DD151033A5

DD151033A5 - PERFUSION FLUID AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF

Info

Publication number: DD151033A5
Application number: DD21866280A
Authority: DD
Inventors: Kazumasa Yokoyama; Masakazu Iwai; Hiroyuki Okamoto; Noboru Yamada
Original assignee: Green Cross Corp
Priority date: 1980-01-28
Filing date: 1980-01-28
Publication date: 1981-09-30

Abstract

Die Erfindung betrifft eine Perfusionsfluessigkeit zur Konservierung von zur Transplantation bestimmter Organen, wie Nieren, ein Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ein Verfahren zur Konservierung von zur Transplantation bestimmten Organen unter Verwendung dieser Perfusionsfluessigkeit. Die Perfusionsfluessigkeit besteht aus einer Ringer-Loesung mit einer Kaliumionenkonzentration von 8 bis 20 meq/l, einer wirksamen Menge geloestem Albumin, einer in der Loesung emulgierten fluessigen Perfluorkohlenstoffverbindung sowie einem Emulgator.The invention relates to a perfusion fluid for the preservation of organs intended for transplantation, such as kidneys, a process for their preparation and a process for the preservation of organs intended for transplantation using this perfusion fluid. The perfusion fluid consists of a Ringer's solution having a potassium ion concentration of 8 to 20 meq / L, an effective amount of dissolved albumin, a solution of perfluorocarbon liquid emulsified in the solution and an emulsifier.

Description

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Title of the invention:

Perfusionsflüssigkeit, Verfahren zu ihrer Herstellung und Verfahren zur Konservierung von zur Transplantation bestimmten OrganenPerfusion fluid, process for its preparation and method for preserving organs intended for transplantation

Anwendungsgebiet der Erfindung: Field of application of the invention :

Die Anwendung der vorliegenden Erfindung erfolgt auf dem Gebiet der Medizin zur Konservierung von zur Transplantation bestimmten Organen, wie Nieren. ·The application of the present invention is in the field of medicine for the preservation of organs intended for transplantation, such as kidneys. ·

Characteristic of the known technical solutions:

In den vergangenen Jahren wurden erhebliche Fortschritte bei der Konservierung von zur Transplantation bestimmten Organen gemacht. Insbesondere die Fortschritte bei der KonservierungSignificant progress has been made in recent years in the preservation of organs for transplantation. In particular, the progress in conservation

^Γ 2 1868 2 ^Γ 2 1868 2

von Nieren hat die Verwendung von Leichennieren zur Transplantation gefördert. Diese Fortschritte beruhen in erheblichem Ausmaß auf der Verbesserung der Perfusionsflüssigkeiten. Beispielsweise werden die klinischen Methoden zur Konservierung von Transplantationsnieren in zwei Kategorien eingeteilt, nämlich die hypothermische Lagerung (durch Immersion), die in Lancet, 2, 1219 - 1222 (1969), beschrieben ist sowie die hypothermische kontinuierliche Perfusion, die in Lancet, 2,Kidney has promoted the use of dead kidney for transplantation. These advances are based to a considerable extent on the improvement of perfusion fluids. For example, the clinical methods for preserving transplant kidneys are classified into two categories, hypothermic storage (by immersion) described in Lancet, 2, 1219-1222 (1969) and hypothermic continuous perfusion described in Lancet, 2, supra;

werden 536 (1967)j beschrieben ist. In der Praxis/das erstgenannte Verfahren für die kurzzeitige Konservierung und das letztgenannte Verfahren für die langzeitige Konservierung verwendet. Mit der weiteren Propagierung der Transplantation von Leichennieren wird die langfristige Konservierung, d.h. die Konservierung durch Perfusion an Bedeutung gewinnen.are described 536 (1967) j. In practice / the former method for short-term preservation and the latter method used for long-term preservation. With the further propagation of kidney kidney transplantation, long-term preservation, i. Conservation by perfusion gain in importance.

Da der größte Teil der Nieren von Spendern stammt, deren Todesursache Unfälle waren, sind zwischen dem Zeitpunkt der Verfügbarkeit einer Leichenniere und dem Zeitpunkt der Transplantation verschiedene Stufen erforderlich, nämlich u.a. Bestimmung der Histokompatibilität zwischen der Leichenniere und dem Patienten, Transport derSince most of the kidneys come from donors whose cause of death was accidents, several stages are required between the time of the availability of a dead kidney and the time of transplantation, namely, among others. Determination of histocompatibility between the coronary kidney and the patient, transport of the

Spenderniere und die Vorbereitungen zur Transplantation. Aus diesen Gründen ist es erforderlich, die Spenderniere solange wie möglich zu konservieren. Im Rahmen der Untersuchungen über die Transplantation von Leichennieren waren zahlreiche Versuche bisher darauf gerichtet, die Leichenniere über einen langen Zeitraum zu konservieren. Eines der Hauptziele dieser Versuche ist die Entwicklung und Verbesserung der Perfusionsflüssigkeiten.Donor kidney and preparations for transplantation. For these reasons, it is necessary to conserve the donor kidney as long as possible. In the context of studies on the transplantation of corpse kidneys, numerous attempts have so far been directed at conserving the corpse kidneys over a long period of time. One of the main goals of these experiments is the development and improvement of perfusion fluids.

Die sich immer mehr verbreitende klinische Verwendung der hypothermischen kontinuierlichen Perfusion nahm ihren Ausgang von den Forschungsarbeiten von Beizer et al., Lancet 536 (1967) . Diesen Forschern gelang es, eine Hundeniere 72 Stunden durch Verwendung eines von Fibrinogen möglichst freien Plasmas als Perfusionsflüssigkeit zu konservieren. Zu diesem-The increasing clinical use of hypothermic continuous perfusion has been initiated by the research of Beizer et al., Lancet 536 (1967). These researchers succeeded in preserving a dog kidney as a perfusion fluid for 72 hours by using a plasma that was as free as possible of fibrinogen. For this

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^Γ 2 1866 2 ^Γ 2 1866 2

Zweck wurde ein kryopräzipitiertes Plasma gefroren und geschmolzen. Seit der Veröffentlichung dieser Arbeit wurde im wesentlichen das kryoprcUipitierte Plasma als Perfusionsflüssigkeit für Nieren verwendetPurpose, a cryoprecipitated plasma was frozen and melted. Since the publication of this work, essentially cryoprecipitated plasma has been used as a kidney perfusion fluid

. .. - , .. -

Im Jahre 1974 haben Toledo-Pereyra et al. Surg. Gynecol. Obstet, Bd. 138 (1974), S. 901 - 905, eine neue Perfusionsflüssigkeit auf der Basis eines mit Kieselgel behandelten kryopräzipitierten Plasmas entwickelt, das frei von ß-Lipoprotein des Fibrinogens ist, das im herkömmlichen l^ryopracipitierten Plasma noch vorhanden ist, und bei.dem der Anteil der unlös-. liehen Fettfraktion, d.h. der Triglyceride, auf 1/3 vermindert ist. Die Verwendung des herkömmlichen kryopräzipitierten Plasmas hat das erhebliche Risiko der Bildung von Embolie während der Perfusion, die durch restliches Fibrinogen, Lipoproteine oder neutrale Fettkügelchen hervorgerufen wird. Dieses Risiko wird bei Verwendung eines kryopräzipitierten Plasmas stark vermindert, das mit Kieselgel behandelt ist, wie es von Toledo-Pereyra et al. entwickelt wurde. Dieses kryopräzipitierte Plasma hat jedoch immer noch verschiedene Nachteile. Zunächst ist das Herstellungsverfahren noch nicht vollständig befriedigend und die Zusammensetzung des erhaltenen Plasmas unterliegt Schwankungen. Es ist somit schwierig, Präparate mit konstantem Proteingehalt und konstanter Elektrolytzusammensetzung zu erhalten. Ferner besteht noch die Gefahr einer Fettembolie während der Perfusion aufgrund unvollständiger Abtrennung der unlöslichen Fettfraktion. "Zur Verminderung dieser Risiken ist es erforderlich, einen teuren Membranoxygenator zu verwenden. Ein wichtiges und entscheidendes ProblemIn 1974, Toledo-Pereyra et al. Surg. Gynecol. Obstet, Vol. 138 (1974), p. 901-905, developed a new perfusion fluid based on a silica gel-treated cryoprecipitated plasma which is free of β-lipoprotein of the fibrinogen which is still present in conventional Lyopracipitated plasma, and bei.dem the proportion of insoluble. lent fat fraction, i. triglycerides, reduced to 1/3. The use of conventional cryoprecipitated plasma has the significant risk of producing embolism during perfusion caused by residual fibrinogen, lipoproteins or neutral fat globules. This risk is greatly reduced when using a cryoprecipitated plasma treated with silica gel as described by Toledo-Pereyra et al. was developed. However, this cryoprecipitated plasma still has several disadvantages. First, the manufacturing process is not yet completely satisfactory and the composition of the resulting plasma is subject to variations. It is thus difficult to obtain preparations of constant protein content and constant electrolyte composition. Furthermore, there is still the risk of fat embolism during perfusion due to incomplete separation of the insoluble fat fraction. "To reduce these risks, it is necessary to use an expensive membrane oxygenator - an important and crucial problem

ist ferner eine ausreichende Inaktivierungsbe-is also sufficient inactivation

handlung gegen Hepatitisvirus. . action against hepatitis virus. ,

. Obwohl das, Although that

kryopräzipitierte Plasma eine ausgezeichnete Perfusionsflüssigkeit zur Konservierung von Nieren darstellt, hat sie dennoch mehrere Nachteile, wie sie vorstehend erwähnt wurden.Cryoprecipitated plasma is an excellent perfusion fluid for the preservation of kidneys, but it still has several disadvantages, as mentioned above.

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2 1866 2 - 4 -2 1866 2 - 4 -

Zur Überwindung der vorstehend beschriebenen Schwierigkeiten bei der Verwendung von kryopräzipitiertem Plasma wurde versucht, eine Albuminlösung als Perfusionsflüssigkeit zu verwenden. Im Tierversuch war diese Flüssigkeit erfolgreich.In order to overcome the above-described difficulties in the use of cryoprecipitated plasma, it has been attempted to use an albumin solution as a perfusion fluid. In animal experiments, this liquid was successful.

Grundman et al., Transpl., Bd. 17 (1974), S. 299 - 305/ perfundierten eine Hundeniere mit einer 6prozentigen Albuminlösung und konnten auf diese Weise die Niere während 96 Stunden konservieren. Ihre Perfusionsflüssigkeit bestand aus einer Krebs-Ringer-Lösung mit 6 Gewichtsprozent/Volumen humanem Albumin. Die 96 Stunden bei niedriger Temperatur perfundierte Hundeniere wurde autotransplantiert mit einer Erfolgsquote von über 80 %. Dies zeigt, daß die Albuminlösung eine ausgezeichnete Perfusionsflüssigkeit ist, die gegenüber dem kryopräzipi-Grundman et al., Transpl., Vol. 17 (1974), pp. 299-305 / perfused a dog kidney with a 6 percent albumin solution and thus was able to preserve the kidney for 96 hours. Their perfusion fluid consisted of a Krebs-Ringer solution containing 6% by weight / volume of human albumin. The dog kidney perfused for 96 hours at low temperature was autografted with a success rate of over 80%. This shows that the albumin solution is an excellent perfusion fluid which is superior to the cryoprecipitate.

tierten Plasma günstig abschneidetCheap plasma

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Die langzeitige Konservierung einer Niere erfordert eine Perfusionsflüssigkeit mit einem bestimmten osmotischen Druck bei niedrigen Temperaturen sowie einer entsprechenden Elektrolyt-Zusammensetzung und außerdem eine bestimmte Menge Sauerstoff.The long-term preservation of a kidney requires a perfusion fluid with a certain osmotic pressure at low temperatures and a corresponding electrolyte composition and also a certain amount of oxygen.

Bei der Konservierung bei niedrigen Temperaturen verbraucht die Niere erheblich weniger Sauerstoff als bei Raumtemperatur, doch ist eine Mihdestmenge an Sauerstoff erforderlich, um ihre Funktion beizubehalten. Nach den klassischen Untersuchungen von Levy, American Journal Physiology, Bd. 197 (1959),When conserved at low temperatures, the kidney consumes significantly less oxygen than at room temperature, but a minimum amount of oxygen is required to maintain its function. According to the classical studies of Levy, American Journal Physiology, Vol. 197 (1959),

S. 1111 - 1114, liegt der Sauerstoffverbrauch einer Niere bei 8 bis 10⁰C bei etwa 3 μΙ/g/Minute. Dies entspricht etwa 20 % des SauerstoffVerbrauchs bei Raumtemperatur. Dementsprechend ist es bei der Konservierung einer Niere allgemein üblich, die Niere mit einer Perfusionsflüssigkeit zu perfundieren, und gleichzeitig Sauerstoff einzuleiten.S. 1111-1114, the oxygen consumption of a kidney at 8 to 10 ⁰ C is about 3 μΙ / g / minute. This corresponds to about 20% of the oxygen consumption at room temperature. Accordingly, in the preservation of a kidney, it is common practice to perfuse the kidney with a perfusion fluid and simultaneously introduce oxygen.

Gesättigte Perfluorkohlenstoffverbindungen (nachstehend kurz mit PFC bezeichnet) sind Flüssigkeiten, die eine beträchtliche Menge Sauerstoff aufnehmen können und in Form einer Emul- ^⁵ sion als Sauerstoffträger wirken. Diese Eigenschaften werden bei der Entwicklung von künstlichem Blut ausgenützt. Die PFC-Saturated perfluorocarbon compounds (hereinafter referred to briefly as PFC) are liquids that can accommodate a substantial amount of oxygen and act in the form of an emul- sion ^ ⁵ as an oxygen carrier. These properties are exploited in the development of artificial blood. The PFC

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r 2 1866 2r 2 1866 2

verbindungconnection

als Sauerstoff träger sowohl in vivo als auch in vitroas an oxygen carrier both in vivo and in vitro

(in einem extrakorporalen System, wie einem Perfusionssystem). Diese Eigenschaft läßt es möglich erscheinen, eine PFC-Emulsion vorteilhaft als Sauerstoffträger bei der Konservierung von Nieren einzusetzen. Außer der guten Aufnahme von Sauerstoff ist die ausgewählte Perfluorkohlenstoffverbindung • biologisch inert und verursacht keine Probleme einer direkten Gewebeschädigung. Bei ihrer Verwendung als Perfusionsflüssigkeit zur Konservierung von Nieren treten daher keine Probleme hinsichtlich der Toxizität auf.(in an extracorporeal system, such as a perfusion system). This feature makes it possible to use a PFC emulsion advantageously as an oxygen carrier in the preservation of kidneys. In addition to the good uptake of oxygen, the selected perfluorocarbon compound is biologically inert and does not cause any problems of direct tissue damage. When used as a perfusion fluid for kidney preservation, therefore, there are no toxicity issues.

Untersuchungen über die Konservierung von Nieren mittels einer pFC-Emulsion wurden von Nakaya et al., Proceedings of Symposium on Perfluorochemical Artificial Blood, Kyoto,Studies on the preservation of kidneys by means of a pFC emulsion have been published by Nakaya et al., Proceedings of Symposium on Perfluorochemical Artificial Blood, Kyoto,

*⁵1976, S. 187 - 201, begonnen. Diese Forscher untersuchten die Lebensfähigkeit von Nieren durch Perfusion von Kaninchennieren mit einer FC-43 Emulsion, d.h. einer Emulsion von Perfluortributylamin, während 9 Stunden bei Raumtemperatur. Im Vergleich mit einer Kontrollgruppe, die mit Ringer-Lösung perfundiert wurde, behielten die mit der FC-43-Emulsion perfundierten Nieren die Mitochondrienfunktion^und sie zeigten eine höhere Aktivität der glykolytische'n und gluconeogenetischen Schlüsselenzyme. Dies zeigt, daß der Sauerstofftransport durch FC-43 einen erheblichen Einfluß auf die Bei-* ⁵ 1976, pp. 187-201. These researchers examined kidney viability by perfusion of rabbit kidney with an FC-43 emulsion, ie, an emulsion of perfluorotributylamine, for 9 hours at room temperature. Compared with a control group perfused with Ringer's solution, the kidneys perfused with the FC-43 emulsion retained mitochondrial function and showed higher activity of the key glycolytic and gluconeogenetic enzymes. This shows that oxygen transport by FC-43 has a significant influence on the

*^f£)' behaltung der Funktionen der perfundierten Niere ausübt.* ^{f £)} 'maintenance of the functions of the perfused kidney.

Diese Forscher richteten jedoch ihre Forschungen im wesentlichen auf die biologischen Aspekte und nicht auf die Transplantation einer konservierten Niere. Bercowitz berichtete über die Ergebnisse einer Transplantation einer Hundeniere, die durch Perfusion mit einer PFC-Emulsion konserviert worden war; vgl. J. Surg. Res., Bd. 20^ (1976), S. 595 - 600. Er perfundierte eine Hundeniere während 24 Stunden bei niedrigen Temperaturen mit einer PFC-Emulsion, die Albumin und kryopräzipitiertes Plasma enthielt. Die konservierte Niere wurde sodann autotransplantiert und die Erfolgsquote untersucht. Die Erfolgsquote betrug in allen 5 Fällen 100 %, wäh-However, these researchers focused their research on the biological aspects rather than the transplantation of a conserved kidney. Bercowitz reported the results of transplanting a dog kidney preserved by perfusion with a PFC emulsion; see. J. Surg. Res., Vol. 20 (1976), p. 595-600. He perfused a dog kidney for 24 hours at low temperatures with a PFC emulsion containing albumin and cryoprecipitated plasma. The preserved kidney was then autografted and the success rate examined. The success rate was 100% in all 5 cases, while

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V rend bei acht Vergleichsversuchen die Erfolgsquote nur 62 % betrug, wobei die Perfusionsflüssigkeit keine FC-43 Emul- · sion enthielt.In eight comparative experiments, the success rate was only 62%, with the perfusion fluid containing no FC-43 emulsions.

Die vorstehend zitierten Arbeiten zeigten, daß die PFC-Emulsion eine wirksame Perfusionsflüssigkeit zur Konservierung einer Niere sowohl bei tiefen Temperaturen als auch bei Raumtemperatur darstellt. Die in den beiden Veröffentlichungen beschriebenen KonservierungsZeiträume sind jedoch nicht ausreichend lang, um die Konservierungsmethode in die Praxis zu übertragen. Insbesondere die Albumin enthaltende FC-43 Emulsion ist nicht genügend stabil, um ein normales Präparat herstellen zu können.The above cited work showed that the PFC emulsion is an effective perfusion fluid for preserving a kidney both at low temperatures and at room temperature. However, the conservation periods described in the two publications are not sufficiently long to put the preservation method into practice. In particular, the albumin-containing FC-43 emulsion is not sufficiently stable to produce a normal preparation can.

Ziel der Erfindung: . ' . Object of the invention:. '.

Ziel der Erfindung ist es, eine neue Perfusionsflüssigkeit zur Verfügung zu stellen, mit der zur Transplantation bestimmte Organe über einen längeren Zeitraum wirksam konserviert werden können.The aim of the invention is to provide a new perfusion fluid with which organs intended for transplantation can be effectively preserved over a longer period of time.

Darlegung des Wesens der Erfindung: . Presentation of the essence of the invention:.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, eine Perfusionsflüssigkeit zur Konservierung von zur Transplantation bestimmten Organen bereitzustellen, welche die Nachteile desThe invention has for its object to provide a perfusion fluid for preserving organs intended for transplantation, which has the disadvantages of

Standes der Technik überwindetThe state of the art overcomes

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Die Erfindung betrifft dementsprechend eine Perfusionsflüssigkeit zur Konservierung von zur Transplantation bestimmten Organen, bestehend aus einer Ringer-Lösung mit einer Kaliumionenkonzentration von .8 bis 20 meq/Liter und einer wirksamen Menge gelöstem Albumin, einer in der Lösung emulgierten flüssigen Perfluorkohlenstoffverbindung sowie einemAccordingly, the invention relates to a perfusion fluid for the preservation of organs intended for transplantation, consisting of a Ringer's solution having a potassium ion concentration of .8 to 20 meq / liter and an effective amount of dissolved albumin, a liquid perfluorocarbon compound emulsified in the solution and a

Emulgator, sowie ein Verfahren zur Konservierung von zur .:: Transplantation bestimmten Organen mittels der_Perfusions-L_ lösung. _jEmulsifier, as well as a method for preserving organs intended for. :: transplantation by means of the perfusion solution. _j

Γ 21 86628 21 8662

Die in der Perfusionsflüssigkeit der Erfindung verwendete Ringer-Lösung unterliegt keinen speziellen Beschränkungen.. Es kann eine übliche Ringer-Lösung oder eine modifizierte " Ringer-Lösung, beispielsweise eine nach Locke, Tyrode, Earle/ Hanks oder Krebs modifizierte Lösung sein. Erfindungsgemäß ist die Kaliumionenkonzentration der Ringer-Lösung, die üblicherweise 4 bis 6 meq/Liter beträgt, auf 8 bis 20, vorzugsweise 8 bis 15 meq/Liter, erhöht. Diese erhöhte Kaliumionenkonzentration wird deshalb verwendet, um die Konzentration näher an die Kaliumionenkonzentration in der extrazellulären Flüssigkeit zu bringen. Hierdurch ist es möglich, die Erfolgsquote bei der Transplantation eines Organs, insbesondere von Nieren, die längere Zeiträume durch Perfusion konserviert werden, erheblich zu steigern. Die erfindungsgemäß verwendete modifizierte Ringer-Lösung hat eine Osmolarität von 290 bis 300 m Osm/Liter und einen pH-Wert von 7,1 bis 7,7 bei 20⁰C. In der nachstehenden Tabelle I sind die Zusammensetzungen einiger typischer Ringer-Lösungen angegeben, die erfindungsgemäß verwendet werden können. Ferner ist die Zusammensetzung eines normalen Plasmas angegeben, das ein Prototyp einer gewöhnlichen Ringer-Lösung ist.The Ringer's solution used in the perfusion liquid of the invention is not particularly limited .. It may be a conventional Ringer's solution or a modified Ringer's solution, for example, a Locke, Tyrode, Earle / Hanks or Krebs modified solution Potassium ion concentration of the Ringer's solution, which is usually 4 to 6 meq / liter, increased to 8 to 20, preferably 8 to 15 meq / liter Therefore, this increased potassium ion concentration is used to increase the concentration closer to the potassium ion concentration in the extracellular fluid This makes it possible to considerably increase the success rate in the transplantation of an organ, in particular of kidneys, which are preserved for prolonged periods by perfusion.The modified Ringer solution used according to the invention has an osmolarity of 290 to 300 m osm./liter a pH of 7.1 to 7.7 at 20 ⁰ C. In the following Table I gives the compositions of some typical Ringer solutions which can be used in the present invention. Also indicated is the composition of a normal plasma which is a prototype of a standard Ringer's solution.

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2 18 6 62 18 6 6

Table I

Beispiele für die Elektrolytzusammensetzung modifizierter Ringer-Lösungen; Einheit = meq/LiterExamples of the Electrolyte Composition of Modified Ringer Solutions; Unit = meq / liter

ilodifizierte Ringer-Lösung j der Erfindung imodified ringers solution of the invention i 22 33 norma les Plasma \ inorma les plasma \ i Ion^^^-»^.Ion ^^^ - '^. 11 1H21H2 116116 142142 Na⁺ Na ⁺ 112112 88th 1010 55 K⁺ K ⁺ 1111 2 52 5 . 6, 6 22 Ca⁺⁺ Ca ⁺⁺ 77 103103 1515 103103 Cl"cl " 118118 2727 1010 •27• 27 HCO ~HCO ~ 33 22 • 101• 101 22 HPO₄"HPO ₄ " 22 66 SO₄-SO ₄ - 77 139139 Glucoseglucose 3333 55 55 Lactoselactose

Die Perfusionsflüssigkeit der Erfindung wird hergestellt durch Vermischen einer PFC-Emulsion in der modifizierten Ringer-Lösung und Zusatz von Albumin, so daß die Konzentrationen an PFC und Albumin bestimmte Werte erreichen.The perfusion fluid of the invention is prepared by mixing a PFC emulsion in the modified Ringer's solution and adding albumin so that the concentrations of PFC and albumin reach certain levels.

Die erfindungsgemäß verwendete PFC-Emulsion wird hergestellt aus einer flüssigen Perfluorkohlenstoffverbindung, die in der Lage ist, Sauerstoff zu absorbieren. Derartige Verfahren sind beispielsweise in den US-PSen 3 958 014, 3 911 138 und 3 962 439 sowie der DE-OS 2 63Ο 586 beschrieben. Hier ist beschrieben, daß stabile Emulsionen hergestellt werden können, die sich als künstliches Blut eignen, wenn man eineThe PFC emulsion used in the present invention is made of a liquid perfluorocarbon compound capable of absorbing oxygen. Such methods are described, for example, in US Pat. Nos. 3,958,014, 3,911,138 and 3,962,439 and DE-OS 2 635 586. Here it is described that stable emulsions can be prepared which are suitable as artificial blood, if one

r 2 18662 _ ₉ _ -ιr 2 18662 _ ₉ _ -ι

Perfluorkohlenstoffverbindung mit einem Phospholipid als Emulgator (US-PS 3 958 014), einem Phospholipid und einer C₀ „„-Fettsäure als Hilfsstoff (US-PS 3 962 439) oder mit einem Polyoxyäthylen-Polyoxypropylen-Copolymerisat mit einem Molekulargewicht von 2 000 bis 20 000 als nicht-ionischem Emulgator (US-PS 3 911 138) oder mit einem Polyoxyäthylenalkyläther oder Polyoxyalkylallyläther oder einer Kombination der vorstehend erwähnten Fettsäuren, nichtionogenen Emulgatoren und des vorstehend erwähnten EiIfsemulgators (DE-OS 2 630 589) emulgiert.Perfluorocarbon compound with a phospholipid as emulsifier (US-PS 3,958,014), a phospholipid and a C ₀ "" fatty acid as an adjuvant (US-PS 3,962,439) or with a polyoxyethylene-polyoxypropylene copolymer having a molecular weight of 2,000 to 20,000 emulsified as a non-ionic emulsifier (US Patent 3,911,138) or with a Polyoxyäthylenalkyläther or Polyoxyalkylallyläther or a combination of the aforementioned fatty acids, nonionic emulsifiers and the above-mentioned egg emulsifier (DE-OS 2,630,589).

Als Perfluorkohlenstoffverbindungen werden solche Verbindungen verwendet, die Organe oder Gewebe nicht schädigen. Es handelt sich um gesättigte Perfluorkohlenstoffverbindungen, die vorzugsweise 9 bis 12 Kohlenstoffatome im Molekül enthalten, von denen einige oder sämtliche mindestens einen gesättigten alicyclischen Ring, einen heterocyclischen Ring mit einem Stickstoff-Heteroatom und/oder Sauerstoff-Heteroatom bilden, oder der eine aliphatische tertiäre Aminogruppe zusammen mit einem Stickstoffatom oder eine aliphatische Ätherfunktion zusammen mit einem Sauerstoffatom oder -atomen aufweisen.Perfluorocarbon compounds are those compounds which do not harm organs or tissues. They are saturated perfluorocarbon compounds, preferably containing 9 to 12 carbon atoms in the molecule, some or all of which form at least one saturated alicyclic ring, a heterocyclic ring having a nitrogen heteroatom and / or oxygen heteroatom, or an aliphatic tertiary amino group together with a nitrogen atom or an aliphatic ether function together with an oxygen atom or atoms.

Die erste Gruppe der erfindungsgemäß verwendeten Perfluorkohlenstoffverbindungen sind Perfluoralkane, Perfluorcycloalkane und Perfluor-(alkylcycloalkane), beispielsweise Perfluor- (Cg_-12~alkane), wie Perfluordecan und Perfluordodecan, Perf luor-(C-, ,--alky !cyclohexane), wie Perfluor-(methylpropylcyclohexane), Perfluor-(buty!cyclohexane). Perfluor-(trimethylcyclohexane), Perfluor-(äthylpropy!cyclohexane) und Perfluor-(pentylcyclohexane), Perfluordecalin, Perfluor-(methyldecaline) und Perfluor-(dimethyldecaline).The first group of perfluorocarbon compounds used in this invention are perfluoroalkanes, perfluorocycloalkanes and perfluoro (alkylcycloalkanes), for example perfluoro- (Cg _-12 alkanes) as perfluorodecane and perfluorododecane, Perf luor- (C, - alky cyclohexanes!) As Perfluoro- (methylpropylcyclohexane), perfluoro (buty! Cyclohexane). Perfluoro- (trimethylcyclohexanes), perfluoro- (ethylpropylcyclohexanes) and perfluoro- (pentylcyclohexanes), perfluorodecalin, perfluoro- (methyldecalins) and perfluoro- (dimethyldecalins).

Eine zweite Gruppe sind die Perfluor-(alkyl-gesättigtenheterocyclischen Verbindungen), wie beispielsweise Perfluor-(alky!tetrahydropyrane), wie Perfluor-(butyltetrahydropyrane),A second group are the perfluoro (alkyl-saturated heterocyclic compounds), such as perfluoro (alkyltetrahydropyrans), such as perfluoro (butyltetrahydropyrans),

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r 2 1 8 SS 2 _ _1η _ πr 2 1 8 SS 2 _ _1η _ π

Perfluor-(penty!tetrahydropyrane) und Perfluor-(hexyltetrahydropyrane), Perfluoralky!tetrahydrofurane, wie Perfluor-(penty!tetrahydrofurane), Perfluor-(hexy!tetrahydrofurane). und Perfluor-(hepty!tetrahydrofurane), Perfluor-(N-alkylpiperidine),wie Perfluor-(N-pentylpiperidine), Perfluor-(N-hexylpiperidine) und Perfluor-(N-butylpiperidin) und Perfluor-(N-alkylmorpholine), wie Perfluor-(N-penty!morpholine) , Perfluor-(N-hexylmorpholine) und Perfluor-(N-heptylmorpholine).Perfluoro- (penty! Tetrahydropyrane) and perfluoro (hexyltetrahydropyrane), Perfluoralky! Tetrahydrofurane, such as perfluoro (penty! Tetrahydrofurane), perfluoro (hexy! Tetrahydrofurane). and perfluoro (hepty! tetrahydrofurans), perfluoro (N-alkylpiperidines), such as perfluoro (N-pentylpiperidines), perfluoro (N-hexylpiperidines) and perfluoro (N-butylpiperidine) and perfluoro (N-alkylmorpholines), such as perfluoro (N-penty! morpholines), perfluoro (N-hexylmorpholines) and perfluoro (N-heptylmorpholines).

Eine dritte Gruppe sind die Perfluor-(tert.-amine), wie beispielsweise Perfluor-(tributylamin), Perflucr-(diäthylhexylamin), Perfluor-(dipropylbutylamin) und Perfluor-(diäthylcyclohexylamin), und Perfluor-(dioxaalkane), nämlich Perfluor-(alkylenglykoldialkyläther), wie Perfluor-(3,8-dioxa-2,9-dimethyldecan) und Perfluor-(tetramethylenglykoldiisopropyläther), Perfluor-(3,7-dioxa-2,8-dimethylnonan) und Perfluor-(trimethylenglykoldiisopropyläther), Perfluor-(4,6-dioxa-5,5-dimethylnonan) und Perfluor-(isopropylenglykol-di-n-propyläther) .A third group is the perfluoro (tertiary amines), such as perfluoro- (tributylamine), perfluoro- (diethylhexylamine), perfluoro- (dipropylbutylamine) and perfluoro- (diethylcyclohexylamine), and perfluoro (dioxaalkanes), namely perfluoro- (alkylene glycol dialkyl ether) such as perfluoro (3,8-dioxa-2,9-dimethyldecane) and perfluoro (tetramethylene glycol diisopropyl ether), perfluoro (3,7-dioxa-2,8-dimethylnonane) and perfluoro (trimethylene glycol diisopropyl ether), perfluoro - (4, 6-dioxa-5,5-dimethylnonan) and perfluoro (isopropylene glycol di-n-propyl ether).

Die PFC-Emulsion in der modifizierten Ringer-Lösung hat eine Teilchengröße von 0,05 bis 0,3 Mikron, sie enthält 10 bis 50 Gewichtsprozent/Volumen PFC, 2,0 bis 5 Gewichtsprozent/ Volumen eines Emulgators und erforderlichenfalls 0,1 bis 1,0 Gewichtsprozent/Volumen eines Hilfsemulgators. Diese Emulsion läßt sich über längere Zeiträume stabil lagern.The PFC emulsion in the modified Ringer's solution has a particle size of 0.05 to 0.3 microns, containing 10 to 50 weight percent / volume of PFC, 2.0 to 5 weight percent / volume of emulsifier and, if necessary, 0.1 to 1 , 0% by weight / volume of an auxiliary emulsifier. This emulsion can be stably stored for long periods.

Die Perfusionsflüssigkeit der Erfindung wird folgendermaßen hergestellt:The perfusion fluid of the invention is prepared as follows:

Die PFC-Emulsion wird mit Rinderalbumin oder humanem Albumin und der modifizierten Ringer-Lösung derart vermischt, daß die erhaltene Flüssigkeit 7,5 bis 12,5 Gewichtsprozent/Volumen PFC und 1 bis 8 Gewichtsprozent/Volumen Albumin enthält.The PFC emulsion is mixed with bovine albumin or human albumin and the modified Ringer's solution such that the resulting liquid contains 7.5 to 12.5 weight percent / volume PFC and 1 to 8 weight percent / volume albumin.

Gegebenenfalls können der Emulsion noch Arzneistoffe, wie Procain-hydrochlorid, Heparin, Phenoxybenzamin, Insulin,Optionally, the emulsion may also contain drugs such as procaine hydrochloride, heparin, phenoxybenzamine, insulin,

L - ' · . ' . . ' . · - -JL - '·. '. , '. · - -J

^Γ 2 1866 2 -u- ^Ί ^Γ 2 1866 2 -u- ^Ί

Dexamethason, Methy!prednisolon, Antibiotika und/oder Urokinase, einverleibt werden. Die vorstehend angegebenen Grenzen der PFC-Konzentration stellen eine erfolgreiche Transplantation des perfundierten Organs sicher. Die Konzentration des Albumins in den vorstehend angegebenen Grenzen dient zur Einstellung des osmotischen Drucks, so daß die Perfusionsflüssigkeit physiologisch isoton gehalten werden kann. ' ........Dexamethasone, methyl prednisolone, antibiotics and / or urokinase. The above limits of PFC concentration ensure successful transplantation of the perfused organ. The concentration of albumin within the limits given above serves to adjust the osmotic pressure so that the perfusion fluid can be kept physiologically isotonic. '........

Die Konservierung eines zu transplantierenden Organs wird in herkömmlicher Weise unter Sauerstoffbegasung mit üblicher .Vorrichtungen durchgeführt. Beispielsweise werden - 400 ml einer 25 Gewichtsprozent/Volumen PFC-Emulsion mit 360 ml der modifizierten Ringer-Lösung und 240 ml einer 25 Gewichtsprozent/Volumen humanen Albuminlösung in der modifizierten Ringer-Lösung miteinander vermischt. Es wird 1 Liter einer Perfusionsflüssigkeit erhalten, die in ein Perfusat-Reservoir eingespeist und durch das zu transplantierende Organ perfundiert wird. Gleichzeitig wird mit einem Gasgemisch aus 95 bis 98 % Sauerstoff und 5 bis 2 % Kohlendioxid oder reinem Sauerstoff mittels eines üblichen Oxygenators begast. Die Perfusionsflüssigkeit durchströmt die Niere in einer Menge von 15 bis 50 ml pro g Niere und pro Stunde, und die Perfusionsflüssigkeit wird mit einem Gemisch aus 95 % Sauerstoff und 5 % Kohlendioxid in einer Strömungsgeschwindigkeit von 30 bis 1500 ml/Minute begast. Gegebenenfalls können die vorstehend aufgeführten Arzneistoffe der Perfusionsflüssigkeit zugesetzt werden. Bei der Perfusion zur Konservierung ist es auch möglich, die Perfusionsflüssigkeit mittels einer pulsierenden Pumpe im Kreislauf zu führen, wobei die Perfusionsflüssigkeit in die arterielle Seite des Reservoirs einer Vorrichtung zur Konservierung von Organen eingespeist wird. Bei der langdauernden Konservierung ist es erwünscht, die Perfusionsflüssigkeit entsprechend zu erneuern. Die Perfusionsflüssigkeit der Erfindung kann nicht nur zur Perfusion für Konservierungszwecke,The preservation of an organ to be transplanted is carried out in a conventional manner with oxygenation with conventional devices. For example, 400 ml of a 25% by weight / volume PFC emulsion are mixed together with 360 ml of the modified Ringer's solution and 240 ml of a 25% by weight / volume of human albumin solution in the modified Ringer's solution. It is obtained 1 liter of perfusion fluid, which is fed into a perfusate reservoir and perfused by the organ to be transplanted. At the same time, gas is gassed with a gas mixture of 95 to 98% oxygen and 5 to 2% carbon dioxide or pure oxygen by means of a conventional oxygenator. The perfusion fluid flows through the kidney in an amount of 15 to 50 ml per g of kidney and per hour, and the perfusion fluid is gassed with a mixture of 95% oxygen and 5% carbon dioxide at a flow rate of 30 to 1500 ml / minute. Optionally, the above listed drugs may be added to the perfusion fluid. During perfusion for preservation, it is also possible to recirculate the perfusion fluid by means of a pulsating pump, the perfusion fluid being fed into the arterial side of the reservoir of an organ preservation device. In the long-term preservation, it is desirable to renew the perfusion fluid accordingly. The perfusion fluid of the invention can be used not only for perfusion for preservation purposes,

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^Γ 2 1 8 66 2 - ₁₂ - ^Γ 2 1 8 66 2 - ₁₂ -

sondern auch während chirurgischer Eingriffe verwendetbut also used during surgical procedures

werden. ·become. ·

Mittels der Perfusionsflüssigkeit der Erfindung gelingt es, 5 Organe über einen langen Zeitraum bis zur Transplantation zu konservieren. Organe, die mit der Perfusionsflüssigkeit der Erfindung perfundiert und konserviert worden sind, ergeben eine sehr hohe Erfolgsquote bei der Transplantation.By means of the perfusion fluid of the invention it is possible to preserve 5 organs over a long period until transplantation. Organs perfused and preserved with the perfusion fluid of the invention give a very high transplant success rate.

Die Beispiele erläutern die Erfindung. Das Zeichen "% (W/V)" bedeutet die Gewichtsmenge pro 100 ml Flüssigkeit.The examples illustrate the invention. The sign "% (W / V)" means the amount by weight per 100 ml of liquid.

Ausführungsbeispiele: 15 Exemplary embodiments: 15

Herstellungsbeispiel 1Production Example 1

Herstellung der Emulsion der FluorkohlenstoffverbindungPreparation of the fluorocarbon compound emulsion

in 8 Liter einer modifizierten Ringer-Lösung (nachstehend beschrieben) werden 300 g eines Polyoxyäthylen-Polyoxypropylen-Copolymerisats vom Molekulargewicht 8 350 gelöst. Nach Zusatz von 3 kg Perfluordecalin wird das erhaltene Gemisch in einem Mischer verrührt. Es wird eine grobe Emulsion erhalten. Die grobe Emulsion wird in das Reservoir eines Emulgators vom Strahltyp (Monton-Gaulin-Homogenisator) eingespeist und dort im Kreislauf geführt. Die Emulgierung wird bei 35 _+ 5⁰C und einem Druck von 200 bis 500 kg/cm² durchgeführt. Die Konzentration des Perfluordecalins in der erhaltenen feinen Emulsion beträgt 31,3 % (W/V) und die durchschnittliche Teilchengröße 0,09 bis 0,1 Mikron, bestimmt nach der Zentrifugen-Sedimentationsmethode. Nach 6monatiger Lagerung bei 4⁰C kann noch kein Zusammenfließen der Teilchen beobachtet werden. Der durchschnittliche- Teilchendurchmesser ist praktisch unverändert geblieben.In 8 liters of a modified Ringer's solution (described below) are dissolved 300 g of a polyoxyethylene-polyoxypropylene copolymer having a molecular weight of 8,350. After adding 3 kg of perfluorodecalin, the resulting mixture is stirred in a mixer. A coarse emulsion is obtained. The coarse emulsion is fed into the reservoir of a jet-type emulsifier (Monton-Gaulin homogenizer) and recirculated there. The emulsification is carried out at 35 ± 5 ^° C. and at a pressure of 200 to 500 kg / cm ² . The concentration of perfluorodecalin in the resulting fine emulsion is 31.3% (w / v) and the average particle size is 0.09 to 0.1 micron as determined by the centrifugal sedimentation method. After 6 months storage at 4 ⁰ C, no coalescence of the particles can be observed. The average particle diameter has remained virtually unchanged.

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r 218 66 2 _ ₁₃ \ ^π r 218 66 2 _ ₁₃ \ ^π

Herstellung der Albuminlösung:Preparation of the albumin solution:

Humanes Serum Albumin wird in einer Konzentration von - 25 % (W/V) in der nachstehend beschriebenen modifizierten Ringer-Lösung gelöst.Human serum albumin is dissolved at a concentration of -25% (w / v) in the modified Ringer's solution described below.

Herstellung der modifizierten Ringer-Lösung: "Preparation of the modified Ringer solution: "

In 1 Liter destilliertem Wasser werden 6,51 g NaCl, 0,4 g MgSO₄, 0,8 g KCl, 0,24 g NaHCO₃, 0,14 g Na₃HPO₄ und 6,0 g Glucose gelöst. Es wird eine Lösung mit folgender Elektrolyt zusammen Setzung, ausgedrückt in meq/Liter, erhalten: 112 Na⁺, 11 K⁺, 7 Mg⁺⁺, 118 Cl", 3 HCO₃", 2 HPO₄"", 7 SO₄"", 33 Glucose. .In 1 liter of distilled water are dissolved 6.51 g of NaCl, 0.4 g of MgSO ₄ , 0.8 g of KCl, 0.24 g of NaHCO ₃ , 0.14 g of Na ₃ HPO ₄ and 6.0 g of glucose. A solution with the following electrolyte composition, expressed in meq / liter, is obtained: 112 Na ⁺ , 11 K ⁺ , 7 Mg ⁺⁺ , 118 Cl ", 3 HCO ₃ ", 2 HPO ₄ "", 7 SO ₄ "", 33 glucose. ,

,.' . '

Vermischen der einzelnen Flüssigkeiten:Mixing the individual liquids:

570 ml der modifizierten Ringer-Lösung und 330 ml der Fluorkohlenstoffemulsion werden miteinander vermischt und gründlieh verrührt. Das Gemisch wird 12 Minuten in einem Sterilisator auf 115⁰C erhitzt und sterilisiert. Das sterilisierte Gemisch wird mit 100 ml der Albuminlösung versetzt, die durch ein Bakterienfilter filtriert worden ist. Das erhaltene Gemisch wird bei 1 bis 10°C gelagert und kann als Perfu- sionsflüssigkeit zur Konservierung von zur Transplantation bestimmten Organen verwendet werden.570 ml of the modified Ringer's solution and 330 ml of the fluorocarbon emulsion are mixed together and thoroughly stirred. The mixture is heated for 12 minutes in a sterilizer at 115 ⁰ C and sterilized. To the sterilized mixture is added 100 ml of the albumin solution filtered through a bacterial filter. The resulting mixture is stored at 1 to 10 ° C and can be used as a perfusion fluid for the preservation of organs intended for transplantation.

Herstellungsbeispiel 2 Herstellung der Perfluorkohlenstoff-Emulsion:Preparation Example 2 Preparation of perfluorocarbon emulsion

In 8 Liter der modifizierten Ringer-Lösung werden 330 g Polyoxyäthylenoctyläther mit einem Durchschnittsmolekulargewicht von 3500 gelöst. Die erhaltene Lösung wird mit 40 g Sojabohnenphospholipid^ und 2 g Kaliumoleat versetzt. Das Gemisch wird in einem Mischer zu einer Suspension verrührt, So-In 8 liters of the modified Ringer's solution, 330 g of polyoxyethylene octyl ether having an average molecular weight of 3500 are dissolved. The resulting solution is mixed with 40 g of soybean phospholipid and 2 g of potassium oleate. The mixture is stirred in a mixer to form a suspension.

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2 1866 22 1866 2

dann wird die erhaltene Suspension mit 3 kg Perfluor-(tributylamin) versetzt und in einem Mischer zu einer groben Emulsion verrührt. Die erhaltene grobe Emulsion wird in gleicher Weise wie in Beispiel 1 weiter emulgiert. Die erhaltene feine Emulsion wird in Ampullen abgefüllt und 12 Minuten bei 115°C sterilisiert. Die Konzentration der Perfluorkohlenstoffverbindung in der sterilisierten Emulsion beträgt 29,7 % (W/V). Nach 6monatiger Lagerung bei 4⁰C zeigt die Emulsion kein Zusammenfließen der Teilchen. 10then the resulting suspension is mixed with 3 kg of perfluoro- (tributylamine) and stirred in a mixer to a coarse emulsion. The resulting coarse emulsion is further emulsified in the same manner as in Example 1. The resulting fine emulsion is filled into ampoules and sterilized at 115 ° C for 12 minutes. The concentration of the perfluorocarbon compound in the sterilized emulsion is 29.7% (w / v). After 6 months of storage at 4 ⁰ C, the emulsion shows no confluence of the particles. 10

Vermischen der Flüssigkeiten: .Mixing the liquids:.

550 ml der in Herstellungsbeispiel 1 beschriebenen modifizierten Ringer-Lösung werden mit 100 ml der Albumin-Lösung und 350 ml der auf die vorstehend beschriebene Weise hergestellten Fluorkohlenstoff-Emulsion vermischt. Das Gemisch wird bei 1 bis 1O°C gelagert. Es kann als Perfusionsflüssigkeit zur Konservierung von zur Transplantation bestimmten550 ml of the modified Ringer's solution described in Preparation Example 1 are mixed with 100 ml of the albumin solution and 350 ml of the fluorocarbon emulsion prepared as described above. The mixture is stored at 1 to 10 ° C. It can be used as a perfusion fluid for the preservation of intended for transplantation

Organen verwendet werden. . .Organs are used. , ,

Herstellungsbeispiel 3 ·Production Example 3

Das Verfahren von Herstellungsbeispiel 1 wird wiederholt, anstelle von Perfluordecalin wird jedoch Perfluormethylpropylcyclohexan verwendet. Die erhaltene Perfusionsflüssigkeit hat ähnliche Eigenschaften wie die in Herstellungsbeispiel 1 beschriebene Perfusionsflüssigkeit.The procedure of Preparation Example 1 is repeated, but instead of perfluorodecalin, perfluoromethylpropylcyclohexane is used. The resulting perfusion fluid has similar properties to the perfusion fluid described in Preparation Example 1.

Herstellungsbeispiel 4 .Production Example 4.

Das Verfahren des Herstellungsbeispiels 1 wird wiederholt, anstelle von Perfluordecalin wird jedoch Perfluorbutylcyclohexan, Perfluortrimethylcyclohexan, Perfluoräthylpropylcyclohexan, Perfluormethyldecalin, Perfluorhexyltetrahydro- ^ pyran, Perfluorpenty!tetrahydrofuran, Perfluorheptyltetrahydrofuran bzw. Perfluordecan verwendet. Die erhaltenen Per-The procedure of Production Example 1 is repeated, but instead of perfluorodecalin, perfluorobutylcyclohexane, perfluorotrimethylcyclohexane, perfluoroethylpropylcyclohexane, perfluoromethyldecalin, perfluorohexyltetrahydro-pyran, perfluoropentyltetrahydrofuran, perfluoroheptyltetrahydrofuran or perfluorodecane are used. The received

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^Γ 21 868 2 - ₁₅ - ^Γ 21 868 2 - ₁₅ -

fusionsflüssigkeiten haben ähnliche Eigenschaften wie die in Herstellungsbeispiel 1 beschriebene Perfusionsflüssigkeit.Fusion fluids have similar properties as the perfusion fluid described in Preparation Example 1.

Herstellungsbeispiel 5Production Example 5

. Das Verfahren von Herstellungsbeispiel 1 wird wiederholt, jedoch wird anstelle von Perfluordecalin Perfluor-N,N-dibutylmonomethylamin, Perfluor-N,N-diäthylpentylamin, Perfluor-Ν,Ν-dipropylbutylamin, Perfluortripropylamin, Perfluor-N,N-diäthylcyclohexylamin, Perfluor-N-pentylpiperidin, Perfluor-N-hexylpiperidin, Perfluor-N-butylpiperidin. Perfluor-N-pentylmorpholin, Perfluor-N-hexylmorpholin bzw. Perfluor-N-heptylmorpholin verwendet. Die erhaltenen Perfusionsflüssigkeiten haben ähnliche Eigenschaften wie die in Herstellungsbeispiel 1 beschriebene Perfusionsflüssigkeit., The procedure of Preparation Example 1 is repeated, but instead of perfluorodecalin, perfluoro-N, N-dibutylmonomethylamine, perfluoro-N, N-diethylpentylamine, perfluoro-Ν, Ν-dipropylbutylamine, perfluorotripropylamine, perfluoro-N, N-diethylcyclohexylamine, perfluoro-N -pentylpiperidine, perfluoro-N-hexylpiperidine, perfluoro-N-butylpiperidine. Perfluoro-N-pentylmorpholine, perfluoro-N-hexylmorpholine or perfluoro-N-heptylmorpholine used. The perfusion fluids obtained have similar properties as the perfusion fluid described in Preparation Example 1.

Herstellungsbeispiel 6 .Production Example 6.

Das Verfahren von Herstellungsbeispiel 1 wird wiederholt, anstelle von Perfluordecalin wird jedoch Perfluortributylamin verwendet. Die erhaltene Perfusionsflüssigkeit hat ähnliche Eigenschaften wie die in Herstellungsbeispiel 1 beschriebene Perfusionsflüssigkeit.The procedure of Preparation Example 1 is repeated, but instead of perfluorodecalin, perfluorotributylamine is used. The resulting perfusion fluid has similar properties to the perfusion fluid described in Preparation Example 1.

Herstellungsbeispiel 7Production Example 7

Das Verfahren von Herstellungsbeispiel 1 wird wiederholt, jedoch wird anstelle des Copolymerisats mit einem Molekulargewicht von 8. 350 ein Polyoxyäthylen-Polyoxypropylen-Copolymerisat mit einem Molekulargewicht von 15 800 verwendet. Die erhaltene Perfusionsflüssigkeit hat ähnliche Eigenschaften wie die in Herstellungsbeispiel 1 erhaltene Perfusionsflüssigkeit.The procedure of Production Example 1 is repeated, but instead of the copolymer having a molecular weight of 8,350, a polyoxyethylene-polyoxypropylene copolymer having a molecular weight of 15,800 is used. The obtained perfusion fluid has similar properties to the perfusion fluid obtained in Preparation Example 1.

.,

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^Γ 2 1866 2 _ ₁₆ _ ^Γ 2 1866 2 _ ₁₆ _

Die nachstehenden Vergleichsversuche an Tieren,denen durch Perfusion konservierte Nieren eingepflanzt wurden, zeigen die Wirksamkeit der erfindungsgemässen Perfusionsflüssigkeit. DasThe following comparative experiments on animals to which kidneys perfused by perfusion have been implanted show the effectiveness of the perfusion fluid according to the invention. The

überleben oder das Absterben des Transplantats wird durch Beobachtung der Funktion der transplantierten Niere bestimmt, • nachdem die kontralaterale normale Niere entfernt wurde. In den Tabellen bedeutet der Ausdruck "frühe Funktion", daß Harnausscheidung innerhalb 2 Tagen nach der kontralateralen Nephrektomie beobachtet wurde. Der Ausdruck "späte Funktion" bedeutet, daß keine Harnausscheidung innerhalb 2 Tagen nach der kontralateralen Nephrektomie beobachtet wurde, daß jedoch danach die Funktion der Niere allmählich besser wurde, bis Harnausscheidung beobachtet werden konnte und die Versuchstiere überlebten. Der Ausdruck "Neurose" bedeutet das Absterben von Gewebe in lokalisierten Bereichen der transplantierten Niere vor der feontralateralen Nephrektomie (der Versuch wurde abgebrochen); "A.T.N." (akute Tubulinei;rose) bedeutet, daß nach der kontralateralen Nephrektomie das Tier an Anurie, Äppetitverlust und häufigem Erbrechen litt, bis der Tod aufgrund akuter Niereninsuffizienz eintrat.survival or death of the graft is determined by observing the function of the transplanted kidney after removing the contralateral normal kidney. In the tables, the term "early function" means that urine excretion was observed within 2 days after contralateral nephrectomy. The term "late function" means that no urinary excretion was observed within 2 days after the contralateral nephrectomy, but thereafter the function of the kidney gradually became better until urinary excretion could be observed and the experimental animals survived. The term "neurosis" means the death of tissue in localized areas of the transplanted kidney prior to feateral lateral nephrectomy (the experiment was stopped); "A.T.N." (Acute tubuline rose) means that after contralateral nephrectomy, the animal suffered from anuria, loss of appetite, and frequent vomiting until death due to acute renal insufficiency.

Versuchsbeispiel 1 Optimale PFC-Konzentration in der Konservierungsflüssigkeit:Experimental Example 1 Optimum PFC Concentration in the Preservative Liquid:

Es ist erforderlich, die geeignete PFC-Konzentration zur Perfusion zu bestimmen, weil mit zunehmender PFC-Konzentration einer PFC-Emulsion die Sauerstoffträgerkapazität der Emulsion zunimmt, während andererseits die Viskosität bei niedrigen Temperaturen erheblich ansteigt. Zur Bestimmung "der optimalen PFC-Konzentration während der Perfusion wird eine Reihe von Perfusionsflüssigkeiten mit unterschiedlicher PFC-Konzentration hergestellt, wobei als Basalsalzlösung eine modifizierte Collins-Lösung (M.C.S.) verwendet wird; vgl. The Lancet, 2, S. 1219 - 1222 (1969). Bei dieser LösungIt is necessary to determine the appropriate PFC concentration for perfusion, because as the PFC concentration of a PFC emulsion increases, the oxygen-carrying capacity of the emulsion increases, while on the other hand the viscosity increases significantly at low temperatures. In order to determine the optimal PFC concentration during perfusion, a series of perfusion fluids of different PFC concentration is prepared using as a basal salt solution a modified Collins solution (MCS), see The Lancet, 2, pp. 1219-1222 (US Pat. 1969), in this solution

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^Γ 218 66 2 ^Γ 218 66 2

. ₁₇ ., ₁₇ .

handelt es sich um die günstigste Lösung zur hypothermen Lagerung von Organen. Sie hat eine Elektrolytzusammensetzung ähnlich der intrazellulären Flüssigkeit. Unterschiedliche Mengen der im Herstellungsbeispiel 2 erhaltenen Fluor kohlenstoff-Emulsion werden zu M.C.S. gegeben, so daß die PFC-'Endkonzentrationen in den Perfusionsflüssigkeiten den Wert 5, 7,5, 10, 12,5 und 15 % (W/V) annehmen. Es werden zur Transplantation bestimmte Hundenieren mit den vorstehend beschriebenen Flüssigkeiten bei 5 bis 8⁰C und einer Perfusionsgeschwindigkeit von 15 bis 18 ml/g/Stunde während 24 Stunden unter Begasung mit einem Gemisch von 95 % Sauerstoff und 5 % Kohlendioxid in einer Strömungsgeschwindigkeit von 300 bis 500 ml/Minute durch Perfusion konserviert Pro Versuchsgruppe werden 5 Hunde verwendet. Die konservier ten Nieren werden autotransplantiert. Am 7. Tag nach der Autotransplantation wird die kontralaterale normale Niere jedes Hundes entnommen und es werden die Überlebenstage jedes Hundes bestimmt. Eine Überlebensrate von 4 Wochen oder länger zeigt eine erfolgreiche Transplantation an, weil bei diesen Hunden nach 2 Wochen sowohl BHS (Blutharnstoff-Stickstoff) und der Kreatininspiegel normal blieb und Harnausscheidung beobachtet wird. Aus den erhaltenen Werten wird die optimale PFC-Konzentration in der Perfusionsflüssigkeit bestimmt.It is the cheapest solution for the hypothermic storage of organs. It has an electrolyte composition similar to the intracellular fluid. Different amounts of the fluorocarbon emulsion obtained in Preparation Example 2 are added to MCS so that the final PFC concentrations in the perfusion liquids are 5, 7.5, 10, 12.5 and 15% (W / V). There are intended for transplantation canine kidney with the above described liquids from 5 to 8 ⁰ C and a perfusion rate 15 to 18 ml / g / hour for 24 hours under aeration with a mixture of 95% oxygen and 5% carbon dioxide at a flow rate of 300 Up to 500 ml / minute preserved by perfusion Five dogs are used per experimental group. The preserved kidneys are autotransplanted. On the 7th day after autotransplant, the contralateral normal kidney of each dog is removed and the survival days of each dog are determined. A survival of 4 weeks or longer indicates successful transplantation because in these dogs both BHS (blood urea nitrogen) and creatinine level remained normal and urine excretion was observed after 2 weeks. From the values obtained, the optimal PFC concentration in the perfusion fluid is determined.

Der Versuch wird in üblicher Weise und in folgender Reihenfolge durchgeführt:The experiment is carried out in the usual way and in the following order:

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218662 _ ₁₈ _218662 _ ₁₈ _

Anästhesie: Pentobarbital-Natrium (30 mg/kg i.v.)Anesthesia: pentobarbital sodium (30 mg / kg i.v.)

• . endotracheale Gabe von Halothan und Sauerstoff•. Endotracheal administration of halothane and oxygen

Abdominale Inzision in der MedianlinieAbdominal incision in the median line

Chirurgische Isolierung der linken Niere . i ' ' .. :Surgical isolation of the left kidney. i '' ..:

.Kanülierung - (Ureter, renale Arterie und Vene) 4-Anfängliches Auswaschen mit kalter M.C.S. oder kalter Ringer-Lactatlösung .Cannulation - (ureter, renal artery and vein) 4-Initial washout with cold M.C.S. or cold Ringer lactate solution

V l ... ' . . · ..V .- ., V l ... '. , · ..V .-.,

Anschluß an den PerfusionskreislaufConnection to the perfusion circuit

Perfusion und Konservierung mit Sauerstoff begaster Perfusionsflüssigkeit während oder 72 Stunden bei 5 bis 8⁰CPerfusion and preservation with oxygen fumigated perfusion fluid during or 72 hours at 5 to 8 ⁰ C.

Auswaschen (M.C.S. oder Ringer-Lactat-Lösung) J.Wash out (M.C.S. or Ringer's lactate solution) J.

Autotransplantation in das kleine BeckenAutotransplantation in the small basin

spätere kontralaterale Nephrektomie.later contralateral nephrectomy.

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2 1866 22 1866 2

- 19 -- 19 -

Table II

Einfluß der PFC-Konzentration in der Perfusionsflüssigkeit auf den Erfolg der TransplantationInfluence of PFC concentration in the perfusion fluid on the success of transplantation

10 15 2010 15 20

30 3530 35

Hunddog Perfusionsperfusion Überlebenssurvival Überlebenssurvival BemerkungenRemarks Nr.No. flüssigkeitliquid zeit, Tagetime, days raterate 11 . * lebend, * alive frühe Funktionearly function 22 -- Necrosenecrosis 33 M.C.S.M.C.S. 55 2/52.5 ** A.T.N. (Anurie)** A.T.N. (Anuria) 44 lebendlive frühe Funktionearly function 55 44 A.T.N. (Anurie)A.T.N. (Anuria) 66 Necrosenecrosis 77 lebendlive späte Funktionlate function 88th 5% PFC5% PFC 55 3/53.5 A.T.N. (Anurie)A.T.N. (Anuria) in M.C.S.in M.C.S. 99 lebendlive frühe Funktionearly function IOIO lebendlive späte Funktionlate function 1111 lebendlive frühe Funktionearly function 1212 lebendlive frühe Funktionearly function 1313 7,5% PFC7.5% PFC lebendlive 4/54.5 frühe Funktionearly function in M.C.S.in M.C.S. 1414 77 A.T.N. (Anurie)A.T.N. (Anuria) 1515 lebendlive späte Funktionlate function 1616 lebendlive frühe Funktionearly function 1717 55 A.T.N. (Anurie)A.T.N. (Anuria) 1818 10% PFC10% PFC lebendlive 4/54.5 frühe Funktionearly function in M.C.S.in M.C.S. 1919 lebendlive frühe Funktionearly function 2020 lebendlive frühe Funktionearly function 21; f21; f lebendlive frühe Funktionearly function 2222 lebendlive frühe Funktionearly function 2323 12,5% PFC12.5% PFC lebendlive 4/54.5 frühe Funktionearly function in M.C.S.in M.C.S. 2424 55 A.T.N- (Anurie)A.T.N- (Anuria) 2525 lebendlive frühe Funktionearly function

Tabelle II FortsetzungTable II continued

26.26th 15% PFC in M.C.S.15% PFC in M.C.S. '8'8th 2/52.5 A.T.N. (Hämaturie)A.T.N. (Hematuria) 2727 lebendlive frühe Funktion (Hämaturie)early function (hematuria) 2828 44 A.T.N. (Anurie)A.T.N. (Anuria) 2929 lebendlive frühe Funktion (Hämaturie)early function (hematuria) 3Ο3Ο 77 A.T.N. (Anurie)A.T.N. (Anuria)

..* Lebend: überlebt mehr als 4 Wochen '.. * Living: survive more than 4 weeks'

** A.T.N. (Akute Tubuline&rose)** A.T.N. (Acute tubuline & rose)

Aus Tabelle II ist ersichtlich, daß eine hohe Erfolgsguote der Transplantation bei einer PFC-Konzentration von 7,5 bis 12,5 % (W/V) erhalten wird. Wenn die PFC-Konzentration 12,5 % (W/V) übersteigt und 15 % (W/V) erreicht, wird Hämaturie in-allen Fällen nach Wiederaufnahme der Durchblutung nach der Transplantation beobachtet. 2 Hunde, die während 2 Wochen überlebten, zeigten Hämaturie mehrere Tage nach der kontralateralen NephreKtomie. Sodann erholten sie sich und überlebten. Aus den vorstehenden Ergebnissen wurde geschlossen, daß eine Perfusionsflüssigkeit mit einer PFC-Konzentration von 10 % (W/V) besonders wirksam ist zur konservierenden Per fusion einer exzidierten Niere.From Table II it can be seen that a high degree of success of transplantation is obtained at a PFC concentration of 7.5 to 12.5% (w / v). When the PFC concentration exceeds 12.5% (w / v) and reaches 15% (w / v), hematuria is observed in all cases after resumption of blood flow after transplantation. Two dogs surviving for 2 weeks showed hematuria several days after the contralateral nephrectomy. Then they recovered and survived. From the above results, it was concluded that a perfusion fluid having a PFC concentration of 10% (W / V) is particularly effective for preserving percussion of an excised kidney.

Versuchsbeispiel 2 Basalsalzlösung:Experimental Example 2 Basal Salt Solution:

Es wurden langdauernde Perfusionsversuche bei niedriger Temperatur durchgeführt, um eine geeignete Basalsalzlösung auszuwählen. Die untersuchten Salzlösungen sind M.C.S. (vorstehend beschrieben), Ringer-Lösung und modifizierte Ringer-Lösung (M.R.S.), hergestellt gemäß Herstellungsbeispiel 1.Long-term low-temperature perfusion experiments were performed to select a suitable basal salt solution. The salt solutions tested are M.C.S. (described above), Ringer's solution and modified Ringer's solution (M.R.S.) prepared according to Preparation Example 1.

^Γ 2 1866 2 ^Γ 2 1866 2

y Perfusionsflüssigkeiten zur Organkonservierung wurden durch Zusatz der Perfluorkohlenstoff-Emulsion von Herstellungsbeispiel 2 und Rinderserum-Albumin zu einer Salzlösung hergestellt, so daß die Endkonzentration 10 % (W/V) PFC und 6 % (W/V) Albumin beträgt. Die Perfusion wurde an Hundenieren (5 pro Gruppe) bei 5 bis 8°C während 72 Stunden gemäß Versuchsbeispiel 1 durchgeführt. Nach der Transplantation und. der Wiederaufnahme der Durchblutung wurden die Bewegung des Blutstroms durch die Niere, die Farbe und der Tonus der Nie- y perfusion for organ preservation were prepared by addition of the perfluorocarbon emulsion of Preparation Example 2 and bovine serum albumin to a salt solution is such that the final concentration of 10% (W / V) PFC and 6% (W / V) albumin. Perfusion was performed on dog kidneys (5 per group) at 5 to 8 ° C for 72 hours according to Experimental Example 1. After the transplant and. the resumption of blood flow, the movement of blood flow through the kidney, the color and tone of

JO re, die Harnausscheidung und die Symptome aufgrund der kontralateralen Nephrektomie am 7. Tage nach der Transplantation beobachtet. Die Perfusionsflüssigkeit (insgesamt 2 Liter) wird während der 72stündigen Perfusion nicht wieder aufgefrischt, sondern in einer Menge von 15 bis 18 ml/g und pro Stunde im Kreislauf geführt. Ausgenommen in den Fällen, in denen M.R.S. als Basalsalzlösung verwendet wurde, sind die Ergebnisse der Transplantation sehr ungünstig, und nahezu sämtliche Versuchstiere sterben aufgrund akuter Niereninsuffizienz 10 Tage nach der kontralateralen Nephrektomie. Bei Verwendung von M.R.S. als Bäsalsalzlösung erholen sich dagegen sämtliche Tiere.JO re, urinary excretion and symptoms due to contralateral nephrectomy observed on the 7th day after transplantation. The perfusion fluid (2 liters in total) is not refreshed during the 72-hour perfusion, but recirculated in an amount of 15 to 18 ml / g and per hour. Except in cases where M.R.S. was used as a basal salt solution, the results of the transplantation are very unfavorable and almost all experimental animals die due to acute renal insufficiency 10 days after the contralateral nephrectomy. When using M.R.S. as Bäsalsalzlösung recover all animals.

Versuchsbeispiel 3Experimental Example 3

Einfluß der Albuminkonzentration in der Perfusionsflüssigkeit auf Hundenieren:Influence of albumin concentration in the perfusion fluid on dog kidneys:

In diesem Versuch werden als Perfusionsflüssigkeiten I0prozentige PFC-Emulsionen in modifizierter Ringer-Lösung verwen det. Es wird die in Herstellungsbeispiel 6 beschriebene PFC-Emulsion verwendet, die unterschiedliche Konzentrationen an humanem Albumin enthält. Die Nieren werden 72 Stunden bei 5 bis 8⁰C unter Begasung gemäß Versuchsbeispiel 1 bei einer Strömungsgeschwindigkeit von 300 bis 500 ml/Minute perfundiert und sodann gemäß Versuchsbeispiel 1 autotransplantiert Die Perfusions-Strömungsgeschwindigkeit wird während derIn this experiment, I0 percent PFC emulsions in modified Ringer's solution are used as perfusion liquids. The PFC emulsion described in Preparation Example 6 containing different concentrations of human albumin is used. The kidneys are perfused for 72 hours at 5 to 8 ^° C. with gassing according to Experimental Example 1 at a flow rate of 300 to 500 ml / minute and then autografted according to Experimental Example 1. The perfusion flow rate is determined during the

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~1~ 1

30 3530 35

Perfusion auf 15 bis 18 ml/g/Stunde eingestellt. Die Kontralaterale Nephrektomie wurde 1 Woche nach der Autotransplan-· tation durchgeführt. Die Ergebnisse sind in Tabelle III zusammengestellt. . . ' 'Perfusion adjusted to 15 to 18 ml / g / hour. Contralateral nephrectomy was performed one week after autotransplan- tation. The results are summarized in Table III. , , ''

Table III

-- 1010 Hund Nr.Dog no. Albumin- Konzen tration, %Albumin concentration,% Gewichtszu nahme der Niere wäh rend der Perfusion, %Weight gain of the kidney during perfusion,% Nach kontralateraler NephrektomieAfter contralateral nephrectomy Überlebento survive 1515 1 2 31 2 3 OO . 73,5 49,4 53,1, 73.5 49.4 53.1 Funktionfunction tot tot überlebensurvive dead dead 4 5 64 5 6 22 38,4 52,9 49,838.4 52.9 49.8 keine Funktion keine Funktion späte Funktion. 2 Tageno function no function late function. 2 days überleben tot totsurvive dead dead 2020 7 8 97 8 9 44 37,6 20,3 41,637.6 20.3 41.6 späte Funktion 2 Tage keine Funktion keine Funktionlate function 2 days no function no function tot überleben überlebenSurvive dead survive 2525 IO 11 12IO 11 12 66 13,7 30,6 34,413.7 30.6 34.4 keine Funktion frühe Funktion frühe Funktionno function early function early function überleben überleben überlebensurvive survive survive 13 14 1513 14 15 88th 11,9 22,8 30,5 11,9 22,8 30,5 frühe Funktion frühe Funktion frühe Funktionearly function early function early function überleben überleben totsurvive survive dead frühe Funktion frühe Funktion keine Funktionearly function early function no function

Versuchsbeispiel 4 ~ ,Experimental Example 4,

Langzeitige Perfusion bei niedriger Temperatur von zur Transplantation bestimmten Nieren:Long term low temperature perfusion of transplanted kidneys:

Die Transplantationsversuche mit Hundenieren wurden in ähnli-Transplantation experiments with dog kidneys were carried out in similar

^Γ 218 6 6 2 . ₂₃ . ^Γ 218 6 6 2. ₂₃ .

eher Weise durchgeführt, wie in Versuchsbeispiel 1. Jede Niere wird 1 Woche bei 5 bis 8⁰C mit einer Strömungsgeschwin digkeit von 15 bis 18 ml/g/Stunde unter Begasung mit einer Strömungsgeschwindigkeit von 300 bis 500 ml/Minute/perfundiert. Die Perfusionsflüssigkeit wird unter Verwendung von M.R.S. von Herstellungsbeispiel 1 als Basalsalzlösung unter Zusatz von Rinderserum-Albumin und der PFC-Emulsion von Herstellungsbeispiel 2 oder einer PFC-Emulsion, die auf dierather way performed as in Experimental Example 1. Each kidney is perfused for 1 week at 5 to 8 ⁰ C and a Strömungsgeschwin speed 15 to 18 ml / g / hour under gassing with a flow rate of 300 to 500 ml / minute /. The perfusion fluid is prepared using MRS of Preparation Example 1 as a basal saline solution with the addition of bovine serum albumin and the PFC emulsion of Preparation Example 2 or a PFC emulsion based on the

gleiche Weise hergestellt worden war wie in Herstellungsart amin beispiel 2,.hergestellt, anstelle von Perfluortributyl/wurde jedoch Perfluordecalin verwendet. Die Konzentrationen an Albumin und PFC in der Perfusionsflüssigkeit betragen 6 % (W/V) bzw. 10 % (W/V). Nach einwöchiger Perfusion werden die Nieren gemäß Versuchsbeispiel 1 autotransplantiert. Die kontralaterale Nephrektomie wird 1 Woche später durchgeführt, und es werden die Symptome beobachtet. Die Ergebnisse sind in Tabelle IV zusammengestellt. Die Plasmaspiegel für Kreatinin und BHS der überlebenden Tiere haben sich nachthe same way as in the production of amine example 2, prepared instead of Perfluortributyl / but perfluorodecalin was used. The concentrations of albumin and PFC in the perfusion fluid are 6% (W / V) and 10% (W / V), respectively. After one-week perfusion, the kidneys are autografted according to Experimental Example 1. Contralateral nephrectomy is performed 1 week later and the symptoms are observed. The results are summarized in Table IV. The plasma levels for creatinine and BHS of surviving animals have decreased

3 Wochen normalisiertNormalized for 3 weeks

20 20

25 30 3525 30 35

- 24 -- 24 -

Table IV

1010

2020

Bei spiel , Nr.At play, no. Perfusions flüssigkeitPerfusion fluid 11 M.R.S. Albumin 6%(W/V) Perfluor- tributyl- amin (10% (W/V) M.R.S. Albumin 6%(W/V) Perfluor- decalin (1O%W/V)M.R.S. Albumin 6% (w / v) perfluorobutyl-amine (10% (w / v) M.R.S. albumin 6% (w / v) perfluorodalin (10% w / v) Gewichts zunahme der Niere während der Per fusion, %Weight increase of kidney during per fusion,% nach kontralateraler Nephrektomieafter contralateral nephrectomy überlebento survive 22 34,334.3 Funktionfunction überlebento survive 33 46,946.9 frühe Funktionearly function totdead 4 4 20,120.1 keine Funktionno function überlebento survive 5 65 6 18,718.7 späte Funktion 2 Tagelate function 2 days totdead 77 33,5 19,333.5 19.3 späte Funktion 3 Tagelate function 3 days überleben überlebensurvive survive 88th 40,140.1 frühe Funktion frühe Funktionearly function early function totdead 99 40,940.9 späte Funktion 3 Tagelate function 3 days überlebento survive 1010 23,523.5 frühe Funktionearly function überlebento survive 21 ,621, 6 frühe Funktionearly function totdead keine Funktionno function

Versuchsbeispiel 5Experimental Example 5

Ähnlich Versuchsbeispiel 1 werden mit Hundenieren Transplantationsversuche durchgeführt. Jede Niere wird 12 oder 24 Stunden bei 18 bis 22⁰C mit einer Strömungsgeschwindigkeit von 40 bis 50 ml/g/Stunde unter Begasung mit einem Gasgemisch aus 95 % Sauerstoff und 5 % Kohlendioxid in einer Strömungsgeschwindigkeit von 300 bis 500 ml/Minute perfundiert.Similar to Experimental Example 1, transplantation experiments are carried out with dog kidneys. Each kidney is perfused for 12 or 24 hours at 18 to 22 ^° C. at a flow rate of 40 to 50 ml / g / hour while gassing with a gas mixture of 95% oxygen and 5% carbon dioxide at a flow rate of 300 to 500 ml / minute.

Die Perfusionsflüssigkeit wurde mit der M.R.S. von Herstellungsbeispiel 1 als Basalsalzlösung , der PFC-Emulsion von Herstellungsbeispiel 2 und Rinderserumalbumin hergestellt.The perfusion fluid was treated with the M.R.S. of Preparation Example 1 as a basal salt solution, the PFC emulsion of Preparation Example 2, and bovine serum albumin.

2 18 6622 18 662

- 25 -- 25 -

Die Konzentrationen an PFC und Albumin in der Perfusionsflüssigkeit betragen 10 % (W/V) und 6 % (W/V). Nach 12stündiger oder 24stündiger Konservierung werden die Nieren autotransplantiert. Die kontralaterale Nephrektomie wird 1 Woche später durchgeführt, und die Symptome werden beobachtet. In Tabelle V sind die Ergebnisse zusammengestellt.The concentrations of PFC and albumin in the perfusion fluid are 10% (W / V) and 6% (W / V). After 12 hours or 24 hours of preservation, the kidneys are autotransplanted. Contralateral nephrectomy is performed one week later and symptoms are observed. Table V summarizes the results.

Bei einem Vergleichsversuch wird kein PFC zugegeben. IiiIn a comparative experiment, no PFC is added. iii

wird einem weiteren Vergleichsversuch/M.C.S. als Basalsalzlösungis subjected to another comparative test / M.C.S. as basal salt solution

verwendet,used

Table V

Bei spiel Nr.At game no. Perfusions flüssigkeitPerfusion fluid Perfusions dauer, Std.Perfusion duration, Std. nach kontralateraler Nephrektomieafter contralateral nephrectomy überlebento survive 1 2 3 41 2 3 4 M.R.S. Albumin 6% (W/V)M.R.S. Albumin 6% (w / v) 1212 Funktionfunction tot tot tot totdead dead dead dead 5 6 7 85 6 7 8 M.C.S. Albumin 6% (W/V) PFC 10% (W/V)M.C.S. Albumin 6% (w / v) PFC 10% (w / v) 1212 keine Funktion keine Funktion keine Funktion keine Funktionno function no function no function no function tot tot tot totdead dead dead dead 9 10 11 129 10 11 12 M.R.S. Albumin 6% (W/V) PFC 10% (W/V)M.R.S. Albumin 6% (w / v) PFC 10% (w / v) 1212 keine Funktion keine Funktion keine Funktion keine Funktionno function no function no function no function überleben überleben überleben überlebensurvive survive survive survive 13 14 15 1613 14 15 16 M.R.S. Albumin 6%(W/V) PFC 10% (W/V)M.R.S. Albumin 6% (w / v) PFC 10% (w / v) 2424 frühe Funktion frühe Funktion frühe Funktion frühe Funktionearly function early function early function early function überleben tot überleben überlebensurvive survive survive dead frühe Funktion keine Funktion frühe Funktion späte Funktion 2 Tageearly function no function early function late function 2 days

Claims

I- # »i

& I - 26 -

invention claim

Perfusion liquid for preserving organs intended for transplantation, characterized in that the liquid contains a Ringer's solution having a potassium ion concentration of 8 to 20 meq / liter, an effective amount of dissolved albumin, a liquid perfluorocarbon compound emulsified in the solution and an emulsifier.
10

2. perfusion fluid according to item 1, characterized by an albumin concentration of 1 to 8% (w / v).

3. perfusion fluid according to item 1, characterized by a concentration of perfluorocarbon compound of 7.5 to 12.5% (W / V).

4. perfusion liquid according to item 1, characterized in that the perfluorocarbon compound contains 9 to 12 carbon atoms.

5. Perfusion liquid according to item 4, characterized in that the perfluorocarbon compound is a perfluoroalkylcyclohexane having 3 to 5 carbon atoms in the alkyl radical, perfluorocycloalkane having 10 to 12 carbon atoms, a perfluoroalkyltetrahydropyran having 4 to 6 carbon atoms in the alkyl radical, a perfluoroalkyltetrahydrofuran having 5 to 7 carbon atoms in the alkyl radical, a perfluoroalkylpiperidine having 4 to 6 carbon atoms in the alkyl radical, a perfluoroalkylmorpholine having 5 to 7 carbon atoms in the alkyl radical, a perfluorotrialkylamine, a perfluoro (dialkylcycloalkylamine) or a perfluoro (dioxa-

alkane) or a mixture of at least two of these compounds. , 35

6. Perfusion fluid according to item 4, characterized in that the perfluorocarbon compound is a per-

¹⁸ 2 1866 2 - 27

fluoroalkylcyclohexane having 3 to 5 carbon atoms in the

optionally alkylated / '_,. , _{o is} alkyl radical or "a / perfluorocycloalkane with 10 to 12

"Carbon atoms is.

7. perfusion fluid according to item 4, characterized in that the perfluorocarbon compound is a perfluoroalkyltetrahydropyran having 4 to 6 carbon atoms in the alkyl radical, a perfluoroalkyltetrahydrofuran having 5 to 7 carbon atoms in the alkyl radical, a perfluoroalkylpiperidine having 4 to 6 carbon atoms in the alkyl radical

or a perfluoroalkylmorpholine having 5 to 7 carbon atoms. atoms in the alkyl radical.

8. Perfusion liquid according to item 5 and 6, characterized in that the perfluorocycloalkane perfluorodecalin, perfluoro (methyldecalin) or perfluoro (dimethyldecalin) is.

9. Perfusion liquid according to item 5 and 6, characterized in that the Perf luoralkylcyclohexan Perf luor- (butylcyclohexane), perfluoro (methylpropylcyclohexan), perfluoro (trimethylcyclohexane), perfluoro (ethylpropylcyclohexane) or perfluoro (pentylcyclohexane).

^ ⁵ 10. perfusion liquid according to item 7, characterized in that the perfluoro-heterocyclic compound perfluoro- (butyltetrahydropyran) Perfluar- (pentyltetrahydrofuran), perfluoro (hexyltetrahydrofuran), perfluoro (heptyltetrahydrofuran), perfluoro (N-hexy! Piperidine ), Perfluoro (N-pentylmorpholine), perfluoro (N-hexylmorpholine) or perfluoro (N-heptylmorpholine).

Perfusion fluid according to item 5, characterized in that the perfluorotrialkylamine is the perfluoro- (di-

ethylhexylamine), perfluoro- (dipropylbutylamine) or perfluoro- (tributylamine).

L J

12. Perfusion liquid according to item 5 and 6, characterized in that the Perf luor- (dialkylcycloalkyl.amin); which is perfluoro (diethylcyclohexylamine).

13. Perfusion liquid nach'Punkt 5, characterized in that the perfluoro (dioxaalkan) of perfluoro (tetramethylenglykoldiisopropyläther), the perfluoro (trimethylenglykoldiisobutyläther) or the perfluoro (isopropylidenglykoldi-n-propyl ether) is.

14. Perfusion fluid according to item 1, characterized in that the emulsifier is a polyoxyethylene-polyoxypropylene copolymer, a Polyoxyäthylenalkyläther, a Polyoxyalkylallyläther or a phospholipid or a mixture of these compounds.

15. perfusion fluid according to item 1, characterized by an additional ι
further emulsifier.

an additional content of a 'C ₀ '. fatty acid as

Ο " £. I

16. A process for the preparation of a perfusion liquid for the preservation of organs intended for transplantation, characterized by mixing albumin, a Ringer solution having a potassium ion concentration of 8 to 20 meq / liter and a stable perfluorocarbon compound emulsion such that the

, Concentration of

Albumin concentration is 1 to 8% (w / v) and the perfluorocarbon compound is 7.5 to 12.5% (w / v).