DD158738A5 - METHOD FOR PRODUCING PARTICLES FROM LIPOID-SOLUBLE SUBSTANCES - Google Patents
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Abstract
Die vorliegende Erfindung betrifft Verfahren zur kontinuierlichen Herstellung von Partikeln aus lipoidloeslichen Stoffen sowie Kompositionen, die diese Partikeln und an diese gebundene biologisch aktive Stoffe, beispielsweise Bakterium- und Viruspartikeln, Zellfraktionen oder Stoffwechselprodukte von Bakterien und deren Derivate, verschiedene Hormone, Antibiotika, sowie Haptene enthalten, fuer die Durchfuehrung von Adjuvierungs- und aktiv Immunisierungsuntersuchungen. Erfindungsgemaess werden Partikel und Kompositionen beispielsweise derart hergestellt, dass man eine Loesung des lipoidloeslichen kornbildenden Stoffes in Alkohol oder in einem geeigneten Loesungsmittel, welches zusaetzlich auch einen oberflaechenaktiven Stoff enthaelt, und den in Wasser oder in einer waessrigen Elektrolytloesung mit einem pH-Wert von 2 bis 10 vorgelegten biologisch aktiven Stoff in ein mit einem Ruehrer ausgeruestetes Gefaess hineinbringt, worin das Volumenverhaeltnis der alkoholischen und der waessrigen Phase 0,1-900:100 betraegt, und das erhaltene Reaktionsgemisch mindestens eine Minute lang vermischt, danach hoechstens 7 Tage lang stehen laesst und die ausgefallenen Partikeln trennt.The present invention relates to processes for the continuous production of particles from lipoidloeslichen substances and compositions containing these particles and attached to these biologically active substances, such as bacterial and viral particles, cell fractions or metabolites of bacteria and their derivatives, various hormones, antibiotics, and haptens for the performance of adjuvant and active immunization studies. According to the invention, particles and compositions are prepared, for example, in such a way that a solution of the lipoid-soluble grain-forming substance in alcohol or in a suitable solvent, which additionally also contains a surface-active substance, and in water or in an aqueous electrolyte solution having a pH of 2 to 10 introduced biologically active material into a equipped with a stirrer vessel, wherein the volume ratio of the alcoholic and the aqueous phase is 0.1-900: 100, and the resulting reaction mixture for at least one minute, then allowed to stand for not more than 7 days and the precipitated particles separates.
Description
Berlin, 25. 6. 1981 AP A 61 К / 227 326 58 680 18Berlin, 25. 6. 1981 AP A 61 К / 227 326 58 680 18
Verfahren zur Herstellung von Partikeln aus lipoidlöslichen StoffenProcess for the preparation of particles of lipid-soluble substances
Die vorliegende Erfindung betrifft Verfahren zur Herstellung von Partikeln aus lipoidlöslichen Stoffen sowie Kompositionen, die diese Partikeln und an diese gebundene biologisch aktive Stoffe enthalten.The present invention relates to processes for the preparation of particles from lipoid-soluble substances as well as compositions containing these particles and bound biologically active substances.
Bei in vitro Untersuchungen wird zur Bindung biologisch aktiver Stoffe z. B. ein Latex, eine spezifisch polymerisierte, geeignete Korngröße aufweisende Polystyrolsuspension in breitem Umfang verwendet (An. J. Med. 21, 888-892 (1956)). Die Latexsuspension wird aus Styrol hergestellt. Es ist bekannt, daß die Styrolmoleküle zur Autopolymerisation sehr leicht bereit sind. Dementsprechend wird das handelsübliche Styrol vor der Herstellung des Latex zur Gewinnung des Styrolmonomers destilliert und das so erhaltene Monomer polymerisiert. Wegen der chemischen Struktur des Styrolmoleküls ist auch die hergestellte Latexsuspension zur Autopolymerisation bereit. So altern die Körner auch während der Lagerung der Suspension und darüber hinaus ist das Reagens zur Durchführung von Ni ederschlagsreaktionen ungeeignet (J. A. M. A. 168 (2), 180-181, (1958)).In in vitro studies, for the binding of biologically active substances z. For example, latex, a polystyrene suspension having a specific polymerized, suitable grain size, has been widely used (An J. Med., 21 , 888-892 (1956)). The latex suspension is made from styrene. It is known that the styrene molecules are very readily ready for autopolymerization. Accordingly, the commercial styrene is distilled prior to the preparation of the latex to obtain the styrene monomer, and the resulting monomer is polymerized. Because of the chemical structure of the styrene molecule, the prepared latex suspension is also ready for autopolymerization. Thus, the grains also age during storage of the suspension and, moreover, the reagent is unsuitable for performing precipitation reactions (JAMA 168 (2), 180-181, (1958)).
Die Herstellung der Reagenzien auf der Basis vom Latex-Trägersystem erfolgt mindestens in zwei Schritten. In dem ersten Schritt wird das Trägersystem selbst hergestellt, danach die biologisch aktiven Stoffe zu diesem TrägersystemThe preparation of the reagents based on the latex carrier system takes place in at least two steps. In the first step, the carrier system itself is prepared, then the biologically active substances to this carrier system
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gebunden» Die Herstellung dieser Reagenzien nimmt viel Zeit in Anspruch und ist nur zur Durchführung der in vitro Untersuchungen geeignet, da das Styrol bezüglich des Organismus stark schädlich ist· bound "The production of these reagents takes a lot of time and is suitable for in vitro studies, as the styrene with respect to the organism highly detrimental · only to perform
Als in vivo Adjuvanten werden die Freund-Adjuvanten in breitem Umfang verwendet (Molecular Biology T^, Biochemistry and Biophysics, 1973 New York)« Diese Adjuvanten können wegen der Nebenwirkungen, welche deren Anwendung in der Humantherapie unmöglich machen, auch unter Prüfbedingungen nur beschränkt angewandt werden. Die erfindungsgemäßen Partikel können vorteilhafter verwendet werden als die in der Humantherapie angewandten metallhaltigen Adjuvanten (Molecular Biology I-I, Biochemistry and Biophysics, 1973 New York) und die Immunstimulanten vom Typ Saponin, welche das Blutbild verändern (Acta vet. scand. Г9, 7-40 (1978)).Freund's adjuvants are widely used as in vivo adjuvants (Molecular Biology T ^, Biochemistry and Biophysics, 1973 New York). "These adjuvants are of limited use even under assay conditions because of the side effects that make their use in human therapy impossible become. The particles according to the invention can be used more advantageously than the metal-containing adjuvants used in human therapy (Molecular Biology I - I, Biochemistry and Biophysics, 1973 New York) and the saponin-type immunostimulants which alter the blood count (Acta vet. Scand., 9, 7 -40 (1978)).
Zur Zeit sind Versuche im Gange, bei parenteraler Verwendung Liposom zur Bindung von biologisch aktiven Stoffen zu benutzen (Proc. Nat. Acad. Sei. 72_, 88-92 (1975))* Das Liposom ist eine aus Cholesterin und einem nicht artfremden oberflächenaktiven Stoff gebildete Partikel. Diese Partikeln werden aus den Chloroformlösungen der erwähnten Stoffe hergestellt; die Ausbildung der Ladungsverhältnisse erfolgt durch Zugabe von Phosphatidylcholin. Die Chloroformphase wird zur Trockne gebracht, so bildet sich eine Lipidschicht an der Wand des Gefäßes. Als zweiter Schritt wird die wäßrige Lösung des biologisch aktiven Stoffes diesem Film zugegeben (GB-PS 28 131/74).Die Herstellung dieses Systems ist nicht kontinuierlich, in einem Vorgang wird nur wenig Material gewonnen. Die Korngröße der so hergestellten Partikel variiert in einem breitem Bereich.At present, attempts are being made to use liposome for binding biologically active substances when used parenterally (Proc Nat Acad., 72, 88-92 (1975)) The liposome is one of cholesterol and a non-alien surfactant formed particles. These particles are made from the chloroform solutions of the mentioned substances; the charge ratios are formed by adding phosphatidylcholine. The chloroform phase is brought to dryness, thus forming a lipid layer on the wall of the vessel. As a second step, the aqueous solution of the biologically active substance is added to this film (GB-PS 28 131/74). The production of this system is not continuous, in one process, only a small amount of material is recovered. The grain size of the particles thus produced varies in a wide range.
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Ziel der ErfindungObject of the invention
Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung eines einfachen und wirtschaftlichen Verfahrens zur Herstellung von Partikeln aus lipoidlösuchen Stoffen sowie von Kompositionen, bestehend aus diesen Partikeln und an diese Partikeln gebundenen biologisch aktiven Stoffen, die sowohl in der Humanmedizin als auch in der Veterinärmedizin in vivo und in vitro angewendet werden können.The aim of the invention is to provide a simple and economical method for the production of particles from lipoidlösuchen substances and compositions consisting of these particles and bound to these particles biologically active substances, both in human medicine and in veterinary medicine in vivo and in vitro can be applied.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Trägersystem aufzufinden, das gegenüber dem Organismus nicht artfremd ist, in vivo und in vitro angewandt werden kann und nicht zur Autopolymerisation neigt.The invention has for its object to find a carrier system that is not alien to the organism, can be applied in vivo and in vitro and does not tend to autopolymerization.
Es wurde gefunden, daß die Ausbildung der Körner des Trägersystems und die Bindung der biologisch aktiven Stoffe zu den so erhaltenen Partikeln auch in einem Schritt durchgeführt werden kann. Dies erfolgt in folgender V/eise. Man löst Cholesterin und einen nicht artfremden oberflächenaktiven Stoff, z. B. Eilecithin in abs. Alkohol. Der biologisch aktive Stoff, z. B, Bakterium- und Viruspartikeln, Zellfraktionen oder StoffWechselprodukte von Bakterien und deren Derivate, verschiedene Hormone, Antibiotika, sowie Haptene, welche selbst eine schlechte Immunogenität aufweisen, wird in einer wäßrigen Elektrolytlösung vorgelegt. Danach werden die alkoholische Phase und die wäßrige Phase vereinigt. So erfolgt die Bildung des Partikelsystems und die Bindung des biologisch aktiven Stoffes in einem Schritt,It has been found that the formation of the grains of the carrier system and the binding of the biologically active substances to the particles thus obtained can also be carried out in one step. This is done in the following way. It dissolves cholesterol and a non-alien surfactant, eg. Eg. Eilecithin in abs. Alcohol. The biologically active substance, for. B, bacterium and virus particles, cell fractions or metabolites of bacteria and their derivatives, various hormones, antibiotics, and haptens, which themselves have a poor immunogenicity, is presented in an aqueous electrolyte solution. Thereafter, the alcoholic phase and the aqueous phase are combined. Thus, the formation of the particle system and the binding of the biologically active substance takes place in one step,
Das erfindungsgemäße Verfahren kann auch in zwei Schritten durchgeführt werden. In diesem Falle wird der kornbildende Stoff in der Alkoholphase gelöst und diese Lösung mit derThe process according to the invention can also be carried out in two steps. In this case, the grain-forming substance is dissolved in the alcohol phase and this solution with the
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wäßrigen Elektrolitphase vermischt· So erhält man die "leeren" Partikeln, zu welchen später biologisch aktive Stoffe gebunden werden können.aqueous electrolyte phase mixed. This gives the "empty" particles to which later biologically active substances can be bound.
Die auf beide Weisen erhaltenen Suspensionen werden zentrifugiert, dekantiert und der erhaltene Niederschlag in Wasser oder in einer wäßrigen Elektrolytlösung suspendiert und mit Ultraschall behandelt. Die Lagerung erfolgt entweder durch Lyophilisierung oder Kühlung. Der lyophilisierte Stoff wird zusätzlich strahlensterilisiert.The suspensions obtained in both ways are centrifuged, decanted and the resulting precipitate suspended in water or in an aqueous electrolyte solution and sonicated. Storage takes place either by lyophilization or cooling. The lyophilized substance is additionally radiation-sterilized.
Die Erfindung betrifft die leeren Trägerpartikeln, die aus lipoidlöslichen Stoffen hergestellt wurden, sowie Kompositionen, die diese Partikeln und an diese gebundene biologisch aktive Stoffe enthalten. DieErfindung betrifft weiterhin Verfahren zu deren Herstellung. Die Herstellung der Partikeln sowie die der Kompositionen sind neu. Die Verwendung der Kompositionen ist auch neu.The invention relates to the empty carrier particles which have been prepared from lipoid-soluble substances, as well as compositions which contain these particles and bound biologically active substances. The invention further relates to processes for their preparation. The production of the particles as well as the compositions are new. The use of the compositions is also new.
Die erfindungsgemäßen Partikeln und die Kompositionen werden so hergestellt, daß man eine Lösung des lipoidlöslichen kornbildenden Stoffes in Alkohol oder in einem geeigneten Lösungsmittel, welches zusätzlich auch einen oberflächenaktiven Stoff enthält,The particles and compositions according to the invention are prepared in such a way that a solution of the lipoid-soluble grain-forming substance in alcohol or in a suitable solvent, which additionally contains a surface-active substance,
a) und den in Wasser oder in einer wäßrigen Elektrolytlösung mit einem pH-Wert von 2 bis 10 vorgelegten biologisch aktiven Stoff in ein mit einem Rührer ausgerüstetes Gefäß hineinbringt, worin das Volumenverhältnis der alkoholischen und der wäßrigen Phase 0,1-900 : 100 beträgt, und das erhaltene Reaktionsgemisch mindestens eine Minute lang vermischt, danach höchstens 7 Tage lang stehen läßt und die ausgefallenen Partikeln trennt, odera) and brings the biologically active substance initially introduced in water or in an aqueous electrolyte solution having a pH of 2 to 10 in a vessel equipped with a stirrer, wherein the volume ratio of the alcoholic and the aqueous phase is 0.1-900: 100 , and the resulting reaction mixture is mixed for at least one minute, then allowed to stand for a maximum of 7 days and the precipitated particles separated, or
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b) mit Wasser oder mit einer wäßrigen Elektrolytlösung mit einem pH-Wert von 2 bis 10 in einem Volumenverhältnis von 0,1-900 : 100 vermischt, die ausgefallenen Partikeln trennt und gegebenenfalls in Wasser oder in einer wäßrigen Elektrolytlösung mit einem pH-Wert von 2 bis 10 suspendiert, danach lyophilisiert, oderb) mixed with water or with an aqueous electrolyte solution having a pH of 2 to 10 in a volume ratio of 0.1-900: 100, the precipitated particles separated and optionally in water or in an aqueous electrolyte solution having a pH of 2 to 10, then lyophilized, or
c) mit Wasser oder mit einer wäßrigen Elektrolytlösung mit einem pH-Wert von 2 bis 10 in einem Volumenverhältnis von 0,1-900 : 100 vermischt, die ausgefallenen Partikeln trennt, die so erhaltenen Partikeln dem in V/asser oder in einer wäßrigen Elektrolytlösung mit einein pH-Wert von 2 bis 10 vorgelegten biologisch aktiven Stoff zugibt, da3 erhaltene Reaktionsgemisch mindestens eine Minute lang vermischt, danach höchstens 7 Tage lang stehen läßt und die gebildeten Partikeln trennt, oderc) mixed with water or with an aqueous electrolyte solution having a pH of 2 to 10 in a volume ratio of 0.1-900: 100, separating the precipitated particles, the particles thus obtained in water or in an aqueous electrolyte solution adding a biologically active substance presented in a pH of 2 to 10, so that the resulting reaction mixture is mixed for at least one minute, then allowed to stand for a maximum of 7 days to separate the formed particles, or
d) die Partikeln nach der Verfahrensvariante b) dem in Wasser oder in einer wäßrigen Elektrolytlösung mit einem pH-Wert von 2 bis 10 vorgelegten biologisch aktiven Stoff zugibt und suspendiert undd) the particles according to process variant b) are added to and suspended in the biologically active substance initially introduced in water or in an aqueous electrolyte solution having a pH of 2 to 10, and
das erhaltene Produkt nach den Verfahrensvarianten a) und c) gegebenenfalls lyophilisiert und gewünschtenfalls strahlensterilisiert.the resulting product according to process variants a) and c) optionally lyophilized and, if desired, radiation-sterilized.
Mit dem erfindungsgemäßen Verfahren kann ein seit langem bestehendes Bedürfnis erfüllt werden, da das Verfahren kontinuierlich durchgeführt werden kann und so die Gewinnung der Suspension in großen Mengen ermöglicht.With the method according to the invention, a long-felt need can be met, since the process can be carried out continuously and thus allows the recovery of the suspension in large quantities.
Durch das erfindungsgemäße Trägersystem werden die Nachteile der bekannten Trägersysteme, beispielsweise die Nachteile des in vitro angewandten Latexes, sowie die der in vivo verwendeten Adjuvanten (Freund-Adjuvant, Adjuvant vomBy means of the carrier system according to the invention, the disadvantages of the known carrier systems, for example the disadvantages of the in vitro applied latex, as well as those used in vivo adjuvants (Freund adjuvant, adjuvant of
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Typ Saponin, metallhaltige Adjuvanten und Liposom) beseitigt· Das erfindungsgemäße Trägersystem ist auf beiden Gebieten verwendbar, neigt nicht zur Aut©polymerisation und ist bezüglich des Organismus nicht artfremd. Es kann auf den verschiedenen Gebieten der Immunologie und der Biologie sowohl in der Humantherapie als auch in der Veterinärmedizin verwendet werden.Type saponin, metal-containing adjuvants and liposome) · The carrier system according to the invention is usable in both fields, does not tend to be autopolymerized and is not alien to the organism. It can be used in the various fields of immunology and biology in both human therapy and veterinary medicine.
Auf der Oberfläche des erfindungsgemäßen Trägersystems können biologisch aktive Stoffe und Moleküle gebunden werden.Biologically active substances and molecules can be bound to the surface of the carrier system according to the invention.
Erfindungsgemäß können die Bildung der Partikeln und die Bindung der biologisch aktiven Stoffe auch in einem Schritt durchgeführt werden, so daß eine kontinuierliche Herstellung möglich ist. Demgemäß können größere Mengen von dem gewünschten Stoff erhalten werden, und dies macht das Verfahren wirtschaftlicher als die bekannten Herstellungsverfahren.According to the invention, the formation of the particles and the binding of the biologically active substances can also be carried out in one step, so that a continuous production is possible. Accordingly, larger amounts of the desired material can be obtained and this makes the process more economical than the known production processes.
Insbesondere hat die Erfindung die folgenden Vorteile:In particular, the invention has the following advantages:
1.In dem erfindungsgemäßen Verfahren erfolgt die Bildung der Partikeln und die Bindung der biologisch aktiven Stoffe in einem Schritt.1.In the process according to the invention, the formation of the particles and the binding of the biologically active substances takes place in one step.
2. Das erfindungsgemäße. Verfahren ist kontinuierlich, so können Partikeln aus lipoidlöslichen Stoffen in großen Mengen hergestellt werden.2. The inventive. Process is continuous, so particles of lipoid-soluble substances can be produced in large quantities.
3. Die Partikeln des Trägersystems sind bezüglich des Organismus nicht artfremd.3. The particles of the carrier system are not alien to the organism.
4. Den Punkten 1 und 2 gemäß ist das Verfahren wirtschaftlich.4. According to points 1 and 2, the procedure is economic.
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5· Durch das Verfahren können neue Systeme in großen Mengen hergestellt werden, welche als Reagenzien zur Durchführung von schnellimmundiagnostischen Untersuchungen in vitro geeignet sind, z. B.The process can produce large quantities of novel systems which are useful as reagents for performing in vitro rapid immunodiagnostic assays, e.g. B.
a) Diagnostikum zur schnellen quantitativen Bestimmung von Rheumatoid arthritisa) Diagnostic for rapid quantitative determination of rheumatoid arthritis
b) Reagenzien zu weiteren sehnellimmundiagnostisehen Be Stimmungen.b) reagents to further Seimellimmundiagnostisehen Be moods.
6. Die schnelldiagnostischen Reaktionen können mit den immundiagnostischen Reagenzien gemäß Punkt 5 als Tüpfelreaktionen durchgeführt und das Ergebnis in einigen Minuten erhalten werden,6. The rapid diagnostic reactions can be carried out with the immunodiagnostic reagents according to point 5 as blotch reactions and the result obtained in a few minutes,
7· Da die Partikeln des Trägersystems keine artfremden7 · Since the particles of the carrier system are not alien
Stoffe bezüglich des Organismus enthalten, sind sie zur Einführung von biologisch aktiven Stoffen in den Organismus geeignet, weiterhinContain substances with respect to the organism, they are suitable for the introduction of biologically active substances in the organism
a) auf dem Gebiet der mit Viren durchgeführten aktiven Immunisierung können sie die Antigenität der lebendigen oder getöteten und freigelegten Viren erhöhen,(a) in the field of active immunization carried out with viruses, they may increase the antigenicity of live or killed and released viruses;
b) auf dem Gebiet der mit Bakterien durchgeführten aktiven Immunisierung sind sie zur Stimulierung der mit getöteten und freigelegten Bakterien, mit den Zellfraktionen und StoffWechselprodukten von Bakterien und mit deren Drivaten durchgeführten Immunisierung geeignet,b) in the field of active immunization with bacteria, they are suitable for stimulating the immunization carried out with killed and released bacteria, with the cell fractions and metabolites of bacteria and their derivatives,
c) sie sind weiterhin zur Steigerung der mit Pilzfraktionen durchgeführten Immunisierung geeignet.c) they are also suitable for increasing the fungal fractional immunization.
8. An die erfindungsgemäßen Partikeln können auch solche biologisch aktiven Stoffe gebunden werden, welche in8. It is also possible to bind to the particles according to the invention those biologically active substances which are present in
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sich, keine oder nur geringe TMnunantwort in dem Organismus induzieren, doch durch diese Bindung geben sie eine größere Immunantwort, So kann durch die Verwendung der erfindungsgemäßen Partikeln eine Adjuvantenwirkung (z. B. bei Haptenen, Hormonen, Enzymen und Hystamin) erreicht werden. Eine parenterale Impfung mit diesen Partikeln hat den Vorteil, daß in diesem Falle keine Veränderungen weder an der Stelle der Impfung noch an anderen Stellen des Organismus erfolgen. Der Stoff saugt sich in vollem Maße auf und weist keine schädigende Nebenwirkung auf.induce no, or little, immune response in the organism, but by this binding give a greater immune response. Thus, the use of the particles of the present invention can provide adjuvant effect (eg, on haptens, hormones, enzymes, and hystamine). Parenteral vaccination with these particles has the advantage that in this case no changes take place either at the site of the vaccine or elsewhere in the organism. The fabric absorbs itself fully and has no harmful side effect.
9. Durch das erfindungsgemäße Verfahren können auch solche biologisch aktiven Stoffe gebunden werden, welche sich wegen ihrer kleinen Moleküle aus dem Organismus relativ schnell eliminieren, doch kann man voraussetzen, daß ihre Elimination durch ihre Bindung an das erfindungsgemäße Partikelsystem langsamer wird und so eine "verzogene Arzneiwirkung" erreicht werden kann.9. By the method according to the invention, it is also possible to bind those biologically active substances which relatively quickly eliminate themselves from the organism because of their small molecules, but it can be assumed that their elimination by their binding to the particle system according to the invention slows down and thus produces a distorted Drug effect "can be achieved.
Die Erfindung wird nachstehend an einigen Beispielen näher erläutert.The invention is explained in more detail below with reference to some examples.
Im Verfahren werden die Alkoholphase oder eine andere organische Lösungsmittelphase und die wäßrige Phase in einem Volumenverhältnis von 0,1-900 : 100 vermischt. So erreicht man die optimale Korngröße sowie die ideale Adsorptionsfähigkeit der Partikeln gegenüber den biologisch aktiven Stoffen.In the process, the alcohol phase or another organic solvent phase and the aqueous phase are mixed in a volume ratio of 0.1-900: 100. This achieves the optimum particle size and the ideal adsorption capacity of the particles compared to the biologically active substances.
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Dag Verfahren wird in der Vorrichtung gemäß der Fig. 1 durchgeführt. In den Behälter 1 wird die Lösung von Lecithin und Cholesterin in abs, Alkohol, in den Behälter der in einer wäßrigen Elektrolytlösung mit einem pH-Wert von 2 bis 10 vorgelegte biologisch aktive Stoff eingefüllt, Nachdem der Rührer 3 in Bewegung gesetzt wurde, läßt man die Gehalte der Behälter 1 und 2 in den Rührbehälter fließen, tropfen oder streuen. Das so erhaltene Reaktionsgemisch wird eine Minute lang mit einer Geschwindigkeit von 50 rpm gerührt, danach aus dem Rührbehälter 4 durch das Überlaufrohr 5 in den Sammelbehälter 6 fließen gelassen. Hier wird das Reaktionsgemisch so lange gerührt, bis die gewünschte Menge an den Partikeln erhalten wird. Das so erhaltene Produkt wird 5 bis 10 Minuten lang bei 37 0C inkubiert, 30 Minuten lang mit einer Geschwindigkeit von 6000 rpm zentrifugiert und der erhaltene Niederschlag dekantiert. Palis das Produkt unmittelbar verwendet wird, wird es in physiologischer Kochsalzlösung aufgenommen, völlig homogenisiert, danach mit Ultraschall behandelt. Falls das erhaltene Produkt erst später angewandt wird, wird der Niederschlag in destilliertem Wasser aufgenommen, völlig homogenisiert, dosiert und lyophilisiert, danach strahlensterilisiert,The Dag method is performed in the apparatus of FIG. Into the container 1, the solution of lecithin and cholesterol in abs, alcohol, is filled in the container of the biologically active substance presented in an aqueous electrolyte solution having a pH of 2 to 10. After the agitator 3 is set in motion, it is allowed to the contents of containers 1 and 2 flow, drip or scatter in the stirred tank. The reaction mixture thus obtained is stirred for one minute at a rate of 50 rpm, then allowed to flow from the stirring tank 4 through the overflow pipe 5 into the collecting tank 6. Here, the reaction mixture is stirred until the desired amount of the particles is obtained. The product thus obtained is incubated for 5 to 10 minutes at 37 0 C, centrifuged for 30 minutes at a speed of 6000 rpm and decanting the resulting precipitate. Palis the product is used directly, it is taken up in physiological saline, completely homogenized, then treated with ultrasound. If the product obtained is used later, the precipitate is taken up in distilled water, completely homogenized, dosed and lyophilized, then radiation sterilized,
Das Verfahren wird in der Vorrichtung gemäß der Fig. 1 durchgeführt. In den Behälter 1 wird die Lösung von Lecithin und Cholesterin in abs. Alkohol, in den Behälter eine wäßrige Elektrolytlösung mit einem pH-Wert von 2 bis 10 eingefüllt, Nachdem der Rührer in Bewegung gesetzt wurde, läßt man die Gehalte der Behälter 1 und 2 in den Rührbehälter 4 fließen, tropfen oder streuen. Nach Ver-The method is carried out in the device according to FIG. 1. In the container 1, the solution of lecithin and cholesterol in abs. Alcohol in the container is filled with an aqueous electrolyte solution having a pH of 2 to 10. After the agitator has been set in motion, the contents of the containers 1 and 2 are allowed to flow, drip or scatter in the stirring container 4. After
25- 6. 1981 AP A 61 К / 227 326 58 6θΟ 18 - 10 -25- 6. 1981 AP A 61 К / 227 326 58 6ΟΟ 18 - 10 -
mischen gelangt die erhaltene Suspension aus dem Rührbehälter 4 durch das Überlaufrohr 5 in den Sammelbehälter 6, Hier wird das Reaktionsgemisch so lange gerührt, bis die gewünschte Menge der Partikelsuspension erhalten wird·Mix the resulting suspension from the stirred tank 4 through the overflow pipe 5 in the collecting container 6, Here, the reaction mixture is stirred until the desired amount of the particle suspension is obtained ·
Die erhaltene Suspension wird 30 Minuten lang mit einer Geschwindigkeit von 6000 rpm (4000-6000 g) zentrifugiert, danach dekantiert. Der erhaltene Niederschlag wird in destilliertem Wasser aufgenommen, völlig homogenisiert, danach mit Ultraschall behandelt, Nach Dosierung wird das Produkt strahlensteriiisiert. Die so hergestellte leere Partikel enthält in lyophilisierter Form in der Einheitsmenge (Partikeleinheit) 11,2 mg Trockensubstanz,The resulting suspension is centrifuged for 30 minutes at a rate of 6000 rpm (4000-6000 g), then decanted. The resulting precipitate is taken up in distilled water, completely homogenized, then treated with ultrasound, after dosing the product is radiation sterilized. The empty particles thus prepared contain, in lyophilised form, in the unit amount (particle unit) 11.2 mg of dry matter,
und dies entspricht einer Partikelnummer von 1,5-2,5 χ 10 ,and this corresponds to a particle number of 1.5-2.5 χ 10,
Das Verfahren wird in der Vorrichtung gemäß der Pig, 1 durchgeführt. In den Behälter 1 wird die Lösung von Lecithin und Cholesterin in abs, Alkohol, in den Behälter 2 eine wäßrige Elektrolytlösung mit einem pH-Wert von 2 bis 10 eingefüllt, Nachdem der Rührer 3 in Bewegung gesetzt wurde, läßt man die Gehalte der Behälter 1 und 2 in den Rührbehälter 4 fließen, tropfen oder streuen. Nach Vermischen gelangt das erhaltene Suspensionsgemisch aus dem Rührbehälter 4 durch das Überlaufrohr 5 in den Sammelbehälter 6, Hier wird das Reaktionsgemisch so lange gerührt, bis die gewünschte Menge der Partikelsuspension erhalten wird· Das Suspensionsgemisch wird 30 Minuten lang mit einer Geschwindigkeit von 6000 rpm zentrifugiert, danach dekantiert. Im Falle unmittelbarer Verwendung nimmt man den biologisch aktiven Stoff in physiologischer Kochsalzlösung auf, in dieser Lösung suspendiert man den erhaltenen Niederschlag, Die Suspension wird homogenisiert undThe method is performed in the device according to Pig, FIG. In the container 1, the solution of lecithin and cholesterol in abs, alcohol, filled in the container 2, an aqueous electrolyte solution having a pH of 2 to 10 After the agitator 3 was set in motion, the contents of the container. 1 and 2 flow, drop or scatter in the stirred tank 4. After mixing, the suspension mixture obtained passes from the stirred tank 4 through the overflow pipe 5 into the collecting tank 6, where the reaction mixture is stirred until the desired amount of the particle suspension is obtained. The suspension mixture is centrifuged for 30 minutes at a speed of 6000 rpm. then decanted. In the case of immediate use, the biologically active substance is taken up in physiological saline solution, in this solution the resulting precipitate is suspended, the suspension is homogenized and
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mit Ultraschall behandelt. Palls die Verwendung erst später erfolgt, gibt man den in destilliertem Wasser oder in einer wäßrigen Elektrolytlösung mit einem pH-Wert von 2 bis 10 vorgelegten biologisch aktiven Stoff dem niederschlag zu. Das erhaltene Reaktionsgemisch wird völlig homogenisiert mit Ultraschall behandelt, 5 bis 10 Minuten lang bei 37 0C inkubiert, dosiert und lyophilisiert. Das lyophilisierte Produkt wird dann strahlensterilisiert.treated with ultrasound. Palls the use only later, one adds to the precipitated in distilled water or in an aqueous electrolyte solution having a pH of 2 to 10 presented biologically active substance. The resulting reaction mixture is completely homogenized with ultrasound treatment, incubated for 5 to 10 minutes at 37 0 C, dosed and lyophilized. The lyophilized product is then radiation sterilized.
Die nach der Verfahrensvariante b) hergestellten Partikeln können bei biologisch aktiven Stoffen als Adjuvanten angewandt v/erden.The particles produced according to process variant b) can be used as an adjuvant in the case of biologically active substances.
Lebendige und getötete Hepatitis-Viren werden zu Partikeln gebunden, indem man einer lyophilisierten PartikeleinheitLiving and killed hepatitis viruses are bound to particles by passing a lyophilized particle unit
(hergestellt nach der Verfahrensvariante b)) 10 Viruspartikeln zugibt. Durch die Verwendung des so erhaltenen Immunisierungsstoffes erreicht man höheren Antikörpertiter, als die der Literatur.(prepared according to process variant b)) 10 virus particles added. By using the immunization substance thus obtained to achieve higher antibody titers, than those of the literature.
Protektive Wirkung durch inaktivierte Myxomatosis-Virus Vakzinen Protective effect by inactivated myxomatosis virus vaccines
In der Veterinärmedizin war zur Immunisierung gegen diesen Virus nur der Impfstoff, welcher mit lebendigem Virus hergestellt wurde, protektiv. Hasen werden mit inaktivierter Myxomatosis-Vakzine geimpft, worin die Hummer der Virus-In veterinary medicine, only the vaccine produced with live virus was immunogenic against this virus. Rabbits are vaccinated with inactivated myxomatosis vaccine, in which the lobsters of the virus
partikeln der Infektion 10 /ml beträgt. Die Hasen werdenparticles of infection is 10 / ml. The rabbits will be
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mit 1 ml der Vakzine, welche zu 1 Partikeleinheit (Verfahrensvariante b)) gebunden ist, subcutan geimpft. Der Kontrollinfektion gemäß, welche an dem 30. Tag nach der Impfung erfolgte, gibt die so hergestellte und verwendete Vakzine auch gegen die lebendigen Viren der Kontrollinfektion von 100 Infektionsdosen einen völligen Schutz.with 1 ml of the vaccine, which is bound to 1 particle unit (process variant b)), subcutaneously vaccinated. According to the control infection, which took place on the 30th day after the vaccination, the vaccine thus prepared and used also gives complete protection against the live viruses of the control infection of 100 infection doses.
Falls die Partikeleinheit nach der Verfahrensvariante a) hergestellt wird, schützt der erreichbare Antikörpertiter bei gleicher Immunisierung gegen 10 Infektionsdosen.If the particle unit according to process variant a) is prepared, the achievable antibody titer with the same immunization protects against 10 infection doses.
Aus den freigelegten Zellen des Stammes Treponema pallidum Budapest (10 /ml) wird Antigen durch Ultraschallbehandlung hergestellt. Das so erhaltene Antigen wird zu den lyophilisierten Partikeln gebunden, worin 2 lyophilisierte Partikeleinheiten pro 1 ml Antigen angewandt werden. Die Tiere werden in jeder Woche insgesamt sechsmal geimpft, wobei der Gehalt des Antigens 1 ml beträgt,und die Impfungen werden intramuscular, intravenös und subcutan durchgeführt. In den Tieren konnte ein hoher spezifischerAntikörpertiter und Ghamker-Immunität erreicht werden.From the exposed cells of the strain Treponema pallidum Budapest (10 / ml) antigen is prepared by sonication. The antigen thus obtained is bound to the lyophilized particles wherein 2 lyophilized particle units per 1 ml of antigen are applied. The animals are vaccinated a total of six times each week with the content of the antigen being 1 ml, and the vaccinations are carried out intramuscularly, intravenously and subcutaneously. In the animals a high specific antibody titer and Ghamker immunity could be achieved.
Ттттпітті sierung gegen TetanusТтттпітті sation against tetanus
a) Zu einer Partikeleinheit (Verfahrensvariante b)) wird die Einheitsmenge des Tetanus-Toxoids gebunden und das erhaltene Material lyophilisiert. Vor der Verwendung wird das Material in physiologischer Kochsalzlösung resuspendiert, worin die Menge der physiologischen Koch-a) To a particle unit (process variant b)), the unit amount of the tetanus toxoid is bound and the resulting material is lyophilized. Prior to use, the material is resuspended in physiological saline, wherein the amount of physiological cooking
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salzlösung dem Volumen der Suspension vor der Lyophilisierung entspricht. Die Wirksamkeit wurde an Meerschweinchen nach den amerikanischen, britischen und ungarischen Arzneibüchern (United States Pharmacopeae, British Pharmacopeae, Pharmacopea Hungaricae) untersucht. Aufgrund der Untersuchungen ist die spezifische Immunogenität des Stoffes gegen Tetanus größer als die in den Vorschriften angegebenen Werte des Immuneffektes. Die Untersuchungen wurden auch mit den Impfstoffen, welche nach den Verfahrensvarianten a) und c) hergestellt wurden, durchgeführt. Die Ergebnisse sind mit den oben angegebenen gleich.salt solution corresponds to the volume of the suspension before lyophilization. The efficacy was tested on guinea pigs according to the United States, British and Hungarian pharmacopoeias (United States Pharmacopoeia, British Pharmacopoeia, Pharmacopea Hungaricae). On the basis of the investigations, the specific immunogenicity of the substance against tetanus is greater than the values of the immune effect stated in the instructions. The investigations were also carried out with the vaccines prepared according to process variants a) and c). The results are the same as those given above.
b) Zu einer Partikeleinheit (Verfahrensvariante b)) werden verschiedene Mengen des Tetanus-Toxoids gebunden und das erhaltene Material lyophilisiert. Nach Lyophilisierung wird das Material in physiologischer Kochsalzlösung aufgenommen (resuspendiert), worin die Menge der physiologischen Kochsalzlösung dem Volumen der Suspension vor der LyophiIisierung entspricht. Die Wirksamkeit wurde an Meerschweinchen nach den im Beispiel 3 erwähnten Arzneibüchern untersucht. Die spezifische Antigenität übersteigt den in den Vorschriften angegebenen Wert, und die Antigenität entspricht dem Dosisantwortgesetz.b) Various amounts of the tetanus toxoid are bound to a particle unit (process variant b)) and the resulting material is lyophilized. After lyophilization, the material is taken up in saline (resuspended), wherein the amount of saline corresponds to the volume of the suspension before lyophilization. The efficacy was tested on guinea pigs according to the pharmacopoeias mentioned in Example 3. The specific antigenicity exceeds the value given in the instructions, and the antigenicity corresponds to the dose response law.
c) Zu verschiedenen Mengen der Partikeln (Verfahrensvariante b)) werden gleiche Mengen an Tetanus-Toxoid gebunden. Uach Lyophilisierung wird das Material in physiologischer Kochsalzlösung auf das Volumen, welches dem Volumen der Suspension vor der Lyophilisierung entspricht, resuspendiert. Die Untersuchungen wurden an Meerschweinchen gemäß den im Beispiel 3 erwähnten Arzneibüchern durchgeführt. Die Immunantwort übersteigt in allen Fällen den in den erwähnten Arzneibüchern angegebenen Antigenitätswerten.c) Different amounts of the particles (process variant b)) are bound to equal amounts of tetanus toxoid. After lyophilization, the material is resuspended in physiological saline to the volume corresponding to the volume of the suspension prior to lyophilization. The investigations were carried out on guinea pigs according to the pharmacopoeias mentioned in Example 3. The immune response in all cases exceeds the antigenicity values stated in the pharmacopoeias mentioned.
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Zu einer Partikeleinheit (Verfahrensvariante b)) werden Diphterie- und bakterielle Antigene kombiniert gebunden. Nach Lyophilisierung wird das Material in physiologischer Kochsalzlösung auf das Volumen, welches dem Volumen der Suspension vor der Lyophilisierung entspricht, resuspendiert· Danach werden die Wirksamkeiten der Antigene nach den im Beispiel 3 erwähnten Arzneibüchern an Meerschweinchen und an weißen Mäusen bestimmt. Das Maß der Antigenität übersteigt die in den Arzneibüchern angegebenen Werte.To a particle unit (process variant b)), diphtheria and bacterial antigens are combined combined. After lyophilization, the material is resuspended in physiological saline to the volume corresponding to the volume of the suspension prior to lyophilization. Thereafter, the activities of the antigens are determined according to the pharmacopoeias on guinea pigs and white mice mentioned in Example 3. The degree of antigenicity exceeds the values given in the pharmacopoeias.
Zur Herstellung von Antihormonen werden Prüfungen mit Human-Choriogonadotropin (HCG) durchgeführt. Zur Zeit wird die allbekannte schlechte immunogene Adjuvierung mit dem öligen Freund-Adjuvant durchgeführt.For the production of antihormones tests are performed with human choriogonadotropin (HCG). At present, the well-known poor immunogenic adjuvantation with the oily friend adjuvant is carried out.
Erfindungsgemäß wird 3000 Ae/mg HCG zu einer Partikeleinheit (Verfahrensvariante b)) gebunden. Mit dem so erhaltenen Impfstoff werden NZW-Hasen mit 2,5 kg Körpergewicht in jeden zwei Wochen subcutan geimpft. Der Antikörpertiter wird nach der 7· Impfung bestimmt und ist in jedem Falle größer als die der Kontrollgruppe.According to the invention 3000 Ae / mg HCG is bound to a particle unit (process variant b)). The vaccine thus obtained is used to vaccinate 2.5 kg NZW rabbits subcutaneously every two weeks. The antibody titer is determined after the 7th vaccination and is in any case greater than that of the control group.
Die Impfung der Kontrollgruppe wird auch mit der gleichen Menge von HCG, welches mit Freund-Adjuvant stimuliert wurde, durchgeführt. Bei der Kontrollgruppe, welche mit dem Freund-Adjuvant geimpft wurde, treten ungewünschte Nebenwirkungen auf, doch findet man keine Nebenwirkungen bei der Gruppe,Vaccination of the control group is also performed with the same amount of HCG stimulated with Freund adjuvant. In the control group vaccinated with the Freund adjuvant, undesirable side effects occur but no side effects are found in the group,
25. 6. 1981 AP A 61 К / 227 326 58 6SO 18 - 15 -25. 6. 1981 AP A 61 К / 227 326 58 6SO 18 - 15 -
welche mit den erfindungsgemäßen Partikeln geimpft wurde. Nach der oben beschriebenen langen Immunisierungsperiode werden die Hasen verblutet und seziert. Nach der mikroskopischen und histologischen Prüfung treten bei der Niere, der Leber und der Lunge keine pathologischen Änderungen auf.which was inoculated with the particles of the invention. After the long immunization period described above, the rabbits are bled and dissected. After microscopic and histological examination, no pathological changes occur in the kidney, the liver and the lungs.
Herstellung von zu den Partikeln aus lipoidlöslichen Stoffen gebundenen gamma-Globulin Reagens Preparation of gamma-globulin reagent bound to the particles of lipid-soluble substances
2,5 ml 0,25 %±ge gamma-Globulin-Lösung in einem Puffer mit einem pH-Wert von 6 und die abs. alkoholische Lösung der lipoidlöslichen Stoffe, welche 0,01 bis 0,6 % Eilecithin und 0,1 bis 2 % Cholesterin enthält, werden nach der Verfahrensvariante a) vermischt. Der erhaltene niederschlag wird in 5 1 bei der Verdünnung des Blutserums üblicher physiologischer Elektrolytlösung vorgelegt, in einem Turmix, danach mit Ultraschall behandelt.2.5 ml of 0.25 % gamma globulin solution in a pH 6 buffer and the abs. alcoholic solution of the lipid-soluble substances, which contains 0.01 to 0.6 % egg lecithin and 0.1 to 2 % cholesterol, are mixed according to process variant a). The resulting precipitate is presented in 5 1 in the dilution of the blood serum usual physiological electrolyte solution, in a Turmix, then treated with ultrasound.
Verwendung des erfindungsgemäß hergestellten gamma-Globulin Reagenses zur quantitativen Bestimmung von Rheumatoid Arthritis Use of the gamma-globulin reagent according to the invention for the quantitative determination of rheumatoid arthritis
In Rheumatoid Arthritis sind Immunkomplexe anwesend, welche mit den normalen menschlichen Immunoglobulinen in Reaktion treten. Ihr Nachweis und die Erkennung der Krankheit begründen sich auf dieser Tatsache, Sie können durch verschiedene Reaktionen, z. B. durch Verwendung von Latexpartikeln oder durch die empfindliche WAALER-ROSE Reaktion sichtbar gemacht werden.In rheumatoid arthritis, immune complexes are present which react with the normal human immunoglobulins. Their detection and recognition of the disease are based on this fact, they can be confirmed by various reactions, eg. B. be visualized by using latex particles or by the sensitive WAALER-ROSE reaction.
Das Latexträgersystem wurde früher beschrieben. Die WAALER-ROSE Reaktion ist eine passive Hemaglutinations-The latex carrier system was described earlier. The WAALER-ROSE reaction is a passive hemagglutination
25· 6. 1981 AP A 61 К / 227 326 58 680 18 - 16 -25 · 6. 1981 AP A 61 К / 227 326 58 680 18 - 16 -
methode, ihre Durchführung beansprucht viel Zeit.method, their implementation takes a lot of time.
Die Blutseren der zu untersuchenden Menschen werden 30 Minuten lang bei 56 0C wärmebehandelt und bis zur Verwendung bei +4 0G gelagert. Man arbeitet möglicherweise mit frischen Blutseren, welche höchstens eine Woche "alt" sind.The blood serum of the people to be tested are heat-treated for 30 minutes at 56 0 C and stored until use at +4 0 G. You may be working with fresh blood serums that are at most one week old.
Auf eine bei der Agglutination der Bakterien übliche Glasplatte wird je ein Tropfen (0,5 ml) des zu untersuchenden Blutserums in physiologischer Kochsalzlösung in verschiedenen Konzentrationen aufgebracht. Zu diesen verdünnten Blutseren werden je 0,01 ml des erfindungsgemäß hergestellten gamma-Globulin Reagenses zugegeben.On a common glass plate in the agglutination of the bacteria, one drop (0.5 ml) of the blood serum to be examined in physiological saline solution is applied in different concentrations. 0.01 ml of the gamma globulin reagent prepared according to the invention is added to each of these diluted blood sera.
nachdem das Reagens dem Blutserum zugegeben wurde, wird der Ablauf der Reaktion, die Agglutination gemessen. Die Reagenzien werden so bald wie möglich den verdünnten Blutserumstropfen zugegeben. Unter der Bewegung der Platte vermischt man die zwei Substanzen mit einem Glasstab. Die Auswertung der Reaktion erfolgt unter Verwendung einer Lupe durch Beobachtung mit Augen. Die Stärke der Agglutinationen wird von 0 bis ++++ geteilt. 0 bedeutet, daß die Agglutination während 5 Minuten nicht auftritt. Die positive Reaktion wird mit den Kreuzen bezeichnet und ist umso stärker, je höher die Anzahl der Kreuze ist. Die Bezeichnung ++++ bedeutet, daß starke Aggregate entstehen und unter den NiederSchlagsteilchen die Flüssigkeit sauber ist. Zur Kontrolle dient ein Tropfen der zur Verdünnung des Blutserums angewandten physiologischen Kochsalzlösung, welchem 0,01 ml des oben erwähnten Reagenses zugegeben wurde. In diesem Falle erfolgt keine Agglutionation während der Prüfzeit von 5 Minuten.After the reagent has been added to the blood serum, the course of the reaction, the agglutination is measured. The reagents are added to the diluted blood serum drop as soon as possible. Under the movement of the plate, the two substances are mixed with a glass rod. The evaluation of the reaction is carried out using a magnifying glass by observation with eyes. The strength of the agglutinations is shared from 0 to ++++. 0 means that agglutination does not occur for 5 minutes. The positive reaction is called by the crosses and is the stronger the higher the number of crosses. The designation ++++ means that strong aggregates are formed and that the liquid is clean under the low-impact particles. A drop of the physiological saline solution used to dilute the blood serum, to which 0.01 ml of the above-mentioned reagent has been added, is used as a control. In this case, no agglutination takes place during the test period of 5 minutes.
Die Bildung der Mikroaggregate kann auch mit einem Mikroskop beobachtet werden. In diesen Fällen wird die Reaktion auf einem Objektträger durchgeführt. Die Beobachtung wirdThe formation of microaggregates can also be observed with a microscope. In these cases, the reaction is performed on a slide. The observation will
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mit einem 40 χ Objektiv und einem 7 x Okular durchgeführt.performed with a 40 χ lens and a 7 x eyepiece.
Palis nur die Positivität des zu untersuchenden Blutserums in Präge kommt, wird die Reaktion mit konzentrierten Blutseren - ohne Verdünnung - durchgeführt. Die Reaktion wird nach der oben beschriebenen durchgeführt und ist positiv, wenn die Agglutination während einer Minute erfolgt, und ist negativ, wenn die Agglutination während dieser Zeit nicht vorkommt.Palis only the positivity of the blood serum to be examined comes into mint, the reaction with concentrated blood sera - without dilution - carried out. The reaction is carried out as described above and is positive when agglutination occurs for one minute and is negative when agglutination does not occur during this time.
Aufgrund der Ergebnisse (Tabelle 1) ist die erfindungsgemäße Komposition zur Durchführung von schneller Reihenuntersuchung geeignet.Based on the results (Table 1), the composition according to the invention is suitable for carrying out rapid screening.
Der Titer des aus lipoidlösuchen Partikeln und zu diesen gebundenen gamma-Globulin hergestellten Reagenses (GLT)The titer of the reagent (GLT) prepared from lipoid dissolving particles and gamma-globulin bound thereto
Der Titer der ?/AALER-ROSE Reaktion (WRT)The titer of the? / AALER-ROSE reaction (WRT)
Verdünnungdilution
Blutserums 0, 32, 64, 128, 256, 512, 1024,Blood serum 0, 32, 64, 128, 256, 512, 1024,
Konzentriert +Concentrated +
2_ 4-4.4. 4.4-4.4. 4.4.4.4- 4—1.4.4. TTT tTTT TtTT 1 I I I2_ 4-4.4. 4.4-4.4. 4.4.4.4- 4-1.4.4. TTT tTTT TtTT 1 I I I
1616
3232
6464
128128
25. 6. 1981 AP A 61 К / 227 326 58 680 18 - 18 -25. 6. 1981 AP A 61 К / 227 326 58 680 18 - 18 -
2,7 mg von aetoxyziertem Hystamin (p-Amino-benzo-azohystamin) wird zur 2 Partikeleinheit des lyophilisierten Trägers (Verfahrensvariante b)) gebunden,und mit diesem Stoff werden Hasen an jedem zweiten Tag immunisiert« Hach der 20· Impfung beobachtet man einen hohen Antikörpertiter des Antihystamins.2.7 mg of aetoxyzed hystamine (p-amino-benzo-azohystamine) is bound to the 2 particle unit of the lyophilized carrier (process variant b)), and this substance is used to immunize rabbits every other day. After the vaccination, one is observed high antibody titers of the antihystamine.
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