CZ307305B6 - Linkosamidy, jejich příprava a použití - Google Patents
Linkosamidy, jejich příprava a použití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ307305B6 CZ307305B6 CZ2017-137A CZ2017137A CZ307305B6 CZ 307305 B6 CZ307305 B6 CZ 307305B6 CZ 2017137 A CZ2017137 A CZ 2017137A CZ 307305 B6 CZ307305 B6 CZ 307305B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- formula
- alkyl
- reaction mixture
- acid
- precursor
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 80
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 52
- SVSARCCKBMZNMR-UHFFFAOYSA-N [1-[2-[methyl-[2-[4-(oxoazaniumylmethylidene)pyridin-1-yl]ethyl]amino]ethyl]pyridin-4-ylidene]methyl-oxoazanium;dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].C1=CC(=C[NH+]=O)C=CN1CCN(C)CCN1C=CC(=C[NH+]=O)C=C1 SVSARCCKBMZNMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 33
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 22
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 13
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims abstract description 13
- 125000004399 C1-C4 alkenyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- 125000004648 C2-C8 alkenyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 99
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 66
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 40
- RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N CoASH Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N 0.000 claims description 39
- RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N coenzime A Natural products OC1C(OP(O)(O)=O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 239000005516 coenzyme A Substances 0.000 claims description 39
- 229940093530 coenzyme a Drugs 0.000 claims description 39
- KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N dephosphocoenzyme A Natural products OC1C(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 37
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 32
- VMSQKUCYEMOKMM-HUQJOJSCSA-N 2-[(2s,3s,4r,5r,6s)-3,4,5-trihydroxy-6-[(1r,2r)-2-methoxy-1-[[(2s)-1-methylpyrrolidine-2-carbonyl]amino]propyl]oxan-2-yl]sulfanylethyl 2-hydroxybenzoate Chemical compound N([C@H]([C@@H](C)OC)[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](SCCOC(=O)C=2C(=CC=CC=2)O)O1)O)C(=O)[C@@H]1CCCN1C VMSQKUCYEMOKMM-HUQJOJSCSA-N 0.000 claims description 27
- VMSQKUCYEMOKMM-UHFFFAOYSA-N Celesticetin Natural products O1C(SCCOC(=O)C=2C(=CC=CC=2)O)C(O)C(O)C(O)C1C(C(C)OC)NC(=O)C1CCCN1C VMSQKUCYEMOKMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 25
- OJMMVQQUTAEWLP-KIDUDLJLSA-N lincomycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 OJMMVQQUTAEWLP-KIDUDLJLSA-N 0.000 claims description 19
- OJMMVQQUTAEWLP-UHFFFAOYSA-N Lincomycin Natural products CN1CC(CCC)CC1C(=O)NC(C(C)O)C1C(O)C(O)C(O)C(SC)O1 OJMMVQQUTAEWLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 229960005287 lincomycin Drugs 0.000 claims description 16
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 15
- -1 R23 Chemical compound 0.000 claims description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 10
- IOHPVZBSOKLVMN-UHFFFAOYSA-N 2-(2-phenylethyl)benzoic acid Chemical group OC(=O)C1=CC=CC=C1CCC1=CC=CC=C1 IOHPVZBSOKLVMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 9
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 claims description 8
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 7
- 238000005660 chlorination reaction Methods 0.000 claims description 7
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 230000032050 esterification Effects 0.000 claims description 7
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 claims description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 6
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 claims description 6
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 5
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 claims description 5
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 claims description 5
- 241001156739 Actinobacteria <phylum> Species 0.000 claims description 4
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 3
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 claims description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 3
- 241000224482 Apicomplexa Species 0.000 claims description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 2
- 241000224483 Coccidia Species 0.000 claims description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 2
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 claims description 2
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 claims description 2
- 241000223777 Theileria Species 0.000 claims description 2
- 241000223996 Toxoplasma Species 0.000 claims description 2
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 claims description 2
- 244000045947 parasite Species 0.000 claims description 2
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 3
- 241000223836 Babesia Species 0.000 claims 1
- 230000009471 action Effects 0.000 claims 1
- 201000008680 babesiosis Diseases 0.000 claims 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 abstract description 10
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 abstract description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 abstract description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 abstract description 2
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 abstract 4
- 125000006273 (C1-C3) alkyl group Chemical group 0.000 abstract 1
- 239000003904 antiprotozoal agent Substances 0.000 abstract 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 148
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 104
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 82
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 61
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 35
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 34
- 101100126877 Dictyostelium discoideum ccbl gene Proteins 0.000 description 33
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 29
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 description 28
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 28
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 28
- 229940041028 lincosamides Drugs 0.000 description 28
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 27
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 27
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 27
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 20
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 16
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 7
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- WXTMDXOMEHJXQO-UHFFFAOYSA-N 2,5-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=CC=C1O WXTMDXOMEHJXQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 6
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 6
- 229940090248 4-hydroxybenzoic acid Drugs 0.000 description 5
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 5
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 5
- KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N clindamycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@H](C)Cl)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N 0.000 description 5
- 108091008053 gene clusters Proteins 0.000 description 5
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ATCRIUVQKHMXSH-UHFFFAOYSA-N 2,4-dichlorobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1Cl ATCRIUVQKHMXSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UIAFKZKHHVMJGS-UHFFFAOYSA-N 2,4-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1O UIAFKZKHHVMJGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AKEUNCKRJATALU-UHFFFAOYSA-N 2,6-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=C(O)C=CC=C1O AKEUNCKRJATALU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- YQUVCSBJEUQKSH-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 YQUVCSBJEUQKSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UYEMGAFJOZZIFP-UHFFFAOYSA-N 3,5-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=CC(O)=C1 UYEMGAFJOZZIFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LULAYUGMBFYYEX-UHFFFAOYSA-N 3-chlorobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC(Cl)=C1 LULAYUGMBFYYEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJFXRHURBJZNAO-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC(O)=C1 IJFXRHURBJZNAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- ILUJQPXNXACGAN-UHFFFAOYSA-N O-methylsalicylic acid Chemical compound COC1=CC=CC=C1C(O)=O ILUJQPXNXACGAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 229960002227 clindamycin Drugs 0.000 description 4
- ZWLPBLYKEWSWPD-UHFFFAOYSA-N o-toluic acid Chemical compound CC1=CC=CC=C1C(O)=O ZWLPBLYKEWSWPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 4
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100327159 Arabidopsis thaliana CCB2 gene Proteins 0.000 description 3
- 101100438795 Arabidopsis thaliana CCMB gene Proteins 0.000 description 3
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N Caprylic acid Natural products CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MEFKEPWMEQBLKI-AIRLBKTGSA-N S-adenosyl-L-methioninate Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](C[S+](CC[C@H](N)C([O-])=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 MEFKEPWMEQBLKI-AIRLBKTGSA-N 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960001570 ademetionine Drugs 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 238000004807 desolvation Methods 0.000 description 3
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N gallic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- WVXCVWNSJUNIRQ-UHFFFAOYSA-N n-[2-methoxy-1-(3,4,5-trihydroxy-6-methylsulfanyloxan-2-yl)propyl]-1-methylpyrrolidine-2-carboxamide Chemical group O1C(SC)C(O)C(O)C(O)C1C(C(C)OC)NC(=O)C1CCCN1C WVXCVWNSJUNIRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N pyridoxal 5'-phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP(O)(O)=O)C(C=O)=C1O NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000007682 pyridoxal 5'-phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000011589 pyridoxal 5'-phosphate Substances 0.000 description 3
- 229960001327 pyridoxal phosphate Drugs 0.000 description 3
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 3
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- WIFSDCDETBPLOR-UHFFFAOYSA-N 2-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=CC=C1C(O)=O.NC1=CC=CC=C1C(O)=O WIFSDCDETBPLOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XRXMNWGCKISMOH-UHFFFAOYSA-N 2-bromobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1Br XRXMNWGCKISMOH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IKCLCGXPQILATA-UHFFFAOYSA-N 2-chlorobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1Cl IKCLCGXPQILATA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CJNZAXGUTKBIHP-UHFFFAOYSA-N 2-iodobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1I CJNZAXGUTKBIHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VPHHJAOJUJHJKD-UHFFFAOYSA-N 3,4-dichlorobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(Cl)C(Cl)=C1 VPHHJAOJUJHJKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CXKCZFDUOYMOOP-UHFFFAOYSA-N 3,5-dichlorobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(Cl)=CC(Cl)=C1 CXKCZFDUOYMOOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AJHPGXZOIAYYDW-UHFFFAOYSA-N 3-(2-cyanophenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1C#N AJHPGXZOIAYYDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QCXJEYYXVJIFCE-UHFFFAOYSA-N 4-acetamidobenzoic acid Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 QCXJEYYXVJIFCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MBDUKNCPOPMRJQ-UHFFFAOYSA-N 4-amino-2-chlorobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C(Cl)=C1 MBDUKNCPOPMRJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WUBBRNOQWQTFEX-UHFFFAOYSA-N 4-aminosalicylic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C(O)=C1 WUBBRNOQWQTFEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N D-gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 241001247311 Kocuria rhizophila Species 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N N-benzoylglycine Chemical compound OC(=O)CNC(=O)C1=CC=CC=C1 QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 241001509463 Streptomyces caelestis Species 0.000 description 2
- 241000187399 Streptomyces lincolnensis Species 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N adipic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC(O)=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 239000003430 antimalarial agent Substances 0.000 description 2
- 150000001558 benzoic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 229940114055 beta-resorcylic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- JXTHNDFMNIQAHM-UHFFFAOYSA-N dichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)Cl JXTHNDFMNIQAHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 2
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 2
- 125000003712 glycosamine group Chemical group 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 2
- DKAGJZJALZXOOV-UHFFFAOYSA-N hydrate;hydrochloride Chemical compound O.Cl DKAGJZJALZXOOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 2
- SUMDYPCJJOFFON-UHFFFAOYSA-N isethionic acid Chemical compound OCCS(O)(=O)=O SUMDYPCJJOFFON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000001055 magnesium Nutrition 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- XTEGVFVZDVNBPF-UHFFFAOYSA-N naphthalene-1,5-disulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2C(S(=O)(=O)O)=CC=CC2=C1S(O)(=O)=O XTEGVFVZDVNBPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- LPNBBFKOUUSUDB-UHFFFAOYSA-N p-toluic acid Chemical compound CC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 LPNBBFKOUUSUDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001860 salicylate Drugs 0.000 description 2
- CXMXRPHRNRROMY-UHFFFAOYSA-N sebacic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCC(O)=O CXMXRPHRNRROMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 2
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N thiocyanic acid Chemical compound SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 2
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 2
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N (+/-)-1,3-Butanediol Chemical compound CC(O)CCO PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QBYIENPQHBMVBV-HFEGYEGKSA-N (2R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid Chemical compound O[C@@H](C(O)=O)c1ccccc1.O[C@@H](C(O)=O)c1ccccc1 QBYIENPQHBMVBV-HFEGYEGKSA-N 0.000 description 1
- KWMLJOLKUYYJFJ-GASJEMHNSA-N (2xi)-D-gluco-heptonic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)C(O)=O KWMLJOLKUYYJFJ-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIOPJNTWMNEORI-GMSGAONNSA-N (S)-camphorsulfonic acid Chemical compound C1C[C@@]2(CS(O)(=O)=O)C(=O)C[C@@H]1C2(C)C MIOPJNTWMNEORI-GMSGAONNSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M .beta-Phenylacrylic acid Natural products [O-]C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M 0.000 description 1
- GYSCBCSGKXNZRH-UHFFFAOYSA-N 1-benzothiophene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=C2SC(C(=O)N)=CC2=C1 GYSCBCSGKXNZRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SJJCQDRGABAVBB-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-2-naphthoic acid Chemical compound C1=CC=CC2=C(O)C(C(=O)O)=CC=C21 SJJCQDRGABAVBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTBFRGCFXZNCOE-UHFFFAOYSA-N 1-methylsulfonylpiperidin-4-one Chemical compound CS(=O)(=O)N1CCC(=O)CC1 RTBFRGCFXZNCOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100024341 10 kDa heat shock protein, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- FRPZMMHWLSIFAZ-UHFFFAOYSA-N 10-undecenoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCC=C FRPZMMHWLSIFAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-N 2-Methylbenzenesulfonic acid Chemical compound CC1=CC=CC=C1S(O)(=O)=O LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 2-oxoglutaric acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)C(O)=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YFHKLSPMRRWLKI-UHFFFAOYSA-N 2-tert-butyl-4-(3-tert-butyl-4-hydroxy-5-methylphenyl)sulfanyl-6-methylphenol Chemical compound CC(C)(C)C1=C(O)C(C)=CC(SC=2C=C(C(O)=C(C)C=2)C(C)(C)C)=C1 YFHKLSPMRRWLKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UOQHWNPVNXSDDO-UHFFFAOYSA-N 3-bromoimidazo[1,2-a]pyridine-6-carbonitrile Chemical compound C1=CC(C#N)=CN2C(Br)=CN=C21 UOQHWNPVNXSDDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XRHGYUZYPHTUJZ-UHFFFAOYSA-N 4-chlorobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 XRHGYUZYPHTUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HIQIXEFWDLTDED-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-1-piperidin-4-ylpyrrolidin-2-one Chemical compound O=C1CC(O)CN1C1CCNCC1 HIQIXEFWDLTDED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 102100038222 60 kDa heat shock protein, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000057234 Acyl transferases Human genes 0.000 description 1
- 108700016155 Acyl transferases Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- LSPHULWDVZXLIL-UHFFFAOYSA-N Camphoric acid Natural products CC1(C)C(C(O)=O)CCC1(C)C(O)=O LSPHULWDVZXLIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010059013 Chaperonin 10 Proteins 0.000 description 1
- 108010058432 Chaperonin 60 Proteins 0.000 description 1
- 108050001186 Chaperonin Cpn60 Proteins 0.000 description 1
- 102000052603 Chaperonins Human genes 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N Cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N Decanoic acid Natural products CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 description 1
- DSLZVSRJTYRBFB-UHFFFAOYSA-N Galactaric acid Natural products OC(=O)C(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O DSLZVSRJTYRBFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002907 Guar gum Polymers 0.000 description 1
- 241000629264 Halicreas minimum Species 0.000 description 1
- 101000610640 Homo sapiens U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Proteins 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000002768 Kirby-Bauer method Methods 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 1
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 1
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 1
- 108010022337 Leucine Enkephalin Proteins 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004264 Petrolatum Substances 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-N R-2-phenyl-2-hydroxyacetic acid Natural products OC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001110823 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-A Proteins 0.000 description 1
- 101000712176 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-B Proteins 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100040374 U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Human genes 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000001361 adipic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011037 adipic acid Nutrition 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N alpha-ethylcaproic acid Natural products CCCCC(CC)C(O)=O OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960004909 aminosalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N anhydrous glutaric acid Natural products OC(=O)CCCC(O)=O JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000078 anti-malarial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001203 anti-plasmodial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000842 anti-protozoal effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000009635 antibiotic susceptibility testing Methods 0.000 description 1
- 229940033495 antimalarials Drugs 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N benzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940092714 benzenesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- GONOPSZTUGRENK-UHFFFAOYSA-N benzyl(trichloro)silane Chemical compound Cl[Si](Cl)(Cl)CC1=CC=CC=C1 GONOPSZTUGRENK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N beta-methyl-butyric acid Natural products CC(C)CC(O)=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 235000011132 calcium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- LSPHULWDVZXLIL-QUBYGPBYSA-N camphoric acid Chemical compound CC1(C)[C@H](C(O)=O)CC[C@]1(C)C(O)=O LSPHULWDVZXLIL-QUBYGPBYSA-N 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- KHAVLLBUVKBTBG-UHFFFAOYSA-N caproleic acid Natural products OC(=O)CCCCCCCC=C KHAVLLBUVKBTBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 229920003086 cellulose ether Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 229930016911 cinnamic acid Natural products 0.000 description 1
- 235000013985 cinnamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008119 colloidal silica Substances 0.000 description 1
- 229940075614 colloidal silicon dioxide Drugs 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 239000000625 cyclamic acid and its Na and Ca salt Substances 0.000 description 1
- HCAJEUSONLESMK-UHFFFAOYSA-N cyclohexylsulfamic acid Chemical compound OS(=O)(=O)NC1CCCCC1 HCAJEUSONLESMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- SASYSVUEVMOWPL-NXVVXOECSA-N decyl oleate Chemical compound CCCCCCCCCCOC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SASYSVUEVMOWPL-NXVVXOECSA-N 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009483 enzymatic pathway Effects 0.000 description 1
- AFAXGSQYZLGZPG-UHFFFAOYSA-N ethanedisulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCS(O)(=O)=O AFAXGSQYZLGZPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- DSLZVSRJTYRBFB-DUHBMQHGSA-N galactaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(O)=O DSLZVSRJTYRBFB-DUHBMQHGSA-N 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229960005219 gentisic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 1
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 1
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000665 guar gum Substances 0.000 description 1
- 235000010417 guar gum Nutrition 0.000 description 1
- 229960002154 guar gum Drugs 0.000 description 1
- 230000026030 halogenation Effects 0.000 description 1
- 238000005658 halogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N isobutyric acid Chemical compound CC(C)C(O)=O KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 229940074928 isopropyl myristate Drugs 0.000 description 1
- XUGNVMKQXJXZCD-UHFFFAOYSA-N isopropyl palmitate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(C)C XUGNVMKQXJXZCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940075495 isopropyl palmitate Drugs 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940099563 lactobionic acid Drugs 0.000 description 1
- URLZCHNOLZSCCA-UHFFFAOYSA-N leu-enkephalin Chemical compound C=1C=C(O)C=CC=1CC(N)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 URLZCHNOLZSCCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940099690 malic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960002510 mandelic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N methyl p-hydroxycinnamate Natural products OC(=O)C=CC1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 235000019426 modified starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- DUWWHGPELOTTOE-UHFFFAOYSA-N n-(5-chloro-2,4-dimethoxyphenyl)-3-oxobutanamide Chemical compound COC1=CC(OC)=C(NC(=O)CC(C)=O)C=C1Cl DUWWHGPELOTTOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N n-hexanoic acid Natural products CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KVBGVZZKJNLNJU-UHFFFAOYSA-N naphthalene-2-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=CC2=CC(S(=O)(=O)O)=CC=C21 KVBGVZZKJNLNJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- SOQBVABWOPYFQZ-UHFFFAOYSA-N oxygen(2-);titanium(4+) Chemical class [O-2].[O-2].[Ti+4] SOQBVABWOPYFQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WLJNZVDCPSBLRP-UHFFFAOYSA-N pamoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC=3C4=CC=CC=C4C=C(C=3O)C(=O)O)=C(O)C(C(O)=O)=CC2=C1 WLJNZVDCPSBLRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 229940066842 petrolatum Drugs 0.000 description 1
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 150000003147 proline derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- JZWFDVDETGFGFC-UHFFFAOYSA-N salacetamide Chemical group CC(=O)NC(=O)C1=CC=CC=C1O JZWFDVDETGFGFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003902 salicylic acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N sn-glycerol 3-phosphate Chemical compound OC[C@@H](O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N titanium oxide Inorganic materials [Ti]=O OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 229960002703 undecylenic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000016804 zinc Nutrition 0.000 description 1
- XOOUIPVCVHRTMJ-UHFFFAOYSA-L zinc stearate Chemical class [Zn+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O XOOUIPVCVHRTMJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/18—Acyclic radicals, substituted by carbocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
- C07H15/14—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to a sulfur, selenium or tellurium atom of a saccharide radical
- C07H15/16—Lincomycin; Derivatives thereof
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Předkládané řešení poskytuje linkosamidy obecného vzorce I, kdeR1 je vybrán z C2-C8 alkyl, C2-C8 alkenyl; R3 je vybrán z OH, O(C1-C4 alkyl), SH, S(C1-C4 alkyl) nebo halogen; R4 je H nebo C1-C3 alkyl; každý z R21, R22, R23, R24, R25 je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující H, OH, C1-C4 alkyl, C1-C4 alkenyl, C1-C4 alkynyl, halogen, O(C1-C4 alkyl), O(C1-C4 alkenyl), O(C1-C4 alkynyl), NH, N(C1-C4 alkyl)N(C1-C4 alkenyl), N(C1-C4 alkynyl); a jejich farmaceuticky přijatelné soli.Poskytnut je i způsob jejich přípravy, zejména biosyntetický způsob využívající nově zjištěných funkcí celesticetinových biosyntetických proteinů Ccb1 a/nebo Ccb2.Linkosamidy obecného vzorce I jsou vhodné pro použití jako antibakteriální a antiprotozoální látky.
Description
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká nových hybridních linkosamidů, jejich přípravy využívající enzymových aktivit z biosyntézy celesticetinu, a jejich použití jako antimikrobiálních látek.
Dosavadní stav techniky
Linkosamidy jsou malá skupina přírodních látek. Pomineme-li vedlejší kultivační produkty, byly dosud popsány pouze tři přírodní linkosamidové látky. Strukturní jádro linkosamidů tvoří aminokyselinová jednotka, derivát prolinu, a jednotka cukerná, neobvyklá aminooktosa, vzájemně propojené amidovou vazbou. Obecný vzorec a substituenty odpovídající třem přírodním linkosamidovým látkám jsou uvedeny níže. Strukturně nejjednodušším přírodním linkosamidem je Bu-2545 (Ri=H; R2=CH3; R3=O-CH3). Biosynteticky komplikovanější přírodní látkou je linkomycin s propylovým bočním řetězcem v pozici 4' prolinové jednotky (Ri=C3H7; R2=CH3; R3=OH). Třetí přírodní linkosamidová látka, celesticetin, naopak boční alkylový řetězec prolinové jednotky postrádá (Ri=H), oproti linkomycinu však obsahuje navíc dvě modifikace aminocukemé jednotky, jednak O-methylaci v pozici 7, shodně s Bu-2545, a především salicylátovou jednotku vázanou dvouuhlíkatým linkerem k atomu síry (R2=CH2-CH2-salicylát; R3=O-CH3).
Bu-2545: R^H, R2=CH3, R3=OCH3 (R konfigurace)
Linkomycin: R1=C3H7 (R konfigurace), R2=CH3, R3=OH (R konfigurace) O
Celesticetin: R^H, R2= , R3=OCH3 (R konfigurace)
Přírodní linkosamidy mají antibakteriální aktivitu. Avšak pouze nejúčinnější z nich, linkomycin, je průmyslově vyráběn a medicínsky přímo využíván jako antibiotikum. Navíc se jeho chlorací vyrábí semisyntetický derivát, klindamycin (R3=CI, S konfigurace), nejúčinnější vyráběná linkosamidová látka. Využívá se především jako antibakteriální agens, díky antiprotozoální aktivitě někdy i jako antimalarikum.
Bylo testováno mnoho derivátů linkomycinu chemicky modifikovaných jak na aminokyselinové, tak na cukerné jednotce, některé i účinnější než linkomycin, a dokonce i než klindamycin. V základní struktuře linkomycinu tak byly dosud identifikovány tři pozice, jejichž modifikace ovlivňuje aktivitu: Vedle pozice 7 cukerné jednotky, jejíž chlorací vzniká klindamycin, je to pozice 4' prolinové jednotky, kde delší alkylové boční řetězce než propyl přítomný v linkomycinu, zejména 4-6 uhlíkaté, významně zvyšují antibakteriální aktivitu příslušných látek. V kombinaci s chlorací v pozici 7 tyto látky navíc vykazují významné účinky antiplazmodiální. Antibakteriální i antimalarické účinky derivátů klindamycinu dále potencuje absence N-methylové skupiny v pozici Γ. Dosud nejúčinnějšími deriváty linkomycinu jsou Γdemethyl-4'-depropyl-4'-pentylklindamycin a 1 '-demethyl-4'-depropyl-4'-hexylklindamycin, jejich příprava chemickou syntézou je však velmi komplikovaná a jejich výroba tak není reálná.
Naopak celesticetin jeví nízkou antimikrobiální aktivitu, proto jeho deriváty unikaly pozornosti výzkumu. Podobně nebyly připraveny ani testovány žádné hybridní látky kombinující zároveň výše zmíněné specifické modifikace linkomycinu (R|=alkyl) a celesticetinu (R2=2C-salicylát): Logicky bylo považováno za neperspektivní modifikovat aktivnější linkomycin na atomu síry navázaného v pozici 1 cukerné jednotky právě substituentem R2 specifickým pro méně účinný celesticetin, mj. i s přihlédnutím ke značné náročnosti přípravy takové hybridní látky chemickou syntézou.
Stále přetrvává potřeba hledat nové linkosamidové látky, které budou kombinovat vysokou antimikrobiální aktivitu s málo komplikovanou a ekonomicky přijatelnou přípravou.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález poskytuje nové linkosamidy kombinující zároveň substituci alkylem v poloze 4' prolinové jednotky a ornamentaci glykosidicky vázaného atomu síry dvouuhlíkatým alkylem s esterově vázanou kyselinou benzoovou nebo jejím derivátem. Žádné hybridní linkosamidové látky kombinující modifikace specifické pro celesticetin (CH2-CH2-salicylát jako R2) a linkomycin (propylový boční řetězec jako R|) nebyly dosud připraveny, tedy ani testovány. Překvapivě a v rozporu s dosavadním obecným názorem tato kombinace substitucí vede ke zvýšení antimikrobiální aktivity. Výroba hybridních látek modifikovaných současně v pozicích 4' i 1 chemickou syntézou by byla extrémně náročná. Předkládaný vynález navrhuje cestu enzymatickou. Příprava těchto látek je tedy umožněna využitím enzymově katalyzovaných procesů na základě nových poznatků o mechanismu funkce enzymů podílejících se na přirozené biosyntéze celesticetinu, které byly získány původci v rámci práce na tomto vynálezu.
Předmětem předkládaného vynálezu jsou látky obecného vzorce 1
kde
R1 je vybrán z C2-C8 alkylů nebo C2-C8 alkenylů;
R3 je vybrán z OH, O(C1-C4 alkyl), SH, S(C1-C4 alkyl) nebo halogen; s výhodou OH, O(C1C2 alkyl), SH, S(C1-C2 alkyl) nebo halogen;
-2CZ 307305 B6
R4 je H nebo C1-C3 alkyl; s výhodou H nebo C1-C2 alkyl;
každý z R21, R22, R23, R24, R25 je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující H, OH, C1-C4 alkyl, C1-C4 alkenyl, C1-C4 alkynyl, halogen, O(C1-C4 alkyl), O(C1-C4 alkenyl), O(C1-C4 alkynyl), NH2, N(C1-C4 alkyl)2, N(C1-C4 alkenyl)2, N(C1-C4 alkynyl)2; s výhodou H, OH, ClC2 alkyl, halogen, O(C1-C2 alkyl), NH2, N(C1-C2 alkyl)2;
a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
Halogeny zahrnují F, Cl, Br, I. Nej výhodněji je halogenem Cl.
Rl je lineární nebo rozvětvený C2-C8 alkyl nebo C2-C8 alkenyl. S výhodou je R1 lineární nebo rozvětvený C2-C8 alkyl. Výhodněji je Rl lineární C2-C8 alkyl. Výhodněji je Rl C3-C6 alkyl. Výhodněji je Rl vybrán ze skupiny zahrnující propyl, butyl, pentyl, hexyl.
R3 je s výhodou OH, OCH3,OCH2CH3 nebo Cl.
R4 je s výhodou H nebo CH3.
Každý z R21, R22, R23, R24, R25 je s výhodou nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující H, OH, CH3, CH2CH3, Cl, Br, I, OCH3, OCH2CH3, NH2.
S výhodou je R21 vybrán ze skupiny zahrnující OH, CH3, CH2CH3, Cl, Br, I, OCH3, OCH2CH3, NH2, H.
S výhodou je R22 vybrán ze skupiny zahrnující H, OH, NH2, Cl.
S výhodou je R23 vybrán ze skupiny zahrnující OH, CH3, CH2CH3, Cl, Br, I, OCH3, OCH2CH3, NH2, H.
S výhodou je R24 vybrán ze skupiny zahrnující H, OH, NH2, Cl.
S výhodou je R25 vybrán ze skupiny zahrnující OH, CH3, CH2CH3, Cl, Br, I, OCH3, OCH2CH3, NH2, H.
Nejvýhodněji je R25 skupina OH a R21, R22, R23, R24 jsou H.
Další výhodné kombinace skupin R21 až R25 jsou uvedeny v tabulce:
| R21 | R22 | R23 | R24 | R25 |
| H | H | H | H | NH2 |
| H | H | H | H | ch3 |
| H | H | H | H | Cl |
| H | H | H | H | Br |
| H | H | H | H | I |
| H | H | H | H | OCH3 |
| H | H | H | H | H |
| H | H | H | OH | H |
| H | H | H | NH2 | H |
-3 CZ 307305 B6
| H | H | H | Cl | H |
| H | H | OH | H | H |
| H | H | NH2 | H | H |
| H | H | ch3 | H | H |
| H | H | Cl | H | H |
| OH | H | H | H | OH |
| H | H | OH | H | OH |
| H | H | NH2 | H | OH |
| H | H | nh2 | H | Cl |
| H | H | Cl | H | Cl |
| H | H | OH | OH | H |
| H | H | Cl | Cl | H |
| H | OH | H | OH | H |
| H | Cl | H | Cl | H |
| H | OH | H | H | OH |
| H | OH | OH | OH | H |
| H | H | Cl | OH | H |
| H | H | OH | Cl | H |
| H | Cl | H | OH | H |
Farmaceuticky přijatelné kyseliny, které mohou tvořit farmaceuticky přijatelné adiční soli látek obecného vzorce I, jsou zejména l-hydroxynaftalen-2-karboxylová kyselina, 2,2-dichloroctová kyselina, 2-hydroxyethansulfonová kyselina, 2-oxoglutarová kyselina, 4-acetamidobenzoová kyselina, 4-aminosalicylová kyselina, octová kyselina, adipová kyselina, askorbová kyselina, asparagová kyselina, benzensulfonová kyselina, benzoová kyselina, kyselina chlorovodíková, kafrová kyselina, kafr-10-sulfonová kyselina, děkanova kyselina, hexanová kyselina, oktanová kyselina, kyselina uhličitá, skořicová kyselina, citrónová kyselina, cyklámová kyselina, dodecylsírová kyselina, ethan-l,2-disulfonová kyselina, ethansulfonová kyselina, kyselina mravenčí, fumarová kyselina, galaktarová kyselina, gentisová kyselina, glukoheptanová kyselina, glukonová kyselina, glukuronová kyselina, glutamová kyselina, glutarová kyselina, glycerofosforečná acidglykolová kyselina, hippurová kyselina, kyselina bromovodíková, isobutanová kyselina, kyselina mléčná, kyselina laktobionová, kyselina laurová, kyselina maleinová, kyselina malonová, kyselina jablečná, kyselina mandlová, methansulfonová kyselina, naftalen-l,5-disulfonová kyselina, naftalen-2-sulfonová kyselina, nikotinová kyselina, kyselina dusičná, kyselina olejová, kyselina šťavelová, kyselina palmitová, kyselina pamoová, kyselina fosforečná, kyselina propanová, kyselina pyroglutamová, kyselina salicylová, kyselina sebaková, kyselina stearová, kyselina jantarová, kyselina sírová, kyselina tartarová, kyselina thiokyanová, toluensulfonová kyselina, undecylenová kyselina (P. H. Stáhl and C. G. Wermuth, editors, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, Weinheim/Zurich:WileyVCH/VHCA, 2002).
S výhodou má obecný vzorec 1 konfiguraci na chirálních centrech uvedenou níže:
-4CZ 307305 B6
Chirální centra s navázanými skupinami R1 a R3 mohou mít konfigurace R i S (všechny čtyři možné kombinace). Výhodněji má ovšem chirální centrum se skupinou R1 konfiguraci R. Výhodněji má chirální centrum se skupinou R3 konfiguraci R, pokud R3=OH, OCH3, OCH2CH3 a naopak konfiguraci S, pokud R3=halogen. Nejvýhodněji má chirální centrum se skupinou R3 konfiguraci S, pokud R3=chlor.
Nejvýhodněji mají nové linkosamidy strukturu:
kde Rl=propyl nebo butyl nebo pentyl nebo hexyl, R3=OH (konfigurace R) nebo OCH3 (konfigurace R) nebo Cl (konfigurace S), R4=H nebo CH3.
Předkládaný vynález dále poskytuje způsob přípravy látek dle obecného vzorce I, který zahrnuje krok enzymaticky katalyzované aktivace derivátu kyseliny benzoové substituované substituenty R21, R22, R23, R24, R25 navázáním koenzymu A a krok enzymaticky katalyzované esterifikace prekurzoru vzorce II
konjugátem derivátu kyseliny benzoové substituované substituenty R21, R22, R23, R24, R25 a koenzymu A.
Ve vzorci II mohou být substituenty Rl, R3, R4jakje uvedeno pro vzorec I.
-5CZ 307305 B6
Látky, kde R3 je halogen, se získávají z produktů enzymaticky katalyzované reakce následnou syntetickou halogenací známými postupy, např. látky s R3=C1 lze získat postupy chlorace používanými při výrobě klindamycinu.
Látky, kde R1 je alkyl delší než C3H7, lze získat analogií postupu publikovaného (Ulanova D., etal. (2010) Antimicrob. Agents Chemother. 54(2), 927) a patentovaného (WO2010127645) dříve pro přípravu 4'-buty W-depropyllinkomycinu a 4'-depropyl-4'-pentyllinkomycinu.
Jako enzym pro enzymaticky katalyzovanou aktivaci derivátu kyseliny benzoové substituované substituenty R21, R22, R23, R24, R25 navázáním koenzymu A lze použít s výhodou protein obsahující celesticetinový biosyntetický protein Ccb2, jehož aminokyselinová sekvence je zveřejněna v databázi GenBank pod přístupovým číslem ADB92576, nebo obsahující Ccb2podobný protein vykazující alespoň 95% identitu s aminokyselinovou sekvencí Ccb2 (5% rozdílnost může obecně zahrnovat prodloužení nebo zkrácení řetězce, nebo bodovou záměnu aminokyselin). Protein může kromě Ccb2 nebo Ccb2-podobného proteinu obsahovat navíc například tzv. kotvu nebo jinou sekvenci, která není nezbytná pro enzymatickou aktivitu.
Jako enzym pro esterifikaci prekurzoru vzorce II lze použít s výhodou protein obsahující celesticetinový biosyntetický protein Ccbl, jehož aminokyselinová sekvence je zveřejněna v databázi GenBank pod přístupovým číslem ADB92559, nebo obsahující Ccbl-podobný protein s alespoň 95% identitou s aminokyselinovou sekvencí Ccbl (5% rozdílnost může obecně zahrnovat prodloužení nebo zkrácení řetězce, nebo bodovou záměnu aminokyselin). Protein může kromě Ccbl nebo Ccbl podobného proteinu obsahovat například tzv. kotvu nebo jinou sekvenci, která není nezbytná pro enzymatickou aktivitu.
Příprava nových látek dle obecného vzorce I je tedy umožněna využitím enzymově katalyzovaných procesů na základě nových poznatků o vlastnostech enzymů podílejících se na přirozené biosyntéze celesticetinu, konkrétně o dvojici enzymů připojujících salicylátovou jednotku: o Ccb2, který aktivuje salicylát připojením koenzymu A, a zejména o Ccbl, acyltransferase katalyzující vlastní připojení (esterifikaci) aktivovaného salicylátu k cukerné jednotce antibiotika přes S-CH2-CH2-OH linker (odpovídající esterifikaci aktivovaného derivátu kyseliny benzoové a prekurzoru vzorce II). Tyto nové poznatky o dvojici enzymů Ccb2 a Ccbl byly získány původci v rámci práce na tomto vynálezu a zjištěná široká substrátová specifita enzymů k oběma substrátům esterifikační reakce (aktivovaných derivátů kyseliny benzoové i prekurzoru dle obecného vzorce II) je dokumentována v části Příklady provedení vynálezu, tj. využita pro enzymatickou přípravou linkosamidů 1-120 obecného vzorce I.
S výhodou reakční směs obsahuje Ccb2, Ccbl, derivát benzoové kyseliny nesoucí substituenty R21 až R25, adenosintrifosfát, koenzym A, MgCl2 a pufr s pH v rozmezí 6 až 9 (s výhodou Tris pufr, pH 7,5). Reakční směs je preinkubována při teplotě v rozmezí 20 až 40 °C, s výhodou 24 až 34 °C, po dobu 15 až 60 minut, s výhodou 25 až 40 minut, poté se přidá prekurzor dle obecného vzorce II a směs se inkubuje při teplotě ve stejném rozmezí po dobu 1 až 3 hodin. Linkosamidy obecného vzorce I lze ze směsi izolovat precipitací proteinů (s výhodou lze použít kyselinu mravenčí), centrifugaci, extrakcí supernatantu a izolací z extraktu chromatografickou separací. Vhodná je chromatografická kolona s reversní stacionární fází (s výhodou Cl8 ligand) a gradientová separace s mobilní fází, jejíž vodná složka má kyselé nebo neutrální pH (s výhodou roztok kyseliny mravenčí v kombinaci s organickým modifikátorem - např. methanol nebo acetonitril).
Prekurzor dle obecného vzorce II lze získat známými postupy, například enzymatickou transformací prekurzoru dle obecného vzorce III.
-6CZ 307305 B6
(ΙΠ)
K této enzymatické transformaci lze použít s výhodou proteiny obsahující celesticetinové biosyntetické proteiny: CcbF, jehož aminokyselinová sekvence je uveřejněna v databázi GenBank pod přístupovým číslem ADB92565, nebo CcbF-podobný protein s alespoň 95% identitou s aminokyselinovou sekvencí CcbF (5% rozdílnost může obecně zahrnovat prodloužení nebo zkrácení řetězce, nebo bodovou záměnu aminokyselin); Ccb5, jehož aminokyselinová sekvence je uveřejněna v databázi GenBank pod přístupovým číslem ADB92579, nebo Ccb5podobný protein s alespoň 95% identitou s aminokyselinovou sekvencí Ccb5 (5% rozdílnost může obecně zahrnovat prodloužení nebo zkrácení řetězce, nebo bodovou záměnu aminokyselin); a popřípadě Ccb4, jehož aminokyselinová sekvence je uveřejněna v databázi GenBank pod přístupovým číslem ADB92578, nebo obsahující Ccb4-podobný protein s alespoň 95% identitou s aminokyselinovou sekvencí Ccb4 (5% rozdílnost může obecně zahrnovat prodloužení nebo zkrácení řetězce, nebo bodovou záměnu aminokyselin). CcbF, Ccb5 a Ccb4 byly popsány v Kameník, Z., et al. (2016) Chem. Sci., 7(1), 430-435; Wang, M., etal. (2016)
J. Am. Chem. Soc., 138(20), 6348-6351.
S výhodou jsou v reakční směsi přítomny CcbF, Ccb5, prekurzor dle vzorce lil a pyridoxal-5fosfát, v pufru o pH 6 až 9 (výhodněji Tris pufr, pH 7,5). Pokud R3 má být OCH3, pak je v reakční směsi přítomen také Ccb4 a S-adenosylmethionin. Reakční směs je inkubována při teplotě v rozmezí 20 až 40 °C, s výhodou 24 až 34 °C, po dobu 1 až 4 hodin, s výhodou 90 až 150 minut.
Ve vzorci III mohou být substituenty Rl, R3, R4 jakje uvedeno pro vzorec I.
V jednom výhodném provedení se enzymaticky katalyzovaná aktivace derivátu kyseliny benzoové substituované substituenty R21, R22, R23, R24, R25 navázáním koenzymu A a enzymaticky katalyzovaná esterifikace prekurzoru vzorce II konjugátem derivátu kyseliny benzoové substituované substituenty R21, R22, R23, R24, R25 a koenzymu A provádějí biosynteticky s použitím mikroorganismu nesoucího kódující sekvence celesticetinových biosyntetických proteinů Ccbl a/nebo Ccb2 nebo biosyntetických proteinů majících 95% identitu s aminokyselinovými sekvencemi Ccbl a Ccb2.
S výhodou je takovým mikroorganismem mikroorganismus třídy Actinobacteria, s výhodou rodu Streptomyces.
Ve výhodném provedení tento mikroorganismus nese kódující sekvence celesticetinových biosyntetických proteinů Ccbl, Ccb2, Ccb5, CcbF, a pro případ, kdy R3 je OCH3, také Ccb4, nebo biosyntetických proteinů majících alespoň 95% identitu aminokyselinové sekvence s Ccbl, Ccb2, Ccb5, CcbF, případně Ccb4, a postup vychází z prekurzoru vzorce III.
Výhodněji tento mikroorganismus spolu s výše uvedenými kódujícími sekvencemi dále nese i kódující sekvence proteinů řídících biosyntézu prekurzoru vzorce III, tj. příslušné geny linkomycinového a/nebo celesticetinového biosyntetického shluku genů. Biosyntetické genové shluky jsou popsány v odborné literatuře a jejich nukleotidové sekvence jsou zveřejněny v databázi GenBank, konkrétně pro linkomycin (Koběrská, M., et al. (2008) Folia Microbiol, 53(5), 395-401; GenBank EU124663) a pro celesticetin (Janata, J., et al. (2015) PloS One, 10(3), eOl 18850; GenBank GQ844764). Z literatury je pro odborníka zřejmá i biosyntetická relevance jednotlivých genů pro vznik konkrétních variant prekurzoru 111 lišících se v Rl, R3 a R4 (kromě výše uvedených zdrojů dále Kameník, Z., et al. (2016) Chem. Sci., 7(1), 430 435; Jirásková P., et al. (2016) Front. Microbiol., 7, 276; Najmanova, L., et al. (2013) ChemBioChem, 14(7), 2259).
Způsob přípravy linkosamidových látek vzorce I s Rl alkylem delším než C3H7 vyplývá z dostupné odborné literatury, a může vycházet z prekurzoru vzorce III, v němž na pozici Rl se již nachází prodloužený alkyl. Takový prekurzor lze ve výhodném provedení získat tak, že kultivační médium mikroorganismu produkujícího prekurzor dle vzorce III, kde R1=C3H7, se obohatí o synteticky připravený 4-alkyl-L-prolin, přičemž délka tohoto 4-alkylu odpovídá délce alkylu na pozici Rl vzniklého prekurzoru vzorce III. Příprava syntetických 4-alkyl-L-prolinů a jejich použití pro přípravu derivátů linkomycinu s Rl delším než C3H7 je popsána v odborné literatuře (Ulanova D., et al. (2010) Antimicrob. Agents Chemother. 54(2), 927); dokument WO2010127645).
Všechny látky získané výše uvedenými postupy mohou být dále dle potřeby modifikovány syntetickými postupy, které jsou odborníkovi v oboru dobře známy, např. chlorací v poloze 7 cukerného zbytku (za vytvoření R3=C1).
Předmětem předkládaného vynálezu jsou dále geneticky modifikované produkční mikroorganismy třídy Actinobacteria, s výhodou rodu Streptomyces, nesoucí kódující sekvence celesticetinových biosyntetických proteinů Ccbl a/nebo Ccb2, nebo biosyntetických proteinů majících alespoň 95% identitu aminokyselinové sekvence s Ccbl, resp. Ccb2, a s výhodou dále nesoucí i kódující sekvence proteinů řídících biosyntézu prekurzoru vzorce II, tj. příslušné geny linkomycinového a/nebo celesticetinového biosyntetického shluku genů. Biosyntetické genové shluky jsou popsány v odborné literatuře a jejich nukleotidové sekvence jsou zveřejněny v databázi GenBank, konkrétně pro linkomycin (Koběrská, M., et al. (2008) Folia Microbiol, 53(5), 395-401; GenBank EU124663) a pro celesticetin (Janata, J., et al. (2015) PloS One, 10(3), eOl 18850; GenBank GQ844764). Z literatury je odborníkovi v oboru zřejmá i biosyntetická relevance jednotlivých genů pro vznik konkrétních variant prekurzoru II lišících se v Rl, R3 a R4 (kromě výše uvedených zdrojů dále Kameník, Z., et al. (2016) Chem. Sci., 7(1), 430 435; Jirásková P., et al. (2016) Front. Microbiol., 7, 276; Najmanova, L., et al. (2013) ChemBioChem, 14(7), 2259).
Předmětem předkládaného vynálezu jsou i geneticky modifikované produkční mikroorganismy třídy Actinobacteria, s výhodou rodu Streptomyces, nesoucí kódující sekvence celesticetinových biosyntetických proteinů Ccbl, Ccb2, Ccb5, CcbF, a pro případ, kdy produkované linkosamidy mají R3=OCH3, také Ccb4, nebo biosyntetických proteinů majících alespoň 95% identitu sCcbl, Ccb2, Ccb5, CcbF, případně Ccb4, a dále nesoucí i kódující sekvence proteinů řídících biosyntézu prekurzoru vzorce 111, tj. příslušné geny linkomycinového a/nebo celesticetinového biosyntetického shluku genů. Nukleotidové sekvence biosyntetických shluků jsou popsány v odborné literatuře a jejich nukleotidové sekvence jsou zveřejněny v databázi GenBank, konkrétně pro linkomycin (Koběrská, M., et al. (2008) Folia Microbiol, 53(5), 395—401; GenBank EU 124663), pro celesticetin (Janata, J., et al. (2015) PloS One, 10(3), eOl 18850; GenBank GQ844764). Z literatury je odborníkovi v oboru zřejmá i biosyntetická relevance jednotlivých genů pro vznik konkrétních variant prekurzoru III lišících se v Rl, R3 a R4 (kromě výše uvedených zdrojů dále Kameník, Z., et al. (2016) Chem. Sci., 7(1), 430-435; Jirásková P., et al. (2016) Front. Microbiol, 7, 276; Najmanova, L., et al. (2013) ChemBioChem, 14 (7), 2259).
V případě proteinů majících alespoň 95% identitu s celesticetinovýmí biosyntetickými proteiny se rozumí, že mutace jsou takové, aby zůstala zachována jejich enzymatická aktivita, tj. aby měly alespoň 50 % enzymatické aktivity příslušného celesticetinového biosyntetického proteinu. Toto lze ověřovat metodami známými odborníkovi v oboru.
-8CZ 307305 B6
Dále jsou předmětem předkládaného vynálezu látky obecného vzorce 1 pro použití jako léčiva, zejména jako antimikrobiální léčiva. Pod pojmem antimikrobiální léčiva se zde rozumí léčiva s účinky na jednobuněčné mikroorganismy, jako jsou bakterie a jednobuněčné eukaryotické parazitické mikroorganismy, zejména na Gram-pozitivní bakterie a parazity kmene Apicomplexa obsahující cílové organely, apikoplasty, zejména se jedná o organismy rodu Plasmodium, Toxoplasma, Babesia, Theileria a třídy Coccidia.
Pro léčebné použití mohou být látky formulovány do farmaceutických kompozic, které obsahují směsi aktivních látek obecného vzorce I nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí s pomocnými látkami. Pomocné látky zahrnují zejména rozpouštědla, jako jsou voda, ethanol, propylenglykol, butylenglykol, glycerol, makrogoly, oleje, isopropylmyristát, benzylalkohol, ethyloleát, tekutý parafin, decyloleát, isopropylpalmitát, ethyloleát; masťové a krémové základy jako jsou parafín, vazelína, silikony, tuky, vosky, vyšší alifatické alkoholy a kyseliny, celulóza, ethery a estery celulózy, škrob, tragant, alginan sodný, mastek, oxidy zinku, hořčíku, titanu, uhličitan vápenatý, uhličitan horečnatý, koloidní oxid křemičitý, stearáty hliníku, hořčíku, zinku, laktóza; plniva jako je laktóza, nativní nebo modifikované škroby, mikrokrystalická celulóza, manitol, fosforečnan vápenatý, síran vápenatý, sacharóza; pojivá jako je škrob, želatina, celulóza a jejich deriváty, např. methylcelulóza, sodná sůl karboxymethylcelulózy, hydroxypropylcelulóza, hydroxypropylmethylcelulóza, arabská guma, tragant, sacharóza, glukóza, kyselina alginová a algináty, guarová guma, polyvinylpyrrolidon; kluzné látky jako jsou mastek, kukuřičný škrob, stearan horečnatý, koloidní oxid křemičitý. Dále mohou pomocné látky zahrnovat stabilizátory, látky podporující rozpad, antioxidanty a konzervanty. Farmaceutické kompozice mohou být zejména ve formě tablet, kapslí, čípků, mastí, krémů, mlék, roztoků, nebo suspenzí. Farmaceutické kompozice mohou dále obsahovat kromě aktivních látek dle obecného vzorce I i další účinné látky, zejména antibiotika a antimalarika.
Příklady uskutečnění vynálezu
Příklad 1: Příprava prekurzoru vzorce III, kde R1 je C3 alkyl, R3 je OH, R4 je H nebo CH3
Kultivace kmenů streptomycet v tekutém médiu
Kultura bakteriálního kmene Streptomyces lincolnensis ElmblH (konstrukce tohoto kmene z S. lincolnensis ATCC 25466 byla popsána dříve - Janata, J., et al. (2008) PLoS One, 2015, 10, eOl 18850) byla připravena inokulací spor z kultivační misky s MS agarem do 50 mL YEME (Kieser, T., et al. (2000) Practical Streptomyces Genetics. Norwich, UK, p. 613) média bez sacharózy a byla inkubována v 500mL baňkách s plochým dnem při 28 °C po dobu 120 h. Poté bylo kultivační médium odděleno centrifugací (4000xg, 20 °C, 15 min) a supematant byl použit pro izolaci linkosamidových prekurzorů dle obecného vzorce III ve výhodné kombinaci substituentů (R1 je C3 alkyl, R3 je OH, R4 je H nebo CH3).
Izolace linkosamidových prekurzoru vzorce III
Supematant kultivačního média byl přečištěn pomocí Oasis HLB 6cc extrakčních kolonek (Waters, USA): Supematant (50 mL) byl nanesen na kolonku předem kondicionovanou a ekvilibrovanou methanolem (5 mL) a vodou (5 mL) a část matrice vzorku byla vymyta vodou (5 mL). Frakce obsahující linkosamidové prekurzory byly eluovány methanolem (15 mL), odpařeny do sucha a rekonstutituovány ve 200 μΐ methanolu. Takto získaný extrakt byl rekonstituován ve 2 mL methanolu a dávkován do vysokoúčinného kapalinového chromatografu (HPLC, firma Waters, USA) vybaveného gradientovou pumpou 600, autosamplerem 717 a UV detektorem 2487 monitorujícího UV záření při 194 nm. Data byla zpracována pomocí software Empower 2 (Waters, USA). Linkosamidové prekurzory byly separovány na Luna C18
-9CZ 307305 B6 chromatografické koloně (250 x 15 mm, velikost částic 5 μιη, Phenomenex, OSA) pomocí dvousložkové mobilní fáze, A a B, kde jako fáze A byl použit 0,1% vodný roztok kyseliny mravenčí (v/v) a jako fáze B methanol. Pro chromatografické analýzy byl využit lineární gradientovy program při průtoku 3 mL min 1 (min/%B): 0/5, 31/27,5 s následným promytím kolony (100% B, 9 min) a ekvilibrací před další analýzou (5% B, 9 min). Frakce obsahující linkosamidové prekurzory byly odpařeny dosucha, rekonstituovány v methanolu a podrobeny další HPLC separaci na chromatografické koloně XTerra Prep RP18 (150 x 7,8 mm, velikost částic 5,0 μιη. Waters, USA) s využitím isokratického elučního programu při průtoku 1,5 mL min 1 s mobilní fází lmM mravenčan amonný (pH 9,0):acetonitril (90:10 v/v). Linkosamidové prekurzory izolované tímto způsobem byly dále použity pro in vitro enzymatické reakce.
Příklad 2: Příprava prekurzoru vzorce II, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3, R4=H nebo CH3 Heterologní produkce a purifikace proteinů CcbF, Ccbl, Ccb2, Ccb4 a Ccb5
Proteiny CcbF (GenBank ADB92565), Ccbl (GenBank ADB92559), Ccb2 (GenBank ADB92576), Ccb4 (GenBank ADB92578) a Ccb5 (GenBank ADB92579) pro přípravu nových linkosamidových látek byly produkovány heterologně v buňkách E. coli. Geny ccbF, ccbl, ccb2, ccb4 a ccb5 byly s použitím primerů dle tabulky 1 amplifikovány metodou PCR z genomové DNA kmene Streptomyces caelestis ATCC 15084, produkujícího celesticetin. PCR produkty byly opracovány restrikčními enzymy (dle tabulky 1) a vloženy do vektorů pET28b (Novagen) pro ccbl, ccb4 nebo ccb5, nebo pET42b (Novagen) pro ccbF nebo ccb2. Proteiny Ccbl, Ccb4 a Ccb5 tak byly produkovány s N-terminální histidinovou kotvou a proteiny CcbF a Ccb2 byly produkovány s C-terminální histidinovou kotvou. K produkci proteinů byl použit kmen E. coli BL21 (DE3) nesoucí konstrukt pro expresi GroES a GroEL chaperoninů. Pro všechny rekombinantní proteiny byla nadprodukce indukována při OD (600 nm) kultury 0,6 až 0,8 isopropyl β-D-l-thiogalaktopyranosidem (0.4 mM). Kultura byla po indukci inkubována při 17°C při 200 otáčkách za minutu po dobu 20 h. Poté byla kultura centrifugována (4000xg, 20 min, 4 °C) a sediment byl použit k přípravě hrubého extraktu pomocí ultrazvukové homogenizace v pufru I (20 mM TR1S pH 8, 100 mM NaCI, 10% glycerol, and 20 mM imidazol). Homogenát byl následně centrifugován 9000xg, 25 min, 4 °C. Proteiny byly z hrubého extraktu purifikovány pomocí lmL HiTrap™ Ni2+ kolonky dle protokolu výrobce (GE Healthcare). Protein Ccb2 byl eluován pufrem II (20 mM TRIS pH 8, 100 mM NaCI, 10% glycerol, and 100 mM imidazol), proteiny Ccb4 a Ccb5 byly eluovány pufrem III (20 mM TRIS pH 8, 100 mM NaCI, 10% glycerol, and 200 mM imidazol) a proteiny CcbF a Ccbl byly eluovány pufrem IV (20 mM TRIS pH 8, 100 mM NaCI, 10% glycerol, and 250 mM imidazol). Imidazol byl z roztoku purifikovaných proteinů eliminován pomocí Amicon centrifugačních tub (Millipore) a pufru V (20 mM TRIS pH 8, 100 mM NaCI, 10% glycerol). Všechny takto připravené proteiny byly stabilní bez poklesu aktivity při 4 °C po dobu alespoň jednoho týdne; proteiny CcbF, Ccbl, Ccb2, a Ccb5 byly navíc stabilní po dobu alespoň jednoho měsíce při -80 °C.
Tabulka 1. Primery použité pro amplifikaci genů S. caelestis. Restrikční místa určená pro vložení do vektoru jsou podtržena
Gen Primer I ccbF CCGCATATGTCCGACTTAGCTGCCG ccbl CTGCATATGCATCTTGATCCAACCAC ccb2 AACCCCATATGAAGCGACGTGGCATGG ccb4 CTACATATGAAGACGCCCGGTACATC ccbS ATAGCTAGCGCGACCGTCCCCGCC
Primer II
CCGCTCGAGGCGGGGCTGCCAGGCG
ATAGAATTCTCATCGGTGGTCGTCGC
AACCCCTCGAGTAAGGTCATGAACTCCGCACG
CTAGAATTCTCAGCACGGAGTGGCCT
CTGGAATTCTCATGAGTCCGCGCGCC
- 10CZ 307305 B6
In vitro enzymatická příprava linkosamidových prekurzoru vzorce II
Reakční směs 1 obsahovala: 20 μΜ CcbF, 20 μΜ Ccb5, 200 μΜ linkosamidový prekurzor dle obecného vzorce III, kde R1 je C3 alkyl, R3 je OH, R4 je H nebo CH3, 200 μΜ pyridoxal-5fosfát, 100 mM Tris pH 7,5. V případě přípravy prekurzoru vzorce II, kde R3=OCH3, reakční směs navíc obsahovala 20 μΜ Ccb4 a 4 mM S-adenosylmethionin. Reakční směs 1 byla inkubována při 30 °C po dobu 2h.
Příklad 3: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3,R21-R24 jsou H a R25 je OH
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina salicylová, 4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCI2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2) obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II v poměru 1:1a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h.
Izolace nových linkosamidových látek vzorce I z enzymatické reakční směsi
Proteiny byly z reakční směsi precipitovány 98% kyselinou mravenčí (30 pL na 1 mL vzorku) a směs byla centrifugována (13500 otáček za minutu, 5 min). Supematant byl extrahován pomocí Oasis HLB 6cc kolonek dle protokolu popsaného výše v odstavci Izolace linkosamidových prekurzoru. Extrakt byl dále podroben separaci pomocí HPLC přístroje definovaného výše v odstavci. Izolace linkosamidových prekurzoru. Nové linkosamidové látky byly separovány na Luna Cl8 chromatografické koloně (250 x 15 mm, velikost částic 5 pm, Phenomenex, USA) pomocí dvousložkové mobilní fáze, A a B, kde jako fáze A byl použit 0,1 % vodný roztok kyseliny mravenčí (v/v) a jako fáze B acetonitril. Pro chromatografické analýzy byl využit lineární gradientový program při průtoku 3 mL min 1 (min/%B): 0/30, 40/65 s následným promytím kolony (100% B, 9 min) a ekvilibrací před další analýzou (30% B, 9 min).
Testy antibakteriální aktivity
Filtrační papírové disky (geometrický průměr 5 mm) nasycené 5 nmol testovaných nových linkosamidových látek byly umístěny na misky s LB agarem (trypton 10 g; kvasničný extrakt 5 g; NaCl 10 g; doplněno destilovanou vodou do objemu 1000 mL; pH 7,5; agar 15 g) souvisle pokryté kulturou testovacího kmene Kocuria rhizophila. Misky byly inkubovány při 37 °C pro dobu 20 h. Minimální inhibiční koncentrace byly stanoveny na základě metody publikované dříve (European Committee for Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST), Clin Microbiol Infect (2003), 9 (8), ix-xv). 5 pL suspenze (0,5 dle McFarlandovy stupnice) bakteriální kultury
K. rhizophila bylo inokulováno do 1 mL LB média obsahujícího testované látky o požadované koncentraci (testován byl koncentrační rozsah 25-1600 nM). Kultury byly inkubovány po dobu 24 h při 37 °C.
- 11 CZ 307305 B6
Tabulka 2: Výsledky testů biologické aktivity
| Testovaná látka | Diskový difusní test: velikost inhibičních zón [mm] | Minimální inhibiční koncentrace [nM] |
| Celesticetin | 19 | 1600 |
| Linkomycin | 24 | 400 |
| Látka vzorce I, kde Rl=propyl, R21R24=H, R25=OH, R3=OCH3, R4=CH3 | 28 | 100 |
| Látka vzorce I, kde Rl=propyl, R21- R24=H, R25=OH, R3=OH, R4=CH3 | 29 | 100 |
Analýza technikou kapalinové chromatografie s hmotnostní detekcí (LC-MS analýza)
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 1-4 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 3.
Tabulka 3. Výsledky LC-MS analýzy látek 1-4
| Línkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=l | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji - hlavni detekované iony (m/z) |
| 1 | 7,10 | 571,2690 | 571,2703 | 373,23; 126,13 |
| 2 | 6,25 | 557,2533 | 557,2543 | 359,22; 126,13 |
| 3 | 7,00 | 557,2533 | 557,2532 | 359,22; 112,11 |
| 4 | 6,30 | 543,2376 | 543,2358 | 345,20 |
- 12CZ 307305 B6
LC-MS analýzy byly provedeny na ultra vysokoúčinném kapalinovém chromatografu Acquity UPLC spojeným s LCT premiér XE hmotnostním spektrometrem a analyzátorem doby letu (Waters, USA). Vzorek o objemu 5 μΐ byl dávkován na Acquity UPLC BEH Cl8 chromatografickou kolonu (50 mm x 2,1 mm, velikost částic 1,7 μπι, Waters, USA), která byla temperována na 40 °C. Vzorek byl z kolony eluován dvousložkovou mobilní fází, jako složka A byl použit vodný roztok 0,1% kyseliny mravenčí (v/v) a jako složka B byl použit acetonitril. K separaci byl při průtoku 0,4 mL min 1 využit následující lineární gradientový program (min/% B) 0/5, 1.5/5, 12.5/58. Analýza byla zakončena výplachem kolony (1,5 min, 100% B) a ekvilibrací před další analýzou (1,5 min, 5% B). Hmotnostní spektrometr byl nastaven na mód W s následujícími parametry: napětí na kapiláře, +2800 V; napětí vložené na vstup do analyzátoru, +40V; průtok desolvatačního plynu (dusík), 800 Lh1: teplota desolvatačního plynu, 350 °C; teplota bloku iontového zdroje, 120 °C; průtok desolvatačního plynu při vstupu do analyzátoru, 50 Lh1; doba skenu, 0,15 s; prodleva mezi skeny, 0,01 s. Přesnost hmoty pod 5 ppm byla udržována pomocí referenční látky leucin-enkefalin (2 ng pL“1, 5 pL min“1). Fragmentace ve zdroji (srážkami vyvolaná disociace - CID) byla vyvolána zvýšením hodnoty apertuře I na +50 V. Data byla zpracována pomocí software MassLnyx V4,l (Waters, USA).
Příklad 4: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3, R21-R25 jsou H
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina benzoová, 4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCl2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou benzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
Výsledky LC-MS analýzy
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 5-8 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 4.
- 13 CZ 307305 B6
Tabulka 4. Výsledky LC-MS analýzy látek 5-8
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=l | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji - hlavní detekované iony (m/z) |
| 5 | 6,85 | 555,2741 | 555,2743 | 373,23; 126,13 |
| 6 | 6,00 | 541,2584 | 541,2578 | 359,22; 126,13 |
| 7 | 7,00 | 541,2584 | 541,2584 | 359,22; 112,11 |
| 8 | 6,10 | 527,2427 | 527,2424 | 345,20 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 5: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3, R21-R24 jsou H, R25 je NH2
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina anthranilová (2aminobenzoová), 4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCl2, 100 mM Tris pH
7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1 a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou anthranilovou (2-aminobenzoovou) byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 9-12 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 5.
-14CZ 307305 B6
Tabulka 5. Výsledky LC-MS analýzy látek 9-12
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=l | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji - hlavní detekované iony (m/z) |
| 9 | 6,50 | 570,2850 | 570,2842 | 373,23; 126,13 |
| 10 | 5,70 | 556,2393 | 556,2703 | 359,22; 126,13 |
| 11 | 6,50 | 556,2393 | 556,2709 | 359,22; 112,11 |
| 12 | 5,40 | 542,2536 | 542,2548 | 345,20; 112,11 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 6: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3, R21-R24 jsou H, R25 je CH3
Reakční směs 2 obsahovala: 2 1 M Ccb2, 2 M Ccbl, 2 mM kyselina 2-methylbenzoová),
4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCl2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1 a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou 2-methyIbenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 13-16 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 6.
- 15 CZ 307305 B6
Tabulka 6. Výsledky LC-MS analýzy látek 13-15
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji - hlavní detekované iony (m/z) |
| 13 | 9,00 | 569,2897 | 569,2917 | 373,23; 126,13 |
| 14 | 7,60 | 555,2740 | 555,2742 | 359,22; 126,13 |
| 15 | 8,00 | 555,2740 | 555,2714 | 359,22 |
| 16 | 5,75 | 541,2583 | 541,2570 | 345,20; 112,11 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 7: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3, R21-R24 jsou H, R25 je Cl
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 2-chlorbenzoová), 4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCl2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou 2chlorbenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 17-20 s následujícími strukturami a LC-MS parametry vedenými v tabulce 7.
- 16CZ 307305 B6
Tabulka 7. Výsledky LC-MS analýzy látek 17-20
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro | Majoritní detekovaný ion v MS spektru | Fragmentace ve zdroji - hlavní detekované iony |
| z=l | (m/z) | (m/z) | ||
| 17 | 8,63 | 589,2351 | 589,2335 | 373,23; 126,13 |
| 18 | 7,25 | 575,2194 | 575,2183 | 359,22; 126,13 |
| 19 | 6,50 | 575,2194 | 575,2169 | 359,22 |
| 20 | 5,52 | 561,2037 | 561,2045 | 345,20 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 8: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3, R21-R24 jsou H, R25 je Br
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 2-brombenzoová), 4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCl2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou 2brombenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 21-24 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 8.
- 17CZ 307305 B6
Tabulka 8. Výsledky LC-MS analýzy látek 21-24
| Linkosamid | Retenční čas | Pseudomolekulámí | Majoritní | Fragmentace ve |
| (min) | ion - teoretická hodnota m/z pro z=l (A+2 peak) | detekovaný ion v MS spektru (zn/z); A+2 peak | zdroji - hlavní detekované iony (m/z) | |
| 21 | 8,75 | 635,1826 | 635,1833 | 373,24; 126,13 |
| 22 | 7,50 | 621,1669 | 621,1666 | 359,22; 126,13 |
| 23 | 6,63 | 621,1669 | 621,1635 | 359,22 |
| 24 | 5,63 | 607,1511 | 607,1506 | 345,21 |
| X-MS analýzy by | y provedeny dle postupu popsaného v | oříkladu 3. |
Příklad 9: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (/? konfigurace), R4=H nebo CH3, R21-R24 jsou H, R25 je I
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 2-jodbenzoová), 4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCl2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou 2jodbenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 25-28 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 9.
-18CZ 307305 B6
Tabulka 9. Výsledky LC-MS analýzy látek 25-28
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=l | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji - hlavní detekované iony (m/z) |
| 25 | 9,13 | 681,1707 | 681,1691 | 373,24; 126,13 |
| 26 | 7,88 | 667,1550 | 667,1524 | 359,22 |
| 27 | 7,00 | 667,1550 | 667,1500 | 359,22 |
| 28 | 5,87 | 653,1393 | 653,1382 | 345,20 |
| ^C-MS analýzy by | y provedeny dle postupu popsaného v | oříkladu 3. |
Příklad 10: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3, R21-R24 jsou H, R25 je OCH3
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 2-methoxybenzoová),
4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCl2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1 15 a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou
2-methoxybenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 29-32 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 10.
-19CZ 307305 B6
Tabulka 10. Výsledky LC-MS analýzy látek 29-32
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=l | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji - hlavní detekované iony (m/z) |
| 29 | 7,52 | 585,2846 | 585,2855 | 373,24; 126,13 |
| 30 | 6,36 | 571,2689 | 571,2693 | 359,22 |
| 31 | 5,83 | 571,2689 | 571,2694 | 359,22 |
| 32 | 4,80 | 557,2532 | 557,2521 | 345,20 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 11: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1-C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3, R21-R23, R25 jsou H, R24 je OH
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 3-hydroxybenzoová),
4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCfy 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1 a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou
3-hydroxybenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 33-36 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 11.
CH3
ch3
-20CZ 307305 B6
Tabulka 11. Výsledky LC-MS analýzy látek 33-36
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z= 1 | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji hlavní detekované iony (m/z) |
| 33 | 5,85 | 571,2690 | 571,2688 | 373,24; 126,13 |
| 34 | 5,09 | 557,2533 | 557,2531 | 359,22; 126,13 |
| 35 | 5,92 | 557,2533 | 557,2538 | 359,22 |
| 36 | 5.07 | 543,2376 | 543,2355 | 345,20 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 12: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3, R21-R23, R25 jsou H, R24 je NH2
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 3-aminobenzoová),
4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCl2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1 a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou 3-aminobenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 37—40 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 12.
-21 CZ 307305 B6
Tabulka 12. Výsledky LC-MS analýzy látek 37-40
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=l | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji — hlavní detekované iony (m/z) |
| 37 | 5,35 | 570,2850 | 570,2839 | 373,24; 126,13 |
| 38 | 4,08 | 556,2393 | 556,2684 | 359,20; 126,12 |
| 39 | 5,35 | 556,2393 | 556,2696 | 359,22; 112,11 |
| 40 | 4,13 | 542,2536 | 542,2541 | 345,20 |
X'-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 13: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3, R21-R23, R25 jsou H, R24 je Cl
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 3-chlorbenzoová), 4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCl2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou 3chlorbenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 41 -44 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 13.
-22CZ 307305 B6
Tabulka 13. Výsledky LC-MS analýzy látek 4144
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=l | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji hlavní detekované iony (m/z) |
| 41 | 7,20 | 589,2351 | 589,2365 | 373,24; 126,13 |
| 42 | 6,77 | 575,2194 | 575,2185 | 359,22; 126,13 |
| 43 | 7,53 | 575,2194 | 575,2209 | 359,21 |
| 44 | 6,55 | 561,2037 | 561,2030 | 345,21 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 14: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (7? konfigurace), R4=H nebo CH3; R21, R22, R24, R25 jsou H, R23 je OH
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 4-hydroxybenzoová),
4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCf, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1 15 a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou 4-hydroxybenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 45—48 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 14.
-23 CZ 307305 B6
Tabulka 14. Výsledky LC-MS analýzy látek 45^18
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=l | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji hlavní detekované iony (m/z) |
| 45 | 5,76 | 571,2690 | 571,2706 | 373,23; 126,13 |
| 46 | 4,91 | 557,2533 | 557,2551 | 359,22; 126,13 |
| 47 | 5,74 | 557,2533 | 557,2540 | 359,21; 112,11 |
| 48 | 4,97 | 543,2376 | 543,2467 | 345,20 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 15: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (7? konfigurace), R4=H nebo CH3; R21, R22, R24, R25 jsou H, R23 je NH2
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 4-aminobenzoová),
4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCl2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1 a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou
4-hydroxybenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 49-52 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 15.
-24CZ 307305 B6
Tabulka 15. Výsledky LC-MS analýzy látek 49-52
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=l | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji hlavní detekované iony (m/z) |
| 49 | 6,81 | 570,2850 | 570,2847 | 373,23; 126,13 |
| 50 | 5,50 | 556,2393 | 556,2692 | 359,22; 126,13 |
| 51 | 5,77 | 556,2393 | 556,2664 | 359,21; 112,11 |
| 52 | 3,72 | 542,2536 | 542,2545 | 345,20 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 16: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3; R21, R22, R24, R25 jsou H, R23 je CH3
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 4-methylbenzoová),
4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCl2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1 a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou 4-hydroxybenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 53-56 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 16.
-25 CZ 307305 B6
Tabulka 16. Výsledky LC-MS analýzy látek 53-56
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=l | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji hlavní detekované iony (m/z) |
| 53 | 8,80 | 569,2897 | 569,2879 | 373,24; 126,13 |
| 54 | 8,08 | 555,2740 | 555,2748 | 359,22; 126,13 |
| 55 | 6,83 | 555,2740 | 555,2725 | 359,22 |
| 56 | 5,67 | 541,2583 | 541,2572 | 345,20 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 17: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3; R21, R22, R24, R25 jsou H, R23 je Cl
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 4-chlorbenzoová), 4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCl2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou 4hydroxybenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 57-60 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 17.
-26CZ 307305 B6
Tabulka 17. Výsledky LC-MS analýzy látek 57-60
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=l | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji hlavní detekované iony (m/z) |
| 57 | 7,52 | 589,2351 | 589,2364 | 373,23; 126,13 |
| 58 | 7,60 | 575,2194 | 575,2183 | 359,22 |
| 59 | 7,54 | 575,2194 | 575,2197 | 359,22; 112,11 |
| 60 | 6,02 | 561,2037 | 561,2037 | 345,20 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 18: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 io alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3; R21, R25 jsou OH; R22-R24 jsou
H
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 2,6-dihydroxybenzoová),
4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCl2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 15 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou 2,6dihydroxybenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 61-64 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 18.
-27CZ 307305 B6
Tabulka 18. Výsledky LC-MS analýzy látek 61-64
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=l | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji - hlavní detekované iony (m/z) |
| 61 | 7,27 | 587,2639 | 587,2656 | 373,24; 126,13 |
| 62 | 5,90 | 573,2482 | 573,2484 | 359,22; 126,13 |
| 63 | 7,03 | 573,2482 | 573,2490 | 359,22 |
| 64 | 4,99 | 559,2325 | 559,2310 | 345,20 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 19: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3; R21, R22, R24 jsou H; R23, R25 jsou OH
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 2,4-dihydroxybenzoová),
4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCI2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1 a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou
2,4-dihydroxybenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 65-68 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 19.
-28CZ 307305 B6
Tabulka 19. Výsledky LC-MS analýzy látek 65-68
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=\ | Majoritní detekovaný ion v MS spektru {m/z) | Fragmentace ve zdroji hlavní detekované iony {m/z) |
| 65 | 7,38 | 587,2639 | 587,2648 | 373,24; 126,13 |
| 66 | 6,05 | 573,2482 | 573,2483 | 359,22; 126,13 |
| 67 | 6,35 | 573,2482 | 573,2487 | 359,21 |
| 68 | 5,11 | 559,2325 | 559,2294 | 345,20 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 20: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3; R21, R22, R24 jsou H; R23 je NH2; R25je OH
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 4-amino-2hydroxybenzoová), 4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCl2, 100 mM Tris pH
7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1 a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou 4-amino-2-hydroxybenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 69-72 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 20.
-29CZ 307305 B6
Tabulka 20. Výsledky LC-MS analýzy látek 69-72
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=l | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji hlavní detekované iony (m/z) |
| 69 | 5,82 | 586,2799 | 586,2789 | 373,24; 126,13 |
| 70 | 4,97 | 572,2642 | 572,2646 | 359,22; 126,13 |
| 71 | 5,95 | 572,2642 | 572,2663 | 112,11 |
| 72 | 4,85 | 558,2485 | 558,2480 | 345,20 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 21: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3; R21, R22, R24 jsou H; R23 NH2; R25jeCl
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 4-amino-2chlorobenzoová, 4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCI2, 100 mM Tris pH
7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1 a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou 4-amino-2-chlorobenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 73-76 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 21.
-30CZ 307305 B6
Tabulka 21. Výsledky LC-MS analýzy látek 73-76
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=l | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji hlavní detekované iony (m/z) |
| 73 | 7,05 | 604.2460 | 604,2453 | 373,24; 126,13 |
| 74 | 5,83 | 590,2303 | 590,2281 | 359,22; 126,13 |
| 75 | 5,38 | 590,2303 | 590,2286 | 359,22 |
| 76 | 4,38 | 576,2146 | 576,2155 | 345,20 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 22: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (7? konfigurace), R4=H nebo CH3; R21, R22, R24 jsou H; R23, R25 jsou Cl
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 2,4-dichlorobenzoová,
4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCl2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1 a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou
2,4-dichlorobenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 77-80 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 22.
-31 CZ 307305 B6
Tabulka 22. Výsledky LC-MS analýzy látek 77-80
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=l | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji hlavní detekované iony (m/z) |
| 77 | 9,78 | 623,1961 | 623.1944 | 373,24; 126,13 |
| 78 | 8,51 | 609,1804 | 609,1783 | 359,22; 126,13 |
| 79 | 8,37 | 609,1804 | 609,1724 | 359,22 |
| 80 | 6,48 | 595,1647 | 595,1632 | 345,20 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 23: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3; R21, R22, R25 jsou H; R23, R24 jsou OH
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 3,4-dihydroxybenzoová),
4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCI2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1 a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou
3,4-dihydroxybenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 81-84 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 23.
-32CZ 307305 B6
Tabulka 23. Výsledky LC-MS analýzy látek 81-84
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=l | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji hlavní detekované iony (m/z) |
| 81 | 6,20 | 587,2639 | 587,2625 | 373,24; 126,13 |
| 82 | 5,00 | 573,2482 | 573,2493 | 359,22; 126,13 |
| 83 | 4,71 | 573,2482 | 573,2455 | 359,21 |
| 84 | 3,86 | 559,2325 | 559,2330 | 345,20 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 24: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3; R21, R22, R25 jsou H; R23, R24 jsou Cl
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 3,4-dichlorobenzoová),
4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCl2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1 15 a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou
3,4-dichlorobenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 85-88 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 24.
-33 CZ 307305 B6
Tabulka 24. Výsledky LC-MS analýzy látek 85-88
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z= 1 | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji hlavní detekované iony (m/z) |
| 85 | 10,09 | 623,1961 | 623,1955 | 373,24; 126,13 |
| 86 | 8,77 | 609,1804 | 609,1821 | 359,22; 126,13 |
| 87 | 8,35 | 609,1804 | 609,1766 | 359,21 |
| 88 | 6,77 | 595,1647 | 595,1626 | 345,20 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 25: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3; R21, R23, R25 jsou H; R22, R24 jsou OH
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 3,5-dihydroxybenzoová),
4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCl2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1 a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou
3,5-dihydroxybenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 89-92 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 25.
ch3
-34CZ 307305 B6
Tabulka 25. Výsledky LC-MS analýzy látek 89-92
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=\ | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji hlavní detekované iony (m/z) |
| 89 | 5,95 | 587,2639 | 587,2632 | 373,24; 126,13 |
| 90 | 4,94 | 573,2482 | 573,2468 | 359,22; 126,13 |
| 91 | 4,40 | 573,2482 | 573,2460 | 359,21 |
| 92 | 3,48 | 559,2325 | 559,2320 | 345,20 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 26: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3; R21, R23, R25 jsou H; R22, R24 jsou Cl
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 3,5-dichlorobenzoová),
4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCl2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1 a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou
3,5-dichlorobenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 93-96 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 26.
ci ci
-35CZ 307305 B6
Tabulka 26. Výsledky LC-MS analýzy látek 93-96
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=\ | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji hlavní detekované iony (m/z) |
| 93 | 10,37 | 623,1961 | 623,1967 | 373,24; 126,13 |
| 94 | 8,87 | 609,1804 | 609,1788 | 359,22; 126,13 |
| 95 | 8,10 | 609,1804 | 609,1755 | 359,22 |
| 96 | 6,80 | 595,1647 | 595,1620 | 345,20 |
^C-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 27: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3; R22, R23, R25 jsou H; R21, R24 jsou OH
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 2,5-dihydroxybenzoová),
4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgC12, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1 a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou
2,5-dihydroxybenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 97-100 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 27.
Tabulka 27. Výsledky LC-MS analýzy látek 93-96
-36CZ 307305 B6
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=l | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji hlavní detekované iony (m/z) |
| 97 | 7,46 | 587,2639 | 587,2649 | 373,24; 126,13 |
| 98 | 6,09 | 573,2482 | 573,2463 | 359,22; 126,13 |
| 99 | 6,18 | 573,2482 | 573,2466 | 359,22 |
| 100 | 4,32 | 559,2325 | 559,2320 | 345,20 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 28: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4=H nebo CH3; R21, R25 jsou H; R22-R24 jsou OH
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2 mM kyselina 3,4,5-trihydroxybenzoová),
4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCl2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí 1 (příprava dle příkladu 2), obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II, v poměru 1:1 a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Nový linkosamid s inkorporovanou kyselinou
3,4,5-trihydroxybenzoovou byl z reakční směsi izolován dle postupu uvedeného v příkladu 3.
LC-MS analýza
Celkem byly připraveny čtyři linkosamidy: látky 101-104 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 28.
-37CZ 307305 B6
Tabulka 28. Výsledky LC-MS analýzy látek 101-104
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomolekulámí ion - teoretická hodnota m/z pro z=l | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji hlavní detekované iony (m/z) |
| 101 | 4,65 | 603,2588 | 603,2582 | 373,24; 126,13 |
| 102 | 3,77 | 589,2431 | 589,2422 | 359,22; 126,13 |
| 103 | 4,76 | 589,2431 | 589,2427 | 359,21 |
| 104 | 3,08 | 575,2274 | 575,2269 | 345,20 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 29: Příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C3 alkyl, R3=C1 (S konfigurace), R4=H nebo CH3; R21-24 jsou H, R25 je OH.
Příprava nových linkosamidů, kde R3=C1 vychází z těch linkosamidů připravených v příkladu 3, jejichž R3=OH (R konfigurace). Tyto jsou synteticky chlorovány následujícím postupem. K suspenzi A-chloromethylen)-2V-methylmethaniminium chloridu (11 mmol) v dichlormethanu (3,5 ml) intenzivně míchané v inertní atmosféře (Ar) za chlazení externí lázní obsahující vodu a led byl přidán po částech během 15 min linkosamid (2 mmol) a 3-/<?rc-butyl-4-hydroxy-5methylfenyl sulfid (9 mg) za vzniku adičního produktu. Chlazení bylo odstaveno, reakční směs byla míchána 2 h při laboratorní teplotě a následně zahřívána na 60 °C po dobu 6 h, pak další 4 h na 68 °C. Následně byla reakční směs ochlazena k 0 °C a pomalu přikapávána do roztoku NaOH (0,66 g) ve směsi vody s ledem (6 g) chlazené externí lázní se směsí aceton/suchý led (-78 °C) tak, aby teplota reakční směsi nepřekročila 21 °C. Během přikapávání reakční směsi bylo pH udržováno kolem 6 případným přídavkem dalšího podílu vodného roztoku NaOH. Poté bylo pH směsi zvýšeno na 10,5 a mícháno 2 h, následně upraveno na pH = 7 a mícháno přes noc. Pak byla směs ochlazena k 0 °C vodou s ledem, pH bylo sníženo na 1,5 přídavkem HC1 a extrahováno CH2C12 (5x5 ml). Každá z organických fází byla promyta 7,5 ml roztoku zředěné HC1 (pH 1,5). Vodné fáze byly spojeny, alkalizovány zředěným roztokem NaOH na pH = 10,5 a extrahovány CH2C12 (5x5 ml). Každá organická fáze byla promyta 2 x 7,5 ml fosfátového pufru (0,5 M, pH = 6,2). Organické fáze byly spojeny, vysušeny bezvodým Na2SO4, přefiltrovány a zakoncentrovány. Získaný olej byl rozpuštěn v ethylacetátu (20 ml), odpařen na vakuové odparce a tato operace byla ještě jednou zopakována. Olej byl rozpuštěn v ethylacetátu a podroben odbarvování pomocí aktivního uhlí (50 mg) po dobu 30 min. Následně přefiltrováno přes Celit a zakoncentrováno na olej. Následně rozpuštěno v ethylacetátu (8 ml) a absolutním ethanolu (2 ml) a za intenzivního míchání přidávána koncentrovaná HC1 do konečného pH = 0,5. Vzniklá suspenze byla míchána 1 h při laboratorní teplotě, poté 30 min při 0 °C. Krystaly byly odfiltrovány, promyty ethylacetátem (1 ml) a sušeny přes noc při 80 °C za vakua. Takto byl získán ethanolový solvát hydrochlorid linkosamidů vzorce I, kde R3=C1 (S konfigurace) v celkovém výtěžku kolem 80 %.
-38 CZ 307305 B6
Příprava hydrochlorid hydrátu: Ethanolový solvát, připravený výše uvedeným postupem, je rozpuštěn ve vodě, odpařen na sirup, rozpuštěn v horkém acetonu, pak pomalu ochlazen na laboratorní teplotu po dobu 4 h. Následným ochlazením acetonového roztoku k 0 °C začnou vypadávat krystaly hydrochlorid hydrátu linkosamidů. Ty jsou po 30 min míchání při 0 °C odfiltrovány a vysušeny na vzduchu. Výtěžek se pohybuje kolem 90 %.
Příklad 30: Příprava prekurzoru vzorce III, kde R1 je C4-C6 alkyl, R3 je OH (R konfigurace), R4 je H nebo CH3
Příprava je analogická postupu pro přípravu prekurzoru vzorce III, kde R1=C3 alkyl tak, jak je popsáno v příkladu 1 s tím rozdílem, že bakteriální kultura inkubována v médiu YEME je v časech kultivace 24h, 48h, a 72h obohacena o 50μΙ 200mM roztoku 4-butyl-L-prolinu (pro R1=C4 alkyl) nebo 4-pentyl-L-prolinu (pro R1=C5 alkyl) nebo 4-hexyl-L-prolinu (pro R1=C6 alkyl). Izolace prekurzoru vzorce III je pak provedena analogicky postupu uvedenému v příkladu
1.
LC-MS analýza
Byly připraveny dva prekurzory, látky 107, 108 s následujícími strukturami a LC-MS parametry uvedenými v tabulce 29.
Tabulka 29. Výsledky LC-MS analýzy látek 107, 108
| Linkosamid | Retenční čas (min) | Pseudomoleku lamí ion - teoretická hodnota m/z pro z= 1 | Majoritní detekovaný ion v MS spektru (m/z) | Fragmentace ve zdroji hlavní detekované iony (m/z) |
| 107 | 4,21 | 494,2536 | 494,2499 | 373,23; 140,14 |
| 108 | 5,11 | 508,2693 | 508,2666 | 387,25; 154,16 |
LC-MS analýzy byly provedeny dle postupu popsaného v příkladu 3.
Příklad 31: Příprava prekurzoru vzorce II, kde R1 je C4-C6 alkyl, R3 je OH nebo OCH3 (R konfigurace), R4 je H nebo CH3
Reakční směs 1 obsahovala: 20 μΜ CcbF, 20 μΜ Ccb5, 200 μΜ linkosamidový prekurzor dle obecného vzorce III, kde R1 je C4-C6 alkyl, R3 je OH, R4 je H nebo CH3 a R5 je H - příprava popsána v příkladu 31, 200 μΜ pyridoxal-5-fosfát, 100 mM Tris pH 7,5. V případě přípravy nových linkosamidových látek dle obecného vzorce II, kde R3=OCH3, reakční směs navíc
-39CZ 307305 B6 obsahovala 20 μΜ Ccb4 a 4 mM S-adenosylmethionin. Reakční směs 1 byla inkubována při 30 °C po dobu 2h. Příprava heterologních proteinů je popsána v příkladu 2.
Příklad 32: In vitro enzymatická příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C4C6 alkyl, R3=OH nebo OCH, (R konfigurace), R4=H nebo CH3, R21-R24 jsou H a R25 je OH
Reakční směs 2 obsahovala: 2 μΜ Ccb2, 2 μΜ Ccbl, 2mM kyselina salicylová, 4,5 mM adenosintrifosfát, 2 mM koenzym A, 2 mM MgCl2, 100 mM Tris pH 7,5. Reakční směs 2 byla ío inkubována při 30 °C po dobu 30 min. Poté byla reakční směs 2 smíchána s reakční směsí (příprava dle příkladu 32) obsahující linkosamidový prekurzor dle vzorce II v poměru 1:1 a byla inkubována při 30 °C po dobu dalších 2h. Izolace linkosamidů byla provedena stejně, jak je popsáno v příkladu 3.
-40CZ 307305 B6
Příklad 33: Příprava nových linkosamidových látek vzorce I, kde R1=C4-C6 alkyl, R3=C1 (S konfigurace), R4=H nebo CH3, R21-R24 jsou H a R25 je OH
Příprava nových linkosamidů, kde R1=C4-C6 alkyl, R3=C1 vychází z těch linkosamidů připravených v příkladu 32, jejichž R3=OH (Λ konfigurace). Tyto jsou synteticky chlorovány stejným chloračním postupem jako je uvedeno v příkladu 29.
Claims (15)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Linkosamidy obecného vzorce 1 kdeR1 je vybrán z C2-C8 alkyl nebo C2-C8 alkenyl;R3 je vybrán z OH, O(C1-C4 alkyl), SH, S(C1-C4 alkyl) nebo halogen;R4 je H nebo C1-C3 alkyl;každý z R21, R22, R23, R24, R25 je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující H, OH, C1-C4 alkyl, C1-C4 alkenyl, C1-C4 alkynyl, halogen, O(C1-C4 alkyl), O(C1-C4 alkenyl), O(C1-C4 alkynyl), NH2, N(C1-C4 alkyl)2, N(C1-C4 alkenyl)2, N(C1-C4 alkynyl)2;a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
- 2. Linkosamidy podle nároku 1, kde R1 je C3-C6 alkyl, s výhodou vybraný z propyl, butyl, pentyl, hexyl.
- 3. Linkosamidy podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, kde R3 je OH, OCH3, OCH2CH3 nebo Cl.
- 4. Linkosamidy podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, kde R4 je H nebo CH3.
- 5. Linkosamidy podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, kde každý z R21, R22, R23, R24, R25 je s výhodou nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující H, OH, CH3, CH2CH3, Cl, Br, I, OCH3, OCH2CH3, nh2.
- 6. Linkosamidy podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, kde má obecný vzorec I konfiguraci na chirálních centrech uvedenou níže:-42CZ 307305 B6 přičemž R1 a R3 mohou mít konfigurace R i .S'; s výhodou má chirální centrum nesoucí skupinou R1 konfiguraci R; výhodněji má chirální centrum se skupinou R3 konfiguraci R, pokud R3=OH, OCH3, OCH2CH3, a konfiguraci S, pokud R3=halogen.
- 7. Způsob přípravy látek obecného vzorce I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6, vyznačený tím, že zahrnuje krok enzymaticky katalyzované aktivace derivátu kyseliny benzoové substituované substituenty R21, R22, R23, R24, R25 navázáním koenzymu A a krok enzymaticky katalyzované esterifíkace prekurzoru vzorce II konjugátem derivátu kyseliny benzoové substituované substituenty R21, R22, R23, R24, R25 a koenzymu A, přičemž ve vzorci II jsou substituenty Rl, R3, R4, jakje uvedeno pro vzorec I.
- 8. Způsob podle nároku 7, vyznačený tím, že jako enzym pro enzymaticky katalyzovanou aktivaci derivátu kyseliny benzoové substituované substituenty R21, R22, R23, R24, R25 navázáním koenzymu A se použije protein obsahující celesticetinový biosyntetický protein Ccb2, nebo obsahující Ccb2-podobný protein s alespoň 95% identitou s aminokyselinovou sekvencí Ccb2, a/nebo jako enzym pro esterifikaci prekurzoru vzorce II se použije protein obsahující celesticetinový biosyntetický protein Ccbl, nebo obsahující Ccbl-podobný protein s alespoň 95% identitou s aminokyselinovou sekvencí Ccbl.
- 9. Způsob podle nároku 7 nebo 8, kde se prekurzor podle obecného vzorce II získá enzymatickou transformací prekurzoru podle obecného vzorce III-43 CZ 307305 B6 působením celesticetinových biosyntetických proteinů CcbF, Ccb5, a popřípadě Ccb4, nebo proteinů s alespoň 95% identitou s CcbF, Ccb5, a popřípadě Ccb4, přičemž ve vzorci III jsou substituenty Rl, R3, R4, jak je uvedeno pro vzorec I.
- 10. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 7 až 9, vyznačený tím, že se enzymaticky katalyzovaná aktivace derivátu kyseliny benzoové substituované substituenty R21, R22, R23, R24, R25 navázáním koenzymu A a/nebo enzymaticky katalyzovaná esterifikace prekurzoru vzorce II konjugátem derivátu kyseliny benzoové substituované substituenty R21, R22, R23, R24, R25 a koenzymu A provádějí biosynteticky s použitím mikroorganismu nesoucího kódující sekvence celesticetinových biosyntetických proteinů Ccbl a/nebo Ccb2, nebo biosyntetických proteinů majících alespoň 95% identitu aminokyselinové sekvence s Ccbl a/nebo Ccb2, přičemž mikroorganismem je s výhodou mikroorganismus třídy Actinobacteria, výhodněji rodu Streptomyces.
- 11. Způsob podle nároku 10, vyznačený tím, že mikroorganismus dále nese kódující sekvence celesticetinových biosyntetických proteinů Ccb5, CcbF, a popřípadě Ccb4 nebo biosyntetických proteinů majících alespoň 95% identitu s Ccb5, CcbF, a popřípadě Ccb4, a postup vychází z prekurzoru vzorce III.
- 12. Způsob podle nároku 11, vyznačený tím, že mikroorganismus dále nese i kódující sekvence příslušných linkomycinových a/nebo celesticetinových biosyntetických proteinů, v kombinaci nezbytných pro biosyntézu prekurzoru vzorce III v buňce.
- 13. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 10 až 12, vyznačený tím, že biosynteticky získaná látka obecného vzorce I je dále podrobena syntetické modifikaci, s výhodou chloraci v poloze 7 cukerného zbytku.
- 14. Linkosamidy obecného vzorce I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 pro použití jako léčiva, zejména jako antimikrobiální léčiva.
- 15. Finkosamidy obecného vzorce I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 pro použití při inhibici nebo zabíjení bakterií a jednobuněčných eukaryotických parazitických mikroorganismů, zejména Gram-pozitivních bakterií a parazitů kmene Apicomplexa obsahujících cílové organely, apikoplasty, zejména organismů rodu Plasmodium, Toxoplasma, Babesia, Theileria a třídy Coccidia.
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2017-137A CZ307305B6 (cs) | 2017-03-10 | 2017-03-10 | Linkosamidy, jejich příprava a použití |
| US16/491,133 US10822366B2 (en) | 2017-03-10 | 2018-03-09 | Lincosamide derivatives, preparation and use thereof as antimicrobial agent |
| PCT/CZ2018/050008 WO2018161979A1 (en) | 2017-03-10 | 2018-03-09 | Lincosamide derivatives, preparation and use thereof as antimicrobial agent |
| EP18716090.8A EP3592756B1 (en) | 2017-03-10 | 2018-03-09 | Lincosamide derivatives, preparation and use thereof as antimicrobial agent |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2017-137A CZ307305B6 (cs) | 2017-03-10 | 2017-03-10 | Linkosamidy, jejich příprava a použití |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2017137A3 CZ2017137A3 (cs) | 2018-05-23 |
| CZ307305B6 true CZ307305B6 (cs) | 2018-05-23 |
Family
ID=68806409
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2017-137A CZ307305B6 (cs) | 2017-03-10 | 2017-03-10 | Linkosamidy, jejich příprava a použití |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10822366B2 (cs) |
| EP (1) | EP3592756B1 (cs) |
| CZ (1) | CZ307305B6 (cs) |
| WO (1) | WO2018161979A1 (cs) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11566039B2 (en) * | 2017-08-10 | 2023-01-31 | President And Fellows Of Harvard College | Lincosamide antibiotics and uses thereof |
| EP3664799B1 (en) | 2017-08-10 | 2025-10-01 | President And Fellows Of Harvard College | Lincosamide antibiotics and uses thereof |
| US20250270246A1 (en) * | 2022-04-20 | 2025-08-28 | President And Fellows Of Harvard College | Lincosamides and uses thereof |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3544552A (en) * | 1968-10-18 | 1970-12-01 | Upjohn Co | 3-phosphate esters of lincomycin |
| US3671647A (en) * | 1971-03-24 | 1972-06-20 | Upjohn Co | Lincomycin 3-nucleotides and the salts thereof |
| WO2010127645A2 (en) * | 2009-05-04 | 2010-11-11 | Institute Of Microbiology As Cr, V. V. I. | The method of biotechnological preparation of lincomycin derivatives and its using |
| CZ2009278A3 (cs) * | 2009-05-04 | 2010-11-18 | Mikrobiologický ústav AV CR, v.v.i. | Sekvence genového shluku kódující biosyntézu celesticetinu |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL128232C (cs) | 1964-04-13 | |||
| JP5290166B2 (ja) | 2007-05-31 | 2013-09-18 | Ｍｅｉｊｉ Ｓｅｉｋａファルマ株式会社 | リンコサミド誘導体及びこれを有効成分とする抗菌剤 |
| CN105566411B (zh) | 2014-11-07 | 2020-11-13 | 中国科学院上海有机化学研究所 | 林可霉素生物合成中间产物及其制法和用途 |
-
2017
- 2017-03-10 CZ CZ2017-137A patent/CZ307305B6/cs unknown
-
2018
- 2018-03-09 WO PCT/CZ2018/050008 patent/WO2018161979A1/en not_active Ceased
- 2018-03-09 EP EP18716090.8A patent/EP3592756B1/en active Active
- 2018-03-09 US US16/491,133 patent/US10822366B2/en active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3544552A (en) * | 1968-10-18 | 1970-12-01 | Upjohn Co | 3-phosphate esters of lincomycin |
| US3671647A (en) * | 1971-03-24 | 1972-06-20 | Upjohn Co | Lincomycin 3-nucleotides and the salts thereof |
| WO2010127645A2 (en) * | 2009-05-04 | 2010-11-11 | Institute Of Microbiology As Cr, V. V. I. | The method of biotechnological preparation of lincomycin derivatives and its using |
| CZ2009278A3 (cs) * | 2009-05-04 | 2010-11-18 | Mikrobiologický ústav AV CR, v.v.i. | Sekvence genového shluku kódující biosyntézu celesticetinu |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Chemical science (20170501) Vol. 8, No. 5, pp. 3349-3355; Electronic Publication Date: 2017.03.23; ISSN: 2041-6520; Janata, J et al."Elucidation of salicylate attachment in celesticetin biosynthesis opens the door to create a library of more efficient hybrid lincosamide antibiotics" * |
| HANADA, Minoru, et al. Antibiotic Bu-2545, a new member of the celesticetin-lincomycin class. The Journal of antibiotics, 1980, 33.7: 751-753; ISSN: 0021-8820 * |
| Journal of the American Chemical Society (20160525), 138(20), pp. 6348-6351 In English CODEN: JACSAT ISSN: 0002-7863; Wang, Min et al:"Differences in PLP-Dependent Cysteinyl Processing Lead to Diverse S-Functionalization of Lincosamide Antibiotics" * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2017137A3 (cs) | 2018-05-23 |
| EP3592756B1 (en) | 2021-09-15 |
| EP3592756A1 (en) | 2020-01-15 |
| US20200017537A1 (en) | 2020-01-16 |
| WO2018161979A1 (en) | 2018-09-13 |
| US10822366B2 (en) | 2020-11-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ307305B6 (cs) | Linkosamidy, jejich příprava a použití | |
| Dupuis et al. | Synthetic diversification of natural products: semi-synthesis and evaluation of triazole jadomycins | |
| García et al. | The chromomycin CmmA acetyltransferase: a membrane‐bound enzyme as a tool for increasing structural diversity of the antitumour mithramycin | |
| Le et al. | Efficient enzymatic systems for synthesis of novel α-mangostin glycosides exhibiting antibacterial activity against Gram-positive bacteria | |
| Liu et al. | Structural and biochemical studies of the glycosyltransferase Bs-YjiC from Bacillus subtilis | |
| Wexselblatt et al. | ppGpp analogues inhibit synthetase activity of Rel proteins from Gram-negative and Gram-positive bacteria | |
| Zhang et al. | In vivo production of thiopeptide variants | |
| EP2601205A2 (en) | Guanine nucleotide derivatives for treating bacterial infections | |
| CN107698602B (zh) | 具有抗肿瘤活性的聚酮类化合物及其制备方法与应用 | |
| Clayton-Cuch et al. | Biochemical and in silico characterization of glycosyltransferases from red sweet cherry (Prunus avium L.) reveals their broad specificity toward phenolic substrates | |
| CZ302256B6 (cs) | Zpusob biotechnologické prípravy derivátu linkomycinu | |
| Tang et al. | Deciphering the biosynthesis of TDP-β-l-oleandrose in avermectin | |
| Zong et al. | Overexpression, purification, biochemical and structural characterization of rhamnosyltransferase UGT89C1 from Arabidopsis thaliana | |
| Kumar et al. | Isolation of chemical constituents from Nonomuraea species: In vitro and in silico evaluation of its antibacterial properties | |
| Schäfer et al. | SimC7 is a novel NAD (P) H-dependent ketoreductase essential for the antibiotic activity of the DNA gyrase inhibitor simocyclinone | |
| US20130273617A1 (en) | Method for producing indole derivative | |
| Wang et al. | Using peptide mimics to study the biosynthesis of the side-ring system of Nosiheptide | |
| Heide et al. | Combinatorial biosynthesis, metabolic engineering and mutasynthesis for the generation of new aminocoumarin antibiotics | |
| Ishimizu et al. | Chemical synthesis of uridine 5′-diphospho-α-D-xylopyranose | |
| Chen et al. | Enzymatic Methylation and Structure–Activity‐Relationship Studies on Polycarcin V, a Gilvocarcin‐Type Antitumor Agent | |
| KR101575295B1 (ko) | 신규한 에포틸론 글리코시드 및 이의 제조방법 | |
| Ukaegbu et al. | Utility of bacterial peptidoglycan recycling enzymes in the chemoenzymatic synthesis of valuable UDP sugar substrates | |
| Skarbek et al. | Synthesis and antimicrobial activity of 6-sulfo-6-deoxy-D-glucosamine and its derivatives | |
| WO2014194551A1 (zh) | 一种海洋咔啉生物碱的生物合成基因簇及其应用 | |
| KR101434602B1 (ko) | 미생물 변이체를 이용한 케르세틴에서 3―ｏ―자일로실 케르세틴을 제조하는 방법 |