DD239006A1 - DIFFERENTIATION TEST FOR STAPHYLOCOCCENES - Google Patents
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Abstract
Der Differenzierungstest fuer Staphylokokken und Staphylokokkenspezies kann in der Human- und Veterinaermedizin sowie Militaermedizin und Hygiene bei mikrobiologischen Routinelaborbestimmungen Anwendung finden. Das Ziel der Erfindung besteht darin, einen Differenzierungstest fuer Staphylokokken zu entwickeln, der einfach, hochsensitiv und in kuerzester Zeit Staphylokokkenspezies differenziert. Die Erfindung hat die Aufgabe, einen Differenzierungstest zu entwickeln, der die Nachteile der bekannten Tests, wie lange Reaktionszeit, vermeidet und gleichzeitig eine Anbindung des Reagenz an Erythrozyten negiert. Erfindungsgemaess wird die Aufgabe dadurch geloest, indem Fibrinogen an Latex-Partikel gebunden und nachfolgend in an sich bekannter Weise mittels Objekttraegeragglutination mit den Staphylokokken geprueft wird. Das verwendete Fibrinogen muss hoch gereinigt sein. Die verwendeten Latex-Partikel sollten vorzugsweise aus hydrophilen oder hydrophoben Polysterol-Latex-Partikeln in der Groessenordnung von 0,5...1,5 mm bestehen. Dadurch wird eine Sensivitaet des Tests erreicht, die noch 160 des Kolonietrockengewichtes von Staphylococcus aureus ermittelt. Bei Verwendung von Vollplasma werden dagegen bis zu 5 Einzelkolonien von Staphylococcus aureus fuer ein positives Testergebnis benoetigt. Die Herstellung einer latexgekoppelten Fibrinogenpraeparation ist ohne groesseren Aufwand moeglich und ist nicht mit den Nachteilen behaftet, die mit der Konservierung und Stabilisierung von Erythrozyten verbunden sind.The differentiation test for staphylococci and staphylococcal species can be used in human and veterinary medicine as well as military medicine and hygiene in routine microbiological laboratory tests. The aim of the invention is to develop a differentiation test for staphylococci, which differentiates staphylococcal species in a simple, highly sensitive manner and in the shortest possible time. The invention has the task of developing a differentiation test, which avoids the disadvantages of the known tests, such as long reaction time, and at the same time negates binding of the reagent to erythrocytes. According to the invention, the object is achieved by binding fibrinogen to latex particles and subsequently testing it in a manner known per se by means of object carrier agglutination with the staphylococci. The fibrinogen used must be highly purified. The latex particles used should preferably consist of hydrophilic or hydrophobic polystyrene latex particles on the order of 0.5 ... 1.5 mm. This achieves a sensitivity of the test, which still determines 160 of the dry weight of Staphylococcus aureus. By contrast, when using whole plasma, up to 5 individual colonies of Staphylococcus aureus are required for a positive test result. The preparation of a latex-coupled fibrinogen preparation is possible without much effort and is not associated with the disadvantages associated with the preservation and stabilization of erythrocytes.
Description
Als Differenzierungskriterien für Staphylococcus aureus können die Phosphataseaktivität, Lysisbildner im Rahmen der Phagentypisierung und die Dnase-Aktivität herangezogen werden, wobei die Reaktionen nach Menzies (J. elin. Path. 30 [1977] 606) und Shanholzer et al. (Am. J. elin. Path. 77 [1982] 587) zeitaufwendig und mit einem hohen technischen Aufwand verbunden sind. Bekannt ist nach Jacherts (Z. f. Hyg. 142 [1956] 502), daß Staphylococcus aureus über eine lösliche und eine gebundene Plamakoagulase verfügt. Die gebundene Plasmakoagulase wird als dumping factor bezeichnet.As differentiation criteria for Staphylococcus aureus the phosphatase activity, Lysisbildner in the context of Phagentypisierung and Dnase activity can be used, the reactions according to Menzies (J. elin Path 30 (1977) 606) and Shanholzer et al. (Am J. Elin., Path 77 [1982] 587) are time-consuming and associated with a high technical complexity. According to Jacherts (Z. f. Hyg. 142 [1956] 502) it is known that Staphylococcus aureus possesses a soluble and a bound plaque coagulase. The bound plasma coagulase is called dumping factor.
Nach Voigt, Witte und Barth (Z. ges. Hyg. 26 [1980] 96) bietet die lösliche Plasmakoagulase in derPlasmakoagulasereaktion die Möglichkeit der Differenzierung von Staphylococcus aureus von anderen Staphylokokkenspezies. Diese Methode ist störanfällig und vor allem sehr zeitaufwendig und dauert ca. 24 Stunden. Die auf dem Objektträger nachweisbare Vollplasma koagulierende Wirkung der gebundenen Koagulase von Staphylococcus aureus wurde von Loeb und Much (J. med. Res. IO [1903] 407; Biochem.Z. 14[198O] 143) bereits beschrieben, jedoch als wenig treffsicher angegeben.According to Voigt, Witte and Barth (Z. Ges. Hyg. 26 [1980] 96) the soluble plasma coagulase in the plasma coagulase reaction offers the possibility of differentiating Staphylococcus aureus from other staphylococcal species. This method is susceptible to interference and, above all, very time-consuming and takes about 24 hours. The solid-plasma coagulating activity of the bound coagulase of Staphylococcus aureus detectable on the slide has already been described by Loeb and Much (J.Med.Res.IO.10 [1903] 407; Biochem.Z.14 [198O] 143), but indicated as poorly accurate ,
Die von Woolfrey et al. (Am. J. elin. Path. 81 [1984] 345) angegebenen Methoden der Differenzierung von Staphylococcus aureus bedinen sich ebenfalls der zellgebundenen Koagulase (CF). Als Reagenzien kommen an Latexpartikel gekoppeltes Vollplasma und an Erythrozyten gekoppeltes Fibrinogen zur Anwendung. Bei der Verwendung von Vollplasma ist die Sensitivität der Methode gering. Eine Einzelkolonie von Staphylococcus aureus ist nicht ausreichend, eine positive Reaktion herbeizuführen. Eine Verwendung von Erythrozyten als korpuskularer Träger ist nicht ohne technische Probleme möglich.The Woolfrey et al. (Methods of differentiation of Staphylococcus aureus indicated in J. Elin., Path. 81, 345) are also due to cell-bound coagulase (CF). The reagents used are whole plasma coupled to latex particles and fibrinogen coupled to erythrocytes. When using full plasma, the sensitivity of the method is low. A single colony of Staphylococcus aureus is not sufficient to cause a positive reaction. Use of erythrocytes as a corpuscular carrier is not possible without technical problems.
Das Ziel der Erfindung besteht darin, einen Differenzierungstest für Staphylokokken zu entwickeln, der einfach, hochsensitiv und in kürzester Zeit Staphylokokkenspezies differenziert.The aim of the invention is to develop a differentiation test for staphylococci, which differentiates staphylococcal species in a simple, highly sensitive manner and in a very short time.
Die Erfindung hat die Aufgabe, einen Differenzierungstest zu entwickeln, der die Nachteile der bekannten Tests, wie lange Reaktionszeit, vermeidet und gleichzeitig eine Anbindung des Reagenz an Erythrozyten negiert.The invention has the task of developing a differentiation test, which avoids the disadvantages of the known tests, such as long reaction time, and at the same time negates binding of the reagent to erythrocytes.
Erfindungsgemäß wird die Aufgabe dadurch gelöst, indem Fibrinogen an Latex-Partikel gebunden und nachfolgend in an sich bekannterWeise mittels Objektträgeragglutination mit den Staphylokokken geprüft wird. Das verwendete Fibrinogen muß hoch gereinigt sein. Die verwendeten Latex-Partikel sollten vorzugsweise aus hydrophilen oder hydrophoben Polysterol-Latex-Partikeln in der Größenordnung von 0,5 bis 1,5μηη bestehen.According to the invention, the object is achieved by binding fibrinogen to latex particles and subsequently testing them in a manner known per se by means of slide agglutination with the staphylococci. The fibrinogen used must be highly purified. The latex particles used should preferably consist of hydrophilic or hydrophobic polystyrene latex particles of the order of 0.5 to 1.5 μm.
Dadurch wird eine Sensitivität des Tests erreicht, die noch Veo des Kolonietrockengewichtes von Staphylococcus aureus ermittelt. Bei Verwendung von Vollplasma werden dagegen bis zu 5 Einzelkolonien von Staphylococcus aureus für ein positives Testergebnis benötigt.This results in a sensitivity of the test that still determines Veo of the colony dry weight of Staphylococcus aureus. By contrast, when using whole plasma, up to 5 individual colonies of Staphylococcus aureus are needed for a positive test result.
Durch die Fibrinogen-Latex-Kopplung erreichte hohe Sensitivität des Tests ermöglicht eine sichere Aussage, auch wenn nur eine Staphylococcus-aureus-Einzelkolonie aus labortechnischen Gründen verfügbar ist.High sensitivity of the test achieved by the fibrinogen-latex coupling allows a reliable statement, even if only one Staphylococcus aureus single colony is available for laboratory reasons.
Die Herstellung einer latexgekoppelten Fibrinogenpräparation ist ohne größeren Aufwand möglich und ist nicht mit den Nachteilen behaftet, die mit der Konservierung und Stabilisierung von Erythrozyten verbunden sind.The preparation of a latex-coupled fibrinogen preparation is possible without much effort and is not afflicted with the disadvantages associated with the preservation and stabilization of erythrocytes.
Die Erfindung wird an einem Ausführungsbeispiel näher beschrieben.The invention will be described in more detail using an exemplary embodiment.
An einen Objektträger werden 50μΙ des Testreagenz pipettiert, in einigem Abstand davon auf den gleichen Objektträger 50μΙ physiologische Kochsalzlösung als Kontrolle.To a slide 50μΙ of the test reagent are pipetted, at some distance on the same slide 50μΙ physiological saline as a control.
In beide Flüssigkeiten wird je eine Kolonie des zu differenzierenden Staphylokokken-Stammes verrieben.A colony of the Staphylococci strain to be differentiated is triturated in both liquids.
Im Falle von Staphylococcus aureus erfolgt innerhalb einer Minute eine makroskopisch deutlich sichtbare Verklumpung des Testreagenz. Die Kochlösung bleibt bei auszuschließender Spontanagglutination klar.In the case of Staphylococcus aureus, a macroscopically clearly visible clumping of the test reagent occurs within one minute. The cooking solution remains clear when spontaneous agglutination is excluded.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD27816585A DD239006A1 (en) | 1985-07-02 | 1985-07-02 | DIFFERENTIATION TEST FOR STAPHYLOCOCCENES |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD27816585A DD239006A1 (en) | 1985-07-02 | 1985-07-02 | DIFFERENTIATION TEST FOR STAPHYLOCOCCENES |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DD239006A1 true DD239006A1 (en) | 1986-09-10 |
Family
ID=5569277
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DD27816585A DD239006A1 (en) | 1985-07-02 | 1985-07-02 | DIFFERENTIATION TEST FOR STAPHYLOCOCCENES |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DD (1) | DD239006A1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1989005980A1 (en) * | 1987-12-24 | 1989-06-29 | Institut Pasteur | Reagent for the detection of staphylococcus aureus by agglutination |
-
1985
- 1985-07-02 DD DD27816585A patent/DD239006A1/en not_active IP Right Cessation
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1989005980A1 (en) * | 1987-12-24 | 1989-06-29 | Institut Pasteur | Reagent for the detection of staphylococcus aureus by agglutination |
| FR2625321A1 (en) * | 1987-12-24 | 1989-06-30 | Pasteur Institut | REAGENT FOR THE DIAGNOSIS OF STAPHYLOCOCCUS AUREUS BY AGGLUTINATION |
| EP0323331A1 (en) * | 1987-12-24 | 1989-07-05 | Institut Pasteur | Reagent for the detection of Staphylococcus aureus by agglutination |
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