CZ307681B6 - Fotoaktivovatelná nanočástice pro fotodynamické aplikace, způsob její přípravy, farmaceutická kompozice ji obsahující a jejich použití - Google Patents
Fotoaktivovatelná nanočástice pro fotodynamické aplikace, způsob její přípravy, farmaceutická kompozice ji obsahující a jejich použití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ307681B6 CZ307681B6 CZ2016-119A CZ2016119A CZ307681B6 CZ 307681 B6 CZ307681 B6 CZ 307681B6 CZ 2016119 A CZ2016119 A CZ 2016119A CZ 307681 B6 CZ307681 B6 CZ 307681B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- nanoparticle
- photoactivatable
- photosensitizer
- temoporfin
- polyethylene oxide
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
- A61K41/0071—PDT with porphyrins having exactly 20 ring atoms, i.e. based on the non-expanded tetrapyrrolic ring system, e.g. bacteriochlorin, chlorin-e6, or phthalocyanines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
- A61K41/0076—PDT with expanded (metallo)porphyrins, i.e. having more than 20 ring atoms, e.g. texaphyrins, sapphyrins, hexaphyrins, pentaphyrins, porphocyanines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
- A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
- A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
- A61K9/5146—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, polyamines, polyanhydrides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Abstract
Předkládané řešení se týká fotoaktivovatelných nanočástic pro fotodynamické aplikace, obsahujících fotosenzibilizátor, (Caž C) mastný alkohol a polymerní surfaktant, s výhodou polyethylenoxid monomethyléter--poly(ε-kaprolaktonu), přičemž velikost nanočástice je v rozmezí od 1 do 1000 nm, a jádro nanočástice je při 4 °C pevné a při 39 °C kapalné. Řešení se dále týká způsobu přípravy fotoaktivovatelných nanočástic, farmaceutické kompozice je obsahující a jejich použití.
Description
Fotoaktivovatelná nanočástice pro fotodynamické aplikace, způsob její přípravy, farmaceutická kompozice ji obsahující a jejich použití
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká fotoaktivovatelných nanočástic pro fotodynamické aplikace, způsobu jejich přípravy, farmaceutické kompozice je obsahující a jejich použití jako léčiva při fotodynamické terapii.
Dosavadní stav techniky
Fotodynamická terapie (photodynamic therapy, PDT) je relativně novou metodou léčby různých onemocnění, zaměřenou zejména na léčbu nádorů, např. spinocelulámího karcinomu hlavy a krku. PDT spočívá v kombinaci fotosenzibilizátoru (photosensitizer, PS), molekuly kyslíku a následného laserového ozáření nádorových lézí. Po laserovém ozáření nádoru absorbují molekuly fotosenzibilizátoru fotony světla a následně excitují kyslík za vzniku singletového kyslíku, který je vysoce destruktivní kvůli poškození buněčných struktur, jako jsou DNA nebo membrány v blízkém okolí. Účinnost PDT z větší části závisí na fotochemických, fotobiologických a fototerapeutických vlastnostech PS. Kritickým faktorem je formulace PS, která zajišťuje, že účinek je selektivně zaměřen na cílovou nádorovou tkáň. PDT je výhodným způsobem léčby nejen v nádorových, i v mnoha nenádorových aplikacích, např. v kosmetice, kde se fotosenzibilizátor kombinuje s biologickým výplňovým materiálem (zahrnujícím kolagen, kyselinu hyaluronovou a další syntetické nebo přírodní produkty) a formulace se následně vstřikuje do ošetřovaného místa (US 2011/0021973 AI). PDT se využívá i jako způsob ošetření nežádoucí celulitidy (US 8414880 B2) či při prevenci a léčení vaskulámích nebo zánětlivých chorob (US 2009/0306032 AI), kde autoři popisují pevné lipidické nanočástice získané mikroemulzifikací za tepla, obsahující cholesteryl-propionát a/nebo cholesteryl butyrát.
Nanomedicína je rychle se rozvíjející oblastí lékařského výzkumu, která je zaměřena zejména na vývoj nanočástic (nanoparticles, NPs) pro profýlaktické, diagnostické a terapeutické aplikace. V oblasti farmacie je obecně velikost nanočástic obvykle definována v rozsahu 1 nm až 1000 nm. Nanomedicína funguje na stejném principu jako mnoho biologických procesů a buněčných mechanismů. Fotosenzibilizátory inkorporované v nanočásticích poskytují velice slibný přístup v řešení jak problému biodostupnosti, tak cíleného transportu do nádorové tkáně. Metody a postupy pro syntézu, funkcionalizaci a použití NPs jsou dnes široce studovány a představují nové strategie pro molekulární cílení, individuální terapii a minimálně invazivní diagnostické techniky.
Obecně jsou PS podávány pacientovi různými cestami, např., topicky (US 2009/0081281 AI), perorálně (US 2010/0273803 AI) nebo intravenózně, přičemž každá má své výhody a nevýhody. Zejména intravenózní podání je problematické, protože mnoho PS jsou hydrofobní nebo amfifilní látky obvykle nerozpustné ve vodě. V některých případech jsou PS (zejména temoporfin) podávány v alkoholickém roztoku (ethanol, propylenglykol). Pro PDT byly testovány zejména porfyriny a chloriny. Temoporfin (Biolitec Pharma, Skotsko, Spojené království) byl v EU schválen pro paliativní nádory hlavy a krku, nádory prostaty a pankreatu (US 2006/0040912 AI).
Povrchově stabilizované pevné lipidické nanočástice (solid lipid nanoparticles, SLNP) s nekovalentně vázaným léčivem představují nový typ formulace léčiv. V krevním řečišti tyto SLNP po adhezi na apolipoproteiny napodobují lipoproteiny s nízkou hustotou (low-densitylipoprotein, LDL), přepravující lipidy do tkání. Receptory LDL jsou nadměrně exprimovány na povrchu mnoha nádorových buněk (Kretzer, Iara F., Durvanei A. Maria, and Raul C. Maranháo. 2012. Cellular Oncology 35 (6): 451-60; Huntosova, Veronika, Diana Buzova, Dana Petrovajova, Peter Kasak, Zuzana Nadova, Daniel Jancura, Franck Sureau, and Pavol Miskovsky. 2012. Intemational Journal of Pharmaceutics 436 (1-2): 463-71), což vede k cílenému doručení
- 1 CZ 307681 B6 léčiva do nádoru. Pro specifické doručení PS co možná nejblíže k nádorové tkáni je potřebné potlačit mechanizmy omezující účinnost PDT. Z důvodu akumulace PS vedoucí k nežádoucí fotosenzibilizaci celého povrchu těla pacientů je kůže rozhodujícím orgánem (Moore, Caroline M., Mark Emberton, and Stephen G. Bown. 2011. Lasers in Surgery and Medicine. 3:768-75). SLNP jsou tedy účinným systémem podávání léčiv zlepšujících biologickou dostupnost i pro látky špatně rozpustné ve vodě. Formulace na bázi SLNP poskytují obecně vyšší biodostupnost a vyšší terapeutický efekt in vitro a in vivo v porovnání s komerčními formulacemi, zejména pro použití pro intravenózní lékovou aplikační formu. US 5 250 236 popisuje pevné lipidické sférické částice, které mají průměr menší než jeden mikrometr. Lipidové částice byly získány přidáním zahřátých lipidů (nad teplotou tání) do směsi složené z vody, surfaktantu a kosurfatantu.
Patentová přihláška WO 1993005768 Al popisuje systém dopravy léčiv založený na pevných částicích lipidických materiálů nebo jejich směsí, s průměrem od 10 nm do 10 pm. Poskytují delší dobu řízeného uvolňování účinné látky a umožňují inkorporaci hydrofilních léčiv do pevného jádra částice.
US 2008/0090803 Al popisuje kovalentní konjugáty mastných alkoholů a farmaceutických nosičů pro léčbu nádorových a virových onemocnění a psychiatrických poruch.
US 2006/0127471 Al popisuje přípravu lipozomálních formulací, obsahujících hydrofobní fotosenzibilizátor (temoporfin) a jejich použití v terapii, zejména za použití intravenózní aplikace. Fosfolipidy jsou modifikovány PEGylací (obsahují polyethylenoxid jako nedílnou součást). Vzniklé PEGylované liposomy obsahují hydrofobní fotosenzibilizátor uvnitř membrány. Tento mechanismus dopraví fotosenzibilizátor do buněčné membrány systému přímo do místa působení.
US 7354599 B2 popisuje farmaceutické liposomální formulace pro PDT, které obsahují hydrofobní fotosenzibilizátor porlyrinového typu (temoporfin), monosacharid (firuktózu a glukózu) a jeden nebo více syntetických fosfolipidů. Díky lyofilizačnímu procesu jsou vzniklé formulace při skladování stabilní a vhodné pro intravenózní podání.
US 8709449 B2 popisuje formulaci zvyšující účinnost PDT a snižující fototoxické reakce pokožky zapříčiněné PDT. Lipidová emulze obsahuje sójový olej, triglyceridy se středně dlouhým řetězcem a fosfolipidy z vajec jako hydrofobní složky. PS je vybrán ze skupiny poriyrinů, ftalocyaninů, metalografitových derivátů, barviv a syntetických fotosenzibilizátoru. US 2008/0311214 Al popisuje modifikované lipidické nano/ mikročástice, které na svém povrchu obsahují molekulu nebo Ugand zaměřující se na specifické vazebné místo a jejich použití pro perorální podání léčiv a antigenů.
Patentová přihláška WO 2006/0069985 A2 popisuje metody přípravy nanočástic na bázi lipidů pomocí homogenizace za účelem inkorporace sloučeniny do už předem připravených nanočástic pomocí duální asymetrické odstředivky.
Patentová přihláška WO 2010/112749 Al popisuje způsob přípravy a složení suspenzí pevných lipidických nanočástic ve vodné fázi, obsahujících minoxidil v lipidové matrici (mono-, di- a triglyceridy neobsahující kyselinu stearovou). SLNP obsahují alespoň jednu amfifilní sloučeninu vybranou z fosfolipidů (sojový lecitin, složený převážně z fosfatidylcholinů). SLNP obsahují zejména fosfatidylcholin, lecitin a jeden nebo více surfaktantů (vybraných z esterů mastných kyselin se sorbitany) a vodnou fázi (obsahující vodu, propylenglykol a popřípadě ethanol). Autoři se zaměřují na kosmetické a farmaceutické využití.
Patentová přihláška WO 2011/116963 A2 popisuje systém dopravy léčiv pomocí SLNP, které jako lipidické nosiče obsahují alespoň jednu účinnou látku a jsou potaženy polymery. Účinná látka je vybrána ze skupiny kosmetických, farmaceutických a/ nebo alimentárních účinných látek a/nebo pomocných látek. Polymery (připravené jednoduchou nebo komplexní koacervací) jsou
-2CZ 307681 B6 vybrány ze skupiny proteinů, polysacharidů, polyesterů, polyakrylátů, polykyanoakrylátů a/nebo jejich směsí.
US 5785976 A popisuje přípravu koloidních suspenzí pevných lipidických částic anizometrických tvarů s lipidovou matricí, která je ve stabilní polymorfhí modifikaci. Dále obsahují suspenzi mikro- a submikronových částic bioaktivních látek. Tyto suspenze byly připraveny především pro parenterální podání, které je velmi výhodné pro bioaktivní látky špatně rozpustné ve vodě, zejména léčiva, a jejich použití v kosmetickém, potravinářském a zemědělském průmyslu.
US 4880634 A popisuje lipidické nano-pelety obsahující farmakologicky účinné látky, jejichž velikost jev rozmezí od 50 do 1000 nm, a mohou být použity jako pomocné látky v systému dopravy léčiv pro perorální podání.
PCT/EP2012/055222 (WO 2012/127037) popisuje farmaceutickou kompozici, která obsahuje kortikosteroid a/nebo derivát vitaminu D inkorporovaný jako pevná směs nebo disperze v lipidických nanočásticích, které jsou při laboratorní teplotě v pevném skupenství, a které obsahují vedle lipidů s teplotou tání vyšší než tělesná teplota rovněž farmaceuticky akceptovatelný surfaktant.
US 2015/0273084 AI se týká nanočástic methylenové modři pro bio-zobrazování a fotodynamickou terapii a jejich použití jako kontrastní látky a cíleného protirakovinného léčiva. Nanočástice obsahuje komplex methylenové modři a mastné kyseliny nebo její soli, a amfifilní polymer (blokový kopolymer polyoxyethylenu a polyoxypropylenu), přičemž komplex methylenové modři a mastné kyseliny je uvnitř micely amfifilního polymeru (Pluronic F—68). Xingwang Zhang, Huan Wang, Tianpeng Zhang, Xiaotong Zhou, Baojian Wu, European Joumal of Pharmaceutical Sciences 62 (2014) 301-308 popisuje přípravu, rozpouštění, stabilizaci a biodostupnost polymemích smíšených micel s modelovým léčivem stiripentolem. Micely byly připraveny rychlou disperzí ethanolového roztoku obsahujícího stiripentol, monomethoxy poly(ethylene glykol)-b-poly(e-kaprolakton) a oleát sodný do vody.
Jingxin Gou, Shuangshuang Feng, Helin Xu, Guihua Fang, Yanhui Chao, Yu Zhang, Hui Xu a Xing Tang, Biomacromolecules 16.9 (2015): 2920-2929 se zabývá přípravou micel s kontrolovanou velikostí částic obsahujících uvnitř jádra tuky se středně dlouhým řetězcem (medium chain triglyceride, MCT) a léčivo inkorporované uvnitř micel a vlivu přítomnosti MCT na obsah léčiva. Obal micel je tvořen blokovým kopolymerem mPEG-b-PCL.
Taratula O., et al., Chemistry of Materials 2Ί.17 (2015):6155-6165 popisuje kombinovanou terapeuticko-diagnostickou látku na bázi silicon naftalocyaninu enkapsulovanou v hydrofobním jádře PEG-PCL polymemích nanočástic. Po nakumulování těchto polymemích nanočástic v cílovém nádoru lze nádorovou tkáň detekovat pomocí NIR fluorescenčního zobrazování. Pokud se nanočástice ozáří NIR laserem, přemění tyto nanočástice absorbovanou energii na toxické reaktivní sloučeniny kyslíku (reactive oxygen species, ROS) a teplo, které vyzařují do nádorové tkáně.
Pro výběr vhodného typu nanočástic jako transportního média umožňujícího cílenou aplikaci příslušné aktivní farmaceutické ingredience je nutné zvážit i všechny nevýhody a omezení příslušného systému. V případě liposomů použití vysokoenergetického ultrazvuku při přípravě často způsobuje oxidaci a degradaci fosfolipidů (T. P. Chelvi and R. Ralhan, International Joumal of Hyperthermia, vol. 11, no. 5, pp. 685-695, 1995; S. Batzri and E. D. Korn, Biochimica et Biophysica Acta-Biomembranes, vol. 298, no. 4, pp. 1015-1019, 1973; J. J. Escobar-Chávez, Skin, vol. 19, p. 22, 2012; M. R. Mozafari, Cellular and Molecular Biology Letters, vol. 10, no. 4, pp. 711-719, 2005). U micel a liposomů je dále např. riziko rozpadu transportního systému ihned po podání kvůli nedostatečné stabilitě (M. Malmsten, Soft Matter, vol. 2, no. 9, pp. 760-769, 2006). Pro systémy využívající enkapsulaci do cyklodextrinů byla
-3CZ 307681 B6 prokázána dráždivost a tím obavy o bezpečnost a omezení jejich použití pro parenterální podávání (R. A. Rajewski and V. J. Stella, Joumal of Pharmaceutical Sciences, vol. 85, no. 11, pp. 1142-1169, 1996; A. F. Soares, R. D. A. Carvalho, and F. Veiga, Nanomedicine, vol. 2, no. 2, pp. 183-202, 2007). U tekutých krystalů jsou kvůli jejich vysoké viskozitě problémy s přípravou a podáním a dále vykazují toxicitu kvůli vysokému obsahu surfaktantů (M. Malmsten, Soft Matter, vol. 2, no. 9, pp. 760-769, 2006; P. S. Prestes, M. Chorilli, L. A. Chiavacci, Μ. V. Scarpa, and G. R. Leonardi, Journal of Dispersion Science and Technology, vol. 31, no. 1, pp. 117-123, 2009; M. Růckert and G. Otting, Joumal of the Američan Chemical Society, vol. 122, no. 32, pp. 7793-7797, 2000). Pro různé typy nanočástic mohou být stěžejní i jiné charakteristiky, např. způsob podání léčiva, koloidní stabilita a interakce s krevními bílkovinami, biodegradabilita nosiče, nízká inkorporace a adsorpce léčivé látky, složitý vývoj metodik pro kontrolu kvality transportního systému, problémy se stabilitou po dobu skladování, toxikologické testy některých typů nanočástic nejsou zcela ukončeny a často je potřeba zvýšení efektivity výroby (W. Mehnert and K. Maděr, Advanced Drug Delivery Reviews, vol. 47, no. 2-3, pp. 165— 196, 2001; E. B. Souto, P. Severino, Μ. H. A. Santana, and S. C. Pinho, Quimica Nova, vol. 34, no. 10, pp. 1762-1769, 2011).
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález poskytuje plně biologicky odbouratelnou formulaci fotoaktivovatelných nanočástic pro fotodynamické aplikace s minimálními vedlejšími účinky. Je založen na pevných lipidických nanočásticích (SLNP) fotosenzibilizátoru a mastných alkoholů, přičemž povrch těchto pevných lipidických nanočástic je stabilizován netoxickým povrchově aktivním polymerem, například kopolymerem polyethylenoxid monomethyléter-ů/oc£-poly(skaprolaktonem), který zabraňuje zachycování SNLP do retikuloendoteliálního systému. Mastné alkoholy jsou potom při metabolizaci plně odbouratelné β-oxidací, zatímco povrchově aktivní kopolymer je také sám o sobě biologicky odbourátelný na kyselinu 6-hydroxyhexanovou a polyethylenoxid a na základě relativně nízké molekulové hmotnosti jsou oba typy fragmentů odstranitelné ledvinami. SLNP jsou při skladovací teplotě 4 °C pevné, stabilní a nepodléhají agregaci. Teplota tání jádra je 39 °C, což umožňuje uvolňování fotosenzibilizátoru v nádoru kontrolovaným způsobem v důsledku intenzivního hypertermického metabolismu.
Předmětem předkládaného vynálezu je fotoaktivovatelná nanočástice pro fotodynamické aplikace, obsahující jádro, obsahující fotosenzibilizátor, a obal, obsahující polyethylenoxid monomethyléter-ň/oc£-poly(s-karoplakton), přičemž jádro obsahuje 1 až 50 hmotn. % fotosenzibilizátoru vybraného z derivátů chlorinu a/nebo porfyrinu a/nebo antrachinonu, vztaženo na celkovou sušinu nanočástice, s výhodou 1 až 4 hmotn. % fotosenzibilizátoru, vztaženo na celkovou sušinu nanočástice, a dále 1 až 80 hmotn. % (Cs až C22) mastných alkoholů, vztaženo na celkovou sušinu nanočástice, s výhodou 12 až 72 hmotn. % (Cs až C22) mastných alkoholů, vztaženo na celkovou sušinu nanočástice; a obal obsahuje 1 až 80 hmotn. % polymemího surfaktantu polyethylenoxid monomethyléter-ň/oc£-poly(s-kaprolaktonu), vztaženo na celkovou sušinu nanočástice, s výhodou obal obsahuje 14 až 72 hmotn. % polymemího surfaktantu, vztaženo na celkovou sušinu nanočástice; přičemž velikost nanočástice je v rozmezí od 1 do 1000 nm, s výhodou v rozmezí od 11 do 760 nm, nejvýhodněji v rozmezí od 11 do 30 nm, a přičemž jádro nanočástice je při 4 °C pevné a při 39 °C kapalné, stanoveno diferenční skenovací kalorimetrií s proplachováním plynným dusíkem o objemu 50 cm3/min za použití india jako standardu v teplotních cyklech: ohřev - chlazení - ohřev, při 5 °C/min, a odečet teplot tání byl proveden z první křivky ohřevu diferenční skenovací kalorimetrie, kdy výsledkem byl bimodální termogram se dvěma endotermami, jednou pro eutektickou směs fotosenzibilizátoru a mastného alkoholu a druhou pro mastný alkohol.
Začlenění temoporfinu do lipidové matrice vede k teplotě tání kolem 26 °C, kdy taje eutektická směs fotosenzibilizátoru a (Cs až C22) mastného alkoholu, a mezi 35 a 39 °C, s výhodou, mezi 37 a 39 °C, nejvýhodněji kolem 39 °C, kdy taje samotný PS. Znamená to, že v lipidovém jádře
-4CZ 307681 B6 existují dvě fáze, obsahující fotosenzibilizátor a (Cs až C22) mastný alkohol. Toto složení umožňuje stabilitu pevných lipidických nanočástic při skladování při teplotě 4 °C a zároveň teplotu tání jádra při 39 °C.
Ve výhodném provedení je fotosenzibilizátor vybraný ze skupiny zahrnující temoporfin, verteporfin, lutecium texafyrin, hypericin a porficen.
V jednom provedení vynálezu obsahuje jádro fotoaktivovatelné nanočástice jeden typ (Cs až C22) mastného alkoholu, s výhodou je mastným alkoholem (C14) mastný alkohol.
V jiném provedení vynálezu obsahuje jádro fotoaktivovatelné nanočástice kombinaci (Cs až C22) mastných alkoholů.
V jednom provedení vynálezu je polymemím surfaktantem polyethylenoxid monomethyléterň/oc£-poly(s-kaprolakton) o polymerizačním stupni polyethylenoxidového bloku 10 až 100 a o polymerizačním stupni poly(s-kaprolaktonového) bloku 3 až 60, s výhodou je polymerizační stupeň polyethylenoxidového bloku 20 až 50 a poly(s-kaprolaktonového) bloku 3 až 20, výhodněji je polymerizační stupeň polyethylenoxidového bloku 45 a poly(s-kaprolaktonového) bloku 7.
Předmětem předkládaného vynálezu je rovněž způsob přípravy fotoaktivovatelné nanočástice podle předkládaného vynálezu, kdy:
- fotosenzibilizátor se rozpustí v rozpouštědle, s výhodou v dichlormethanu, a přidá se k (Cs až C22) mastnému alkoholu zahřátému na 45 °C za vzniku první fáze;
- polymemí surfaktant se rozpustí v organickém rozpouštědle, s výhodou v dichlormethanu, přidá se voda a směs se zahřeje na 45 °C za vzniku druhé fáze;
- obě zahřáté fáze se smíchají a homogenizují, s výhodou po dobu 2 min při 8000 otáčkách/min;
- výsledná emulze se podrobí působení ultrazvuku;
- výsledná emulze se ochladí na laboratorní teplotu.
Působení ultrazvuku lze provádět například při laboratorní teplotě a amplitudě ultrazvuku mezi 50 a 75 %, s výhodou při amplitudě ultrazvuku 50 % po dobu 35 min a potom při amplitudě ultrazvuku 70 % po dobu 5 min.
Předmětem předkládaného vynálezu je rovněž farmaceutická kompozice, která obsahuje fotoaktivovatelnou nanočástici podle předkládaného vynálezu, a dále obsahuje farmaceuticky přijatelné přísady, vybrané ze skupiny zahrnující antiadheziva, pojivá, potahovací látky, barviva, bobtnadla, ochucovadla, maziva, konzervanty, sladidla, sorbenty.
Předmětem předkládaného vynálezu je rovněž fotoaktivovatelná nanočástice podle předkládaného vynálezu a/nebo farmaceutická kompozice podle předkládaného vynálezu pro použití jako léčivo.
Předmětem předkládaného vynálezu je rovněž fotoaktivovatelná nanočástice podle předkládaného vynálezu a/nebo farmaceutická kompozice podle předkládaného vynálezu pro použití jako léčivo pro intravenózní aplikaci. Intravenózní aplikací se rozumí vpravení tekuté formy léčiva přímo do žíly nebo tepny pacienta.
Předmětem předkládaného vynálezu je rovněž fotoaktivovatelná nanočástice podle předkládaného vynálezu a/nebo farmaceutická kompozice podle předkládaného vynálezu pro použití při fotodynamické terapii a/nebo fotodynamické diagnostice.
Předkládaný vynález systému pevných lipidických nanočástic poskytuje řešení k překonání všech výše zmíněných omezení ze stavu techniky, jako je např. jednoduchá příprava, stabilita po dobu skladování, jádro nanočástice je při skladovací teplotě (4 °C) pevné, stabilní a nepodléhá agregaci
-5CZ 307681 B6 při fyziologickém pH (pH ~ 7,4), přičemž teplota tání jádra 39 °C umožňuje uvolňování fotosenzibilizátoru v nádoru kontrolovaným způsobem v důsledku intenzivního hypertermického metabolismu. Nanosystém o jedinečném složení je plně biodegradovatelný a poskytuje zvýšení biodostupnosti a terapeutického efektu in vitro a in vivo (porovnaní s komerční formulací). Použití nanoformulace je jak pro perorální, tak intravenózní lékovou aplikační formu.
Objasnění výkresů
Obrázek 1: I I-NMR spektrum kopolymeru polyethylenoxid-ůZocA-poly(s-kaprolakton), (PEOů-PCL). Intenzity protonových signálů označených: a (δ = 3,63 ppm, odpovídá PEO bloku) a c (δ = 1,64 ppm, odpovídá bloku PCL) v I I-NMR spektru.
Obrázek 2: Termogramy DSC analýzy vzorků bez obsahu temoporfmu (označeny jako SLNP s příslušným PEOxPCLy), s inkorporovaným temoporfmem (připraveny dle Příkladů 1, 2 a 3) a čistý temoporfin (10 až 20 mg).
Obrázek 3: Transmisní elektronové mikrografy vzorků pevných lipidických nanočástic s inkorporovaným temoporfmem, připravených dle Příkladů 1, 2 a 3.
Obrázek 4: Časový profil in vitro uvolňování temoporfmu (%) z pevných lipidických nanočástic připravených dle Příkladů 1, 2 a 3, při pH 7,4. Data jsou vyjádřena jako průměr ± SD (n = 3).
Obrázek 5: Vliv one-shot PDT na růst lidského karcinomu prsu linie MDA-MB-231. Skupině Nu/Nu myší (n=5) byly intravenózně aplikovány formulace pevných lipidických nanočástic s inkorporovaným temoporfmem připravených dle Příkladů 1, 2, 3 (dávka temoporfmu 0,8 mg/kg myš, i.v.), které jsou ve srovnání s neléčenou skupinou myší (v grafech jako kontrolní skupina) a v porovnání s komerční formulací (Originátor, 4 mg temoporfmu, 376 mg ethanolu a 560 mg propylenglykolu). Tři hodiny po podání byly nádorové oblasti ozářeny (100 J/cm2) a následně byly v pravidelných intervalech měřeny velikosti nádoru.
Obrázek 6: Křivka inhibice růstu nádoru - TGí % (tumor growth inhibition) jako funkce času po intravenózní aplikaci (i.v.) testovaných formulací pevných lipidických nanočástic s inkorporovaným temoporfmem připravených dle Příkladů 1, 2, 3 (dávka temoporfmu 0,8 mg/kg myš) v porovnání s komerční formulací (Originátor, 4 mg temoporfmu, 376 mg ethanolu a 560 mg propylenglykolu). Graf znázorňuje inhibici růstu lidského karcinomu prsu linie MDAMB-231 ve skupině Nu/Nu myší (n=5).
Příklady uskutečnění vynálezu
Příklad 1
Syntéza kopolymeru polyethylenoxid-ůZocA-poly(s-kaprolaktonu) (PEO-//-PCL) je založena na polymerizaci s otevíráním kruhu ε-kaprolaktonu bez přítomnosti katalyzátoru, iniciovaná pomocí polyethylenoxid monomethyleteru (MPEO). Do 50 ml odměmé baňky s magnetickým míchadlem byly vloženy 3 g (1,49 mmol) MPEO. Systém byl odplyněn v 5 cyklech vakuum argon. V atmosféře argonu bylo přidáno 3,4 g (30 mmol) ε-kaprolaktonu. Následně byl systém ochlazen suchým ledem/ethanol, evakuován a zahřát na 185 °C. Polymerizace s otevíráním kruhu trvala 33 hodin. Po polymeraci byl systém naplněn argonem a vychlazen na laboratorní teplotu. Pevné látky v baňce byly rozpuštěny v 10 ml dichlormethanu a vysráženy do 350 ml diethyletheru. Po vysušení byl polymer suspendován ve vodě a dialyzován proti vodě v dialyzační membráně MWCO 2 kDa. Příklad II-NMR spektra kopolymeru PEO-ů-PCL je
-6CZ 307681 B6 zobrazen na obrázku 1. Poměr monomemích jednotek jednotlivých produktů byl vypočten za použití intenzit protonových signálů označených a (δ = 3,63 ppm, odpovídá PEO bloku) a c (δ = 1,64 ppm, odpovídá bloku PCL) v II-NMR spektru podle rovnice (1):
DP(PCL·) = DP(řW) * f (1) kde DP(PCL) je stupeň polymerizace poly(s-kaprolaktonového) bloku, DP(PEO) je stupeň polymerizace polyethylenoxidového bloku a c a a jsou integrální intenzity signálů příslušných protonů (viz obrázek 1).
Délka bloku PEO makroiniciátoru v kopolymeru se stupněm polymerace byla DP = 45 monomemích jednotek. Délka bloku PCL se stupněm polymerace DP = 7 monomemích jednotek. Výsledný kopolymer (polymemí surfaktant) má průměrný vzorec: PEO45PCL7.
Pevné lipidické nanočástice s inkorporovaným fotosenzibilizátorem temoporfinem byly připraveny pomocí vysokovýkonné homogenizační a ultrazvukové metody. Lipidická fáze složená z 1-tetradekanolu (10 mg/ml) byla vložena do skleněné lahvičky a zahřátá na 45 °C. Temoporfin (10 mg/ml) byl rozpuštěn v 1 ml dichlormetanu a přidán k lipidové fázi pro získání směsi lipid-léčivo po odpaření dichlormetanu. Vodná fáze byla získána rozpuštěním kopolymeru PEO45PCL7 (50 mg/ml) v 1 ml dichlormetanu, následným přidáním 5 ml ILO a zahřátím na 45 °C. Horká lipidová fáze byla přidána k horké vodné fázi a následně byla směs homogenizovaná po dobu 2 min při 8000 otáčkách/min. Výsledná emulze byla ultrazvukovaná za použití standardního ultrazvukového hrotu (T25 digital Ultra-Turrax, IKA, Schoeller instruments, s.r.o., Czech Republic). Amplituda ultrazvuku byla nastavena na 50 % po dobu 35 min a na 70 % po dobu 5 min. Vzniklá emulze byla okamžitě ochlazená na laboratorní teplotu.
Pro měření velikosti částic (hydrodynamický poloměr, RH), indexu polydisperzity (PDI) a zeta potenciálu (ZP) testovaných pevných lipidických nanoformulací s inkorporovaným temoporfinem byl použit Zetasizer (Zen 3600, Malvem Instruments Ltd.) pomocí dynamického rozptylu světla (DLS). Pro dosažení vhodné koncentrace před samotným měřením byly vzorky zředěny redestilovanou vodou (pH~5 výsledného roztoku). Veškerá měření probíhala při teplotě 25 °C. K reprezentaci dat distribuce velikosti NPs byla použita intenzitně vážená distribuce. Výsledky jsou uvedeny v Tabulce 1.
Pro analýzu pomocí diferenční skenovací kalorimetrie (DSC) byl použit kalorimetr (Q2000, V24.ll Build 124, TA Instruments) s proplachováním plynným dusíkem (50 cm3/min). Přístroj byl kalibrován pro měření teploty a tepelného toku za použití india jako standardu. Analyzované byly vzorky jednak bez obsahu temoporfinu (označeny jako SLNP s příslušným PEOxPCLy), tak s inkorporovaným temoporfinem (připraveny dle Příkladu 1, 2, 3) a samotný temoporfin (pevná látka, 10 až 20 mg), (viz Obrázek 2). Nanoformulace byly umístěny do T-zero hermetických hliníkových pánviček a analýza probíhala v teplotních cyklech: ohřev - chlazení -ohřev, od 10 do 50 °C, při 5 °C/min. Teploty tání těchto vzorků byly odečteny z 1. DSC-křivky ohřevu. Začlenění temoporfinu do lipidové matrice má za výsledek bimodální termogram se dvěma endotermami: kolem 26 °C (eutektická směs temoporfinu a 1-tetradekanolu) a kolem 39 °C (1tetradekanol). To znamená, že v lipidovém jádře existují dvě fáze, obsahující temoporfin a 1tetradekanol. Toto složení umožňuje stabilitu pevných lipidických nanočástic při skladování při teplotě 4 °C a zároveň teplotu tání jádra při 39 °C.
Testované nanoformulace byly ve skleněných lahvičkách skladovány v chladničce při teplotě 4 až 8 °C, po dobu 1 měsíce. V den 1, 14 a 30 byla pomocí DLS měřena velikost částic (Rh, nm), PDI a ZP (mV), a to při pH ~ 5 a 7,4. Na základě statistické analýzy rozptylu jednoduchého třídění (one-way ANOVA) nebyl během skladování (den 1, 14, 30) zjištěn žádný významný rozdíl. Hodnota a=0,05 byla použita jako prahová hodnota statistické významnosti.
-7 CZ 307681 B6
Obsah temoporfinu v lipidové matrici byl stanoven pomocí UV-VIS spektrometrie (Evolution 220, Thermo Scientific™) následovně: Vzorky nanoformulací (lpi) byly rozpuštěny v methanolu (0,999 ml) a analyzovány při 652 nm. Koncentrace temoporfinu byla vypočtena použitím Lambert-Beerova zákona, Amax = 652 nm, S652 = 22 400 M 'cm '(2). Účinnost enkapsulace temoporfinu (EE %) a obsah temoporfinu v systému nanočástic (DL %) byly vypočteny podle rovnic (3) a (4) a výsledky jsou zobrazeny v Tabulce 2, (2>
EE (%) = j 00 % (3, •^ίϋί'ίίί
DL (%) =-------ÚlullALA-------Y lfJ0 % {4) «i«ivo v SLNP·+· Λ šuríaktant (1) A = absorbance; & = molámí absorpční koeficient při vlnové délce λ (652 nm); c = molámí koncentrace absorpční složky v mol/L; 1 = délka absorpční vrstvy. (2) EE (%) = účinnost enkapsulace; wiéčivo v slnp = hmotnost temoporfinu v pevných lipidických nanočásticích; wtotai = celková hmotnost temoporfinu použitá při přípravě testovaných nanoformulací; (3) DL (%) = obsah temoporfinu v nanočásticovém systému (drug loading); wiipid = hmotnost 1-tetradekanolu; Wsurfaktant — hmotnost PEO45PCL7.
Testované vzorky byly analyzovány a vizualizovány pomocí transmisního elektronového mikroskopu (TEM) (Tecnai G2 Spirit Twin 12, FEI). Vzorek (2 μΐ) byl nakapán na dírkovanou, uhlíkem potaženou mřížku a přebytek roztoku byl odsát dotykem úzkého pruhu filtračního papíru (1 min). Nanočástice byly při laboratorní teplotě ponechány zcela oschnout a následně byly pozorovány pomocí TEM mikroskopu (zobrazení ve světlém poli, urychlovací napětí 120 kV). Částice jsou zobrazeny jako černé skvrny na šedém pozadí (pozitivní kontrast), mají kulovitý tvar a velikost korelující s hydrodynamickým poloměrem, měřeným pomocí DLS, jak je znázorněno na Obrázku 3.
Pro studium in vitro uvolňování temoporfinu z testovaných formulací byla použita metoda dialýzy přes dialyzační membránu (viz Obrázek 4). Dialyzační membrána (3,5 kDa) byla na 20 min ponořena do destilované vody. Alikvotní objem formulace (2 ml) byl nejprve zředěn 2 ml 2 x koncentrovanějšího PBS. Tato směs byla přemístěna do dialyzačních membrán a následně vložena do předehřátého (37 °C) roztoku PBS o pH ~ 7,4 (200 ml) a ponechána míchat na magnetické míchačce (200 otáček za minutu). Alikvotní podíly (0,1 ml) vzorků byly v časových intervalech 0,5; 1; 2; 4; 6; 8; 24 a 72 hodin odebrané z vnitřního prostoru dialyzační membrány a analyzovány pomocí UV-VIS spektrometrie (po vhodném zředění methanolem). Následně byl vypočten procentuální obsah uvolněného temoporfinu, a to na základě rozdílu jeho koncentrace použité pro přípravu roztoku SLNP (10 mg/ml) a stanové koncentrace pomocí UV-VIS spektrometrie v odebraném roztoku vzorku z vnitřku dialyzační membrány.
Buňky nádorové linie 4T1 (karcinom mléčné žlázy myší) a MDA-MB-231 (lidský adenokarcinom prsu) byly udržovány v exponenciální fázi růstu za sterilních podmínek v médiu RPMI 1640 obohaceném o 10% bovinního fetálního séra (FCS), penicilinu (100 jednotek/ml), streptomycinu (0,1 mg/ml) a L-glutaminu (2 mmol). Inkubovány byly při 37 °C v atmosféře z 95 % vzduchu a 5 % CO2. Buněčné linie byly pasážovány každý druhý nebo třetí den.
Pro analýzu in vitro cytotoxicity testovaných formulací byly buňky 4T1 (2 x 105) nasazeny na Petriho misky (35 mm) a inkubovány přes noc při 37 °C. K buňkám pak byly přidány testované formulace tak, aby finální koncentrace temoporfinu byly v rozmezí 0,25 až 2 μΜ a následně byly dále 16 hodin inkubovány. Koncentrace temoporfinu v SLNP byla zvolena tak, aby sama o sobě nezpůsobila více než 10% mortalitu buněk. Testovací misky s buňkami byly propláchnuty médiem bez fenolové červeně (FČ) a po přidání kultivačního média bez FČ byly 30 min ozařovány pomocí halogenové lampy (75 W) vybavené filtrem pro vlnové délky 620 až 680 nm
-8CZ 307681 B6 (Andover, Sálem, NH). Maximum excitace temoporfinu odpovídá Zex = 652 nm. Intenzita ozařování buněk byla 3,7 mW/cm2 s celkovou dávkou ozáření 6,6 J/cm2. V Burkerově komůrce byl 24 hodin po ozáření stanoven pomocí vstřebávání trypanové modři poměr živých a mrtvých buněk (%, buňky/ml) a tím byly získány křivky dávka - účinek, z kterých byly číselně vyhodnoceny hodnoty IC 50. Hodnota IC 50 představuje koncentraci temoporfinu, která je potřebná k usmrcení 50 % buněk a byla vypočtena pro každou křivku (Tabulka 3). V kontrolních experimentech byl hodnocen jejich toxický efekt bez ozáření (tzv. dark toxicity, toxicita bez fotodynamického efektu) a taktéž toxicita formulací SLNP bez obsahu temoporfinu (prázdných, tj. 1-tetradekanol a PEOxPCLy) při stejných koncentračních podmínkách. Byla zjištěna velmi nízká toxicita bez ozáření stejně jako u SPLP bez temoporfinu (pod 10 % v celém koncentračním rozsahu).
Subcelulámí lokalizace fotosenzibilizátoru temoporfinu byla zkoumána pomocí fluorescenční mikroskopie v porovnání s formulací originátora (komerční, 4 mg temoporfinu, 376 mg ethanolu a 560 mg propylenglykolu). Nádorové buňky 4T1 nasazené na krycí sklíčka, umístněné v Petriho miskách (průměr 35 mm) byly inkubovány s formulacemi temoporfinu o konečné koncentraci 2 μΜ (1 h nebo 4 h inkubace) nebo 1 μΜ (16 h inkubace) v kultivačním médiu při 37 °C. Po inkubaci byly misky s buňkami promyty třikrát PBS, zality bezbarvým médiem bez FC a zkoumány pod mikroskopem (DM IRB, Leica) vybaveným fotoaparátem (DFC 480) při použití objektivu s 63x olejovou imerzí a filtrační kostkou (N2.1, Leica), excitace: BP 515-560 nm, emise: LP 590 nm). Fluorescence formulací fotosenzibilizátoru temoporfinu v nádorových 4T1 buňkách byla měřena 1, 4 a 16 hodin po přidání formulace do kultivačního média. Testovaná nanoformulace, v porovnání s formulací originátora, vykazovala významně rychlejší kinetiku nárůstu fluorescence (po 4 h).
Pro sledování subcelulámí kolokalizace byly buňky inkubovány s testovanou nanoformulací temoporfinu a k buňkám byl postupně přidán na 30 min 100 nM MitoTracker Green (pro značení mitochondrií) nebo 250 nM ER-Tracker Blue pro značení endoplazmatického retikula (ER). Pro označení lysozomů byl do kultivačního média (1 h) přidán 500 nM LysoTracker Green. Filtrační kostka typu A (Leica, excitace: BP 340-380 nm a emise: LP 400 nm) byla použita pro analýzu ER Tracker Blue; filtrační kostka 13 (Leica, excitace: BP 450-490 a emise: LP 515) byla použita pro MitoTracker Green a LysoTracker Green. Testovaná nanoformulace byla lokalizována především v ER.
Terapeutická účinnost pro cílený transport léčiva s PDT aplikací byla testována na nádorovém modelu Nu/Nu myší in vivo a byla srovnaná s originální formulací (komerční, označena jako originátor). Buňky lidského karcinomu prsu linie MDA-MB-231 (lxlO7 buněk) byly suspendovány v 0,1 ml PBS a 0,1 ml Matrigelu a následně subkutánně (s.c.) injikovány do zadních boků myší. Když hmotnost tumoru dosáhla objemu 200 až 300 mm3 (7 až 10 dnů po transplantaci), testována formulace byla v objemu 0,1 ml na 20 g myši intravenózně (i.v.) injikována do ocasní žíly v dávce temoporfinu 0,8 mg/kg myši. Po třech hodinách byla plocha nádoru (2 cm2) ozářená pomocí xenonové lampy, (500 až 700 nm, Zex. 652 nm), o celkové maximální dávce světla 100 J/cm2 a intenzitě ozáření 200 mW/cm2. Kontrolní skupina myší byla za stejných podmínek ozářená, ale bez působení léčiva (viz Obrázek 5). Každá experimentální skupina se skládala z 5 myší. Čtyřicet dva dnů po podání testovaných nanoformulací byly myši usmrceny předávkováním ketaminem a nádory byly histologicky vyhodnoceny. Všechny aspekty zvířecích experimentů a chovu byly prováděny v souladu s národními a evropskými předpisy a byly schváleny ústavním výborem (Bříza, Tomáš, Jarmila Králová, Petr Cígler, Zdeněk Kejík, Pavla Poučková, Petr Vašek, Irena Moserová, Pavel Martásek, and Vladimír Král. 2012. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 22 (1): 82-84; Králová, Jarmila, Tomáš Bríza, Irena Moserová, Bohumil Dolenský, Petr Vašek, Pavla Poučková, Zdenek Kejík, et al. 2008. Joumal of Medicinal Chemistry 51 (19): 5964-73). Získaná data pro každou testovanou skupinu jsou vyjádřena jako aritmetický průměr (n=5), chyba měření byla vypočtena jako směrodatná odchylka (± SD) a zobrazena jako funkce času. Zmenšení objemu nádoru bylo ve srovnání s
-9CZ 307681 B6 neošetřenou kontrolní skupinou statisticky významné na hladině významnosti a=0.01 (Tabulka 4).
Inhibice růstu nádoru (tumor growth inhibition, % TGI) jako měřítko účinnosti terapie byla srovnaná s komerční formulací (4 mg temoporfinu, 376 mg ethanolu a 560 mg propylenglykolu), (viz Obrázek 6). Vypočtena byla podle rovnice (5), kde V je střední objem nádoru konkrétní testované skupiny v daném časovém bodě, Vo je střední objem nádoru konkrétní testované skupiny na začátku experimentu, Vk je střední objem nádoru kontrolní skupiny (s aplikací fyziologického roztoku) v daném časovém bodě a Vko je střední objem nádoru kontrolní skupiny na začátku experimentu:
TGI (%) - 100 - x íqqI (5)
IGcAfce J
Příklad 2
Formulace byla analogická Příkladu 1, obměna spočívala v jiném složení (stupeň polymerace poly(s-kaprolaktonového) bloku) použitého kopolymeru (PEO45PCL17). Výsledky z DLS analýzy (RH, PDI, ZP) uvedeny v Tabulce 1. Výsledky z DSC jsou uvedeny na Obrázku 2. Výsledky pro účinnost enkapsulace temoporfinu (%) a obsah temoporfinu (%) v SLNP jsou uvedeny v Tabulce 2. Transmisní elektronové mikrografy testovaných vzorků jsou zobrazeny na Obrázku 3. Časový profil in vitro uvolňování temoporfinu (%) z nanoformulací je zobrazen na Obrázku 4. Analýza in vitro cytotoxicity probíhala dle Příkladu 1, obměna spočívala v použití finálních koncentrací temoporfinu inkorporovaného v testovaných SLNP, které byly v rozmezí 1 až 20 μΜ. Výsledky z mortality buněk (%), IC 50 (μΜ) jsou uvedeny v Tabulce 3. Postup subcelulámí lokalizace fotosenzibilizátoru temoporfinu pomocí fluorescenční mikroskopie proběhl dle Příkladu 1. Postup stanovení subcelulámí kolokalizace nanoformulací pomocí fluorescenční mikroskopie proběhl dle Příkladu 1, obměna spočívala v její lokalizaci - především v lysozomech. Výsledky terapeutické účinnosti pro cílený transport temoporfinu s PDT aplikací in vivo jsou zobrazeny na Obrázku 5 a jejich statistické vyhodnocení je uvedeno v Tabulce 4. Graf znázorňující inhibici růstu nádoru je zobrazen na Obrázku 6.
Příklad 3
Formulace dle Příkladu 1, obměna spočívala v jiném složení (stupeň polymerace poly(skaprolaktonového) bloku) použitého kopolymeru (PEO45PCL34). Výsledky z DLS analýzy (Rh, PDI, ZP) uvedeny v Tabulce 1. Výsledky z DSC jsou uvedeny na Obrázku 2. Výsledky pro účinnost enkapsulace temoporfinu (%) a obsah temoporfinu (%) v SLNP jsou uvedeny v Tabulce
2. Transmisní elektronové mikrograly testovaných vzorků jsou zobrazeny na Obrázku 3. Časový profil in vitro uvolňování temoporfinu (%) z nanoformulací je zobrazen na Obrázku 4. Analýza in vitro cytotoxicity dle Příkladu 1, obměna spočívala v použití finálních koncentrací temoporfinu inkorporovaného v testovaných SLNP, které byly v rozmezí 1 až 20 μΜ. Výsledky z mortality buněk (%), IC 50 (μΜ) jsou uvedeny v Tabulce 3. Postup subcelulámí lokalizace fotosenzibilizátoru temoporfinu pomocí fluorescenční mikroskopie dle Příkladu 1. Výsledky terapeutické účinnosti pro cílený transport temoporfinu s PDT aplikací in vivo jsou zobrazeny na Obrázku 5, obměna spočívala ve statistické analýze dat, kde zmenšení objemu nádoru bylo ve srovnání s neošetřenou kontrolní skupinou statisticky nevýznamné na hladině významnosti a=0.01, jak je uvedeno v Tabulce 4. Graf znázorňující inhibici růstu nádoru je zobrazen na Obrázku 6.
- 10CZ 307681 B6
Příklad 4
Formulace dle Příkladu 1, obměna spočívala v hmotnostním složení lipidické fáze, kde navážka 1-tetradekanolu byla 50 mg/ml a ve hmotnostním složení vodné fáze, kde navážka PEO45PCL7 byla 10 mg/ml. Výsledky z DLS analýzy (RH, PDI, ZP) uvedeny v Tabulce 1. Výsledky pro účinnost enkapsulace temoporfinu (%) a obsah temoporfinu (%) v SLNP jsou uvedeny v Tabulce 2.
Příklad 5
Formulace dle Příkladu 1, obměna spočívala v hmotnostním složení lipidické fáze, kde navážka 1-tetradekanolu byla 50 mg/ml a ve hmotnostním složení vodné fáze, kde navážka PEO45PCL17 byla 10 mg/ml. Obměna dále spočívala dále v jiném složení (stupeň polymerace poly(skaprolaktonového) bloku) použitého kopolymeru (PEO45PCL17). Výsledky z DLS analýzy (RH, PDI, ZP) uvedeny v Tabulce 1. Výsledky pro účinnost enkapsulace temoporfinu (%) a obsah temoporfinu (%) v SLNP jsou uvedeny v Tabulce 2.
Příklad 6
Formulace dle Příkladu 1, obměna spočívala v hmotnostním složení lipidické fáze, kde navážka 1-tetradekanolu byla 50 mg/ml a ve hmotnostním složení vodné fáze, kde navážka PEO45PCL34 byla 10 mg/ml. Obměna dále spočívala v jiném složení (stupeň polymerace poly(skaprolaktonového) bloku) použitého kopolymeru (PEO45PCL34). Výsledky z DLS analýzy (RH, PDI, ZP) uvedeny v Tabulce 1. Výsledky pro účinnost enkapsulace temoporfinu (%) a obsah temoporfinu (%) v SLNP jsou uvedeny v Tabulce 2.
Příklad 7
Formulace dle Příkladu 1, obměna spočívala v navážce temoporfinu použité při přípravě testovaných nanoformulací, která byla 20 mg/ml. Výsledky z DLS analýzy (RH, PDI, ZP) uvedeny v Tabulce 1. Výsledky pro účinnost enkapsulace temoporfinu (%) a obsah temoporfinu (%) v SLNP jsou uvedeny v Tabulce 2.
Příklad 8
Formulace dle Příkladu 1, obměna spočívala v navážce temoporfinu použité při přípravě testovaných nanoformulací, která byla 20 mg/ml. Další obměna spočívala v jiném složení (stupeň polymerace poly(s-kaprolaktonového) bloku) použitého kopolymeru (PEO45PCL17).Výsledky z DLS analýzy (Rh, PDI, ZP) uvedeny v Tabulce 1. Výsledky pro účinnost enkapsulace temoporfinu (%) a obsah temoporfinu (%) v SLNP jsou uvedeny v Tabulce 2.
Příklad 9
Formulace dle Příkladu 1, obměna spočívala v navážce temoporfinu použité při přípravě testovaných nanoformulací, která byla 20 mg/ml. Další obměna spočívala v jiném složení (stupeň polymerace poly(s-kaprolaktonového) bloku) použitého kopolymeru (PEO45PCL34). Výsledky z DLS analýzy (Rh, PDI, ZP) uvedeny v Tabulce 1. Výsledky pro účinnost enkapsulace temoporfinu (%) a obsah temoporfinu (%) v SLNP jsou uvedeny v Tabulce 2.
- 11 CZ 307681 B6
Tabulka 1: Velikost částic (Rh, nm), index polydisperzity /PDI), zeta potenciál (ZP, mV) vzorků pevných lipidických nanoformulací s inkorporovaným temoporfinem (průměr ± SD, n=3), při pH~5
| i | Koncentrace .(mg i .ml) i Fiíráiistee | | --------------------s---------— Imotonstni orocenta (obsah i | PDI ± SD | ZP(mV)*SD | ||||
| latkv v sušině sssúnui) | R-b {títn):t SD | ||||||
| i ! í-ieíradekanol t ; | PEQxPCLy | tetBopróíin | -tetradckawl | PEOxPCU | |||
| i Přiklad l | 13,3 ± 0.8 | 0,7 ± 0,3 | -8.2 ± 1.7 | ||||
| i Přiklad 2 i 10 | 50 | 10 | 14,3 | 71,4 | 7;,8.« 2,3 | 0,4 i 0,2 | -17,8 ± 3,2 : |
| i Přiklad 3 | | 8,9 ± 1,1 | 0,9 ±0.2 | -13,1 ± 0,5 | ||||
| i Přiklad 4 [ | 316,2 ± 22,5 | 0,9 ±0.01 | -9,2 ±1,6 | ||||
| j Příklad 5 i 50 | w | 10 | 71,4 | I4(3 | 349.2 s: 15,1 | 6,6 * 0,01 | -7,5 = 1,3 |
| 1 Příklad 6 1 | 353,2 t: 3.5.3 | 0,9 ±0,01 | -6,5 ± 1,3 | ||||
| Přiklad? i | 6,3 x C?.4 | 0,8 ± 0,02 | -9,2 i 1.3 | ||||
| Příklad 8 10 | 50 | 20 | 12,5' | 62,5 | 10, t ± 1,6 | 0,9 ±0,003 | -4,5 ±1.6 |
| | Pří kl ad 9 1 | 20,6i J.4 | 0.5 ± 0,0 J | -14.6 ± 1,2 |
Tabulka 2: Účinnosti enkapsulace temoporfinu (EE %) a obsah temoporfinu (DL %) v testovaných pevných lipických nanočástic s inkorporovaným temoporfinem (průměr ± SD, ίο n = 3).
| Formulace DL (%) ± SD | EL (%) χ SD |
| Přikladl ρ.92±0,06 | 22.22 ± 0.3 |
| Příklad 2 3,93 ±0,09 | 22,65 ±0,1 |
| Příklad 3 ΐ 3,96 ± 0,08 | 23.06 · 0.4 |
| Příklad 4 | 2,98 i 0,11 | 14.83 x 0.6 |
| Příklad 5 3,08 ±0,05 | 17.02 ± LI |
| | Přiklad 6 i 3.12 ±0,08 i i | 18,13 ±0.8 |
| I Příklad 7 i| .70 ±0,34 | 5.26 ±0.3 |
| I Příklad 8 .1,82 ±0,12 | 7.15 ±0,4 |
| Příkladů 1,90 ±0.02 | 9.12 ± 0.3 |
- 12CZ 307681 B6
Tabulka 3: Mortalita buněk (%) a IC 50 (μΜ) po podání pevných lipidických nanočástic s inkorporováným temoporfinem připravených dle Příkladů 1, 2 a 3 (průměr ± SD, n = 5).
| Formulace | Koncentrace (iiM) (temoporfinu) | Mortalita buněk (%) (rnean ± SD) | IC 50 (μΜ) (tenuiporfín) |
| 0,25 | 24 ±6,8 | ||
| 0.5 | 67 ±24,7 | ||
| Příklad l | 1 | 88 ±0,9 | 0,39 |
| 2 | 93 ± 2,4 | ||
| 1 | 47 ± 12,9 | ||
| 2,5 | 44 ± 4,2 | ||
| Příklad 2 | 10 | 66 ± 7,7 | 2,41 |
| 20 | 61 ± 11,5 | ||
| 1 | 21 ± 1,6 | ||
| Příklad 3 | 2,5 | 22 ± 7,6 | >20 |
| 10 | 26 ± 15,7 | ||
| 20 | 29 ± 9f7 |
Tabulka 4: Statistická analýza in vivo dat (one-shot PDT) za použití statistické analýzy rozptylu jednoduchého třídění (one-way ANOVA) z programu Origin 9 (OriginLab software), při prahových hodnotách hladiny významnosti a = 0,05 a 0,01.
Žádné statisticky významné rozdíly mezi skupinami, a = 0.05. + Statisticky významné rozdíly mezi skupinami, a = 0.05.
++ Statisticky významné rozdíly mezi skupinami, a = 0.01.
Příklad 10
Formulace dle Příkladu 1, s tím, že fotosenzibilizátor byl verteporfin.
- 13 CZ 307681 B6
Příklad 11
Formulace dle Příkladu 1, s tím, že fotosenzibilizátor byl lutecium texafyrin.
Příklad 12
Formulace dle Příkladu 1, s tím, že fotosenzibilizátor byl hypericin.
Příklad 13
Formulace dle Příkladu 1, s tím, že fotosenzibilizátor byl porficen.
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (10)
1. Fotoaktivovatelná nanočástice pro fotodynamické aplikace, obsahující jádro, obsahující fotosenzibilizátor, a obal, obsahující polyethylenoxid monomethyléterň/oc£-poly(s-karoplakton, vyznačená tím, že jádro obsahuje 1 až 50 hmotn. % fotosenzibilizátoru vybraného z derivátů chlorinu a/nebo porfyrinu a/nebo antrachinonu, vztaženo na celkovou sušinu nanočástice, s výhodou 1 až 4 hmotn. % fotosenzibilizátoru, vztaženo na celkovou sušinu nanočástice, a dále 1 až 80 hmotn. % (Cs až C22) mastných alkoholů, vztaženo na celkovou sušinu nanočástice; a obal obsahuje 1 až 80 hmotn. % polyethylenoxid monomethyléter-ů/oc£-poly(skaroplaktonu), vztaženo na celkovou sušinu nanočástice; přičemž velikost nanočástice je v rozmezí od 1 do 1000 nm, a přičemž jádro nanočástice je při 4 °C pevné a při 39 °C kapalné, stanoveno diferenční skenovací kalorimetrií s proplachováním plynným dusíkem o objemu 50 cm3/min za použití india jako standardu v teplotních cyklech: ohřev - chlazení - ohřev, při 5 °C/min, a odečet teplot tání byl proveden z první křivky ohřevu diferenční skenovací kalorimetrie, kdy výsledkem byl bimodální termogram se dvěma endotermami, jednou pro eutektickou směs fotosenzibilizátoru a mastného alkoholu a druhou pro mastný alkohol.
2. Fotoaktivovatelná nanočástice podle nároku 1, vyznačená tím, že fotosenzibilizátor je vybraný ze skupiny zahrnující temoporfin, verteporfin, lutecium texafyrin, hypericin a porficen.
3. Fotoaktivovatelná nanočástice podle nároku 1 nebo 2, vyznačená tím, že jádro obsahuje jeden typ (Cs až C22) mastného alkoholu, s výhodou je mastným alkoholem (C14) mastný alkohol.
4. Fotoaktivovatelná nanočástice podle nároku 1 nebo 2, vyznačená tím, že jádro obsahuje kombinaci (Cs až C22) mastných alkoholů.
5. Fotoaktivovatelná nanočástice podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, vyznačená tím, že polymemí surfaktant polyethylenoxid monomethyléter-ů/oc£-poly(skaroplakton) je o polymerizačním stupni polyethylenoxidového bloku 10 až 100 a o polymerizačním stupni poly(s-karoplaktonového) bloku 3 až 60, s výhodou je polymerizační stupeň polyethylenoxidového bloku 20 až 50 a póly (εkaroplaktonového) bloku 3 až 20, výhodněji je polymerizační stupeň polyethylenoxidového bloku 45 a póly (ε-karoplaktonového) bloku 7.
- 14CZ 307681 B6
6. Způsob přípravy fotoaktivovatelné nanočástice podle kteréhokoliv z předchozích nároků, vyznačený tím, že:
- fotosenzibilizátor se rozpustí v rozpouštědle, s výhodou v dichlormethanu, a přidá se k (Cs až C22) mastnému alkoholu zahřátému na 45 °C za vzniku první fáze;
- polymemí surfaktant se rozpustí v organickém rozpouštědle, s výhodou v dichlormethanu, přidá se voda a směs se zahřeje na 45 °C za vzniku drahé fáze;
- obě zahřáté fáze se smíchají a homogenizují, s výhodou po dobu 2 min při 8000 otáčkách/min;
- výsledná emulze se podrobí působení ultrazvuku;
- výsledná emulze se ochladí na laboratorní teplotu.
7. Farmaceutická kompozice, vyznačená tím, že obsahuje fotoaktivovatelnou nanočástici podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 a dále obsahuje farmaceuticky přijatelné přísady, vybrané ze skupiny zahrnující antiadheziva, pojivá, potahovací látky, barviva, bobtnadla, ochucovadla, maziva, konzervanty, sladidla, sorbenty.
8. Fotoaktivovatelná nanočástice podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 a/nebo farmaceutická kompozice podle nároku 7 pro použití jako léčivo.
9. Fotoaktivovatelná nanočástice podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 a/nebo farmaceutická kompozice podle nároku 7 pro použití jako léčivo pro intravenózní aplikaci.
10. Fotoaktivovatelná nanočástice podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 a/nebo farmaceutická kompozice podle nároku 7 pro použití při fotodynamické terapii a/nebo fotodynamické diagnostice.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2016-119A CZ307681B6 (cs) | 2016-02-29 | 2016-02-29 | Fotoaktivovatelná nanočástice pro fotodynamické aplikace, způsob její přípravy, farmaceutická kompozice ji obsahující a jejich použití |
| PCT/CZ2017/050008 WO2017148454A1 (en) | 2016-02-29 | 2017-02-24 | Photoactivatable nanoparticles for photodynamic applications, method of preparation thereof, pharmaceutical compositions containing them, and use thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2016-119A CZ307681B6 (cs) | 2016-02-29 | 2016-02-29 | Fotoaktivovatelná nanočástice pro fotodynamické aplikace, způsob její přípravy, farmaceutická kompozice ji obsahující a jejich použití |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2016119A3 CZ2016119A3 (cs) | 2017-09-13 |
| CZ307681B6 true CZ307681B6 (cs) | 2019-02-13 |
Family
ID=58358331
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2016-119A CZ307681B6 (cs) | 2016-02-29 | 2016-02-29 | Fotoaktivovatelná nanočástice pro fotodynamické aplikace, způsob její přípravy, farmaceutická kompozice ji obsahující a jejich použití |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ307681B6 (cs) |
| WO (1) | WO2017148454A1 (cs) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012127037A2 (en) * | 2011-03-24 | 2012-09-27 | Leo Pharma A/S | A composition comprising lipid nanoparticles and a corticosteroid or vitamin d derivative |
| US20150273084A1 (en) * | 2014-03-26 | 2015-10-01 | Korea Institute Of Science And Technology | Methylene blue nanoparticle for bioimaging and photodynamic therapy and use thereof |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3421468A1 (de) | 1984-06-08 | 1985-12-19 | Dr. Rentschler Arzneimittel Gmbh & Co, 7958 Laupheim | Lipidnanopellets als traegersystem fuer arzneimittel zur peroralen anwendung |
| US5250236A (en) | 1991-08-05 | 1993-10-05 | Gasco Maria R | Method for producing solid lipid microspheres having a narrow size distribution |
| DE4131562A1 (de) | 1991-09-18 | 1993-03-25 | Medac Klinische Spezialpraep | Arzneistofftraeger aus festen lipidteilchen-feste lipidnanosphaeren (sln) |
| US5785976A (en) | 1993-03-05 | 1998-07-28 | Pharmacia & Upjohn Ab | Solid lipid particles, particles of bioactive agents and methods for the manufacture and use thereof |
| GB0005855D0 (en) | 2000-03-10 | 2000-05-03 | Scotia Holdings Plc | Compounds for pdt |
| ES2387562T3 (es) | 2001-03-23 | 2012-09-26 | Luitpold Pharmaceuticals, Inc. | Conjugados alcohol graso-medicamento |
| US20050048109A1 (en) | 2003-08-26 | 2005-03-03 | Ceramoptec Industries, Inc. | Non-polar photosensitizer formulations for photodynamic therapy |
| US8986731B2 (en) | 2003-08-26 | 2015-03-24 | Biolitec Pharma Marketing Ltd | Pegylated liposomal formulations of hydrophobic photosensitizers for photodynamic therapy |
| US8709449B2 (en) | 2004-02-12 | 2014-04-29 | Biolitec Pharma Marketing Ltd | Methods and compositions for improving photodynamic therapy through administration of lipids |
| EP1674081A1 (de) | 2004-12-23 | 2006-06-28 | KTB Tumorforschungsgesellschaft mbH | Herstellung von lipidbasierten Nanopartikeln unter Einsatz einer dualen asymmetrischen Zentrifuge |
| ITMI20051024A1 (it) | 2005-06-01 | 2006-12-02 | Maria Rosa Gasco | Nuovo uso di nanoparticelle lipidiche solide |
| US20070031482A1 (en) | 2005-08-02 | 2007-02-08 | Ceramoptec Industries, Ind. | PDT treatment method for cellulites and cosmetic use |
| US20070237826A1 (en) | 2006-04-05 | 2007-10-11 | Rao Kollipara K | Polymerized solid lipid nanoparticles for oral or mucosal delivery of therapeutic proteins and peptides |
| EP2051699B1 (en) | 2006-05-10 | 2018-09-26 | biolitec Unternehmensbeteiligungs II AG | Photosensitizer formulations for topical applications |
| US20080214460A1 (en) | 2007-01-18 | 2008-09-04 | Ceramoptec Industries, Inc. | Formulations for cosmetic and wound care treatments with photosensitizers as fluorescent markers |
| FR2943545B1 (fr) | 2009-03-31 | 2011-06-03 | Univ Claude Bernard Lyon | Nanoparticules lipidiques solides encapsulant du minoxidil et suspension aqueuse les contenant. |
| US8815931B2 (en) | 2009-04-28 | 2014-08-26 | Biolitec Pharma Marketing Ltd | Oral formulations for tetrapyrrole derivatives |
| ES2384060B1 (es) | 2010-03-24 | 2013-09-23 | Lipotec S.A. | Cápsulas de nanopartículas lipídicas. |
-
2016
- 2016-02-29 CZ CZ2016-119A patent/CZ307681B6/cs not_active IP Right Cessation
-
2017
- 2017-02-24 WO PCT/CZ2017/050008 patent/WO2017148454A1/en active Application Filing
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012127037A2 (en) * | 2011-03-24 | 2012-09-27 | Leo Pharma A/S | A composition comprising lipid nanoparticles and a corticosteroid or vitamin d derivative |
| US20150273084A1 (en) * | 2014-03-26 | 2015-10-01 | Korea Institute Of Science And Technology | Methylene blue nanoparticle for bioimaging and photodynamic therapy and use thereof |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Gou, Jingxin, et al. "Decreased core crystallinity facilitated drug loading in polymeric micelles without affecting their biological performances." Biomacromolecules 16.9 (2015): 2920-2929. * |
| Taratula, Olena, et al. "Naphthalocyanine-Based Biodegradable Polymeric Nanoparticles for Image-Guided Combinatorial Phototherapy." Chemistry of Materials 27.17 (2015): 6155-6165. * |
| Zhang, Xingwang, et al. "Exploring the potential of self-assembled mixed micelles in enhancing the stability and oral bioavailability of an acid-labile drug." European Journal of Pharmaceutical Sciences 62 (2014): 301-308. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2017148454A1 (en) | 2017-09-08 |
| CZ2016119A3 (cs) | 2017-09-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Pei et al. | Light-activatable red blood cell membrane-camouflaged dimeric prodrug nanoparticles for synergistic photodynamic/chemotherapy | |
| Kirchherr et al. | Stabilization of indocyanine green by encapsulation within micellar systems | |
| Zhang et al. | Carrier-free, chemophotodynamic dual nanodrugs via self-assembly for synergistic antitumor therapy | |
| Gao et al. | Neuronal mitochondria-targeted delivery of curcumin by biomimetic engineered nanosystems in Alzheimer's disease mice | |
| Kraft et al. | Interactions of indocyanine green and lipid in enhancing near-infrared fluorescence properties: the basis for near-infrared imaging in vivo | |
| Xu et al. | Platelet membrane coating coupled with solar irradiation endows a photodynamic nanosystem with both improved antitumor efficacy and undetectable skin damage | |
| Zheng et al. | Enhanced tumor treatment using biofunctional indocyanine green-containing nanostructure by intratumoral or intravenous injection | |
| Zhu et al. | Dually pH/reduction-responsive vesicles for ultrahigh-contrast fluorescence imaging and thermo-chemotherapy-synergized tumor ablation | |
| Zheng et al. | Indocyanine green-containing nanostructure as near infrared dual-functional targeting probes for optical imaging and photothermal therapy | |
| Jia et al. | Plasma membrane activatable polymeric nanotheranostics with self-enhanced light-triggered photosensitizer cellular influx for photodynamic cancer therapy | |
| Shi et al. | Reactive oxygen species-responsive nanoparticles based on PEGlated prodrug for targeted treatment of oral tongue squamous cell carcinoma by combining photodynamic therapy and chemotherapy | |
| Hung et al. | Active tumor permeation and uptake of surface charge-switchable theranostic nanoparticles for imaging-guided photothermal/chemo combinatorial therapy | |
| Caltagirone et al. | Cancer-cell-targeted theranostic cubosomes | |
| AU2016248454B2 (en) | Nanostructures comprising cobalt porphyrin-phospholipid conjugates and polyhistidine-tags | |
| Ding et al. | Dual-functional bio-derived nanoparticulates for apoptotic antitumor therapy | |
| Mironov et al. | Nanosized vehicles for delivery of photosensitizers in photodynamic diagnosis and therapy of cancer | |
| Zagami et al. | Folate-decorated amphiphilic cyclodextrins as cell-targeted nanophototherapeutics | |
| Thakur et al. | Co-administration of zinc phthalocyanine and quercetin via hybrid nanoparticles for augmented photodynamic therapy | |
| Bourdon et al. | A comparative study of the cellular uptake, localization and phototoxicity of meta-tetra (hydroxyphenyl) chlorin encapsulated in surface-modified submicronic oil/water carriers in HT29 tumor cells | |
| Thanasekaran et al. | Lipid-wrapped upconversion nanoconstruct/photosensitizer complex for near-infrared light-mediated photodynamic therapy | |
| Sheng et al. | Lipoprotein-inspired penetrating nanoparticles for deep tumor-targeted shuttling of indocyanine green and enhanced photo-theranostics | |
| Chen et al. | Oral nanostructured lipid carriers loaded with near-infrared dye for image-guided photothermal therapy | |
| Han et al. | Acidity-triggered tumor retention/internalization of chimeric peptide for enhanced photodynamic therapy and real-time monitoring of therapeutic effects | |
| Shao et al. | Photostability highly improved nanoparticles based on IR-780 and negative charged copolymer for enhanced photothermal therapy | |
| Fathi-Karkan et al. | Recent advancements in the targeted delivery of etoposide nanomedicine for cancer therapy: A comprehensive review |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20220228 |