyl with one or two aryl radicals, these optionally being, for. B. by lower alkyl, such as tert-lower alkyl, z. Tert-butyl, lower alkoxy such as methoxy, hydroxy, halogen, e.g. As chlorine, and / or nitro, mono- or polysubstituted phenyl radicals, as appropriate, for. As mentioned above, substituted benzyloxycarbonyl, z. B. 4-Methoxybenzyloxycarbony.l, or 4-Nitrobenzyloxycarbonyl, or optionally, for. As mentioned above, substituted diphenylmethoxycarbonyl, z. Diphenylmethoxycarbonyl or di- (4-methoxyphenyl) -methoxycarbonyl, 1-lower alkoxy-lower alkoxycarbonyl such as methoxymethoxycarbonyl, 1-methoxyethoxycarbonyl or 1-ethoxymethoxycarbonyl, 1-lower alkylthio-lower alkoxycarbonyl such as 1-methylthiomethoxycarbonyl or 1-ethylthioethoxycarbonyl, aroylmethoxycarbonyl wherein the aroyl group is optionally substituted, e.g. , As halogen, such as bromine, substituted benzoyl represents, for. Phenacyloxycarbonyl, 2-halo-lower alkoxycarbonyl, e.g. 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl, 2-bromoethoxycarbonyl or 2-iodoethoxycarbonyl, or 2- (trisubstituted silyl) -ethoxycarbonyl, wherein each of the substituents independently represents an optionally substituted, e.g. B. substituted by lower alkyl, lower alkoxy, aryl, halogen, and / or nitro, aliphatic, araliphatic, cycloaliphatic or aromatic hydrocarbon radical, such as corresponding, optionally substituted lower alkyl, phenyl, alkylene, cycloalkyl or phenyl, z. 2-tri-lower alkylsilylethoxycarbonyl, 2-trimethylsilylethoxycarbonyl or 2- (di-n-butyl-methyl-silyl) -ethoxycarbonyl, or 2-triarylsilylethoxycarbonyl such as 2-triphenylsilylethoxycarbonyl. The organic silyl or stannyl radicals mentioned above and below preferably contain lower alkyl, in particular methyl, as substituents of the silicon or tin atoms. Corresponding SiIyI or stannyl groups are primarily tri-lower alkylsilyl, in particular trimethylsilyl, furthermore dimethyl-tert-butyl-silyl, or correspondingly substituted stannyl, ζ. Β. Tri-n-butylstannyl.
Bevorzugte geschützte Carboxylgruppen sind tert.-Niederalkoxycarbonyl, wie tert.-Butoxycarbonyl, und in erster Linie gegebenenfalls, z. B. wie oben erwähnt, substituiertes Benzyloxycarbonyl, wie 4-Nitrobenzyloxycarbonyl, oder Diphenylmethoxycarbonyl, vor allem 2-(Trimethylsilyl)-ethoxycarbonyl.Preferred protected carboxyl groups are tertiary lower alkoxycarbonyl, such as tert-butoxycarbonyl, and especially optionally, e.g. As mentioned above, substituted benzyloxycarbonyl, such as 4-nitrobenzyloxycarbonyl, or diphenylmethoxycarbonyl, especially 2- (trimethylsilyl) -ethoxycarbonyl.
Eine geschützte Aminogruppe kann z. B. in Form einer leicht spaltbaren Acylamino-, Arylmethylamino-, verätherten Mercaptoamiho-, 2-Acyl-niederalk-i-en-yl-amino-, SiIyI- oder Stannylaminogruppe oder als Azidogruppe vorliegen. In einer entsprechenden Acylaminogruppe ist Acyl beispielsweise der Acylrest einer organischen Carbonsäure mit z.B. bis zu 18 Kohlenstoffatomen, insbesondere einer gegebenenfalls, z. B. durch Halogen oder Aryl, substituierten Alkancarbonsäure oder gegebenenfalls, z. B. durch Halogen,' Niederalkoxy oder Nitro, substituierten Benzoesäure, oder eines Kohlensäurehaibesters. Solche Acylgruppen sind beispielsweise Niederalkanoyl, wie Formyl, Acetyl oder Propionyl, Halogenniederalkanoyl, wie 2-Halogenacetyl, insbesondere 2-Chlor-, 2-Brom-, 2-lod-; 2,2,2-Trifiuor- oder 2,2,2-Trichlöracetyl, gegebenenfalls, z. B. durch Halogen, Niederalkoxy oder Nitro substituiertes Benzoyl, z. B. Benzoyl, 4-Chlorbenzoyl, 4-Methoxybenzoyl oder 4-Nitrobenzoyl, oder in 1-Stellung des Niederalkylrestes verzweigtes oder in 1- oder 2-Stellung geeignet substituiertes Niederalkoxycarbonyl, insbesondere tert.-Niederalkoxycarbonyl, z. B. tert.-Butyloxycarbonyl, Arylmethoxycarbonyl mit einem oder zwei Aryl resten, die vorzugsweise gegebenenfalls, z. B. durch Niederalkyl, irisbesondere tert.-Niederaikyl, wie tert.-Butyl, Niederalkoxy, wie Methoxy, Hydroxy, Halogen, z. B. Chlor, und/oder Nitro, mono- oder polysubstituiertes Phenyl darstellen, wie gegebenenfalls substituiertes Benzyloxycarbonyl, z. B. 4-Nitro-benzyloxycarbonyl, oder substituiertes Diphenylmethoxycarbonyl, z. B. Benzhydryloxycarbonyl oder Di-(4-methoxyphenyl)-rnethoxycarbonyl, Aroylmethoxycarbonyl, worin die Aroylgruppe vorzugsweise gegebenenfalls, z. B. durch Halogen, wie Brom, substituiertes Benzoyl darstellt, z. B. Phenacyloxycarbonyl, 2-Halogenniederalkoxycarbonyl, z. B. 2,2,2-Trichlorethoxycarbonyl, 2-Bromethoxycarbonyl oder 2-lodethoxycarbonyl, oder 2-(trisubstituiertes Silyl)-ethoxycarbonyl, worin die Substituenten unabhängig voneinander je einen gegebenenfalls substituierten, z. B. durch Niederalkyl, Niederalkoxy, Aryl, Halogen oder Nitro substituierten, aliphatischen, araliphatischen, cycloaliphatischen oder aromatischen Kohlenwasserstoffrest mit bis zu 15C-Atomen, wie entsprechendes, gegebenenfalls substituiertes Niederalkyl, Phenylniederalkyl, Cycloalkyl oder Phenyl, bedeuten, z. B. 2-Triniederalkylsilylethoxycarbonyl, wie 2-Trimethylsilylethoxycarbonyl oder 2-(Di-n-butyl-methyl-silyl)-ethoxycarbonyi, oder 2-Triarylsilylethoxycarbonyl, wie 2-Triphenylsilylethoxycarbonyl.A protected amino group may, for. Example in the form of an easily cleavable acylamino, Arylmethylamino-, etherified Mercaptoamiho-, 2-acyl-lower alk-i-en-yl-amino, SiIyI or Stannylaminogruppe or present as an azido group. For example, in a corresponding acylamino group, acyl is the acyl radical of an organic carboxylic acid with e.g. up to 18 carbon atoms, in particular an optionally, for. B. by halogen or aryl, substituted alkanecarboxylic acid or optionally, for. Example by halogen, 'lower alkoxy or nitro, substituted benzoic acid, or a carbonic acid. Such acyl groups are, for example, lower alkanoyl, such as formyl, acetyl or propionyl, halo-lower alkanoyl, such as 2-haloacetyl, especially 2-chloro, 2-bromo, 2-iodo; 2,2,2-Trifiuor- or 2,2,2-Trichlöracetyl, optionally, for. B. substituted by halogen, lower alkoxy or nitro substituted benzoyl, z. B. benzoyl, 4-chlorobenzoyl, 4-methoxybenzoyl or 4-nitrobenzoyl, or in the 1-position of the lower alkyl or branched in the 1- or 2-position suitably substituted lower alkoxycarbonyl, especially tert-Niederalkoxycarbonyl, z. B. tert-butyloxycarbonyl, arylmethoxycarbonyl with one or two aryl radicals, which are preferably optionally, for. B. by lower alkyl, irisbesondere tert-Niederaikyl, such as tert-butyl, lower alkoxy, such as methoxy, hydroxy, halogen, z. As chlorine, and / or nitro, mono- or polysubstituted phenyl, such as optionally substituted benzyloxycarbonyl, z. 4-nitro-benzyloxycarbonyl, or substituted diphenylmethoxycarbonyl, e.g. B. Benzhydryloxycarbonyl or di- (4-methoxyphenyl) -rnethoxycarbonyl, Aroylmethoxycarbonyl, wherein the aroyl group is preferably optionally, for. B. represented by halogen, such as bromine, substituted benzoyl, z. Phenacyloxycarbonyl, 2-halo-lower alkoxycarbonyl, e.g. 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl, 2-bromoethoxycarbonyl or 2-iodoethoxycarbonyl, or 2- (trisubstituted silyl) -ethoxycarbonyl, wherein each of the substituents independently represents an optionally substituted, e.g. B. substituted by lower alkyl, lower alkoxy, aryl, halogen or nitro, aliphatic, araliphatic, cycloaliphatic or aromatic hydrocarbon radical having up to 15C atoms, such as corresponding, optionally substituted lower alkyl, phenyl, alkylene, cycloalkyl or phenyl, z. 2-tri-lower alkylsilylethoxycarbonyl such as 2-trimethylsilylethoxycarbonyl or 2- (di-n-butyl-methyl-silyl) -ethoxycarbonyl, or 2-triarylsilylethoxycarbonyl such as 2-triphenylsilylethoxycarbonyl.
Weitere, als Aminoschutzgruppen in Frage kommende Acylreste sind auch entsprechende Reste organischer Phosphor-, Phosphon- oder Phosphinsäuren, wie Diniederalkylphosphoryl, z. B. Dimethylphosphoryl, Diethylphosphoryl, Di-npropylphosphoryl oder Diisopropylphosphoryl, Dicycloalkylphosphoryl, z.B. Dicyclohexylphosphoryl, gegebenenfalls substituiertes Diphenylphosphoryl, z. B. Diphenylphosphoryl, gegebenenfalls, z. B. durch Nitro substituiertes Di- . . (phenylniederalkyl)-phosphoryi, z. B. Dibenzylphosphoryl oder Di-(4-nitrobenzyl)-phosophoryl, gegebenenfalls substituiertes Phenyloxy-phenyl-phosphonyl, z. B. Phenyloxyphenyl-phosphonyl, Diniederalkylphosphinyl, z. B. Diethylphosphinyl, oder gegebenenfalls substituiertes Diphenylphosphinyl, z. B. Diphenylphosphinyl.Further acyl radicals which are suitable as amino-protecting groups are also corresponding radicals of organic phosphoric, phosphonic or phosphinic acids, such as dilower alkylphosphoryl, eg. Dimethylphosphoryl, diethylphosphoryl, di-n-propylphosphoryl or diisopropylphosphoryl, dicycloalkylphosphoryl, e.g. Dicyclohexylphosphoryl, optionally substituted diphenylphosphoryl, e.g. B. diphenylphosphoryl, optionally, for. As substituted by nitro di-. , (phenyl-lower alkyl) phosphoryi, e.g. B. dibenzylphosphoryl or di- (4-nitrobenzyl) -phosphoryl, optionally substituted phenyloxy-phenyl-phosphonyl, z. Phenyloxyphenyl phosphonyl, dilower alkyl phosphinyl, e.g. B. diethylphosphinyl, or optionally substituted diphenylphosphinyl, z. B. diphenylphosphinyl.
In einer Arylmethylamonigruppe, die eine Mono-, Di- oder insbesondere Triarylmethylaminogruppe darstellt, sind die Arylreste insbesondere gegebenenfalls substituierte Phenylreste. Solche Gruppen sind beispielsweise Benzyl-, Diphenylmethyl- und insbesondere Tritylamino.In an arylmethylammonium group which represents a mono-, di- or in particular triarylmethylamino group, the aryl radicals are in particular optionally substituted phenyl radicals. Such groups are for example benzyl, diphenylmethyl and especially tritylamino.
Eine verätherte Mercaptogruppe in einer mit einem solchen Rest geschützten Aminogruppe ist in erster Linie Arylthio oder Arylniederalkylthio, worin Aryl insbesondere gegebenenfalls, z.B. durch Niederalkyl, wie Methyl oder tert.-Butyl, Niederalkoxy, wie Methoxy, Halogen, wie Chlor, und/oder Nitro substituiertes Phenyl ist. Eine entsprechende Aminoschutzgruppe ist z. B. 4-Nitrophenylthio.An etherified mercapto group in an amino group protected with such a radical is primarily arylthio or aryl-lower alkylthio, wherein aryl is especially optionally, e.g. is phenyl substituted by lower alkyl, such as methyl or tert-butyl, lower alkoxy, such as methoxy, halogen, such as chlorine, and / or nitro. A corresponding amino protecting group is z. B. 4-Nitrophenylthio.
In einem als Aminoschutzgruppe verwendbaren 2-ΑογΙ-ηίβαβΓ3^-1-βηΙ-γΙ^·Γβ3ί ist Acyl ζ. Β, der entsprechende Rest einer Niederalkancarbonsäure, einer gegebenenfalls, z. B. durch Niederalkyl, wie Methyl oder tert.-Butyl, Niederalkoxy, wie Methoxy, Halogen, wie Chlor, und/oder Nitro substituierten Benzoesäure, oder insbesondere eines Kohlensäurehaibesters, wie eines Kohlensäure-niederalkylhalbesters. Entsprechende Schutzgruppen sind in erster Linie 1-Niederalkanoyl-prop-1-en-2-yl, z. B. 1-Acetyl-prop-1-en-2-yl, oder 1-Niederalkoxycarbonyl-prop-1-en-2-yl,z. B. 1-Ethoxycarbonyl-prop-1-en-2-yl. Eine Aminogruppe kann auch in protonierter Form geschützt werden; als entsprechende Anionen kommen in erster Linie diejenigen von starken anorganischen Säuren, wie von Halogenwasserstoffsäuren, z. B. das Chlor- oder Bromanion, oder von organischen Sulfonsäuren, wie p-Toluolsulfonsäure, in Frage.In a usable as amino protecting group 2-γογΙ-ηίβαβΓ3 ^ -1-βηΙ-γΙ ^ · ίβ3ί is acyl ζ. Β, the corresponding radical of a lower alkanecarboxylic acid, an optionally, z. B. by lower alkyl, such as methyl or tert-butyl, lower alkoxy, such as methoxy, halogen, such as chlorine, and / or nitro substituted benzoic acid, or in particular a Kohlensäurehaibesters, such as a carbonic acid lower alkyl. Corresponding protecting groups are primarily 1-lower alkanoyl-prop-1-en-2-yl, e.g. 1-acetyl-prop-1-en-2-yl, or 1-lower alkoxycarbonyl-prop-1-en-2-yl, e.g. For example, 1-ethoxycarbonyl-prop-1-en-2-yl. An amino group can also be protected in protonated form; as corresponding anions are primarily those of strong inorganic acids, such as hydrogen halides, z. As the chlorine or Bromanion, or of organic sulfonic acids, such as p-toluenesulfonic acid in question.
Bevorzugte Aminoschutzgruppen sind Acyireste von Kohlensäurehalbestern, insbesondere tert.-Butyloxycarbonyl, gegebenenfalls, z. B. wie angegeben, substituiertes Benzyloxycarbonyl, z. B. 4-Nitro-benzyloxycarbonyl, oder Diphenylmethoxycarbonyl, oder 2-Halogen-niederalkoxycarbonyl, wie 2,2,2-Trichlorethoxycarbonyl, ferner Trityl oder Formyl.Preferred amino-protecting groups are acyl radicals of carbonic monoesters, in particular tert-butyloxycarbonyl, if appropriate, for. B. as indicated, substituted benzyloxycarbonyl, z. 4-nitro-benzyloxycarbonyl, or diphenylmethoxycarbonyl, or 2-halo-lower alkoxycarbonyl such as 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl, further trityl or formyl.
Eine Mercaptogruppe, wie z. B. in Cystein, kann insbesondere durch S-Alkylierung mit gegebenenfalls substituierten Alkylresten, Thioacetalbildung, S-Acylierung oder durch das Erstellen asymmetrischer Disulfid-Gruppierungen geschützt werden. Bevorzugte Mercaptoschutzgruppen sind z. B. gegebenenfalls im Phenylrest, z. B. durch Methoxy oder Nitro, substituiertes Benzyl, wie 4-Methoxybenzyl, gegebenenfalls im Phenylteil,z.B. durch Methoxy, substituiertes Diphenylmethyl, wie 4,4'-Dimethoxydiphenyl-methyl, Triphenylmethyi, Trimethylsilyl, Benzyl-thiomethyl, Tetrahydropyranyl, Acylaminomethyl, Benzoyl, Benzyloxycarbonyl oder Aminocarbonyi, wie Ethylaminocarbonyl.A mercapto group, such as. As in cysteine, in particular by S-alkylation with optionally substituted alkyl radicals, thioacetal, S-acylation or by creating asymmetric disulfide groups are protected. Preferred mercapto protecting groups are, for. B. optionally in the phenyl radical, for. Substituted by methoxy or nitro, substituted benzyl, such as 4-methoxybenzyl, optionally in the phenyl moiety, e.g. by methoxy, substituted diphenylmethyl, such as 4,4'-dimethoxydiphenylmethyl, triphenylmethyl, trimethylsilyl, benzylthiomethyl, tetrahydropyranyl, acylaminomethyl, benzoyl, benzyloxycarbonyl or aminocarbonyi, such as ethylaminocarbonyl.
Primäre Carbonsäureamidgruppen (Carbamoylgruppen,-CONH2) sind z. B. in Form von N-(9-Xanthenyl)-Derivaten oder in Form von N-(Mono-, Di- oder TriarylmethyD-Derivaten geschützt, wobei Aryl insbesondere unsubstituiertes oder mit bis zu 5 gleichen oder verschiedenen Substituenten substituiertes Phenyl bedeutet. Solche Phenylsubstituenten sind vorzugsweise Niederalkyl, wie Methyl, oder Niederalkoxy, wie Methoxy. Als Beispiele für solche Arylmethyl-Schutzgruppen eien genannt: 4-Methoxybenzyl, 2,4,6-Trimethoxy-benzyl, Diphenyl-methyl, Di-(4'-methoxy-phenyl)-methyl und Di-(4-methyl-phenyl)-methyl. Der Schutz von Carbamoylgruppen ist fakultativ, d. h. bei geeigneten Reaktionsbedingungen, z. B. bei Verwendung geeigneter Kondensationsmittel, nicht zwingend erforderlich.Primary carboxylic acid amide groups (carbamoyl groups, -CONH 2 ) are z. B. in the form of N- (9-xanthenyl) derivatives or in the form of N- (mono-, di- or TriarylmethyD derivatives protected, wherein aryl in particular unsubstituted or substituted with up to 5 identical or different substituents phenyl Phenyl substituents are preferably lower alkyl, such as methyl, or lower alkoxy, such as methoxy Examples of such arylmethyl protecting groups include: 4-methoxybenzyl, 2,4,6-trimethoxy-benzyl, diphenyl-methyl, di (4'-methoxy) The protection of carbamoyl groups is optional, ie not absolutely necessary under suitable reaction conditions, for example when using suitable condensing agents.
Guanidinogruppen sind z. B. in Form des Säureadditionssalzes, insbesondere als Hydrochlorid oder als Toluolsulfonat geschützt.Guanidino groups are z. B. in the form of the acid addition salt, in particular protected as hydrochloride or as toluenesulfonate.
Ein den Rest R1, R2-C(=O)-, R4 oder R6 übertragendes Acylierungsmittel ist insbesondere die entsprechende Carbonsäure, d. h. R'-OH, R2-COOH, Rd-OH oder R6~OH, oder vorzugsweise ein reaktionsfähiges Säurederivat derselben, wobei die Aktivierung der als Acvlierunasmittel verwendeten Carbonsäure auch in situ in Gegenwart der Verbindung der Formel Il erfolgen kann.An acylating agent which transfers the radical R 1 , R 2 -C (= O) -, R 4 or R 6 is, in particular, the corresponding carboxylic acid, ie R'-OH, R 2 -COOH, R d -OH or R 6 ~OH, or, preferably, a reactive acid derivative thereof, wherein the activation of the carboxylic acid used as an additional agent can also be effected in situ in the presence of the compound of formula II.
Die Erfindung betrifft insbesondere diejenigen Ausführungsformen des Verfahrens a), wobei ein Acylrest R1, R4 und/oder R6 eingeführt wird.The invention particularly relates to those embodiments of process a), wherein an acyl radical R 1 , R 4 and / or R 6 is introduced.
Als Acyliefungsmittel verwendbare aktivierte Carbonsäurederivate sind in erster Linie reaktionsfähige aktivierte Ester oder reaktionsfähige Anhydride, ferner reaktionsfähige cyclische Amide.Activated carboxylic acid derivatives useful as acylating agents are primarily reactive activated esters or reactive anhydrides, and also reactive cyclic amides.
Aktivierte Ester von Säuren sind insbesondere am Verknüpfungskohlenstoffatom des veresternden Restes ungesättigte Ester, z. B. vom Vinylester-Typ, wie eigentliche Vinylester (die man z. B. durch Umesterung eines entsprechenden Esters mit Vinylacetat erhalten kann; Methode des aktivierten Vinylesters), Carbamoylvinylester (die man z. B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit einem Isoxazoliumreagens erhalten kann; 1,2-Oxazolium- oder Woodward-Methode), oder 1-Niederalkoxyvinylester (die man z.B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit einem Niederalkoxyacetylen erhalten kann; Ethoxyacetylen-Methode), oder Ester vom Amidinotyp, wie Ν,Ν'-disubstituierte Amidinoester (die man z.B. durch Behandein der entsprechenden Säure mit einem geeigneten Ν,Ν'-disubstituierten Carbodiimid, z. B. !^,N'-Dicyclohexylcarbodiimid, erhalten kann; Carbodiimid-Methode), oder N,N-disubstituierte Amidinoester (die man z. B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit einem Ν,Ν-disubstituierten Cyanamid erhalten kann; Cyanamid-Methode), geeignete Arylester, insbesondere durch Elektronen-anziehende Substituenten geeignet substituierte Phenylester (die man z. B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit einem geeignet substituierten Phenol, z. B. 4-Nitrophenol, 4-Methylsulfonyl-phenol, 2,4,5-Trichlorphenol, 2,3,4,5,6-Pentachlor-phenol oder 4-Phenyldiazophenol, in gegenwart eines' Kondensationsmittels, wie (^,N'-Dicyclohexyl-carbodiimid, erhalten kann; Methode der aktivierten Arylester), Cyanmethylester (die man z. B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit Chloracetonitril in Gegenwart einer Base erhalten kann; Cyanmethylester-Methode), Thioester, insbesondere gegebenenfalls, z. B. durch Nitro, substituierte Phenyl-thioester (die man z. B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit gegebenenfalls, z. B. durch Nitro, substituierten Thiophenolen, u. a. mit Hilfe der Anhydrid- oder Carbodiimid-Methode, erhalten kann; Methode der aktivierten Thiolester), Amino- oder Amidoester (die man z.B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit einer N-Hydroxy-amino- bzw. N-Hydroxy-amido-Verbindung, z. B. N-Hydroxy-succinimid, NrHydroxy-piperidin, N-Hydroxyphthalimid oder 1-Hydroxy-benztriazol, z.B. nach der Anhydrid-oder Carbodiimid-Methode, erhalten kann; Methode der aktivierten N-Hydroxyester) oder Silylester (die man z. B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit einem Silylierungsmittel, z. B. Hexamethyldisilazan, erhalten kann und die leicht mit Hydroxy-, nicht aber mit Aminogruppen reagieren). Activated esters of acids are especially at the linking carbon atom of the esterifying radical unsaturated esters, eg. Vinyl ester type, such as actual vinyl esters (which can be obtained, for example, by transesterification of a corresponding ester with vinyl acetate; activated vinyl ester method), carbamoylvinyl esters (obtained, for example, by treating the corresponding acid with an isoxazolium reagent 1,2-oxazolium or Woodward method), or 1-lower alkoxyvinyl ester (which can be obtained, for example, by treating the corresponding acid with a lower alkoxyacetylene, ethoxyacetylene method), or amidino-type esters such as Ν, Ν'-disubstituted ones Amidinoester (which can be obtained, for example, by treating the corresponding acid with a suitable Ν, Ν'-disubstituted carbodiimide, eg., ^, N'-dicyclohexylcarbodiimide, carbodiimide method), or N, N-disubstituted Amidinoester (the can be obtained, for example, by treating the corresponding acid with a Ν, Ν-disubstituted cyanamide, cyanamide method), suitable aryl esters, in particular by electron-attracting substituents suitable et substituted phenyl esters (which z. B. by treating the corresponding acid with a suitably substituted phenol, for. 4-nitrophenol, 4-methylsulfonylphenol, 2,4,5-trichlorophenol, 2,3,4,5,6-pentachlorophenol or 4-phenyldiazophenol, in the presence of a condensing agent such as (n ', n'). Dicyclohexylcarbodiimide), cyanomethyl esters (which can be obtained, for example, by treating the corresponding acid with chloroacetonitrile in the presence of a base, cyanomethyl ester method), thioesters, especially if appropriate, e.g. B. by nitro, substituted phenyl thioester (which can be obtained, for example, by treating the corresponding acid with optionally, for example by nitro, substituted thiophenols, inter alia by means of the anhydride or carbodiimide method; activated thiolesters), amino or amido esters (which are obtained, for example, by treating the corresponding acid with an N-hydroxy-amino or N-hydroxy-amido compound, for example N-hydroxy-succinimide, N r hydroxy-piperidine , N-hydroxyphthalimide or 1-hydroxybenzotriazole, for example by the anhydride or carbodiimide method; activated N-hydroxy ester method) or silyl ester (obtained, for example, by treating the corresponding acid with a silylating agent, e.g. B. hexamethyldisilazane, and which react easily with hydroxy, but not with amino groups).
Anhydride von Säuren können symmetrische oder vorzugsweise gemischte Anhydride dieser Säuren sein, so z. B. Anhydride mit anorganischen Säuren, wie Säurehalogenide, insbesondere Säurechloride (die man z. B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit Thionylchlorid, Phosphorpentachlorid oder Oxalylchlorid erhalten kann; Säurechloridmethode), Azide (die man z.B. aus einem entsprechenden Säureester über das entsprechende Hydrazid und dessen Behandlung mit salpetriger Säure erhalten kann; Azidmethode), Anhydride mit Kohlensäurehalbderivaten, wie mit entsprechenden Estern, z. B. Kohlensäureniederalkylhalbestern (die man z. B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit Halogen-, wie Chlorameisensäure-niederalkylestem oder mit einem i-Niederalkoxycarbonyl^-niederalkoxy-i^-dihydro-chinoliniZ. B. 1-Niederalkoxycarbonyl^-ethoxy-i^-dihydrochinolin, erhalten kann; Methode der gemischen O-Alkylkohlensäureanhydride), oder Anhydride mit dihalogenierter, insbesondere dichlorierter Phosphorsäure (die man z.B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit Phosphoroxychlorid erhalten kann; Phosphoroxychloridmethode), oder Anhydride mit organischen Säuren, wie gemischte Anhydride mit organischen Carbonsäuren (die man ζ. B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit einem gegebenenfalls substituierten Niederalkan- oder Phenylalkancarbonsäurehalogenid, z. B. Phenylessigsäure-, Pivalinsäure- oder Trifluoressigsäurechlorid erhalten kann; Methode der gemischten Carbonsäureanhydride) oder mit organischen Sulfonsäuren (die man ζ. B. durch Behandeln eines Salzes, wie eines Alkalimetailsalzes, der entsprechenden Säure, mit einem geeigneten organischen Sulfonsäurehalogenid, wie Niederalkan- oder Aryl-, ζ. B. Methan- oder p-Toluolsulfonsäurechlorid, erhalten kann; Methode der gemischen Sulfonsäureanhydride), sowie symmetrische Anhydride (die man z.B. durch Kondensation der entsprechenden Säure in Gegenwart eines Carbodiimids oder von 1-DiethylaminopropinAnhydrides of acids may be symmetrical or preferably mixed anhydrides of these acids, such. Example, anhydrides with inorganic acids, such as acid halides, in particular acid chlorides (which can be obtained, for example, by treating the corresponding acid with thionyl chloride, phosphorus pentachloride or oxalyl chloride, acid chloride method), azides (eg, from a corresponding acid ester over the corresponding hydrazide and its treatment can be obtained with nitrous acid, azide method), anhydrides with carbonic acid derivatives, as with corresponding esters, eg. B. Kohlensiederiederalkylhalbestern (which is obtained, for example, by treating the corresponding acid with halogen, such as lower alkyl chloroformate or with an i-Niederalkoxycarbonyl ^ -niederalkoxy-i ^ -dihydro-quinoliniZ, B. 1-Niederalkoxycarbonyl ^ -ethoxy-i method of mixed O-alkylcarbonic anhydrides), or anhydrides with dihalogenated, in particular dichlorinated phosphoric acid (which can be obtained, for example, by treating the corresponding acid with phosphorus oxychloride, phosphorus oxychloride method), or anhydrides with organic acids, such as mixed anhydrides with organic carboxylic acids (which can be obtained, for example, by treating the corresponding acid with an optionally substituted lower alkane or phenylalkanecarboxylic acid halide, eg phenylacetic acid, pivalic acid or trifluoroacetic acid chloride, mixed carboxylic acid anhydride method) or with organic sulfonic acids (which are ζ B. by treating a salt it, such as an alkali metal salt, of the corresponding acid, with a suitable organic sulfonic acid halide, such as lower alkane or aryl, ζ. For example, methane or p-toluenesulfonyl chloride, can be obtained; Mixed sulfonic acid anhydride method), as well as symmetrical anhydrides (obtained, for example, by condensation of the corresponding acid in the presence of a carbodiimide or of 1-diethylaminopropyne
erhalten kann; Methode der symmetrischen Anhydride). .. ... can receive; Method of symmetrical anhydrides). .. ...
Geeignete cyclische Amide sind insbesondere Amide mit fünfgiiedrigen Diazacyclen aromatischen Charakters, wie Amide mit lmidazolen,z. B. Imidazol (die man z. B. durch Behandeln der entsprechenden Säure mit Ν,Ν'-Carbonyldiimidazol erhalten kann; Imidazolid-Methode), oder Pyrazolen, z. B. 3,5-Dimethyl-pyrazol (die man z. B. über das Säurehydrazid durch Behandeln mit Acetylaceton erhalten kann; Pyrazolid-Methode).Suitable cyclic amides are, in particular, amides having five-membered diazacycles of aromatic character, such as amides with imidazoles, e.g. Imidazole (which can be obtained, for example, by treating the corresponding acid with Ν, Ν'-carbonyldiimidazole, imidazolide method), or pyrazoles, e.g. B. 3,5-dimethyl-pyrazole (which can be obtained, for example, via the acid hydrazide by treatment with acetylacetone, pyrazolide method).
Wie erwähnt können Derivate von Säuren, die als Acylierungsmittel verwendet werden, auch in situ gebildet werden. So kann man z. B. Ν,Ν'-disubstituierte Amidinoester in situ bilden, indem man das Gemisch des Ausgangsmaterials der Formel Il und der als Acylierungsmittel verwendeten Säure in Gegenwart eines geeigneten Ν,Ν-disubstituierten Carbodiimids, z. B. N-N'-Dicyclohexylcarbodiimid, zur Reaktion bringt. Ferner kann man Amino-oder Amidoester der als Acylierungsmittel verwendeten Säuren in Gegenwart des zu acylierenden Ausgangsmaterials der Formel Il bilden, indem man das Gemisch der entsprechenden Säure- und Amino-Ausgangsstoffe in Gegenwart eines Ν,Ν'-disubstituierten Carbodiimids, z. B. N^'-Dicyclohexyl-carbodimid, und eines N-Hydroxy-amins oder N-Hydroxy-amids, z. B. N-Hydroxysuccinimid, gegebenenfalls in Anwesenheit einer geeigneten Base, z. B. 4-Dimethylamino-pyridin, umsetzt.As mentioned, derivatives of acids used as acylating agents can also be formed in situ. So you can z. B. Ν, Ν'-disubstituted amidinoester form in situ by reacting the mixture of the starting material of the formula II and the acid used as the acylating agent in the presence of a suitable Ν, Ν-disubstituted carbodiimide, z. As N-N'-dicyclohexylcarbodiimide, brings to reaction. Furthermore, one can form amino or amido esters of acids used as acylating in the presence of the starting material of the formula II to be acylated by reacting the mixture of the corresponding acid and amino starting materials in the presence of a Ν, Ν'-disubstituted carbodiimide, z. N, N'-dicyclohexyl-carbodiimide, and N-hydroxy-amine or N-hydroxy-amide, e.g. B. N-hydroxysuccinimide, optionally in the presence of a suitable base, for. For example, 4-dimethylamino-pyridine.
Die Reaktion kann in an sich bekannter Weise durchgeführt werden, wobei die Reaktionsbedingungen in erster Linie davon abhängen, ob und wie die Carboxylgruppe des Acylierungsmittels aktiviert ist, üblicherweise in Gegenwart eines geeigneten Lösungs- oder Verdünnungsmittels oder eines Gemisches von solchen, und, falls notwendig, in Gegenwart eines Kondensationsmittels, das z. B., wenn die an der Reaktion teilnehmende Carboxylgruppe als Anhydrid vorliegt, auch ein säurebindendes Mittel sein kann, unter Kühlen öder Erwärmen, z. B. in einem Temperaturbereich von etwa -30°C bis etwa + 150°C, insbesondere von etwa O0C bis +100°C, vorzugsweise von Raumtemperatur (ca. +200C) bis +7O0C, in einem geschlossenen Reaktionsgefäß und/oder in der Atmosphäre eines Inertgases, z.B. Stickstoff. Übliche Kondensationsmittei sind z. B. Carbodiimide, beispielsweise Ν,Ν'-Diethyl-, N,N'-Dipropyl-, Ν,Ν'-Dicyclohexyl- oder N-Ethyl-N'-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimid, geeignete Carbonylverbindungen, beispielsweise Carbonyldiimidazol, oder 1,2-Oxazoliumverbindungen, z. B. 2-Ethyl-5-phenyl-1,2-oxazolium-3'-sulfonat und 2-tert.-Butyl-5-methyl-isoxazolium-perchlorat, oder eine geeignete Acylaminoverbindung,z. B. 2-Ethoxy-1-ethoxycarbonyl-1,2-dihydrochinolin. Übliche säurebindende Kondent&rtionsmittel sind z. B. Alkalimetallcarbonate oder -hydrogencarbonate, z. B. Natrium- oder Kaliumcarbonat oder -hydrogencarbonat (üblicherweise zusammen miteinemSulfat), oder organische Basen, wie üblicherweise sterisch gehinderte Triniederalkylamine, z. B. Ν,Ν-Diisopropyl-N-ethyl-amin.The reaction may be carried out in a manner known per se, the reaction conditions depending primarily on whether and how the carboxyl group of the acylating agent is activated, usually in the presence of a suitable solvent or diluent or a mixture of such and, if necessary, in the presence of a condensing agent, the z. For example, when the carboxyl group participating in the reaction is present as an anhydride, it may also be an acid-binding agent, with cooling or heating, e.g. B. in a temperature range of about -30 ° C to about + 150 ° C, in particular from about O 0 C to + 100 ° C, preferably from room temperature (about +20 0 C) to + 7O 0 C, in a closed Reaction vessel and / or in the atmosphere of an inert gas, for example nitrogen. Usual Kondensationsmittei are z. Carbodiimides, for example Ν, Ν'-diethyl, N, N'-dipropyl, Ν, Ν'-dicyclohexyl or N-ethyl-N '- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide, suitable carbonyl compounds, for example carbonyldiimidazole, or 1,2-oxazolium compounds, e.g. 2-ethyl-5-phenyl-1,2-oxazolium-3'-sulfonate and 2-tert-butyl-5-methyl-isoxazolium perchlorate, or a suitable acylamino compound, e.g. B. 2-ethoxy-1-ethoxycarbonyl-1,2-dihydroquinoline. Common acid-binding condylents are e.g. B. alkali metal carbonates or bicarbonates, z. Sodium or potassium carbonate or bicarbonate (usually together with a sulfate), or organic bases such as sterically hindered tri-lower alkylamines, e.g. B. Ν, Ν-diisopropyl-N-ethyl-amine.
Die Abspaltung der Schutzgruppen, ζ. B. der Carboxyl-, Amino-, Hydroxy- oder Mercaptoschutzgruppen, die nicht Bestandteil des gewünschten Endprodukts der Formel I sind, erfolgt in an sich bekannter Weise, z. B. mittels Solvoiyse, insbesondere Hydrolyse, Alkoholyse oder Acidolyse, oder mittels Reduktion, insbesondere Hydrogenolyse oder chemische Reduktion, gegebenenfalls stufenweise oder gleichzeitig, wobei auch enzymatische Methoden verwendet werden können. So kann mittert.-Niederalkoxycarbonyl oder in 2-Stellung durch eine organische Silylgruppe oder in 1-Stellung durch Niederalkoxy oder Niederalkylthio substituiertes Niederalkoxycarbonyl oder gegebenenfalls substituiertes Diphenylmethoxycarbonyl z.B. durch Behandeln mit einer geeigneten Säure, wie Ameisensäure oderTrifluoressigsäure, gegebenenfalls unter Zugabe einer nucleophilen Verbindung, wie Phenol oder Anisol, in freies Carboxyl überführen. Gegebenenfalls substituiertes Benzyloxycarbonyl kann z. B. mittels Hydrogenolyse, d. h. durch Behandeln mit Wasserstoff in Gegenwart eines metallischen Hydrierkatalysators, wie eines Palladiumkatalysators, freigesetzt werden. Ferner kann man geeignet substituiertes Benzyloxycarbonyl, wie 4-Nitrobenzyloxycarbonyl, auch mittels chemischer Reduktion, z. B. durch Behandeln mit einem Alkalimetall-, ζ. B. Natriumdithionit, oder mit einem reduzierenden Metall, z. B. Zink, oder Metallsalz, wie einem Chrom-ll-salz, z. B. Chrom-ll-chlorid, üblicherweise in Gegenwart eines wasserstoffabgehenden Mittels, das zusammen mit dem Metall nascierenden Wasserstoff zu erzeugen vermag, wie einer Säurerin erster Linie einer geeigneten Carbonsäure, wie einer gegebenenfalls,z. B. durch Hydroxy, substituierten Niederalkancarbonsäure, z. B. Essigsäure, Ameisensäure, Glycolsäure, Diphenylglycolsäure, Milchsäure, Mandelsäure, 4-Chlor-mandelsäure oder Weinsäure, oder eines Alkohols oder Thiols, wobei man vorzugsweise Wasser zugibt, in freies Carboxyl überführen. Durch Behandeln mit einem reduzierenden Metall oder Metallsalz, wie oben beschrieben, kann man auch 2-Halogen-niederalkoxycarbonyl (gegebenenfalls nach Umwandlung einer 2-Brom-niederalkoxycarbonylgruppe in eine entsprechende 2-lod-niederalkoxycarbonylgruppe) oder Aroylmethoxycarbonyl in freies Carboxyl umwandeln, wobei Aroylmethoxycarbonyl ebenfalls durch Behandelnmit einem nucleophilen, vorzugsweise salzbildenden Reagens, wie Natriumthiophenolat oder Natriumiodid, gespalten werden kann. Substituiertes 2-Silylethoxycarbonyl kann auch.durch Behandeln mit einem, das Fluoridanion liefernden Salz der Fluorwasserstoffsäure, wie einem Alkalimetallfluorid, z. B. Natrium- oder Kaliumfluorid, in Anwesenheit eines macrocylischen Polyethers („Kronenether"), oder mit einem Fluorid einer organischen quaternären Base, wie Tetraniederalkylammoniumfluorid oderTriniederalkyl-aryl-ammoniumfluorid^. B. Tetraethylammoniumfluorid oder Tetrabutylammoniumfluorid, in Gegenwart eines aprotischen polaren Lösungsmittels, wie Dimethylsulfoxid oder N,N-Dimethylacetamid, in freies Carboxyl übergeführt werden.The cleavage of the protecting groups, ζ. As the carboxyl, amino, hydroxy or mercapto protecting groups, which are not part of the desired end product of formula I, is carried out in a conventional manner, for. B. by Solvoiyse, in particular hydrolysis, alcoholysis or acidolysis, or by reduction, in particular hydrogenolysis or chemical reduction, optionally in stages or simultaneously, whereby enzymatic methods can be used. For example, lower alkoxycarbonyl or lower alkoxycarbonyl or optionally substituted diphenylmethoxycarbonyl substituted in the 2-position by an organic silyl group or in the 1-position by lower alkoxy or lower alkylthio may be prepared by treatment with a suitable acid such as formic acid or trifluoroacetic acid optionally with the addition of a nucleophilic compound such as Convert phenol or anisole into free carboxyl. Optionally substituted benzyloxycarbonyl may e.g. B. by hydrogenolysis, ie by treatment with hydrogen in the presence of a metallic hydrogenation catalyst, such as a palladium catalyst, are released. Furthermore, suitably substituted benzyloxycarbonyl, such as 4-nitrobenzyloxycarbonyl, also by means of chemical reduction, for. B. by treatment with an alkali metal, ζ. As sodium dithionite, or with a reducing metal, for. As zinc, or metal salt, such as a chromium-ll-salt, z. Chromium-II-chloride, usually in the presence of a hydrogen donating agent which is capable of producing nascent hydrogen together with the metal, such as an acid r primarily a suitable carboxylic acid such as an optional, e.g. B. substituted by hydroxy, lower alkanecarboxylic, z. As acetic acid, formic acid, glycolic acid, diphenyl glycolic acid, lactic acid, mandelic acid, 4-chloro-mandelic acid or tartaric acid, or an alcohol or thiol, preferably adding water, convert into free carboxyl. By treating with a reducing metal or metal salt as described above, one can also convert 2-halo-lower alkoxycarbonyl (optionally after conversion of a 2-bromo-lower alkoxycarbonyl group to a corresponding 2-iodo-lower alkoxycarbonyl group) or aroylmethoxycarbonyl into free carboxyl, with aroylmethoxycarbonyl also can be cleaved by treatment with a nucleophilic, preferably salt-forming, reagent, such as sodium thiophenolate or sodium iodide. Substituted 2-silylethoxycarbonyl may also be prepared by treatment with a hydrofluoric acid hydrofluoric acid salt such as an alkali metal fluoride, e.g. Sodium or potassium fluoride, in the presence of a macrocyclic polyether ("crown ether"), or with a fluoride of an organic quaternary base such as tetra-lower alkylammonium fluoride or tri-lower alkyl-aryl-ammonium fluoride ^, eg tetraethylammonium fluoride or tetrabutylammonium fluoride, in the presence of an aprotic polar solvent such as Dimethylsulfoxide or N, N-dimethylacetamide are converted into free carboxyl.
Verestertes Carboxyl kann auch enzymatisch gespalten werden, z. B. verestertes Lysin, ζ. Β. Lysinmethylester, mittels Trypsin. Eine geschützte Aminogruppe setzt man in an sich bekannter und je nach Art der Schutzgruppen in verschiedenartiger Weise, vorzugsweise mittels Solvoiyse oder Reduktion, frei. 2-Halogen-niederalkoxycarbonylamino (gegebenenfalls nach Umwandlung einer 2-Brom-niederalkoxycarbonylaminogruppe in eine 2-lod-niederalkoxycarbonylaminogruppe), Aroylmethoxycarbonyiamino oder 4-Nitrobenzyloxycarbonylamino kann z. B. durch Behandeln mit einem geeigneten chemischen Reduktionsmittel, wie Zink in Gegenwart einer geeigneten Carbonsäure, wie wäßriger Essigsäure, gespalten werden. Aroylmethoxycarbonyiamino kann auch durch Behandeln mit einem nucleophilen, vorzugsweise salzbildenden Reagens, wie Natriumthiophenolat, und 4-Nitro-benzyloxycarbonylamino auch durch Behandeln mit einem Alkalimetall-, ζ. Β. Natriumdithionit, gespalten werden. Gegebenenfalls substituiertes Diphenylmethoxycarbonylamino, tert.-Niederalkoxycarbonylamino oder 2-trisubstituiertes Silylethoxycarbonylamino kann durch Behandeln mit einer geeigneten Säure, z. B. Ameisen- oder Trifluoressigsäure, gegebenenfalls substituiertes Benzyloxycarbonylamino z. B. mittels Hydrogenolyse, d.h. durch Behandeln mit Wasserstoff in Gegenwart eines geeigneten Hydrierkatalysators, wie eines Palladiumkatalysators, gegebenenfalls substituiertes Triarylmethylamino oder Formylamino z.B. durch Behandeln mit einer Säure, wie Mineralsäure, ζ. B. Chlorwasserstoffsäure, oder einer organischen Säure, z. B. Ameisen-, Essig- oder Trifluoressigsäure, gegebenenfalls in Gegenwart von Wasser, gespalten werden, und eine mit einer organischen Silylgruppe geschützte Aminogruppe kann z.B. mittels Hydrolyse oder Alkoholyse freigesetzt werden. Eine durch 2-Halogenacetyl,z. B. 2-Chloracetyl, geschützte Aminogruppe kann durch Behandeln mit Thioharnstoff in Gegenwart einer Base, oder mit einem Thiolatsalz, wie einem Alkalimetallthiolat, desThioharnstoffs und anschließende Solvoiyse, wie Alkoholyse oder Hydrolyse, des entstandenen Kondensationsprodukts freigesetzt werden. Eine durch 2-substituiertes Silylethoxycarbonyl geschützte Aminogruppe kann auch durch Behandeln mit einem Fluoridanionen liefernden Salz der Fluorwasserstoffsäure, wie oben im Zusammenhang mit der Freisetzung einer entsprechend geschützten Carboxylgruppe angegeben, in die freie Aminogruppe übergeführt werden.Esterified carboxyl can also be cleaved enzymatically, e.g. B. esterified lysine, ζ. Β. Lysine methyl ester, by trypsin. A protected amino group is set in a manner known per se and depending on the nature of the protecting groups in various ways, preferably by means of Solvoiyse or reduction, free. 2-halo-lower alkoxycarbonylamino (optionally after conversion of a 2-bromo-lower alkoxycarbonylamino group to a 2-iodo-lower alkoxycarbonylamino group), aroylmethoxycarbonyiamino or 4-nitrobenzyloxycarbonylamino may be e.g. By cleavage with a suitable chemical reducing agent such as zinc in the presence of a suitable carboxylic acid such as aqueous acetic acid. Aroylmethoxycarbonyiamino may also be prepared by treatment with a nucleophilic, preferably salt-forming, reagent, such as sodium thiophenolate, and 4-nitrobenzyloxycarbonylamino also by treatment with an alkali metal, ζ. Β. Sodium dithionite, are split. Optionally substituted diphenylmethoxycarbonylamino, tertiary-lower alkoxycarbonylamino or 2-trisubstituted silylethoxycarbonylamino may be prepared by treatment with a suitable acid, e.g. B. formic or trifluoroacetic acid, optionally substituted Benzyloxycarbonylamino z. B. by hydrogenolysis, ie by treatment with hydrogen in the presence of a suitable hydrogenation catalyst, such as a palladium catalyst, optionally substituted triarylmethylamino or formylamino, for example by treatment with an acid such as mineral acid, ζ. Hydrochloric acid, or an organic acid, e.g. For example, formic, acetic or trifluoroacetic acid, optionally in the presence of water, are cleaved, and a protected with an organic silyl group amino group can be released for example by hydrolysis or alcoholysis. A by 2-haloacetyl, z. For example, 2-chloroacetyl, protected amino group may be released by treatment with thiourea in the presence of a base, or with a thiolate salt such as an alkali metal thiolate, of the thiourea and subsequent solvation such as alcoholysis or hydrolysis of the resulting condensation product. A 2-substituted silylethoxycarbonyl-protected amino group may also be converted to the free amino group by treatment with a fluoride anion-providing salt of hydrofluoric acid as described above in connection with the release of a suitably protected carboxyl group.
In Form einer Azidogruppe geschütztes Amino wird z.B. durch Reduktion in freies Amino übergeführt, beispielsweise durch katalytische Hydrierung mit Wasserstoff in Gegenwart eines Hydrierkatalysators, wie Platinoxid, Palladium oder Raney-Nickel, oder auch durch Behandeln mit Zink in Gegenwart einer.Säure, wie Essigsäure. Die katalytische Hydrierung wird vorzugsweise in einem inerten Lösungsmittel, wie einem halogenierten Kohlenwasserstoff, z. B. Methylenchlorid, ode.r auch in Wasser oder einem Gemisch von Wasser und einem organischen Lösungsmittel, wie einem Alkohol oder Dioxan, bei etwa 200C bis 25°C, oder auch unter Kühlen oder Erwärmen, durchgeführt.Amino protected in the form of an azido group is converted for example by reduction into free amino, for example by catalytic hydrogenation with hydrogen in the presence of a hydrogenation catalyst, such as platinum oxide, palladium or Raney nickel, or by treatment with zinc in the presence of a. Acid, such as acetic acid. The catalytic hydrogenation is preferably carried out in an inert solvent such as a halogenated hydrocarbon, e.g. As methylene chloride, or even in water or a mixture of water and an organic solvent such as an alcohol or dioxane, at about 20 0 C to 25 ° C, or under cooling or heating performed.
Eine durch eine geeignete Acylgruppe, eine organische Silylgruppe oder durch gegebenenfalls substituiertes 1-Phenylniederalkyl geschützte Hydroxy- oder Mercaptogruppe wird analog einer entsprechend geschützten Aminogruppe freigesetzt. Durch gegebenenfalls substituiertes 1-Phenylniederalkyl, z. B. Benzyl, geschütztes Hydroxy wird vorzugsweise durch katalytische Hydrierung, z. B. in Gegenwart eine Palladium-auf-Kohle-Katalysators freigesetzt. Eine durch 2,2-Dichloracetyl geschützte Hydroxy- bzw. Mercaptogruppe wird z. B. durch basische Hydrolyse, eine durch tert.-Niederalkyl oder durch einen 2-oxa- oder 2-thia-aliphatischen oder -cycloaliphatischen Kohlenwasserstoff rest veretherte Hydroxy- bzw. Mercaptogruppe durch Acidolyse, z. B. durch Behandeln mit einer Mineralsäure oder einer starken Carbonsäure, ζ. Β. Trifluoressigsäure, freigesetzt. Zwei Hydroxygruppen, die zusammen mittels einer vorzugsweise substituierten Methylengruppe, wie durch Niederalkyliden, z. B. Isopropyliden, Cycloalkyliden, z. B. Cyclohexyliden, oder Benzyliden, geschützt sind, können durch saure · Solvoiyse, besonders in Gegenwart einer Mineralsäure oder einer starken organischen Säure, freigesetzt werden. Mit einem organischen Silylrest, z. B. Trimethylsilyl, verethertes Hydroxy kann auch mit einem Fluoridanionen liefernden Salz der Fluorwasserstoffsäure, z. B. Tetrabutylammoniumfluorid, freigesetzt werden.A hydroxy or mercapto group protected by a suitable acyl group, an organic silyl group or by optionally substituted 1-phenyl-lower alkyl is liberated analogously to a correspondingly protected amino group. By optionally substituted 1-phenyl-lower alkyl, for. B. Benzyl, protected hydroxy is preferably by catalytic hydrogenation, for. B. released in the presence of a palladium-on-carbon catalyst. A protected by 2,2-dichloroacetyl hydroxy or mercapto group is z. Example, by basic hydrolysis, a by tert-lower alkyl or by a 2-oxa or 2-thia-aliphatic or -cycloaliphatic hydrocarbon rest etherified hydroxy or mercapto group by acidolysis, for. B. by treatment with a mineral acid or a strong carboxylic acid, ζ. Β. Trifluoroacetic acid, released. Two hydroxy groups which together through a preferably substituted methylene group, such as by lower alkylidene, z. B. isopropylidene, cycloalkylidene, z. As cyclohexylidene, or benzylidene, can be released by acidic · Solvoiyse, especially in the presence of a mineral acid or a strong organic acid. With an organic silyl, z. For example, trimethylsilyl, etherified hydroxy may also be reacted with a fluoride anion supplying salt of hydrofluoric acid, e.g. As tetrabutylammonium fluoride, are released.
Bevorzugt werden beim Vorhandensein von mehreren geschützten funktioneilen Gruppen die Schutzgruppen so gewählt, daß gleichzeitig mehr als eine solche Gruppe abgespalten werden kann, beispielsweise acidolytisch, wie durch Behandeln mit Trffluoressigsäure oder Ameisensäure, oder reduktiv, wie durch Behandeln mit Zink und Essigsäure, oder mit Wasserstoff und einem Hydrierkatalysator, wie einem Palladium-Kohle-Katalysator. Wenn die gewünschten Endstoffe Schutzgruppen enthalten,Preferably, in the presence of multiple protected functional groups, the protecting groups are selected to simultaneously cleave more than one such group, for example acidolytically, such as by treatment with trifluoroacetic acid or formic acid, or reductive, such as by treatment with zinc and acetic acid, or with hydrogen and a hydrogenation catalyst such as a palladium-carbon catalyst. If the desired end-products contain protective groups,
z. B. wenn R12Aryimethoxy, wie Benzyloxy, bedeutet, werden diejenigen Schutzgruppen, die nach erfolgter Reaktion abgespalten werden sollen, so gewählt, daß sie regioselektiv wieder abgespalten werden können, z. B. kann mit einem organischen Silylrest verethertes Hydroxy im Rest R8 oder R11 mit Fluorid freigesetzt werden, wobei eine Arylmethoxy-Schutzgruppe im Rest R9 oder R12 erhalten bleibt.z. B. when R 12 aryimethoxy, such as benzyloxy, those protecting groups which are to be cleaved after the reaction is chosen so that they can be cleaved regioselectively again, z. For example, hydroxyl etherified with an organic silyl radical can be released in the radical R 8 or R 11 with fluoride, an arylmethoxy protective group being retained in the radical R 9 or R 12 .
Die Ausgangsstoffe der Formel II, worin R2a Wasserstoff bedeutet, werden z. B. aus entsprechenden Verbindungen hergestellt, worin R2aeine Aminoschutzgruppe, z.B. Benzyloxycarbonyl, bedeutet.The starting materials of formula II, wherein R 2a is hydrogen, z. B. from corresponding compounds, wherein R 2a is an amino protecting group, for example benzyloxycarbonyl.
Verfahren b: .Method b :.
Ein reaktionsfähiges Derivat einer Verbindung der Formel III ist z. B. eine Metalloxyverbindung, wie sie z. B. durch Umsetzung einer Verbindung der Formel III mit einer geeigneten Base, wie einem Alkalimetallhydrid oder-amid, erhalten werden kann.A reactive derivative of a compound of formula III is z. For example, a metal oxy compound as z. By reaction of a compound of formula III with a suitable base such as an alkali metal hydride or amide.
Reaktionsfähiges verestertes Hydroxy X ist z. B. mit einer starken anorganischen oder organischen Säure verestertes Hydroxy, wie mit einer Mineralsäure, z. B. Halogenwasserstoffsäure, wie Chlorwasserstoff-, Bromwasserstoff- oder lodwasserstoffsäure, ferner Schwefelsäure, oder Halogenschwefelsäure, z. B. Fl.uorschwefelsäure, oder mit einer stärken organischen Sulfonsäure, wie einer gegebenenfalls, z. B. durch Halogen, wie Fluor, substituierten Niederalkansulfonsäure oder einer aromatischen Sulfonsäure, z. B. einer gegebenenfalls durch Niederalkyl, wie Methyl, Halogen, wie Brom, und/oder Nitro substituierten Benzolsulfonsäure, z. B-. einer Methansulfon-, Trifluormethansulfon- oder p-Toluolsulfonsäure, verestertes Hydroxy, bevorzugterweise ein Chlorid, Bromid oder Iodid.Reactive esterified hydroxy X is z. B. with a strong inorganic or organic acid esterified hydroxy, such as with a mineral acid, eg. As hydrohalic acid, such as hydrochloric, hydrobromic or hydroiodic acid, further sulfuric acid, or halogenated sulfuric acid, eg. B. Fl.uorschwefelsäure, or with a strong organic sulfonic acid, such as an optionally, for. Example by halogen, such as fluorine, substituted lower alkanesulfonic acid or an aromatic sulfonic acid, eg. Example, an optionally substituted by lower alkyl, such as methyl, halogen, such as bromine, and / or nitro substituted benzenesulfonic acid, eg. B-. a methanesulfonic, trifluoromethanesulfonic or p-toluenesulfonic acid, esterified hydroxy, preferably a chloride, bromide or iodide.
Freie funktioneile Gruppen in einer Verbindung der Formel IV, die vorteilhafterweise durch leicht abspaltbare Schutzgruppen geschützt sind, sind insbesondere Hydroxy-, Mercapto- oder Carboxygruppen.Free functional groups in a compound of the formula IV, which are advantageously protected by easily removable protective groups, are in particular hydroxyl, mercapto or carboxy groups.
Die Reaktion wird vorzugsweise in einem inerten organischen Lösungsmittel bei einerTemperaturzwischen -30°Cund +150°C, insbesondere 00C und +1000C, z.B. + 20°Cund +700C, erforderlichenfalls in Gegenwart eines säurebindenden Mittels durchgeführt.The reaction is carried out, if necessary C in the presence of an acid-binding agent, preferably in an inert organic solvent at a temperature between -30 ° C and + 150 ° C, in particular 0 0 C to +100 0 C, for example + 20 ° C and +70 0th
Die Abspaltung von Schutzgruppen, die nicht Bestandteil des gewünschten Endstoffs der Formel I sind, erfolgt wie bei VerfahrenThe removal of protective groups which are not part of the desired end product of the formula I is carried out as in the process
a) beschrieben.a) described.
Verfahren c:Method c:
Ein reaktionsfähiges Carbonsäurederivat einer Verbindung der Formel V, ist in erster Linie ein reaktionsfähiger Ester, ein reaktionsfähiges Anhydrid oder ein reaktionsfähiges cyclisches Amid, worin die Carboxylgruppe in analoger Weise wie bei den bei Verfahren a) beschriebenen reaktionsfähigen Acylierungsmitteln aktiviert ist, und wobei die Aktivierung auch in situ erfolgenA reactive carboxylic acid derivative of a compound of formula V is primarily a reactive ester, a reactive anhydride or a reactive cyclic amide in which the carboxyl group is activated in a manner analogous to the reactive acylating agents described in method a) and wherein the activation also done in situ
In Verbindungen der Formeln V oder Vl gegebenenfalls vorhandene funktionell Gruppen, die vorzugsweise durch leicht abspaltbare Schutzgruppen geschützt werden, sind insbesondere. Amino und Guanidino im Rest R11, Carboxy als Rest R10 und Hydroxy als Rest R9 oder R12, daneben aber auch Hydroxy oder Mercapto fm Rest R8 oder Hydroxy im Rest R11.Functional groups optionally present in compounds of the formulas V or VI are preferably protected by easily removable protecting groups. Amino and guanidino in the radical R 11 , carboxy as the radical R 10 and hydroxy as the radical R 9 or R 12 , but also hydroxy or mercapto fm radical R 8 or hydroxy in the radical R 11 .
In einem reaktionsfähigen Derivat einer Verbindung der Formel Vl ist die Aminogruppe z. B. durch Umsetzung mit einem Phosphit, z. B. Diethylchlorphosphit, 1,1-Phenylen-chlorphosphit, Ethyl-dichlorphosphit, Ethylen-chlor-phosphit oder Tetraethylpyrophosphit, oder durch Bindung an Halogencarbonyl, z. B. Chlorcarbonyl, oder in Form einer Isocyanatgruppe aktiviert. Vorzugsweise wird die Reaktion so durchgeführt, daß man ein reaktionsfähiges Carbonsäurederivat einer Verbindung der Formel V mit einer Verbindung der Formel Vl umsetzt, worin die an der Reaktion teilnehmende Ami no- oder Hy droxygruppe in freier Form vorliegt.In a reactive derivative of a compound of formula VI, the amino group z. B. by reaction with a phosphite, eg. B. diethylchlorophosphite, 1,1-phenylene-chlorophosphite, ethyl-dichlorophosphite, ethylene-chloro-phosphite or tetraethylpyrophosphite, or by bonding to halocarbonyl, z. As chlorocarbonyl, or activated in the form of an isocyanate group. Preferably, the reaction is carried out by reacting a reactive carboxylic acid derivative of a compound of formula V with a compound of formula VI, wherein the participating in the reaction Ami no- or Hy droxygruppe is present in free form.
Die Reaktion und die nachfolgende Abspaltung der Schutzgruppen, die nicht Bestandteil des gewünschten Endstoffes sind, wird analog wie bei Verfahren a) beschrieben durchgeführt.The reaction and the subsequent removal of the protective groups, which are not part of the desired end product, are carried out analogously as described in process a).
Die Veresterung einer Verbindung der Formel V, worin q, rund tfür 1 stehen, kann auch mit Hilfe der bei Verfahren d) beschriebenen Veresterungsmittel durchgeführt werden.The esterification of a compound of the formula V in which q is approximately t for 1 can also be carried out with the aid of the esterification agents described in process d).
Verfahren d:Method d:
In einer Verbindung der Formel VII gegebenenfalls vorhandene freie funktionell Gruppen, die durch leicht abspaltbare Schutzgruppen geschützt sind, sind insbesondere Carboxylgruppen, die nicht verestert werden sollen, und ferner Hydroxy-, Mercapto-, Guanidino und Aminogruppen.In a compound of formula VII optionally present free functional groups which are protected by readily cleavable protecting groups, in particular carboxyl groups which are not to be esterified, and further hydroxy, mercapto, guanidino and amino groups.
Geeignete Schutzgruppen und ihre Abspaltung sind bei Verfahren a) beschrieben.Suitable protecting groups and their cleavage are described in process a).
Ein reaktionsfähiges Carbonsäurederivat einer Verbindung der Formel VII ist insbesondere ein reaktionsfähiger Ester, ein reaktionsfähiges Anhydrid oder ein reaktionsfähiges cyclisches Amid, worin die Carboxylgruppe in analoger Weise wie bei den bei Verfahren a) beschriebenen reaktionsfähigen Acylierungsmitteln aktiviert ist, und wobei die Aktivierung auch in situ erfolgen kann. Vorzugsweise wird die Reaktion so durchgeführt, daß man ein reaktionsfähiges Carbonsäurederivat einer Verbindung derIn particular, a reactive carboxylic acid derivative of a compound of formula VII is a reactive ester, a reactive anhydride or a reactive cyclic amide in which the carboxyl group is activated in a manner analogous to the reactive acylating agents described in method a) and wherein the activation is also in situ can. Preferably, the reaction is carried out by reacting a reactive carboxylic acid derivative of a compound of
Formel VII zur Veresterung von Carboxy R13 mit einer Verbindung H-R9', worin R9' die obengenannten Bedeutungen von R9 mit Ausnahme von Hydroxy und Amino hat, oder, zur Veresterung von Carboxy R10*, mit einem Niederalkanol oder Arylniederalkanol umsetzt.Formula VII for the esterification of carboxy R 13 with a compound HR 9 ', wherein R 9 ' has the abovementioned meanings of R 9 with the exception of hydroxy and amino, or, for the esterification of carboxy R 10 *, with a lower alkanol or aryl-lower alkanol.
Alternativ kann man eine Verbindung der Formel VII mit freier Carboxylgruppe durch Umsetzung mit einem reaktionsfähigen Derivat des als Veresterungskomponente gewünschten Alkohols verestern.Alternatively, a compound of the formula VII having a free carboxyl group can be esterified by reaction with a reactive derivative of the alcohol desired as the esterification component.
Geeignete Mittel zur Veresterung sind beispielsweise entsprechende Diazoverbindungen, wie gegebenenfalls substituierte Diazoniederalkane, z. B. Diazomethan, Diazoethan, Diazo-n-butan oder Diphenyldiazomethan. Diese Reagenzien werden in Gegenwart eines geeigneten inerten Lösungsmittels, wie eines aliphatischen, cycloaliphatischen oder aromatischen Kohlenwasserstoffs, wie Hexan, Cyclohexan, Benzol oder Toluol, eines halogenierten aliphatischen Kohlenwasserstoffs, z. B.Suitable agents for esterification are, for example, corresponding diazo compounds, such as optionally substituted diazonium haloalkanes, eg. As diazomethane, diazoethane, diazo-n-butane or diphenyldiazomethane. These reagents are reacted in the presence of a suitable inert solvent such as an aliphatic, cycloaliphatic or aromatic hydrocarbon such as hexane, cyclohexane, benzene or toluene, a halogenated aliphatic hydrocarbon, e.g. B.
Methylenchlorid, oder eines Ethers, wie eines Diniederalkylethers, z. B. Diethylether, oder eines cyclischen Ethers, ζ. Β.Methylene chloride, or an ether such as a di-lower alkyl ether, e.g. As diethyl ether, or a cyclic ether, ζ. Β.
Tetrahydrofuran oder Dioxan, oder eines Lösungsmittelgemisches, und, je nach Diazoreagens, unter Kühlen, bei Raumtemperatur oder unter leichtem Erwärmen, ferner, wenn notwendig, in einem geschlossenen Gefäß und/oder unter einerTetrahydrofuran or dioxane, or a solvent mixture, and, depending on the diazo reagent, with cooling, at room temperature or with gentle heating, further, if necessary, in a closed vessel and / or under one
Inertgas-, z.B. Stickstoffatmosphäre, zur Anwendung gebracht. f> Inertgas-, eg nitrogen atmosphere, brought to application. f>
Weitere geeignete Mittel zur Verbesserung sind Ester entsprechender Alkohole, in erster Linie solche mit starken anorganischen oder organischen Säuren, wie Mineralsäuren, z. B. Halogenwasserstoffsäuren, wie Chlorwasserstoff-, Bromwasserstoff- oder InHwflQQPrCtnffcäl IfO fornOr ^rhxA/ofolcäl I TO nHor W alnnonerhuiofülcäl irO -J R CIllfM-C^hvA/Qfoleotiro n^orp^ri/an Arn^nm^A«Further suitable means for improving are esters of corresponding alcohols, primarily those with strong inorganic or organic acids, such as mineral acids, eg. For example, hydrohalic acids, such as hydrochloric, hydrobromic, or trifluoric acid, for example, orrn-a-rxA / ofolcal I TO nHor W alnnonerhuiofulcal irO-J R CIllfM-C ^ hvA / Qfoleotiro n ^ orp ^ ri / an Arn ^ nm ^ A «
Sulfonsäuren, wie gegebenenfalls, z. B. durch Halogen, wie Fluor, substituierten Niederalkansulfonsäuren, oder aromatischen Sulfonsäuren, wie z. B. gegebenenfalls durch Niederalkyl, wie Methyl, Halogen, wie Brom, und/oder Nitro substituierten Benzolsulfonsäuren, z. B. Methansulfon-, Trifluormethansulfon- oder p-Toluolsulfonsäure. Solche Ester sind u. a. Niederalkylhalogenide, Diniederalkylsulfate, wie Dimethylsulfat, ferner Fluorsulfonsäureester, wie -niederalkylester, z. B. Fluorsulfonsäuremethylester, oder gegebenenfalls Halqgen-substituierte Methansulfonsäure-niederalkylester, z. B. Trifluormethansulfonsäuremethylester. Sie werden üblicherweise in Gegenwart eines inerten Lösungsmittels, wie eines gegebenenfalls halogenierten, wie chlorierten, aliphatischen, cycloaliphatischen oder aromatischen Kohlenwasserstoffs, z. B. Methylenchlorid, eines Ethers, wie Dioxan oder Tetrahydrofuran, oderreines Gemisches davon verwendet. Dabei wendet man vorzugsweise geeignete Kondensationsmittel, wie Alkalimetallcarbonate oder -hydrogencarbonate, z. B. Natrium- oder Kaliumcarbonat oder -hydrogencarbonat (üblicherweise zusammen mit einem Sulfat), oder organische Basen, wie üblicherweise sterisch gehinderte Triniederalkylamine, z. B. N,N-Diisopropyl.-N-ethyl-amin (vorzugsweise zusammen mit Halogensulfonsäure-niederalkylestem oder gegebenenfalls halogensubstituierten Methansulfonsäureniederalkylestem) an, wobei unter Kühlen, bei Raumtemperatur oder unter Erwärmen, z. B. bei Temperaturen von etwa —20°C bis etwa 500C, und, wenn notwendig, in einem geschlossenen Gefäß und/oder in einer Inertgas-, z. B. Stickstoffatmosphäre, gearbeitet wird. Weitere Mittel zur Veresterung sind entsprechende trisubstituierte Oxoniumsalze (sogenannte Meerweinsalze), oder disubstituierte Carbenium- oder Haloniumsalze, worin die Substituenten die verethernden Reste sind, beispielsweise Triniederalkyloxoniumsalze, sowie Diniederalkoxycarbenium- oder Diniederalkylhaloniumsalze, insbesondere die entsprechenden Salze mit' komplexen, fluorhaltigen Säuren, wie die entsprechenden Tetrafluorborate, Hexafluorphosphate, Hexafluorantimonate, oder Hexachlorantimonate. Solche Reagentien sind z. B. Trimethyloxonium- oder Triethyloxoniumhexafluorantimonat, -hexachlorantimonat, -hexafluorphosphat oder -tetrafluorborat, Dimethoxycarbeniumhexafluorphosphat oder Dimethylbromoniumhexafluorantimonat. Man verwendet diese Mittel vorzugsweise in einem inerten Lösungsmittel, wie einem Ether oder einem ftalogenierten Kohlenwasserstoff, z. B. Diethylether, Tetrahydrofuran oder Methylenchlorid, oder in einem Gemisch davon, wenn notwendig, in Gegenwart einer Base, wie einer organischen Base, z. B. eines, vorzugsweise sterisch gehinderten, Triniederalkylamins, z. B. Ν,Ν-Diisopropyl-N-ethyl-amin, und unter Kühlen, bei Raumtemperatur oder unter leichtem Erwärmen, z. B. bei etwa -20°C bis etwa 50°G, wenn notwendig, in einem geschlossenen Gefäß und/oder in einer Inertgas-, z. B. Stickstoffatmosphäre.Sulfonic acids, as appropriate, e.g. Example, by halogen, such as fluorine, substituted lower alkanesulfonic acids, or aromatic sulfonic acids, such as. B. optionally substituted by lower alkyl, such as methyl, halogen, such as bromine, and / or nitro substituted benzenesulfonic acids, eg. As methanesulfonic, trifluoromethanesulfonic or p-toluenesulfonic acid. Such esters include lower alkyl halides, di-lower alkyl sulfates such as dimethyl sulfate, and fluorosulfonic acid esters such as lower alkyl esters, e.g. As fluorosulfonate, or optionally Halqgen-substituted methanesulfonic acid lower alkyl, z. B. Trifluoromethanesulfonsäuremethylester. They are usually in the presence of an inert solvent, such as an optionally halogenated, such as chlorinated, aliphatic, cycloaliphatic or aromatic hydrocarbon, for. Methylene chloride, an ether such as dioxane or tetrahydrofuran, or a pure mixture thereof. In this case, it is preferable to use suitable condensing agents, such as alkali metal carbonates or bicarbonates, z. For example, sodium or potassium carbonate or bicarbonate (usually together with a sulfate), or organic bases, such as usually hindered Triniederalkylamine, z. N, N-diisopropyl.-N-ethyl-amine (preferably together with halosulfonic acid lower alkyl esters or optionally halogen-substituted methanesulfonic acid lower alkyl esters), with cooling, at room temperature or with heating, e.g. B. at temperatures of about -20 ° C to about 50 0 C, and, if necessary, in a closed vessel and / or in an inert gas, such. As nitrogen atmosphere is worked. Further agents for esterification are corresponding trisubstituted oxonium salts (so-called seaweed salts), or disubstituted carbenium or halonium salts in which the substituents are the etherifying radicals, for example tri-lower alkyloxonium salts, and di-lower alkoxycarbenium or di-lower alkyl halonium salts, in particular the corresponding salts with complex, fluorine-containing acids, such as corresponding tetrafluoroborates, hexafluorophosphates, hexafluoroantimonates, or hexachloroantimonates. Such reagents are for. Trimethyloxonium or triethyloxonium hexafluoroantimonate, hexachloroantimonate, hexafluorophosphate or tetrafluoroborate, dimethoxycarbenium hexafluorophosphate or dimethylbromonium hexafluoroantimonate. It is preferable to use these agents in an inert solvent such as an ether or a halogenated hydrocarbon, e.g. Example, diethyl ether, tetrahydrofuran or methylene chloride, or in a mixture thereof, if necessary, in the presence of a base such as an organic base, for. B. one, preferably sterically hindered, Triniederalkylamins, z. B. Ν, Ν-diisopropyl-N-ethyl-amine, and with cooling, at room temperature or with gentle heating, for. At about -20 ° C to about 50 ° G, if necessary, in a closed vessel and / or in an inert gas, e.g. B. nitrogen atmosphere.
Eine bevorzugte Ausführungsform desVerfahrensd) ist die Umsetzung eines Cäsiumsalzes einer Verbindung der Formel VlI mit dem als Veresterungskomponente gewünschten Alkohol, worin die Hydroxylgruppe in reaktionsfähiger veresterter Form vorliegtA preferred embodiment of process d) is the reaction of a cesium salt of a compound of formula VI with the alcohol desired as the esterification component wherein the hydroxyl group is in a reactive esterified form
Verfahren e: Method e:
Eine Verbindung der Formel I, worin mindestens einer der Reste R8, R9, R10, R11 und R12 in einer geschützten Form vorliegt, die nicht der Definition des gewünschten Endstoffes entspricht, ist insbesondere eine Verbindung der Formel I, worin eine Hydroxyoder-Mercaptogruppe im Rest R8, eine Amino- oder Hydroxygruppe im Rest R11, freies Hydroxy R9 oder R12, und/oder Carboxy R10 durch eine leicht abspaltbare Schutzgruppe geschützt ist, die in dem gewünschten Endstoff nicht enthalten ist. Leicht abspaltbare Schutzgruppen sind insbesondere die bei Verfahren a) genannten. Die Abspaltung der Schutzgruppen wird analog, wie bei Verfahren a) beschrieben, durchgeführtA compound of the formula I in which at least one of the radicals R 8 , R 9 , R 10 , R 11 and R 12 is present in a protected form which does not correspond to the definition of the desired end product is in particular a compound of the formula I in which a Hydroxy or mercapto group in the radical R 8 , an amino or hydroxy group in the radical R 11 , free hydroxy R 9 or R 12 , and / or carboxy R 10 is protected by a readily cleavable protecting group, which is not included in the desired end product. Easily removable protective groups are in particular those mentioned in process a). The cleavage of the protective groups is carried out analogously, as described in process a)
Verfahren f: ' - . Method f: '-.
In einer Verbindung der Formel VIII gegebenenfalls vorhandene freie funktionelle Gruppen, die durch leicht abspaltbare Schutzgruppen geschützt sind, sind insbesondere Carboxylgruppen, die nicht amidiert werden sollen, und ferner Hydroxy-, . Mercapto-, Guanidino und Aminogruppen.In a compound of formula VIII optionally present free functional groups which are protected by readily cleavable protecting groups, in particular carboxyl groups which are not to be amidated, and further hydroxy,. Mercapto, guanidino and amino groups.
Geeignete Schutzgruppen und ihre Abspaltung sind bei Verfahren a) beschrieben. - . 'Suitable protecting groups and their cleavage are described in process a). -. '
Ein reaktionsfähiges Carbonsäurederivat einer Verbindung der Formel VIII ist insbesondere ein reaktionsfähiger Ester, ein reaktionsfähiges Anhydrid oder ein reaktionsfähiges cyclisches Amid, worin die Carboxylgruppe in analoger Weise wie bei den bei Verfahren a) beschriebenen reaktionsfähigen Acylierungsmitteln aktiviert ist, und wobei die Aktivierung auch in situ erfolgen kann. Vorzugsweise wird die Reaktion so durchgeführt, daß man ein reaktionsfähiges Carbonsäurederivat einer Verbindung der Formel VIII mit Ammoniak umsetzt. Alternativ kann man auch eine Verbindung der Formel VIII mit freier Carboxylgruppe mit einem reaktionsfähigen Ammoniakderivat umsetzen, wobei die Aktivierung der Aminogruppe z. B. analog wie bei Verfahren c) beschrieben erfolgt.In particular, a reactive carboxylic acid derivative of a compound of formula VIII is a reactive ester, a reactive anhydride or a reactive cyclic amide in which the carboxyl group is activated in a manner analogous to the reactive acylating agents described in method a) and wherein the activation is also in situ can. Preferably, the reaction is carried out by reacting a reactive carboxylic acid derivative of a compound of formula VIII with ammonia. Alternatively, it is also possible to react a compound of formula VIII with a free carboxyl group with a reactive ammonia derivative, wherein the activation of the amino group z. B. analogously as described in method c).
Die Reaktion und die nachfolgende Abspaltung der Schutzgruppe^, die nicht Bestandteil des gewünschten Endstoffes sind, wird analog wie bei Verfahren a) beschrieben durchgeführt.The reaction and the subsequent cleavage of the protective group, which are not part of the desired end product, are carried out analogously as described in process a).
Zusatzoperationen: Salze von Verbindungen der Formel I mit salzbildenden Gruppen können in an sich bekannter Weise hergestellt werden. So kann man Salze von Verbindungen der Formel I mit sauren Gruppen durch Umsetzung mit einer geeigneten Base,z. B. durch Behandeln mit geeigneten Metallverbindungen, wie Alkalimetallsalzen von geeigneten organischen Carbonsäuren, z. B. dem Natriumsalz der a-Ethyl-carbonsäure, oder mit geeigneten anorganischen Alkali- oder Erdalkalimetallsalzen, insbesondere solchen, die sich von einer schwachen und vorzugsweise flüchtigen Säure ableiten, z. B. Natriumhydrogencarbonat, oder mit Ammoniak oder einem geeigneten organischen Amin bilden, wobei man vorzugsweise stöchiometrische Mengen oder nur einen kleinen Überschuß des salzbildenden Mittels verwendet. Säureadditionssalze von Verbindungen der Formel I erhält man in üblicher Weise, z. B. durch Behandeln mit einer Säure oder einem geeigneten Anionenaustauschreagens. Innere Salze von Verbindungen der Formel I, welche z. B. eine freie Carboxylgruppe und eine freie Aminogruppe enthalten, können z. B. durch Neutralisieren von Salzen, wie Säureadditionssalzen, auf den isoelektrischen Punkt, z.B. mit schwachen Basen, oder durch Behandeln mit flüssigen Ionenaustauschern gebildet werden. Salze können in üblicherweise in die freien Verbindungen übergeführt werden, Metall-und Ammoniumsalze z.B. durch Behandeln mit geeigneten Säuren, und Säureadditionssalze z. B. durch Behandeln mit einem geeigneten basischen Mittel. Gemische von Isomeren können in an sich bekannter Weise, z.B. durch fraktionierte Kristallisation, Chromatographie etc. in die einzelnen Isomeren aufgetrennt werden.Additional operations: Salts of compounds of the formula I with salt-forming groups can be prepared in a manner known per se. Thus, salts of compounds of formula I with acidic groups by reaction with a suitable base, for. By treating with suitable metal compounds, such as alkali metal salts of suitable organic carboxylic acids, e.g. As the sodium salt of a-ethyl-carboxylic acid, or with suitable inorganic alkali or alkaline earth metal salts, especially those derived from a weak and preferably volatile acid, z. As sodium bicarbonate, or form with ammonia or a suitable organic amine, preferably using stoichiometric amounts or only a small excess of the salt-forming agent. Acid addition salts of compounds of the formula I are obtained in a customary manner, for. By treatment with an acid or a suitable anion exchange reagent. Internal salts of compounds of the formula I, which z. B. contain a free carboxyl group and a free amino group, z. By neutralizing salts, such as acid addition salts, to the isoelectric point, e.g. with weak bases, or by treatment with liquid ion exchangers. Salts can usually be converted to the free compounds, metal and ammonium salts e.g. by treatment with suitable acids, and acid addition salts e.g. By treating with a suitable basic agent. Mixtures of isomers may be prepared in a manner known per se, e.g. fractionated crystallization, chromatography etc. are separated into the individual isomers.
Die oben beschriebenen Verfahren, inklusive die Verfahren zur Abspaltung von Schutzgruppen und die zusätzlichen Verfahrensmaßnahmen, werden, wenn nicht anders angegeben, in an sich bekannter Weise, z. B. in An- oder Abwesenheit von vorzugsweise inerten Lösungs- und Verdünnungsmitteln, wenn notwendig, in Anwesenheit von Kondensationsmitteln oder Katalysatoren, bei erniedrigter oder erhöhter Temperatur, z.B. in einem Temperaturbereich von etwa -200C bis etwa +15O0C, insbesondere von etwa O0C bis etwa +7O0C, vorzugsweise von etwa +1O0C bis etwa +400C, hauptsächlich bei Raumtemperatur,The methods described above, including the methods for deprotection and the additional process measures are, unless otherwise stated, in a conventional manner, for. B. in the presence or absence of preferably inert solvents and diluents, if necessary, in the presence of condensing agents or catalysts, at reduced or elevated temperature, for example in a temperature range from about -20 0 C to about + 15O 0 C, in particular of about 0 ° C to about + 7O 0 C, preferably from about + 1O 0 C to about +40 0 C, principally at room temperature,
Dabei sind unter Berücksichtigung aller im Molekül befindlichen Substituenten, wenn erforderlich, z. B. bei Anwesenheit leicht hydrolysierbarer Reste, besonders schonende Reaktionsbedingungen, wie kurze Reaktionszeiten, Verwendung von milden sauren oder basischen Mitteln in niedriger Konzentration, stöchiometrische Mengenverhältnisse, Wahl geeigneter Katalysatoren, Lösungsmittel, Temperatur-und/oder Druckbedingungen, anzuwenden.Taking into account all substituents in the molecule, if necessary, z. B. in the presence of easily hydrolyzable radicals, particularly gentle reaction conditions, such as short reaction times, use of mild acidic or basic agents in low concentration, stoichiometric proportions, choice of suitable catalysts, solvents, temperature and / or pressure conditions apply.
Die Erfindung betrifft auch diejenigen Ausführungsformen des Verfahrens, bei denen man von einer auf irgendeiner Stufe des Verfahrens als Zwischenprodukt erhältlichen Verbindung ausgeht und die fehlenden Verfahrensschritte durchführt oder das Verfahren auf irgendeiner Stufe abbricht oder einen Ausgangsstoff unter den Reaktionsbedingungen bildet oder in Form eines reaktionsfähigen Derivats oder Salzes verwendet. Dabei geht man vorzugsweise von solchen Ausgangsstoffen aus, die verfahrensgemäß zu den oben als besonders wertvoll beschriebenen Verbindungen führen.The invention also relates to those embodiments of the process starting from a compound obtainable as intermediate at any stage of the process and carrying out the missing process steps or breaking off the process at any stage or forming a starting material under the reaction conditions or in the form of a reactive derivative or Salt used. In this case, it is preferable to start from such starting materials, which according to the method lead to the compounds described above as being particularly valuable.
Neue Ausgangsstoffe und/oder Zwischenprodukte sowie Verfahren zu ihrer Herstellung sind ebenfalls Gegenstand der vorliegenden Erfindung. Vorzugsweise werden solche Ausgangsstoffe verwendet und die Reaktionsbedingungen so gewählt, daß man zu den in dieser Anmeldung als besonders bevorzugt aufgeführten Verbindungen gelangt. Die Erfindung betrifft auch pharmazeutische Präparate, die eine wirksame Menge, insbesondere eine zur Prophylaxe oder Therapie von Virusinfektionen oder eine zurTherapie von Tumorerkrankungen wirksame Menge, der Aktivsubstanz zusammen mit pharmazeutisch verwendbaren Trägerstoffen enthalten, die sich zurtropischen, z. B. intranasalen, enteralen, z. B. oralen oder rektalen, oder parenteralen Verabreichung eignen, und anorganisch oder organisch, fest oder flüssig sein können. So verwendet man Tabletten oder Gelatinekapseln, welche den Wirkstoff zusammen mit Verdünnungsmitteln, z. B. Lactose, Dextrose, Sukrose, Mannitol, Sorbitol, Cellulose und/oder Glycerin, und/oder Schmiermitteln, z. B. Kieselerde, Talk, Stearinsäure oder Salze davon, wie Magnesium- oder Caleiumstearat, und/oder Polyethylenglykol, enthalten. Tabletten können ebenfalls Bindemittel, z. B. Magnesiumaluminiumsilikat, Stärken, wie Mais-, Weizen- oder Reisstärke, Gelatine, Methylcellulose, Natriumcarboxymethylcellulose und/oder Polyvinylpyrrolidon, und, wenn erwünscht, Sprengmittel, z. B. Stärken, Agar, Alginsäure oder ein Salz davon, wie Natriumalginat, und/oder Brausemischungen, oder Adsorptionsmittel, Farbstoffe, Geschmackstoffe und Süßmittel enthalten. Ferner kann man die pharmakologisch wirksamen Verbindungen der vorliegenden Erfindung in Form von parenteral verabreichbaren Präparaten oder von Infusionslösungen verwenden. Solche Lösungen sind vorzugsweise isotonische wäßrige Lösungen oder Suspensionen, wobei diese z. B. bei lyophilisierten Präparaten, welche die Wirksubstanz allein oder zusammen mit einem Trägermaterial, z. B. Mannit, enthalten, vor Gebrauch hergestellt werden können. Die pharmazeutischen Präparate können sterilisiert sein und/oder Hilfsstoffe, z. B. Konservier-, Stabilisier-, Netz- und/oder Emulgiermittel, Löslichkeitsvermittler, Salze zur Regulierung des osmotischen Drucks und/oder Puffer enthalten. Die vorliegenden pharmazeutischen Präparate, die, wenn erwünscht, weitere pharmakologisch wirksame Stoffe, wie Antibiotika, enthalten können, werden in an sich bekannter Weise, z. B. mittels konventioneller Misch-, Granulier-, Dragier-, Lösungs- oder Lyophilisierungsverfahren, hergestellt und enthalten von etwa 0,001 % bis 20%, insbesondere von etwa 0,01 % bis etwa 10%, in erster Linie zwischen 0,1 % und 5%, des bzw. der Aktivstoffe, wobei eine Wirkstoff konzentration unterhalb von 1 % insbesondere fürtopisch zu applizierende Präparate .geeignet ist.Novel starting materials and / or intermediates and processes for their preparation are also the subject of the present invention. Preferably, such starting materials are used and the reaction conditions are chosen so as to arrive at the compounds listed in this application as being particularly preferred. The invention also relates to pharmaceutical preparations which contain an effective amount, in particular an effective amount for the prophylaxis or therapy of viral infections or for the treatment of tumorous diseases, the active substance together with pharmaceutically acceptable excipients, the zurtropischen, z. B. intranasal, enteral, z. As oral or rectal, or parenteral administration, and may be inorganic or organic, solid or liquid. Thus, one uses tablets or gelatin capsules containing the active ingredient together with diluents, for. Lactose, dextrose, sucrose, mannitol, sorbitol, cellulose and / or glycerol, and / or lubricants, e.g. For example, silica, talc, stearic acid or salts thereof, such as magnesium or Caleiumstearat, and / or polyethylene glycol. Tablets may also bind, e.g. Magnesium aluminum silicate, starches such as corn, wheat or rice starch, gelatin, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and / or polyvinylpyrrolidone, and, if desired, disintegrants, e.g. For example, starches, agar, alginic acid or a salt thereof, such as sodium alginate, and / or effervescent mixtures, or adsorbents, dyes, flavorings and sweeteners. Further, the pharmacologically active compounds of the present invention may be used in the form of parenterally administrable preparations or infusion solutions. Such solutions are preferably isotonic aqueous solutions or suspensions, these z. As in lyophilized preparations containing the active substance alone or together with a carrier material, for. As mannitol, can be prepared before use. The pharmaceutical preparations may be sterilized and / or adjuvants, eg. As preservatives, stabilizers, wetting agents and / or emulsifiers, solubilizers, salts for regulating the osmotic pressure and / or buffers. The present pharmaceutical preparations which, if desired, may contain other pharmacologically active substances, such as antibiotics, are prepared in a manner known per se, for. Example by means of conventional mixing, granulation, coating, solution or lyophilization process, prepared and contain from about 0.001% to 20%, in particular from about 0.01% to about 10%, primarily between 0.1% and 5%, of the active substance (s), where an active ingredient concentration below 1% is suitable in particular for preparations to be applied topically.
Als topisch zu applizierende Darreichungsformen sind die folgenden bevorzugt: Cremes, Salben oder Pasten mit einem Wirkstoff gehalt von 0,001 % bis 1 %, insbesondere von 0,01 % bis 0,1 %, z. B. 0,05%, z. B. Salben zur intranasalen Applikation oder Lippenstifte, oder wäßrige Lösungen mit einem Wirkstoffgehalt von 0,001 % bis 1%, insbesondere 0,05% bis 0,5%, z. B. 0,1 %, vorzugsweise isotonische, sterile und physiologisch verträgliche Lösungen, z. B. Augentropfen, vorzugsweise in Mikrobehältern zur einmaligen Verwendung, oder Sprays zur Anwendung im Mund- und Rachenraum. Besonders geeignet sind die in den Beispielen beschriebenen pharmazeutischen Präparate.As topically applied dosage forms, the following are preferred: creams, ointments or pastes with an active ingredient content of 0.001% to 1%, in particular from 0.01% to 0.1%, z. B. 0.05%, z. As ointments for intranasal administration or lipsticks, or aqueous solutions with an active ingredient content of 0.001% to 1%, in particular 0.05% to 0.5%, z. B. 0.1%, preferably isotonic, sterile and physiologically acceptable solutions, eg. As eye drops, preferably in micro-containers for single use, or sprays for use in the oropharynx. Particularly suitable are the pharmaceutical preparations described in the examples.
Cremes sind Öl-in-Wasser-Emulsionen, die mehr als 50% Wasser aufweisen. Als ölige Grundlage verwendet man in erster Linie Fettalkohole, z. B. Lauryl-, Cetyl- oder Stearylalkohole, Fettsäuren, z. B. Palmitin- oder Stearinsäure, flüssige bis feste Wachse, z. B. Isopropylmyristat, Wollwachs oder Bienenwachs, und/oder Kohlenwasserstoffe, z. B. Vaseline (Petrolatum) oder Paraffinöl. Als Emulgatoren kommen oberflächenaktive Substanzen mit vorwiegend hydrophilen Eigenschaften in Frage, wie entsprechende nichtionische Emulgatoren, z.B. Fettsäureester von Polyalkoholen oder Ethyienoxidaddukte davon, wie Polyglycerinfettsäureester oder Polyoxyethylensorbitan-fettsäureester (Tweens), ferner Polyoxyethylen-fettalkoholether oder -fettsäureester, oder entsprechende ionische Emulgatoren, wie Alkalimetallsalze von Fettalkoholsulfaten, z. B. Natriumlaurylsulfat, Natriumcetylsulfat oder Natriumstearylsulfat, die man üblicherweise in Gegenwart von Fettalkoholen, z. B. Cetylalkohol oder Stearylalkohol, verwendet. Zusätze zur Wasserphase sind u.a. Mittel, welche die Austrocknung der Cremes vermindern, z. B. Polyalkohol, wie Glycerin, Sorbit, Propylenglykol und/oder Polyethylenglykole, ferner Konservierungsmittel, Riechstoffe, etc.Creams are oil-in-water emulsions that contain more than 50% water. As an oily basis are used primarily fatty alcohols, eg. For example, lauryl, cetyl or Stearylalkohole, fatty acids, eg. As palmitic or stearic, liquid to solid waxes, z. Isopropyl myristate, wool wax or beeswax, and / or hydrocarbons, e.g. Vaseline (petrolatum) or paraffin oil. Suitable emulsifiers are surface-active substances with predominantly hydrophilic properties, such as corresponding nonionic emulsifiers, e.g. Fatty acid esters of polyhydric alcohols or ethylene oxide adducts thereof, such as polyglycerol fatty acid esters or polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters (Tweens), also polyoxyethylene fatty alcohol ethers or fatty acid esters, or corresponding ionic emulsifiers, such as alkali metal salts of fatty alcohol sulfates, e.g. For example, sodium lauryl sulfate, sodium cetyl sulfate or sodium stearyl sulfate, which is usually in the presence of fatty alcohols, eg. As cetyl alcohol or stearyl alcohol used. Additives to the water phase are u.a. Agents that reduce the drying of the creams, z. As polyhydric alcohol, such as glycerol, sorbitol, propylene glycol and / or polyethylene glycols, preservatives, fragrances, etc.
Salben sind Wasser-in-Öl-Emulsionen, die bis zu 70%, vorzugsweise jedoch von etwa 20% bis etwa 50% Wasser oder wäßrige Phase enthalten. Als Fettphase kommen in erster Linie Kohlenwasserstoffe, z. B. Vaseline, Paraffinöl und/oder Hartparaffine in Frage, die zur Verbesserung des Wasserbindungsvermögens vorzugsweise geeignete Hydroxyverbindungen, wie Fettalkohole oder Ester davon, z. B. Cetylalkohol oder Wollwachsalkohole, bzw. Wollwachs, enthalten. Emulgatoren sind entsprechende lipophile Substanzen, wie Sorbitanfettsäureester (Spans), z. B. Sorbitanoleat und/oder Sorbitanisostearat. Zusätze von Wasserphase sind z.B. Feuchthaltungsmittel, wie Polyalkohole, z.B. Glycerin, Propylenglykol, Sorbit und/oder Polyethylenglykol, wie Konservierungsmittel, Riechstoffe, etc.Ointments are water-in-oil emulsions containing up to 70%, but preferably from about 20% to about 50% water or aqueous phase. As the fatty phase come primarily hydrocarbons, eg. As petroleum jelly, paraffin oil and / or hard paraffins in question, which are preferably suitable for improving the water binding capacity hydroxy compounds, such as fatty alcohols or esters thereof, for. As cetyl alcohol or wool wax alcohols, or wool wax included. Emulsifiers are corresponding lipophilic substances, such as sorbitan fatty acid esters (Spans), z. B. sorbitan oleate and / or sorbitan isostearate. Additions of water phase are e.g. Humectants, such as polyalcohols, e.g. Glycerol, propylene glycol, sorbitol and / or polyethylene glycol, such as preservatives, fragrances, etc.
Fettsalben sind wasserfrei und enthalten als Grundlage insbesondere Kohlenwasserstoffe, z. B. Paraffin, Vaseline und/oder flüssige Paraffine, ferner natürliche oder partialsynthetische Fette, z. B. Kokosfettsäuretriglycerid, oder vorzugsweise gehärtete Öle, z. B. hydriertes Erdnuß- oder Rizinusöl, ferner Fettsäurepartialester des Glycerins, ζ. B. Glycerinmono- und -distearat, sowie z. B. die im Zusammenhang mit den Salben erwähnten, die Wasserstoffaufnahmefähigkeit steigernden Fettalkohole, Emulgatoren und/oder Zusätze.Fatty ointments are anhydrous and contain as a basis in particular hydrocarbons, eg. As paraffin, vaseline and / or liquid paraffins, also natural or partially synthetic fats, eg. Coconut fatty acid triglyceride, or preferably hardened oils, e.g. B. hydrogenated peanut or castor oil, also fatty acid partial esters of glycerol, ζ. B. glycerol mono- and distearate, and z. As mentioned in connection with the ointments, the hydrogen absorbing capacity-increasing fatty alcohols, emulsifiers and / or additives.
Pasten sind Cremes und Salben mit sekretabsorbierenden Puderbestandteilen, wie Metalloxiden, z. B. Titanoxid oder Zinkoxid, ferner Talk und/oder Aluminiumsilikate, welche die Aufgabe haben, vorhandene Feuchtigkeit oder Sekrete zu binden. Schäume werden aus Druckbehältern verabreicht und sind in Aerosolform vorliegende flüssige ÖI-in-Wasser-Emulsioneh, wobei halogenierte Kohlenwasserstoffe, wie Chlorfluomiederalkane, z. B. Dichlordifluormethan und Dichlortetrafluorethan, als Treibmittel verwendet werden. Als Ölphase verwendet man u.a. Kohlenwasserstoffe, z. B. Paraffinöl, Fettalkohole, z. B. Cetylalkohol, Fettsäureester, z. B. Isopropylmyristat, und/oder andere Wachse. Als Emulgatoren verwendet man u. a. GemischePastes are creams and ointments with secretion-absorbing powder constituents, such as metal oxides, eg. As titanium oxide or zinc oxide, further talc and / or aluminum silicates, which have the task of binding existing moisture or secretions. Foams are administered from pressure vessels and are aerosolized liquid oil-in-water emulsions wherein halogenated hydrocarbons such as chlorofluoro-lower alkanes, e.g. As dichlorodifluoromethane and dichlorotetrafluoroethane, can be used as a blowing agent. As the oil phase u.a. Hydrocarbons, eg. As paraffin oil, fatty alcohols, eg. For example, cetyl alcohol, fatty acid esters, e.g. As isopropyl myristate, and / or other waxes. As emulsifiers u u. a. mixtures
von solchen mit vorwiegend hydrophilen Eigenschaften, wie Polyoxyethylen-sorbitan-fettsäureester(Tweens), und solchen mit vorwiegend lipophilen Eigenschaften, wie Sorbitanfettsäureester (Spans). Dazu kommen die üblichen Zusätze, wie Konservierungsmittel, etc.those having predominantly hydrophilic properties, such as polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters (Tweens), and those having predominantly lipophilic properties, such as sorbitan fatty acid esters (Spans). There are also the usual additives, such as preservatives, etc.
Tinkturen und Lösungen weisen meistens eine wäßrig-ethanolische Grundlage auf, der u. a. Polyalkohole, z. B. Glycerin, Glykole, und/oder Polyethylenglykol, als Feuchthaltemittel zur Herabsetzung der Verdunstung, und rückfettende Substanzen, wie Fettsäureester mit niedrigen Polyethylenglykolen, d. h. im wäßrigen Gemisch lösliche, lipophile Substanzen als Ersatz für die der Haut mit dem Ethanol entzogenen Fettsubstanzen, und, falls notwendig, andere Hilfs- und Zusatzmittel beigegeben sind. Die Herstellung der topisch verwendbaren pharmazeutischen Präparate erfolgt in an sich bekannter Weise, z. B. durch Lösen oder Suspendieren des Wirkstoffes in der Grundlage oder in einem Teil davon, falls notwendig. Bei Verarbeitung des Wirkstoffes als Lösung wird dieser in der Regel vor der Emulgierung in einer der beiden Phasen gelöst; bei Verarbeitung als Suspension wird er nach der Emulgierung mit einem Teil der Grundlage vermischt und dann dem Rest der Formulierung beigegeben.Tinctures and solutions usually have an aqueous-ethanolic basis, the u. a. Polyalcohols, for. As glycerol, glycols, and / or polyethylene glycol, as humectants to reduce evaporation, and refatting substances such as fatty acid esters with low polyethylene glycols, d. H. soluble in aqueous mixture, lipophilic substances as a substitute for the skin with the ethanol extracted fatty substances, and, if necessary, other auxiliaries and additives are added. The preparation of the topically usable pharmaceutical preparations is carried out in a conventional manner, for. By dissolving or suspending the active ingredient in the base or in a part thereof, if necessary. When processing the active ingredient as a solution this is usually dissolved before emulsification in one of the two phases; when processed as a suspension, it is mixed after emulsification with part of the base and then added to the remainder of the formulation.
Ausführungsbeispielembodiment
Die nachfolgenden Beispiele illustrieren die Erfindung, ohne sie in irgendeiner Form einzuschränken. Die Rf-Werte werden auf Kieselgeldünnschichtplatten (Firma Merck, Darmstadt, Deutschland) ermittelt. Das Verhältnis der Lauf mittel in den verwendeten Laufmittelgemischen zueinander ist in Volumenanteilen (V/V), Temperaturen sind in Grad Celsius angegeben. Die Konzentration, c, der Substanz im Lösungsmittel(gemisch) ist im Fälle der optischen Drehung in % (Gewicht/Volumen) angegeben.The following examples illustrate the invention without limiting it in any way. The Rf values are determined on silica gel thin-layer plates (Merck, Darmstadt, Germany). The ratio of the running agent in the solvent mixtures used is in volume fractions (V / V), temperatures are given in degrees Celsius. The concentration, c, of the substance in the solvent (mixture) is given in% (weight / volume) in the case of optical rotation.
11,4g (16,77 mMol) N-Propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzhydrylester (α,/3-Gemisch), der 1,17 Mol Wasser enthält, werden in 120ml absolutem Pyridin gelöst. Die so erhaltene Lösung wird mit 7,6ml (80,3 mMol) Essigsäureanhydrid versetzt und 92 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird die gelbliche Lösung im Hochvakuum bei 40° eingedampft. Das so erhaltene Rohprodukt wird mit 100ml Diethylether verrieben und die so entstehende Suspension 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Dann werden die gebildeten Kristalle abgesaugt und mit Diethylether nachgewaschen.11.4 g (16.77 mmol) of N-propionyl-demethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester (α, / 3 mixture) containing 1.17 mol of water are dissolved in 120 ml of absolute pyridine. The solution thus obtained is treated with 7.6 ml (80.3 mmol) of acetic anhydride and stirred for 92 hours at room temperature. Thereafter, the yellowish solution is evaporated in a high vacuum at 40 °. The crude product thus obtained is triturated with 100 ml of diethyl ether and the resulting suspension is stirred for 2 hours at room temperature. Then, the crystals formed are filtered off with suction and washed with diethyl ether.
Nach zweimaligerUmkristallisation aus Essigsäureethylester-Isopropanol-Diethylether (100:5:40) erhält man eine I.Fraktion chromatographisch reinen 1 ^,ö-Tri-O-acetyl-N-propioriyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzhydrylester (a, ^-Gemisch) in Form farbloser Kristalle vom Smp. 165-1660C.After two recrystallizations from ethyl acetate-isopropanol-diethyl ether (100: 5: 40), one obtains an I.Fraction of chromatographically pure 1 ^, ö-tri-O-acetyl-N-propioriyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester ( a, ^ mixture) in the form of colorless crystals of mp. 165-166 0 C.
Die Mutterlaugen der Umkristallisationen werden vereinigt und im Vakuum eingedampft. Den so erhaltenen Rückstand reinigt man durch Säulenchromatographie an 600g Kieselgel (Typ 60, reinst, Merck; 0,063-0,2mm) im System Chloroform-Ethanol (9:1) (10ml Fraktionen).The mother liquors of the recrystallizations are combined and evaporated in vacuo. The residue thus obtained is purified by column chromatography on 600 g of silica gel (type 60, very pure, Merck, 0.063-0.2 mm) in the system chloroform-ethanol (9: 1) (10 ml fractions).
Die Fraktionen 217-310 werden vereinigt und im Vakuum eingedampft. Man erhält eine 2. Fraktion chromatographisch reinen lAe-Tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzhydrylester (α, ^-Gemisch), die zusammen mit der 1. Fraktion in 200 ml absolutem Methanol gelöst wird. Die so erhaltene, leicht trübe Lösung wird dann durch ein Milliporefilter (Fluoropore, PTFE, 0,2/xm) filtriert und das klare Filtrat im Vakuum bei 4O0C eingedampft. Der Rückstand wird anschließend in 50ml absolutem Essigsäureethylester gelöst, der zuvor durch ein Milliporefilter (Fluoropore, PTFE, 0,2μηι) filtriert worden ist, und durch Zugabe von 20ml absolutem Diethylether, der ebenfalls durch ein Milliporefilter filtriert worden ist, kristallisiert und mit filtriertem, absolutem Diethylether nachgewaschen. Man erhält 1,4,6-Tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmu ramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzhydrylester (<*, /3-Gemisch) in Form farbloser Kristalle vom Smp. 165-166°C, die noch 0,27MoI Wasser enthalten.Fractions 217-310 are combined and evaporated in vacuo. This gives a second fraction of pure lAe-tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester (α, ^ mixture), which together with the 1st fraction in 200 ml of absolute Methanol is dissolved. The solution thus obtained, lightly cloudy is then filtered through a Millipore filter (Fluoropore PTFE, 0.2 / xm) and evaporated the clear filtrate in vacuo at 4O 0 C. The residue is then dissolved in 50 ml of absolute ethyl acetate, which has been previously filtered through a Millipore filter (Fluoropore, PTFE, 0.2μηι), and by addition of 20ml of absolute diethyl ether, which has also been filtered through a Millipore filter, crystallized and filtered with, rinsed with absolute diethyl ether. This gives 1,4,6-tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmu ramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester (<*, / 3 mixture) in the form of colorless crystals of mp. 165-166 ° C, which still contain 0.27MoI of water.
C38H48N4Oi4 -0,27H2O (789,68) 'C 38 H 48 N 4 Oi 4 -0,27H 2 O (789.68) '
Ber. C57,80 H6,22 N7,10 028,91 H2O0,62Ber. C57,80 H6,22 N7,10 028,91 H 2 O0,62
Gef. C57,91 H6,20 N7,11 028,77 H2O0,62Found. C57,91 H6,20 N7,11 028.77 H 2 O0,62
[a]l° = +32,7 ± 2,1° (c = 0,486; Methanol) R, = 0,28 (Chloroform: Methanol = 9:1), Rf = 0,70 (Chloroform:Methanol = 4:1). [a] l ° = +32.7 ± 2.1 ° (c = 0.486, methanol) R, = 0.28 (chloroform: methanol = 9: 1), R f = 0.70 (chloroform: methanol = 4 :1).
Ein weiteres Produkt erhält man aus den Fraktionen 105-140 der oben beschriebenen Säulenchromatographie.Another product is obtained from fractions 105-140 of the above-described column chromatography.
Der nach dem Eindampfen im Vakuum erhaltene gelbe Rückstand (0,55g, Schaum) wird in Cyclohexan-Diethylether-Methylenchlorid (10:30:5) heiß gelöst und die so erhaltene Lösung auf Raumtemperatur abgekühlt. Dabei scheidet sich ein gelbes Öl ab, das nach Abdekantieren des Lösungsmittels V2 Stunde mit 50 ml absolutem Diethylether verrührt wird. Die so erhaltenen Kristalle werden abgenutscht und mit absolutem Diethylether nachgewaschen.The yellow residue obtained after evaporation in vacuo (0.55 g, foam) is dissolved in cyclohexane-diethyl ether-methylene chloride (10: 30: 5) hot and the resulting solution cooled to room temperature. This separates out a yellow oil, which is stirred after decanting the solvent for 2 hours with 50 ml of absolute diethyl ether. The resulting crystals are filtered off with suction and washed with absolute diethyl ether.
Die Kristalle werden dann in 100ml tert.-Butanol-Wasser (1:1) gelöst. Die so erhaltene Lösung wird durch ein Milliporefilter (Fluoropore, PTFE, 0,2μηι) filtriert und lyophilisiert.The crystals are then dissolved in 100 ml of tert-butanol-water (1: 1). The solution thus obtained is filtered through a Millipore filter (Fluoropore, PTFE, 0.2μηι) and lyophilized.
Man erhält laAe-Tri-O-acetyl^-desoxy^-propionylamino-D-mannos-S-O-yl-acetyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzhydrylester als farbloses Pulver, das 1,11 Mol Wasser enthält.There is obtained laAe-tri-O-acetyl ^ -deoxy ^ -propionylamino-D-mannos-S-O-yl-acetyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester as a colorless powder containing 1.11 moles of water.
C38H48NiO14 1,11 H2O (804,81)C 38 H 48 NiO 14 1.11 H 2 O (804.81)
Ber. C56,71 H 6,31 N6,96 030,03 H2O2,48Ber. C 56.71 H 6.31 N 6.96 030.03 H 2 O 2.48
Gef. C 56,94 H 6,36 N 7,22 030,15 H2O 2,48C, 56.94, H, 6.36, N, 7.22, 030, 15, H, 2, O 2.48
Ho0 = +5,5 + 2,7° (c = 0,365; Methanol), Rf = 0,49 (Chloroform: Methanol = 9:1), Rf = 0,79 (Chloroform:Methanol = 4:1).Ho 0 = + 5.5 + 2.7 ° (c = 0.365, methanol), R f = 0.49 (chloroform: methanol = 9: 1), R f = 0.79 (chloroform: methanol = 4: 1 ).
Das Ausgangsmaterial erhält man wie folgt:The starting material is obtained as follows:
Stufe 1.1: 16,0 g (31,63 mMoI) N-Propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin, das 0,74MoI Wasser enthält, werden in 300 ml Methanol-Dimethoxyethan (1:1) gelöst und anschließend mit 9,2 g (47,4mMol) Diphenyldiazomethan versetzt. Das Ganze wird 20 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nach 20, 44 und 68 Stunden werden noch jeweils 4,6g (23,7 mMol) Diphenyldiazomethan zugegeben. Nach beendeter Reaktion (90 Stunden) wird die rote Lösung im Vakuum bei 400C zur Trockne eingedampft, das so erhaltene rote Harz mit 300ml absolutem Diethylether versetzt und V2 Stunde bei RaumtemperaturStep 1.1: 16.0 g (31.63 mmol) of N-propionyl-demethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine containing 0.74 mol of water are dissolved in 300 ml of methanol-dimethoxyethane (1: 1) and then washed with 9.2 g (47.4 mmol) of diphenyldiazomethane are added. The whole is stirred for 20 hours at room temperature. After 20, 44 and 68 hours, 4.6 g (23.7 mmol) of diphenyldiazomethane are added in each case. After completion of the reaction (90 hours), the red solution is evaporated to dryness in vacuo at 40 0 C, added to the resulting red resin with 300ml of absolute diethyl ether and V2 hour at room temperature
gerührt. touched.
Man erhält farblose Kristalle, die abgenutscht und mit Diethylether nachgewaschen werden.This gives colorless crystals, which are suction filtered and washed with diethyl ether.
Nach Umkristallisation aus 400ml Aceton erhält man N-Propionyl-desmethylmuramyl-L-alanin-D-isoglutamin-benzhydrylester in Form farbloser Kristalle vom Smp. 188-190°C(Zers.), die 1,17 Mol Wasser enthalten.Recrystallization from 400 ml of acetone gives N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanine-D-isoglutamine-benzhydryl ester in the form of colorless crystals of mp. 188-190 ° C (dec.), Which contain 1.17 mol of water.
C32H42N4O11-1,17H2O (679,78) . · .C 32 H 42 N 4 O 11 -1.17 H 2 O (679.78). ·.
Ber. · C56,55 H6,60 N8,24 028,63 H2O3,09Ber. · C56,55 H6,60 N8,24 028.63 H2 O3,09
Gef. C 56,67 H 6,67 N 8,43 028,65 H2O 3,09Gef. C 56.67 H 6.67 N 8.43 028.65 H 2 O 3.09
[a]§° = +7,5 ± 0,1° (c = 0,898; Methanol), R, = 0,62 (Chloroform:Methanoi:Wasser = 70:30:5), R, = 0,62 (Chloroform:Methanol = 7:3).[a] § ° = + 7.5 ± 0.1 ° (c = 0.898, methanol), R, = 0.62 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5), R, = 0.62 ( Chloroform: methanol = 7: 3).
Beispiel 2: 2,33g (3,8mMol) N-Propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzylester, der noch 1,59MoI Wasser enthält, werden in 24ml absolutem Pyridin gelöst, dann 1,4ml (14,8 mMol) Essigsäureanhydrid zugegeben und die so erhaltene Lösung wird 16 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wird die farblose Lösung im Hochvakuum bei 300C eingedampft. Man erhält einen leicht gelben Schaum, der durch Säulenchromatographie an 400g Kieselgel (Typ 60, reinst, Merck; 0,063-0,2 mm) im System Chloroform-Ethanol (9:1) gereinigt wird (10 ml Fraktionen), wobei man nacheinander das /3-Anomere, das α,/3-Anomerengemisch und das a-Anomere des 1,4,6-Tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzylesters eluiert.Example 2: 2.33 g (3.8 mmol) of N-propionyl-demethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzyl ester, which still contains 1.59 mol of water, are dissolved in 24 ml of absolute pyridine, then 1.4 ml (14.8 mmol) acetic anhydride, and the resulting solution is stirred at room temperature for 16 hours. Subsequently, the colorless solution is evaporated in a high vacuum at 30 0 C. A slightly yellow foam is obtained, which is purified by column chromatography on 400 g of silica gel (type 60, very pure, Merck, 0.063-0.2 mm) in the system chloroform-ethanol (9: 1) (10 ml fractions) / 3-anomers, the α, / 3 anomeric mixture and the α-anomer of 1,4,6-tri-O-acetyl-N-propionyl-demethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzyl ester.
Die Fraktionen 112-126 (/3-Anomeres), 127-190 (α,/3-Gemisch) und 191-260 (a-Anomeres) werden jeweils vereinigt und im Hochvakuum bei 30°C eingedampft. ·The fractions 112-126 (/ 3-anomeres), 127-190 (α, / 3 mixture) and 191-260 (α-anomeres) are each combined and evaporated under high vacuum at 30 ° C. ·
Der Rückstand der Fraktionen 112-126 wird aus 60 ml Chloroform :Diethylether (1:5) kristallisiert. Man erhält 1/3,4,6-Tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzylester in Form farbloser Kristalle vom Smp. 189-1900C. Die Kristalle werden'anschließend in 100ml doppelt destilliertem Wasser-tert.Butanol (1:1) gelöst. Die so erhaltene Lösung wird durch ein Milliporefilter (Fluoropore, PTFE, 0,2^m) filtriert u'sd im Hochvakuum lyophilisiert. Man erhält 1/3,4,6-Tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzylester als farbloses Pulver, das 1,21 Mol Wasser enthält. C32H44N4O14 '1,21 H2O (730,52)The residue of fractions 112-126 is crystallized from 60 ml of chloroform: diethyl ether (1: 5). This gives 1 / 3,4,6-tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzyl ester in the form of colorless crystals, mp. 189-190 0 C. The crystals are'anschließend in Dissolved 100 ml of double-distilled water-tert-butanol (1: 1). The resulting solution is filtered through a Millipore filter (Fluoropore, PTFE, 0.2M) and lyophilized under high vacuum. This gives 1 / 3,4,6-tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzyl ester as a colorless powder containing 1.21 mol of water. C 32 H 44 N 4 O 14 '1.21 H 2 O (730.52)
Ber. C 52,62 H 6,43 N 7,67 033,30 H2O 2,98Ber. C, 52.62, H, 6.43, N, 7.67, 033.30, H 2 O, 2.98
Gef. C 52,97 H 6,27 N 7,86 033,24 H2O 2,98Found C 52.97 H 6.27 N 7.86 033.24 H 2 O 2.98
[a]g° = +14,3 ± 4,2° (c = 0,237; Dimethylformamid), R, = 0,25 (ChlorofomvEthanol = 9:1), Rf = 0,67 (ChlorofornrEthanol = 4:1), Rf = 0,45 (Chloroform:Methanol = 9:1).[a] g ° = + 14.3 ± 4.2 ° (c = 0.237, dimethylformamide), R, = 0.25 (chlorofromethanol = 9: 1), R f = 0.67 (chlorofornrethanol = 4: 1) , R f = 0.45 (chloroform: methanol = 9: 1).
Der Rückstand der Fraktionen 127-190 kristallisiert aus 120ml Chloroform-Diethylether (1:5). Man erhält 1,4,6-Tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzylester (α,/3-Gemisch,. nach 1H-NMR a:ß ~ 6:1) in Form farbloser ' Kristalle vom Smp. 156-1570C.The residue of fractions 127-190 crystallized from 120 ml of chloroform-diethyl ether (1: 5). This gives 1,4,6-tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzyl ester (α, / 3 mixture, according to 1 H-NMR a: ß ~ 6: 1 ) as colorless' crystals of mp. 156-157 0 C.
Die Kristalle werden anschließend in 150ml doppelt destilliertem Wasser-tert.Butanol (1:1) gelöst, die so erhaltene Lösung wird durch ein Milliporefilter (Fluoropore, PTFE, 0,2/^m) filtriert und im Hochvakuum lyophilisiert. Man erhält 1,4,6-Tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzylester (α,/3-Gemisch) als farbloses Pulver, das 1,00 Mol Wasser enthält.The crystals are then dissolved in 150 ml of double-distilled water-tert-butanol (1: 1), the resulting solution is filtered through a Millipore filter (Fluoropore, PTFE, 0.2 / 1) and lyophilized in a high vacuum. This gives 1,4,6-tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzyl ester (α, / 3 mixture) as a colorless powder containing 1.00 mol of water.
C32H44N4O14 · 1,00 H2O (726,73)C 32 H 44 N 4 O 14 · 1.00 H 2 O (726.73)
Ber. C52,89 H6,41 N7/71 033,02 H2O2,48Ber. C52,89 H6,41 N7 / 71 033,02 H 2 O2,48
Gef. C 53,18 H 6,42 N 7,49 032,81 H2O 2,48Found C 53.18 H 6.42 N 7.49 032.81 H 2 O 2.48
[a]g° = +56,0 ± 1,1° (c = 0,948; Dimethylformamid), Rf = 0,17 + 0,24 (Chloroform:Ethanol = 9:1; Doppelfleck), Rf = 0,45 (Chloroform:Methanol = 9:1), Rf = 0,67 (Chloroform:Methanol = 4:1).[a] g ° = + 56.0 ± 1.1 ° (c = 0.948, dimethylformamide), R f = 0.17 + 0.24 (chloroform: ethanol = 9: 1, double spot), R f = 0, 45 (chloroform: methanol = 9: 1), R f = 0.67 (chloroform: methanol = 4: 1).
Der Rückstand der Fraktionen 191-260 kristallisiert aus 90ml Chloroform-Diethylether (1:5). Man erhält 1a,4,6-Tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzylester in Form farbloser Kristalle vom Smp. 147-149°C. Die Kristalle werden anschließend in 100 ml doppelt destilliertem Wasser-tert.Butanol (1:1) gelöst. Die so erhaltene Lösung wird durch ein Milliporefilter (Fluoropore, PTFE, 0,2/xm) filtriert und im Hochvakuum lyophilisiert. Man erhält 1 a,4,6-Tri-O-acetyldesmethylmuramyl-N-propionyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzylester als farbloses Pulver, das noch 1,12 Mol Wasser enthält. C32H44N4O14- 1,12H2O (728,89) ' 'The residue of fractions 191-260 crystallizes from 90 ml of chloroform-diethyl ether (1: 5). 1a, 4,6-tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzyl ester is obtained in the form of colorless crystals of mp. 147-149 ° C. The crystals are then dissolved in 100 ml of double distilled water-tert-butanol (1: 1). The resulting solution is filtered through a Millipore filter (Fluoropore, PTFE, 0.2 / xm) and lyophilized under high vacuum. This gives 1 a, 4,6-tri-O-acetyldesmethylmuramyl-N-propionyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzyl ester as a colorless powder which still contains 1.12 mol of water. C 32 H 44 N 4 O 14 - 1.12 H 2 O (728.89) ''
Ber. C52,74 H6,43 N7,69 033,18 H2O2,76Ber. C52,74 H6,43 N7,69 033.18 H 2 O2,76
Gef. C52,96 H6,54 N7,62 033,15 H2O2,76Found. C52,96 H6,54 N7,62 033.15 H 2 O2,76
[a]r3° = +36,9 ± 1,7° (c = 0,593; Methylenchlorid:Methanol = 1:1), Rf = 0,17 (Chloroform:Ethanol = 9:1), Rf = 0,45 (Chloroform:Methanol = 9:1), Rf = 0,67 (Chloroform:Methanol = 4:1).[a] = +36.9 r3 ° ± 1.7 ° (c = 0.593; methylene chloride: methanol = 1: 1), R f = 0.17 (chloroform: ethanol = 9: 1), Rf = 0.45 (Chloroform: methanol = 9: 1), R f = 0.67 (chloroform: methanol = 4: 1).
Beispiel 3: Analog Beispiel 1 erhält man aus 1,19g (1,54mMol)-N-Propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin-benzhydrylester (α,/6-Gemisch) der 2,24MoI Wasser enthält, mit 0,7 ml (7,4 mMol) Essigsäureanhydrid in 12 ml Pyridin (20 Stunden, Raumtemperatur) i^^-Tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alaninbenzhydrylester (a,yS-Gemisch) als farbloses Pulver, das 1,33MoI Wasser enthält.Example 3 Analogously to Example 1, 1.19 g (1.54 mmol) of N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanine-benzhydryl ester (α, / 6 mixture) of the 2.24 mol of water are obtained containing 0.7 ml (7.4 mmol) of acetic anhydride in 12 ml of pyridine (20 hours, room temperature) - tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L- alanine benzhydryl ester (a, yS mixture) as a colorless powder containing 1.33 moles of water.
C4IH63N5O15 -1,33H2O (879,85)C 4 H H 63 N 5 O 15 -1.33 H 2 O (879.85)
Ber. C 55,97 H 6,40 N 7,96 029,69 H2O 2,72Ber. C 55.97 H 6.40 N 7.96 029.69 H 2 O 2.72
Gef. C56,14 K6,36 N7,98 029,56 H2O2,72Found. C56,14 K6,36 N7,98 029.56 H 2 O2,72
[a]g° = +23,8 + 2,1 "C (c= 0,478; Dimethylformamid), Rf = 0,36 (Chloroform Methanol = 9:1), Rf = 0,69 (Chloroform:Methanol = 4:1), Rf = 0,87 (Chloroform:Methanol = 7:3).[a] g ° = +23.8 + 2.1 "C (c = 0.478, dimethylformamide), R f = 0.36 (chloroform: methanol = 9: 1), R f = 0.69 (chloroform: methanol = 4: 1), R f = 0.87 (chloroform: methanol = 7: 3).
Das Ausgangsmaterial erhält man wie folgt:The starting material is obtained as follows:
Stufe 3.1: Analog Beispiel 1 erhält man aus 2,11 g (4,07mMol) N-Propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L--alanin, das 1,56 Mol Wasser enthält, mit insgesamt 2,14g (11,06 mMol) Diphenyldiazomethan in 42 ml Methanol-Dimethoxyethan (1:1) (18 Stunden, Raumtemperatur) N-Propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin-benzhydrylester als farbloses Pulver, das 2,24MoI Wasser enthält.Step 3.1: Analogously to Example 1, 2.11 g (4.07 mmol) of N-propionyl-dem-methylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanine containing 1.56 mol of water are obtained, in total 2.14 g (11.06 mmol) diphenyldiazomethane in 42 ml methanol-dimethoxyethane (1: 1) (18 hours, room temperature) N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanine-benzhydryl ester as a colorless powder containing 2, Contains 24MoI of water.
C35H47N5O12-2,24H2O (770,14) 'C 35 H 47 N 5 O 12 -2.24H 2 O (770.14) '
Ber. C54,58 H6,76 N9,09 029,59- · H2O5,25Ber. C54.58 H6.76 N9.09 029.59 · H 2 O 5.25
Gef. C54,85 H6,86 N 9,11 029,21 H2O5,25Found. C54,85 H6,86 N 9,11 029,21 H 2 O5,25
[a]§° = +2,9 + 2°C (c = 0,478; Dimethylformamid), Rf = 0,57 (Chloroform:Methanol = 7:3), Rf = 0,65 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5).[ a ] § ° = + 2.9 + 2 ° C (c = 0.478, dimethylformamide), R f = 0.57 (chloroform: methanol = 7: 3), R f = 0.65 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5).
Beispiel 4: Analog Beispiel 1 erhält man aus 0,767g (1,09mMol) N-Propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure^CJ-methylester-(C7)-benzhydrylester, der noch 1,42MoI Wasser enthält, mit 0,49 ml (5,2 mMol) Essigsäureanhydrid in 8,7 ml Pyridin (44 Stunden, Raumtemperatur) lAe-Tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-iCJ-methylester-(CyJ-benzhydrylester (α, /3-Gemisch) als farbloses Pulver, das 0,71 Mol Wasser enthält.EXAMPLE 4 Analogous to Example 1, from 0.767 g (1.09 mmol) of N-propionyl-dem-methylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid, C 1-methyl ester (C 7 ) -benzhydryl ester, which still contains 1.42 mol of water, is obtained 0.49 ml (5.2 mmol) of acetic anhydride in 8.7 ml of pyridine (44 hours, room temperature). 1A-Tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid iCJ-methyl ester- ( CyJ-benzhydryl ester (α, / 3 mixture) as a colorless powder containing 0.71 mol of water.
C39H49N3O15-0,71 H2O (812,62) ' . ·C 39 H 49 N 3 O 15 -0.71 H 2 O (812.62) '. ·
Ber. C57,65 H6,28 N 5,17 030,92 H201,57Ber. C57.65 H6.28 N 5.17 030.92 H 2 01.57
Gef. ' C58,09 · H6,23 N5,28 030,71 H201,57Found C58.09 * H6.23 N5.28 030.71 H 2 01.57
[a]§° = +53,9 ± 1,90C (c = 0,519; Dimethylformamid), Rf = 0,55 (Chloroform:Methanol = 9:1), Rf = 0,87 (Chloroform:Methanol = 4:1), Rf = 0,95 (Chloroform:Methanol = 7:3). Das Ausgangsmaterial erhält man wie folgt:[a] = +53.9 ± 1.9 ° § 0 C (c = 0.519; dimethylformamide), R f = 0.55 (chloroform: methanol = 9: 1), R f = 0.87 (chloroform: methanol = 4: 1), R f = 0.95 (chloroform: methanol = 7: 3). The starting material is obtained as follows:
Stufe 4.1: Analog Beispiel 1 erhält man aus 1,32g (2,SmMoI) N-Propionyl-desmethylm'uramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-(Ca)-methylester, der noch 0,68MoI Wasser enthält, mit insgesamt 1,4g (7,2mMol) Diphenyldiazomethan in 27ml Methanol-Dimethoxyethan (1:1) (18 Stunden, Raumtemperatur) N-Propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsaure-iCJ-methylester-(C7)-benzhydrylester als farbloses Pulver, das 1,42MoI Wasser enthält. C33H43N3O12 1,42H2O (699,30)Stage 4.1: Analogously to Example 1, from 1.32 g (2, SmMoI) N-propionyl-desmethylm'uramyl-L-alanyl-D-glutamic acid (C a) methyl ester, which still contains 0,68MoI water with a total 1.4 g (7.2 mmol) of diphenyldiazomethane in 27 ml of methanol-dimethoxyethane (1: 1) (18 hours, room temperature) of N-propionyl-demethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid iCJ methyl ester (C 7 ) benzhydryl ester colorless powder containing 1.42 moles of water. C 33 H 43 N 3 O 12 1.42H 2 O (699.30)
Ber. C56,69 H6,63 N6,01 030,70 ' H2O3,65Ber. C 56.69 H 6.63 N 6.01 030.70 H 2 O 3.65
Gef. C 56,75 H 6,73 N 6,21 030,74 H2O 3,65Found. C 56.75 H 6.73 N 6.21 3.65 H 2 O 030,74
[a]g° = +10,3 ± 2,30C (c = 0,435; Wasser), R, = 0,73 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5), Rf = 0,91 (Chloroform:Methanol = 7:3).[ a ] g ° = +10.3 ± 2.3 0 C (c = 0.435, water), R, = 0.73 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5), R f = 0.91 (Chloroform: methanol = 7: 3).
Beispiel 5: Analog Beispiel 1 erhält man aus 1,15g (1,57mMol) N-Propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-iCJ-n-butylester-(C7)-benzhydrylester, der noch 0,99MoI Wasser enthält, mit 0,70 ml (7,4mMol) Essigsäureanhydrid in 12 ml Pyridin (16 Stunden, Raumtemperatur) lAe-Tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-iCJ-n-butylester-(Cy)-benzhydrylester (a, /3-Gemisch) als farbloses Pulver, das 0,73 Mol Wasser enthält. C42Hg5N3O15-0,73H2O (855,08)Example 5 Analogously to Example 1, 1.15 g (1.57 mmol) of N-propionyl-dem-methylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid iCJ-n-butyl ester (C 7 ) -benzhydryl ester, which still contains 0.99 mol of water containing 0.70 ml (7.4 mmol) acetic anhydride in 12 ml pyridine (16 hours, room temperature). 1A-Tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid iCJ-n-butyl ester - (C y ) -benzhydryl ester (a, / 3 mixture) as a colorless powder containing 0.73 mol of water. C 42 Hg 5 N 3 O 15 -0.73H 2 O (855.08)
Ber. C58,99 H6,60 N 4,91 029,50 H201,54Ber. C58.99 H6.60 N 4.91 029.50 H 2 01.54
Gef. C 58,96 H 6,72 N 4,76 029,49 H201,54C 58.96 H 6.72 N 4.76 029.49 H 2 01.54
[a]g> = +12,6 + 2,3°C(c = 0,443; Chloroform), R, = 0,72 (Chloroform:Methanol = 9:1), R, = 0,96 (Chloroform:Methanol = 4:1) [a] g> = +12.6 + 2.3 ° C (c = 0.443, chloroform), R, = 0.72 (chloroform: methanol = 9: 1), R, = 0.96 (chloroform: methanol = 4: 1)
Das Ausgangsmaterial erhält man wie folgt: The starting material is obtained as follows:
Stufe5.1: Analog Beispiel 1 erhält man aus 1,9g (3,3mMol) N-Propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-iCJ-nbutylester, der 1,03 Mol Wasser enthält, mit insgesamt 2,5g (12,85mMol) Diphenyldiazomethan in 40ml Methanol-Dimethoxyethan (1:1,70 Stunden, Raumtemperatur) N-Propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-fCJ-nbutylester-(Cy)-benzhydrylester als farbloses Pulver, das 0,99 Mol Wasser enthält. C36H49N3O12 · 0,99 H2O (733,62)Stage 5.1: Analogously to Example 1, from 1.9 g (3.3 mmol) of N-propionyl-dem-methylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid-iCJ-n-butyl ester, which contains 1.03 mol of water, with a total of 2.5 g ( 12.85 mmol) diphenyldiazomethane in 40 ml methanol-dimethoxyethane (1: 1.70 hours, room temperature) N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid FcJ-n-butyl ester (C y ) -benzhydryl ester as a colorless powder containing 0 Contains 99 mol of water. C 36 H 49 N 3 O 12 · 0.99 H 2 O (733.62)
Ber. C58,94 H7,03 N5/73 028,32 H2O2,43Ber. C 58.94 H7.03 N5 / 73 028.32 H 2 O 2.43
Gef. C 59,24 H 7,06 N 5,59 028,08 H2O 2,43Found C 59.24 H 7.06 N 5.59 028.08 H 2 O 2.43
[a]§° = 12,5 ± 1,9°C (c = 0,522; Methanol), Rf = 0,46 (Chloroform:Methanol = 9:1), Rf = 0,63 (Chloroform:Methanol = 4:1), Rf = 0,88 (Chloroform:Methanol = 7:3).[a] § ° = 12.5 ± 1.9 ° C (c = 0.522, methanol), R f = 0.46 (chloroform: methanol = 9: 1), R f = 0.63 (chloroform: methanol = 4: 1), R f = 0.88 (chloroform: methanol = 7: 3).
Beispiel 6: Analog Beispiel 1 erhält man aus 1,0g (1,43mMol) rohem N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-fCJ-pivaloyloxymethylester-(Cr)-benzylesterund 0,57 ml (6,OmMoI) Essigsäureanhydrid in 10ml absolutem Pyridin (20 Stunden, Raumtemperatur) N-Acetyl-1,4,6-tri-O-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-(Ca)-pivaloyloxy-methylester-(Cr)-benzylester (α,/3-Gemisch) als farbloses Pulver, das 0,79 Mol Wasser enthält.Example 6: Analogously to Example 1, 1.0 g (1.43 mmol) of crude N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutamic acid-fCJ-pivaloyloxymethyl ester (C r ) benzyl ester and 0.57 ml (6, OmMoI ) Acetic anhydride in 10 ml of absolute pyridine (20 hours, room temperature) N-acetyl-1,4,6-tri-O-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutamic acid (C a ) -pivaloyloxy-methyl ester (C r ) benzyl ester (α, / 3 mixture) as a colorless powder containing 0.79 mole of water.
C38H53N3O17 0,79 H2O (838,08)C 38 H 53 N 3 O 17 0.79 H 2 O (838.08)
Ber. C 54,47 H 6,60 N 5,02 033,96 H201,69Ber. C 54.47 H 6.60 N 5.02 033.96 H 2 01.69
Gef. C54,52 H6,36 N5,12 033,71 H2O1,69Found. C54,52 H6,36 N5,12 033.71 H 2 O1,69
Md0 = 68,5 ±4,1°C (c = 0,241; Dimethylformamid), R, = 0,52 (Chloroform:Methanol = 9:1), R, = 0,55 (Chloroform:Ethanol = 9:1).Md 0 = 68.5 ± 4.1 ° C (c = 0.241, dimethylformamide), R, = 0.52 (chloroform: methanol = 9: 1), R, = 0.55 (chloroform: ethanol = 9: 1 ).
Das Ausgangsmaterial erhält man folgendermaßen:The starting material is obtained as follows:
Stufe 6.1: 20,2g (6OmMoI) N-tert.-Butyloxycarbonyl-D-glutaminsäure-iGjJ-benzylester werden in einem Gemisch aus 300ml Tetrahydrofuran und 50ml Wasser gelöst. Zu dieser Lösung gibt man 19,55g (6OmMoI) Cäsiumcarbonat (puYum, Fluka), gelöst in 100 ml Wasser, und läßt das Ganze V2 Stunde bei Raumtemperatur stehen. Anschließend wird im Hochvakuum bei 300C eingedampft und der so erhaltene Rückstand nacheinander mit 200 ml Methanol und zweimal mit je 200 ml DimethylformamidStep 6.1: 20.2 g (60 μmol) of N-tert-butyloxycarbonyl-D-glutamic acid iGjJ-benzyl ester are dissolved in a mixture of 300 ml of tetrahydrofuran and 50 ml of water. 19.55 g (60 mmol) of cesium carbonate (PuYum, Fluka), dissolved in 100 ml of water, are added to this solution and the whole is allowed to stand at room temperature for 2 hours. The mixture is then evaporated at 30 0 C under high vacuum and the residue thus obtained successively with 200 ml of methanol and twice with 200 ml of dimethylformamide
Das so erhaltene Cäsiumsalz des N-tert.-Butyloxycarbonyl-D-glutaminsäure-iC^-benzylesters (28,1 g; 6OmMoI) wird in 500ml Dimethylformamid suspendiert. Zu dieser Suspension werden bei Raumtemperatur 18,0g (17,4ml; 12OmMoI) Pivalinsäurechlormethylester (purum, FlUka) und 18,0g (12OmMoI) Natriumiodid gegeben. Das so erhaltene Gemisch wird 17 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird filtriert und das Filtrat im Hochvakuum bei 4O0C eingedampft. Der so erhaltene Rückstand wird in 500ml Essigsäureethylester aufgenommen und nacheinander je dreimal mit 150ml 0,1 N Natriumthiosulfatlösung und Wasser gewaschen. Nach Trocknen der Essigesterphase über Natriumsulfat wird erneut im Vakuum eingedampft. Der noch schwach gelbe Rückstand wird aus 450 ml Methanol:Wasser (1:2) umkristallisiert. Man erhält N-tert.-Butyloxycarbonyl-D-glutaminsäure-tCJ-pivaloyloxymethylester-tC^-benzylesterin Form farbloser Kristalle mit Smp.76-The thus-obtained cesium salt of N-tert-butyloxycarbonyl-D-glutamic acid-1C-benzyl ester (28.1 g, 60 mol%) is suspended in 500 ml of dimethylformamide. At room temperature, 18.0 g (17.4 ml, 12 μmol) of pivaloyl chloromethyl ester (purum, FlUka) and 18.0 g (12 μmol) of sodium iodide are added to this suspension. The resulting mixture is stirred for 17 hours at room temperature. It is then filtered and the filtrate evaporated under high vacuum at 4O 0 C. The residue thus obtained is taken up in 500 ml of ethyl acetate and washed successively three times with 150 ml of 0.1 N sodium thiosulfate solution and water. After drying the ethyl acetate phase over sodium sulfate is evaporated again in vacuo. The still slightly yellow residue is recrystallized from 450 ml of methanol: water (1: 2). N-tert-butyloxycarbonyl-D-glutamic acid-tCJ-pivaloyloxymethyl ester-tC -benzyl ester is obtained in the form of colorless crystals of mp.
C23H33NO8 (451,52)C 23 H 33 NO 8 (451.52)
Ber. C 61,18 H 7,37 N 3,10 . 028,35Ber. C 61.18 H 7.37 N 3.10. 028.35
Gef. C 61,08 H 7,25 N 3,33 028,58C, C, 61.08, H, 7.25, N, 3.33, 028, 58
[a]g° = + 18,4 ± 0,1°C(c = 1,034; Essigsäureethylester), Rf = 0,85 (Methylenchlorid:Methanol = 9:1); Stufe 6.2: 20,0g (44,3mMol) N-tert.-Butyloxycarbonyl-D-glutaminsäure-fCJ-pivaloyloxymethylester-iC^-benzylester werden bei O0C in einem Gemisch von 400ml Trifluoressigsäure^Methylenchlojid (1:1) 1,5 Stunden gerührt. Dann wird die Reaktionslösung im Hochvakuum bei 3O0C eingedampft und der so erhaltene Rückstand mehrmals in Methylenchlorid aufgenommen und erneut eingedampft. Man erhält ein gelbes Öl, das in einem.Gemisch von 100 ml Wasser und 300 ml Diethylether aufgenommen.und auf O0C gekühlt wird. Zu der Lösung gibt man unter starkem Rühren 80 ml 1 N Natronlauge (pH 7,5) und trennt die Etherphase ab. Die etherische Lösung wird einmal mit 100 ml Wasser, die Wasserphase einmal mit 200 ml Diethylether extrahiert. Die Etherphasen werden vereinigt, über Natriumsulfat getrocknet und filtriert. Das rötliche Filtrat wird dann mit 8,43g (44,3 mMol) p-Toluolsulfonsäure-monohydrat (puriss., Fluka), gelöst in 100ml Diethylether; versetzt und ' 1 Stunde bei Raumtemperatur, dann V2 Stunde bei O0C gerührt. Die so erhaltenen Kristalle werden abgesaugt und mit Diethylether gewaschen. Das erhaltene Rohprodukt wird aus 400ml Essigsäureethylester umkristallisiert. Man erhält D-Glutaminsäure-fCJ-pivaloyloxymethylester-fC^-benzylestertosylatin Form farbloser Kristalle vom Smp. 135-1370C.[α] g ° = + 18.4 ± 0.1 ° C (c = 1.034, ethyl acetate), R f = 0.85 (methylene chloride: methanol = 9: 1); Stage 6.2: 20.0 g (44.3 mmol) of N-tert-butyloxycarbonyl-D-glutamic acid-fCJ-pivaloyloxymethyl ester-1C-benzyl ester are dissolved at 0 ° C. in a mixture of 400 ml of trifluoroacetic acid, methylene chloride (1: 1) 1, Stirred for 5 hours. Then the reaction solution in high vacuum at 3O 0 C is evaporated and the resulting residue repeatedly taken up in methylene chloride and again evaporated. A yellow oil is obtained, which is taken up in a mixture of 100 ml of water and 300 ml of diethyl ether and cooled to 0 ° C. With vigorous stirring, 80 ml of 1 N sodium hydroxide solution (pH 7.5) are added to the solution, and the ether phase is separated off. The ethereal solution is extracted once with 100 ml of water, the water phase once with 200 ml of diethyl ether. The ether phases are combined, dried over sodium sulfate and filtered. The reddish filtrate is then washed with 8.43 g (44.3 mmol) of p-toluenesulfonic acid monohydrate (puriss., Fluka) dissolved in 100 ml of diethyl ether; and 'for 1 hour at room temperature, then stirred for V2 h at 0 0 C. The crystals thus obtained are filtered off with suction and washed with diethyl ether. The crude product obtained is recrystallized from 400 ml of ethyl acetate. This gives D-glutamic acid-fCJ-pivaloyloxymethyl ester-Fc ^ -benzylestertosylatin in the form of colorless crystals, mp 135-137 0 C.
C25H33NO9S (523,60)C 25 H 33 NO 9 S (523.60)
Ber. C57,35 H 6,35 N 2,68 027,50 S 6,12Ber. C57.35 H 6,35 N 2,68 027,50 S 6,12
Gef. C57,39 H 6,52 N 2,72 027,53 S 6,12C57.39 H 6.52 N 2.72 027.53 S 6.12
[a]&° = +8,8 + 0,1°C(c = 0,924; Methylenchlorid), Rf = 0,78 (Methylenchlorid:Methanol = 9:1; Doppelfleck), Rf = 0,84 (Methylenchlorid:Methanol = 5:1; Doppelfleck). [a] & ° = + 8.8 + 0.1 ° C (c = 0.924, methylene chloride), R f = 0.78 (methylene chloride: methanol = 9: 1, double spot), R f = 0.84 (methylene chloride : Methanol = 5: 1; double spot).
Stufe 6.3: 2,6g (6,5mMol) N-Acetyl-muramyl-L-alanin-natriumsalz, das 0,63 Mol Wasser enthält, werden in 50ml Dimethylformamid gelöst. Zu dieser Lösung gibt man bei Raumtemperatur 1,47g (7,14mMol) N^-Dicyclohexylcarbodiimid, 0,74g (7,14mMol) N-Hydroxy-succinimid und 3,41 g (6,5mMol) D-Glutaminsäure-iCJ-pivaloyloxymethylester-iCyl-benzylestertosylat und rührt die so erhaltene klare, farblose Lösung 14 Stunden bei Raumtemperatur.Step 6.3: 2.6g (6.5moles) of N-acetyl-muramyl-L-alanine-sodium salt containing 0.63 moles of water is dissolved in 50ml of dimethylformamide. To this solution is added at room temperature 1.47 g (7.14 mmol) of N, N-dicyclohexylcarbodiimide, 0.74 g (7.14 mmol) of N-hydroxy succinimide and 3.41 g (6.5 mmol) of D-glutamic acid iCI-pivaloyloxymethyl ester -iCyl-benzyl ester tosylate and the resulting clear, colorless solution is stirred for 14 hours at room temperature.
Die während der Reaktion ausgefallenen Kristalle (Ν,Ν-Dicyclohexylharnstoff) werden dann abgesaugt und das Filtrat wird im Hochvakuum bei 4O0C eingedampft. Der Rückstand wird in 300ml Essigsäureethylester aufgenommen, filtriert, und die so erhaltene Lösung nacheinanderyiermal mit je 100ml Wasser, dreimal mit je 100ml gesättigter wäßriger Natriumsulfatlösung und zweimal mit je 100 ml Wasser gewaschen.The precipitated during the reaction crystals (Ν, Ν-dicyclohexylurea) are then filtered off with suction and the filtrate is evaporated under high vacuum at 4O 0 C. The residue is taken up in 300 ml of ethyl acetate, filtered, and the solution thus obtained successively washed once each with 100 ml of water, three times with 100 ml of saturated aqueous sodium sulfate solution and twice with 100 ml of water.
Die Essigesterphasen werden vereinigt, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und erneut eingedampft.The ethyl acetate phases are combined, dried over sodium sulfate, filtered and evaporated again.
Man erhält einen leicht gelben Schaum, der durch Säulenchromatographie an 440g Kieselgel (Typ 60, reinst, Merck; 0,063-0,200 mm) im System Aceton-Essigsäureethylester (7:3) gereinigt wird (10 ml Fraktionen). Die Fraktionen 21-70 werden vereinigt und im Vakuum bei 400C eingedampft. Man erhält schwach verunreinigten N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-fCJ-pivaloyloxymethylester-(Cr)-benzylester als farblosen Schaum, der ohne weitere Reinigung verarbeitet wird.A slightly yellow foam is obtained, which is purified by column chromatography on 440 g silica gel (type 60, very pure, Merck, 0.063-0.200 mm) in the system acetone-ethyl acetate (7: 3) (10 ml fractions). Fractions 21-70 are combined and evaporated in vacuo at 40 0 C. Low-contaminated N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutamic acid-fCJ-pivaloyloxymethyl ester (C r ) -benzyl ester is obtained as a colorless foam, which is processed without further purification.
Rf = 0,74 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5), Rf = 0,85 (Chloroform:Methanol = 7:3).Rf = 0.74 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5), R f = 0.85 (chloroform: methanol = 7: 3).
Beispiel 7: 10g (15,86mMol) N-Benzoyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzylester löst man in 100ml Pyridin und versetzt mit 9ml Acetanhydrid. Nach 24 Stunden bei Raumtemperatur dampft man am Hochvakuum ein, nimmt den Rückstand in Methylenchlorid auf und schüttelt die organische Phase nacheinander mit je 300 ml 1 N Salzsäure, Wasser, 5%iger NaHCO3-Lösung und Wasser aus. Die wäßrigen Phasen extrahiert man zweimal mit je 150 ml Methylenchlorid. Man trocknet die vereinigten organischen Phasen mit Natriumsulfat und dampft ein.Example 7: 10 g (15.86 mmol) of N-benzoyl-demethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzyl ester are dissolved in 100 ml of pyridine and mixed with 9 ml of acetic anhydride. After 24 hours at room temperature, the mixture is evaporated under high vacuum, the residue is taken up in methylene chloride and the organic phase is shaken successively with 300 ml of 1 N hydrochloric acid, water, 5% NaHCO 3 solution and water. The aqueous phases are extracted twice with 150 ml of methylene chloride. The combined organic phases are dried with sodium sulfate and evaporated.
Zwecks Kristallisation löst man in 20 ml Ethanol und gibt 30 ml Essigsäureethylester und dann Diethylether bis zur Trübung (—60 ml) zu. Man erhält farblose Kristalle des a^-IAe-Tri-O-acetyl-N-benzoyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminbenzylesters mit Smp. 168-1690C. Aus der Mutterlauge lassen sich weitere Kristalle gewinnen. [a]2° = + 44,90C ± 1,2°C (c = 0,813, CHCI3), Rf = 0,54 (CHCI3:Methanol = 9:1).For crystallization, dissolve in 20 ml of ethanol and add 30 ml of ethyl acetate and then diethyl ether until cloudy (-60 ml). This gives colorless crystals of a ^ -IAe-tri-O-acetyl-N-benzoyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminbenzylesters with mp. 168-169 0 C. From the mother liquor, more crystals can be obtained. [A] 2 ° = + 44.9 0 C ± 1.2 ° C (c = 0.813, CHCl 3) R f = 0.54 (CHCI 3: methanol = 9: 1).
Beispiel 8: Man versetzt 4,5g (6,4mMol) 1,4,6-Tri-O-acetyl-N-benzoyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin, gelöst in 60 ml Acetonitril, mit 3,7 g (19,1 mMol) Diphenyldiazomethan in 30 ml Acetonitril. Nach 5 Stunden bei Raumtemperatur ist die Reaktion beendet; man dampft im Vakuum zu r Trockne ein, extrahiert den Rückstand viermal mit je 20 ml Diethylether und reinigt ihn chromatographisch über 250g Kieselgel (Merck, 0,04-0,6 mm). Man eluiert nacheinander mit 1 Liter Methyienchlorid-Aceton (9:1, Fraktion 1), pro Fraktion je 500 ml CH2CI2-Aceton (7:3, Fraktionen 2 und 3) und pro Fraktion je 1 Liter CH2CI2-Aceton (1:1, Fraktionen 4, 5 und 6). Man erhält so aus Fraktion 1 unreines a-Anomeres, aus Fraktion 3 reines a-Anomeres und aus den Fraktionen 4 und 5 α,/3-Anomerengemisch des lAe-Tri-O-acetyl-N-benzoyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminbenzhydrylesters.Example 8 4.5 g (6.4 mmol) of 1,4,6-tri-O-acetyl-N-benzoyl-demethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine, dissolved in 60 ml of acetonitrile, are added at 3.7 g (19.1 mmol) of diphenyldiazomethane in 30 ml of acetonitrile. After 5 hours at room temperature, the reaction is complete; it is evaporated to dryness in vacuo, the residue is extracted four times with 20 ml of diethyl ether each time and purified by chromatography over 250 g of silica gel (Merck, 0.04-0.6 mm). The column is eluted sequentially with 1 liter Methyienchlorid-acetone (9: 1, fraction 1), per fraction 500 ml of CH 2 Cl 2 -acetone (7: 3, fractions 2 and 3) and per fraction per 1 liter CH 2 CI 2 - Acetone (1: 1, fractions 4, 5 and 6). Thus, from fraction 1 impure α-anomeres, from fraction 3 of pure α-anomeres and from fractions 4 and 5 α, / 3-anomeric mixture of the lAe-tri-O-acetyl-N-benzoyl-desmethylmuramyl-L-alanyl- D-isoglutaminbenzhydrylesters.
a-Anomer: Smp. 108-110°C, [α]£° = + 36,3 ± 1°C(c= 1,01, CHCI3), Rf = 0,27 (CHCI3: Aceton = 1:1).a-anomer: m.p. 108-110 ° C, [α] £ ° = + 36.3 ± 1 ° C (c = 1.01, CHCl 3 ), R f = 0.27 (CHCl 3 : acetone = 1 :1).
Das Ausgangsmaterial, lAe-Tri-O-acetyl-N-benzoyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin, erhält man durch katalytische Hydrierung des entsprechenden Benzylesters (Beispiel 7) mit 5%iger Palladium-Kohle in Dimethoxyethan als Anomerengemisch. Smp. 114-12O0C,The starting material, lAe-tri-O-acetyl-N-benzoyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine, is obtained by catalytic hydrogenation of the corresponding benzyl ester (Example 7) with 5% palladium-carbon in dimethoxyethane as Anomerengemisch. Mp 114-12O 0 C,
[a]l° = + 51,9°C± 10C(C = 0,963, H2O), Rf = 0,16 (CHCI3:Methanol:H2O = 85:15:2). [a] ° l = + 51.9 ° C ± 1 0 C (C = 0.963, H 2 O), Rf = 0.16 (CHCl 3: methanol: H 2 O = 85: 15: 2).
Beispiel 9: 1,5g (2mMol) N-Benzoyl-(1a,/3),4,6-tri-O-butyryl-desmethylmuramyi-L-alanyl-D-isogluta'min setzt man analog Beispiel 8 mit Diphenyldiazomethan um. Nach analoger Aufarbeitung erhält man ein Rohprodukt, das an 50g Kieselgel (Merck, 0,04-0,6 mm) Chromatographien wird. Man eluiert nacheinander mit 1 Liter CH2CI2-Aceton (9:1, Fraktion 1), pro Fraktion je 1 Liter CH2CI2-Aceton (8:2, Fraktionen 2 und 3) und pro Fraktion je 500ml CH2CI2-Aceton (7:3, Fraktionen 4 und 5). Aus Fraktion 2 erhält man a-Anomeres, aus Fraktion 4 unreines /3-Anomeres des N-Benzoyl-1,4,6-tri-O-butyryldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzhydrylesters. Das a-Anomere erhält man kristallin durch Lösen in Aceton (0,7 ml/g) und Zugabe von Diethylether (22 ml/g). Smp. 109-1130C, [a]g° = + 45,10C ± 1,10C (c = 0,92, CHCI3), R, = 0,62 (CHCI3:Aceton = 1:1).Example 9: 1.5 g (2 mmol) of N-benzoyl- (1a, / 3), 4,6-tri-O-butyryl-demethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine are reacted analogously to Example 8 with diphenyldiazomethane. After analogous work-up, a crude product is obtained which is chromatographed on 50 g of silica gel (Merck, 0.04-0.6 mm). Sequentially eluting with 1 liter of CH 2 Cl 2 -acetone (9: 1, fraction 1), per fraction per 1 liter of CH 2 Cl 2 -acetone (8: 2, fractions 2 and 3) and per fraction each 500ml CH 2 CI 2- acetone (7: 3, fractions 4 and 5). From fraction 2 there is obtained a-anomeres, from fraction 4 impure / 3-anomeres of N-benzoyl-1,4,6-tri-O-butyryldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester. The α-anomer is obtained by crystallization by dissolving in acetone (0.7 ml / g) and adding diethyl ether (22 ml / g). . Mp 109-113 0 C, [a] = + 45.1 g ° C ± 1.1 0 0 C (c = 0.92, CHCI 3), R, = 0.62 (CHCl 3: acetone = 1 :1).
Das/3-Anomere erhält man kristallin durch Lösen in 8 ml Aceton bei 500C und Zugabe von 20 ml Diethylether bei Raumtemperatur.The / 3-anomer is obtained by crystallization by dissolving in 8 ml of acetone at 50 ° C. and adding 20 ml of diethyl ether at room temperature.
' Smp. 169-171 °C, [a]§° = + 13,8°C + 1,30C (c = 0,741, CHCI3:Methanol = 1:1), Rf = 0,52 (CHCI3:Aceton = 1:1). Das Ausgangsmaterial erhält man folgendermaßen:'Mp 169-171 ° C, [a] = + 13.8 ° § ° C + 1.3 0 C (c = 0.741, CHCI 3: methanol = 1: 1)., R f = 0.52 (CHCI 3 : acetone = 1: 1). The starting material is obtained as follows:
Stufe 9.1: N-Benzoyl-(1a,/3),4,6-tri-O-butyryl-desmethylmuramyl-L-alany!-D-isoglutamin-benzylester erhält man in bekannter Weise aus N-Benzoyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzylester in Pyridin mit 6 Äquivalenten Buttersäureanhydrid unter Zugabe katalytischer Mengen-4-Dimethylaminopyridin. Nach üblicher Aufarbeitung erhält man beim Verreiben mit Diethylether Kristalle vom Smp. 166-1710C, [a]o° = + 43,20C ± 1°C(c = 0,954, CHCI3), a-Anomeres: Rf = 0,42 (CHCI3:Aceton = 1:1),0-Anomeres: Rf = 0,28 (CHCI3:Aceton = 1:1).Step 9.1: N-Benzoyl- (1a, / 3), 4,6-tri-O-butyryl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzyl ester is obtained in a known manner from N-benzoyl-desmethylmuramyl-L- alanyl-D-isoglutamine-benzyl ester in pyridine with 6 equivalents of butyric anhydride with the addition of catalytic amounts of 4-dimethylaminopyridine. . After customary working up, on trituration with diethyl ether, crystals of mp 166-171 0 C, [a] o ° = + 43.2 0 C ± 1 ° C (c = 0.954, CHCI 3) a-anomer: R f = 0.42 (CHCl 3 : acetone = 1: 1), 0-anomeres: R f = 0.28 (CHCl 3 : acetone = 1: 1).
Stufe 9.2: Durch katalytische Hydrierung von N-Benzoyl-fia^JAe-tri-O-butyryl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminbenzylester mit 5%iger Palladium-Kohle in Tetrahydrofuran erhält man N-Benzoyl-(1a,/3,4,6-tri-0-butyryl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin als Hemihydrat mit Smp. 100-1050C, [a]§° = + 54,2°C ± 1°C(c = 0,96, Methanol), Rf = 0,45 (CHCI3:Methanol = 8:2).Step 9.2: By catalytic hydrogenation of N-benzoyl-fia-JAe-tri-O-butyryl-demethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminobenzyl ester with 5% palladium-carbon in tetrahydrofuran, N-benzoyl- (1a, / 3 , 4,6-tri-O-butyryl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine as hemihydrate with mp 100-105 0 C, [a] § ° = + 54.2 ° C ± 1 ° C (c = 0.96, methanol), R f = 0.45 (CHCl 3 : methanol = 8: 2).
Beispiel 10: Analog Beispiel 1 setztman 3,69g (5,6mMol) N-Acetyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzhydrylester, 'gelöst in 40 ml abs. Pyridin, mit 2,04g (2OmMoI) Essigsäureanhydrid (1 Stunde, Raumtemperatur) um. Die klare Lösung wird bei 300C stark eingeengt, der Rückstand in 150ml Essigsäureethylester aufgenommen und die Lösung zweimal mit je 50ml Wasser extrahiert. Nach Trocknen und Verdampfen des Lösungsmittels verbleibt N-Acetyl-da^J^^-tri-O-acetyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzhydrylester.Example 10: Analogously to Example 1, 3.69 g (5.6 mmol) of N-acetyldimethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminebenzhydryl ester, dissolved in 40 ml of abs. Pyridine, with 2.04g (20mMo) acetic anhydride (1h, room temperature). The clear solution is highly concentrated at 30 0 C, the residue taken up in 150 ml ethyl acetate and the solution was extracted twice with 50 ml of water. After drying and evaporation of the solvent remains N-acetyl-da ^ J ^^ - tri-O-acetyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzhydrylester.
Hg0 = + 330C ± 1°C (c = 1,159, Methanol), R, = 0,70 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5), R, = 0,48 (n-Butanol:Essigsäure:Wasser = 75:7,5:21) und Rf = 0,81 (Essigsäureethylestenn-. Butanol:Pyridin:Essigsäure:Wasser = 42:21:21:6:10).Hg 0 + 33 = 0 C ± 1 ° C (c = 1.159, methanol), R, = 0.70 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5), R, = 0.48 (n-butanol: Acetic acid: water = 75: 7.5: 21) and R f = 0.81 (ethyl acetate-butanol: pyridine: acetic acid: water = 42: 21: 21: 6: 10).
Der N-Acetyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzhydrylester kann wie folgt hergestellt werden: Stufe 10.1: Eine Lösung von 22,8g (4OmMoI) N-Acetyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin in 500ml eines 1:1-Gemisches von 1,2-Dimethoxy-ethan und Methanol wird mit 11,6g (6OmMoI) Diphenyl-diazomethan versetzt, und die Lösung während 16 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die rote Suspension wird bei 2O0C und unter vermindertem Druck eingedampft, und der Rückstand mehrfach'mit Diethylether verrieben, bis ein fast farbloses Produkt erhalten wird. Dieses wird in 100 ml Methanol gelöst und durch portionsweise Zugabe eines 2:1-Gemisches von Diethylether:Petrolether zur Kristallisation gebracht. Nach mehrstündigem Rühren, zunächst bei Raumtemperatur, dann im Eisbad, wird die Kristallmasse abfiltriert und unter vermindertem Druck getrocknet. Man erhält so den N-Acetyl-desmethylmurarnyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzhydrylester in Form von würfelförmigen Kristallen. Smp. 17O0C (mit Zersetzung), [a]o° = + 14 + 10C (c = 1,5, Methanol), Rf = 0,40 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5) und Rf = 0,66 (Essigsäureethylestenn-Butanol:Pyridin:Eisessig:Wasser = 42:21:21:6:10). .The N-acetyl-demmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester can be prepared as follows: Step 10.1: A solution of 22.8 g (40 mmol) of N-acetyl-demethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine in 500 ml of a A 1: 1 mixture of 1,2-dimethoxy-ethane and methanol is treated with 11.6 g (6OmMoI) diphenyl-diazomethan, and the solution stirred for 16 hours at room temperature. The red suspension is evaporated at 2O 0 C and under reduced pressure, and the residue mehrfach'mit diethyl ether until a nearly colorless product is obtained. This is dissolved in 100 ml of methanol and brought by the portionwise addition of a 2: 1 mixture of diethyl ether: petroleum ether to crystallize. After several hours of stirring, first at room temperature, then in an ice bath, the crystal mass is filtered off and dried under reduced pressure. This gives the N-acetyl-desmethylmurarnyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester in the form of cubic crystals. Mp 17O 0 C (with decomposition), [a] o ° = + 14 + 1 0 C (c = 1.5, methanol), R f = 0.40 (chloroform:. Methanol: water = 70: 30: 5 ) and R f = 0.66 (ethyl acetate-butanol: pyridine: glacial acetic acid: water = 42: 21: 21: 6: 10). ,
Beispiel 11: Analog Beispiel 10 erhält man aus 0,55g (0,85 mMol) N-Acetyl-desmethylmuramyl-L-'a-aminobutyryl-D-isoglutarninbenzhydrylester, gelöst in 5ml abs. Pyridin, und 0,281 g (2,76mMol) Essigsäureanhydrid (30 Minuten, Raumtemperatur) N-Acetyl-iia^lAe-tri-O-acetyl-desmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutamin-benzhydrylester; Rf = 0,63 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5) und Rf = 0,82 (Essigsäureethylestenn-Butanol:Pyridin:Essigsäure:Wasser = 42:21:21:6:10).Example 11: Analogously to Example 10 is obtained from 0.55 g (0.85 mmol) of N-acetyl-desmethylmuramyl-L-'a-aminobutyryl-D-isoglutarninbenzhydrylester, dissolved in 5ml abs. Pyridine, and 0.281 g (2.76 mmol) of acetic anhydride (30 minutes, room temperature) of N-acetyl-1α-Al-tri-O-acetyl-demethylmuramyl-la-aminobutyryl-D-isoglutamine-benzhydryl ester; R f = 0.63 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5) and R f = 0.82 (ethyl acetate-butanol: pyridine: acetic acid: water = 42: 21: 21: 6: 10).
Beispiel 12: Aus 2,10g (2,54mMol) N-Acetyl-desmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-glutaminsäure-dibenzhydrylester und 1,053ml (11,43mMol) Essigsäureanhydrid in 6ml absolutem Pyridin erhält man analog Beispiel 1 nach 12stündigem Stehen bei Raumtemperatur die Peracetylverbindung. Die Reinigung erfolgt an 450 g Kieselgel (Typ 60, Merck; Korngröße 0,063-0,200 mm;.Example 12: From 2.10 g (2.54 mmol) of N-acetyl-desmethylmuramyl-La-aminobutyryl-D-glutamic acid dibenzhydryl ester and 1.053 ml (11.43 mmol) of acetic anhydride in 6 ml of absolute pyridine are obtained analogously to Example 1 after standing for 12 hours at room temperature the peracetyl compound. Purification is carried out on 450 g of silica gel (type 60, Merck, particle size 0.063-0.200 mm;
5ml Fraktionen) erst mit Chloroform, dann ab Fraktion 20 mit Chloroform:lsopropanol (3:1). Das in den Fraktionen 43-106 enthaltene Material wird gesammelt, in 5ml Chloroform gelöst, nach Zugabe von 40ml abs. Dioxan durch ein Millipore-Filter (Fluoropore, PTFE, 0,2^m) filtriert und dann lyophilisiert. Man erhält N-Acetyl-da^Aö-tri-O-acetyl-desmethylmuramyl-L-aaminobutyryl-D-glutaminsäure-dibenzhydrylester als farbloses, lockeres Pulver, 0,37 Mol Wasser enthaltend.5 ml fractions) first with chloroform, then from fraction 20 with chloroform: isopropanol (3: 1). The material contained in fractions 43-106 is collected, dissolved in 5 ml of chloroform, after addition of 40 ml of abs. Dioxan filtered through a Millipore filter (Fluoropore, PTFE, 0.2 ^ m) and then lyophilized. This gives N-acetyl-da ^ Aö-tri-O-acetyl-desmethylmuramyl-L-aaminobutyryl-D-glutamic acid dibenzhydrylester as a colorless, loose powder, containing 0.37 mol of water.
C61H57N3O15 · 0,37 H2O (958,69)C 61 H 57 N 3 O 15 · 0.37 H 2 O (958.69)
Ber. C63,90 H 6,09 N 4,38 H2O 0,69Ber. C63.90 H 6.09 N 4.38 H 2 O 0.69
Gef. C 63,6 H 6,1 N 4,6 H2O 0,70Gef. C 63.6 H 6.1 N 4.6 H 2 O 0.70
[a]g0= + 29,6± 1,7°C(c = 0,577; Methanol), Rf = 0,69 (n-Butanol:Essigsäure:Wasser = 75:7,5:21) und R, = 0,93 (Essigsäureethylester:n-Butanol:Pyridin:Essigsäure:Wasser = 42:21:21:6:10).[α] g 0 = + 29.6 ± 1.7 ° C (c = 0.577, methanol), R f = 0.69 (n-butanol: acetic acid: water = 75: 7.5: 21) and R, = 0.93 (ethyl acetate: n-butanol: pyridine: acetic acid: water = 42: 21: 21: 6: 10).
Das Ausgangsmaterial erhält man analog Beispiel 1 wie folgt:The starting material is obtained analogously to Example 1 as follows:
3,00g (6,1 mMol) N-Acetyl-desmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-glutaminsäure, gelöst in 30ml eines 1:1 Gemisches aus Dimethylformamid und Methanol, werden bei Raumtemperatur und Rühren mit überschüssigem Diphenyldiazomethan versetzt.3.00 g (6.1 mmol) of N-acetyl-demmethylmuramyl-L-α-aminobutyryl-D-glutamic acid, dissolved in 30 ml of a 1: 1 mixture of dimethylformamide and methanol, are treated at room temperature with stirring and excess diphenyldiazomethane.
Nach 3 Tagen wird die rote Suspension im Hochvakuum bei 300C eingedampft, der rote Rückstand mehrfach mit Diethylether-Petrolether (1:3) verrieben und das Überstehende abdekantiert. Der feste Rückstand wird erst durch Chromatographie an 600g Kieselgel (Typ 60, Merck) im System Chloroform:Methanol:Wasser (70:30:5; u.a. zwecks Entfernung von Halbester), dann auf einer zweiten Säule (100g) erst mit Essigsäureethylester, dann Essigsäureethylester: Methanol (3:1; 5ml Fraktionen) gereinigt.After 3 days, the red suspension is evaporated under high vacuum at 30 0 C, the red residue triturated several times with diethyl ether-petroleum ether (1: 3) and the supernatant decanted off. The solid residue is first by chromatography on 600 g of silica gel (type 60, Merck) in the system chloroform: methanol: water (70: 30: 5, inter alia, to remove half ester), then on a second column (100 g) first with ethyl acetate, then Ethyl acetate: methanol (3: 1, 5 ml fractions).
Das gesammelte Material wird in 4,5 ml Methanol gelöst und nach Zugabe von 70 ml abs. Dioxan und übliche Filtration durch ein Millipore-Filter lyophilisiert. Man erhält N-Acetyl-desmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-glutaminsäure-dibenzhydrylester als farbloses Pulver, 0,93 Mol Wasser enthaltend.The collected material is dissolved in 4.5 ml of methanol and after addition of 70 ml of abs. Dioxane and conventional filtration through a Millipore filter lyophilized. N-acetyl-desmethylmuramyl-L-α-aminobutyryl-D-glutamic acid-dibenzhydryl ester is obtained as a colorless powder containing 0.93 mol of water.
Ber. C 64,14 H 6,34 N 4,99 H201,99Ber. C 64.14 H 6.34 N 4.99 H 2 01.99
Gef. C 64,1 H 6,5 N 4,9 H2O 2,0Gef. C 64.1 H 6.5 N 4.9 H 2 O 2.0
[a]o° = + 11,6 ± 2,9°C(c = 0,344; Methanol), Rf = 0,55 (Essigsäureethylester:Methanol = 4:1) und Rf = 0,77 (Chloroform :lsopropanol = 1:1). [a] o ° = + 11.6 ± 2.9 ° C (c = 0.344, methanol), R f = 0.55 (ethyl acetate: methanol = 4: 1) and R f = 0.77 (chloroform: isopropanol = 1: 1).
Beispiel 13: Analog Beispiel 1 erhält man aus 0,67 g (1 mMol) Ν-Example 13 Analogously to Example 1, 0.67 g (1 mmol) of Ν-
benzhydrylester und 0,367g (3,6mMol) Essigsäureanhydrid in 5ml abs. Pyridin (30 Minuten, Raumtemperatur) N-Acetyl-(la.ßlAe-tri-O-acetyl-desmethylmuramyl-L-valyl-D-isoglutamin-benzhydrylester.Benzhydrylester and 0,367g (3,6mMol) acetic anhydride in 5ml abs. Pyridine (30 minutes, room temperature) N-acetyl- (1a.βlAe-tri-O-acetyl-desmethylmuramyl-L-valyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester.
[a]g° = + 35°C ± 1 0C (c = 0,594; Methanol), Rf = 0,92 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5) und Rf = 0,80 (Essigsäureethylester:n-Butanol:Pyridin:Essigsäure:Wasser = 42:21:21:6:10).[a] g ° = + 35 ° C ± 1 0 C (c = 0.594; methanol), R f = 0.92 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5) and R f = 0.80 (ethyl acetate : n-butanol: pyridine: acetic acid: water = 42: 21: 21: 6: 10).
Das Ausgangsmaterial erhält man analog Beispiel 1 wie folgt:The starting material is obtained analogously to Example 1 as follows:
Stufe 13.1:1,60g (3,15mMol) N-Acetyl-desmethylmuramyl-L-valyl-D-isoglutamin, gelöst in 30ml Methanol, werden mit überschüssigem Diphenyldiazomethan (2 Stunden, Raumtemperatur) verestert. Das Produkt wird durch mehrfaches Umfallen aus MethanokDiethylether (1:8) gereinigt. Man erhält N-Acetyl-desmethylmuramyl-L-valyl-D-isoglutamin-benzhydrylester.Step 13.1: 1.60 g (3.15 mmol) of N-acetyl-demethylmuramyl-L-valyl-D-isoglutamine dissolved in 30 ml of methanol are esterified with excess diphenyldiazomethane (2 hours, room temperature). The product is purified by repeated reprecipitation from MethanokDiethylether (1: 8). N-acetyl-desmethylmuramyl-L-valyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester is obtained.
[a]g0= + 130C ± 10C(C = 1,067; Methanol), Rf = 0,56 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5), Rf = 0,42 (n-Butanol:Essigsäure:Wasser = 75:7,5:21) und Rf = 0,72 (Essigsäureethylestenn-Butanol:Pyridin:Essigsäure:Wasser = 42:21:21:6:10).[a] g 0 = + 13 0 C ± 1 0 C (C = 1.067, methanol), R f = 0.56 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5), R f = 0.42 (n Butanol: acetic acid: water = 75: 7.5: 21) and R f = 0.72 (ethyl acetate-butanol: pyridine: acetic acid: water = 42: 21: 21: 6: 10).
Beispiel 14: Eine Lösung von 1,2g N-Acetyl-muramyl-L-varyl-D-isoglutamin-benzhydrylester in 12ml absolutem Pyridin wird unter Rühren mit 0,75 ml Essigsäureanhydrid versetzt und 24 Stunden bei Raumtemperatur stehen gelassen. Das Reaktionsgemisch wird dann auf 40 ml Eiswasser gegossen, wobei das Produkt auskristallisiert, die Kristalle werden abgesaugt, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Nach Umkristallisation aus Essigsäureethylester und Diethylether erhält man N-Acetyi-1,4,6-tri-O-acetyl-muramyl-L-valyl-D-isoglutamin-benzhydrylester, Rf = 0,3 (Methylenchlorid:Methanol = 5:1). Das verwendete Ausgangsmaterial wird wie folgt hergestellt:EXAMPLE 14 A solution of 1.2 g of N-acetyl-muramyl-L-diaryl-D-isoglutamine-benzhydryl ester in 12 ml of absolute pyridine is treated with 0.75 ml of acetic anhydride with stirring and allowed to stand at room temperature for 24 hours. The reaction mixture is then poured into 40 ml of ice-water, whereupon the product crystallizes out, the crystals are filtered off with suction, washed with water and dried. Recrystallization from ethyl acetate and diethyl ether gives N-acetyl-1,4,6-tri-O-acetyl-muramyl-L-valyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester, R f = 0.3 (methylene chloride: methanol = 5: 1). , The starting material used is prepared as follows:
Stufe 14.1: Eine Lösung von 2,0g N-Acetyl-muramyl-L-valyl-D-isoglutamin in 25ml Methanol und 25ml 1,2-Dimethoxyethan wird mit 1,1 g Diphenyldiazomethan versetzt und 20 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wird zur Trockne eingedampft und mit Diethylether extrahiert. Der Rückstand wird in Wasser suspendiert, gerührt, abfiltriert und über NaOH-Pillen getrocknet. Der erhaltene N-Acetyl-muramyl-L-valyl-D-isoglutamin-benzhydrylester schmilzt bei 1850C (Zers.), Rf = 0,5 (Chloroform:Methanol:Wasser = 14:6:1), [a]§° = + 38°C (c = 0,912; Methanol).Stage 14.1: A solution of 2.0 g of N-acetyl-muramyl-L-valyl-D-isoglutamine in 25 ml of methanol and 25 ml of 1,2-dimethoxyethane is treated with 1.1 g of diphenyldiazomethane and stirred for 20 hours at room temperature. The reaction mixture is evaporated to dryness and extracted with diethyl ether. The residue is suspended in water, stirred, filtered off and dried over NaOH pills. The resulting N-acetyl-muramyl-L-valyl-D-isoglutamine benzhydryl ester melting at 185 0 C (dec.), R f = 0.5 (chloroform: methanol: water = 14: 6: 1), [a] § ° = + 38 ° C (c = 0.912, methanol).
Beispiel 15: Eine Lösung von 2,0g N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzhydryiester in 20ml absolutem Pyridin wird unter Rühren mit 1,7ml Essigsäureanhydrid versetzt und 24 Stunden bei Raumtemperatur stehen gelassen. Das Reaktionsgemisch wird dann auf 50 ml Eiswassergegossen. Das ausgeschiedene Material wird in 100 ml Essigsäureethylester aufgenommen, mit verdünnter Salzsäure und halbgesättigter Kochsalzlösung gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Nach Eindampfen des Lösungsmittels erhält man N-Acetyl-IAe-tri-O-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminbenzhydrylester. Rf = 0,7 (Methylenchlorid:Methanol = 5:1)Example 15: A solution of 2.0 g of N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamine benzhydryiester in 20 ml of absolute pyridine is added under stirring with 1.7 ml of acetic anhydride and allowed to stand for 24 hours at room temperature. The reaction mixture is then poured onto 50 ml of ice water. The precipitated material is taken up in 100 ml of ethyl acetate, washed with dilute hydrochloric acid and semisaturated sodium chloride solution and dried over magnesium sulfate. Evaporation of the solvent gives N-acetyl-IAe-tri-O-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminbenzhydrylester. Rf = 0.7 (methylene chloride: methanol = 5: 1)
Das verwendete Ausgangsmaterial wird wie folgt hergestellt: The starting material used is prepared as follows:
Stufe 15.1: Eine Lösung von 1,1 g N-Acetyl-.muramyl-L-alanyl-D-isoglutamin in 12,5ml Methanol und 12,5ml 1,2-Dimethoxyethan wird mit 0,42g Diphenyldiazomethan versetzt und 20 Stunden bei 40°C gerührt. Nach Eindampfen des Lösungsmittels wird der Rückstand gründlich mit Diethylether und Wasser extrahiert und über NaOH-Pillen getrocknet. Man erhält N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzhydrylester in Form weißer Kristalle. Rf = 0,6 (Methylenchlorid^ethanokWasser = 14:6:1).Step 15.1: To a solution of 1.1 g of N-acetyl-.muramyl-L-alanyl-D-isoglutamine in 12.5 ml of methanol and 12.5 ml of 1,2-dimethoxyethane is added 0.42 g of diphenyldiazomethane and allowed to stand at 40 for 20 hours ° C stirred. After evaporation of the solvent, the residue is extracted thoroughly with diethyl ether and water and dried over NaOH pills. N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester is obtained in the form of white crystals. Rf = 0.6 (methylene chloride, ethane water = 14: 6: 1).
Beispiel 16: 1,45g (1,99mMol) N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin-benzhydrylester, gelöst in 10ml abs.Example 16: 1.45 g (1.99 mmol) of N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanine-benzhydryl ester, dissolved in 10 ml of abs.
Pyridin, werden mit 0,73g (7,15mMol) Essigsäureanhydrid versetzt und während 35 Stunden bei Raumtemperatur stehen gelassen. Die gelbliche Lösung wird im Hochvakuum bei 30°C zur Trockne eingedampft, der Rückstand mit abs. Dioxan versetzt und lyophilisiert. Das gefriergetrocknete Material wird in 10ml Chloroform:Methanol (1:1) aufgenommen und mit 100ml abs.Pyridine, 0.73 g (7.15 mmol) of acetic anhydride are added and allowed to stand at room temperature for 35 hours. The yellowish solution is evaporated under high vacuum at 30 ° C to dryness, the residue with abs. Dioxane added and lyophilized. The freeze-dried material is taken up in 10 ml of chloroform: methanol (1: 1) and extracted with 100 ml of abs.
Diethylether gefällt (3mal). Das so erhaltene Pulver wird in 100ml abs. Dioxan:Wasser (1:1) gelöst, wie üblich durch ein Millipore-Filter (PTFE; 0,2μηι) filtriert und lyophilisiert. Man erhält N-Acetyl-iia^J^^-tri-O-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin-benzhydrylester als farbloses Pulver, 1,42 Mol Wasser und 0,7 Mol Dioxan enthaltend.Diethyl ether precipitated (3 times). The resulting powder is abs. In 100ml. Dioxane: Water (1: 1) dissolved, filtered as usual through a Millipore filter (PTFE, 0,2μηι) and lyophilized. This gives N-acetyl-iia ^ J ^^ - tri-O-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanine benzhydryl ester as a colorless powder, containing 1.42 moles of water and 0.7 moles of dioxane.
C4iH5iN5O15 · 0,7 C4H8O2 · 1,42 H2OC 4 iH 5 iN 5 O 15 · 0.7 C 4 H 8 O 2 · 1.42 H 2 O
Ber. C 55,90 H 6,37 N 7,44 H2O 2,72Ber. C 55.90 H 6.37 N 7.44 H 2 O 2.72
Gef. C 55,98 H 6,42 N 7,76 H2O 2,71Found C 55.98 H 6.42 N 7.76 H 2 O 2.71
[a]§° = + 25,5 ± 2,1 °C (c = 0,475; Dimethylsulfoxid), Rf = 0,39[a] § ° = + 25.5 ± 2.1 ° C (c = 0.475, dimethyl sulfoxide), R f = 0.39
(n-Butanol:Essigsäure:Wasser = 75:7,5:21), Rf = 0,83(n-butanol: acetic acid: water = 75: 7.5: 21), R f = 0.83
(ChloroforiTKMethanokWasser = 70:30:5) und Rf = 0,85(ChloroforiTKMethanokWater = 70: 30: 5) and R f = 0.85
(Chloroform:Methanol:Wasser:Essigsäure = 70:40:9:1).(Chloroform: methanol: water: acetic acid = 70: 40: 9: 1).
Das Ausgangsmaterial erhält man wie folgt:The starting material is obtained as follows:
Stufe 16.1: 3,25g (5,6mMol) N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-L-alanin werden in 50ml Methanol gelöst und unter Rühren mit überschüssigem Diphenyldiazomethan verestert. Nach 6 Stunden wird die violette Lösung eingedampft und der gelbliche Rückstand durch Chromatographie an 400g Kieselgel (Typ 60, Merck) im System Chloroform:Methanol:Wasser (70:30:5) gereinigt (13ml Fraktionen). Das nach einem Vorlauf von 600ml in den Fraktionen 42 bis 60 enthaltene Material wird gesammelt, in 100 ml Chloroform aufgenommen, durch ein Millipore-Filter (PTFE; 0,2μ,ιη) filtriert und eingedampft. Der Rückstand wird in 150 ml abs. Dioxan aufgenommen und lyophilisiert. Man erhält N-Acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin-benzhydrylester als farbloses, lockeres Pulver.Stage 16.1: 3.25 g (5.6 mmol) of N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-L-alanine are dissolved in 50 ml of methanol and esterified with excess diphenyldiazomethane with stirring. After 6 hours, the violet solution is evaporated and the yellowish residue is purified by chromatography on 400 g of silica gel (type 60, Merck) in the system chloroform: methanol: water (70: 30: 5) (13 ml fractions). The material contained in a fraction of 600 ml in the fractions 42 to 60 is collected, taken up in 100 ml of chloroform, filtered through a Millipore filter (PTFE, 0.2μ, ιη) and evaporated. The residue is dissolved in 150 ml of abs. Dioxane taken and lyophilized. N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanine-benzhydryl ester is obtained as a colorless, loose powder.
C35H47N6O12 · 1,51 H2O (756,99)C 35 H 47 N 6 O 12 · 1.51 H 2 O (756.99)
Ber. C55,54 H 6,69 N 9,25 H2O3,59Ber. C55.54 H 6.69 N 9.25 H 2 O3.59
Gef. C 55,68 H 6,39 N 9,04 H2O 3,59Found C 55.68 H 6.39 N 9.04 H 2 O 3.59
[a]§° = + 16,3 ± 10C (c = 0,979; Dimethylsulfoxid),[a] = + 16.3 ° § ± 1 0 C (c = 0.979; dimethyl sulfoxide),
Rf = 0,31 (n-Butanol:Essigsäure:Wässer = 70:7,5:21),Rf = 0.31 (n-butanol: acetic acid: waters = 70: 7.5: 21),
Rf = 0,57 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5) undRf = 0.57 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5) and
Rf = 0,33 (Chloroform:Methanol:Wasser:Essigsäure = 75:27:5:0,5).Rf = 0.33 (chloroform: methanol: water: acetic acid = 75: 27: 5: 0.5).
Beispiel 17: Analog Beispiel 16 erhält man aus 1,00g (1,53mMol) N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-D-lsoglutaminyl-L-alaninbenzylester, gelöst in 18ml abs. Pyridin, und 0,66g (5,97mMol) Essigsäureanhydrid die Peracetylverbindung (6 Stunden, Raumtemperatur). Die Reinigung erfolgt durch Chromatographie an 150g Kieselgel im System Chloroform:Methanol:Wasser (70:30:5; 5ml Fraktionen). Man erhält N-Acetyl-tia^JAe-tri-O-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin-benzylester als farbloses Lyophilisat, 1,84 Mol Wasser enthaltend.Example 17 Analogously to Example 16, 1.00 g (1.53 mmol) of N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanine benzyl ester, dissolved in 18 ml of abs. Pyridine, and 0.66 g (5.97 mmol) acetic anhydride, the peracetyl compound (6 hours, room temperature). It is purified by chromatography on 150 g of silica gel in the system chloroform: methanol: water (70: 30: 5, 5 ml fractions). N-acetyl-tia-JAe-tri-O-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanine-benzyl ester is obtained as colorless lyophilisate, containing 1.84 mol of water.
C35H49N5O15 · 1,84 H2O (812,94)C 35 H 49 N 5 O 15 · 1.84 H 2 O (812.94)
Ber. C 51,72 H 6,56 N 8,62 H2O 4,07Ber. C 51.72 H 6.56 N 8.62 H 2 O 4.07
Gef. C 51,5 H6,9 N8,3 H2O4,1Gef. C 51.5 H6.9 N8.3 H 2 O 4.1
[a]o° = + 38,5 ± 3,5°C (c = 0,282; Dimethylformamid), Rf = 0,63 (Acetonitril:Wasser = 3:1), Rf = 0,39 (n-Butanol:Essigsäure:Wasser = 75:7,5:21), Rf = 0,83 (Essigsäureethylestenn-Butanol:Pyridin:Essigsäure:Wasser = 42:21:21:6:10). [a] o ° = + 38.5 ± 3.5 ° C (c = 0.282, dimethylformamide), R f = 0.63 (acetonitrile: water = 3: 1), R f = 0.39 (n-butanol : Acetic acid: water = 75: 7.5: 21), R f = 0.83 (ethyl acetate-butanol: pyridine: acetic acid: water = 42: 21: 21: 6: 10).
Beispiel 18: 1,45g (1,5mMol) N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin-cholesteryl-S-ester und 0,72g (7,1 mMol) Essigsäureanhydrid werden in 16 ml einer Mischung aus abs. Pyridin und Dimethylformamid (6:1)" gelöst und während 22 Stunden bei Raumtemperaturstehengelassen. Die klare Lösung wird im Hochvakuum bei 300C auf ca. 4ml eingeengt, der entstehende gallertige Rückstand mit 50 ml Essigsäureethylester verrieben und der Überstand abdekantiert (4mal). Der feste Rückstand wird in 5ml Dimethylformamid aufgenommen, 50ml abs. Dioxan zugefügt, das Ganze durch ein Millipore-Filter (PTFE; 0,2,um) filtriert und lyophilisiert. Man erhält N-Acetyl-tia^lAe-tri-O-acetyl-muramyl-L-aianyl-D-isoglutaminyl-L-alanincholesteryl-3-ester als farbloses Pulver, 0,62 Mol Wasser enthaltend.Example 18: 1.45 g (1.5 mmol) of N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanine-cholesteryl-S-ester and 0.72 g (7.1 mmol) of acetic anhydride are dissolved in 16 ml of a Mixture of abs. Pyridine and dimethylformamide (6: 1) "and allowed to stand for 22 hours at room temperature.The clear solution is concentrated under high vacuum at 30 0 C to about 4ml, the resulting gelatinous residue triturated with 50 ml of ethyl acetate and the supernatant decanted (4 times). The solid residue is taken up in 5 ml of dimethylformamide, 50 ml of absolute dioxane are added, the whole is filtered through a Millipore filter (PTFE, 0.2 μm) and lyophilized to give N-acetyl-tia-1-ac-tri-O-acetyl -muramyl-L-aianyl-D-isoglutaminyl-L-alanine-cholesteryl-3-ester as a colorless powder containing 0.62 mol of water.
C55H87N5O15-0,62 H2O (1069,49) · ·C 55 H 87 N 5 O 15 -0.62 H 2 O (1069.49) ·
Ber. C61.77 H8,33 N6,55 H201,04Ber. C61.77 H8.33 N6.55 H 2 01.04
Gef. C 61,8 H 8,4 N 6,8 H201,0Gef. C 61.8 H 8.4 N 6.8 H 2 01.0
[a]§0= +7,7 ± 10C (c = 0,977; Dimethylsulfoxid), R, = 0,41 (n-Butanol:Essigsäure:Wasser = 75:7,5:21), Rf = 0,87 (Essigsäureethylester:n-Butanol:Pyridin:Essigsäure:Wasser = 42:21:21:6:10).[a] 0 = + 7.7 ± 1 § 0 C (c = 0.977; dimethyl sulfoxide), R, = 0.41 (n-butanol: acetic acid: water = 75: 7.5: 21) R f = 0 , 87 (ethyl acetate: n-butanol: pyridine: acetic acid: water = 42: 21: 21: 6: 10).
Beispiel 19: Analog Beispiel 1 erhält man aus N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutamin-pivaloyloxymethylester und Essigsäureanhydrid in absolutem Pyridin N-Acetyl-IAe-tri-O-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutamin-pivaloyloxymethylester.EXAMPLE 19 Analogously to Example 1, N-acetyl-IAe-tri-O-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutamine is obtained from N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutamine-pivaloyloxymethyl ester and acetic anhydride in absolute pyridine -pivaloyloxymethylester.
Das Ausgangsmaterial erhält man folgendermaßen:The starting material is obtained as follows:
Stufe 19.1: 3,0g (8,54mMol) N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-D-glutamin werden in einem Gemisch aus 300 ml Tetrahydrofuran und 20ml Wasser gelöst. Zu dieser Lösung gibt man 1,39g (4,27mMo|) Cäsiumcarbonat (purum, Fluka), gelöst in 7ml Wasser, und läßt das Ganze V2 Stunde bei Raumtemperatur stehen. Anschließend wird im Hochvakuum bei 30°C eingedampft und der so erhaltene Rückstand nacheinander mit 250ml Methanol und zweimal je 250ml Dimethylformamid im Hochvakuum bei 4O0C abgedampft.Step 19.1: 3.0 g (8.54 mmol) of N-benzyloxycarbonyl-L-alanyl-D-glutamine are dissolved in a mixture of 300 ml of tetrahydrofuran and 20 ml of water. To this solution is added 1.39g (4.27mMo) of cesium carbonate (purum, Fluka) dissolved in 7ml of water, and allowed to stand at room temperature for 2h. It is then evaporated in a high vacuum at 30 ° C and the residue thus obtained, successively with 250ml of methanol and twice 250ml each dimethylformamide in a high vacuum at 4O 0 C evaporated.
Das so erhaltene Cäsiumsalz des N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-D-glutamins wird in 300 ml Dimethylformamid suspendiert. Zu dieser Suspension werden bei Raumtemperatur 2,57g (2,48ml; 17,08mMol) Pivalinsäurechlormethylester (purum, Fluka) und 2,56g (17,08mMol) Natriumiodid gegeben. Das so erhaltene Gemisch wird 42 Stunden bei Raumtemperatur gerührt.The cesium salt of N-benzyloxycarbonyl-L-alanyl-D-glutamine thus obtained is suspended in 300 ml of dimethylformamide. To this suspension are added at room temperature 2.57 g (2.48 ml, 17.08 mmol) of pivaloyl chloroformate (purum, Fluka) and 2.56 g (17.08 mmol) of sodium iodide. The resulting mixture is stirred for 42 hours at room temperature.
Anschließend wird im Hochvakuum bei 4O0C eingedampft. Der so erhaltene gelbe, kristalline Rückstand wird in 500 ml Essigsäureethylester aufgenommen (Suspension) und dreimal mit je 150 ml Wasser gewaschen. Die klaren Essigesterphasen werden vereinigt, über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum bei 30°C eingedampft. Der Rückstand kristallisiert aus Essigsäureethylester:n-Pentan = 1:15 (20:300ml). Man erhält nach zweimaliger Umkristallisation N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-D-glutamin-pivaloyloxymethylester in Form farbloser Kristalle vom Smp. 109-1100C.C is then evaporated under high vacuum at 4O 0th The yellow, crystalline residue thus obtained is taken up in 500 ml of ethyl acetate (suspension) and washed three times with 150 ml of water each time. The clear ethyl acetate phases are combined, dried over sodium sulfate and evaporated in vacuo at 30 ° C. The residue crystallizes from ethyl acetate: n-pentane = 1:15 (20: 300 ml). After two recrystallizations is obtained N-benzyloxycarbonyl-L-alanyl-D-glutamine-pivaloyloxymethyl ester in the form of colorless crystals of mp. 109-110 0 C.
C22H31N3O8 (465,50)C 22 H 31 N 3 O 8 (465.50)
Ber. C56/76 H 6,71 N9,03 027,49Ber. C56 / 76 H 6.71 N9.03 027.49
Gef. C 56,42 H 6,69 N 8,82 027,73Gef. C 56.42 H 6.69 N 8.82 027.73
Md0 = + 5,5 + 0,1°C(c = 0,973; Methanol), Rf = 0,62 (Methylenchlorid:Methanol = 5:1), Rf = 0,86 (MethylenchloridiMethanohWasser = 70:30:5).Md 0 = + 5.5 + 0.1 ° C (c = 0.973, methanol), R f = 0.62 (methylene chloride: methanol = 5: 1), R f = 0.86 (methylene chloride / methanol water = 70: 30: 5 ).
Stufe 19.2: Eine Lösung von 6,7g (14,4mMol) N-Benzyloxycarbonyl-L-alanyl-D-glutamin-pivaloyloxymethylesterin 200ml Dimethoxyethan wird bei konstantem pH-Wert von 5,5 (Tritration mit 1 N Salzsäure) mit 1,0g 10%iger Palladiumkohle als Katalysator 40 Minuten bei Raumtemperatur und Normaldruck hydriert.Step 19.2: A solution of 6.7 g (14.4 mmol) of N-benzyloxycarbonyl-L-alanyl-D-glutamine-pivaloyloxymethyl ester in 200 ml of dimethoxyethane is added at a constant pH of 5.5 (titration with 1 N hydrochloric acid) at 1.0 g 10% palladium carbon catalyst as hydrogenated for 40 minutes at room temperature and atmospheric pressure.
Dann wird vom Katalysator abfiltriert und das Filtrat im Hochvakuum bei 300C eingedampft. Der so erhaltene Rückstand wird in 30ml Diethylether suspendiert. Die so erhaltenen farblosen Kristalle werden abgesaugt und mit Diethylether nachgewaschen.Then, the catalyst is filtered off and the filtrate is evaporated at 30 0 C under high vacuum. The residue thus obtained is suspended in 30 ml of diethyl ether. The colorless crystals thus obtained are filtered off with suction and washed with diethyl ether.
Man erhält L-Alanyl'-D-glutamin-pivaloyloxymethylester-hydrochlorid in Form farbloser Kristalle vom Smp. 110—111 °C (Zers.).This gives L-Alanyl'-D-glutamine pivaloyloxymethyl ester hydrochloride in the form of colorless crystals, mp. 110-111 ° C (dec.).
C14H26CIN3O6 (367,83) ·C 14 H 26 CIN 3 O 6 (367.83) ·
Ber. C45/72 H 7,13 Cl 9,64 N 11,42 026,10Ber. C45 / 72 H 7,13 Cl 9,64 N 11,42 026,10
Gef. C 45,51 H 7,36 Cl 9,34 N 11,47 026,40C 45.51 H 7.36 Cl 9.34 N 11.47 026.40
[a]g0= + 25,5+ 0,10C(C= 1,128; Methanol), Rf = 0,07 (Methylenchlorid:Methanol = 5:1), Rf = 0,37 (Methylenchlorid:Methanol:Wasser = 70:30:5), Rf = 0,59 (Methylenchlorid:Methanol:Wasser = 5:5:1).[α] g 0 = + 25.5 + 0.1 0 C (C = 1.128, methanol), R f = 0.07 (methylene chloride: methanol = 5: 1), R f = 0.37 (methylene chloride: methanol: Water = 70: 30: 5), R f = 0.59 (methylene chloride: methanol: water = 5: 5: 1).
Stufe 19.3: 5,18g (13,OmMoI; 2,52mMol/g) N-Acetyl^-O^-O-isopropyliden-muraminsäure-natriumsalz werden in 150ml Dimethylformamid suspendiert. Dann werden bei Raumtemperatur 4,8g (13,OmMoI) L-Alanyl-D-glutaminpivaloyloxymethylester-hydrochlorid,2,95g (14,3mMol) Dicyclohexylcarbodiimid und 1,64g (14,3mMol) N-Hydroxy-succinimid zugegeben. Die so erhaltene, leicht gelbe Suspension wird 22 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird von der Hauptmenge des entstandenen Dicyclohexylharnstoffes abgesaugt und das so erhaltene Filtrat im Hochvakuum bei 4O0C eingedampft. Das zurückbleibende gelbe Öl wird in 20ml Methanol aufgenommen, eine weitere Fraktion Dicyclohexylharnstoff abgesaugt und erneut im Hochvakuum eingedampft.Step 19.3: 5.18 g (13, OmMoI; 2.52 mmol / g) of N-acetyl-O-O-isopropylidene-muramic acid sodium salt are suspended in 150 ml of dimethylformamide. Then, at room temperature, 4.8 g of (13, OmMoI) L-alanyl-D-glutamine pivaloyloxymethyl ester hydrochloride, 2.95 g (14.3 mmol) of dicyclohexylcarbodiimide and 1.64 g (14.3 mmol) of N-hydroxy-succinimide are added. The resulting slightly yellow suspension is stirred for 22 hours at room temperature. It is then filtered off with suction from the main amount of the resulting Dicyclohexylharnstoffes and the filtrate thus obtained under high vacuum at 4O 0 C evaporated. The residual yellow oil is taken up in 20 ml of methanol, a further fraction of dicyclohexylurea is filtered off with suction and re-evaporated under high vacuum.
Das so erhaltene Rohprodukt, das auch noch wenig Dicyclohexylharnstoff enthält, wird durch Säulenchromatographie an 1 000 g Kieselgel (Typ 60, reinst, Merck; 0,063-0,2mm) im System Methylenchlorid: Methanol = 9:1 gereinigt (10ml Fraktionen).The crude product thus obtained, which also contains little dicyclohexylurea, is purified by column chromatography on 1000 g of silica gel (type 60, very pure, Merck, 0.063-0.2 mm) in the system methylene chloride: methanol = 9: 1 (10 ml fractions).
Die Fraktionen 380-1 21.0 werden vereinigt, wobei ab Fraktion 850 mit dem System MethylenchloridiMethanokWasser = 70:30:5The fractions 380-1 21.0 are combined, starting from fraction 850 with the system MethylenchloridiMethanokWasser = 70: 30: 5
eluiertwird. . ·is eluted. , ·
Nach Eindampfen der Eluate im Hochvakuum bei 30° erhält man ein Gemisch das hauptsächlich aus N-Acetyl-4-0,6-0-isopropyliden-muramyl-L-alanyl-D-glutamin-pivaloyloxymethylester und etwas N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutaminpivaloyloxymethylester besteht, in Form eines schwach gelben Schaumes, der ohne weitere Reinigung verarbeitet wird.After evaporation of the eluates in a high vacuum at 30 ° to obtain a mixture consisting mainly of N-acetyl-4-0,6-0-isopropylidene-muramyl-L-alanyl-D-glutamine pivaloyloxymethylester and some N-acetyl-muramyl-L alanyl-D-glutamine-pivaloyloxymethyl ester, in the form of a pale yellow foam, which is processed without further purification.
Rf = 0,33 [N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutamin-pivaloyloxymethylester] und 0,66 [N-Acetyl^-O^-O-isopropyliden-muramyl-L-alanyl-D-glutamin-pivaloyloxymethylester] (Methylenchlorid:Methanol:Wasser = 70:30:5).Rf = 0.33 [N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutamine-pivaloyloxymethyl ester] and 0.66 [N-acetyl] -O-O-isopropylidene-muramyl-L-alanyl-D-glutamine-pivaloyloxymethyl ester ] (Methylene chloride: methanol: water = 70: 30: 5).
Stufe 19.4: Eine Lösung von 5,5g (ca. 8,5mMol) rohem N-Acetyl^-O^-O-isopropyliden-muramyl-L-alanyl-D-glutaminpivaloyloxymethylesterin 100 ml Eisessig-Wasser (3:2) wird 4,5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird dieleicht· gelbe Lösung im Hochvakuum bei 4O0C eingedampft und der.so erhaltene Rückstand durch Säulenchromatographie an 500g Kieselgel (Typ 60, reinst, Merck; 0,063-0,2mm) im System Methylenchlorid:Methanol:Wasser (70:30:5) gereinigt (10ml Fraktionen). Die Fraktionen 52-65 werden vereinigt und im Hochvakuum bei 30°C eingedampft. Man erhält N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutamin-pivaloyloxymethylester, der in 60 ml bidestilliertem-Wasser gelöst wird. Die Lösung wird durch ein Milliporefilter (Nalgene® S; 0,2 μιη) filtriert und anschließend im Hochvakuum lyophilisiert. Man erhält N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutamin-pivaloyloxymethylester als farbloses Pulver, das noch 1,21 Mol Wasser enthält.Step 19.4: A solution of 5.5 g (ca. 8.5 mmol) crude N-acetyl-O-O-isopropylidene-muramyl-L-alanyl-D-glutamine pivaloyloxymethyl ester in 100 ml glacial acetic acid (3: 2) becomes 4 , Stirred for 5 hours at room temperature. Thereafter batten view · yellow solution under high vacuum at 4O 0 C evaporated and residue der.so obtained by column chromatography on 500g silica gel (Type 60, reinst, Merck; 0,063-0,2mm) in the system methylene chloride: methanol: water (70:30: 5) cleaned (10ml fractions). Fractions 52-65 are combined and evaporated at 30 ° C under high vacuum. This gives N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutamine-pivaloyloxymethylester, which is dissolved in 60 ml bidistilled-water. The solution is filtered through a Millipore filter (Nalgene® S, 0.2 μιη) and then lyophilized in a high vacuum. N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-glutamine-pivaloyloxymethyl ester is obtained as a colorless powder which still contains 1.21 mol of water.
C25H42N4O13 -1,21 H2O (628,50)C 25 H 42 N 4 O 13 -1.21 H 2 O (628.50)
Ber. C47,78 H 7,16 N8,91 036,18 H2O3,48Ber. C, 47.78 H, 7.16 N, 8.91, 036, 18, H 2 O, 3.48
Gef. C48,09 H7,15 N9,02 036,01 H2O3,48C48.09 H7.15 N9.02 036.01 H 2 O3.48
(a]l° = + 39,5 ±0,10C (c = 0,443; Wasser), (a) l ° = + 39.5 ± 0.1 0 C (c = 0.443, water),
Rf = 0,61 (MethylenchloridiMethanohWasser = 70:30:5).Rf = 0.61 (methylene chloride-methanol water = 70: 30: 5).
Beispiel 20: Nach den in dieser Anmeldung beschriebenen Verfahren erhält man die folgenden Verbindungen:Example 20: Following the procedures described in this application, the following compounds are obtained:
a) N-Acetyl-i^^-tri-O-acetyl-muramyl-L-N-methyl-alanyl-D-isoglutamin-benzhydrylester,a) N-acetyl-1,2,3-tri-O-acetyl-muramyl-L-N-methyl-alanyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester,
b) N-Acetyl-IAe-tri-O-acetyl-muramyl-a-amino-isobutyryl-D-isoglutamin-benzhydrylesterundb) N-acetyl-IAe-tri-O-acetyl-muramyl-a-amino-isobutyryl-D-isoglutamine-benzhydryl ester and
c) N-Acetyl-IAe-tri-O-acetyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-y-methoxycarbonyl-isoglutamin-benzhydrylester.c) N-acetyl-IAe-tri-O-acetyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-y-methoxycarbonyl-isoglutamine-benzhydryl ester.
Beispie! 21: Weibliche MF-2f SPF-Mäuse mit einem Körpergewicht von 14-16g werden unter leichter Narkose mit einem Gemisch aus gleichen Teilen Diethylether, Ethanol und Chloroform mit letalen Dosen (ungefähr eine LDSo_9o; 1-4 plaqueforming units [PFU]) in Form von je 0,05ml einer Suspension von Influenza A/Texas/1/77 (Virus A) oder von Influenza B/Hong-Kong 15/72 (Virus B) Viren (Maus-adaptierte Stämme) intranasal infiziert.Step Example! 21: Female MF-2f SPF mice weighing 14-16 g are under light anesthesia with a mixture of equal parts of diethyl ether, ethanol and chloroform, with lethal doses (about one LD S o_9o; 1-4 plaqueforming units [PFU]) in the form of 0.05 ml each of a suspension of influenza A / Texas / 1/77 (virus A) or of influenza B / Hong Kong 15/72 (virus B) viruses (mouse-adapted strains) intranasally infected.
Jeder Maus aus Gruppen von jeweils 10 dieser Mäuse wird zum unten angegebenen Zeitpunkt [Tage] bezogen auf den Tag der Infektion einmal (Einzeldosis) die in Tabelle 1 genannte Menge der jeweiligen Wirksubstanz in 0,05 bzw. in 0,2ml einer 0,005 Gew.-%igen Lösung von Carboxymethylcellulose-natriumsalz in doppelt destilliertem, pyrogenfreiem Wasser im Falle von intranasaler bzw. oraler Applikation auf die in Tabelle 1 genannte Art appliziert.Each mouse from groups of 10 of each of these mice is given at the time indicated below [days] relative to the day of infection once (single dose) the amount of the respective active substance in 0.05 or in 0.2 ml of a 0.005 wt. % solution of carboxymethylcellulose sodium salt in double distilled, pyrogen-free water in the case of intranasal or oral administration in the manner mentioned in Table 1.
Jeweils 20 der obengenannten infizierten Mäuse dienen zur Kontrolle, d. h. sie erhalten ein Placebo (0,005 Gew.-%ige Lösung von Carboxymethylcellulose-natriumsalz).In each case 20 of the above-mentioned infected mice are used for control, d. H. they receive a placebo (0.005 wt% solution of carboxymethylcellulose sodium salt).
Die intranasale Applikation der Wirksubstanz wird unter leichter Narkose mit einem Gemisch aus gleichen Teilen Diethylether, Ethanol und Chloroform durchgeführt.The intranasal administration of the active substance is carried out under light anesthesia with a mixture of equal parts of diethyl ether, ethanol and chloroform.
Verbindung I = lAe-Tri-O-acetyi-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-aianyl-D-isoglutamin-benzhydrylester.Compound I = lAe-tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-aianyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester.
Beispiel 22: Nichtwäßrige Einzeldosis zur Nasenapplikation Zusammensetzung:Example 22: Non-aqueous single dose for nasal application Composition:
lAe-Tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-LAE-tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-
L-alanyl-D-isoglutamin-benzhydrylester 0,03 mgL-alanyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester 0.03 mg
Miglyol812 - 30,00 mgMiglyol812 - 30.00 mg
0,03 mg des Wirkstoffs werden unter aseptischen Bedingungen in 29,97 mg Miglyol gelöst.0.03 mg of the active ingredient is dissolved under aseptic conditions in 29.97 mg Miglyol.
Diese Lösung wird in einen handelsüblichen Einmalnasenapplikator abgefüllt, der vor der Anwendung auf eine Treibstoffdose aufgesetzt wird.This solution is filled in a commercial disposable nose applicator, which is placed on a fuel can before use.
Beispie! 23: Nasentropfen Zusammensetzung:Step Example! 23: nose drops composition:
lAö-Tri-O-acetyl-N-propionyl-des- 0,15 mg 0,10 mg10A-Tri-O-acetyl-N-propionyl-des-0.15 mg 0.10 mg
methylmuramyl-L-analyl-D-isoglutamin-methylmuramyl-L-analyl-D-isoglutamin-
benzhydrylesterbenzhydryl
Thiomersalthimerosal
Natriummonohydrogenphosphat 2 H2OSodium monohydrogenphosphate 2H 2 O
Natriumdihydrogenphosphat· 12H2OSodium dihydrogen phosphate · 12H 2 O
Benzalkoniumchloridbenzalkonium chloride
Ethylendiamintetraessigsäure-dinatriumsalz (EDTA)Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt (EDTA)
Natriumchloridsodium chloride
Entmi'neralisiertes WasserDemineralized water
In einem Teil der obengenannten Menge von entmineralisiertem Wasser werden untör Rühren Natriumdihydrogenphosphat, Dinatriumhydrogenphosphat, Natriumchlorid, Thiomersal und EDTA-Dinatriumsalzbei Raumtemperatur gelöst.In a part of the above-mentioned amount of demineralized water, without stirring, sodium dihydrogen phosphate, disodium hydrogen phosphate, sodium chloride, thiomersal and EDTA disodium salt are dissolved at room temperature.
In dieser Lösung löst man anschließend den Wirkstoff auf und ergänzt mit dem restlichen entmineralisierten Wasser.In this solution, the drug is then dissolved and supplemented with the remaining demineralized water.
Die Lösung oder ein Teil oder ein Vielfaches davon wird durch einen Membranfilter filtriert und in gereinigte Behälter abgefüllt.The solution or a part or multiple thereof is filtered through a membrane filter and filled into cleaned containers.
Geeignete Behälter sind z. B.Suitable containers are z. B.
a) Glas- oder Kunststoffbehälter (ä 5ml oder 10ml), welche eine Pipette aus Glas oder Kunststoff mit einem elastomeren Pipettensauger besitzen,a) glass or plastic containers (a 5ml or 10ml) containing a glass or plastic pipette with an elastomeric pipettor,
b) Knautschflaschen aus Kunststoff mit einem Steigrohr und einem Sprühkopf aus Kunststoff,b) plastic crumpled bottles with a riser and a plastic spraying head,
c) Einzeldosisbehälter aus Kunststoff (Inhalt 2-3 Tropfen) oderc) single dose plastic container (content 2-3 drops) or
d) Glas-oder Kunststoffflaschen, die mit einem normierten Pumpdosierspray aus Kunststoff versehen sind (ohne Treibgas).d) Glass or plastic bottles provided with a normalized pumped dosing spray of plastic (without propellant gas).
Beispiel 24: Nasensalbe Zusammensetzung:Example 24: Nose Ointment Composition:
i^^-Tri-O-acetyl-N-propionyl-des-methylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin- 0,03 gi ^^ - Tri-O-acetyl-N-propionyl-des-methylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine 0.03 g
benzhydrylesterbenzhydryl
Paraffinöl dickflüssig . 20,00 gParaffin oil viscous. 20.00 g
weißes Vaselin 30,00 gwhite Vaseline 30.00 g
Wollfett, wasserfrei , 40,00 gWool fat, anhydrous, 40.00 g
entmineralisiertes Wasser' 19,97 gdemineralised water 19.97 g
Die Fettphase, bestehend aus Paraffinöl, Vaselin und Wollfett, wird zusammengeschmolzen. Die wäßrige Lösung des Wirkstoffs wird bei ca. 50°C in die Fettphase eingearbeitet.The fat phase, consisting of paraffin oil, petrolatum and wool fat, is melted together. The aqueous solution of the active ingredient is incorporated at about 50 ° C in the fatty phase.
Beispiel 25: Herstellung von 1000 Tabletten, enthaltend 0,5% Wirkstoff Zusammensetzung pro 1 000 Tabletten:Example 25 Preparation of 1000 Tablets Containing 0.5% Active Ingredient Composition per 1000 Tablets
lAe-Tri-O-acetyl-Nr-propionyl-des-methylmuramyl-L-alanyl-D-LAE-tri-O-acetyl-Nr-propionyl-des-methylmuramyl-L-alanyl-D-
isoglutamin-benzhydrylester 0,5 gisoglutamine-benzhydryl ester 0.5 g
Lactose gemahlen 43,0 gLactose ground 43.0 g
Maisstärke 52,0 gCorn starch 52.0 g
Pharmacoat 603® (Hydroxypropylmethylcellulose, enthaltend 28-30% Methoxylgruppen, geliefert von Shinetsu Chemical Company,Pharmacoat 603® (hydroxypropylmethylcellulose containing 28-30% methoxyl groups, supplied by Shinetsu Chemical Company,
Toio, Japan) 3,0 gToio, Japan) 3.0 g
Aerosil® (kolloidales Siliziumdioxid, geliefert von Degussa, Frankfurt,Aerosil® (colloidal silica, supplied by Degussa, Frankfurt,
Bundesrepublik Deutschland) 1,0 gFederal Republic of Germany) 1.0 g
Magnesiumstearat 0,5 gMagnesium stearate 0.5 g
Der Wirkstoff und 15g Lactose werden vorgemischt. Die so erhaltene Vormischung wird mit 28g Lactose und 47 g Maisstärke zusammengemischt. Mit der so erhaltenen Mischung und einer wäßrigen Lösung des Pharmacoat wird eine granulierfertige Masse hergestellt, die granuliert, getrocknet und gemahlen wird. Hierzu mischt man 5g Maisstärke, Aerosil und JVIagnesiumstearat und komprimiert zu 1 000 Tabletten mit einem Gewicht .von je 100 mg. Die Preßlinge können auf an sich bekannte Weise magensaftresistent lackiert werden.The active ingredient and 15g lactose are premixed. The premix thus obtained is mixed together with 28 g of lactose and 47 g of corn starch. With the mixture thus obtained and an aqueous solution of the Pharmacoat a granulate-ready mass is prepared, which is granulated, dried and ground. For this purpose, 5 g of corn starch, Aerosil and magnesium magnesium stearate are mixed and compressed to give 1,000 tablets weighing 100 mg each. The compacts can be coated gastroresistant in a known per se.
Beispiel 26: Nach den in dieser Anmeldung beschriebenen Verfahren erhält man die folgenden Verbindungen:Example 26: Following the procedures described in this application, the following compounds are obtained:
N-Acetyl-1,4,6-tri-0-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-a-([2-benzyloxy-carbonylamino-ethyl]-sulfonyl-methyl)-glycinbenzylester,N-acetyl-1,4,6-tri-0-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-a - ([2-benzyloxy-carbonylamino-ethyl] sulfonyl-methyl) -glycine, benzyl ester,
N-Acetyl-i^^-tri-O-acetyl-muramyl-L-analyl-D-isoglutaminyl-L-O-acetyl-serin-benzylester, TAe-Tri-O-acetyl-N-benzoyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-dicholinester, N-Propionyl-IAB-tri-O-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzhydrylester, lAö-Tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-a-n-butylester-y-benzylester, lAe-Tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-dibenzylester, N-Acetyl-IAe-tri-O-propionyl-muramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutamin-benzhydrylester, 1,4,6-Tri-O-acetyI-N-benzoyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzylester und lAe-Tri-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-dipivaloyloxymethylester.N-acetyl-i ^^ - tri-O-acetyl-muramyl-L-analyl-D-isoglutaminyl-LO-acetyl-serine-benzyl ester, TAe-tri-O-acetyl-N-benzoyl-desmethylmuramyl-L-alanyl- D-glutamic acid dicholinester, N-propionyl-IAB-tri-O-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester, IA-tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D glutamic acid-an-butyl ester-y-benzyl ester, lAe-tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid dibenzyl ester, N-acetyl-IAe-tri-O-propionyl-muramyl-La aminobutyryl-D-isoglutamine-benzhydryl ester, 1,4,6-tri-O-acetyl-N-benzoyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzyl ester, and lAe-tri-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L- alanyl-D-glutamic acid dipivaloyloxymethylester.
Beispiel 27: Analog Beispiel 1 erhält man aus 250mg (circa 0,098mMol) rohem 4,6-di-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-dipivaloyloxymethylester (α,/3-Gemisch) und 2,0ml (21,OmMoI) Essigsäureanhydrid in 10ml absolutem Pyridin (18 Stunden, Raumtemperatur) lAe-Tri-O-acetyl-N-propionyl-des-methylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-dipivaloyloxymethylester (α,/3-Gemisch); Rf = 0,43 (Chloroform:Ethanol = 95:5), Rf = 0,56 (Chloroform:Methanol = 9:1), Rf = 0,72 (Chloroform:Methanol = 4:1)Example 27: Analogously to Example 1, from 250 mg (about 0.098 mmol) of crude 4,6-di-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid dipivaloyloxymethylester (α, / 3 mixture) and 2.0 ml (21, OmMoI) acetic anhydride in 10 ml of absolute pyridine (18 hours, room temperature). 1A-Tri-O-acetyl-N-propionyl-des-methylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid dipivaloyloxymethyl ester (α, / 3- Mixture); Rf = 0.43 (chloroform: ethanol = 95: 5), Rf = 0.56 (chloroform: methanol = 9: 1), Rf = 0.72 (chloroform: methanol = 4: 1)
Das Ausgangsmaterial erhält man wie folgt: The starting material is obtained as follows:
Stufe 27.1: Zu einer Lösung von 9,78g (34,1 mMol) N-tert.-Butyloxy-carbonyl-L-alanin-N-hydroxy-succinimidester in 200ml absolutem Ν,Ν-Dimethylformamid gibt man bei Raumtemperatur unter Rühren 15,9g (34,1 mMol) D-Glutaminsäure-(Ca)-pivaloyloxymethylester-(C,,)-benzylester-tosylat und 3,75ml (34,1 mMolJN-Methylmorpholin. Nach 18 Stunden Rühren bei Raumtemperatur wird im Vakuum bei 4O0C eingedampft. Das so erhaltene Rohprodukt (gelbes Öl) wird durch Säulenchromatographie an 800g Kieselgel (Typ 60, reinst, Merck; 0,063-0,2mm) im System Methylenchlorid-Essigsäureethylester (85:15) gereinigt (10ml Fraktionen). Die Fraktionen 126-230 werden vereinigt und im Vakuum bei 3O0C eingedampft. Man erhält N-tert.-Butyl-oxycarbonyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-iCJ-pivaloyloxymethylester-iCyJ-benzylester als gelbliches Öl; 'Step 27.1: To a solution of 9.78 g (34.1 mmol) of N-tert.-butyloxycarbonyl-L-alanine-N-hydroxy-succinimide ester in 200 ml of absolute Ν, Ν-dimethylformamide is added at room temperature with stirring 15, 9g (34.1 mmol) of D-glutamic acid (C a ) -pivaloyloxymethyl ester (C ,,) benzyl ester tosylate and 3.75 ml (34.1 mmol of 1N-methylmorpholine.) After stirring for 18 hours at room temperature in vacuo at 40 ° . evaporated 0 C. The crude product (yellow oil) so obtained is purified by column chromatography on 800g silica gel (type 60, reinst, Merck; 0,063-0,2mm) in the system methylene chloride-ethyl acetate (85:15) (10 ml fractions) fractions. 126-230 were combined and concentrated in vacuo at 3O evaporated 0C to give N-tert-butyl-oxycarbonyl-L-alanyl-D-glutamic acid pivaloyloxymethyl ester ICJ-iCyJ-benzyl ester as a yellowish oil;. '
[a]l° = -10,6 ± 0,1°C(c= 1,035; Methylenchlorid), Rf = 0,29 (MethylenchloridiEssigsäureethylester = 85:15), Rf = 0,73 (Methylenchlorid:Methanol = 9:1), Rf = 0,78 (Methylenchlorid:Methanol = 5:1). [ α ] l ° = -10.6 ± 0.1 ° C (c = 1.035, methylene chloride), Rf = 0.29 (methylene chloride / ethyl acetate = 85:15), Rf = 0.73 (methylene chloride: methanol = 9: 1 ), R f = 0.78 (methylene chloride: methanol = 5: 1).
Stufe27.2: Zu einer Lösung von 4,0g (7,65mMol) N-tert.-Butyloxycarbonyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-fCJ-pivaloyloxymethylester-(C?)-benzylester in 50 ml absolutem Essigsäureethylestergibt man bei 00C 100 ml ca. 5 N Salzsäure in . Essigsäureethylester und rührt 1 Stunde bei 0°C. Danach wird im Hochvakuum bei 3O0C eingedampft und der so erhaltene Rückstand mehrmals in Essigsäureethylester aufgenommen und erneut eingedampft. Man erhält einen farblosen Schaum, der in 50 ml Essigsäureethylester gelöst wird. Nach Zugabe von 250 ml Pentan und Kühlung auf -10°C erhält man L-Alanyl-D-glutaminsäure-iCJ-pivaloyl-oxymethylester-iC^-benzylester-hydrochlorid als farblose Kristalle vom Smp. 73-740C, die noch 0,63 Mol Wasser enthalten; .. ·Stufe27.2: To a solution of 4.0 g (7,65mMol) N-tert.-butyloxycarbonyl-L-alanyl-D-glutamic acid-fCj-pivaloyloxymethylester- (C?) -Benzyl ester in 50 ml of absolute Essigsäureethylestergibt one at 0 0 C 100 ml approx. 5 N hydrochloric acid in. Ethyl acetate and stirred for 1 hour at 0 ° C. Thereafter, in a high vacuum at 3O 0 C evaporated and the resulting residue taken up several times in ethyl acetate and again evaporated. A colorless foam is obtained which is dissolved in 50 ml of ethyl acetate. After addition of 250 ml of pentane and cooling to -10 ° C is obtained L-alanyl-D-glutamic acid iCJ-pivaloyl-oxymethyl ester-iC ^ benzyl ester hydrochloride as colorless crystals of mp. 73-74 0 C, which is still 0 , 63 moles of water; .. ·
Mg0 = +23,5 ± 0,1 °C (c = 1,150; Methanol), Rf = 0,20(Methylenchlorid:Methanol ='9:1), Rf = 0,49(Methylenchlorid:Methanol = 5:1), Rf = 0,87 (MethylenchloridiMethanohWasser = 70:30:5).Mg 0 = + 23.5 ± 0.1 ° C (c = 1.150, methanol), R f = 0.20 (methylene chloride: methanol = '9: 1), R f = 0.49 (methylene chloride: methanol = 5: 1 ), R f = 0.87 (methylene chloride-methanol water = 70: 30: 5).
Stufe27.3: Zu einer Suspension von 2,99g (~5,0mMol;enthält noch Natriumchlorid; 1,673mMol/g) 1-a-0-Benzyl-4,6-0,0-isopropyliden-N-propionyl-desmethylmuraminsäure-natriumsalz in 50ml absolutem Ν,Ν-Dimethylformamid werden bei Raumtemperatur unter Rühren nacheinander 1,34g (6,5mMol) N^-Dicyclohexylcarbodiimid, 1,03g (6,5mMol) 1-Hydroxybenzotriazol und 2,35g (5,OmMoI L-Alanyl-D-glutaminsäure-iCJ-pivaloyloxymethylester-lCyJ-benzylester-hydrochlorid gegeben und dann 22 Stunden bei Raumtemperatur weiter gerührt. Danach wird die Suspension filtriert (N,N-Dicyclohexylhamstoff) und das Filtrat im Hochvakuum bei 4O0C eingedampft. Den Rückstand, einen gelblichen Schaum, nimmt man in 100 ml Essigsäureethylester auf und wäscht die so erhaltene Lösung nacheinander mit je 50 ml 2 N Zitronensäure, 10%iger Natriumhydrogencarbonatlösung und Wasser. Die Essigesterphasen werden vereinigt, über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft. Das so erhaltene Rohprodukt wird durch Säulenchromatographie an 400g Kieselgel (Typ 60, reinst, Merck; 0,063-0,2 mm) zunächst mit Chloroform (Vorlauf 2 Liter), dann im System Chloroform-Ethanol (95:5) gereinigt (10ml Fraktionen). Die Fraktionen 93-122 werden vereinigt und im Vakuum eingedampft. Man erhält noch schwach verunreinigten i-a-O-Benzyl^e-OiO-isopropyliden-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-iC;,)-pivaloyloxymethylester-fCyl-benzylester als farblosen Schaum, der ohne weitere Reinigung verarbeitet wird; Rf = 0,55 (Chloroform:Ethanol = 9:1), Rf = 0,63 (Chloroform:Methanol = 9:1).Step 27.3: To a suspension of 2.99 g (~ 5.0 mmol, still contains sodium chloride, 1.673 mmol / g) of 1-α-O-benzyl-4,6-0,0-isopropylidene-N-propionyl-desmethylmuramic acid sodium salt in 50 ml of absolute Ν, Ν-dimethylformamide, 1.34 g (6.5 mmol) of N, -dicyclohexylcarbodiimide, 1.03 g (6.5 mmol) of 1-hydroxybenzotriazole and 2.35 g (5, OmMoI L-alanyl -D-glutamic acid-ICJ-pivaloyloxymethyl-lCyJ-benzyl ester hydrochloride was added and then stirred for a further 22 hours at room temperature. the suspension is evaporated filtered (N, N-dicyclohexylurea) and the filtrate under high vacuum at 4O 0 C. the residue, A yellowish foam, taken up in 100 ml of ethyl acetate and the resulting solution is washed successively with 50 ml of 2N citric acid, 10% sodium bicarbonate solution and water The ethyl acetate phases are combined, dried over sodium sulfate and evaporated in vacuo is through columns chromatography on 400g silica gel (type 60, purest, Merck; 0.063-0.2 mm) first with chloroform (flow 2 liters), then in the system chloroform-ethanol (95: 5) cleaned (10ml fractions). Fractions 93-122 are combined and evaporated in vacuo. Is still slightly poorly contaminated iaO-benzyl ^ e-OiO-isopropylidene-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid iC;,) - pivaloyloxymethylester-fCyl-benzyl ester as a colorless foam, which is processed without further purification; Rf = 0.55 (chloroform: ethanol = 9: 1), Rf = 0.63 (chloroform: methanol = 9: 1).
Stufe27.4: Zu einer Lösung von 830mg (1,OmMoI) i-a-O-Benzyl^e-O^-isopropyliden-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-iCJ-pivaloyloxymethylester-iCyJ-benzylesterin 28,5ml absolutem Methylenchlorid gibt man bei 0°C 1,5 ml Trifluoressigsäure und rührt das Ganze 1,5 Stunden bei0°C. Danach wird die so erhaltene farblose Lösung im Hochvakuum bei 400C zurTrockne eingedampft. Der Rückstand kristallisiert aus Chloroform-Methanol-Diethylether (5:1:70). Man erhält i-a-O-Benzyl-N-propionyl-desmethylm'uramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-iCJ-pivaloyloxymethylester-fC^-benzylesterals farblose Kristalle; Smp. 148-1490C; _ Rf = 0,33 (Chloroform:Methanol = 9:1)," Rf = 0,67 (Chloroform:Methanol = 4:1), Rf = 0,90 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5).Step 27.4: To a solution of 830mg (1, OmMoI) of 1o-Benzyl ^ eO ^ -isopropylidene-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid iCJ-pivaloyloxymethyl ester iCyJ-benzyl ester in 28.5ml of absolute methylene chloride 1.5 ml of trifluoroacetic acid at 0 ° C and stirred at 0 ° C for 1.5 hours. Thereafter, the colorless solution thus obtained is evaporated under high vacuum at 40 0 C to dryness. The residue crystallizes from chloroform-methanol-diethyl ether (5: 1: 70). Ia O-Benzyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid iCJ-pivaloyloxymethyl ester-Fc ^ -benzyl ester is obtained as colorless crystals; M.p. 148-149 0 C; Rf = 0.33 (chloroform: methanol = 9: 1), "Rf = 0.67 (chloroform: methanol = 4: 1), Rf = 0.90 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5) ,
Stufe27.5: 400mg (0,5mMol) i-a-O-Benzyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-fCa)-pivaloyloxymethylester-(Cr-benzylesterwerdenin80mlTetrahydrofuran-Methanol(4:1)mit200mg 10%iger Palladiumkohle als Katalysator bei Raumtemperatur unter Normaldruck hydriert. Nach beendeter Hydrierung (1 Stunde) wird vom Katalysator abfiltriert und das Filtrat im Hochvakuum eingedampft. Der Rückstand, ein farbloser Schaum, wird in einem Gemisch aus 30ml Tetrahydrofuran und 1 ml Wasser gelöst und die so erhaltene Lösung bei Raumtemperatur mit einer Lösung von 96mg (0,25 mMol) Cäsiumcarbonat in 0,38 ml Wasser versetzt. Nach einer halben Stunde stehen bei Raumtemperatur wird die farblose Lösung im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird anschließend zweimal mit je 100ml Methanol und einmal mit 100ml Ν,Ν-Dimethylformamid versetzt und erneut eingedampft. Man erhält noch schwer verunreinigtes 1-a-O-Benzyl-N-propionyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-tCJ-pivaloyloxymethylester-cäsiumsalz als farblosen Schaum, der ohne weitere Reinigung verarbeitet wird; Rf = 0,15 (Chloroform:Methanol = 4:1), Rf = 0,35 (Chloroform:Methanol = 7:3), Rf = 0,45 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5).Step 27.5: 400 mg (0.5 mmol) of iaO-benzyl-N-propionyl-demethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid-fCa) -pivaloyloxymethyl ester (C r -benzyl ester in 80 ml of tetrahydrofuran-methanol (4: 1) with 200 mg of 10% palladium carbon After completion of the hydrogenation (1 hour), the catalyst is filtered off and the filtrate is evaporated under high vacuum The residue, a colorless foam, is dissolved in a mixture of 30 ml of tetrahydrofuran and 1 ml of water and the resulting solution A solution of 96 mg (0.25 mmol) of cesium carbonate in 0.38 ml of water is added at room temperature, after half an hour at room temperature, the colorless solution is evaporated in vacuo and the residue is washed twice with 100 ml of methanol and once with 100 ml Ν, Ν-dimethylformamide is added and evaporated again to give still heavily contaminated 1-aO-benzyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid-tCJ-pivaloyloxymethylester- cesium salt as a colorless foam, which is processed without further purification; R f = 0.15 (chloroform: methanol = 4: 1), R f = 0.35 (chloroform: methanol = 7: 3), R f = 0.45 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5).
Stufe 27.6: Zu einer Lösung von 420mg (0,5mMol) i-a-O-Benzyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-(CJ-pivaloyloxymethylester-cäsiumsalz in 15ml Ν,Ν-Dimethylformamid gibtman bei Raumtemperatur unter Rühren 150mg (145μΙ, 1,OmMoI) Pivalinsäure-chlormethylester und 150mg (1,OmMoI) Natriumiodid. Das so erhaltene Gemisch wird 18 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, dann werden nochmals 145μΙ (1,OmMoI) Pivalinsäurechlormethylester und 150 mg (1,OmMoI) Natriumiodid zugegeben und weitere 48 Stunden gerührt. Anschließend wird das Gemisch im Hochvakuum bei 300C eingedampft. Das Rohprodukt reinigt man durch zweifache Säulenchromatographie an 200 bzw. 250g Kieselgel (Typ 60, reinst, Merck; 0,063-0,2mm) im System Chloroform-Methanol (9:1) bzw. Chloroform:Methanol (95:5). Die das gewünschte Produkt enthaltenden Fraktionen werden jeweils vereinigt und im Vakuum eingedampft. Man erhält 1-a-O-Benzyl-N-propionyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-dipivaloyloxymethylester;Step 27.6: To a solution of 420mg (0.5 mmol) of iaO-benzyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid (CJ-pivaloyloxymethyl ester cesium salt in 15 mL of Ν, Ν-dimethylformamide is added 150mg at room temperature with stirring (145μΙ, 1, OmMoI) pivaloyl chloromethyl ester and 150mg (1, OmMoI) sodium iodide The resulting mixture is stirred at room temperature for 18 hours then 145μΙ (1, OmMoI) pivaloyl chloroate and 150 mg (1, OmMoI) sodium iodide are added The mixture is then evaporated under high vacuum at 30 ° C. The crude product is purified by double column chromatography on 200 or 250 g of silica gel (type 60, very pure, Merck, 0.063-0.2 mm) in the chloroform-methanol system (9: 1) or chloroform: methanol (95: 5) The fractions containing the desired product are each combined and evaporated in vacuo to give 1-a-benzyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid. dipivaloyloxymethy lester;
Rf = 0,25 (Chloroform:Methanol = 9:1),Rf = 0.25 (chloroform: methanol = 9: 1),
Rf =~0,35(Chloroform:Ethanol = 9:1), · ' . "Rf = ~0.35 (chloroform: ethanol = 9: 1). "
Rf = 0,70(Chloroform:Methanol = 4:1).Rf = 0.70 (chloroform: methanol = 4: 1).
Stufe 27.7: Analog Beispiel 1 erhält man aus 80mg (0,098mMol) 1-a-O-Benzyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäuredipivaloyloxymethylester und 0,8ml (8,4mMol) Essigsäureanhydrid in 8ml absolutem Pyridin (18 Stunden Raumtemperatur) 4,6-Di-O-acetyl-i-a-benzyl-N-pröpionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-Stage 27.7: Analogously to Example 1, from 80 mg (0.098 mmol) of 1-α-O-benzyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid dipivaloyloxymethyl ester and 0.8 ml (8.4 mmol) of acetic anhydride in 8 ml of absolute pyridine (18 hours Room temperature) 4,6-di-O-acetyl-ia-benzyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid
dipivaloyloxymethylester; ' dipivaloyloxymethylester; '
Rf = 0,50 (Chloroform:Ethanol = 95:5),Rf = 0.50 (chloroform: ethanol = 95: 5),
Rf = 0,65 (Chloroform:Ethanol = 9:1),Rf = 0.65 (chloroform: ethanol = 9: 1),
Rf = 0,77 (Chloroform:Methanol = 9:1).Rf = 0.77 (chloroform: methanol = 9: 1).
Stufe27.8: 140mg (0,098mMol 4,6-Di-0-acetyl-1-a-0-benzyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-giutaminsäuredipivaloyloxymethylester werden in 80ml Dimethoxyethan-Wasser (9:1) mit Palladiumkohle (Degussa, E101 N) als Katalysator 20 Stunden bei Raumtemperatur unter Normaldruck hydriert. Danach wird vom Katalysator abfiltriert und das Filtrat im Hochvakuum bei 30°C eingedampft. Man erhält rohen 4,6-Di-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmurarnyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-dipivaloyloxymethylester (α,/3-Gemisch),' der ohne weitere Reinigung verarbeitet wird; Rf = 0,38(Chloroform:Methanol = 9:1),Step 27.8: 140mg (0.098 mmol) of 4,6-di-O-acetyl-1-a-O-benzyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-giutamic acid dibivaloyloxymethyl ester are dissolved in 80 ml of dimethoxyethane-water (9: 1). with palladium carbon (Degussa, E101N) as the catalyst for 20 hours at room temperature under atmospheric pressure, followed by filtering off the catalyst and evaporating the filtrate in a high vacuum at 30 ° C. This gives crude 4,6-di-O-acetyl-N-propionyl -desmethylmurarnyl-L-alanyl-D-glutamic acid dipivaloyloxymethyl ester (α, / 3 mixture), which is processed without further purification, R f = 0.38 (chloroform: methanol = 9: 1),
Rf = 0,64 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5),Rf = 0.64 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5),
Rf = 0,68 (Chloroform:Methanol = 4:1). .. ·Rf = 0.68 (chloroform: methanol = 4: 1). .. ·
Beispiel 28: Analog Beispiel 1 erhält man aus 174,0mg (0,25mMol) N-Pfopionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin-benzoyloxymethylester, der noch Spuren von N-Methyl-morpholin-hydrochlorid enthält, in 1,7 ml absolutem Pyridin mit 0,1 ml (1,04mMol) Essigsäureanhydrid unter Zusatz von wenig 4-Dimethylamino-pyridin 1,4,6-Tri-O-acetyl-N-propionyldesmethylmuramyl-L-alan'yl-D-isoglutaminyl-L-alanin-benzoyloxymethylester (α,/3-Gemisch) als farblose Kristalle; Smp. 177-178°C(ausMethylenchlorid:Diethylether = 1:1), Rf = 0,45 (Chloroform:Methanol = 4:1), Rf = 0,64 (Chloroform:Methanol = 7:3)EXAMPLE 28 Analogous to Example 1, 174.0 mg (0.25 mmol) of N-pentoxodyl-dem-methylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanine-benzoyloxymethyl ester, which still contains traces of N-methylmorpholine hydrochloride, are obtained. in 1.7 ml of absolute pyridine with 0.1 ml (1.04 mmol) of acetic anhydride with the addition of a little 4-dimethylaminopyridine 1,4,6-tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D -isoglutaminyl-L-alanine-benzoyloxymethyl ester (α, / 3 mixture) as colorless crystals; Mp 177-178 ° C (from methylene chloride: diethyl ether = 1: 1), Rf = 0.45 (chloroform: methanol = 4: 1), Rf = 0.64 (chloroform: methanol = 7: 3)
Das Ausgangsmaterial erhält man wie folgt: The starting material is obtained as follows:
Stufe 28.1: Eine Lösung von 18,9g (0,1 Mol) N-tert.-Butyloxycarbolyl-L-alanin in 50ml Ν,Ν-Dimethylacetamid wird mit 14,9ml (0,1 Mol) 1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-en und 36,2ml (0,45 Mol) Diiodmethan versetzt und 7 Stunden bei 22°C gerührt. Man dampft die Lösung im Hochvakuum ein und gibt zum Rückstand eine Suspension von 36,6g (0,3 Mol) Benzoesäure, 6,1 g (0,05 Mol) 4-Dimethylaminopyridin und 37,3ml !,S-DiazabicycloIöAOlundec-J-en in 75ml Ν,Ν-Dimethylacetamid. Die nach 40 Minuten entstandene klare Lösung wird 16 Stunden bei 220C stehengelassen. Man schüttelt den Ansatz mit einem Gemisch aus 0,3molarer Dikaliumhydrogenphosphat-Lösung und Essigsäureethylester, trennt.die organische Schicht ab, wäscht sie mit weiterer Phosphat-Lösung, trocknet über Natriumsulfat und dampft ein. Digerieren des Rückstandes mit Pentan, dann Pentan-Diethylether (3:1) gibt N-tert.-Butyloxycarbonyl-L-alanin-benzoyloxymethylester; Rf = 0,68 (ChloroforrmEssigsäureethylester = 9:1).Step 28.1: A solution of 18.9 g (0.1 mol) of N-tert-butyloxycarbolyl-L-alanine in 50 ml of Ν, Ν-dimethylacetamide is mixed with 14.9 ml (0.1 mol) of 1,8-diazabicyclo [5.4 .O] undec-7-ene and 36.2 ml (0.45 mol) of diiodomethane and stirred at 22 ° C for 7 hours. The solution is evaporated under high vacuum and the residue is a suspension of 36.6 g (0.3 mol) of benzoic acid, 6.1 g (0.05 mol) of 4-dimethylaminopyridine and 37.3 ml!, S-DiazabicycloIöAOlundec-J- in 75ml Ν, Ν-dimethylacetamide. The resulting after 40 minutes clear solution is allowed to stand for 16 hours at 22 0 C. The mixture is shaken with a mixture of 0.3 molar dipotassium hydrogen phosphate solution and ethyl acetate, the organic layer is separated, washed with further phosphate solution, dried over sodium sulfate and evaporated. Trituration of the residue with pentane, then pentane-diethyl ether (3: 1) gives N-tert-butyloxycarbonyl-L-alanine-benzoyloxymethyl ester; Rf = 0.68 (chloroformate = 9: 1).
Stufe28.2: 3,72g (11,5mMol) N-tert.-Butyloxycarbonyl-L-alanin-benzoyloxymethylesterwerden bei O0C in 100ml einer 5molaren Chlorwasserstoff-Lösung in Essigsäureethylester klar gelöst und 2 Stunden bei 0°C stehengelassen. Bei O0C wird die Lösung zu 200 ml Diethylether-Pentan (1:1) gegeben und nach 20 Minuten Rühren bei 00C das ausgefallene gelartige Rohprodukt abfiltriert. Es wird 2 Stunden bei 220C in 360 ml Essigsäureethylester-Diethylether-Pentan (1:1:1) verrührt, dann abfiltriert. Man erhält L-Alanin-benzoyloxymethylester-hydrochlorid; Smp. 99-1000C.Stufe28.2: 3,72g (11.5 mmol) of N-tert-butyloxycarbonyl-L-alanine benzoyloxymethylesterwerden clear solution at 0 ° C in 100 ml of a 5molaren hydrogen chloride solution in ethyl acetate and allowed to stand at 0 ° C for 2 hours. At 0 ° C., the solution is added to 200 ml of diethyl ether-pentane (1: 1) and, after stirring for 20 minutes at 0 ° C., the precipitated gel-like crude product is filtered off. It is stirred for 2 hours at 22 0 C in 360 ml of ethyl acetate-diethyl ether-pentane (1: 1: 1), then filtered off. L-alanine-benzoyloxymethyl ester hydrochloride is obtained; Mp. 99-100 0 C.
Stufe 28.3: Zu einer Lösung von 506mg (1,OmMoI) N-Propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin, das 0,77 Mol Wasser enthält, in 10ml absolutem Ν,Ν-Dimethylformamid gibtman bei Raumtemperatur unter Rühren 268mg (1,3mMol) NjN-Dicyclohexylcarbodiimid und 207mg (1,3mMol) 1-Hydroxy-benzotriazol. Nach 2 Stunden wird die so erhaltene farblose Suspension nacheinander mit 269 mg (1,OmMoI) L-Alanin-benzoyioxymethylester-hydrochlorid und 110μ.Ι (1,OmMoI) N-Methylmorpholin versetzt und danach bei Raumtemperatur weitergerührt. Nach 22 Stunden wird von ausgefallenem N,N-Dicyclohexylharnstoff abfiltriert und das Filtrat im Hochvakuum bei 3O0C eingedampft. Der so erhaltene, schwach gelbgefärbte Rückstand (Schaum) wird in 25ml Essigsäureethylester suspendiert und diese Suspension 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Das in Form farbloser Kristalle erhaltene Rohprodukt wird-durch Säulenchromatographie an 150g Kieselgel (Typ 60, reinst, Merck; 0,063-0,2mm) im System Chloroform-Methanol-Wasser (70:30:5) weiter gereinigt (5ml Fraktionen). Die Fraktionen 25-35 werden vereinigt und im Hochvakuum eingedampft. Man erhält fast reinen N-Propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin-benzoyioxymethylester (α,/3-Gemisch) als farblosen Schaum, der noch Spuren von N-Methylmorpholin-hydrochlorid enthält und ohne weitere Reinigung verarbeitet wird; Rf = 0,36 (Chloroform:Methanol = 7:3), Rf = 0,41 (Chloroform: Methanol :Wasser = 70:30:5), Rf = 0,74 (Acetonitril:Wasser = 3:1).Step 28.3: To a solution of 506 mg (1, OmMoI) of N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine containing 0.77 mol of water in 10 ml of absolute Ν, Ν-dimethylformamide is added 268 mg at room temperature with stirring. 1.3 mmol) N, N-dicyclohexylcarbodiimide and 207 mg (1.3 mmol) of 1-hydroxybenzotriazole. After 2 hours, the thus obtained colorless suspension is added successively with 269 mg of (1, OmMoI) L-alanine-benzoyioxymethyl ester hydrochloride and 110 .mu.l (1, OmMoI) N-methylmorpholine and then stirred further at room temperature. After 22 hours, is filtered off from the precipitated N, N-dicyclohexylurea and the filtrate was evaporated under high vacuum at 3O 0 C. The thus obtained, slightly yellow-colored residue (foam) is suspended in 25 ml of ethyl acetate and this suspension is stirred for 1 hour at room temperature. The crude product obtained as colorless crystals is further purified by column chromatography on 150 g of silica gel (type 60, very pure, Merck, 0.063-0.2 mm) in the system chloroform-methanol-water (70: 30: 5) (5 ml fractions). Fractions 25-35 are combined and evaporated under high vacuum. Almost pure N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanine-benzoyioxymethylester (α, / 3 mixture) is obtained as a colorless foam, which still contains traces of N-methylmorpholine hydrochloride and processed without further purification becomes; Rf = 0.36 (chloroform: methanol = 7: 3), Rf = 0.41 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5), Rf = 0.74 (acetonitrile: water = 3: 1).
Beispiel 29: 1,95g (2,18mMol) N-Acetyl-muramyl-L-aianyl-D-isoglutaminyl-L-lC^HU-benzyloxycarbonylamino-ethyl]-sulfonylmethyl)-glycin-benzylester werden in 40 ml abs. Pyridin gelöst und mitder30fachen molaren Menge an Essigsäureanhydrid peracetyliert (30 Stunden, RT). Die gallertige Masse wird mit wenig Wasser in Lösung gebracht, das Ganze am Rotationsverdampfer im Hochvakuum bei 30cC auf ein kleines Volumen eingeengt und nach Zugabe von abs. Dioxan lyophilisiert. Das Rohprodukt wird an Kieselgel (Korngröße 0,04-0,063 mm) erst mit Chloroform, dann mit Chloroform-Methanol-, Gemischen (98:2 bis 1:1') einer Flash-chromatographie (145:1; 25ml Fraktionen; 0,5 bar) unterworfen. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden gesammelt, in 90%igem Dioxan (80 ml) gelöst und nach Sterilfiltration (0,2/xm; PTFE) lyophilisiert. Man erhält N-Acetyl-1,4,6-tri-0-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-(C")-([2-benzyloxycarbonylaminoethyll-sulfonyl-methylj-glycin-benzylester (α,/3-Gemisch) als schwach gelbliches Pulver, 1,27 Mol Wasser enthaltend: [a]§° = +36,6 ± 10C (c = 1,030; Dimethylformamid), - rExample 29: 1.95 g (2.18 mmol) of N-acetyl-muramyl-L-aylyl-D-isoglutaminyl-L-1-C 1 H 4 -benzyloxycarbonylamino-ethyl] -sulfonylmethyl) -glycine-benzyl ester are dissolved in 40 ml of abs. Pyridine and peracetylated with 30 times the molar amount of acetic anhydride (30 hours, RT). The gelatinous mass is brought into solution with a little water, the whole on a rotary evaporator in a high vacuum at 30 c C concentrated to a small volume and after addition of abs. Dioxane lyophilized. The crude product is chromatographed on silica gel (particle size 0.04-0.063 mm) first with chloroform, then with chloroform-methanol, mixtures (98: 2 to 1: 1 ') of a flash chromatography (145: 1; 25 ml fractions; 5 bar). The fractions containing the product are collected, dissolved in 90% dioxane (80 ml) and lyophilized after sterile filtration (0.2 / xm; PTFE). N-acetyl-1,4,6-tri-O-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L- (C ") - ([2-benzyloxycarbonylaminoethyl-sulfonyl-methyl-glycine-benzyl ester (α , / 3 mixture) containing as a pale yellowish powder, 1.27 mole of water: [a] = +36.6 ± 1 ° § 0 C (c = 1.030; dimethylformamide), - r
Rf = 0,15 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5), Rf = 0,53 (n-Butanol:Essigsäure:Wasser = 75:7,5:21),Rf = 0.15 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5), Rf = 0.53 (n-butanol: acetic acid: water = 75: 7.5: 21),
Rf = 0,61 (Acetonitril :Wasser = 3:1). · ' ,R f = 0.61 (acetonitrile: water = 3: 1). · ',
Das Ausgangsmaterial erhält man wie folgt:The starting material is obtained as follows:
Stufe 29.1: Zu einer Lösung von 8,50g (2OmMoI) N^Benzyloxycarbonyl-L-thialysin-benzylester-hydrochlorid werden innerhalb von 30 Minuten bei RT unter Rühren 21,5g (10QmMoI) einer 31,4%igen Wasserstoffperoxidlösung eingetropft. Nach . 30stündigem Rühren werden zur Zersetzung von überschüssigem Peroxid 1,5g Palladiumkohle (5%ig) eingetragen, wobei eine starke Gasentwicklung eintritt. Nach 3stündigem Rühren wird der Katalysator entfernt und die Reaktionslösung am Rotationsverdampfer bei 30cC zur Trockne verdampft. Der ölige Rückstand wird in 11 ml Aceton gelöst und durch Zugabe von 20mi Diethylether zur Kristallisation gebracht. Nach Rekristallisation aus dem gleichen Gemisch erhält man Νε-Benzyloxycarbonyl-L-thialysin-S^-dioxid-benzylester-hydrochlorid in Form farbloser Nadeln; Smp. 141—142CC (Zers.); Smp. des p-Toluolsulfonats 130-1340C (Zers.); Rf = 0,50 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5), Rf = 0,89 (Methylethylketon:Pyridin:Wasser = 65:5:20), Rf= 0,71 (n-Butanol:Eisessig:Wasser = 3:1:1). .Step 29.1: To a solution of 8.50 g (2OmMoI) N ^ benzyloxycarbonyl-L-thialysine benzyl ester hydrochloride are added dropwise within 30 minutes at RT with stirring 21.5 g (10QmMoI) of a 31.4% hydrogen peroxide solution. To . 30 hours of stirring to decompose excess peroxide 1.5 g of palladium (5%) are entered, with a strong gas evolution occurs. After stirring for 3 hours the catalyst is removed and the reaction solution is evaporated on a rotary evaporator at 30 c C to dryness. The oily residue is dissolved in 11 ml of acetone and brought to crystallization by addition of 20mi diethyl ether. Recrystallization from the same mixture gives Ν ε- benzyloxycarbonyl-L-thialysine-S-dioxide benzyl ester hydrochloride in the form of colorless needles; Mp 141-142 C C (Zers.); . Mp of the p-toluenesulfonate 130-134 0 C (dec.); R f = 0.50 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5), R f = 0.89 (methyl ethyl ketone: pyridine: water = 65: 5: 20), R f = 0.71 (n-butanol: glacial acetic acid : Water = 3: 1: 1). ,
Stufe29.2: 2,95g (6mMol) N-Acetyl-murarnyl-L-alanyl-D-isoglutamin und 2,74g (6mMol) NE-Benzyloxycarbonyl-L-thialysin-S,S-dioxid-benzylester-hydrochlorid werden wie üblich (siehe Stufe 30.1) nach der Dicyclohexylcarbodiimid-i-Hydroxy-benztriazol-Methode miteinander verknüpft. Nach total 51 Stunden Rühren bei RT wird die rötliche Suspension mit 200ml Essigsäureethylester versetzt, nach 1 stündigem Rühren das Unlösliche abfiltriert und das Filtratam Rotationsverdampfer im Hochvakuum bei 30°C zur Trockne verdampft. Der Rückstand wird mit je 100 ml Essigsäureethylester und Wasser versetzt und während einer Stunde gerührt. Das gallertige Material wird abfiltriert,-getrocknet und dann zwischen je 80 ml Ober- und Unterphase von gegeneinander gesättigtem n-Butanol-Wasser (1:1) verteilt. Nach einstündigem Rühren wird das unlösliche Material abgesaugt, gewaschen und getrocknet. Man erhält N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-(Coi)-([2-benzytoxycarbonylamino-ethyl]-sulfonylmethyl)-glycin-benzylester (α,/3-Gemisch) in Form eines weißen Pulvers, 1,63 Mol Wasser enthaltend;Step 29.2: 2.95 g (6 mmol) of N-acetyl-murarnyl-L-alanyl-D-isoglutamine and 2.74 g (6 mmol) of N E -benzyloxycarbonyl-L-thialysine S, S-dioxide benzyl ester hydrochloride are as described customary (see step 30.1) by the Dicyclohexylcarbodiimid-i-hydroxy-benzotriazole method linked together. After a total of 51 hours of stirring at RT, the reddish suspension is mixed with 200 ml of ethyl acetate, after 1 hour of stirring, the insoluble matter is filtered off and the filtrate is evaporated to dryness in a high vacuum at 30 ° C. The residue is treated with 100 ml of ethyl acetate and water and stirred for one hour. The gelatinous material is filtered off, dried and then distributed between each 80 ml upper and lower phase of mutually saturated n-butanol-water (1: 1). After stirring for one hour, the insoluble material is filtered off with suction, washed and dried. This gives N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L (C oi ) - ([2-benzytoxycarbonylamino-ethyl] -sulfonylmethyl) -glycine-benzyl ester (α, / 3 mixture) in the form of a white Powder, containing 1.63 moles of water;
Rf = 0,60 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5),Rf = 0.60 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5),
Rf = 0,83 (Acetonitril :Wasser = 3:1). ' . "_R f = 0.83 (acetonitrile: water = 3: 1). '. "_
Beispiel30: 1,50g (2,24mMol) N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-serin-benzylesterwerden in 40ml abs. Pyridin suspendiert und mit der 40fachen molaren Menge an Essigsäureanhydrid peracetyliert. Das nach 24stündigem Rühren bei RT erhaltene gallertige Material wird durch Zugabe von 5 ml Wasser in Lösung gebracht, das Ganze am Rotationsverdampfer im Hochvakuum (300C) auf etwa 5 ml eingeengt, mit doppelt-destilliertem Wasser versetzt und lyophilisiert. Das Rohprodukt wird in· 50ml warmem Essigsäureethylester aufgenommen und durch Zugabe von fünf Volumenteilen Diethylether gefällt (2x). Der Niederschlag wird in Chloroform-Methanol (1:1) gelöst, sterilfiltriert {0,2^m, PTFE), nach Verdampfen des Lösungsmittels in abs. Dioxan aufgenommen und gefriergetrocknet. Man erhält N-Acetyl-1 Ae-O-triacetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-O-acetyl-serin-benzylester-hydrat («,^-Gemisch) als farbloses Pulver; [a]§° = +26,5 ± 0,9°C(c = 1,096; Chloroform:Methanol = 1:1), Rf = 0,10 (Chloroform:lsopropanol = 7:2), Rf = 0,69 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5), Rf = 0,33 (n-Butanol:Essigsäure:Wasser = 75:7, 5:21)Example 30: 1.50 g (2.24 mmol) of N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-serine-benzyl ester are dissolved in 40 ml abs. Pyridine and peracetylated with 40 times the molar amount of acetic anhydride. The gelatinous material obtained after stirring for 24 hours at RT is brought into solution by addition of 5 ml of water, the whole on a rotary evaporator under high vacuum (30 0 C) concentrated to about 5 ml, treated with double-distilled water and lyophilized. The crude product is taken up in 50 ml of warm ethyl acetate and precipitated by the addition of five volumes of diethyl ether (2X). The precipitate is dissolved in chloroform-methanol (1: 1), sterile filtered {0.2 ^ m, PTFE), after evaporation of the solvent in abs. Dioxane taken up and freeze-dried. N-acetyl-1 Ae-O-triacetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-O-acetyl-serine-benzyl ester hydrate is obtained as a colorless powder; [a] § ° = +26.5 ± 0.9 ° C (c = 1.096, chloroform: methanol = 1: 1), Rf = 0.10 (chloroform: isopropanol = 7: 2), Rf = 0.69 (Chloroform: methanol: water = 70: 30: 5), Rf = 0.33 (n-butanol: acetic acid: water = 75: 7, 5:21)
Das Ausgangsmaterial erhält man wie folgt: The starting material is obtained as follows:
Stufe30.1: 5,00g (10,15mMol) N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamin,2,00g (13,2mMol) 1-Hydroxybenztriazol (12%Wasser enthaltend) und 2,35g (10,15 mMol) L-Serin-benzylester-hydrochlorid werden in 50 ml Dimethylformamid gelöst. Dazu fügt man 1,17ml (10,66mMol) N-Methyl-morpholin und schließlich 2,72g (13,2mMol) N^'-Dicyclohexylcarbodiimid. Nach 24stündigem Rühren bei RT wird die rötliche Suspension mit 100 ml Essigsäureethylester versetzt und während einer Stunde gerührt. Der unlösliche Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert und das Filtrat im Hochvakuum am Rotationsverdampfer bei 30°C eingedampft. Das erhaltene gelbe Öl wird an Kieselgel (60:1; 15ml Fraktionen) im System Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5 gereinigt. Die das Produkt enthaltenden reinen Fraktionen werden gesammelt und nach Verdampfen des Lösungsmittels aus tert.-Butanol-Wasser (9:1) lyophilisiert. Man erhält N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-serin-benzylester (α,/3-Gemisch) als farbloses Pulver, 1,87 Mol Wasser enthaltend; W§46nm = +12,4 ± 10C (c = 0,978; Wasser), Rf = 0,41 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5),Step 30.1: 5.00 g (10.15 mmol) of N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamine, 2.00 g (13.2 mmol) of 1-hydroxybenzotriazole (containing 12% water) and 2.35 g (10, 15 mmol) of L-serine benzyl ester hydrochloride are dissolved in 50 ml of dimethylformamide. To this are added 1.17 ml (10.66 mmol) of N-methylmorpholine and finally 2.72 g (13.2 mmol) of N, N''-dicyclohexylcarbodiimide. After stirring for 24 hours at RT, the reddish suspension is mixed with 100 ml of ethyl acetate and stirred for one hour. The insoluble dicyclohexylurea is filtered off and the filtrate is evaporated in a high vacuum on a rotary evaporator at 30 ° C. The resulting yellow oil is purified on silica gel (60: 1, 15 ml fractions) in the system chloroform: methanol: water = 70: 30: 5. The pure fractions containing the product are collected and, after evaporation of the solvent from tert-butanol-water (9: 1), lyophilized. This gives N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-serine-benzyl ester (α, / 3 mixture) as a colorless powder, containing 1.87 moles of water; W§46nm = +12.4 ± 1 0 C (c = 0.978; water), Rf = 0.41 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5),
Rf = 0,59 (Essigsäureethylester:n-Butanol:Pyridin:Essigsäure:Wasser = 42:21:21:6:10).Rf = 0.59 (ethyl acetate: n-butanol: pyridine: acetic acid: water = 42: 21: 21: 6: 10).
Beispiel 31: 0,36g (0,535mMol) N-Acetyl-muramyl-L-N-methyl-alanyl-D-isoglutamin-benzhydrylester (α,/3-Gemisch) werden in 4ml abs. Pyridin gelöst und nach Zugabe von 0,15 ml (16 mMol) Acetanhydrid während drei Stunden bei RT stehengelassen. Die gelbliche Lösung wird bei 300C im Hochvakuum eingedampft, in 10 ml Wasser aufgenommen und lyophilisiert. Das Rohprodukt wird durch Chromatographie an Kieselgel (1:180) im System Chloroform-Isopropanol (9:1) (0,8ml Fraktionen) gereinigt. Die einheitlichen Fraktionen werden gesammelt und aus abs. Dioxan lyophilisiert. Man erhält N-Acetyl-i^^-tri-O-acetyl-muramyl-L-N-methyl-alanyl-D-isoglutamin-benzhydrylester (α,/3-Gemisch) als farbloses Pulver; Rf = 0,61 (n-Butanol:Essigsäure:Wasser = 75:7,5:21), Rf = 0,20 (ChloroforiTKlsopropanohEssigsäure = 70:8:2).Example 31: 0.36 g (0.535 mmol) of N-acetyl-muramyl-LN-methyl-alanyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester (α, / 3 mixture) are dissolved in 4 ml of abs. Pyridine dissolved and after addition of 0.15 ml (16 mmol) of acetic anhydride for three hours at RT allowed to stand. The yellowish solution is evaporated at 30 0 C under high vacuum, taken up in 10 ml of water and lyophilized. The crude product is purified by chromatography on silica gel (1: 180) in the system chloroform-isopropanol (9: 1) (0.8 ml fractions). The uniform fractions are collected and from abs. Dioxane lyophilized. This gives N-acetyl-i ^^ - tri-O-acetyl-muramyl-LN-methyl-alanyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester (α, / 3 mixture) as a colorless powder; Rf = 0.61 (n-butanol: acetic acid: water = 75: 7.5: 21), Rf = 0.20 (chloroforil-1-chloro-acetic acid = 70: 8: 2).
Das Ausgangsmaterial erhält man wie folgt:The starting material is obtained as follows:
Stufe31.1: 0,50g (0,99mMol) N-Acetyl-muramyl-L-N-methyl-alanyl-D-isoglutamin (α,/3-Gemisch), gelöst in Methanol, werden mit überschüssigem Diphenyldiazomethan verestert. Nach zweistündigem Stehen wird zur Trockne verdampft und der Rückstand mehrfach mit Petrolether verrieben. Man saugt ab, nimmt den Rückstand in wenig Methanol auf und fällt das Material mit der zehnfachen Menge an Diethylether: Petrolether (1:1) aus. Man erhält N-Acetyl-muramyl-L-N-methyl-alanyl-D-isoglutamin-benzhydrylester als farbloses Pulver;Step 31.1: 0.50 g (0.99 mmol) of N-acetyl-muramyl-L-N-methyl-alanyl-D-isoglutamine (α, / 3 mixture) dissolved in methanol are esterified with excess diphenyldiazomethane. After standing for two hours, it is evaporated to dryness and the residue triturated several times with petroleum ether. It is suctioned off, the residue is taken up in a little methanol and the material precipitates with ten times the amount of diethyl ether: petroleum ether (1: 1). N-acetyl-muramyl-L-N-methyl-alanyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester is obtained as a colorless powder;
Rf = 0,76 (Acetonitril:Wasser = 3:1),Rf = 0.76 (acetonitrile: water = 3: 1),
Rf = 0,63 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5).Rf = 0.63 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5).
Beispiel 32: 0,50g (0,99 mMol) N-Acetyl-muramyl-a-aminoisobutyryl-D-isoglutamin (α,/3-Gemisch) werden analog Stufe 31.1 mit Diphenyldiazomethan verestert. Das Rohprodukt (Rf = 0,48 [Chloroform:Methanol:Wasser =70:30:5]) wird analog Beispiel 31 peracetyliert. Die Reaktionslösung wird im Vakuum zur Trockne verdampft, in Wasser aufgenommen und lyophilisiert. Die Reinigung erfolgt an Kieselgel (1:100) in Chloroform-Methanol (9:1,1 ml Fraktionen). Die reinen Fraktionen werden vereinigt, in 5ml Chloroform aufgenommen, filtriert (PTFE; 0,2μηι) und dann zur Trockne verdampft. Der Rückstand wird in abs. Dioxan aufgenommen und lyophilisiert. Man erhält N-Acetyl-i^^-tri-O-acetyi-muramyl-a-aminoisobutyryl-D-isoglutaminbenzhydrylester (α,/3-Gemisch) als farbloses Pulver, 0,73 Mol Wasser enthaltend; [a]g° = +45,7 ± 1 °C (c = 0,993; Methanol),Example 32: 0.50 g (0.99 mmol) of N-acetyl-muramyl-α-aminoisobutyryl-D-isoglutamine (α, / 3 mixture) are esterified analogously to step 31.1 with diphenyldiazomethane. The crude product (R f = 0.48 [chloroform: methanol: water = 70: 30: 5]) is peracetylated analogously to Example 31. The reaction solution is evaporated to dryness in vacuo, taken up in water and lyophilized. Purification on silica gel (1: 100) in chloroform-methanol (9: 1.1 ml fractions). The pure fractions are combined, taken up in 5 ml of chloroform, filtered (PTFE, 0,2μηι) and then evaporated to dryness. The residue is in abs. Dioxane taken and lyophilized. This gives N-acetyl-i ^^ - tri-O-acetyl-muramyl-a-aminoisobutyryl-D-isoglutaminbenzhydrylester (α, / 3 mixture) as a colorless powder, containing 0.73 mol of water; [a] g ° = + 45.7 ± 1 ° C (c = 0.993, methanol),
Rf = 0,80 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5),Rf = 0.80 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5),
Rf = 0,32 (Chloroform:Methanol = 9:1),Rf = 0.32 (chloroform: methanol = 9: 1),
Rf = 0,50 (n-Butanol:Essigsäure:Wasser = 75:7, 5:21).Rf = 0.50 (n-butanol: acetic acid: water = 75: 7, 5:21).
Beispiel 33: 33mg N-Acetyl-desmethylmuramyl-L-alanyi-D-y-methoxycarbonyl-isoglutamin-benzhydrylester (α,/3-Gemisch) werden analog Beispiel 31 peracetyliert. Nach Lyophilisation aus abs. Dioxan verbleibt N-Acetyl-i^^-tri-O-acetyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-y-methoxycarbonyl-isoglutamin-benzhydrylester (α,/3-Gemisch) als farbloses Pulver; Rf = 0,67 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5),Example 33: 33 mg of N-acetyl-desmethylmuramyl-L-alanyi-Dy-methoxycarbonyl-isoglutamine-benzhydryl ester (α, / 3 mixture) are peracetylated analogously to Example 31. After lyophilization from abs. Dioxane remains N-acetyl-i ^^ - tri-O-acetyldesmethylmuramyl-L-alanyl-Dy-methoxycarbonyl-isoglutamin-benzhydryl ester (α, / 3 mixture) as a colorless powder; R f = 0.67 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5),
Rf = 0,35 (n-Butanol:Essigsäure:Wasser = 75:7, 5:21).Rf = 0.35 (n-butanol: acetic acid: water = 75: 7, 5:21).
Das Ausgangsmaterial erhält man wie folgt:The starting material is obtained as follows:
Stufe 33.1: 0,216g (0,40 mMol) N-Acetyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-y-carboxy-isoglutamin (α,/3-Gemisch) werden analog Stufe 31.1 mit Diphenyldiazomethan (3 Äquivalente) verestert. Die hellrötliche Suspension wird nach dreistündigem Rühren filtriert und das Filtrat zur Trockne verdampft. Das Gemisch, bestehend aus Edukt, Mono- und Dibenzhydrylester sowie Zersetzungsprodukten, die vom Diphenyldiazomethan herrühren, wird durch Chromatographie an Kieselgel (1:100) im System Chloroform-Methanol-Wasser (70:30:5) aufgetrennt. Nach zweimaligem Chromatographieren erhält man N-Acetyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-y-benzhydryloxycarbonyl-isoglutamin-benzydrylester (α,/3-Gemisch) als farbloses Harz mit denStep 33.1: 0.216 g (0.40 mmol) of N-acetyl-demethylmuramyl-L-alanyl-D-y-carboxy-isoglutamine (α, / 3 mixture) are esterified analogously to step 31.1 with diphenyldiazomethane (3 equivalents). The light reddish suspension is filtered after three hours of stirring and the filtrate evaporated to dryness. The mixture, consisting of educt, mono- and Dibenzhydrylester and decomposition products derived from the diphenyldiazomethane is separated by chromatography on silica gel (1: 100) in the system chloroform-methanol-water (70: 30: 5). After two chromatographs obtained N-Acetyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-y-benzhydryloxycarbonyl-isoglutamin-benzydryl ester (α, / 3 mixture) as a colorless resin with the
Rf-Werten . 'RF values. '
Rf = 0,67 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5) undRf = 0.67 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5) and
Rf = 0,46 (n-Butanol:Essigsäure:Wasser = 75;7,5:21)Rf = 0.46 (n-butanol: acetic acid: water = 75; 7.5: 21)
und N-Acetyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzhydrylester mit dem RrWert Rf = 0,13 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5).and N-acetyl-demethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester of Rr value Rf = 0.13 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5).
Stufe33.2: N-Acetyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzhydrylesterwirdin methanolischer Lösung wie üblich mit einer Lösung von Diazomethan in Diethylether verestert. Nachdem Eindampfen verbleibt N-Acetyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-y-methoxycarbonyl-isoglutamin-benzhydrylester (α,/3-Gemisch) als farbloses Harz; Rf = 0,56 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5).Step 33.2: N-acetyl-demethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester is esterified in methanolic solution as usual with a solution of diazomethane in diethyl ether. After evaporation, N-acetyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-y-methoxycarbonyl-isoglutamine-benzhydryl ester (α, / 3 mixture) remains as a colorless resin; Rf = 0.56 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5).
Beispiel 34: 1,70g (2,53mMol) N-Acetyl-muramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutamin-benzhydrylester (α,/3-Gemisch), gelöst in 25ml abs. Pyridin, werden analog Beispiel 31 perpropionyliert (90 Äquivalente Anhydrid). Nach dreistündigem Stehen bei RT fügt man 30 ml Wasser zu und verdampft das Ganze im HV bei 300C zur Trockne. Der harzige Rückstand wird in 80 ml abs. Dioxan aufgenommen, filtriert (PTFE; 0,2 μίτι) und lyophilisiert. Man erhält N-Acetyl-IAe-tri-O-propionyl-muramyl-L-a-aminobutyryl-D-isogiutamin-benzydrylester (α,/3-Gemisch) als farbloses Pulver, 0,79 Mol Wasser enthaltend; [a]§° = +52,2 ±.3,7 0C (c = 0,270; Methanol),Example 34: 1.70 g (2.53 mmol) of N-acetyl-muramyl-La-aminobutyryl-D-isoglutamine-benzhydryl ester (α, / 3 mixture), dissolved in 25 ml of abs. Pyridine are perpropionylated analogously to Example 31 (90 equivalents of anhydride). After three hours of standing at RT, 30 ml of water are added and the whole evaporated in the HV at 30 0 C to dryness. The resinous residue is abs. In 80 ml. Dioxane taken, filtered (PTFE, 0.2 μίτι) and lyophilized. This gives N-acetyl-IAe-tri-O-propionyl-muramyl-La-aminobutyryl-D-isogiutamine-benzydryl ester (α, / 3 mixture) as a colorless powder, containing 0.79 mol of water; [a] § ° = + 52.2 ± .3.7 0 C (c = 0.270, methanol),
Rf = 0,67 (Acetonitril:Wasser = 3:1),Rf = 0.67 (acetonitrile: water = 3: 1),
Rf = 0,32 (ChloroformMsopropanokEssigsäure = 70:8:2),Rf = 0.32 (chloroform-m propanoacetic acid = 70: 8: 2),
Rf = 0,87 (Essigsäureethylester:n-Butanol:Pyridin:Essigsäure:Wasser = 42:21:21:6:10).Rf = 0.87 (ethyl acetate: n-butanol: pyridine: acetic acid: water = 42: 21: 21: 6: 10).
Das Ausgangsmaterial enthält man wie folgt:The starting material is contained as follows:
Stufe 34.1: 2,03g (4mMol) N-Acetyl-muramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutamin (α,/3-Gemisch) werden analog Stufe 31.1 in den Benzhydrylester übergeführt. Nach der üblichen Aufarbeitung verbleibt N-Acetyl-muramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminbenzhydrylester (α,/3-Gemisch) als farbloses Pulver;Stage 34.1: 2.03 g (4 mmol) of N-acetyl-muramyl-L-α-aminobutyryl-D-isoglutamine (α, / 3 mixture) are converted into the benzhydryl ester analogously to stage 31.1. After the usual workup remains N-acetyl-muramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminbenzhydrylester (α, / 3 mixture) as a colorless powder;
[a]g0 = +41,8 ±1,80C (c = 0,548; Methanol), "[a] g 0 = +41.8 ± 1.8 0 C (c = 0.548, methanol), "
Rf = 0,73 (Chloroform:Methanol:Wasser = 70:30:5),Rf = 0.73 (chloroform: methanol: water = 70: 30: 5),
Rf = 0,78 (Acetonitril:Wasser = 3:1).Rf = 0.78 (acetonitrile: water = 3: 1).
Beispiel 35: Analog Beispiel 1 erhält man aus 2,0g (2,94mMol) N-Propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminbenzhydrylester (α,/3-Gemisch), der 1,17 Mol Wasser enthält, in 20 ml absolutem Pyridin mit 1,68 ml (13,06 mMol) Propionsäureanhydrid (purissimum; d = 1,012) 1,4,6-Tri-O-propionyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminbenzhydrylester (α,/3-Gemisch) als farbloses Lyophilisat, das noch 0,68 Mol Wasser enthält; Smp. 156-157°C,EXAMPLE 35 Analogously to Example 1, 2.0 g (2.94 mmol) of N-propionyl-dem-methylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester (α, / 3 mixture) containing 1.17 mol of water are dissolved in 20 ml absolute pyridine with 1.68 ml (13.06 mmol) propionic anhydride (purissimum; d = 1.012) 1,4,6-tri-O-propionyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester (α, / 3-mixture) as a colorless lyophilisate, which still contains 0.68 mol of water; Mp 156-157 ° C,
[a]§° = +39,0 ± 2,10C (c = 0,467; Methanol),[a] § ° = +39.0 ± 2.1 0 C (c = 0.467, methanol),
R, = 0,40 (Chloroform:Ethanol = 9:1),R, = 0.40 (chloroform: ethanol = 9: 1),
Rf = 0,48 (Chloroform:Methanol = 9:1),Rf = 0.48 (chloroform: methanol = 9: 1),
Rf = 0,88 (Chloroform:Methanol = 4:1).Rf = 0.88 (chloroform: methanol = 4: 1).
Beispiel 36: Analog Beispiel 1 erhält man aus 2,0g (3,1 mMol) N-Propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-(Ca)-nbutylester-(C,,)-benzylester (hauptsächlich a-Anomeres), der noch 0,41 Mol Wasser enthält, in 20 ml absolutem Pyridin mit 1,14ml (12,OmMoI) Essigsäureanhydrid i^e-Tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-tCo.l-nbutylester-(Cy)-benzylester als farbloses Lyophiiisat, das noch 0,73 Mol Wasser enthält. Laut ^-NMR-Spektrum (360MHz) liegt die Verbindung fast ausschließlich in Form des a-Anomeren vor;Example 36: Analogously to Example 1, from 2.0 g (3.1 mmol) of N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid (C a) -nbutylester- (C ,,) - benzyl ester (principally a- Anomeres), which still contains 0.41 mol of water, in 20 ml of absolute pyridine with 1.14 ml (12, OmMoI) acetic anhydride, 1-tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid -tCo.l-n-butyl ester (C y ) benzyl ester as a colorless Lyophiiisat, which still contains 0.73 mol of water. According to the ^ -NMR spectrum (360 MHz), the compound is present almost exclusively in the form of the α-anomer;
„Smp." 62-64°C,"Mp" 62-64 ° C,
[a]g° = +36,4 ± 3,6°C (c = 0,280; Methanol),[a] g ° = + 36.4 ± 3.6 ° C (c = 0.280, methanol),
Rf = 0,43 (Chloroform:Methanol = 9:1),Rf = 0.43 (chloroform: methanol = 9: 1),
Rf = 0,55(Chloroform:Ethanol = 9:1),Rf = 0.55 (chloroform: ethanol = 9: 1),
Rf = 0,85 (Chloroform !Methanol = 4:1). '·Rf = 0.85 (chloroform! Methanol = 4: 1). '·
Beispiel 37: Analog Beispiel 1 erhält man aus 0,57g (0,83mMoi) N-Propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäuredibenzylester (α,/3-Gemisch), der 0,89 Mol Wasser enthält, in 8ml absolutem Pyridin mit 0,36 ml (3,807 mMol) Essigsäureanhydrid 1,4,6-Tri-O-acetyl-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-dibenzylester {α,/3-Gemisch) in Form farbloser Kristalle;EXAMPLE 37 Analogously to Example 1, 0.57 g (0.83 mmol) of N-propionyl-demethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid dibenzyl ester (α, / 3 mixture) containing 0.89 mol of water are obtained in 8 ml of absolute Pyridine with 0.36 ml (3.807 mmol) acetic anhydride 1,4,6-tri-O-acetyl-N-propionyl-demethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid dibenzyl ester {α, / 3 mixture) in the form of colorless crystals ;
Smp. 141-1420C (aus Chloroform:Diethylether = 1:10),Mp 141-142 0 C (from chloroform: diethyl ether = 1:10).,
[a]§° = +22,7 ± 2,2°C (c = 0,454; Methylenchlorid),[a] § ° = + 22,7 ± 2,2 ° C (c = 0,454, methylene chloride),
Rf = 0,42 (Chloroform:Methanol = 9:1),Rf = 0.42 (chloroform: methanol = 9: 1),
Rf = 0,46(Chloroform:Ethanol - 9:1),Rf = 0.46 (chloroform: ethanol - 9: 1),
Rf = 0,70 (Chloroform:Methanol = 4:1).Rf = 0.70 (chloroform: methanol = 4: 1).
Das Ausgangsmaterial erhält man wie folgt:The starting material is obtained as follows:
Stufe 37.1: 0,74g (1,95mMol) 4,6-0,0-lsopropyliden-N-propionyl-desmethylmuraminsäure-natriumsalz werden in 20ml N,N-Dimethylformamid suspendiert, danach 0,342g (2,145mMol) 1-Hydroxy-benzotriazol, 0,442g (2,14SmMoI) N,N-Dicyclohexylcarbodiimid und 0,85g (1,95mMol) L-Alanyl-D-glutaminsäure-dibenzylester-hydrochlorid zugegeben und das Ganze über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird von ausgefallenem Ν,Ν-Dicyclohexylharnstoff abfiltriert und das so erhaltene Filtratim Hochvakuum bei 30°C zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird in 150ml Essigsäureethylester aufgenommen und nacheinander mit je 50ml gesättigter'Natriumhydrogencarbonatlösung, 2N Zitronensäure, gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung und Wasser gewaschen. Die organischen Phasen werden vereinigt, über Natriumsulfat getrocknet und im Hochvakuum bei 300C eingedampft. Man erhält 4,6-0,0-lsopropyliden-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-dibenzylester (α,/3-Gemisch), der etwas N-Propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäuredibenzylester (α,/3-Gemisch) sowie Ν,Ν-Dicyclohexylharnstoff enthält und ohne weitere Reinigung verarbeitet wird.Step 37.1: 0.74 g (1.95 mmol) of 4,6-0,0-isopropylidene-N-propionyl-desmethylmuramic acid, sodium salt are suspended in 20 ml of N, N-dimethylformamide, followed by 0.342 g (2.145 mmol) of 1-hydroxybenzotriazole , 0.42 g (2.14 SmMoI) of N, N-dicyclohexylcarbodiimide and 0.85 g (1.95 mmol) of L-alanyl-D-glutamic acid dibenzyl ester hydrochloride were added and the whole was stirred at room temperature overnight. The mixture is then filtered off from precipitated Ν, Ν-dicyclohexylurea and the resulting filtrate is evaporated to dryness under high vacuum at 30 ° C. The residue is taken up in 150 ml of ethyl acetate and washed successively with 50 ml each of saturated sodium bicarbonate solution, 2N citric acid, saturated sodium bicarbonate solution and water. The organic phases are combined, dried over sodium sulphate and evaporated at 30 ° C. in a high vacuum. There is obtained 4,6-0,0-isopropylidene-N-propionyl-demethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid dibenzyl ester (α, / 3 mixture) containing some N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D- glutamic acid dibenzyl ester (α, / 3 mixture) and Ν, Ν-dicyclohexylurea and is processed without further purification.
Stufe 37.2: 3,3g roher 4,6-0,0-lsopropyliden-N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-dibenzylester (a,ß-Gemisch) werden in 30 ml 50%iger Essigsäure über Nacht stehengelassen. Die so erhaltene Lösung wirde danach filtriert und das Filtrat im Hochvakuum bei 3O0C eingedampft. Den Rückstand reinigt man durch Säulenchromatographie an 150g Kieselgel (Typ 60, reinst, Merck; 0,063-0,2mm) im System Chloroform-Ethanol (9:1; 10ml Fraktionen). Die Fraktionen 56-95 werden vereinigt und im Hochvakuum eingedampft. Der Rückstand wird dann in 80 ml Methanol gelöst und die so erhaltene, leicht trübe Lösung durch ein Milliporefilter (Fluoropore, PTFE, 0,2^m) filtriert. Das klare Filtrat wird im Vakuum bei 40°C eingedampft. Der Rückstand wird anschließend in 10 ml absolutern Methanol, das zuvor durch in Milliporefilter (Fluoropore, PTFE, 0,2^m) filtriert worden ist, gelöst und durch Zugabe von 100 ml absolutem Diethylether, der ebenfalls durch ein Milliporefilter filtriert worden ist, kristallisiert und mit filtriertem, absolutem Diethylether nachgewaschen. Man erhält N-Propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-dibenzylester (α,/3-Gemisch) in Form farbloser Kristalle, die 0,89 Mol Wasser enthalten; Smp. 146-1470C,Step 37.2: 3.3 g of crude 4,6-0,0-isopropylidene-N-propionyl-demethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid dibenzyl ester ( α, β mixture) are left in 30 ml of 50% acetic acid overnight , The solution thus obtained Wirde then filtered and the filtrate evaporated under high vacuum at 3O 0 C. The residue is purified by column chromatography on 150 g silica gel (type 60, very pure, Merck, 0.063-0.2 mm) in the system chloroform-ethanol (9: 1, 10 ml fractions). Fractions 56-95 are combined and evaporated under high vacuum. The residue is then dissolved in 80 ml of methanol and the resulting, slightly cloudy solution through a Millipore filter (Fluoropore, PTFE, 0.2 ^ m) filtered. The clear filtrate is evaporated in vacuo at 40 ° C. The residue is then dissolved in 10 ml of absolute methanol, previously filtered through Millipore filter (Fluoropore, PTFE, 0.2 ^ m) and crystallized by addition of 100 ml of absolute diethyl ether which has also been filtered through a Millipore filter and washed with filtered, absolute diethyl ether. This gives N-propionyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid dibenzyl ester (α, / 3 mixture) in the form of colorless crystals containing 0.89 mol of water; M.p. 146-147 0 C,
[a]2° = 14,6 + 2,1 °C (c = 0,478; Methanol),[ a ] 2 ° = 14.6 + 2.1 ° C (c = 0.478, methanol),
Rf = 0,20 (Chloroform:Methanol = 9:1),Rf = 0.20 (chloroform: methanol = 9: 1),
Rf = 0,65(Chloroform:Me." 1:1),Rf = 0.65 (chloroform: Me. "1: 1),
Rf = 0,81 (ChlorofomrMethano, - /:3).Rf = 0.81 (ChlorofomrMethano, - /: 3).
Beispiel 38: Analog Beispiel 1 erhält man mit Pyridin und Acetanhydrid aus N-Benzoyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-dicholinester-dichlorid lAe-Tri-O-acetyl-N-benzoyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäuredicholinester-dichlorid.Example 38 Analogously to Example 1, pyridine and acetic anhydride are prepared from N-benzoyl-dem-methylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid dicholinester dichloride, lAe-tri-O-acetyl-N-benzoyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D glutaminsäuredicholinester dichloride.
Das Ausgangsmaterial erhält man wie folgt:The starting material is obtained as follows:
Stufe 38.1: Analog wie beschrieben in Synthesis 1982,138, erhält man aus D-Glutaminsäure-dimethylester-hydrochlorid und überschlüssigem Cholinchlorid mit Titan-tetraethylester als Katalysator in Acetonitril bei 80°C D-Glutaminsäure-dicholinester-Stage 38.1: Analogously to Synthesis 1982,138, D-glutamic acid dimethyl ester hydrochloride and oversaturated choline chloride are obtained with titanium tetraethyl ester as catalyst in acetonitrile at 80 ° C. D-glutamic acid-dicholinester-
dichlorid-hydrochlorid. ' ·dichloride hydrochloride. '·
Stufe 38.2: Analog Stufe 6.3 erhält man aus N-Benzoyl-desmethylmuramyl-L-alanin und D-Glutaminsäure-dicholinesterdichlorid-hydrochlorid mit Dicyclohexylcarbodiimid N-Benzoyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminsäure-dicholinesterdichlorid.Step 38.2: Analogously to Step 6.3, N-benzoyl-dem-methylmuramyl-L-alanyl-D-glutamic acid dichloro-dichloride dichloride is obtained from N-benzoyl-demethylmuramyl-L-alanine and D-glutamic acid-dichloroyl chloride dichloride with dicyclohexylcarbodiimide.
Beispiel 39: Analog Beispiel 1 erhält man aus N-Benzoyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzhydrylester mit n-Hexanoylchlorid, Pyridin und 4-Dimethylamino-pyridin-N-Benzoyl-1,4,6-tri-0-n-hexanoyl-L-alanyl-D-isoglutaminbenzhydrylester.Example 39 Analogously to Example 1, N-benzoyl-dem-methylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine-benzhydryl ester is obtained with n-hexanoyl chloride, pyridine and 4-dimethylaminopyridine-N-benzoyl-1,4,6-tri-O n-hexanoyl-L-alanyl-D-isoglutaminbenzhydrylester.
Claims (26)
a) eine Verbindung der Formel Ilwherein the hexose part is derived from D-glucose, D-mannose, or D-galactose, η is O or 1, and R 1 , R 4 and R 6 are independently lower alkanoyl or benzoyl, R 2 is lower alkyl or phenyl, R 3 , R 5 and R 7 independently of one another are hydrogen or lower alkyl, or R 5 with R 8 together are trimethylene and R 7 is hydrogen, R 8 is hydrogen or lower-alkyl which is unsubstituted or substituted by phenyl, hydroxyl, mercapto or lower alkylthio, R 9 and R 12 independently of one another, amino, C 1 -I 0 -alkoxy, aryl-lower alkoxy, Alkanoyloxyniederalkoxy with up to 16 C atoms, Aroyloxyniederalkoxy, 3-cholesteryloxy or 2-trimethylammonio-ethyloxy, R 10 is hydrogen; Carboxy, lower alkoxycarbonyl or aryl-lower alkoxycarbonyl, and R 11 is hydrogen or unsubstituted or substituted by amino, hydroxy, lower alkanoylamino, lower alkanoyloxy, 2-benzyloxycarbonylaminoethylsulfinyl, 2-lower alkoxycarbonylaminoethylsulfinyl, 2-loweralkoxycarbonylaminoethylsulfonyl, 2-loweralkoxycarbonylaminoethyl -sulfonyl or guanidino substituted lower alkyl, with the proviso that at least one of R 9 and R 12 of hydroxy, amino and Ci_ 7 alkoxy or R 10 of hydrogen, carboxy and alkoxycarbonyl having up to 7 carbon atoms in the alkoxy different and salts of such compounds having at least one salt-forming group, characterized in that
a) a compound of formula II
b) eine Verbindung der Formel III,wherein in a compound of formula II existing free functional groups, except for the groups which are to participate in the reaction, if necessary, are protected by readily cleavable protecting groups, with a R 1 to be introduced , R 2 -C (= O) -, R Reacting 4 or R 6 transferring acylating agents and cleaves existing protecting groups if necessary, or
b) a compound of the formula III,
-CH- C—Ν—C—C—NH-O
-CH- C-Ν-C-C-NH-
ηR 12
η
—O.CH 2 OR 6
-O.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CH77385 | 1985-02-20 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DD246546A5 true DD246546A5 (en) | 1987-06-10 |
Family
ID=4194843
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DD28713186A DD247606A5 (en) | 1985-02-20 | 1986-02-18 | ACYLATED HEXOSEDERIVATES AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF |
DD28716186A DD246546A5 (en) | 1985-02-20 | 1986-02-19 | ACYLATED HEXOSEDERIVATES AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DD28713186A DD247606A5 (en) | 1985-02-20 | 1986-02-18 | ACYLATED HEXOSEDERIVATES AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
JP (2) | JPS61194099A (en) |
DD (2) | DD247606A5 (en) |
ZA (2) | ZA861227B (en) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2628800C2 (en) * | 2014-03-12 | 2017-08-22 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарминтерпрайсез" | Amide compounds, methods for production, application as means for treatment and prevention of diseases caused by rna-containing viruses |
-
1986
- 1986-02-18 DD DD28713186A patent/DD247606A5/en unknown
- 1986-02-18 JP JP61032094A patent/JPS61194099A/en active Pending
- 1986-02-19 ZA ZA861227A patent/ZA861227B/en unknown
- 1986-02-19 DD DD28716186A patent/DD246546A5/en not_active IP Right Cessation
- 1986-02-19 ZA ZA861228A patent/ZA861228B/en unknown
- 1986-02-20 JP JP61034001A patent/JPS61194037A/en active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS61194037A (en) | 1986-08-28 |
ZA861228B (en) | 1987-10-28 |
JPS61194099A (en) | 1986-08-28 |
ZA861227B (en) | 1987-10-28 |
DD247606A5 (en) | 1987-07-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0114787B1 (en) | Peptide derivatives | |
DE3881489T2 (en) | PEPTIDES WITH COLLAGENASE INHIBITING EFFECT. | |
EP0169812B1 (en) | Phosphatidyl compounds, process for their preparation and their use | |
CH677672A5 (en) | ||
EP0548024B1 (en) | Aminosulphonic acid derivatives and process for their preparation | |
EP0111266A2 (en) | Substituted tetrapeptides | |
EP0541486A1 (en) | Polycyclic conjugates | |
EP0099578B1 (en) | Muramyl peptides and method for their preparation | |
EP0233837A2 (en) | Saccharide derivatives and method for their preparation | |
EP0594540A1 (en) | Antiretroviral acyl compounds | |
EP0115472A2 (en) | Pyrrolidinon derivatives and process for their preparation | |
US4640911A (en) | Acylated sugar derivatives, processes for their manufacture, and their use | |
EP0174912A2 (en) | Phosphorus compounds, process for their preparations and their use | |
EP0192611A2 (en) | Acylated hexose derivatives and method for their preparation | |
DE2819898A1 (en) | NEW SUBSTITUTED PHENYLACIC ACID AMIDE COMPOUNDS AND METHOD FOR THEIR PRODUCTION | |
DE2063996C3 (en) | Alpha-aminoxyhydroxamic acid derivatives, processes for producing the same and pharmaceuticals containing them | |
EP0565484A2 (en) | HIV-protease inhibiting morpholin- and thiomorpholin-4-ylamides | |
EP0163286A2 (en) | Acylated sugars, method for their preparation and their use | |
EP0192609A2 (en) | Acylated hexose derivatives and method for their preparation | |
DD246546A5 (en) | ACYLATED HEXOSEDERIVATES AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF | |
EP0115473A2 (en) | Substituted pyrrolidinone derivatives and process for their preparation | |
EP0239543A2 (en) | Glucose derivatives and methods for their preparation |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PJ | Ceased due to non-payment of renewal fee (addendum to changes before extension act) |