CZ308400B6 - Farmaceutický přípravek pro léčení maligního melanomu - Google Patents
Farmaceutický přípravek pro léčení maligního melanomu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ308400B6 CZ308400B6 CZ2018-181A CZ2018181A CZ308400B6 CZ 308400 B6 CZ308400 B6 CZ 308400B6 CZ 2018181 A CZ2018181 A CZ 2018181A CZ 308400 B6 CZ308400 B6 CZ 308400B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- concentration
- nmol
- cells
- pmol
- obatoclax
- Prior art date
Links
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 title claims abstract description 72
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 title claims abstract description 11
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 67
- CVCLJVVBHYOXDC-IAZSKANUSA-N (2z)-2-[(5z)-5-[(3,5-dimethyl-1h-pyrrol-2-yl)methylidene]-4-methoxypyrrol-2-ylidene]indole Chemical compound COC1=C\C(=C/2N=C3C=CC=CC3=C\2)N\C1=C/C=1NC(C)=CC=1C CVCLJVVBHYOXDC-IAZSKANUSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 229950006584 obatoclax Drugs 0.000 claims abstract description 26
- KVQOGDQTWWCZFX-UHFFFAOYSA-N 2-[[3-[[2-(dimethylamino)phenyl]methyl]-2-pyridin-4-yl-1,3-diazinan-1-yl]methyl]-N,N-dimethylaniline Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=C1CN1C(C=2C=CN=CC=2)N(CC=2C(=CC=CC=2)N(C)C)CCC1 KVQOGDQTWWCZFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 25
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims abstract description 19
- ULNXAWLQFZMIHX-UHFFFAOYSA-N GSK343 Chemical compound C1=C(C)NC(=O)C(CNC(=O)C=2C=3C=NN(C=3C=C(C=2)C=2C=C(N=CC=2)N2CCN(C)CC2)C(C)C)=C1CCC ULNXAWLQFZMIHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- FKSFKBQGSFSOSM-QFIPXVFZSA-N 1-[(2S)-butan-2-yl]-N-[(4,6-dimethyl-2-oxo-1H-pyridin-3-yl)methyl]-3-methyl-6-[6-(1-piperazinyl)-3-pyridinyl]-4-indolecarboxamide Chemical compound C1=C2N([C@@H](C)CC)C=C(C)C2=C(C(=O)NCC=2C(NC(C)=CC=2C)=O)C=C1C(C=N1)=CC=C1N1CCNCC1 FKSFKBQGSFSOSM-QFIPXVFZSA-N 0.000 claims abstract description 17
- BCFKACXAIBEPKR-UHFFFAOYSA-N 2-[3-[2-[3-fluoro-4-(4-methylpiperazin-1-yl)anilino]-5-methyl-7h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl]phenyl]acetonitrile Chemical compound C1CN(C)CCN1C(C(=C1)F)=CC=C1NC1=NC(C=2C=C(CC#N)C=CC=2)=C(C(C)=CN2)C2=N1 BCFKACXAIBEPKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- LBSMEKVVMYSTIH-UHFFFAOYSA-N HA15 Chemical compound C1=CC=C2C(N(C)C)=CC=CC2=C1S(=O)(=O)NC(C=1)=CC=CC=1C1=CSC(NC(C)=O)=N1 LBSMEKVVMYSTIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 230000008029 eradication Effects 0.000 claims abstract description 9
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical class CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 27
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 10
- DNVXATUJJDPFDM-KRWDZBQOSA-N JQ1 Chemical compound N([C@@H](CC(=O)OC(C)(C)C)C1=NN=C(N1C=1SC(C)=C(C)C=11)C)=C1C1=CC=C(Cl)C=C1 DNVXATUJJDPFDM-KRWDZBQOSA-N 0.000 claims description 9
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 7
- -1 2 - ((3,5-dimethyl-1H-pyrrol-2-yl) methylene) (3-methoxy-2H-pyrrol-5-yl) -1H-indole methanesulfonate Chemical compound 0.000 claims description 5
- 125000002147 dimethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])N(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 21
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 97
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 37
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 27
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 23
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 21
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 21
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 12
- 108091005625 BRD4 Proteins 0.000 description 11
- 102100029895 Bromodomain-containing protein 4 Human genes 0.000 description 11
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 11
- 108010016200 Zinc Finger Protein GLI1 Proteins 0.000 description 11
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 11
- 102100035535 Zinc finger protein GLI1 Human genes 0.000 description 9
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 9
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 9
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 9
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 9
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 9
- 108700041152 Endoplasmic Reticulum Chaperone BiP Proteins 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 8
- 230000004900 autophagic degradation Effects 0.000 description 8
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 8
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 8
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 8
- 102000013760 Microphthalmia-Associated Transcription Factor Human genes 0.000 description 7
- 108010050345 Microphthalmia-Associated Transcription Factor Proteins 0.000 description 7
- 102100026662 Delta and Notch-like epidermal growth factor-related receptor Human genes 0.000 description 6
- 102100021451 Endoplasmic reticulum chaperone BiP Human genes 0.000 description 6
- 101150112743 HSPA5 gene Proteins 0.000 description 6
- 101001056180 Homo sapiens Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1 Proteins 0.000 description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 description 6
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 6
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 229940125431 BRAF inhibitor Drugs 0.000 description 5
- 102100026539 Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1 Human genes 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 5
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 description 5
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 5
- 230000001973 epigenetic effect Effects 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 5
- 102100021569 Apoptosis regulator Bcl-2 Human genes 0.000 description 4
- 102000001805 Bromodomains Human genes 0.000 description 4
- 108050009021 Bromodomains Proteins 0.000 description 4
- 244000060234 Gmelina philippensis Species 0.000 description 4
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 4
- 101000971171 Homo sapiens Apoptosis regulator Bcl-2 Proteins 0.000 description 4
- 101000984753 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase B-raf Proteins 0.000 description 4
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 4
- 102000016397 Methyltransferase Human genes 0.000 description 4
- 108010088665 Zinc Finger Protein Gli2 Proteins 0.000 description 4
- 102100035558 Zinc finger protein GLI2 Human genes 0.000 description 4
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 4
- 102100039788 GTPase NRas Human genes 0.000 description 3
- 108010036115 Histone Methyltransferases Proteins 0.000 description 3
- 102000011787 Histone Methyltransferases Human genes 0.000 description 3
- 101000744505 Homo sapiens GTPase NRas Proteins 0.000 description 3
- 108010000597 Polycomb Repressive Complex 2 Proteins 0.000 description 3
- 102000002272 Polycomb Repressive Complex 2 Human genes 0.000 description 3
- 101100111629 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) KAR2 gene Proteins 0.000 description 3
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 102100027103 Serine/threonine-protein kinase B-raf Human genes 0.000 description 3
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 3
- 230000003127 anti-melanomic effect Effects 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 101150028578 grp78 gene Proteins 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 229960003862 vemurafenib Drugs 0.000 description 3
- GPXBXXGIAQBQNI-UHFFFAOYSA-N vemurafenib Chemical compound CCCS(=O)(=O)NC1=CC=C(F)C(C(=O)C=2C3=CC(=CN=C3NC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)=C1F GPXBXXGIAQBQNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 3
- ZVAGBRFUYHSUHA-LZOXOEDVSA-N (2z)-2-[(5z)-5-[(3,5-dimethyl-1h-pyrrol-2-yl)methylidene]-4-methoxypyrrol-2-ylidene]indole;methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O.COC1=C\C(=C/2N=C3C=CC=CC3=C\2)N\C1=C/C=1NC(C)=CC=1C ZVAGBRFUYHSUHA-LZOXOEDVSA-N 0.000 description 2
- ZVAGBRFUYHSUHA-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[(3,5-dimethyl-1h-pyrrol-2-yl)methylidene]-4-methoxypyrrol-2-ylidene]indole;methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O.COC1=CC(=C2N=C3C=CC=CC3=C2)NC1=CC=1NC(C)=CC=1C ZVAGBRFUYHSUHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000007067 DNA methylation Effects 0.000 description 2
- 102100033636 Histone H3.2 Human genes 0.000 description 2
- 102100038970 Histone-lysine N-methyltransferase EZH2 Human genes 0.000 description 2
- 101001028782 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase EZH1 Proteins 0.000 description 2
- 101000882127 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase EZH2 Proteins 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 108091005682 Receptor kinases Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 2
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 2
- 102100025093 Zinc fingers and homeoboxes protein 2 Human genes 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 239000013000 chemical inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 208000030381 cutaneous melanoma Diseases 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 206010012818 diffuse large B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 2
- 206010013663 drug dependence Diseases 0.000 description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 2
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 2
- 229940121647 egfr inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 238000009162 epigenetic therapy Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 239000002829 mitogen activated protein kinase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 2
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 2
- 108091008819 oncoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000027450 oncoproteins Human genes 0.000 description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 201000003708 skin melanoma Diseases 0.000 description 2
- 230000008410 smoothened signaling pathway Effects 0.000 description 2
- 208000011117 substance-related disease Diseases 0.000 description 2
- SUVMJBTUFCVSAD-UHFFFAOYSA-N sulforaphane Chemical compound CS(=O)CCCCN=C=S SUVMJBTUFCVSAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- SUVMJBTUFCVSAD-JTQLQIEISA-N 4-Methylsulfinylbutyl isothiocyanate Natural products C[S@](=O)CCCCN=C=S SUVMJBTUFCVSAD-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 4-[[(3ar,5ar,5br,7ar,9s,11ar,11br,13as)-5a,5b,8,8,11a-pentamethyl-3a-[(5-methylpyridine-3-carbonyl)amino]-2-oxo-1-propan-2-yl-4,5,6,7,7a,9,10,11,11b,12,13,13a-dodecahydro-3h-cyclopenta[a]chrysen-9-yl]oxy]-2,2-dimethyl-4-oxobutanoic acid Chemical compound N([C@@]12CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@H]5C(C)(C)[C@@H](OC(=O)CC(C)(C)C(O)=O)CC[C@]5(C)[C@H]4CC[C@@H]3C1=C(C(C2)=O)C(C)C)C(=O)C1=CN=CC(C)=C1 QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 0.000 description 1
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 108010063104 Apoptosis Regulatory Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010565 Apoptosis Regulatory Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000182988 Assa Species 0.000 description 1
- 239000012664 BCL-2-inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940088617 BET protein inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102100021663 Baculoviral IAP repeat-containing protein 5 Human genes 0.000 description 1
- 102000051485 Bcl-2 family Human genes 0.000 description 1
- 108700038897 Bcl-2 family Proteins 0.000 description 1
- 102100021334 Bcl-2-related protein A1 Human genes 0.000 description 1
- 229940123711 Bcl2 inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010048909 Boredom Diseases 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- JWBOIMRXGHLCPP-UHFFFAOYSA-N Chloditan Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C(C(Cl)Cl)C1=CC=C(Cl)C=C1 JWBOIMRXGHLCPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 101000876610 Dictyostelium discoideum Extracellular signal-regulated kinase 2 Proteins 0.000 description 1
- 229940126152 EZH2 methyltransferase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101150022345 GAS6 gene Proteins 0.000 description 1
- 229940116409 GLI1 inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101000894929 Homo sapiens Bcl-2-related protein A1 Proteins 0.000 description 1
- 101001052493 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000973211 Homo sapiens Nuclear factor 1 B-type Proteins 0.000 description 1
- 101000572986 Homo sapiens POU domain, class 3, transcription factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001123298 Homo sapiens PR domain zinc finger protein 14 Proteins 0.000 description 1
- 101100369992 Homo sapiens TNFSF10 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 208000022120 Jeavons syndrome Diseases 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 229940124647 MEK inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102100024193 Mitogen-activated protein kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 102100022165 Nuclear factor 1 B-type Human genes 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 239000012828 PI3K inhibitor Substances 0.000 description 1
- 102100026459 POU domain, class 3, transcription factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100028974 PR domain zinc finger protein 14 Human genes 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 108010022429 Polycomb-Group Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012425 Polycomb-Group Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700040121 Protein Methyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 102000055027 Protein Methyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 101150043341 Socs3 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000000102 Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck Diseases 0.000 description 1
- 102000058015 Suppressor of Cytokine Signaling 3 Human genes 0.000 description 1
- 108700027337 Suppressor of Cytokine Signaling 3 Proteins 0.000 description 1
- 108010002687 Survivin Proteins 0.000 description 1
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 108700012411 TNFSF10 Proteins 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100024598 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 10 Human genes 0.000 description 1
- 102000009524 Vascular Endothelial Growth Factor A Human genes 0.000 description 1
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 208000020990 adrenal cortex carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000007128 adrenocortical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 1
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 108010023337 axl receptor tyrosine kinase Proteins 0.000 description 1
- 108700041737 bcl-2 Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229940125763 bromodomain inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000003560 cancer drug Substances 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000006369 cell cycle progression Effects 0.000 description 1
- 230000004709 cell invasion Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 230000006364 cellular survival Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 238000011254 conventional chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960002465 dabrafenib Drugs 0.000 description 1
- BFSMGDJOXZAERB-UHFFFAOYSA-N dabrafenib Chemical compound S1C(C(C)(C)C)=NC(C=2C(=C(NS(=O)(=O)C=3C(=CC=CC=3F)F)C=CC=2)F)=C1C1=CC=NC(N)=N1 BFSMGDJOXZAERB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 230000000385 effect on melanoma Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000006718 epigenetic regulation Effects 0.000 description 1
- 230000007705 epithelial mesenchymal transition Effects 0.000 description 1
- QTTMOCOWZLSYSV-QWAPEVOJSA-M equilin sodium sulfate Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4C3=CCC2=C1 QTTMOCOWZLSYSV-QWAPEVOJSA-M 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000004547 gene signature Effects 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 108010017007 glucose-regulated proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 201000000459 head and neck squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000009459 hedgehog signaling Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 231100000225 lethality Toxicity 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 229960000350 mitotane Drugs 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 229960005554 obatoclax mesylate Drugs 0.000 description 1
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 1
- 229940043441 phosphoinositide 3-kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000001126 phototherapy Methods 0.000 description 1
- 230000029279 positive regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 230000001686 pro-survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 102000016914 ras Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010014186 ras Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 1
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000003660 reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 102200055464 rs113488022 Human genes 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 230000009211 stress pathway Effects 0.000 description 1
- 229960005559 sulforaphane Drugs 0.000 description 1
- 235000015487 sulforaphane Nutrition 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011885 synergistic combination Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 150000003892 tartrate salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 108091006106 transcriptional activators Proteins 0.000 description 1
- 108091006107 transcriptional repressors Proteins 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940121358 tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000005483 tyrosine kinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 150000004917 tyrosine kinase inhibitor derivatives Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
- A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
- A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/425—Thiazoles
- A61K31/426—1,3-Thiazoles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
- A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
- A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
- A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
- A61K31/5517—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine condensed with five-membered rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. imidazobenzodiazepines, triazolam
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Vynález řeší farmaceutický přípravek pro použití k léčení maligního melanomu obsahující trojkombinaci účinných látek, kterými jsou GANT61, obatoclax, s výhodou jeho mezylátovou sůl, a látka vybraná ze skupiny sestávající z (+)-JQl, SGI-7079, GSK343, GSK126, HA15, přičemž koncentrace účinných látek v dané trojkombinaci potřebných pro eradikaci nádorových buněk je následující: a) GANT61 10 až 20 μmol/l; b) obatoclax 150 až 300 nmol/l; cl) (+)-JQl 125 až 500 nmol/l; c2) SGI-7079 125 až 500 nmol/l; c3) GSK343 0,25 až 1,0 μmol/l; c4) GSK126 25 až 100 nmol/l; a c5) HA15 2,5 až 10 μmol/l. Všechny trojkombinace jsou velmi účinné v pokusech na buněčných kulturách lidských melanomových buněk, kdy došlo k eradikaci všech nádorových buněk do 7 dnů po aplikaci.
Description
Farmaceutický přípravek pro léčení maligního melanomu
Oblast techniky
Vynález se týká farmaceutického přípravku pro léčení maligního melanomu kombinací tří známých účinných látek. V přihlášce obecně je řešena problematika cílené léčby nádorových buněk. Konkrétně je řešena otázka zahubení buněk u jednoho typu nádoru (melanomu) synergickou kombinací účinných látek, které jsou dále v přihlášce popsány.
Dosavadní stav techniky
Cílená léčba nádorových onemocnění znamená léčbu účinnou chemickou látkou (popř. látkami), schválenými pro použití v humánní medicíně státním orgánem, např. americkým úřadem FDA (Food and Drug Administration), nebo nadnárodní agenturou, např. EMEA. V České republice je samozřejmě pro léčebné použití účinných látek nutný též souhlas Státního ústavu pro kontrolu léčiv (SUKL). Dosud byla při cílené léčbě i v klinických studiích fáze I-IV (které léčbě těsně předcházejí) používána v naprosté většině pouze jedna sloučenina, např. inhibitor některé buněčné signální dráhy, inhibitor funkce mutovaného onkogenu, inhibitor epigenetické regulace, inhibitor antiapoptotických proteinů apod. V současné době existuje již přes 100 000 různých chemických inhibitorů, které mají alespoň menší (avšak statisticky signifikantní) negativní účinek na růst nádorových buněk (či přímo buňky usmrcují převážně pomocí apoptózy) v experimentálním testování. Využito a zkoušeno (ať již experimentálně na buněčných kulturách, v preklinických studiích na imunodeficitních tzv. nudě myších i v klinických studiích přímo při léčbě pacientů s jakýmkoli nádorem) bylo však jen mnohem menší množství látek (cca 200-300).
Problémem klinického použití jedné látky je však rezistence, která vzniká zpravidla po několika měsících úspěšné léčby v podstatě vždy (výjimečně je nádor již od počátku inherentně rezistentní vůči léčivu, což se bez experimentálního ověření nepozná). Typická je např. rezistence proti vemurafenibu nebo dabrafenibu, které se používají pro inhibici aktivity mutovaného BRAF onkogenu. Mutace toho onkogenu (driver mutations) jsou u maligního melanomu přítomny asi v 60 % případů (1). Dalším typicky mutovaným onkogenem u melanomu je NRAS, a to asi u 15 % případů (2). Po proběhlé léčbě příslušným inhibitorem se nádor stává (vlivem mnoha mutací vzniklých během jeho progrese) rezistentní vůči původní léčbě a je dokonce závislý na podávaném léku (tento stav se označuje jako drug addiction) (3-5) a produkuje se proonkogenní sekretom podporující nádorový růst (6). Řešit tuto situaci se stává složitější než před podáním prvního léku. Obvykle se první lék pochopitelně vysadí a nasadí se druhý lék a pokračuje se v léčbě. Velmi často vznikne postupně rezistence i na tento druhý lék. Melanom je silně fenotypově heterogenní již od prvních stadií (7, 8) a heterogenita se postupně zvyšuje. Přítomnost mnoha různých subpopulací buněk tak způsobuje jeho rezistenci, neboť vůči podanému léčivu je senzitivní jen malá část subpopulací. Tato mikroheterogenita a plasticita fenotypu je obecně léčebným problémem i u jiných typů nádorů (9,10).
V poslední době je proto uplatňována tendence nasadit dva, popř. i více léků najednou již jako počáteční léčbu (11-13). Tyto léky by měly být pečlivě vybírány podle výsledků předchozího experimentálního výzkumu na buněčných kulturách stejného typu nádoru a na nude myších, což se většinou neděje a jsou často přímo prováděny klinické studie na pacientech. Kombinace dvou léčiv od začátku léčby prudce snižuje riziko vzniku rané rezistence. Ověřovat přímo pacientův nádor experimentálně na různé účinné kombinace léčiv v podstatě není čas, neboť toto ověření je časově náročné a nádor v pacientovi mezitím roste a zhoršuje se tak prognóza. Podle literatury byly při této tzv. cílené léčbě výjimečně zkoušeny při léčbě nádorů nebo experimentálně pouze dvojkombinace léčiv jako první léčba (11-15) (s lepším účinkem než monoléčba), nebyla však vyzkoušena trojkombinace. Při klasické chemoterapii se samozřejmě vždy použije kombinace necílených, obecně používaných protinádorových látek.
- 1 CZ 308400 B6
Citace pramenů:
1. Davies H, Bignell GR, Cox C et al.: Mutations of the BRAF gene in human cancer. Nature. 2002,417(6892):949-54.
2. Yan J, Wu X, Yu J et al.: Analysis of NRAS gain in 657 patients with melanoma and evaluation of its sensitivity to a MEK inhibitor. Eur J Cancer. 2018, 89:90-101.
3. Kong X, Kuilman T, Shahrabi A et al.: Cancer drug addiction is relayed by an ERK2- dependent phenotype switch. Nature. 2017, 550(7675):270-274.
4. Hong A, Moriceau G, Sun L et al: Exploiting Drug Addiction Mechanisms to Select against MAPKi-Resistant Melanoma. Cancer Discov. 2018, 8(1):74-93.
5. Sidaway P: Targeted therapies: Drug addiction revealed in BRAF and MEK inhibitor- resistant melanoma cells. Nat Rev Clin Oncol. 2015, 12(4): 189.
6. Obenauf AC, Zou Y, Ji AL: Therapy-induced tumour secretomes promote resistance and tumour progression. Nature. 2015, 520(7547):368-72.
7. Vandamme N, Berx G: Melanoma cells revive an embryonic transcriptional network to dictate phenotypic heterogeneity. Front Oncol. 2014, 4:352.
8. Tulchinsky E, Pringle JH, Caramel J et al.: Plasticity of melanoma and EMT-TF reprogramming. Oncotarget. 2014, 5(1): 1-2.
9. Meacham CE, Morrison SJ: Tumour heterogeneity and cancer cell plasticity. Nature. 2013, 501(7467):328-37.
10. Blakely CM, Watkins TBK, Wu W et al.: Evolution and clinical impact of co-occurring genetic alterations in advanced-stage EGFR-mutant lung cancers. Nat Genet. 2017, 49(12): 1693-1704.
11. Watanabe M, Umezawa K, Higashihara M et al. Combined inhibition of NF-κΒ and Bel-2 triggers synergistic reduction of viability and induces apoptosis in melanoma cells. Oncol Res. 2013,21 (4): 173-80.
12. Vlčková K, Réda J, Ondrušová L et al.: GLI inhibitor GANT61 kills melanoma cells and acts in synergy with obatoclax. Int J Oncol. 2016, 49(3):953-60.
13. Korkut A, Wang W, Demir E et al.: Perturbation biology nominates upstream-downstream drug combinations in RAF inhibitor resistant melanoma cells. Elife. 2015, 18;4.
14. Boshuizen J, Koopman LA, Krijgsman O et al.: Cooperative targeting of melanoma heterogeneity with an AXL antibody-drug conjugate and BRAF/MEK inhibitors. Nat Med. 2018, 24(2):203-212.
15. Dinavahi SS, Noory MA, Gowda R: Moving Synergistically Acting Drug Combinations to the Clinic by Comparing Sequential versus Simultaneous Drug Administrations. Mol Pharmacol. 2018, 93(3): 190-196.
16. Santini R, Vinci MC, Pandolfi S et al.: Hedgehog-GLI signaling drives self-renewal and tumorigenicity of human melanoma-initiating cells. Stem Cells. 2012, 30(9): 1808-18.
17. Faiáo-Flores F, Alves-Fernandes DK. Pennacchi PC et al.: Targeting the hedgehog transcription factors GLI1 and GLI2 restores sensitivity to vemurafenib-resistant human melanoma cells. Oncogene. 2017, 36(13): 1849-1861
18. Stecca B, Mas C, Clement V et al.: Melanomas require HEDGEHOG-GLI signaling regulated by interactions between GLI 1 and the RAS-MEK/AKT pathways. Proc Natl Acad Sci USA. 2007, 104(14):5895-900.
19. Vlčková K, Ondrušová L, Vachtenheim J et al: Survivin, a novel target of the Hedgehog/GLI signaling pathway in human tumor cells. Cell Death Dis. 2016, 7.1: e2048.
20. Haq R, Yokoyama S, Hawryluk EB et al.: BCL2A1 is a lineage-specific antiapoptotic melanoma oncogene that confers resistance to BRAF inhibition. Proc Natl Acad Sci USA. 2013,110(11):4321-6.
21. Nguyen M, Marcellus RC, Roulston A et al. Small molecule obatoclax (GX15-070) antagonizes MCL-1 and overcomes MCL-1-mediated resistance to apoptosis. Proc Natl Acad Sei USA. 2007, 104(49): 19512-7.
22. Segura MF, Fontanals-Cirera B, Gaziel-Sovran A et al.: BRD4 sustains melanoma proliferation and represents a new target for epigenetic therapy. Cancer Res. 2013,
-2CZ 308400 B6
73(20):6264-76.
23. Muller J, Krijgsman O, Tsoi J et al.: Low MITF/AXL ratio predicts early resistance to multiple targeted drugs in melanoma. Nat Commun. 2014, 5:5712
24. Tiffen JC, Gunatilake D, Gallagher SJ et al.: Targeting activating mutations of EZH2 leads to potent cell growth inhibition in human melanoma by derepression of tumor suppressor genes. Oncotarget. 2015, 6(29):27023-36.
25. Cerezo M, Lehraiki A, Millet A et al.: Compounds Triggering ER Stress Exert AntiMelanoma Effects and Overcome BRAF Inhibitor Resistance. Cancer Cell. 2016, 29(6):805819.
Podstata vynálezu:
Podstatou vynálezu je zjištění pěti různých kombinací tří látek - účinných protinádorových léčiv v jednom přípravku na buňkách v buněčné kultuře, namířené specificky proti lidskému malignímu melanomu (v pokročilejších stadiích II - IV). V těchto stádiích je další léčba téměř neúčinná (kromě imunoterapie, která však působí v malém procentu případů). Z dosavadního stavu techniky vyplývá, že pro účinnou léčbu je nutno eliminovat nádorové buňky v co nejkratším čase. Zjistili jsme, že všech pět účinných kombinací léčiv je schopno zcela eradikovat nádorové buňky max. do 5 dnů (viz dále obr. 2), tedy účinek testovaných kombinací látek byl mimořádně silný.
V této přihlášce vynálezu uvádíme trojkombinace chemických látek (5 různých trojkombinací), kdy základem jsou vždy dvě látky a jen třetí se ve všech kombinacích liší. Jejich účinek na buňky maligního melanomu je efektivní, i když se liší podle použité buněčné linie, a je velmi rychlý, neboť buňky jsou eradikovány i při nižších koncentracích látek nejpozději do 7 dnů. Testovali jsme kombinace jen cílených léčiv (nízkomolekulámích inhibitorů), nikoli např. kombinaci podání jedné chemické látky s imunologickou léčbou, fototerapií, radioterapií apod. Naším cílem tedy bylo zaútočit na nádorové buňky účinnými látkami, které jsou každá z jiné oblasti buněčné biologie a nejsou zaměřeny proti drive mutacím onkogenů, kdy je známo, že se vždy vytvoří rezistence. Pro účinnost léčby je důležité, aby byly eradikovány i subpopulace buněk, které jsou velmi invazivní a rekrutují se z nich tzv. nádorové kmenové buňky (cancer stem cells, CSC) (16) a metastatické buňky.
Základem naší látkové trojkobinace byl GANT61 a obatoclax. GANT61 je látka silně a specificky inhibující aktivitu faktorů GLI, které jsou efektory signální cesty Hedgehog (17-19), důležité pro progresi melanomu. Obatoclax je velmi silný inhibitor antiapoptotické rodiny genů BCL2 a inhibuje i antiapoptotický protein Mcl-1 (20,21). K tomuto základu dvou látek, bylo použito vždy jedné z pěti následujících látek. JQ1, což je velmi silný inhibitor aktivity epigenetického faktoru BRD4, důležitého pro progresi melanomu (22). Dalšími látkami byly SGI-7079, inhibitor AXL kinázy, která je přítomna v subpopulacích invazivních buněk melanomu (23). Inhibitory GSK323 a GSK126 působí podobně a jsou silnými inhibitory methyltransferázy EZH2 (součást polycomb repression 2 komplexu). EZH2 byl popsán jako důležitý epigenetický faktor při vývoji melanomu (24). HA 15 je látka popsaná jako velmi silně a specificky působící mechanismem stresu endoplasmatického retikula a mitochondrií na melanomové buňky (25).
Podstatou vynálezu je tedy farmaceutický přípravek pro použití k léčbě maligního melanomu obsahující kombinaci tří účinných látek
a) GANT61, tj. 2-[[3-[[2-(dimethylamino)fenyl]methyl]-2-pyridin-4-yl-l,3-diazinan-lyl]methyl] -N,N-dimethylanilin;
b) Obatoclax, tj. 2-(2-((3,5-dimethyl-lH-pyrrol-2-yl)methylen)-3-methoxy-2H-pyrrol-5-yl)IH-indol a
-3 CZ 308400 B6
c) látku vybranou ze skupiny sestávající z cl) (+)-JQl, tj. (S)-tert-butyl 2-(4-(4-chlorfenyl)-2,3,9-trimethyl-6H-thieno[3,2-f][l,2,4]triazolo [4,3 -a] [ 1,4] diazepin-6-yl)acetát;
c2) SGI-7079, tj. 2-(3-(2-((3-Fluoro-4-(4-methylpiperazin-l-yl)fenyl)amino)-5-methyl-7Hpyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)fenyl)acetonitril;
c3) GSK343, tj. N-[(6-methyl-2-oxo-4-propyl-lH-pyridin-3-yl)methyl]-6-[2-(4-methylpiperazin-1 -yl)pyridin-4-yl] -1 -propan-2-ylindazol-4-karboxamid;
c4) GSK126, tj. l-[(2S)-butan-2-yl]-N-[(4,6-dimethyl-2-oxo-lH-pyridin-3-yl)methyl]-3-methyl6-(6-piperazin-l-ylpyridin-3-yl)indol-4-karboxamid;
c5) HA15, tj. N-[4-[3-[[5-(dimethylamino)naftalen-l-yl]sulfonylamino]fenyl]-l,3-thiazol-2yl]acetamid.
Bylo zjištěno, že koncentrace účinných látek v dané trojkombinaci potřebných pro eradikaci nádorových buněk je následující: a) GANT61 10 až 20 pmol/l; b) obatoclax 150 až 300 nmol/1; cl) (+)-JQl 125 až 500 nmol/1; c2) SGI-7079 125 až 500 nmol/1; c3) GSK343 0,25 až 1,0 pmol/l; c4) GSK126 25 až 100 nmol/1; a c5) HA15 2,5 až 10 pmol/l.
K testování bylo použito 6 definovaných buněčných linií nádoru pro nejvyšší koncentrace účinných látek a 4 buněčné linie pro použití dvou nižších koncentrací účinných látek. Celkem bylo provedeno testování v rozsahu 3 koncentrací látek na všech pěti kombinacích. Bylo tedy dosaženo 15 výsledků. Navíc byly provedeny testy na kontrolních, nemelanomových liniích (buňky nádoru slinivky břišní), a to v jedné nejvyšší koncentraci ve všech pěti kombinacích.
Cílem řešení bylo nalézt vhodné kombinace léků, které jsou co nejúčinnější pro dosažení rychlé eradikace nádorových buněk, která je předpokladem pro úspěšnou cílenou léčbu. Koncentrace látek použité v přihlášce vynálezu jsou pravděpodobně použitelné i při humánním použití v nádorové tkáni (ověření vyžaduje další farmakologické studie již při klinickém zkoušení). Provedli jsme ještě dva experimenty, kdy koncentrace látek byly nižší než nejvyšší, a zjistili jsme, že snižováním koncentrace se dosáhne eradikace buněk jen u dvou buněčných linií, na další dvě linie jsou nejnižší koncentrace již neúčinné (obr. 5. a tabulka č. 2), účinná byla jen poslední trojkombinace (č. V).
Dalším cílem vynálezu byl požadavek, aby kombinace tří látek eradikovala všechny molekulární typy maligního melanomu, např. s mutacemi i bez mutací onkogenů BRAF, NRAS, RACI a dalších. Podobný přístup je u melanomu originální, stejně tak je originálních všech pět použitých kombinací cílených léčiv.
Zdůvodnění patentovatelnosti přihlašovaného řešení: Jednak je to z důvodu originality popsaných experimentálních výsledků jde o unikátní možnost použít uvedené látky (které byly vybrány na základě dlouholetého molekulárně-biologického výzkumu melanomu a možných cílů jeho léčby) při terapii melanomu. Uvedené trojkombinace biologicky aktivních chemických inhibitorů nebyly tedy nikdy k uvedenému účelu (ani k léčbě jiných nádorů) testovány (dle dostupné odborné literatury). Uvedení všech pěti trojkombinací v jednom vynálezu zdůvodňujeme chemickou podobností jednotlivých látek, jejich podobností z hlediska biologického negativního vlivu na buněčný růst a jejich mimořádné účinnosti ve všech kombinacích, zvi. v nejvyšších popsaných koncentracích.
Účinky vynálezu
Z obrazové části přihlášky vynálezu je zřejmé ubývání buněk obsahující ať již publikovanou
-4CZ 308400 B6 dvojkombinaci GANT61 + obatoclax (méně účinná kombinace) (obr. 1) nebo všech 5 trojkombinací. Pro srovnání jsou na obr. 3 ukázány i 4 druhy buněk nádorů slinivky břišní (při použití nej vyšší koncentrace látek, tj. experimenty č. 16-20, viz tabulka 2), na které působí látky jen nepatrně hůře než na buňky melanomu, pouze jedna pankreatická nádorová linie (PANC-1) je vůči substancím odolná. Použití nižších koncentrací látek na melanomové buňky (tabulka 3 exp. 6-10, a obr. 4) zvýšilo jejich odolnost a při nejnižší koncentraci látek (tabulka 2. exp. 11-15, a obr. 5) byly již 2 linie melanomu resistentní i 7. den (kromě 5. trojkombinace, která byla účinná u všech typů buněk), ale na 2 další linie trojkombinace působily a buňky byly eradikovány již 5. den (obr. 5).
Důvod pro výběr 2 základních popsaných látek: První dvě látky (sloučenina 1 a 2), tedy GANT61 a obatoclax, mají synergický účinek a vykazují tzv. syntetickou letalitu při jejich kombinovaném použití na melanomových buňkách (Vlčková K, Réda J, Ondrušová L et al.: GLI inhibitor GANT61 kills melanoma cells and acts in synergy with obatoclax. Int J Oncol. 2016, 49(3):95360). Proto byly zvoleny jako základ každé z pěti trojkombinací. K těmto dvěma sloučeninám byla přidána další 1 látka. Bylo použito 5 dalších účinných látek a tím se dosáhlo i vytvoření pěti různých směsí (koktejlů), které byly testovány v různých koncentracích, jak rychle eradikují melanomové buňky.
Zdůvodnění výběru dalších 5 použitých látek: Výběr látek vychází z našich mnohaletých zkušeností, experimentů a jejich výsledků u buněk maligního melanomu a z dostupných literárních údajů:
Sloučenina 3 ((+)-JQ 1): Jde o inhibitor tzv. BET bromodomén, který silně a specificky inhibuje BET doménu, která je obsažena v epigenetickém faktoru BRD4. JQ1 obecně působí jako inhibitor na mnoho nádorů včetně melanomu. Jeho extrémně silný účinek ukazuje na důležitost BRD4 faktoru při onkogenezi. Byl proto vybrán pro jeho velmi silný a specifický účinek na mnoho typů nádorových buněk vč. melanomu. BRD4 je onkogenní protein s rekurentní translokací u mnoha nádorů a kompetitivní vazba s JQ1 vytlačuje BRD4 onkoprotein z chromatinu.
Sloučenina 4 (SGI-7079): Jde o silný inhibitor protein kinázy AXL, která se v poslední době ukazuje jako marker invazivity a onkogenních vlastností melanomových buněk (Sensi M, Catani M, Castellano G, et al.: Human cutaneous melanomas lacking MITF and melanocyte differentiation antigens express a functional Axl receptor kinase. J Invest Dermatol. 2011, 131 (12):2448-57). Její hladina je zvýšena v subpopulacích s vysokou invazivitou a její zvýšení doprovází pokles klíčového transkripčního faktoru melanomu MITF (Muller J, Krijgsman O, Tsoi J. et al.: Low MITF/AXL ratio predicts early resistance to multiple targeted drugs in melanoma. Nat Commun. 2014, 5:5712).
Sloučenina 5 (GSK343): GSK343 je silný a selektivní inhibitor aktivity faktoru EZH2 (enhancer of zeste homologue 2). Je silně specifický pro EZH2 s 60x větší selektivitou inhibice oproti příbuznému proteinu EZH1, a má >1000x větší selektivitu oproti jiným histonmethyltransferázám. EZH2 je histon metyltransferáza, trimetylující histon 3 na lysinu 27 (H3K27me3), a je tedy typický epigenetický modulátor. EZH2 je podjednotka tzv. polycomb repressive complex 2 (PRC2). V nádorech včetně melanomu je nalézána vysoká hladina EZH2 a přítomnost H3K27me3 a inhibice EZH2 má výrazný vliv na snížení nádorové progrese melanomu (Gelato KA, Schóckel L, Klingbeil O et al.: Super-enhancers define a proliferative PGC-la-expressing melanoma subgroup sensitive to BET inhibition. Oncogene 2018, 37(4):512521).
Sloučenina 6 (GSK126): Tato sloučenina je podobně jako sloučenina 5 silným inhibitorem EZH2. GSK126 is je silný a selektivní inhibitor EZH2 methyltransferázy, rovněž více než lOOOx selektivnější pro EZH2 než pro 20 jiných lidských methyltransferáz. Použili jsme tedy tuto látku jako druhou alternativu s podobnými chemickými a biologickými vlastnostmi jako má látka 5.
-5 CZ 308400 B6 (EZH2 působí jako transkripční aktivátor nebo represor, v závislosti na buněčném kontextu.)
Sloučenina 7 (HA15): Tato látka se ukázala v jedné publikované práci jako mimořádně účinná proti melanomovým buňkám (Cerezo M, Lehraiki A, Millet A. et al.: Compounds Triggering ER Stress Exert Anti-Melanoma Effects and Overcome BRAF Inhibitor Resistance. Cancer Cell 2016, 29(6):805-819). Látka překonává známou rezistenci způsobenou aplikací inhibitoru BRAF (mutovaný a aktivovaný onkogen u cca 60 % případů melanomu). Specifickým cílem této látky je chaperonový komplex BÍP/GRP78/HSPA5 a působení HA 15 v buňce má za následek stres endoplasmatického retikula s následnou buněčnou smrtí autofagií a apoptózou (Cerezo M, Rocchi S.: New anti-cancer molecules targeting HSPA5/BIP to induce endoplasmic reticulum stress, autophagy and apoptosis. Autophagy. 2017, 13(1):216-217).
Popis použitých chemických sloučenin (účinných látek). (Citace jsou pouze vhodným výběrem 5 citací pro každou látku z velkého množství existujících citací o příslušné sloučenině.)
Sloučenina 1:
Triviální název: GANT61, synonymum: NSC136476
Chemický název: 2-[[3-[[2-(dimethylamino)fenyl]methyl]-2-pyridin-4-yl-l,3-diazinan-lyl]methyl] -N,N-dimethylanilin
Sumární vzorec: C27H35N5, molekulová hmotnost: 429,6
Strukturní vzorec:
Farmakologický účinek (dle selleckchem.com): GANT61 je inhibitor GLI1- i GLI2- indukované transkripce tím, že znemožňuje vazbu těchto transkripčních faktorů na DNA.
Příklady biologického účinku in vitro nebo in vivo (dle selleckchem.com): GANT61 je inhibitor fúnkce GLI1- a GLI2-indukované transkripce, inhibuje signální dráhu Hedgehog s IC50 5 μΜ v GLIl-exprimujících HEK293T buňkách.
Citace (GANT61):
- Vlčková K, Réda J, Ondrušová L et al.: GLI inhibitor GANT61 kills melanoma cells and acts in synergy with obatoclax. Int J Oncol. 2016, 49(3):953-60 (12);
- Mazumdar T, DeVecchio J, Shi T et al.: Hedgehog signaling drives cellular survival in human colon carcinoma cells. Cancer Res. 2011, 71 (3): 1092-102;
- Wickstróm M, Dyberg C, Shimokawa T, et al.: Targeting the hedgehog signal transduction pathway at the level of GLI inhibits neuroblastoma cell growth in vitro and in vivo. Int J Cancer. 2013, 132(7): 1516-24;
- Faiáo-Flores F, Alves-Fernandes DK, Pennacchi PC, et al.: Targeting the hedgehog transcription factors GLI1 and GLI2 restores sensitivity to vemurafenib-resistant human melanoma cells. Oncogene. 2017, 36(13): 1849-1861 (17);
- Geng L, Lu K, Li P, et al.: GLI1 inhibitor GANT61 exhibits antitumor efficacy in T-cell lymphoma cells through down-regulation of p-STAT3 and SOCS3. Oncotarget. 2017,
-6CZ 308400 B6
8(30):48701 -48710.
Sloučenina 2:
Triviální název: Obatoclax mezylát, synonymum: GX15-070
Chemický název: 2-(2-((3,5-Dimethyl-lH-pyrrol-2-yl)methylen)-3-methoxy-2H-pyrrol-5-yl)-lHindol methansulfonát
Sumární vzorec: C2oH19N3O.CH4O3S, molekulová hmotnost: 413,49
Strukturní vzorec:
X x____ q' 'T
H
Farmakologický účinek (dle selleckchem.com): antagonista BCL-2 s Ki, 0,22 μΜ. Obatoclax je BH3 mimetikum vázající se a inhibující široké spektrum členů BCL-2 rodiny, a to BCL-2, Bel- xL, a rovněž na Mcl-1.
Příklady biologického účinku in vitro nebo in vivo (dle selleckchem.com): Obatoclax kompletně inhibuje oživení funkce Mcl-1 vlivem Bak v konc. 5 μΜ v SK-MEL-5 buňkách a překonává rezistenci k ABT-3 73-indukované apoptóze způsobené vlivem inhibice Mcl-1 v KB/Bcl-2 buňkách.
Je antagonistou antiapoptotického faktoru BCL-2 (Ki je 0,22 μΜ v nebuněčném pokusu). Obatoclax se zde používá ve formě mezylátové soli, v literatuře lze najít i odkazy na tartrátovou sůl (sůl kyseliny vinné) nebo hydrochloridovou sůl.
Citace (Obatoclax):
- Huang S, Okumura K, Sinicrope FA.: BH3 mimetic obatoclax enhances TRAIL-mediated apoptosis in human pancreatic cancer cells. Clin Cancer Res. 2009, 15(1): 150-9;
- Vlčková K, Réda J, Ondrušová L et al.: GLI inhibitor GANT61 kills melanoma cells and acts in synergy with obatoclax. Int J Oncol. 2016, 49(3):953-60 (12);
- Nguyen M, Marcellus RC, Roulston A, et al.: Small molecule obatoclax (GX15-070) antagonizes MCL-1 and overcomes MCL-1-mediated resistance to apoptosis. Proc Natl Acad Sci USA. 2007, 104(49): 19512-7 (21);
- Yazbeck VY, Li C, Grandis JR, et al.: Single-agent obatoclax (GX15-070) potently induces apoptosis and pro-survival autophagy in head and neck squamous cell carcinoma cells. Oral Oncol. 2014, 50(2): 120-7;
- Koehler BC, Scherr AL, Lorenz S, et al.: Pan-Bcl-2 inhibitor obatoclax delays cell cycle progression and blocks migration of colorectal cancer cells. PLoS One. 2014, 9(9):e 106571.
Sloučenina 3:
Triviální název: (+)-JQ 1, synonymum: —
-7CZ 308400 B6
Chemický název: (S)-tert-butyl 2-(4-(4-chlorfenyl)-2,3,9-trimethyl-6H-thieno[3,2-f][l,2,4]triazolo [4,3 -a] [ 1,4] diazepin-6-yl)acetát
Sumární vzorec: C23H25CIN4O2S, molekulová hmotnost: 456,99
Strukturní vzorec:
Farmakologický účinek (dle selleckchem.com): (+)-JQl je inhibitor tzv. BET bromodomén, IC50=77 nM / 33 nM pro BRD4(l/2) protein in vitro, vazba je specifická pouze na rodinu BET proteinů.
Příklady biologického účinku in vitro nebo in vivo (dle selleckchem.com): (+)-JQl (500 nM) oslabuje rychlou proliferaci NMC 797 a Per403 buněk v kultuře. (+)-JQl (50 mg/kg) inhibuje růst nádorů z NMC 797 buněk na nude myších.
Látka je inhibitorem BET bromodomén, s IC50 77 nM a 33 nM for BRD4(1), resp. BRD4(2) v nebuněčném pokusu in vitro.
Citace (JQ1):
- Shao Q, Kannan A, Lin Z, et al.: BET protein inhibitor JQ1 attenuates Myc-amplified MCC tumor growth in vivo. Cancer Res. 2014, 74(23):7090-102;
- Korkut A, Wang W, Demir E. et al.: Perturbation biology nominates upstream-downstream drug combinations in RAF inhibitor resistant melanoma cells. Elite. 2015, 18;4;
- De Raedt T, Beert E, Pasmant E, et al.: PRC2 loss amplifies Ras-driven transcription and confers sensitivity to BRD4-based therapies. Nature. 2014, 514(7521):247-51;
- Segura MF, Fontanals-Cirera B, Gaziel-Sovran A et al.: BRD4 sustains melanoma proliferation and represents a new target for epigenetic therapy. Cancer Res. 2013, 73(20):6264-76 (22);
- Filippakopoulos P, Qi J, Picaud S et al.: Selective inhibition of BET bromodomains. Nature. 2010,468(7327): 1067-73.
Sloučenina 4:
Triviální název: SGI-7079, synonymum: CFIEMBL3809908;
Chemický název: 2-(3-(2-((3 -Fluoro-4-(4-methylpiperazin-1 -yl)fenyl)amino)-5 -methyl-7Hpyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)fenyl)acetonitril
Sumární vzorec: C26H26FN7, molekulová hmotnost: 455,53
Strukturní vzorec:
Farmakologický účinek (dle selleckchem.com): nový selektivní inhibitor tyrosin kinázy AXL (Ki = 5,7nM).
Příklad biologického účinku in vitro nebo in vivo (dle selleckchem.com): je účinný (Ki=5,7 nM) v inhibici aktivity kinázy AXL in vitro a inhibuje Gas6 ligandem-indukovanou tyrosinovou fosforylaci lidské AXL exprimované v HEK293T buňkách (EC50=100 nM), inhibuje růst nádorů v závislosti na koncentraci.
Citace (SGI-7079):
- Byers LA, Diao L, Wang J, et al.: An epithelial-mesenchymal transition gene signature predicts resistance to EGFR and PI3K inhibitors and identifies Axl as a therapeutic target for overcoming EGFR inhibitor resistance. Clin Cancer Res. 2013, 19(l):279-90;
- Myers SH, Brunton VG, Unciti-Broceta A: AXL Inhibitors in Cancer: A Medicinal Chemistry Perspective. J Med Chem. 2016 Apr 28;59(8):3593-608;
- Sensi M, Catani M, Castellano G, et al.: Human cutaneous melanomas lacking MITF and melanocyte differentiation antigens express a functional Axl receptor kinase. J Invest Dermatol. 2011, 131 (12):2448-57;
- Muller J, Krijgsman O, Tsoi J. et al.: Low MITF/AXL ratio predicts early resistance to multiple targeted drugs in melanoma. Nat Commun. 2014, 5:5712 (23);
- Miller MA, Oudin MJ, Sullivan RJ. Et al.: Reduced Proteolytic Shedding of Receptor Tyrosine Kinases Is a Post-Translational Mechanism of Kinase Inhibitor Resistance. Cancer Discov. 2016, 6(4):382-99.
Sloučenina 5:
Triviální název: GSK343, synonymum: 1346704-33-3
Chemický název: N-[(6-methyl-2-oxo-4-propyl-lH-pyridin-3-yl)methyl]-6-[2-(4-methylpiperazin-1 -yl)pyridin-4-yl] -1 -propan-2-ylindazol-4-karboxamid
Sumární vzorec: C31H39N7O2, molekulová hmotnost: 541,69
Strukturní vzorec:
Farmakologický účinek (dle selleckchem.com): silný a selektivní inhibitor EZH2 proteinu s IC50=4 nM v in vitro reakci, ukazující 60x větší selektivitu oproti EZH1, a je lOOOx více
-9CZ 308400 B6 selektivní pro EZH2 i ve srovnání s 20 jinými lidskými methyltransferázami. Příklad biologického účinku in vitro nebo in vivo (dle selleckchem.com): Inhibuje trimethylaci lysinu H3K27 (H3K27me3) s IC50= 174 nM v nádorových buňkách prsní žlázy HCC1806, silně inhibuje buněčnou proliferaci v nádorových buňkách prsní žlázy a prostaty (nádorová linie prostaty LNCaP je nejvíce sensitivní k GSK343, s IC50=2,9 μΜ).
Citace (GSK343):
- Yu H, Ma M, Yan J. et al.: Identification of coexistence of BRAF V600E mutation and EZH2 gain specifically in melanoma as a promising target for combination therapy. J Transl Med. 2017, 15(1):243;
- Poirier JT, Gardner EE, Connis N. et al.: DNA methylation in small cell lung cancer defines distinct disease subtypes and correlates with high expression of EZH2. Oncogene. 2015, 34(48): 5 869-78;
- Fane ME, Chhabra Y, Hollingsworth DEJ et al.: NFIB Mediates BRN2 Driven Melanoma Cell Migration and Invasion Through Regulation of EZH2 and MITF. EBioMedicine. 2017, 16:63-75;
- Souroullas GP, Jeck WR. Parker JS et al.: An oncogenic Ezh2 mutation induces tumors through global redistribution of histone 3 lysine 27 trimethylation. Nat Med. 2016, 22(6):63240;
- Mahmoud F, Shields B, Makhoul I et al.: Role of EZH2 histone methyltrasferase in melanoma progression and metastasis. Cancer Biol Ther. 2016, 17(6):579-91.
Sloučenina 6:
Triviální název: GSK126, synonymum: 1346574-57-9
Chemický název: l-[(2S)-butan-2-yl]-N-[(4,6-dimethyl-2-oxo-lH-pyridin-3-yl)methyl]-3methyl-6-(6-piperazin-l-ylpyridin-3-yl)indol-4-karboxamid
Sumární vzorec: C3iH3sN6O2, molekulová hmotnost: 526,87
Strukturní vzorec:
Farmakologický účinek (dle selleckchem.com): účinný, velmi selektivní inhibitor EZH2 methyltransferázy s IC50=9,9 nM, >1000x více selektivní pro EZH2 ve srovnání s 20 jinými lidskými methyltransferázami.
Příklad biologického účinku in vitro nebo in vivo (dle selleckchem.com): silně inhibuje methylaci na H3K27me3 (trimethylace lysinu 27 v histonu H3) a H3K27me3 v EZH2 divokých i mutantních DLBCL buňkách. Efektivně inhibuje proliferaci EZH2 mutantních DLBCL buněčných linií a indukuje transkripční aktivaci cílových genů pro EZH2 v senzitivních buněčných liniích. V H2087 buňkách inhibuje expresi VEGF-A a fosforylované kinázy Ser(473)AKT, čímž způsobuje inhibici buněčné proliferace, migrace ametastázování.
- 10 CZ 308400 B6
Citace (GSK126):
- McCabe MT, Ott HM, Ganji G at al.: EZH2 inhibition as a therapeutic strategy for lymphoma with EZH2-activating mutations. Nature 2012, 492(7427): 108-12;
- Tiffen J, Wilson S, Gallagher SJ et al.: Somatic Copy Number Amplification and Hyperactivating Somatic Mutations of EZH2 Correlate With DNA Methylation and Drive Epigenetic Silencing of Genes Involved in Tumor Suppression and Immune Responses in Melanoma. Neoplasia. 2016, 18(2): 121-32;
- Fisher ML, Adhikary G, Grun D et al.: The Ezh2 polycomb group protein drives an aggressive phenotype in melanoma cancer stem cells and is a target of diet derived sulforaphane. Mol Carcinog. 2016, 55(12):2024-2036;
- Tiffen JC, Gunatilake D, Gallagher SJ et al.: Targeting activating mutations of EZH2 leads to potent cell growth inhibition in human melanoma by derepression of tumor suppressor genes. Oncotarget. 2015, 6(29):27023-36 (24);
- Ott HM, Graves AP, Pappalardi MB et al.: A687V EZH2 is a driver of histone H3 lysine 27 (H3K27) hypertrimethylation. Mol Cancer Ther. 2014, 13(12):3062-73.
Sloučenina 7:
Triviální název: HA15, synonymum: 1609402-14-3
Chemický název: N-[4-[3-[[5-(dimethylamino)naftalen-l-yl]sulfonylamino]fenyl]-l,3-thiazol-2yl]acetamid
Sumární vzorec: C23H22N4O3S2, molekulová hmotnost: 466,58
Strukturní vzorec:
Farmakologický účinek (dle selleckchem.com): HA15 je molekula specificky inhibující proteinový complex BÍP/GRP78/HSPA5.
Přiklad biologického účinku in vitro nebo in vivo (dle selleckchem.com): HA 15 indukuje stress endoplasmatického retikula vedoucí k buněčné smrti in vitro a překonává rezistenci vůči BRAF inhibitoru v melanomových buňkách. IC50 nebylo zatím stanoveno.
Citace (HA 15):
- Cerezo M, Lehraiki A, Millet A. et al.: Compounds Triggering ER Stress Exert AntiMelanoma Effects and Overcome BRAF Inhibitor Resistance. Cancer Cell 2016, 29(6):805819;
- Cerezo M, Rocchi S.: New anti-cancer molecules targeting HSPA5/BIP to induce endoplasmic reticulum stress, autophagy and apoptosis. Autophagy. 2017, 13( 1):216-217;
- Cerezo M, Rocchi S: New anti-cancer molecules targeting HSPA5/BIP to induce endoplasmic
- 11 CZ 308400 B6 reticulum stress, autophagy and apoptosis. Autophagy. 2017, 13( 1):216-217;
- Ruggiero C, Doghman-Bouguerra M, Ronco C et al.: The GRP78/BIP inhibitor HA 15 synergizes with mitotane action against adrenocortical carcinoma cells through convergent activation of ER stress pathways. Mol Cell Endocrinol. 201, pii: S0303-7207(18):30070-4;
- Moriya C, Taniguchi H, Nagatoishi S et al.: PRDM14 directly interacts with heat shock proteins HSP90a and glucose-regulated protein 78. Cancer Sci. 201, 109(2):373-383.
Objasnění výkresů
Obr. 1: Publikovaná (citace (12)) experimentální terapie v buněčné kultuře dvojkombinací sloučenin GANT61 a obatoclax (který byl v tomto experimentu v koncentraci pouze 100 nM, na rozdíl od trojkombinací, a neměl zde jako samotná aplikovaná látka téměř žádný účinek na melanomové buňky). Obrázek převzatý z publikace (12).
Obr. 2: Experimenty provedené při nejvyšších koncentracích (nepublikovaný experiment). Lze z něj jasně usoudit, že všemi pěti trojkombinacemi protinádorových sloučenin při nejvyšších použitých koncentracích (tabulka 2, experimenty č. 1-5) bylo všech 6 typů melanomových buněk v kultuře zcela eradikováno ve velmi krátké době (max. po pěti dnech). Označení K. 1, K. 2, atd. v obr. 2 vždy značí číslo použité trojkombinace (K jako kombinace nebo koktejl). Toto je tedy hlavní (a velmi vydařený) výsledek experimentální části přihlášky.
Obr. 3: Srovnání účinnosti použitých trojkombinací na nádorových buňkách slinivky břišní (nepublikovaný experiment). Tyto buňky byly o něco více rezistentní při nejvyšší koncentraci látek (další koncentrace nebyly testovány), zcela rezistentní byla buněčná linie PANC-1, která byla eradikována pouze první trojkombinací až 7. den po její aplikaci na buňky. Označení K. 1, K. 2, atd. v obr. 3 vždy značí číslo použité trojkombinace.
Obr. 4: Experimenty provedené při středních koncentracích (nepublikovaný experiment). Lze z něj usoudit, že při středních použitých koncentracích látek (tabulka 2, exp. 6-10) se zhoršuje eradikace buněk a prodlužuje se doba jejich přežívání (kromě linie SK-MEL-3, která je velmi sensitivní). Nicméně s výjimkou buněčné linie SK-MEL-28 jsou i při těchto koncentracích všechny buňky eradikovány nejpozději 7. den experimentu, a to u všech pěti typů kombinací. Označení K. 1, K. 2, atd. v obr. 4 vždy značí číslo použité trojkombinace.
Obr. 5: Experimenty provedené při nejnižších koncentracích (nepublikovaný experiment). Lze z něj jasně usoudit, že v nejnižších použitých koncentracích látek (tabulka 2, exp. 11-15) trojkombinací protinádorových sloučenin byly u dvou buněčných linií melanomových buněk (501 mel a SK-MEL-3) buňky zcela eradikovány ve velmi krátké době (max. po pěti dnech), a to všechny buňky u všech pěti koktejl. Naopak dvě buněčné linie (MeWo a SK-MEL-28) již byly k aplikaci léčiv až do 7. dne rezistentní, kromě kombinace č. 5, kdy byly buňky eradikovány již 3., resp. 5. den experimentu. Označení K. 1, K 2 atd. v obr. 5 vždy značí číslo použité trojkombinace). Opět se ukázalo, že buněčná linie SK-MEL-3 je velmi sensitivní i k nízkým koncentracím látek.
Způsob provádění testů
Testování přežívání buněk po jednotlivých dnech bylo provedeno metodou tzv. colony forming assa. Buňky byly rozesety do jamek a po jejich přilnutí k plastikovému povrchu (všechny typy buněk byly adherentní buňky) byl další den považován za den 0, kdy byly přidány látkové kombinace. Další den byl pak označen den 1 atd. Analýza množství zbývajících buněk byla provedena ve dnech 1,3,5 a 7. Tmavá pole reprezentují přítomnost buněk, světlá pole ukazují na nepřítomnost buněk. Každá buněčná linie obsahuje kontroly, kam bylo přidáváno pouze rozpouštědlo (v levém sloupci na obr. 2-5, na obr. 1 jsou kontroly v horní řadě). Některé látky byly rozpuštěny v dimethylsulfoxidu (DMSO), některé v etanolu. Ke kontrolám byla tedy
- 12 CZ 308400 B6 přidávána jen směs DMSO/etanol 3:2. K buňkám byla vždy přidána 1/1000 objemu štočku (koncentrovaného zásobního roztoku) každé z trojkombinací látek. Výsledky byly kvantifikovány pomocí software ImageJ (hodnoty jsou ukázány v tabulkách č. 3-6 a ukazují stejně jako obrázky dostatečně zřejmě účinek látek). Kvantifikace obr. č. 1 je ukázána přímo v obrázku (jen hlavní čísla) a protože jde o obrázek převzatý z vydané publikace, je ponechán nezměněn. Z tabulek je zřejmé, že v prázdných polích již je rel. hodnota 0 nebo jen zcela nepatrně nad nulou (tzn. buňky byly látkami zničeny). V kontrolách, zvi. 7. den jsou relativní hodnoty velmi vysoké. Na první pohled je jasná např. úplná eradikace všech typů buněk melanomu max. již ve dni 5 (obr. 2). Jako kontrolu jsme použili pro srovnání na léčbu obecně velmi rezistentní buňky nádoru pankreatu (obr. 3). Tyto 4 typy nádoru slinivky břišní byly o něco více rezistentní než melanomy, ale ke dni 7 byly též eradikovány. Výjimkou byla linie PANC-1, která byla eradikována po 7 dnech pouze první trojkombinací látek, k ostatním kombinacím byly tyto buňky i po 7 dnech rezistentní.
Příklady uskutečnění vynálezu
V této přihlášce jde o jedinečné provedení vynálezu, které spadá do širokého obsahu řešení vhodné kombinace protinádorových léčiv použitelné od počátku nádorové léčby. Byla prokázána 100% účinnost u všech pěti trojkombinací léčiv na buněčných kulturách melanomových buněk v jedné (nejvyšší) koncentraci. Byly použity různé, přesně definované koncentrace látek a autentické výsledky jsou demonstrovány na obrázcích. Při použití nižších koncentrací se začala projevovat různá citlivost melanomových linií na jednotlivé trojkombinace a pochopitelně se prodloužila i doba eradikace buněk. Souhrnně však ve všech experimentech byly melanomové buňky eradikovány (až na 2 výjimečně rezistentní buněčné linie při nejnižších koncentracích sloučenin - obr. 5) nejpozději do 7 dnů od aplikace léčiva.
Způsob přípravy pěti trojkombinací léčiv a jejich aplikace na buňky v buněčné kultuře:
Tabulka 1
Tabulka látek použitých v pěti testovaných kombinacích (koktejlech)
Obsah látek v jednotlivých trojkombinacích:
Trojkombinace č. I: Sloučenina 1 + Sloučenina 2 + Sloučenina 3
Trojkombinace č. II: Sloučenina 1 + Sloučenina 2 + Sloučenina 4
Trojkombinace č. III: Sloučenina 1 + Sloučenina 2 + Sloučenina 5
Trojkombinace č. IV: Sloučenina 1 + Sloučenina 2 + Sloučenina 6
Trojkombinace č. V: Sloučenina 1 + Sloučenina 2 + Sloučenina 7
Příprava látek před přidáním na buňky: Kontrolní roztok (bez přidaných inhibitorů), použitý i pro doplnění objemu na lOOOx pracovní koncentraci po příslušném naředění všech látek v etanolu nebo DMSO dle pokynů výrobce (selleckchem.com) ve všech kombinacích: 2 díly etanolu (100%) + 3 díly dimethylsulfoxidu (DMSO, 100%). Všechny kombinace v lOOOx pracovní koncentraci pak byly lOOOx naředěny na konečnou koncentraci Ix v příslušném kultivačním médiu a aplikovány na buňky. lOOOx ředěný kontrolní roztok nemá již jako Ix kontrolní roztok žádný vliv na buněčný růst. Konečné (pracovní) koncentrace všech látek (aplikované na buňky) jsou uvedeny pro každý experiment v Tabulce 2.
- 13 CZ 308400 B6
Tabulka 2
Tabulka konečných (pracovních) koncentrací všech v kombinacích použitých látek. Uvedené koncentrace jsou tedy přítomny v médiu na buňkách během celého pokusu (den 1-7).
| Exp. č. | GANT61 | Obatoclax | (+)-JQl | SGI-7079 | GSK343 | GSK126 | ΗΑ15 | Obr. Č. | Tu. |
| 1 | 20 μΜ | 300 ηΜ | 500 ηΜ | 0 | 0 | 0 | 0 | 2 | m. |
| 2 | 20 μΜ | 300 ηΜ | 0 | 500 ηΜ | 0 | 0 | 0 | 2 | m. |
| 3 | 20 μΜ | 300 ηΜ | 0 | 0 | 1,0 μΜ | 0 | 0 | 2 | m. |
| 4 | 20 μΜ | 300 ηΜ | 0 | 0 | 0 | 100 ηΜ | 0 | 2 | m. |
| 5 | 20 μΜ | 300 ηΜ | 0 | 0 | 0 | 0 | 10 μΜ | 2 | m. |
| 6 | 10 μΜ | 150 ηΜ | 250 ηΜ | 0 | 0 | 0 | 0 | 4 | m. |
| 7 | 10 μΜ | 150 ηΜ | 0 | 250 ηΜ | 0 | 0 | 0 | 4 | m. |
| 8 | 10 μΜ | 150 ηΜ | 0 | 0 | 0,5 μΜ | 0 | 0 | 4 | m. |
| 9 | 10 μΜ | 150 ηΜ | 0 | 0 | 0 | 50 ηΜ | 0 | 4 | m. |
| 10 | 10 μΜ | 150 ηΜ | 0 | 0 | 0 | 0 | 5 μΜ | 4 | m. |
| 11 | 10 μΜ | 150 ηΜ | 125 ηΜ | 0 | 0 | 0 | 0 | 5 | m. |
| 12 | 10 μΜ | 150 ηΜ | 0 | 125 ηΜ | 0 | 0 | 0 | 5 | m. |
| 13 | 10 μΜ | 150 ηΜ | 0 | 0 | 0,25 μΜ | 0 | 0 | 5 | m. |
| 14 | 10 μΜ | 150 ηΜ | 0 | 0 | 0 | 25 ηΜ | 0 | 5 | m. |
| 15 | 10 μΜ | 150 ηΜ | 0 | 0 | 0 | 0 | 2,5 μΜ | 5 | m. |
| 16 | 20 μΜ | 300 ηΜ | 500 ηΜ | 0 | 0 | 0 | 0 | 3 | pa.t. |
| 17 | 20 μΜ | 300 ηΜ | 0 | 500 ηΜ | 0 | 0 | 0 | 3 | pa.t. |
| 18 | 20 μΜ | 300 ηΜ | 0 | 0 | 1,0 μΜ | 0 | 0 | 3 | pa.t. |
| 19 | 20 μΜ | 300 ηΜ | 0 | 0 | 0 | 100 ηΜ | 0 | 3 | pa.t. |
| 20 | 20 μΜ | 300 ηΜ | 0 | 0 | 0 | 0 | 10 μΜ | 3 | pa.t. |
Vysvětlivky k Tabulce 2: M = mol/1, Exp. = experiment, Tu. = typ nádoru, m. = melanom, pa.t. = tumor pankreatu (pokus s těmito nádorovými buňkami byl proveden pro srovnání pouze s nejvyšší koncentrací účinných látek, exp. 16-20).
Tabulka 3
Kvantifikace denzity buněk k obr. 2 (jednotlivé buňky tabulky se shodují s políčky obrázku).
- 14 CZ 308400 B6
501mel
| 14314 | 5929 | 7387 | 7735 | 8324 | 8096 |
| 18112 | 0 | 1168 | 0 | 0 | 0 |
| 18253 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 18763 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
Hbl
| 8568 | 2275 | 5220 | 4368 | 4316 | 4651 |
| 13059 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 14944 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 17160 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
MeWo
| 3001 | 1612 | 1575 | 2902 | 3652 | 3560 |
| 8656 | 609 | 812 | 482 | 779 | 190 |
| 10297 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 11607 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
SK-MEL-3
| 4516 | 3007 | 3118 | 3330 | 2889 | 2942 |
| 8932 | 0 | 0 | 237 | 0 | 0 |
| 9916 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 10130 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
SK-MEL-5
| 3741 | 1130 | 1901 | 2341 | 2284 | 2934 |
| 8840 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 9918 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 11074 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
SK-MEL-28
| 6391 | 4320 | 3774 | 4911 | 5111 | 6529 |
| 11717 | 945 | 3381 | 2652 | 3307 | 2326 |
| 11890 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 12872 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
Tabulka 4
Kvantifikace denzity buněk k obr. 3 (jednotlivé buňky tabulky se shodují s políčky obrázku).
BxPC-3
| 2269 | 1804 | 1081 | 2331 | 1881 | 2058 |
| 4683 | 408 | 793 | 2683 | 2184 | 2053 |
| 7734 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 10128 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
- 15 CZ 308400 B6
MiaPaca
| 5743 | 1974 | 1446 | 3504 | 3511 | 2536 |
| 11878 | 310 | 540 | 2410 | 1004 | 432 |
| 12444 | 0 | 0 | 32 | 0 | 0 |
| 12813 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
PANC-1
| 1595 | 1814 | 2087 | 2491 | 2958 | 2787 |
| 9366 | 2787 | 4602 | 4896 | 4651 | 3710 |
| 13680 | 1260 | 3832 | 5510 | 5729 | 4340 |
| 13968 | 120 | 1536 | 2532 | 4562 | 2793 |
PA-TU-8902
| 4729 | 2740 | 2585 | 3731 | 3234 | 3430 |
| 12567 | 1799 | 3077 | 5123 | 4327 | 5203 |
| 14227 | 479 | 1861 | 1196 | 1257 | 1959 |
| 14571 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
Tabulka 5
Kvantifikace denzity buněk k obr. 4 (jednotlivé buňky tabulky se shodují s políčky obrázku).
ίο 501mel
| 17111 | 6711 | 7383 | 9123 | 10637 | 12052 |
| 36330 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 39847 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 43575 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
MeWo
| 12505 | 10976 | 9554 | 12236 | 13416 | 13244 |
| 25141 | 6609 | 10539 | 8944 | 9166 | 6913 |
| 39702 | 8941 | 5051 | 3063 | 3853 | 2353 |
| 41377 | 2856 | 1589 | 1118 | 0 | 0 |
SK-MEL-3
| 15008 | 5518 | 5368 | 7881 | 7776 | 8154 |
| 27964 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 38400 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 40889 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
SK-MEL-28
| 14026 | 4653 | 8459 | 9254 | 7678 | 8065 |
| 27937 | 4821 | 8975 | 4684 | 8115 | 8458 |
| 40758 | 698 | 801 | 861 | 1515 | 8205 |
| 45725 | 165 | 768 | 2358 | 172 | 2568 |
- 16 CZ 308400 B6
Tabulka 6
Kvantifikace denzity buněk k obr. 5 (jednotlivé buňky tabulky se shodují s políčky obrázku).
501mel
| 27840 | 13994 | 13013 | 11286 | 11881 | 13946 |
| 39380 | 2957 | 101 | 82 | 945 | 329 |
| 39450 | 153 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 43242 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
MeWo
| 15157 | 11579 | 14592 | 14620 | 14504 | 11384 |
| 28603 | 16208 | 19532 | 15041 | 19111 | 0 |
| 39648 | 20253 | 22409 | 22504 | 29771 | 0 |
| 42893 | 32419 | 32566 | 11411 | 20209 | 0 |
SK-MEL-3
| 16040 | 6589 | 10585 | 5374 | 7665 | 6639 |
| 36702 | 689 | 325 | 258 | 228 | 371 |
| 37212 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 39725 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
SK-MEL-28
| 28343 | 15376 | 19922 | 14626 | 16404 | 13676 |
| 38456 | 33239 | 32573 | 42435 | 46258 | 25451 |
| 42017 | 25679 | 36106 | 36241 | 37751 | 0 |
| 44002 | 27098 | 40063 | 41511 | 41319 | 0 |
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (5)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Farmaceutický přípravek pro použití k léčbě maligního melanomu obsahující kombinaci účinných látek, vyznačující se tím, že obsahuje kombinaci tří účinných láteka) GANT61, tj. 2-[[3-[[2-(dimethylamino)fenyl]methyl]-2-pyridin-4-yl-l,3-diazinan-lyl]methyl] -N,N-dimethylanilin;b) Obatoclax, tj. 2-(2-((3,5-dimethyl-lH-pyrrol-2-yl)methylen)-3-methoxy-2H-pyrrol-5-yl)IH-indol ac) látku vybranou ze skupiny sestávající z cl)(+)-JQl, tj. (S)-tert-butyl 2-(4-(4-chlorfenyl)-2,3,9-trimethyl-6H-thieno[3,2-f][l,2,4]triazolo [4,3 -a] [ 1,4] diazepin-6-yl)acetát;c2)SGI-7079, tj. 2-(3-(2-((3-Fluoro-4-(4-methylpiperazin-l-yl)fenyl)amino)-5-methyl-7Hpyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)fenyl)acetonitril;c3)GSK343, tj. N-[(6-methyl-2-oxo-4-propyl-lH-pyridin-3-yl)methyl]-6-[2-(4-methylpiperazin-1 -yl)pyridin-4-yl] -1 -propan-2-ylindazol-4-karboxamid;c4)GSK126, tj. l-[(2S)-butan-2-yl]-N-[(4,6-dimethyl-2-oxo-lH-pyridin-3-yl)methyl]-3methyl-6-(6-piperazin-l-ylpyridin-3-yl)indol-4-karboxamid;- 17 CZ 308400 B6 c5)HA15, tj. N-[4-[3-[[5-(dimethylamino)naftalen-l-yl]sulfonylamino]fenyl]-l,3-thiazol-2yl]acetamid;přičemž koncentrace účinných látek potřebných pro eradikaci nádorových buněk je následující: a) GANT61 10 až 20 pmol/l; b) obatoclax 150 až 300 nmol/1; cl) (+)-JQ 1 125 až 500 nmol/1; c2) SGI-7079 125 až 500 nmol/1; c3) GSK343 0,25 až 1,0 pmol/l; c4) GSK126 25 až 100 nmol/1; a c5) HA15 2,5 až 10 pmol/l.
- 2. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje kombinaci tří účinných látek:a) GANT61 v koncentraci 10 až 20 pmol/l;b) obatoclax v koncentraci 150 až 300 nmol/1 ac) látku vybranou ze skupiny sestávající z cl)(+)-JQ 1 v koncentraci 250 až 500 nmol/1;c2)SGI-7079 v koncentraci 250 až 500 nmol/1;c3)GSK343 v koncentraci 0,5 až 1,0 pmol/l;c4)GSK126 v koncentraci 50 až 100 nmol/1;c5)HA15 v koncentraci 5 až 10 pmol/l.
- 3. Farmaceutický přípravek podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že obsahuje kombinaci tří účinných látek:a) GANT61 v koncentraci 20 pmol/l;b) obatoclax v koncentraci 300 nmol/1 ac) látku vybranou ze skupiny sestávající z cl) (+)-JQ 1 v koncentraci 500 nmol/1;c2) SGI-7079 v koncentraci 500 nmol/1;c3) GSK343 v koncentraci 1,0 pmol/l;c4) GSK126 v koncentraci 100 nmol/1;c5) HA 15 v koncentraci 10 pmol/l.
- 4. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje kombinaci tří účinných látek:a) GANT61 v koncentraci 10 až 20 pmol/l;b) obatoclax v koncentraci 150 až 300 nmol/1 a c5) HA15 v koncentraci 2,5 až 10 pmol/l.
- 5. Farmaceutický přípravek podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že účinná látka obatoclax je ve formě mezylátové soli, tj. 2-(2-((3,5-dimethyl-lH-pyrrol-2-yl)methylen)-3methoxy-2H-pyrrol-5-yl)-lH-indol methansulfonát.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2018-181A CZ308400B6 (cs) | 2018-04-11 | 2018-04-11 | Farmaceutický přípravek pro léčení maligního melanomu |
| PCT/CZ2019/000018 WO2019196965A2 (en) | 2018-04-11 | 2019-04-10 | Pharmacy preparation for malignant melanoma treatment |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2018-181A CZ308400B6 (cs) | 2018-04-11 | 2018-04-11 | Farmaceutický přípravek pro léčení maligního melanomu |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2018181A3 CZ2018181A3 (cs) | 2019-10-30 |
| CZ308400B6 true CZ308400B6 (cs) | 2020-07-29 |
Family
ID=66349211
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2018-181A CZ308400B6 (cs) | 2018-04-11 | 2018-04-11 | Farmaceutický přípravek pro léčení maligního melanomu |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ308400B6 (cs) |
| WO (1) | WO2019196965A2 (cs) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP4201928A1 (en) * | 2021-12-21 | 2023-06-28 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) | Benzene sulfonamide thiazole compounds and their use for the treatment of cancers |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010090764A1 (en) * | 2009-02-09 | 2010-08-12 | Supergen, Inc. | Pyrrolopyrimidinyl axl kinase inhibitors |
| WO2011140325A1 (en) * | 2010-05-07 | 2011-11-10 | Glaxosmithkline Llc | Indazoles |
| WO2014072486A1 (en) * | 2012-11-09 | 2014-05-15 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | New benzene sulfonamide thiazole compounds |
| WO2015070020A2 (en) * | 2013-11-08 | 2015-05-14 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Combination therapy for cancer using bromodomain and extra-terminal (bet) protein inhibitors |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106963765B (zh) * | 2017-03-28 | 2020-04-07 | 上海交通大学医学院附属第九人民医院 | Ezh2抑制剂化合物在制备治疗眼部黑色素瘤的药物中的应用 |
-
2018
- 2018-04-11 CZ CZ2018-181A patent/CZ308400B6/cs not_active IP Right Cessation
-
2019
- 2019-04-10 WO PCT/CZ2019/000018 patent/WO2019196965A2/en not_active Ceased
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010090764A1 (en) * | 2009-02-09 | 2010-08-12 | Supergen, Inc. | Pyrrolopyrimidinyl axl kinase inhibitors |
| WO2011140325A1 (en) * | 2010-05-07 | 2011-11-10 | Glaxosmithkline Llc | Indazoles |
| WO2014072486A1 (en) * | 2012-11-09 | 2014-05-15 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | New benzene sulfonamide thiazole compounds |
| WO2015070020A2 (en) * | 2013-11-08 | 2015-05-14 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Combination therapy for cancer using bromodomain and extra-terminal (bet) protein inhibitors |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Vlčková, Kateřina, et al. "GLI inhibitor GANT61 kills melanoma cells and acts in synergy with obatoclax." International journal of oncology 49.3 (2016): 953-960. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2019196965A2 (en) | 2019-10-17 |
| CZ2018181A3 (cs) | 2019-10-30 |
| WO2019196965A3 (en) | 2020-01-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| O'leary et al. | Treating cancer with selective CDK4/6 inhibitors | |
| KR102676705B1 (ko) | 암을 치료하는 방법 | |
| KR102473113B1 (ko) | 암 치료를 위한 병용 요법 | |
| RU2747788C2 (ru) | Комбинированная терапия ингибиторами notch и cdk4/6 для лечения рака | |
| Kudchadkar et al. | Targeting mutant BRAF in melanoma: current status and future development of combination therapy strategies | |
| JP6193268B2 (ja) | Ｃｄｋ８／ｃｄｋ１９選択的阻害剤、ならびに癌のための抗転移および化学防御の方法におけるそれらの使用 | |
| McInnes | Progress in the evaluation of CDK inhibitors as anti-tumor agents | |
| RU2695228C2 (ru) | Прерывистое введение ингибитора mdm2 | |
| AU2014372166B2 (en) | Pharmaceutical combinations | |
| Felgenhauer et al. | Dual BRD4 and AURKA inhibition is synergistic against MYCN-amplified and nonamplified neuroblastoma | |
| US11666580B2 (en) | Mechanism of resistance to bet bromodomain inhibitors | |
| PT2154971E (pt) | Combinação farmacêutica sinérgica para o tratamento de cancro | |
| WO2016123054A2 (en) | Kinase drug combinations and methods of use thereof | |
| JP2022145800A (ja) | 静止細胞標的化およびｅｇｆｒ阻害剤を用いた新生物の処置のための組み合わせ | |
| WO2012146933A1 (en) | Cyprodinil for use in medicine | |
| US20220062291A1 (en) | Compositions and methods of treating cancers by administering a phenothiazine-related drug that activates protein phosphatase 2a (pp2a) with reduced inhibitory activity targeted to the dopamine d2 receptor and accompanying toxicity | |
| Takeda et al. | YES1 activation induces acquired resistance to neratinib in HER2‐amplified breast and lung cancers | |
| WO2019053595A1 (en) | INHIBITORS OF PROTEIN KINASE C FOR THE TREATMENT OF CHOROIDAL MELLANOMA | |
| KR20080004495A (ko) | 암을 치료하기 위한 조합물, 방법 및 조성물 | |
| Li et al. | Developing SHP2-based combination therapy for KRAS-amplified cancer | |
| Natarajan et al. | Pioglitazone modulates doxorubicin resistance in a in vivo model of drug resistant osteosarcoma xenograft | |
| HK1219879A1 (zh) | 用於治疗癌症的包含mps-1激酶抑制剂和有丝分裂抑制剂的组合 | |
| US20250017933A1 (en) | Cancer treatment using lsd1 inhibitors and plk1 inhibitors | |
| CZ308400B6 (cs) | Farmaceutický přípravek pro léčení maligního melanomu | |
| ES3030540T3 (en) | Treatment of breast cancer using combination therapies comprising gdc-9545 and gdc-0077 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20230411 |