DD204105A1 - PROCESS FOR SUPPLEMENTING BACTERIA - Google Patents

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DD204105A1
DD204105A1 DD23431781A DD23431781A DD204105A1 DD 204105 A1 DD204105 A1 DD 204105A1 DD 23431781 A DD23431781 A DD 23431781A DD 23431781 A DD23431781 A DD 23431781A DD 204105 A1 DD204105 A1 DD 204105A1
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Hans-Peter Kleber
Rainer Claus
Hermann Seim
Erich Strack
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Univ Leipzig
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Abstract

Die Erfindung hat das Ziel, die Wachstumsrate der Bakterien zu steigern. Die Aufgabe besteht darin, zur Erzeugung von Biomasse Bakterienstaemme einzusetzen, die auf den Zusatz von chemischen Verbindungen mit verstaerktem Wachstum reagieren. Die Aufgabe wird durch den Einsatz von Staemmen wie Acinetobacter calcoaceticus, Pseudomonas putida u.a. geloest, wobei als Wachstumsstimulantien quaternaere Ammoniumverbindungen wie Carnitin, Cholin o. dgl. eingesetzt werden.The invention aims to increase the growth rate of the bacteria. The task is to use for the production of biomass bacterial stasis, which respond to the addition of chemical compounds with increased growth. The object is achieved by the use of Staemmen such as Acinetobacter calcoaceticus, Pseudomonas putida u.a. dissolved, wherein as growth stimulants quaternary ammonium compounds such as carnitine, choline o. The like. Be used.

Description

234317 7234317 7

Titel der ErfindungTitle of the invention

Verfahren aim Züchten von BakterienProcess aim Breeding of bacteria

Anwendungsgebiet der ErfindungField of application of the invention

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Züchten von Bakterien, die als Biomasse von Bedeutung sind,The invention relates to a method for growing bacteria that are of importance as biomass,

Charatsriatik der bekannten technischen LösungenCharatsriatik of the known technical solutions

ist bereits bekannt, Bakterien suchten und die Produkte der Züchtungsverfahren als Biomasse zn verwenden« So ist es weit verbreitet, als Kohlenstoffquelle für die Kultivierung von Bakterien .ethanol, Glucose, organische Säuren oder aliphatische Kohlenwasserstoffe einzusetzen* Um das Wachstum der Bakterien auf diesen Kohlenstoff- und Energiequellen zu beschleunigen, wird - da die Nährstoffansprüche der Mikroorganismen sehr komplex sind - im allgemeinen dem Kulturmedium Hefe-, Fleisch-, Malzextrakt,, Serum, Maisquellwasser oder andere, Wachstumsfaktoren enthaltende Verbindungen zugesetzt. Darüberhinaus ist bekannt, daß das Wachstum der Bakterien und/oder die Ausbeute an Biomasse außer durch verfahrenstechnische lösungen auch durch Optimierung der Kultivierungsbedingungen beschleunigt bzw. erhöht werden kann« Dazu gehört z.B. die gesteuerte Zugabe von Hährsubstraten, die Ausbalancierung des Kohlenstoff/Stickstoffangebota, die Aufrechterhalten^ eines bestimmten pH-Wertes und/oder der Temperatur, der .Zusatz von Spurenelementen wie z.JB. Cu,. von Siliconöl entsprechender Viskosität o«dgl* Dia Mehrzahlis already known bacteria tested and zn the products of breeding methods as biomass use "It is widely used as a carbon source for the cultivation of bacteria .ethanol, glucose to use organic acids or aliphatic hydrocarbons * To the growth of bacteria on these carbon and to accelerate energy sources, since the nutrient requirements of microorganisms are very complex, yeast, meat, malt extract, serum, corn steep liquor, or other growth factor-containing compounds are generally added to the culture medium. Moreover, it is known that the growth of the bacteria and / or the yield of biomass can be accelerated or increased by process engineering solutions and optimization of cultivation conditions. "This includes, for example, the controlled addition of Hährsubstraten, the balance of carbon / Stickstoffangebota, the maintain ^ of a certain pH and / or temperature, the addition of trace elements such as. Cu ,. of silicone oil of corresponding viscosity or the like

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der Verfahren ist dabei auf ein bestimmtea Substrat and Jiikroorganismenspezies fixiert oder schlägt verfahrenstechnische lösungen vor, die sich darauf beziehen·The method is thereby fixed on a particular substrate and microorganism species or proposes procedural solutions relating thereto.

Bei den mit Hefezusatz arbeitenden Verfahren besteht in starkem laße die Gefahr der Verunreinigung der Bakterienkultur, da der Hefeextrakt BTähraedium für die Mehrzahl aller Mikroorganismen darstellt. Wünschenswert ist daher eine Methode zum Züchten von Bakterien, die den Hefeestraktzusatz vermeidet, ohne das Wachstum der Mikroorganismen dadurch zu vermindern·There is a great deal of risk of contamination of the bacterial culture in yeast-added processes, since the yeast extract is BThra medium for the majority of microorganisms. It is therefore desirable to have a method for growing bacteria which avoids the addition of yeasts without thereby reducing the growth of microorganisms.

A 3 1 7 7A 3 1 7 7

Ziel der ErfindungObject of the invention

Die Erfindung hat das Ziel, die Waehstumsrate der Bakterien im Verlauf des Züchtungsprozesses zu steigern, die Ausbeute zu erhöhen und damit die Ökonomie der Herstellung verwertbarer Biomasse wesentlich zu verbessern.The object of the invention is to increase the rate of growth of the bacteria during the breeding process, to increase the yield and thus to substantially improve the economy of producing usable biomass.

Darlegung des Wesens der ErfindungExplanation of the essence of the invention

Die Erfindung hat die Aufgabe, die Kultivierungsdauer der Bakterien zu vermindern, indem zur Erzeugung von Biomasse Bakterienstämme eingesetzt werden, die auf den Zusatz von chemischen Verbindungen mit verstärktem Wachstum reagieren. Ss soll dabei unerheblich sein, ob die Zusätze von den Bakterien als Kohlenstoff- und/oder Stickstoffquelle bzw. Elektronen- oder Wasserstoffdonatoren mit verwendet werden.The object of the invention is to reduce the cultivation time of the bacteria by using bacterial strains which react to the addition of chemical compounds with increased growth to produce biomass. It should be irrelevant whether the additives are used by the bacteria as carbon and / or nitrogen source or electron or hydrogen donors.

Die Aufgabe wird dadurch gelöst, daß Bakterienstämme in einem rlüssigen Minimalmedium, flüssigen oder festen Komplerxmedium unter Verwendung von Acetat, Malat, Glucose, Pares, Mepasin o.dgl. als Kohlenstoffquelle und HH.C1 o. dgl. als Stickstoffquelle gezüchtet werden, wobei.erfindungsgemäß als wachstumsstimulierendes Mittel quaternäre Ammoniumverbindungen, insbesondere Cholin, Acetyleholin, D,Ii-,L(-) oder !>(+)-Carnitin, dessen Vorläufer wie z.B. Lysin, Abbauprodukte oder Derivate, eingesetzt werden.The object is achieved in that bacterial strains in a liquid minimal medium, liquid or solid Komplerxmedium using acetate, malate, glucose, Pares, Mepasin or the like. quaternary ammonium compounds, especially choline, acetyleholine, D, I, L (-) or... (+) - carnitine, whose precursors, such as., are used as a source of growth and HH.C1 or the like as a nitrogen source eg Lysine, degradation products or derivatives used.

Carnitin ist nicht nur Bestandteil tierischer Zellen bzw. Organe (Muskel, Leber), sondern kommt auch weitverbreitet in Mikroorganismen (ITeurospora, Streptokokken) vor« Die Holle des Carnitins im Stoffwechsel der Fettsäuren eukarynotischer Zellen bzw. Zeilkompartimente (Mitochondrien) iat in den letzten beiden Jahrzehnten intensiv untersucht worden. Trotz der Beschäftigung der Pachv/elt mit dem Carnitin und seiner Rolle im Stoffwechsel von Mikroorganismen iat es bisher nicht bekannt geworden, daß CarnitinCarnitine is not only a component of animal cells or organs (muscle, liver), but is also widespread in microorganisms (ITeurospora, streptococci). "The role of carnitine in the metabolism of the fatty acids eukaryotic cells or cell compartments (mitochondria) iat in the last two Been intensively studied for decades. Despite the occupation of the pachyderm with carnitine and its role in the metabolism of microorganisms, it has hitherto not been known that carnitine

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selbst, Derivate davon oder Vorläufer von ihm auf das Wachstum von Bakterien einen merklichen Einfloß ausüben* Es ist zweifellos überraschend, daß Carnitin und seine Derivate auf Bakterienstämme wie z.B..It is undoubtedly surprising that carnitine and its derivatives are susceptible to bacterial strains such as, for example.

Acinetobaeter calcoaceticus 60,/VAcinetobaeter calcoaceticus 60, / v

Acinetobacter calcoaceticus GCM 2355 Acinetobacter calcoaceticus EB 104 Acinetobacter calcoaceticus CCM 5572 Acinetobacter calcoaceticus CCIlI 2376 Pseudomonas putidaAcinetobacter calcoaceticus GCM 2355 Acinetobacter calcoaceticus EB 104 Acinetobacter calcoaceticus CCM 5572 Acinetobacter calcoaceticus CClI 2376 Pseudomonas putida

Pseudomonas oleovoransPseudomonas oleovorans

Salmonella typhisiurium LüL·Salmonella typhisiurium LüL ·

Proteus vulgarisProteus vulgaris

Sscherichia coli 044 K74Sscherichia coli 044 K74

AcetobacterAcetobacter

GluconobacterGluconobacter

Mischkulturen o«g. BakterienMixed cultures o. G. bacteria

Mischkulturen anderer Art bei Anwesenheit ein oderMixed cultures of other species in the presence of one or

mehrerer Spezies o.g« Bakterienseveral species or bacteria

wachstumsstimulierend wirken. Als Caraitinderivate sind insbesondere DL-Carnitin selbst, Acetylcamitin, Cholin, Acetylcholin, Betainhydrat, Lysin, ^-Butyrobetain, Grotonbetain als wirksam erkannt worden9 jedoch sind auch Salze des Carnitins and seiner Vorläufer wie Halogenide oder Hitrate, Sulfate and Phosphate einsetzbar.stimulate growth. As caraitin derivatives in particular DL-carnitine itself, acetylcamitin, choline, acetylcholine, betaine hydrate, lysine, ^ -Butyrobetain, Grotonbetain have been recognized as effective 9 but also salts of carnitine and its precursors such as halides or Hitrate, sulfates and phosphates can be used.

Beispiele für verwendbare Carnitinderivate sind weiterhin solche Verbindungen, die zu Carnitin gespaltet werden können, wie kurzkettige oder langkettige Acylcarnitine,. wie Propionylcarnitin, Butyrylearnitin, Palmitoylcamitin und Stearoylcarnitin, sowie Alkylester, wie Methyl- und Athylester des'Carnitine« Beispiele für Derivate von Crotonobetain und Butyrobetain sind die entsprechenden Alkylester, wie der Methyl- und Athylester sowie Doppelester, wie z.B« Acetylcarnitinmethylester«Examples of useful carnitine derivatives are furthermore those compounds which can be cleaved to carnitine, such as short-chain or long-chain acylcarnitines. such as propionylcarnitine, butyrylearnitin, palmitoylcamitin and stearoylcarnitine, as well as alkyl esters, such as methyl and ethyl esters of the 'carnitine' Examples of derivatives of crotonobetaine and butyrobetaine are the corresponding alkyl esters, such as the methyl and ethyl esters and double esters, such as 'acetylcarnitine methyl ester'

Im erfindungsgemäßen Verfahren können über das eingangs angegebene flüssige Minimalmedium hinaus Hährmedien mit beliebigen, durch Bakterien verwertbaren Kohlenstoffqaellen verwendet werden, Beispiele für diese Kohlenstoff quellen sind Zucker, wie Glucose, Rohrzucker oder Stärke, Alkohole, wie Ethanol oder Methanol, Carbonsäuren, wie Essigsäure oder fumarsäure, höhere Fettsäuren, wie Palmitinsäure, Stearinsäure oder Ölsäure, deren Ester, Öle und Pette, wie Sojabohnenöl oder Walöl, die diese fettsäuren enthalten, sowie Kohlenwasserstoffe, wie unverzweigte Paraffine, Kerosin oder Gssöl.In the method according to the invention can be used on the above-mentioned liquid minimal medium also Hährmedien with any usable by bacteria Kohlenstoffqaellen examples of these carbon sources are sugars such as glucose, cane sugar or starch, alcohols such as ethanol or methanol, carboxylic acids such as acetic acid or fumaric acid , higher fatty acids such as palmitic acid, stearic acid or oleic acid, their esters, oils and pats such as soybean oil or whale oil containing these fatty acids, and hydrocarbons such as unbranched paraffins, kerosene or gss oil.

Das Mährmedium enthält ferner Stickstoffquellen wie Ammoniumsalze, beispielsweise Ammoniumsulfat oder Ammonium-Chlorid, oder Harnstoff, ferner kann das iSährmedium anorganische Salze, wie Kaliumsalze, Magnesiumsalze, Salze der Phosphorsäure, Zinksalze und Mangansalze, wie Kaliumchlorid, Magnesiumsulfat, Kaliumphosphat, Zinksulfat oder Hangansulfat enthalten, ferner können dem iiähraediom Sparenmengen an Titaminen, wie Biotin oder Vitamin B-, Melassen und Maisquellwasser, die diese Vitamine enthalten, zugesetzt werden.The nutrient medium also contains nitrogen sources such as ammonium salts, for example ammonium sulfate or ammonium chloride, or urea, and the nutrient medium may contain inorganic salts such as potassium salts, magnesium salts, salts of phosphoric acid, zinc salts and manganese salts such as potassium chloride, magnesium sulfate, potassium phosphate, zinc sulfate or hangane sulfate, Further, the ethereal savings amount of titamines such as biotin or vitamin B, molasses and corn steep liquor containing these vitamins can be added.

Die Züchtung kann auf festen oder flüssigen Ii ähr boden unter Verwendung üblicher i'ermenter und bei den üblichen 'Temperaturen durchgeführt werden* Züchtungsteaperaturen von 25 bis 400C sind besonders günstig. Der pH-Wert des Uährmediums beträgt bei Verwendung von Garbonsäuren oder höheren Fettsäuren vorzugsweise 6 bis 8 und bei Verwendung anderer Kohlenstoffquellen 4 bis 8« Bei Verwendung von Kohlenwasserstoffen oder Ölen und Petten als Kohlenstoffquelle kann eine grenzflächenaktive Verbindung, beispielsweise ein Fett säur«derivat, zugesetzt werden, um die Dispersion aes Substrats unter den Züchtungabedingungen su verbessern. Das erfindungsgesiäö verwendete Carnitin oder dessen Derivate bzw. Vorläufer werden des Nährmedium.in einer Konzentration von mindestens 10 ^ug/Iiter, berech-The cultivation may arranty on solid or liquid Ii ground are carried out using conventional i'ermenter and at the usual '* Züchtungsteaperaturen temperatures of 25 to 40 0 C are particularly favorable. The pH of the nutrient medium is preferably from 6 to 8 when using carboxylic acids or higher fatty acids and from 4 to 8 when using other carbon sources. "When using hydrocarbons or oils and petten as the carbon source, a surfactant compound, for example a fatty acid derivative, may be added to improve the dispersion of the substrate under the cultivation conditions, see below. The carnitine or its derivatives or precursors used according to the invention are used in the nutrient medium in a concentration of at least 10 μg / litter.

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net als Carnitinchlorid, zugesetzt. Selbst in höfcs?en Konzentrationen hemmt das Carnitin oder dessen Derivate nicht das Wachstum der Bakterien, Allzu hohe Konzentrationen sind jedoch zu vermeiden. Die bevorzugte Konzentration liegt bei 10 /Ug bis 100 mg/Liter,net as carnitine chloride, added. Even at high concentrations, carnitine or its derivatives do not inhibit the growth of the bacteria, but excessively high concentrations are to be avoided. The preferred concentration is 10 / ug to 100 mg / liter,

Die Erfindung soll nachstehend an 14 Ausführungsbeispielen näher erläutert werden,The invention will be explained in more detail below on 14 exemplary embodiments,

Beispiel 1example 1

Es wird ein auf einen pH-Wert von 7,2 eingestelltes Minimalmedium verwendet, das aus 1,5 g HaH2PO4; 6,9 g K2HPO4; 0,2 g MgSO4 . 7 H2O; 750/üg ^eSO4 . 7H2O; 75 yag MaSO4 . 4 H2O; 75 /Ug ZnSO4 . 7 H2O; 15 /Ug CuSO4 . 5 H3O; 15 /Ug CoCl2 , 6 H2O und 15 /Ug H^BO3 in 1 Liter bidestilliertem Wasser hergestellt wird. Als einzige Kohlenstoffquelle dient Hesadecan (6 g/l); ST-Qüelle ist HH4Cl (3 g/l)» Dieses Grundinedium wird mit D,L-Carnitin in.den nachstehenden, in Tab, I angegebenen Mengen versetzt,It is used a set to a pH of 7.2 minimal medium consisting of 1.5 g HaH 2 PO 4 ; 6.9 g K 2 HPO 4 ; 0.2 g of MgSO 4 . 7H 2 O; 750 / üg ^ eSO 4 . 7H 2 O; 75 yag MaSO 4 . 4H 2 O; 75 / Ug ZnSO 4 . 7H 2 O; 15 / Ug CuSO 4 . 5 H 3 O; 15 / Ug CoCl 2 , 6 H 2 O and 15 / Ug H ^ BO 3 in 1 liter of bidistilled water. The only carbon source is hesadcan (6 g / l); ST cell is HH 4 Cl (3 g / l) »This basic medicine is mixed with D, L-carnitine in the following amounts indicated in Tab, I,

100 ml dieses Mediums werden in 500 ml fassende Schüttelkolben mit Einstiehen gegeben und mit 2,0 ml einer Kulturflüssigkeit (optische Dichte bei 600 nm etwa 1,5) von Acinetobacter calcoaceticus 69/Y beimpft. Die Kulturflüssigkeit wird durch Abschwemmen von 24h alten Sehrägagarröhrchen mit Minimalmedium gewonnen. Die Züchtung wird bei 300C unter Schütteln durchgeführt, Die Ergebnisse sind in Tabelle I. zusammengefaßt,100 ml of this medium are placed in 500 ml shake flasks with training and inoculated with 2.0 ml of a culture fluid (optical density at 600 nm about 1.5) of Acinetobacter calcoaceticus 69 / Y. The culture fluid is recovered by washing away 24 h old tubes with minimal medium. The cultivation is carried out at 30 ° C. with shaking. The results are summarized in Table I.

Tabelle ITable I

D,L-Carnitin- Bakterientrockengewicht (mg/1) nach ange-Kon2entration gebener Züchtungsdauer (h) (g/l) 16 18 21 22 23D, L-carnitine bacterial dry weight (mg / l) after prolonged concentration (h) (g / l) 16 18 21 22 23

0 60 140 290 540 930 0,1 190 460 2600 3800 6900 0,3 240 570 3600 5500 72000 60 140 290 540 930 0.1 190 460 2600 3800 6900 0.3 240 570 3600 5500 7200

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Beispiel 2Example 2

Beispiel 1 wird wiederholt, anstelle von Hesadecan werden 10 g/l Parez (Kohlenwasserstoffgemisch der Kettenlängen ^12~^2O^ a^"s e^nz^ee Wachst uinskohlenst off quelle verwendet< Die Ergebnisse sind in Tabelle II zusammengefaßt.Example 1 is repeated, instead of Hesadecan 10 g / l Parez be (hydrocarbon mixture of chain lengths ^ 12 ~ ^ 2O ^ a ^ "se ^ NZ ^ e e Grow uinskohlenst off source used <The results are summarized in Table II.

Tabelle IITable II

DjL-Carnitin- Bakterientrockengewicht (mg/1) nach Konzentration angegebener Züchtungsdauer (h) (g/l) 16 19 24DjL carnitine bacterial dry weight (mg / l) after concentration of specified breeding time (h) (g / l) 16 19 24

00 920920 16001600 61006100 0,10.1 11001100 37003700 63006300 0,50.5 14001400 39003900 75007500

Beispiel 3Example 3

Gemäß Beispiel 1 wird Acinetobacter calcoaceticüs CCH 2355 gezüchtet. Die Ergebnisse sind in Tabelle III zusammengefaßt«According to Example 1 Acinetobacter calcoaceticus CCH 2355 is grown. The results are summarized in Table III «

Tabelletable IIIIII ebener Züchtungsdauer (h)even breeding time (h) 9,59.5 1313 D,1-CarnitinD, 1-carnitine 88th 600600 39003900 Konzentrationconcentration Bakterientrockengewicht (mg/1) nachBacteria dry weight (mg / 1) after 190190 13801380 58005800 (g/i)(G / i) angegangeg 460460 15001500 64006400 00 66 520520 0,10.1 4040 0,30.3 8080 9090

Beispiel 4Example 4

Gemäß' Beispiel 1 werden Acinetobacter calcoaceticüs Ξ3 104, COM 5572 und CCM 237b gezüchtet. Die Ergebnisse sind in fabelie 17 zusammengefaßt.According to 'Example 1 Acinetobacter calcoaceticüs Ξ3 104, COM 5572 and CCM 237b are grown. The results are summarized in fabelie 17.

« *> «* j ι / /«*>« * J ι / /

Bakterienstammbacterial strain

Oamitin-Zusatz (g/1)Oamitin supplement (g / 1)

Tabelle ITTable IT

Bakterientroekengewicht (mg/1) nach.Bacterial microbe weight (mg / 1) after.

angegebener Zuchtungsdauer (h)specified breeding duration (h)

β 8 10 11 12 13 14 21β 8 10 11 12 13 14 21

Ac^calco- aceticus EB 104Ac ^ calcoaceticus EB 104 0,50.5 120 500 250 700120 500 250 700 110 520 4900 5100 360 1900 5700 5900110 520 4900 5100 360 1900 5700 5900 1300 19001300 1900 Ac,Galeo- aceticus GCM 5572Ac, Galeo aceticus GCM 5572 0,50.5 150 250150 250 630 1400 2500 1150 2300 3900630 1400 2500 1150 2300 3900 Ac.ealco- aceticus GCM 2376Ac.ealcoaceticus GCM 2376 0,50.5

Beispiel 5Example 5

Gemäß Beispiel 1 wird Ac. calcoaceticus &3/Ί gezüchtet. Als-Kohlenwasserstoffquelle wird jedoch anstelle der n-Päraffine ffialat (20 g/l) eingesetzt. Die Ergebnisse sind in Tabelle T zusammengefaßt.According to Example 1, Ac. calcoaceticus & 3 / Ί bred. As a hydrocarbon source, however, ffialate (20 g / l) is used instead of the n-pregelaffins. The results are summarized in Table T.

Tabelle YTable Y (mg/1) nach(mg / l) after 88th D, L-G aasiitinD, L-G aasiitin iungsdatier (n)dossier (s) 780780 Konzentrat ionConcentrate ion BakterientroGkengewichtBakterientroGkengewicht 15001500 (g/l)(G / l) angegebener Züehlspecified amount 200200 OO 1,5 41.5 4 700700 0,50.5 20 4020 40 50 9050 90

L O 4 J i / LO 4 J i /

Beispiel 6Example 6

Beispiel 1 wird wiederholt, außer i),L-Carnitin werden jedoch auch L-Acetyl-Camitin, Cholin vind Acetyl-Cholin eingesetzt. Die Ergebnisse sind in Tabelle VI zusammengefaßt«Example 1 is repeated, except i), L-carnitine but also L-acetyl-camitine, choline vind acetyl-choline are used. The results are summarized in Table VI «

Zusatzadditive

Tabelle VITable VI

Bakterientrockengewichi; (mg/1) nach angegebener Züchtungsdauer (h) 7 8,5 12 13,5Bakterientrockengewichi; (mg / l) after the specified breeding time (h) 7 8.5 12 13.5

270270 570570 20002000 56005600 Cholin (1 g/l)Choline (1 g / l) 200200 560560 22002200 60006000 Acetyl-Cholin (lg/1)Acetyl-choline (lg / 1) 390390 800800 49004900 1070010700 D,!-Carnitin (0,5g/DD,! - carnitine (0.5g / d 330330 780780 52005200 1080010800 L-Aeetyl-CarnitinL-carnitine Aeetyl- 810810 15001500 1020010200 1150011500 (0,5 g/l)(0.5 g / l)

Beispiel 7Example 7

Gemäß Beispiel 1 wird Ac, calcoaceticus SB 104 gezüchtet, außer D,L-Carnitin werden jedoch Acetyl-Carnitin, Cholin und Acetyl-Cholin eingesetzt. Die Ergebnisse sind in Tabelle VlI zusammengefaßt.According to Example 1, Ac, calcoaceticus SB 104 is cultured, except D, L-carnitine but acetyl-carnitine, choline and acetyl-choline are used. The results are summarized in Table VI.

Tabelle VIITable VII

Zusatz Bakterientrockenge'wicht (mg/1) nachAddition of bacterial dry matter (mg / 1) after

angegebener Züchtungsdauer (h) 11 13specified breeding time (h) 11 13

Cholin (o,5 g/l) Acetyl-Cholin (0,5gCholine (o, 5 g / l) acetyl-choline (0.5 g

/1)/1)

DjL-CarnitinDJL-carnitine

(0,5 g/l) L-A cetyl-Carnitin(0.5 g / L) L-A cetyl-carnitine

(0,5 g/l)(0.5 g / l)

6200 7450 86006200 7450 8600

7350 65007350 6500

6450 79006450 7900

97009700

7700 68507700 6850

69006900

86008600

1500015000

8850 74008850 7400

1717

Beispiel 8Example 8

Gemäß Beispiel 1 werden Ac· Galeoaceticus 69/V und SB 104 gezüchtet.. Anstelle von B,L-Caraitin wird Glycinbetain als Zusatz verwendet. Die Ergebnisse sind in Tabelle Till zusammengefaßt.According to Example 1, Ac · Galeoaceticus 69 / V and SB 104 are cultured. Instead of B, L-caraitin, glycine betaine is used as an additive. The results are summarized in Table Till.

labeile VIIIlabeile VIII

Bakterien- GIycinstamrn betainBacterial GIycinstamrn betaine

Zusatzadditive

(g/l) 3,5 7,5(g / l) 3.5 7.5

Bakterientrockengewicht (mg/1) nach angegebener ZüchtungsdauerBacteria dry weight (mg / 1) after the specified breeding period

Ch) 8 10 11 12 13 14,5 21,5 24Ch) 8 10 11 12 13 14.5 21.5 24

Ac.Calco-Ac.Calco- o,O, 55 5050 6060 25002500 40004000 100100 50005000 2020 64006400 51005100 aceticusaceticus 6060 8080 27002700 45004500 210210 67006700 950950 80008000 1050010500 69/T69 / T __ Ac.calco-Ac.calco- o,O, 55 4S0O4S0O aceticusaceticus 940©940 © SB 104SB 104

Beispiel 9Example 9

Gemäß Beispiel 1 wird Ac.calcoaceticus CGM 2355 gezüchtet, Anstelle von D,!-Carnitin werden jedoch Acetyl-Carnitin bzw. Glycinbetain als Zusätze verwendet. Die Ergebnisse sind in Tabelle U. zusammengefaßt.According to Example 1 Ac.calcoaceticus CGM 2355 is grown, but instead of D,! - Carnitin acetyl-carnitine or glycine betaine are used as additives. The results are summarized in Table U.

Zusatz (0,5 g/l)Additive (0.5 g / l)

Tabelle ΓΣTable ΓΣ

Bakterientrockengewicht (mg/1) nach angegebener Züchtungsdauer (h) 6 8 9,5 13Bacteria dry weight (mg / l) after specified breeding time (h) 6 8 9,5 13

—- 4040 190190 600600 39003900 Acetyl-CarnitinAcetyl-carnitine 280280 14301430 37003700 70007000 Glycinbetainglycine betaine 9090 520520 15001500 58005800

Beispiel 10Example 10

Gemäß Beispiel 1 werden Pseudomonas putida und Pseudomonas oleovorans gezüchtet. Als Kohlenstoffquelle dient jedoch Octan (20 g/l). Die Ergebnisse sind in Tabelle I zusammengefaßt.According to Example 1 Pseudomonas putida and Pseudomonas oleovorans are bred. However, the carbon source is octane (20 g / l). The results are summarized in Table I.

Tabelletable

Bakterienstammbacterial strain

Carnitin-ZusatzCarnitine supplement

(g/l)(G / l)

Bakterientrockengewicht (mg/1)Bacteria dry weight (mg / 1)

nach angegebener Züchtungsdauer (h)after specified breeding period (h)

1313

1515

18,518.5

23,523.5

Ps.Ps. 00 -- 5050 9090 650650 280280 oleovoransoleovorans ,5, 5 100100 180180 970970 850850 Ps.Ps. 00 __ 2020 110110 putidaputida ,5, 5 380380 720720

Beispiel 11Example 11

Gezüchtet wird Salmonella typhlmuriom unter partiell anaeroben Bedingungen« Als Substrat dient Komplezmedium (Pankreatisches Pepton). Gezüchtet wird in 14ml-Ansätzen in Reagenzgläsern. Dem Medium werden !-Carnitin, Acetyl-L-Carnitin, γ - Butyrobetain, Crotonbetain oder Gholin (jeweils 5 g/l) zugesetzt. Die Ergebnisse sind in Tabelle XI zusammengefaßt.Salmonella typhlmurioma is grown under partially anaerobic conditions. "The substrate used is the complement medium (pancreatic peptone). Bred in 14ml batches in test tubes. The medium is added with carnitine, acetyl-L-carnitine, γ -butyrobetaine, crotonbetaine or gholin (in each case 5 g / l). The results are summarized in Table XI.

Zusatz (5 g/l)Additive (5 g / l)

Tabelle IITable II

Bakterientrockengewicht (mg/1) nach angegebener Züchtungsdauer (h), 19 24 46Bacteria dry weight (mg / l) after the specified breeding time (h), 19 24 46

Cholin CrotonbetainCholine Crotonbetaine

320 330 430320 330 430

1V -Butyrobetain 380 L-Carnitin 630 Acetyl-L-Carnitin 590 1 V butyrobetaine 380 L-carnitine 630 acetylcarnitine 590

360 380 490360 380 490

440 690 610440 690 610

380 480 560380 480 560

610 890 800610 890 800

I /I /

Beispiel 12Example 12

Gemäß Beispiel, 11 wird Proteus vulgaria gezüchtet. Die Ergebnisse sind in Tabelle JII zusammengefaßt.According to example, 11, Proteus vulgaria is bred. The results are summarized in Table JII.

Tabelle IIITable III

Zusatz Bakterientrockengewicht (mg/1) nachAddition of bacterial dry weight (mg / 1) after

(5 g/l) angegebener Züchtungsdauer (h)(5 g / l) of specified breeding time (h)

24 4824 48

350 480 850 940 540 660350 480 850 940 540 660

Beispiel 13Example 13

Gemäß Beispiel 11 wird Sscheriehia eoli gezüchtet. Die Ergebnisse sind in Tabelle XIII zusammengefaßt,According to Example 11 Sscheriehia eoli is bred. The results are summarized in Table XIII,

Tabelle UliTable Uli

Zusatz Bakterientrockengewieht (mg/1) nach (5 g/l) angegebener Züehtungsdauer (h)Addition of bacterial dry matter (mg / l) after (5 g / l) specified duration (h)

24 4824 48

230 240 400 250 400 480230 240 400 250 400 480

290290 Acetyl-L-CarnitinAcetyl-L-carnitine 310310 Cholincholine GrotonbetainGrotonbetain ^ -Butyrobetain^ -Butyrobetaine L-CarnitinL-carnitine 360360

'-'- 220220 GholinGholin 220220 Crotonbetaincrotonobetaine 380380 ^ -Butyrobetain^ -Butyrobetaine 220220 !-Carnitin! -Carnitine 370370 Acetyl-L-CarnitinAcetyl-L-carnitine 430430

L J k J 1 / / L J k J 1 / /

Beispiel 14Example 14

Gezüchtet wird Acinetobaeter oalcoaceticua IB 104 nach Beispiel 1 (0j6 % Cjg auf Minimalmedi tun) unter Zusatz von lysinAcinetobaeter oalcoaceticua IB 104 is grown according to Example 1 (0j6 % Cjg on Minimalmedi do) with the addition of lysine

Die Ergebnisse sind in Tabelle HY zusammengefaßt. The results are summarized in Table HY.

Tabelle XIVTable XIV

Lysinkonzentration Bakterientrockengewicht (mg/1) nach (g/l) angegebener Zuchtungsdauer .(h)Lysine concentration Bacteria dry weight (mg / l) after (g / l) specified breeding time. (H)

3,5 4,5 5,5 6,5 7,53.5 4.5 5.5 6.5 7.5

__ 120120 600600 12001200 29002900 62006200 0,10.1 220220 700700 16001600 43004300 62006200 0,50.5 290290 780780 18001800 47004700 64006400

Claims (27)

234317 7234317 7 Erfindungsanspruchinvention claim 1. Verfahren zum Züchten von Bakterien, in einem flüssigen Minimalmedium, rlüssigen oder festen Komplerraedium unter Verwendung von Acetat, Malat, Glucose, Pares:, Mepasin o.dgl« als Kohlenstoffquelle und NH.G1 o.dgl« als Sttökstoffquelle,1. A method for growing bacteria, in a liquid minimal medium, liquid or solid Komplerraedium using acetate, malate, glucose, Pares :, Mepasin or the like «as carbon source and NH.G1 or the like« as Sttokkstoffquelle, dadurch gekennzeichnet, daßcharacterized in that als waehstumsfördernder Zusatz quaternäre Ammoniumverbindungen, insbesondere Choiin, Acetylcholin, Lysin, D,L-, l(-) oder D(+)-Carnitin, dessen Vorläufer, Abbauprodukte und/oder Derivate eingesetzt werden«quaternary ammonium compounds, in particular choiin, acetylcholine, lysine, D, L (-) or D (+) - carnitine, the precursors of which, degradation products and / or derivatives are used 2. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Stamm Acinetobacter calcoaceticus 69 V gezüchtet wird,2. The method according to item 1, characterized in that the strain Acinetobacter calcoaceticus 69 V is grown, 3. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Stamm Acinetobaeter ealcoaceticus CCM 2355 gezüchtet wird«3. The method according to item 1, characterized in that the strain Acinetobaeter ealcoaceticus CCM 2355 is bred « 4. Verfahren nach Punkt T, dadurch gekennzeichnet, daß der Stamm Acinetobacter calcoaceticus EB 104 gezüchtet wird« .4. Method according to point T, characterized in that the strain Acinetobacter calcoaceticus EB 104 is grown «. 5. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Stamm Acinetobacter calcoaceticus CCM 5572 gezüchtet wird«5. The method according to item 1, characterized in that the strain Acinetobacter calcoaceticus CCM 5572 is bred « 6« Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Stamm Acinetobacter calcoaceticus GCM 2376 gezüchtet wird«6 «Method according to item 1, characterized in that the strain Acinetobacter calcoaceticus GCM 2376 is cultivated« 7. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Stamm Pseudomonas putida gezüchtet wird«7. Method according to item 1, characterized in that the strain Pseudomonas putida is bred « 8, Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Stamm Pseudomonas oleovorans gezüchtet wird«8, method according to item 1, characterized in that the strain Pseudomonas oleovorans is bred « L J 4 ά 1 I I * L J 4 ά 1 II * 9. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet,..daß der Stamm Salmonella typhimurium LSp gezüchtet wird.9. The method according to item 1, characterized, .. that the strain Salmonella typhimurium LSp is grown. 10. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Stamm Proteus vulgaris gezüchtet wird.10. The method according to item 1, characterized in that the strain Proteus vulgaris is grown. 11. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Stamm Sscherichia coli 044 K74 gezüchtet wird.11. The method according to item 1, characterized in that the strain Sscherichia coli 044 K74 is grown. 12. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Stamm Acetobacter gezüchtet wird«12. The method according to item 1, characterized in that the strain Acetobacter is bred « 13. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Stamm Giuconobaeter gezüchtet wird.13. The method according to item 1, characterized in that the strain Giuconobaeter is grown. 14. Verfahren nach Punkt 1 bis 13, dadurch gekennzeichnet, daß Mischkulturen gezüchtet werden«14. Method according to item 1 to 13, characterized in that mixed cultures are cultivated « 15. Verfahren nach Punkt 1 bis 14, dadurch gekennzeichnet, daß Aeinetobacter calcoaceticus 69 V, GCM 23559 BB 104, CGM 5572, CCM 2376, Pseudomonas putida, Pseudo» monas oleovorans, Salmonella typhimurium LT^» Proteus vulgaris, üscherichia coli 044 K74, Acetobacter, Gluconobacter .jeder für sich oder in belieöiger Kombination miteinander anwesend sind bei der Züchtung beliebiger anderer Arten von Mischkulturen.15. The method according to item 1 to 14, characterized in that Aeinetobacter calcoaceticus 69 V, GCM 2355 9 BB 104, CGM 5572, CCM 2376, Pseudomonas putida, Pseudomonas oleovorans, Salmonella typhimurium LT ^ Proteus vulgaris, üscherichia coli 044 K74 , Acetobacter, Gluconobacter. Are present either alone or in any combination with each other in the breeding of any other species of mixed cultures. 15. Verfahren nach Punkt 1 bis 15? dadurch gekennzeichnet, daß als Carnitinvorläufer Crotonbetain oder Butyrobetain •verwendet werden.15. Method according to items 1 to 15? characterized in that are used as carnitine precursor croton betaine or butyrobetaine •. 17. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als Carnitinderivate ein Acylcarnitin, Alkylcarnitin oder Acyl-Alkylcarnitin verwendet,17. The method according to item 1, characterized in that one uses as the carnitine derivatives an acylcarnitine, alkylcarnitine or acyl-alkylcarnitine, 18. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als Acylcarnitine solche mit Pettsaurere sten der Kettenlänge zwischen Cp und Cp^ wie 3,B, Acety!carnitin, Propionylcamitin, Butyry !carnitin, Pälini toy !carnitin18. The method according to item 1, characterized in that as acylcarnitines those with Pettsaurere most of the chain length between Cp and Cp ^ as 3, B, Acety! Carnitine, propionylcamitin, Butyric carnitine, Palini toy! Carnitine oder Stearoylcarnitin verwendet. -or stearoyl carnitine. - 19. Verfahren nach Punkt 1 und 17, dadurch gekennzeichnet, daß man als Alkylcarnitin Methyl- oder Xthylcarnitin verwendet. 19. The method according to item 1 and 17, characterized in that one uses as Alkylcarnitin methyl or Xthylcarnitin. 20. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als Crotonobetainderivat ein Alkylcrotonobetain verwendet .20. The method according to item 1, characterized in that is used as Crotonobetainderivat an alkyl crotonobetaine. 21. Verfahren nach Punkt 1 und 20, dadurch gekennzeichnet, daß man als Älkylcrotonobetain Methyl- oder Äthylcronotobetain verwendet.21. The method according to item 1 and 20, characterized in that is used as Älkylcrotonobetain methyl or Äthylcronotobetain. 22. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als Butyrobetainderivat ein Alkylbutyrobetain verwendet .22. The method according to item 1, characterized in that one uses as Butyrobetainderivat Alkylbutyrobetain. 23. Verfahren nach Punkt 1 und 22, dadurch gekennzeichnet, daß man als Alkylbutyrobetain Methyl- oder Athylbutyrobetain verwendet.23. The method according to item 1 and 22, characterized in that is used as Alkylbutyrobetain methyl or Athylbutyrobetain. 24. Verfahren nach Punkt 1 und 16-23, dadurch gekennzeichnet, daß man Hitrile und Amide der entsprechenden Betaine einsetzt.24. The method according to item 1 and 16-23, characterized in that one uses Hitrile and amides of the corresponding betaines. 25. Verfahren nach Punkt 1 some 9-11 und 14-24, dadurch gekennzeichnet, daß unter partiell anaeroben Bedingungen gezüchtet wird.25. The method according to item 1 some 9-11 and 14-24, characterized in that is grown under partially anaerobic conditions. 26. Verfahren nach Punkt 1 sowie 9-11 und 14-24, dadurch gekennzeichnet, daß mikroaerophil gezüchtet wird.26. The method according to item 1 and 9-11 and 14-24, characterized in that microaerophilically bred. 27. Verfahren nach Punkt 1 sowie 9-11 und 14-24, dadurch gekennzeichnet, daß anaerob gezüchtet wird.27. The method according to item 1 and 9-11 and 14-24, characterized in that anaerobically bred. 28. Verfahren nach. Punkt 1-17, dadurch gekennzeichnet, daß die Wachstumsförderung in vivo stattfindet.28. Method according to. Item 1-17, characterized in that the growth promotion takes place in vivo. 29. Verfahren nach Punkt 1-28, dadurch gekennzeichnet, daß die quaternären Ammoniumverbindungen standardisierten festen oder flüssigen Minimal- oder Komplex-?ertignährböden zur Bakterienkultivierung zugesetzt werden.29. Method according to items 1-28, characterized in that the quaternary ammonium compounds are added to standardized solid or liquid minimal or complex culture media for bacterial cultivation.
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