DD224490A1 - METHOD FOR PRODUCING A VIROSTATIC AGENT - Google Patents
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Abstract
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines virostatischen Mittels. Die Erfindung hat das Ziel, die Nachteile der bisherigen Mittel gegen Herpes-Viren, wie z. B. begrenztes Aktivitaetsspektrum, zu ueberwinden und neue wirksame Substanzkombinationen gegen Herpes-Erkrankungen aufzufinden. Das erfindungsgemaesse Mittel ist dadurch gekennzeichnet, dass es Trinatriumphosphonoformiat (I) und 5-substituierte Pyrimidinnucleosidanaloga (II) im moralen Verhaeltnis 2 500:1 bis 1:1 bzw. 1:3 enthaelt. Die Verbindungen I und II werden im angegebenen Verhaeltnis mit den ueblichen Traeger- und Zusatzstoffen gemischt. Als Pyrimidin-Nucleosidanaloga werden erfindungsgemaess Arabinosylnucleoside bzw. 2-Halogen-Arabinosylnucleoside (IIa), Desoxyuridinnucleoside (IIb) oder acyclische Pyrimidinnucleoside (IIc) eingesetzt. Das Verhaeltnis der Komponenten I und II wird erfindungsgemaess so gewaehlt, dass ihre Konzentrationen bei Anwendung des Mittels ueber den Konzentrationen liegen, die eine 50%ige Hemmung der Virusvermehrung bewirken. Anwendungsgebiet der Erfindung sind die pharmazeutische Industrie, das Gesundheitswesen und das Veterinaerwesen.The invention relates to a process for the preparation of a virostatic agent. The invention has the aim of the disadvantages of the previous means against herpes viruses, such. As limited spectrum of activity to overcome and find new effective substance combinations against herpes diseases. The agent according to the invention is characterized in that it contains trisodium phosphonoformate (I) and 5-substituted pyrimidine nucleoside analogues (II) in a ratio of 2: 500: 1 to 1: 1 and 1: 3, respectively. The compounds I and II are mixed in the ratio indicated with the usual carriers and additives. The pyrimidine nucleoside analogs used according to the invention are arabinosyl nucleosides or 2-halo-arabinosyl nucleosides (IIa), deoxyuridine nucleosides (IIb) or acyclic pyrimidine nucleosides (IIc). The ratio of components I and II is chosen according to the invention so that their concentrations when using the agent are above the concentrations which cause a 50% inhibition of virus replication. Fields of application of the invention are the pharmaceutical, healthcare and veterinary industries.
Description
Die Erfindung betrifft ein Mittel gegen die Vermehrung von Viren der Herpesgruppe /Herpes-Simplex-Virus Typ 1 und Typ 2 (HSV-1 und HSV-2), Varizella-Zoster-Virus (VZV), Zytomegalievirus (CMV), Epstein-Barr-Virus (EBV), Pseudorabiesvirus (PRV) u. a./. Anwendungsgebiet der Erfindung sind die pharmazeutische Industrie, das Gesundheitswesen und das Veterinärwesen.The invention relates to an agent against the proliferation of viruses of the herpes group / herpes simplex virus type 1 and type 2 (HSV-1 and HSV-2), varicella-zoster virus (VZV), cytomegalovirus (CMV), Epstein-Barr Virus (EBV), pseudorabies virus (PRV), and the like. a. /. Fields of application of the invention are the pharmaceutical, healthcare and veterinary industries.
Durch Herpesviren verursachte Erkrankungen sind von vielfältiger Art und weit verbreitet. Neben leichten Verlaufsformen, die die Gesundheit und das Wohlbefinden des Patienten beeinträchtigen, wie z. B. Herpes labialis, Varizellen, Herpes keratitis, sekundärer Herpes genitalis und Herpes zoster, sind es besonders die schweren und lebensbedrohlichen Erkrankungen, wie Herpes encephalitis, primärer Herpes genitalis, Ekzema herpeticatum, die Herpessepsis des Neugeborenen und Kleinkindes, die konnatale Zytomegalie sowie eine Reihe von generalisierten Herpesvirus-Erkrankungen immunsuppremierter Patienten (Chemotherapie von Tumorerkrankungen sowie Immunosuppression nach Transplantation von Organen und Knochenmark), die einer antiviralen Chemotherapie bedürfen. Auch verschiedene Tumorerkrankungen, die mit einigen Vertretern der Herpesvirus-Gruppe in Verbindung gebracht werden, wie z. B. Zervix-Karzinom, Burkitt-Lymphom, Infektiöse Mononukleose, können das Ziel einer solchen Chemotherapie sein.Herpes virus-induced diseases are of a variety of types and are prevalent. In addition to mild forms that affect the health and well-being of the patient, such. As herpes labialis, varicella, herpes keratitis, secondary genital herpes and herpes zoster, it is especially the serious and life-threatening diseases such as herpes encephalitis, primary genital herpes, eczema herpeticatum, the herpes of the newborn and toddler, congenital cytomegalovirus and a number of generalized herpesvirus diseases of immunosuppressed patients (chemotherapy of tumor diseases as well as immunosuppression after transplantation of organs and bone marrow), which require antiviral chemotherapy. Also, various tumor diseases associated with some representatives of the herpesvirus group, such. Cervical carcinoma, Burkitt's lymphoma, infectious mononucleosis, may be the target of such chemotherapy.
Nur wenige Mittel wurden bisher zur Behandlung von Herpesvirus-Erkrankungen entwickelt und zugelassen. So werden 5-Jod-2'-Desoxyuridin (IDU, Idoxuridine Stoxil®), 5-Trifluormethyl-2'-Desoxyuridin (TFT, Trifluridine, Viroptic®) und 9-/3-D-Arabinofuranosyladenin (Ara-A, Vidarabine, Vira-A®) in der Augenheilkunde zur lokalen Behandlung von Herpes keratitis eingesetzt (Salbe, Augentropfen). Wegen ihrer geringen Selektivität (hemmen nicht nur Virus — sondern auch die Zellvermehrung) zeigen sie jedoch eine Reihe von toxischen Nebenwirkungen und sind somit zum systemischen Einsatz (orale Applikation) bei lebensbedrohlichen Herpesvirus-Erkrankungen nicht geeignet.Only a few remedies have been developed and approved for the treatment of herpesvirus diseases. Thus, 5-iodo-2'-deoxyuridine (IDU, Idoxuridine Stoxil®), 5-trifluoromethyl-2'-deoxyuridine (TFT, trifluridine, Viroptic®) and 9- / 3-D-arabinofuranosyladenine (Ara-A, Vidarabine, Vira-A®) in ophthalmology for the local treatment of herpes keratitis used (ointment, eye drops). Because of their low selectivity (inhibiting not only virus but also cell proliferation), however, they show a number of toxic side effects and are therefore not suitable for systemic use (oral administration) in life-threatening herpesvirus diseases.
Wesentlich besser geeignet wegen ihrer höheren Effektivität (antivirale Wirkung bei bedeutend geringeren Konzentrationen) und Selektivität (Hemmung von zellulären Stoffwechselprozessen erst bei 1 000-1 OOOOfachem der antiviralen Konzentration) sind neue Mittel, wie z. B. 9-(2-Hydroxyäthoxymethyl)guanin (ACV, Acyclovir, Zovirax®) und (E)-5-(2-Bromvinyl)-2'-Desoxyuridin (Bromvinyldesoxyuridin, BrVUdR, BVDU), die bei systemischem Einsatz keine toxischen Nebenwirkungen zeigen. Währen ACV besonders wirksam gegenüber HSV-1 und HSV-2 ist, zeichnet sich BrVUdR durch eine höhere Effektivität gegenüber HSV-1, besonders aber gegenüber VZV aus (BRD-OS 2915254100; 1 OOOfach wirksameres ACV). Die beiden Verbindungen wirken zwar in niedriger, Konzentrationen, jedoch sind wegen des komplizierten Herstellungsverfahrens die Kosten für eine systemische Therapie bei lebensbedrohlichen Herpesvirus-Erkrankungen (Behandlung über 5-10 Tage) erheblich. Ein weiteres selektives Antiherpetikum, nämlich das Trinatriumsalz der Phosphonoameisensäure (Na3PFA, Foscarnet®-Natrium) wirkt zwar hemmend auf HSV-1, HSV-2, VZV und eine Reihe weiterer Vertreter der Herpesvirus-Gruppe, jedoch bei bedeutend höheren Konzentrationen (1 OOOfach und mehr). Es wird deshalb nur in Salbenform (3%ig) zur lokalen Anwendung bei Herpes labialis bzw. Herpes genitalis erprobt. Eine Begleiterscheinung der antiviralen Chemotherapie mit spezifischen Antiherpetika, wie z. B. ACV, BrVUdR und PFA, ist das Auftreten von Substanz-resistenten Stämmen beim klinischen Einsatz der Verbindungen, ähnlich der Herausbildung der Antibiotika-Resistenz. Da die genannten Analoga ACV und BrVUdR einerseits und Na3PFA andererseits einen unterschiedlichen Wirkungsmechanismus ihrer antiviralen Eigenschaft aufweisen, d. h. in unterschiedlicher Weise spezifisch metabolisiert und somit auch unterschiedlich spezifisch im Virusreplikationszyklus wirksam werden, kann die o.g. Resistenzerscheinung unterschiedliche molekularbiologische Ursachen haben.Much better suited because of their higher effectiveness (antiviral effect at significantly lower concentrations) and selectivity (inhibition of cellular metabolic processes only at 1 000-1 000 times the antiviral concentration) are new means such. B. 9- (2-Hydroxyäthoxymethyl) guanine (ACV, acyclovir, Zovirax®) and (E) -5- (2-bromovinyl) -2'-deoxyuridine (Bromvinyldesoxyuridin, BrVUdR, BVDU), which when used systemically no toxic side effects demonstrate. While ACV is particularly effective against HSV-1 and HSV-2, BrVUdR is characterized by a higher efficacy against HSV-1, but especially against VZV (BRD-OS 2915254100, 1 000 times more potent ACV). Although the two compounds act in lower concentrations, the cost of systemic therapy for life-threatening herpesvirus diseases (treatment over 5-10 days) is significant because of the complicated manufacturing process. Another selective antiherpetic, namely the trisodium salt of phosphonoformic acid (Na 3 PFA, Foscarnet® sodium) inhibits HSV-1, HSV-2, VZV and a number of other herpesvirus group members, but at significantly higher concentrations (1 OOOfach and more). It is therefore only in ointment form (3%) for local use in herpes labialis or genital herpes tested. A concomitant antiviral chemotherapy with specific antiherpetics, such. As ACV, BrVUdR and PFA, is the appearance of substance-resistant strains in the clinical use of the compounds, similar to the emergence of antibiotic resistance. Since the mentioned analogues ACV and BrVUdR on the one hand and Na 3 PFA on the other hand have a different mechanism of action of their antiviral property, ie specifically metabolized in different ways and thus also different specific effective in the virus replication cycle, the above-mentioned resistance phenomenon may have different molecular biological causes.
Die Tatsache einer möglichen Resistenzentwicklung gegenüber einzelnen antiviralen Mitteln sowie das lückenhafte Aktivitätsspektrum bestimmter Antiherpetika gegenüber der Palette von Vertretern der Herpesvirusgruppe haben die Suche nach weiteren Antiherpes-Mitteln veranlaßt. Neue Analoga, wie (E)-5-(2-Bromvinyl)-1-ß-D-Arabinofuranosylurazil (BrVaraU) sowie 5-Vinyl-i-ß-D-Arabinofuranosylurazil (VaraU) sowie 9-(1,3-Dihydroxy-2-Propoxymethyl)Guanin /BIOLF-62, DHPG/ ergänzen die o.g. Mittel durch zusätzliche gewünschte Eigenschaften. So zeigt z. B. BrVaraU neben einer hohen Aktivität gegenüber HSV-1 eine im Vergleich zum BrVUdR noch gesteigerte Wirkung gegenüber V2V (wirksame Konzentration im Nanogramm-Bereich); VaraU wirkt hemmend auf HSV-1, HSV-2 und EBV und BIOLF-62 hemmt HSV-1, HSV-2, CMV, VZV, EBV und ACV-resistente Herpesvirusstämme.The fact of a possible development of resistance to individual antiviral agents and the patchy spectrum of activity of certain antiherpetics against the range of representatives of the herpesvirus group have prompted the search for other antherpes remedies. New analogs such as (E) -5- (2-bromo-vinyl) -1-.beta.-D-arabinofuranosyluracil (BrVaraU) and 5-vinyl-i-.beta.-D-arabinofuranosyluracil (VaraU) and 9- (1,3-dihydroxy -2-propoxymethyl) guanine / BIOLF-62, DHPG / supplement the above Means by additional desired properties. So z. B. BrVaraU in addition to a high activity against HSV-1 in comparison to the BrVUdR still increased activity against V2V (effective concentration in the nanogram range); VaraU inhibits HSV-1, HSV-2 and EBV and BIOLF-62 inhibits HSV-1, HSV-2, CMV, VZV, EBV and ACV-resistant herpes virus strains.
In den letzten Jahren sind Versuche unternommen worden, durch Kombination virostatischer Mittel einerseits die Mengen der einzelnen einzusetzenden Mittel zu reduzieren und andererseits die antivirale Wirkung zu erhöhen. In der Zeitschrift Antimicrobial Agents and Chemotherapy Vol.22, N°6, S. 1026-1030 (1983) werden Ergebnisse vorgelegt, die zu einer erfolgreichen Arzneimittelentwicklung führen können. Kombinationen von BIOLF-62 (0,7-1,2^g/ml) mit PFA (90/xg/ml) bzw. Phophonoessigsäure (PAA; 250μ^/ιηΙ) führen zu einer 200-2OOOfachen bzw. größer als 50fachen Erhöhung der Hemmwirkung (verglichen mit einer einfachen Addition der Hemmwirkung der einzelnen Verbindungen) gegenüber HSV-1, bei Kombination von BIOLF-62 (0,6-3^g/ml) mit PFA (80/ig/ml) bzw. PAA (76-90/xg/ml) zu einer 55-4300fachen bzw. 20-180fachen Erhöhung der Hemmwirkung gegenüber HSV-2.In recent years, attempts have been made to reduce by combining virostatic agents on the one hand, the amounts of the individual agents to be used and on the other hand to increase the antiviral effect. In the journal Antimicrobial Agents and Chemotherapy Vol.22, N ° 6, pp. 1026-1030 (1983) results are presented which can lead to a successful drug development. Combinations of BIOLF-62 (0.7-1.2 g / ml) with PFA (90 / xg / ml) and phosphonoacetic acid (PAA; 250μ ^ / ιηΙ) lead to a 200-2OOOf or greater than 50-fold increase the inhibitory effect (compared to a simple addition of the inhibitory effect of the individual compounds) against HSV-1, when combining BIOLF-62 (0.6-3 ^ g / ml) with PFA (80 / ig / ml) or PAA (76 -90 / xg / ml) to 55-4300 fold and 20-180 fold increase in inhibitory activity against HSV-2, respectively.
Die bisherigen Ergebnisse bei der Kombination von antiviralen Mitteln gegen Viren der Herpesgruppe sind auf die beiden o. g. Vertreter dieser Gruppe, nämlich HSV-1 und HSV-2, begrenzt.The results so far in the combination of antiviral agents against viruses of the herpes group are on the two o. G. Representatives of this group, namely HSV-1 and HSV-2, limited.
-2- 262 447 4-2- 262 447 4
Die Erfindung hat das Ziel, die Nachteile der bisherigen Mittel gegen Herpesviren, wie z.B. begrenztes Aktivitätsspektrum, zu überwinden und neue wirksame Substanzkombinationen gegen Herpes-Erkrankungen aufzufinden. Nachteilig ist, daß die Mittel einzeln bestimmte Vertreter dieser Virusgruppe nicht erfassen. Die Erfindung hat desweiteren zum Ziel, die Palette der bisherigen Mittel gegen Herpeserkrankungen zu erweitern und durch geeignete Zusammenstellung einzelner antiviraler Mittel mit unterschiedlichen Wirkungsmechanismen das Ausmaß der Hemmwirkung qualitativ und quantitativ zu erhöhen, um somit einerseits die Möglichkeit der Ausbildung resistenter Stämme zu reduzieren und andererseits das Ausweichen sowohl sensitiver als auch resistenter Stämme in eine latente Phase der Infektion (Fixierung von Virusmaterial in den Ganglien) einzuschränken.The invention has the aim of overcoming the disadvantages of the previous remedies against herpesviruses, e.g. limited spectrum of activity to overcome and find new effective substance combinations against herpes diseases. The disadvantage is that the means individually do not detect certain representatives of this group of viruses. The invention further aims to expand the range of existing means against herpes and by suitable combination of individual antiviral agents with different mechanisms of action to increase the extent of the inhibitory effect qualitatively and quantitatively, thus reducing the one hand, the possibility of training resistant strains and on the other hand Avoidance of both sensitive and resistant strains into a latent phase of infection (fixation of virus material in the ganglia).
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zur Herstellung eines solchen Mittels zu entwickeln.The invention has for its object to develop a process for the preparation of such an agent.
Das erfindungsgemäße Mittel gegen Viren der Herpesgruppe ist dadurch gekennzeichnet, daß es TrinatriumphosphonoformiatThe antiviral agent of the herpes group of the invention is characterized in that it is trisodium phosphonoformate
(i) und 5-substituierte Pyrimidinnucleosidanaloga (II) im molaren Verhältnis 2500:1 bis 1:1 bzw. 1:3 enthält. Die Verbindungen I und Il werden im angegebenen Verhältnis mit den üblichen Träger- und Zusatzstoffen gemischt.(i) and 5-substituted pyrimidine nucleoside analogues (II) in a molar ratio of 2500: 1 to 1: 1 and 1: 3, respectively. The compounds I and II are mixed in the ratio indicated with the usual carriers and additives.
Als Pyrimidin-Nucleosidanaloga werden erfindungsgemäß Arabinosylnucleoside bzw. 2'-Halogen-Arabinosylnucleoside (Ha), Desoxyuridinnucleoside (lib) oder acyclische (offenkettige 1-Substituenten) Pyrimidinnucleoside (Mc) eingesetzt. Bevorzugte Verbindungen Ha sind 5-Bromvinyl-, 5-Vinyl-, 5-Äthyl- und 5-Methyl-1-/3-D-Arabinofuranosyluracil bzw. -zytosin oder 2'-Halogeno-5-Bromvinyl-, 5-Vinyl-, 5-Halogeno-, 5-Äthyl-, 5-Methyl-1-/3-D-Arabinofuranosyluracil bzw. -cytosin. Bevorzugte Verbindungen Hb sind 5-Vinyl-, 5-Äthyl- und 5-Halogenvinyl-2'-desoxyuridin bzw. -desoxycytidin. Bevorzugte Verbindungen lic sind 1-Hydroxybutyl- und i-Hydroxyäthoxymethyl-5-dibromvinyluracil bzw. -cytosin.The pyrimidine nucleoside analogs used according to the invention are arabinosyl nucleosides or 2'-halo-arabinosyl nucleosides (Ha), deoxyuridine nucleosides (lib) or acyclic (open-chain 1-substituents) pyrimidine nucleosides (Mc). Preferred compounds Ha are 5-bromovinyl, 5-vinyl, 5-ethyl and 5-methyl-1/3-D-arabinofuranosyluracil or cytosine or 2'-halo-5-bromovinyl, 5-vinyl , 5-halo-, 5-ethyl-, 5-methyl-1/3-D-arabinofuranosyluracil or cytosine. Preferred compounds Hb are 5-vinyl, 5-ethyl and 5-halovinyl-2'-deoxyuridine or -deoxycytidine. Preferred compounds lic are 1-hydroxybutyl and i-hydroxyethoxymethyl-5-dibromovinyluracil or cytosine.
Das Verhältnis der-Komponenten I und Il wird erfindungsgemäß so gewählt, daß ihre Konzentrationen bei Anwendung des Mittels über den Konzentrationen liegen, die eine 50%ige Hemmung der Virusvermehrung bewirken. Bevorzugt werden Konzentrationen, die ein Mehrfaches der für eine 50%ige Hemmung notwendigen Konzentration betragen. Verbindungen Il mit einer hohen spezifischen Wirkung werden also in geringeren Konzentrationen eingesetzt (Verhältnis 1:11 = 2500:1 bis 250:1 im Falle von HSV-1; bzw. 100:1 bis 5:1 im Falle von HSV-2; in Ausnahmen bei Verbindungen Il mit geringerer spezifischer Wirkung (Wirkung erst in höheren Konzentrationen), aber auch im Verhältnis 2:1 bis 1:3). Beispielsweise wird die Kombination I und 5-Bromvinyl-1-/3-D-Arabinofuranosylurazil im Verhältnis 2:1 bis 1:2 im Falle der Hemmung von verschiedenen HSV-2-Stämmen eingesetzt.The ratio of the components I and II is chosen according to the invention such that their concentrations when using the agent are above the concentrations which cause a 50% inhibition of the virus multiplication. Preference is given to concentrations which are a multiple of the concentration necessary for a 50% inhibition. Compounds II having a high specific activity are thus used in lower concentrations (ratio 1:11 = 2500: 1 to 250: 1 in the case of HSV-1, or 100: 1 to 5: 1 in the case of HSV-2; Exceptions for compounds II with less specific action (effect only in higher concentrations), but also in the ratio 2: 1 to 1: 3). For example, combination I and 5-bromo-vinyl-1/3-D-arabinofuranosyluracil are used in the ratio 2: 1 to 1: 2 in the case of inhibition of various HSV-2 strains.
Die erfindungsgemäßen Mittel zeigen eine außergewöhnlich hohe Wirkung gegen Herpesviren. Beispielsweise zeigt die Verbindung I (250μΜ; 7fache Reduktion der Virusmenge eines HSV-2 Materials) mit Il (5-Vinyl-1-/3-D-Arabinofuranosylurazil) (50μ,Μ; 9fache Reduktion der Virusmenge eines HSV-2-Materials) zusammen eine Wirkung, die mehr als 1 600fach über der Summe beider o.g. Einzelwirkungen liegt.The agents of the invention show an exceptionally high activity against herpesviruses. For example, Compound I (250μΜ, 7 fold reduction in the amount of virus of a HSV-2 material) with Il (5-vinyl-1- / 3-D-arabinofuranosyluracil) (50μ, Μ; 9-fold reduction in the amount of virus of HSV-2 material) together an effect that is more than 1,600 times greater than the sum of both Individual effects lies.
Die Vorteile des neuen Mittels liegen auf der Hand. Für eine Therapie wird erheblich weniger Substanz benötigt als bei herkömmlichen Therapieverfahren. Daraus ergeben sich ökonomische Vorteile und eine Entlastung der Patienten von Nebenwirkungen der eingesetzten Substanzen. Aus medizinischer Sicht wird die Möglichkeit der Bildung resistenter Stämme sowie die Möglichkeit des Ausweichens in die latente Phase der Infektion reduziert, das Spektrum der Aktivität gegenüber verschiedenen Vertretern der Herpesgruppe erhöht und der Einsatz für eine orale Applikation durch Reduzierung der absoluten Konzentrationen für Mittel ermöglicht, die bisher auf Grund von Nebenwirkungen nur für eine lokale Behandlung von Herpesvirusinfektionen eingesetzt wurden.The benefits of the new remedy are obvious. For a therapy considerably less substance is needed than with conventional therapy procedures. This results in economic benefits and a relief of the patients of side effects of the substances used. From a medical point of view, the possibility of forming resistant strains and the possibility of evasion into the latent phase of the infection is increased, the spectrum of activity against various representatives of the herpes group is increased and the use for oral administration is made possible by reducing the absolute concentrations for the agents Previously due to side effects only for a local treatment of herpes virus infections were used.
Die Erfindung soll anschließend an Ausführungsbeispielen näher erläutert werden.The invention will be explained in more detail by exemplary embodiments.
Methode der Bestimmung der virushemmenden Wirkung der Einzelverbindungen (I, Ua, b, c) sowie der Kombination von Verbindungen I und IlMethod of determining the virus-inhibiting activity of the individual compounds (I, Ua, b, c) and the combination of compounds I and II
Zur Anwendung kommt ein Plaque-Reduktionstest von Herpesviren in Monolayer-Zellkulturen von menschlichen embryonalen Lungenfibroblasten. Bestimmt wird der Gehalt einer Virussuspension an infektiösen Partikeln durch Infektion des o.g. Zellrasens mit der konzentrierten Virussuspension bzw. Verdünnungen davon (1:101 bis 1:10s) ohne den Einfluß von antiviraien Mitteln bzw. mit diesen Mitteln, die nach einer Adsorptionszeit von 1 h bei 37°C zusammen mit einem Wachstumsmedium auf den infizierten Zellrasen gegeben werden. Nach einer Inkubationszeit von 2 bis 10 Tagen (in Abhängigkeit von den verwendeten Herpesviren) bilden sich Löcher (Plaques) in dem mit einem Farbstoff angefärbten Zellrasen, hervorgerufen durch die Vermehrung einzelner Viruspartikel, die eine Zerstörung von infizierten Zellen bewirken. In den mit den entsprechenden Virusverdünnungen (Vw", η = 1-6 arithmetische Reihe) infizierten Zellkulturen werden sowohl in den nichtbehandelten Virus-Kontrollkulturen als auch in den behandelten infizierten Zellkulturen die Plaques gezählt und die Reduzierung des Gehaltes an infektiösen Partikeln (Plaque-bildende Einheiten) in Gegenwart von antiviraien Mitteln bestimmt.A plaque reduction test of herpesviruses in monolayer cell cultures of human embryonic lung fibroblasts is used. The content of a virus suspension of infectious particles is determined by infection of the above cell lawn with the concentrated virus suspension or dilutions thereof (1:10 1 to 1:10 s ) without the influence of antiviral agents or with these agents after an adsorption time of 1 h at 37 ° C together with a growth medium on the infected cell lawn. After an incubation period of 2 to 10 days (depending on the herpesviruses used), holes (plaques) form in the dye-stained cell lawn, caused by the multiplication of individual virus particles, which cause destruction of infected cells. In the cell cultures infected with the appropriate virus dilutions (Vw ", η = 1-6 arithmetic series), the plaques are counted in both the untreated virus control cultures and in the treated infected cell cultures and the reduction in the content of infectious particles (plaque-forming Units) in the presence of antiviral agents.
Trinatriumphosphonoformiat (I) bewirkt in einer Konzentration von 250μΜ (das 1,6fache des ID50-Wertes (ID50 = die Konzentration in μΜ, die eine 50%ige Hemmung der Pläquezahl einer substanzbehandelten infizierten Zellkultur im Vergleich zu einer unbehandelten virusinfizierten Kontrollkultur bewirkt) eine ca. 7fache Reduktion des Gehaltes an infektiösen Partikeln einer Herpes-simplex Virus Typ 2 (HSV-2)-Suspension auf menschlichen embryonalen Lungenfibroblasten. 5-Vinyl-1-/3-D-Arabinofuranosylurazil (II) reduziert in einer Konzentration von 50μ.Μ (das 3,8fache des ID50-Wertes) den Gehalt der gleichen Virussuspension um das 9fache. Die Kombination von I (250μΜ) + Il (50μ.Μ) jedoch bewirkt eine Reduktion um das > 1 600fache der Summe der beiden Einzelhemmungen.Trisodium phosphonoformate (I) at a concentration of 250μΜ (1.6 times the ID 50 value (ID 50 = the concentration in μΜ which produces a 50% inhibition of the Pläque number of a substance-treated infected cell culture compared to an untreated virus-infected control culture) an approximately 7-fold reduction in the content of infectious particles of a herpes simplex virus type 2 (HSV-2) suspension on human embryonic lung fibroblasts 5-vinyl-1/3-D-arabinofuranosyluracil (II) reduced in a concentration of 50μ .Μ (3.8 times of the ID 50 value), however, the content of the same virus suspension to 9 times. the combination of I (250μΜ) + Il (50μ.Μ) causes a reduction of the> 1 600 times the sum of the two individual inhibitions ,
Trinatriumphosphonoformiat (I) bewirkt in einer Konzentration von 250μΜ eine ca. 7fache Reduktion des Virusgehaltes einer HSV-2-Suspension. 5-Methyl-1-/3-D-Arabinofuranosylurazil (AraT) (II) reduziert den Gehalt der gleichen Suspension in Konzentrationen von 2,5μ,Μ ca. 10fach. Die Kombination von I (250/xM) und 11 (2,5μΜ) bewirkt jedoch eine Reduktion um das > 1 500fache der Summe der beiden Einzelhemmungen.Trisodium phosphonoformate (I) causes in a concentration of 250μΜ an approximately 7-fold reduction in the virus content of a HSV-2 suspension. 5-Methyl-1/3-D-arabinofuranosyluracil (AraT) (II) reduces the content of the same suspension in concentrations of 2.5μ, Μ approximately 10-fold. However, the combination of I (250 / xM) and 11 (2.5μΜ) causes a reduction by> 1,500 times the sum of the two individual inhibitors.
-3- 262 447-3- 262 447
Trinatriumphosphonoformiat (I) bewirkt in Konzentrationen von 125/j.M (1,2fache des ID50-Wertes) eine ca. 6fache Reduktion des Virusgehaltes einer HSV-1-Suspension. 5-Vinyl-1-/3-D-Arabinofuranosylurazil (II) reduziert in einer Konzentration von 0,25/xM (4fache des ID50-Wertes) den Gehalt der gleichen Virussuspension um das 20fache.Trisodium phosphonoformate (I) causes an approximately 6-fold reduction in the virus content of an HSV-1 suspension at concentrations of 125 / jM (1.2 times the ID 50 value). 5-Vinyl-1/3-D-arabinofuranosyluracil (II) reduces the content of the same virus suspension by a factor of 20 at a concentration of 0.25 / xM (4 times the ID 50 value).
Eine Kombination von I (125/xM) und Il (0,25μ.Μ) bewirkt jedoch eine Reduktion um das > 1 700fache der Summe der beiden Einzel hem mungen.However, a combination of I (125 / xM) and Il (0.25μ.Μ) results in a reduction of> 1 700 times the sum of the two individual inhibitions.
Trinatriumphosphonoformiat (I) bewirkt in Konzentrationen von 125μ,Μ (1,2fache des ID50-Wertes) eine ca. 6fache Reduktion des Virusgehaltes einer HSV-1-Suspension. (E)-5-(2-Bromvinyl)-1-/3-D-Arabinofuranosylurazil (II) reduziert in Konzentrationen von 0,05μ.Μ (2faches des ID50-Wertes) den Gehalt der gleichen Virussuspension um das ca. 2fache. Die Kombination von I (125/xM) und Il (0,05/j.M) ergibt eine >5500fache Reduzierung des Virusgehaltes im Vergleich zur Summe der beiden Einzelhemmungen.Trisodium phosphonoformate (I) causes an approximately 6-fold reduction in the virus content of an HSV-1 suspension in concentrations of 125 μ, Μ (1.2 times the ID 50 value). (E) -5- (2-Bromovinyl) -1- / 3-D-arabinofuranosyluracil (II) reduces the content of the same virus suspension by approximately 2-fold in concentrations of 0.05 μ.Μ (2 times the ID 50 value) , The combination of I (125 / xM) and Il (0.05 / jM) gives a> 5500-fold reduction in virus content compared to the sum of the two individual inhibitors.
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| DD26244784A DD224490A1 (en) | 1984-04-30 | 1984-04-30 | METHOD FOR PRODUCING A VIROSTATIC AGENT |
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| Country | Link |
|---|---|
| DD (1) | DD224490A1 (en) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4841039A (en) * | 1986-05-01 | 1989-06-20 | Emory University | 2',3'-dideoxy-5-substituted uridines and related compounds as antiviral agents |
| US4916122A (en) * | 1987-01-28 | 1990-04-10 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | 3'-Azido-2',3'-dideoxyuridine anti-retroviral composition |
| US5077279A (en) * | 1986-05-01 | 1991-12-31 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | 3'-azido-2',3'-dideoxy-5-methylcytidine anti-viral composition |
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| US5190926A (en) * | 1987-01-28 | 1993-03-02 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | 3'-azido-2',3'-dideoxypyrimidines and related compounds as antiviral agents |
-
1984
- 1984-04-30 DD DD26244784A patent/DD224490A1/en not_active IP Right Cessation
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