DD237327A1 - STABILIZATION OF PEROXIDASES AND SO STABILIZED MEDIUM - Google Patents
STABILIZATION OF PEROXIDASES AND SO STABILIZED MEDIUM Download PDFInfo
- Publication number
- DD237327A1 DD237327A1 DD27636685A DD27636685A DD237327A1 DD 237327 A1 DD237327 A1 DD 237327A1 DD 27636685 A DD27636685 A DD 27636685A DD 27636685 A DD27636685 A DD 27636685A DD 237327 A1 DD237327 A1 DD 237327A1
- Authority
- DD
- German Democratic Republic
- Prior art keywords
- medium
- protein
- proteins
- derivatives
- stabilization
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Es wird ein Verfahren zur Stabilisierung von Peroxidasen beschrieben, die in der Analytik verwendet werden, und zwar besonders fuer Immunoassays zur Markierung von Antigenen oder Antikoerpern. Dadurch kann der Gebrauchswert entsprechender Reagenzien erhoeht werden. Die Stabilisierung erfolgt durch 2,2-disubstituierte Azine oder deren Umsetzungsprodukte und gegebenenfalls zusaetzlich durch Polyalkohole in einem Proteine und/oder Aminosaeuren oder Derivate dieser Stoffe enthaltenden Medium.A process is described for the stabilization of peroxidases used in analytics, especially for immunoassays for labeling antigens or antibodies. As a result, the utility value of appropriate reagents can be increased. The stabilization is carried out by 2,2-disubstituted azines or their reaction products and optionally additionally by polyalcohols in a protein and / or amino acids or derivatives of these substances containing medium.
Description
=eroxidasen, speziell einige ihrer Isoenzyme aus Meerrettich, werden als Indikatoren verwendet, um verschiedene Reaktionen, z. 3. durch die Bildung gefärbter oder fluoreszierender Verbindungen, leicht meßbar zu machen. Besonders für Enzymimmunoassays werden Peroxidasen zu diesem Zweck häufig verwendet, und zwar über die Markierung von Antigenen oder Antikörpern. Kommerzielle Testpackungen für diese Methodik enthalten daher solche Peroxidasekonjugate als essentielle Bestandteile. Bekanntlich sind aber Peroxidasen in sehr verdünntem Zustand recht unbeständig, so daß die peroxidasehaltigen Reagenzien häufig die Verwendbarkeitsdäuer des gesamten Testsatzes begrenzen. Durch eine geringe bzw, unsichere Stabilität leidet natürlich die Attraktivität der Kits bzw. der gesamten Methodik. = Eroxidasen, especially some of their isozymes of horseradish can be used as indicators to various reactions such. 3. easy to measure by the formation of colored or fluorescent compounds. Especially for enzyme immunoassays peroxidases are often used for this purpose, via the labeling of antigens or antibodies. Commercial test packs for this methodology therefore contain such peroxidase conjugates as essential components. However, peroxidases in a very dilute state are known to be quite unstable, so that the peroxidase-containing reagents frequently limit the usefulness of the entire test kit. Of course, the attractiveness of the kits or the entire methodology suffers from a low or uncertain stability.
Die bisher verwendeten Medien für die Stabilisierung von Psroxidasen mit Puffern unterschiedlicher Art und Konzentration, mit verschiedenen Zusätzen von Salzen, Komplexbildnern, Metallionen, Sacchariden, Proteinen, synthetischen Polymeren oder anderen Substanzen können nicht voll befriedigen. Sie geben im allgemeinen nur eine begrenzte Lagerstabilität oder weisen eine Anfälligkeit gegenüber erhöhten Temperaturen auf. Eine Verlängerung der möglichen Lagerungszeit wäre aber von Vorteil für den Hersteller und den Nutzer.The previously used media for the stabilization of Psroxidasen with buffers of different types and concentrations, with various additions of salts, complexing agents, metal ions, saccharides, proteins, synthetic polymers or other substances can not fully satisfy. They generally give only limited storage stability or are susceptible to elevated temperatures. An extension of the possible storage time would be advantageous for the manufacturer and the user.
Das Ziel der Erfindung war es also, eine Verbesserung der Stabilität von Peroxidasen zu erreichen.The aim of the invention was thus to achieve an improvement in the stability of peroxidases.
Bei den Vorarbeiten zur Lösung dieser Aufgabe wurde zunächst versucht, Enzymsubstrate zu verwenden, indem z.B. o-Phenylendiamin, Benzidin und andere Substanzen getestet wurden, aber die Ergebnisse waren unbefriedigend. Völlig anders war es dagegen, wenn zu Proteine und/oder Aminosäuren oder Derivate dieser Substanzen enthaltenden Lösungen Substanzen der Klasse der 2,2'-disubstituierten Azine gegeben wurden. Deren Hauptvertreter aus der Reihe der heterocyclischen Azine ist die 2,2'-Azino-di-(3-ethyl-benzthiazolinsulfonsäure-(6)). Eine weitere Verbesserung konnte im allgemeinen durch das zusätzliche Einbringen von Polyalkoholen in das Medium erreicht werden.In the preliminary work to solve this problem, it was first attempted to use enzyme substrates by e.g. O-phenylenediamine, benzidine and other substances were tested, but the results were unsatisfactory. On the other hand, it was completely different when substances containing the class of 2,2'-disubstituted azines were added to proteins and / or amino acids or derivatives of these substances. Their main representative from the series of heterocyclic azines is the 2,2'-azino-di- (3-ethylbenzothiazolinesulfonic acid (6)). A further improvement could generally be achieved by the additional introduction of polyalcohols into the medium.
Bei diesen Untersuchungen zeigten sich zwei überraschende Effekte. In Gegenwart von Serum entfärbte sich die grüne 2,2'-Azino-di-(3-ethyl-benzthiazolinsulfonsäure-(6)) sehr schnell, und es entstand eine praktisch farblose Lösung, die anzeigte, daß die eingesetzte Substanz chemisch umgesetzt war, d.h. das Peroxidasesubstrat 2,2'-Azino-di-(3-ethyl- . benzthiazolinsulfonsäure-(6)) war nicht mehr vorhanden. Die erhaltene bessere Stabilität der Peroxidase wurde also in diesen Fällen nicht durch das zugegebene Peroxidasesubstrat erreicht, sondern von dem oder den Umsetzungsprodukten. In welcher Weise das oder die Umsetzungsprodukte auf die Peroxidase einwirkten, konnte nicht geklärt werden. Der andere Effekt war die Tatsache, daß das Enzym nicht nur für den Reaktionsmechanismus der peroxidatischen Umsetzung von heterocyclischen Azinen, sondern auch für den der Umsetzung von o-Phenylendiamin und ähnlichen Substanzen stabilisiert wurde, was hiervon besonderem Interesse war. Wä'hrend die Azine nach einem Radikalmechanismus umgesetzt werden, bei dem zunächst [bzw. bei der praktischen Verwendung von 2,2'-Azino-di-(3-ethylbenzthiazolinsulfonsäure-(6)) als angestrebtes Produkt! ein stabiles Radikalkation entsteht, ist dies beim o-Phenylendiamin nicht der Fall, es wird vielmehr ein anderer Mechanismus wirksam. Diese gleichzeitige Stabilisierung zweier Mechanismen ist keineswegs von vornherein zu erwarten, da in anderen Fällen nur der Radikalmechanismus in brauchbarer Weise erhalten wird, nicht dagegen der für die o-Phenylendiamin-Oxidation verantwortliche, z. B. bei der Stabilisierung mit verschiedenen Metallionen.These studies revealed two surprising effects. In the presence of serum, the green 2,2'-azino-di- (3-ethyl-benzthiazolinesulfonic acid- (6)) decolorized very rapidly and a virtually colorless solution was formed, indicating that the substance used was chemically reacted. ie the peroxidase substrate 2,2'-azino-di (3-ethylbenzothiazolinesulfonic acid (6)) was no longer present. The resulting better stability of the peroxidase was therefore not achieved in these cases by the added peroxidase substrate, but by the one or more reaction products. In what way the or the reaction products acted on the peroxidase, could not be clarified. The other effect was the fact that the enzyme was stabilized not only for the reaction mechanism of the peroxidative reaction of heterocyclic azines, but also for the reaction of o-phenylenediamine and the like, which was of particular interest. While the azines are converted by a radical mechanism in which [or in the practical use of 2,2'-azino-di- (3-ethylbenzthiazolinsulfonsäure- (6)) as desired product! a stable radical cation is formed, this is not the case for o-phenylenediamine, but it is rather another mechanism is effective. This simultaneous stabilization of two mechanisms is by no means to be expected in advance, since in other cases only the radical mechanism is obtained in a useful manner, but not the one responsible for the o-phenylenediamine oxidation, z. As in the stabilization with different metal ions.
Die Verbesserung der Stabilität ist besonders bei Zusatz von heterocyclischen Azinen im Verein mit Polyalkoholen, z. B. zu Serum und anschließende Lyophilisation, sehr groß; die Wirkung ist aber auch im flüssigen Zustand vorhanden. Für die Grundstabilisierung kommen Proteine tierischen, pflanzlichen oder mikrobiellen Ursprungs sowie deren Derivate in Frage. Von den löslichen Proteinen eignensich vor allem Serum und Serumeiweiße von Mensch und Tier. Das Serum kann nativ oder in bearbeitetem Zustand zugegeben werden. Die teilweise oder vollständige Entfernung der Lipide in an sich bekannter Weise ist eine häufig günstige Vorbehandlung. Zur Zurückdrängung von eventuell möglichen ungünstigen Einflüssen der Serumenzyme, der Transportproteine oder anderer Substanzen erweist es sich als vorteilhaft, diese Aktivitäten durch Erhitzen teilweise oder vollständig zu zerstören. Ein gewisses Problem könnte beim Einsatz im Enzymimmunoassay die Anwesenheit peroxidatisch wirkender Enzyme im Zusatzserum sein. Dieser Einfluß auf die spätere Bestimmung ist aber im allgemeinen sehr gering, da diese Enzyme nicht an der Immunreaktion teilnehmen und bei derTrennung von freiem und gebundenem Tracerfast vollständig entfernt werden. Ein geringer Rest stört nicht, weil er in allen Bestimmungsansätzen in gleicher Menge vorhanden ist und über die sog. unspezifische Bindung, von der er wieder nur einen Bruchteil ausmacht, kontrolliert werden kann. Verwendbar sind Zusätze von Serum oder Serumfraktionen in flüssiger oder fester Form, die einen Eiweißgehalt des Mediums von mehr als Q,Qi % ergeben. Sehr gute Effekte werden häufig mit mehr als 2% erreicht.The improvement in stability is particularly in the addition of heterocyclic azines in association with polyalcohols, eg. B. to serum and subsequent lyophilization, very large; but the effect is also present in the liquid state. For the basic stabilization proteins of animal, vegetable or microbial origin as well as their derivatives come into question. Of the soluble proteins, serum and serum proteins of humans and animals are particularly suitable. The serum can be added natively or in an edited state. Partial or complete removal of the lipids in a manner known per se is a frequently favorable pretreatment. To suppress any possible adverse effects of the serum enzymes, the transport proteins or other substances, it proves to be advantageous to destroy these activities by heating partially or completely. A certain problem when using the enzyme immunoassay could be the presence of peroxidative enzymes in the additional serum. However, this effect on the later determination is generally very small because these enzymes do not participate in the immune response and are almost completely removed upon separation of free and bound tracers. A small remainder does not bother, because it is present in the same amount in all determination approaches and can be controlled via the so-called non-specific binding, of which it is again only a fraction. Usable are additions of serum or serum fractions in liquid or solid form which give a protein content of the medium of more than Q, Qi%. Very good effects are often achieved with more than 2%.
Eine weitere Quelle für lösliches Eiweiß ist z.B. tierische Milch, die man zweckmäßigerweise vorher entrahmt. Für den Einsatz von Milcheiweißen gilt im Prinzip das bei Serum Gesagte. Unter Proteinderivaten werden hier solche Verbindungen verstanden, die durch Abbau der Proteine über Brüchstücke bis hin zu den Aminosäuren reichen, sowie Aggregate, die aus Proteinen oder ihren Abbauprodukten entstehen.Another source of soluble protein is e.g. animal milk, which is expediently skimmed before. For the use of milk proteins in principle applies to serum. Protein derivatives are understood here to mean those compounds which, by degradation of the proteins, extend via fragments to the amino acids, as well as aggregates which arise from proteins or their degradation products.
Der Proteinabbau kann in verschiedenen Arten erfolgen, z.B. schon rein thermisch, wobei teilweise Oxidationsmittel (Wasserstoffperoxid) zugesetzt werden, vor allem aber durch Hydrolyse mit Säuren, Basen oder Enzymen. Solche Abbauprodukte sind in an sich bekannter Weise von allen Eiweißen herzustellen. Für den technischen Gebrauch bieten sich vor allem solche Produkte an, die billig im Handel erhältlich sind, z. B. Gelatine, hydrojysierte Gelatine und Peptone. Gelatine wird aus Gerüsteiweißen von Tieren durch saure Hydrolyse gewonnen, die Peptone durch enzymatischen Abbau, z. B. von Casein, Fleisch, Gluthen oder Sojabohneneiweiß. Die Molmassen solcher Eiweißabbauprodukte sind sehr unterschiedlich, je nach Herstellungsart, und sie sind im allgemeinen auch sehr inhomogen. Die Zahl der Peptidbindungen pro Molekül kann von einigen 1 000 bis Null reichen. Bei den Handelsprodukten sind die Molekülgrößen manchmaletwas definierter. Während bei Gelatine die Zahl der Peptidbindungen in der Größenordnung von Tausend liegt, treten bei der sog. hydrolysierten (= partiell hydrolysierten) Gelatine, die für Infusionszwecke verwendet wird, Molmassen von etwa 20000 bis 40000 auf, die kleineren Moleküle werden vorher durch Dialyse entfernt. Bei den verschiedenen handelsüblichen Peptonen treten meist Molmassen von weniger als 5000, z.T. auch weniger als 2000, auf, und es liegen neben Oligopeptiden stets auch freie Aminosäuren vor. Wenn solche Abbauprodukte im allgemeinen auch relativ inhomogen sind, so haben sie doch gegenüber Serum den Vorteil, daß sie nicht die Eigenschaften von Antikörpern, spezifischen Transportproteinen, Hormonen oder Enzymen besitzen und häufig auch keine Lipide enthalten, was für manche Anwendungszwecke von Bedeutung sein kann.Protein degradation can be done in several ways, e.g. already purely thermal, with partial oxidation agent (hydrogen peroxide) are added, but especially by hydrolysis with acids, bases or enzymes. Such degradation products are to be prepared in a conventional manner of all proteins. For technical use, especially offer those products that are available cheaply in the trade, eg. Gelatin, hydrojysed gelatin and peptones. Gelatine is obtained from scaffold proteins of animals by acid hydrolysis, the peptones by enzymatic degradation, eg. Casein, meat, gluthene or soybean protein. The molecular weights of such protein degradation products are very different, depending on the method of preparation, and they are also generally very inhomogeneous. The number of peptide bonds per molecule can range from a few thousand to zero. For the commercial products, molecular sizes are sometimes somewhat more defined. While in gelatin the number of peptide bonds is of the order of a thousand, in the so-called hydrolyzed (= partially hydrolyzed) gelatine used for infusion purposes, molecular weights of about 20,000 to 40,000 occur, the smaller molecules being previously removed by dialysis. In the case of the various commercially available peptones, molecular weights of less than 5,000, for the most part, usually occur. less than 2000, and there are always free amino acids besides oligopeptides. Although such degradation products are generally relatively inhomogeneous, they also have the advantage over serum that they do not possess the properties of antibodies, specific transport proteins, hormones or enzymes, and often also do not contain lipids, which may be of importance for some applications.
Aggregate von Eiweißen entstehen allmählich bei der Lagerung von Eiweißlösungen, besonders schnell aber beim Erhitzen. Solche Aggregate können aus zwei bis zwanzig oder mehr Molekülen bestehen. Ihre Bindungsform ist nicht genau bekannt, aber relativ fest, so daß man sie teilweise säulenchromatographisch trennen kann.Aggregates of proteins are formed gradually during the storage of protein solutions, especially fast on heating. Such aggregates can consist of two to twenty or more molecules. Their binding form is not exactly known, but relatively strong, so that they can be partially separated by column chromatography.
Die Eigenschaften der Aggregate können sich deutlich von denen der Einzelmoleküle unterscheiden. Proteinaggregate entstehen unter anderem zwangsläufig dann, wenn zur Stabilisierung Serum eingesetzt und ein großer Teil der potentiellen Störsubstanzen durch sog. Inaktivieren (Erhitzen z. B. auf 50 bis 600C über 60 Minuten) unwirksam gemacht werden soll. Als Endprodukte der Proteinhydrolyse treten Aminosäuren auf, z. B. Glycin, Alanin, Phenylalanin, Tyrosin, Serin, Cystein, Glutaminsäure, Lysin und andere. Neben den natürlich vorkommenden Aminosäuren kann man auch synthetische, nicht in der Natur vorkommende verwenden, und zwar neben α-Aminosäuren auch solche, in denen z. B. die Carboxyl- und die Aminogruppe durch einen Zwischenraum getrennt sind, z. B. ε-Aminocapronsäure, oder in denen zwei Aminogruppen nebeneinander stehen, z.B. Diaminobernsteinsäure. Als Hauptderivate der Aminosäuren kommen hier die Peptide in Frage, die neben dem Abbau der Proteine auch durch Synthese gewonnen werden sowie N-Acylaminosäuren.The properties of the aggregates may differ significantly from those of the individual molecules. Among other things, protein aggregates inevitably arise when serum is used for stabilization and a large proportion of the potential interfering substances is to be rendered inactive by so-called inactivation (heating, for example, to 50 to 60 ° C. over 60 minutes). As end products of protein hydrolysis amino acids occur, for. Glycine, alanine, phenylalanine, tyrosine, serine, cysteine, glutamic acid, lysine and others. In addition to the naturally occurring amino acids, one can also use synthetic, not occurring in nature, and in addition to α-amino acids and those in which z. B. the carboxyl and the amino group are separated by a gap, for. B. ε-aminocaproic acid, or in which two amino groups are adjacent to each other, for example diaminosuccinic acid. The main derivatives of the amino acids here are the peptides in question, which are obtained in addition to the degradation of proteins by synthesis and N-acylamino acids.
Ais Polyalkohole werden, hier vor allem einfache und zusammengesetzte Saccharide bis zu Polysacchariden verstanden, z. 8. Arabinose, Glukose, Fruktose, Saccharose, Maltose und andere .bis zum Dextran, daneben auch Glykoside, Zuckeralkohole, -amine und -säuren, z. B. Methylglykosid, Sorbit, Glukosamin und Glykonsäure sowie 'Kondensations- und Polymerisationsprodukte von Alkoholen, z. B. Polyethylenglykol und Polyvinylalkohol.Ais polyalcohols are understood here, especially simple and composite saccharides up to polysaccharides, z. 8. arabinose, glucose, fructose, sucrose, maltose and others. To dextran, but also glycosides, sugar alcohols, amines and acids, e.g. As methyl glycoside, sorbitol, glucosamine and glyconic acid and 'condensation and polymerization of alcohols, eg. For example, polyethylene glycol and polyvinyl alcohol.
Sehr günstig ist z. B. Rohrzucker, da er billig und in großer Reinheit überall zur Verfugung steht. Eine Wirkung tritt bei.einer Konzentration von mehr als 1 % auf, für die Stabilisierung und Lyophilisierung sind 5 bis 15% besonders günstig.Very low is z. As cane sugar, because it is cheap and in great purity everywhere available. An effect occurs at a concentration of more than 1%, for stabilization and lyophilization 5 to 15% are particularly favorable.
Für die Einstellung und Beibehaltung des gewünschten pH-Wertes ist ein Zusatz von Puffer günstig. Die Art der Pufferionen sowie ihre Konzentration hängt z.T. von den anderen Bedingungen ab. Phosphatpuffer und die sog. Good-Puffer in Konzentrationen von 0,005 bis 0,25mol/l haben sich in verschiedenen Fällen als günstig erwiesen. Man kann aber auch Citrat, Tartrat, Succinat und andere Anionen verwenden. Als Kationen kommen neben Natrium, Kalium und Ammonium auch Trispuffer und Amine in Frage. pH-Werte zwischen 4,0 und 9,0 sind im Prinzip verwendbar, für die meisten Fälle ist aber ein Wert von 6,0 bis 7,5 am günstigsten.For setting and maintaining the desired pH, an addition of buffer is favorable. The type of buffer ion and its concentration depends z.T. from the other conditions. Phosphate buffer and the so-called Good buffer in concentrations of 0.005 to 0.25 mol / l have proven to be beneficial in various cases. But you can also use citrate, tartrate, succinate and other anions. As cations come in addition to sodium, potassium and ammonium and Tris buffer and amines in question. pH values between 4.0 and 9.0 are usable in principle, but in most cases a value of 6.0 to 7.5 is the most favorable.
Die Lyophilisation der zu stabilisierenden Enzymiösungen erfolgt in an sich bekannter Weise, indem man z. B. Portionen von 0,1 bis 1,0 ml in Flaschen abfüllt, diese auf eine Temperatur von unter -30°C abkühlt und das Eis unter vermindertem Druck sublimiert. Danach werden die Flaschen mit einem Schutzgas versehen oder im Vakuum luft- und feuchtigkeitsdicht verschlossen. Zur Lagerung in flüssigem Zustand wird die Lösung gegebenenfalls in an sich bekannter Weise mit einem Konservierungsmittel versehen, das z. B. aus der Gruppe der Phenole, der organischen Quecksilberverbindungen oder der p-Hydroxybenzoesäureester stammen kann. Dann wird die Lösung sterilfiltriert und in sterile, dicht verschließbare Gefäße abgefüllt.The lyophilization of the stabilized Enzymiösungen done in a conventional manner by z. B. bottlings of 0.1 to 1.0 ml in bottles, this cooled to a temperature below -30 ° C and sublimated the ice under reduced pressure. Thereafter, the bottles are provided with a protective gas or sealed in a vacuum air and moisture-tight. For storage in the liquid state, the solution is optionally provided in a conventional manner with a preservative z. B. from the group of phenols, organic mercury compounds or p-hydroxybenzoic acid ester. Then the solution is sterile filtered and filled into sterile, tightly closed containers.
A. Progesteron-Peroxidase-Konjugat (hergestellt nach der Methode der gemischten Anhydride) wurde in folgender Lösung lyophilisiert: 25% Humanserum (delipidiert, 1 Stunde auf 56°C erhitzt), 0,01 mol/l Phosphatpuffer, pH 6,5. Der Peroxidasegehalt betrug etwa 40ng/ml. . . . 'A. Progesterone peroxidase conjugate (prepared by the mixed anhydride method) was lyophilized in the following solution: 25% human serum (delipidated, heated to 56 ° C for 1 hour), 0.01 mol / l phosphate buffer, pH 6.5. The peroxidase content was about 40 ng / ml. , , , '
B. Wie Ansatz A, aber mit einem Zusatz von 0,2% 2,2'-Azino-di-(3-ethyl-ben2thiazolinsuifonsäure-{6)). Die Lösung entfärbte sich in weniger als 2 Minuten von einer grünen zu der schwach gelbbräunlichen, durch das Serum verursachten Färbung.B. Same as Approach A but with 0.2% addition of 2,2'-azino-di- (3-ethylbenzothiazolinesulfonic acid {6)). The solution discolored in less than 2 minutes from a green to the pale tan, caused by the serum staining.
C. Wie Ansatz A, aber mit einem Zusatz von 10% Rohrzucker.C. Same as Approach A but with an addition of 10% cane sugar.
D. Wie Ansatz B, aber mit einem Zusatz von 10% Rohrzucker.D. Same as batch B, but with an addition of 10% cane sugar.
Nach 10 Tagen Lagerung bei 450C wurden bei A 14%, bei B 36%, bei C 81 %.und bei D 91 % der nach der Lyophilisierung erhaltenen Aktivität wiedergefunden.After 10 days of storage at 45 ° C., 14% were recovered in A, 36% in B, 81% in C and 91% in D recovered after the lyophilization.
A. Das Peroxidasekonjugat von humanem Plazentataktogen (hergestellt nach der Perjodatmethode) wurde in folgender Lösung lyophilisiert: 0,5% Rinderserumalbumin, 0,05mol/l Phosphatpuffer, pH6,5.A. The peroxidase conjugate of human placental lactate (prepared by the periodate method) was lyophilized in the following solution: 0.5% bovine serum albumin, 0.05 mol / L phosphate buffer, pH 6.5.
B. Wie Ansatz A, aber mit Zusatz von 0,2% 2,2'-Azino-di-(3-ethYlbenzthiazolinsulfonsäure-{6)).B. Same as Approach A but with the addition of 0.2% 2,2'-azino-di (3-ethylbenzthiazolinesulfonic acid {6)).
C. Wie Ansatz A, aber mit Zusatz von 10% Rohrzucker.C. Same as Approach A but with the addition of 10% cane sugar.
D. Wie Ansatz 8, aber mit einem Zusatz von 10% Rohrzucker.D. Like Approach 8, but with an addition of 10% cane sugar.
Nach 6 Tagen Lagerung bei 37=C wurden bei A 24%, bei B 45%, bei C 50% und bei D 64% der eingesetzten Aktivität wiedergefunden.After 6 days of storage at 37 ° C., 24% were recovered for A, 45% for B, 50% for C and 64% of D used for activity.
A. Testosteron-Peroxidase-Konjugat wurde in folgender Lösung flüssig aufbewahrt: 0,1 % Humanserumalbumin, 0,05mol/l Phosphatpuffer, pH 6,2, 0,1 % 8-Hydroxychinolin.A. Testosterone peroxidase conjugate was stored in liquid form in the following solution: 0.1% human serum albumin, 0.05 mol / L phosphate buffer, pH 6.2, 0.1% 8-hydroxyquinoline.
B. Wie Ansatz A, aber mit einem Zusatz von 0,4% 2,2'-Azino-di-(3-ethyl-benzthiazolinsulfonsäure-(6)).B. Like Approach A but with an addition of 0.4% 2,2'-azino-di- (3-ethyl-benzthiazolinesulfonic acid- (6)).
C. Wie Ansatz 8, aber mit einem Zusatz von 10% Rohrzucker.C. As in approach 8 but with an addition of 10% cane sugar.
Nach 14 Tagen Lagerung bei 370C wurden bei A 20%, bei B 69% und bei C 77% der Ausgangsaktivität wiedergefunden.After 14 days of storage at 37 ° C., 20% were recovered in A, 69% in B and 77% of C in starting activity.
Claims (7)
3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Polyalkohole einfache, zusammengesetzte oder Polysaccharide, Zuckeralkohole, -amine oder -säuren, Glykoside sowie Kondensations- oder Polymerisationsprodukte vonis.
3. The method according to claim 1, characterized in that the polyalcohols simple, composite or polysaccharides, sugar alcohols, amines or acids, glycosides and condensation or polymerization of
9. Verfahren nach Anspruch 1 und 8, dadurch gekennzeichnet, daß der Zusatz der Polyalkohole zwischen 10 und 400g/l,Alcohols are.
9. The method according to claim 1 and 8, characterized in that the addition of the polyalcohols between 10 and 400g / l,
10. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der pH-Wert des Mediums vorzugsweise zwischen 6,0 und 7,5 .Preferably between 50 and 150g / 1 lies.
10. The method according to claim 1, characterized in that the pH of the medium is preferably between 6.0 and 7.5.
' 1. Stabilisierte Peroxidase in einem Proteine und/oder Aminosäuren oder Derivate dieser Stoffe enthaltenden Medium,lies.
1. Stabilized peroxidase in a medium containing proteins and / or amino acids or derivatives of these substances,
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD27636685A DD237327B3 (en) | 1985-05-15 | 1985-05-15 | STABILIZATION OF PEROXIDASES AND SO STABILIZED MEDIUM |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD27636685A DD237327B3 (en) | 1985-05-15 | 1985-05-15 | STABILIZATION OF PEROXIDASES AND SO STABILIZED MEDIUM |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DD237327A1 true DD237327A1 (en) | 1986-07-09 |
| DD237327B3 DD237327B3 (en) | 1992-10-08 |
Family
ID=5567829
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DD27636685A DD237327B3 (en) | 1985-05-15 | 1985-05-15 | STABILIZATION OF PEROXIDASES AND SO STABILIZED MEDIUM |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DD (1) | DD237327B3 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0252750A1 (en) * | 1986-07-10 | 1988-01-13 | EASTMAN KODAK COMPANY (a New Jersey corporation) | Composition and analytical element having stabilized peroxidase |
-
1985
- 1985-05-15 DD DD27636685A patent/DD237327B3/en not_active IP Right Cessation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0252750A1 (en) * | 1986-07-10 | 1988-01-13 | EASTMAN KODAK COMPANY (a New Jersey corporation) | Composition and analytical element having stabilized peroxidase |
| US5155024A (en) * | 1986-07-10 | 1992-10-13 | Eastman Kodak Company | Binder composition and analytical element having stabilized peroxidase in layer containing the composition |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DD237327B3 (en) | 1992-10-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Schobert et al. | Unusual solution properties of proline and its interaction with proteins | |
| DE69008891T2 (en) | Storage of materials. | |
| DE69703371T2 (en) | Nutritional composition from corn steep liquor and process for its preparation | |
| EP0220537A1 (en) | Pharmaceutical composition containing thymus extract fractions | |
| DE2617922C3 (en) | Process for the production of stable, lyophilized products | |
| DE2224777A1 (en) | NEW ALKALINE PROTEOLYTIC ENZYME, ITS PRODUCTION AND USE | |
| DE69724876T2 (en) | Thermal stabilization, osmosis protection and drying protection of enzymes, cell contents and cells with mannosyl glycerate | |
| MC et al. | A glucuronide-decomposing enzyme from rumen micro-organisms. 1. Preparation and assay. | |
| Heuermann et al. | Purification and characterization of a sialidase from Clostridium chauvoei NC08596 | |
| Cory et al. | Isolation and characterization of enolase from rainbow trout (Salmo gairdnerii gairdnerii) | |
| Stenhagen et al. | The interaction between porphyrins and lipoid and protein monolayers | |
| DE3204569C2 (en) | ||
| DD237327A1 (en) | STABILIZATION OF PEROXIDASES AND SO STABILIZED MEDIUM | |
| CH683317A5 (en) | A method for producing a Haarnährmittels. | |
| Planta et al. | Chromatographic purification of the thiol enzyme cathepsin C | |
| DE2417265A1 (en) | Carrier-bound enzymes | |
| Schöbel et al. | Isolation and characterization of a chlorogenic acid esterase from Aspergillus niger | |
| EP0599344B1 (en) | Process for the stabilization of proteins | |
| DD237325A1 (en) | STABILIZATION OF HAEMENZYMEN AND SO STABILIZED MEDIUM | |
| DE4014564C1 (en) | ||
| Robinson et al. | Aspartate–Glutamate Transaminase in a Red Halophilic Bacterium | |
| DD237326A1 (en) | STABILIZATION OF ENZYMES AND SO STABILIZED MEDIUM | |
| Hirano et al. | Inhibition of cell adhesion in Dictyostelium discoideum by tunicamycin is prevented by leupeptin | |
| EP0075925B1 (en) | Process for producing an active ingredient specifically acting upon the nutritive centre as an appetizer, and the active ingredient obtained by the process | |
| DD237325B1 (en) | METHOD FOR STABILIZING HAEMENZYMS AND SO STABILIZED HAEMENZYMEN |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EPAE | Change in the person, name or address of the patentee | ||
| UW | Conversion of economic patent into exclusive patent | ||
| ENJ | Ceased due to non-payment of renewal fee |