CZ306640B6 - Způsob provádění průtokového cytometrického měření - Google Patents
Způsob provádění průtokového cytometrického měření Download PDFInfo
- Publication number
- CZ306640B6 CZ306640B6 CZ2015-590A CZ2015590A CZ306640B6 CZ 306640 B6 CZ306640 B6 CZ 306640B6 CZ 2015590 A CZ2015590 A CZ 2015590A CZ 306640 B6 CZ306640 B6 CZ 306640B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- cuvette
- photoluminescence
- particles
- signal
- excitation radiation
- Prior art date
Links
- 238000005259 measurement Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims abstract description 62
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 54
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims abstract description 39
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims abstract description 35
- 238000005424 photoluminescence Methods 0.000 claims abstract description 30
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims abstract description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- -1 etc. Substances 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000013307 optical fiber Substances 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Optical Measuring Cells (AREA)
Abstract
Způsob provádění průtokového cytometrického měření, při kterém se suspenze měřených částic (30) strhává nosnou tekutinou z kapiláry (2) do vnitřního prostoru kyvety (3), kterým se vede do měřicího bodu průtokového cytometru (1), ve kterém se měřené částice (30) osvětlují excitačním zářením z alespoň jednoho zdroje (4) excitačního záření, přičemž se alespoň jedním optickým detektorem fotoluminiscence (71, 72, 73) snímá fotoluminiscence těchto měřených částic (30). Před průtokovým cytometrickým měřením měřených částice (30) a/nebo v jeho průběhu se přitom do kapiláry (3) přivede suspenze referenčních částic známé velikosti a charakteru, kyveta (2) se uvede do lineárního krokového pohybu s krokem v řádu jednotek až desítek mikrometrů postupně ve dvou vzájemně kolmých osách (x, y), které jsou současně kolmé k podélné ose (20) kyvety (2), přičemž se alespoň jedním optickým detektorem (71, 72, 73) fotoluminiscence snímá fotoluminiscence referenčních částic, načež se z histogramu digitalizovaného signálu tohoto optického detektoru/detektorů (71, 72, 73) fotoluminiscence stanoví poloha kyvety (2) s nejvyšší intenzitou tohoto signálu, do které se kyveta (2) přesune. V této poloze se pak zahájí nebo znovuzahájí průtokové cytometrické měření měřených částic (30).
Description
Způsob provádění průtokového cytometrického měření
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu provádění průtokového cytometrického měřené, při kterém se suspenze měřených částic strhává nosnou tekutinou z kapiláry do vnitřního prostoru kyvety, kterým se vede do měřicího bodu cytometru.
Dosavadní stav techniky
Průtokové cytometrické měření je přístrojová metoda, který umožňuje měřit různé vlastnosti velkého množství pevných částic malých rozměrů, nejčastěji biologického původu - např. různých typů buněk, virů, chromozomů, apod., ale také různých anorganických materiálů - např. částic prachu, apod. Během měření jsou tyto částice ve formě suspenze nasávány ze zkumavky cytometru do otevřené kapiláry, která je uložená v průhledné kyvetě, přičemž kyvetou protéká laminárním prouděním nosná tekutina, která při obtékání kapiláry strhává zjejího ústí vzorek suspenze, a nese ho do měřicího bodu cytometru. V tomto měřicím bodu jsou pak částice ve vzorku suspenze ozařovány excitačním zářením z alespoň jednoho zdroje monochromatického excitačního záření, nejčastěji laserem, přičemž se soustavou optických detektorů sleduje přímý rozptyl (FSC - forward scatter) a boční rozptyl (SSC - side scatter) tohoto záření způsobený průchodem jednotlivých částic měřicím bodem cytometru, a současně fotoluminiscence (FL) fluorochromů přirozeně přítomných v daných částicích a/nebo jim pro účely cytometrického měření dodaných. Intenzita přímého rozptylu excitačního záření je pak úměrná velikosti dané částice, přičemž v případě buněk také umožňuje odlišit živé buňky od mrtvých; intenzita bočního rozptylu excitačního záření je přímo úměrná vnitřní komplexitě dané částice, resp. granularitě (charakteru povrchu a tvaru) buňky; z fotoluminiscence dané částice lze určit její typ či velikost, a případně i roztřídit směs částic různých typů.
Kyveta je v současné době v cytometru uložena vyjímatelně, a s možností jednoduchého mechanického polohování prostřednictvím manuálně ovládaných stavěčích šroubů. Toto její uložení má řadu nedostatků, přičemž nejpodstatnějším z nich je, že při jakékoliv manipulaci s kyvetou, např. při jejím čistění, však i přes použití různých tvarových prvků či značek, které by měly zabezpečit její optimální polohu, dochází k upnutí kyvety mimo optickou osu (některého z) optických prvků cytometru (tj. detektoru/ů a/nebo objektivu/ů). Vzhledem ktomu, že i jen velmi malá odchylka (v řádu desítek mikrometrů) může mít značný vliv na výsledky a přesnost měření, vyžaduje každé nové upnutí kyvety do držáku cytometru zdlouhavé odborné seřizování její polohy.
Kromě upnutí kyvety mimo optickou osu optických prvků cytometru ovlivňují výsledek měření a jeho přesnost také nečistoty, které se v kyvetě průběžně usazují, a které svou přítomností vychylují dráhu suspenze měřených částic.
Cílem vynálezu je navrhnout způsob provádění průtokového cytometrického měření, který by umožňoval před a/nebo během samotného měření automatické přesunutí kyvety cytometru do její optimální polohy vůči zdroji excitačního záření a ostatním optickým prvkům cytometru.
Podstata vynálezu
Cíle vynálezu se dosáhne způsobem provádění průtokového cytometrického měření, při kterém se suspenze měřených částic strhává nosnou tekutinou z kapiláry do vnitřního prostoru kyvety, kterým se vede do měřicího bodu průtokového cytometru, ve kterém se měřené částice osvětlují excitačním zářením z alespoň jednoho zdroje excitačního záření, přičemž se alespoň jedním optickým detektorem fotoluminiscence snímá fotoluminiscence těchto měřených částic. Podstata
- 1 CZ 306640 B6 tohoto způsobu pak spočívá v tom, že před průtokovým cytometrickým měřením měřených částic a/nebo v jeho průběhu se do kapiláry přivede suspenze referenčních částic známé velikosti a charakteru, kyveta se uvede do lineárního krokového pohybu s krokem v řádu jednotek až desítek mikrometrů postupně ve dvou vzájemně kolmých osách, které jsou současně kolmé k podélné ose kyvety, a jedna z nich je kolmá na paprsek excitačního záření, přičemž se alespoň jedním optickým detektorem fotoluminiscence snímá fotoluminiscence referenčních částic. Z histogramu digitalizovaného signálu tohoto optického detektoru/detektorů fotoluminiscence se pak stanoví poloha kyvety s nejvyšší intenzitou tohoto signálu, do které se kyveta přesune, a v této poloze se zahájí nebo znovuzahájí průtokové cytometrické měření měřených částic. Tato poloha představuje optimální polohu kyvety, ve které je fluidní kanál kyvety s měřenými částicemi vystaven maximální možné intenzitě excitačního záření ze zdroje excitačního záření a zároveň je optickými detektory cytometru detekován nej lepší poměr užitečného signálu vzhledem k šumovému pozadí.
Před nalezením a přesunutím kyvety do polohy s nejvyšší intenzitou signálu optického detektoru fotoluminiscence se kyveta uvede do krokového lineárního pohybu s krokem v řádu desítek až stovek mikrometrů v ose kolmé na paprsek excitačního záření, přičemž se alespoň jedním optickým detektorem přímého rozptylu snímá přímý rozptyl excitačního záření způsobený referenčními částicemi v měřicím bodu průtokového cytometru, a z histogramu digitalizovaného signálu tohoto optického detektoru se stanoví poloha kyvety s nejužším pikem tohoto signálu, do které se kyveta v této ose přesune. Poté se kyveta uvede do krokového lineárního pohybu s krokem v řádu desítek až stovek mikrometrů v ose rovnoběžné s paprskem excitačního záření, přičemž se alespoň jedním optickým detektorem bočního rozptylu snímá boční rozptyl excitačního záření způsobený referenčními částicemi v měřicím bodě průtokového cytometru, a z histogramu digitalizovaného signálu tohoto optického detektoru se stanoví poloha kyvety s nejvyšší intenzitou tohoto signálu, do které se kyveta v této ose přesune. Tímto způsobem se kyveta přesune do výhodné pozice pro hledání optimální pozice.
V jiné variantě způsobu provádění průtokového cytometrického měření se kyveta před nalezením a přesunutím do polohy s nejvyšší intenzitou signálu optického detektoru fotoluminiscence přesune do polohy, ve které probíhalo některé z předcházejících cytometrických měření.
V další variantě způsobu provádění průtokového cytometrického měření se kyveta před nalezením a přesunutím do polohy s nejvyšší intenzitou signálu optického detektoru fotoluminiscence přesune do polohy, ve které je v pomocném objektivu průtokového cytometru viditelný proud vzorku.
Objasnění výkresů
Na přiloženém výkrese je na obr. 1 znázorněno schéma průtokového cytometru k provádění průtokového cytometrického měření podle vynálezu, a na obr. 2 držák kyvety tohoto cytometru, na obr. 3 příkladný histogram signálu optického detektoru dopředného rozptylu, na obr. 4 příkladný histogram signálu optického detektoru bočního rozptylu, a na obr. 5 příkladný histogram signálu optického detektoru fotoluminiscence.
Příklady uskutečnění vynálezu
Průtokový cytometr f znázorněný na obr. 1 obsahuje kyvetu 2 uloženou v držáku kyvety znázorněném na obr. 2, která je propojená s neznázorněným zdrojem nosné tekutiny, a v jejímž vnitřním prostoru je uložena nebo vyústěna otevřená kapilára 3 neznázoměné zkumavky pro uložení suspenze měřených částic 30. Mimo kapiláru 3 je této kyvetě 2 v měřicím bodu cytometru 1 přiřazen alespoň jeden zdroj 4 (monochromatického) excitačního záření, s výhodou např. laser, proti kterému je na opačné straně kyvety 2 uspořádán alespoň jeden optický detektor 5 přímého rozptylu (FSC - forward scatter) excitačního záření. Dále jí je ve stejné rovině kolmé k podélné
-2CZ 306640 B6 ose 20 kyvety 2 a ke směru pohybu měřených částic 30, mimo dráhu excitačního paprsku, přiřazen alespoň jeden optický detektor 6 bočního rozptylu (SSC - side scatter) excitačního záření, a alespoň jeden, obvykle však více, optických detektorů 71, 72, 73 fotoluminiscence měřených částic 30. Každému z těchto optických detektorů 5, 6, 71, 72, 73 je přitom přiřazená neznázorněná standardní optika, obsahující např. prvky pro kolimaci dané složky excitačního záření, resp. fotoluminiscenčního záření, a/nebo pro její/jeho vychýlení požadovaným směrem, jako např. kolimátory, čočky, zrcadla, apod., a/nebo pro úpravu jeho/jejího spektra, jako např. filtry. V jiné variantě provedení pak může být tato optika úplně nebo částečně nahrazená optickými vlákny. Optické detektory 5, 6, 7£, 72, 73 jsou optické detektory libovolného známého typu, jako např. PMT, APD, CCD, CMOS apod., kterým je přiřazena neznázoměná elektronika pro čtení a digitalizaci jejich signálů. Tato elektronika přitom může být samostatná, nebo může být součástí optického detektoru 5, 6, 71, 72, 73 nebo součástí řídicí jednotky 8 cytometru 1 tvořené např. počítačem, či podobným zařízením, ke které jsou optické detektory 5, 6, 71, 72, 73 připojeny.
Oproti standardní konstrukci je u cytometru 1 podle vynálezu držák 9 kyvety 2 uložen pohyblivě ve dvou vzájemně kolmých osách x, y, které jsou současně kolmé k podélné ose 20 kyvety 2 (a tedy ke směru pohybu měřených částic 30), přičemž jedna z nich je současně kolmá na excitační paprsek (viz obr. 2, na kterém je znázorněná varianta cytometru £ se svisle orientovanou kyvetou 2, u které jsou obě tyto osy horizontální), a je propojený se dvěma krokovými motory 10 a 11 pro pohyb v těchto osách s krokem v řádu jednotek až stovek mikrometrů. Jako výhodné se během testování projevily zejména krokové motory série LSA (výrobce Zaber Technologies). Tyto krokové motory 10, 11, resp. jejich řídicí části jsou propojeny s řídicí jednotkou 8 cytometru £, která je spouští a řídí jejich pohyb. Kromě toho je držák 9 kyvety 2 opatřen neznázoměnými standardními upínacími prostředky, které umožňují opakované vyjímání a vkládání kyvety 2.
Způsob provádění průtokového cytometrického měření podle vynálezu je pak založen na použití cytometru £ s držákem 9 kyvety 2 uloženým výše popsaným způsobem, u kterého se signály z optických detektorů 5, 6, 7£, 72, 73, kromě standardní analýzy měřených částic 30, použijí k automatickému nalezení optimální polohy kyvety 2, a to buď před měřením daných částic 30, např. po manipulaci s kyvetou 2, nebo během měření těchto částic 30, např. po změně tlakových poměrů v kyvetě 2 a v důsledku toho i změně dráhy těchto částic v ní, a k přesunutí kyvety 2 do této optimální polohy. Optimální polohou kyvety 2 je přitom poloha, ve které je fluidní kanál kyvety 2 s jednotlivými měřenými částicemi 30 vystaven maximální možné intenzitě excitačního záření ze zdroje 4 excitačního záření a zároveň je optickými detektory 5, 6, 7£, 72, 73 cytometru £ detekován nej lepší poměr užitečného signálu vzhledem k šumovému pozadí.
Pro nalezení optimální polohy se nejprve kyveta 2 působením pohonu 10 pohybuje ve směru osy y (dle obr. 2) kolmé na podélnou osu 20 kyvety 2 a na paprsek excitačního záření, přičemž prochází tímto paprskem (s výhodou tímto paprskem a případně jeho nejbližším okolím prochází pouze v ní uložená kapilára 3). Přitom se do řídicí jednotky 8 cytometru £ přivádí signál z optického detektoru/detektorů 5 přímého rozptylu excitačního záření, který se využívá jako zpětná vazba pro nalezení optimální polohy kyvety 2 na této ose. Takovou optimální polohou je přitom poloha s nej užším pikem, a tedy s nej nižším variačním koeficientem, v histogramu tohoto signálu (viz obr. 3, na kterém je znázorněn příkladný histogram signálu optického detektoru 5 přímého rozptylu, ve kterém je poloha s nejužším pikem označená Yl). Po nalezení této polohy se do ní kyveta 2 působením příslušného krokového motoru 10 přesune. Pro nalezení nejužšího píku signálu optického detektoru/detektorů 5 přímého rozptylu excitačního záření se přitom signál z tohoto detektoru/detektorů 5 s výhodou digitalizuje, a nejužší pík se v histogramu tohoto signálu vyhledá prostřednictvím software obsahujícího funkce pro proložení dat Gaussovskou funkcí, automatické rozpoznání pozadí, apod. Vzhledem k tomu, že takový software a jeho funkce jsou odborníkovi v oboru dobře známé, nebudou tu blíže popisovány.
Poté následuje nalezení optimální polohy kyvety 2 na druhé z os — tj. na ose x (dle obr. 2), která je kolmá na podélnou osu 20 kyvety 2 a současně rovnoběžná s paprskem excitačního záření. Přitom se do řídicí jednotky 8 cytometru £ přivádí signál z optického detektoru/detektorů 6 bočního
- 3 CZ 306640 B6 rozptylu excitačního záření, který se využívá jako zpětná vazba pro nalezení optimální polohy kyvety 2 na této ose. Takovou optimální polohou je přitom poloha s největší intenzitou signálu, a tedy s nejvyšší hodnotou pozice píku v histogramu signálu tohoto optického detektoru 6 (viz obr. 4, na kterém je znázorněn příkladný histogram signálu optického detektoru 6 bočního rozptylu, ve kterém je poloha s nejvyšší hodnotou pozice píku označená XI). Po nalezení této polohy se do ní kyveta 2 působením příslušného krokového motoru 11 přesune. Pro nalezení největší intenzity signálu optického detektoru 6 bočního rozptylu excitačního záření se přitom signál z tohoto detektoru/detektorů 5 s výhodou digitalizuje, a nejvyšší intenzita signálu se v histogramu tohoto signálu vyhledá prostřednictvím software obsahujícího funkce pro proložení dat Gaussovskou funkcí, automatické rozpoznání pozadí, apod. Vzhledem k tomu, že takový software a jeho funkce jsou odborníkovi v oboru dobře známé, nebudou tu blíže popisovány.
Vzhledem k charakteru signálu optického detektoru/detektorů 5 přímého rozptylu a optického detektoru/detektorů 6 bočního rozptylu se při výše popsaných krocích kyveta 2 může pohybovat v hrubých krocích o velikosti desítek až stovek mikrometrů, s výhodou např. 50 až 100 mikrometrů.
Po tomto hrubém nalezení optimální polohy kyvety 2 následuje doladění polohy kyvety 2 v obou osách x, y, ke kterému se jako zpětná vazba využije signál z alespoň jednoho optického detektoru 71 a/nebo 72 a/nebo 73 fotoluminiscence. V tomto kroku se kyveta 2 postupně pohybuje v obou horizontálních osách x, y v okolí polohy nalezené v předcházejících krocích, přičemž se hledá její poloha s nejvyšší intenzitou signálu, a tedy s co nejvyšší hodnotou pozice píku v histogramu signálu optického detektoru 71 a/nebo 72 a/nebo 73 fotoluminiscence (viz obr. 5, na kterém je znázorněn příkladný histogram signálu optického detektoru 71, 72, 73 fotoluminiscence, ve kterém je poloha s nejvyšší hodnotou pozice píku označená P). Vzhledem k tomu, že signál z optického detektoru/detektorů 6 fotoluminiscence je mnohem citlivější než signály z optického detektoru/detektorů 5 přímého rozptylu a z optického detektoru/detektorů 6 bočního rozptylu, pohybuje se kyveta 2 v této fázi prostřednictvím krokových motorů 10, 11 s krokem o velikosti jednotek až desítek mikrometrů, s výhodou např. 10 až 50 mikrometrů. Pro nalezení největší intenzity signálu optického detektoru 71 a/nebo 72 a/nebo 73 fotoluminiscence se přitom signál z tohoto optického detektoru/detektorů 71 a/nebo 72 a/nebo 73 digitalizuje, a nejvyšší intenzita signálu se v histogramu tohoto signálu vyhledá prostřednictvím software obsahujícího funkce pro proložení dat Gaussovskou funkcí, automatické rozpoznání pozadí, apod. Vzhledem ktomu, že takový software a jeho funkce jsou odborníkovi v oboru dobře známé, nebudou tu blíže popisovány.
V případě, že se v tomto kroku vyhodnocuje signál z více než jednoho optického detektoru 71, 72, 73 fotoluminiscence, vyhodnotí se optimální poloha kyvety 2 jako kompromisní optimum všech nebo alespoň některých signálů, nebo se jako výchozí zvolí pouze jeden ze signálů.
Tímto způsobem nalezená poloha kyvety 2 je optimální polohou kyvety 2 pro dané měření, a krokové motory 10, Ují v této pozici udržují po dobu měření daných částic 30.
Během hledání optimální polohy kyvety 2 před zahájením průtokového cytometrického měření daných částic, případně v jejím průběhu, přitom kyvetou 2 prochází kalibrační částice známé velikosti a struktury, např. normalizované latexové mikrokuličky, apod., případně částice 30 z některého z předcházejících měření.
Pokud by z nějakého důvodu nedošlo v některém z kroků k nalezení optimální polohy kyvety 2 v některé z os x, y, je možné kterýkoliv krok, nebo některou jeho část alespoň jednou zopakovat.
V jiné variantě způsobu provádění průtokového cytometrického měření podle vynálezu se vynechají první dva výše popsané kroky hledání optimální polohy kyvety 2, a kyveta 2 se působením krokových motorů 10, 11 přesune do polohy, ve které probíhalo předcházející nebo některé z předcházejících průtokových cytometrických měření, přičemž tato poloha/polohy může být ulo
-4CZ 306640 B6 žená v paměti řídicí jednotky 8 cytometry L Poté proběhne již jen doladění polohy kyvety 2 s využitím signálu z optického detektoru 71 a/nebo 72 a/nebo 73_fotoluminiscence.
V případě, že není daný cytometr 1 osazen optickým detektorem 5 přímého rozptylu a/nebo optickým detektorem 6 bočního rozptylu excitačního záření, je možné provést hrubé nastavení polohy kyvety 2 v příslušné ose prostřednictvím pomocného objektivu, který je standardní součástí cytometru J, nebo kterým lze cytometr J na přechodnou dobu osadit, a (např. manuálního) posunu kyvety 2 a poté přejít ktěm krokům nalezení optimální polohy kyvety 2, které senzorické vybavení daného cytometru 1 umožňuje, zejména k jemnému doladění polohy kyvety 2 s využitím signálu z optického detektoru 71 a/nebo 72 a/nebo 73 fotoluminiscence. Při tomto postupu obsluha cytometru 1 pohybuje např. manuálně držákem 9 kyvety 2 až do chvíle, kdy je v pomocném objektivu pozorovatelný proud vzorku. V tomto okamžiku se také objeví signál (pík mimo šumové pozadí) na nějakém z optických detektorů, kterými je daný cytometr osazen. Po přesunutí kyvety 2 do této polohy obsluha prostřednictvím řídicí jednotky 8 cytometru J spustí kroky výše popsaného způsobu nalezení optimální polohy kyvety 2, které senzorické vybavení daného cytometru 1 umožňuje.
I když se kyveta 2 během provádění způsobu průtokového cytometrického měření podle vynálezu pohybuje s krokem v řádu maximálně stovek mikrometrů, je výhodné, pokud její uložení a její pohony 10, 11 umožňují její pohyb i ve větším rozsahu, např. pro její přemístění do polohy, ve které je snaží manipulace s ní, např. při její výměně, apod.
Průmyslová využitelnost
Způsob provádění průtokového cytometrického měření podle vynálezu je využitelný pro standardní cytometrická měření, při kterých se měří různé vlastnosti velkého množství pevných částic malých rozměrů, nejčastěji biologického původu - např. různých typů buněk, virů, chromozomů, apod., ale také různých anorganických materiálů - např. částic prachu, apod. Jeho výhodou je, že oproti dosud známým způsobům umožňuje před měřením daných částic, např. po manipulaci s kyvetou cytometru, nebo během měření těchto částic, např. po změně tlakových poměrů v kyvetě cytometru, na základě signálů z optických detektorů cytometru automaticky nalézt optimální polohu této kyvety, ve které je její fluidní kanál s jednotlivými měřenými částicemi vystaven maximální možné intenzitě excitačního záření ze zdroje excitačního záření a zároveň je optickými detektory cytometru detekován nejlepší poměr užitečného signálu vzhledem k šumovému pozadí.
Claims (3)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob provádění průtokového cytometrického měření, při kterém se suspenze měřených částic (30) strhává nosnou tekutinou z kapiláry (2) do vnitřního prostoru kyvety (3), kterým se vede do měřicího bodu průtokového cytometru (1), ve kterém se měřené částice (30) osvětlují excitačním zářením z alespoň jednoho zdroje (4) excitačního záření, přičemž se alespoň jedním optickým detektorem fotoluminiscence (71,72, 73) snímá fotoluminiscence těchto měřených částic (30), vyznačující se tím, že před průtokovým cytometrickým měřením měřených částic (30) a/nebo v jeho průběhu se do kapiláry (3) přivede suspenze referenčních částic známé velikosti a charakteru, kyveta (2) se uvede do krokového lineárního pohybu s krokem v řádu desítek až stovek mikrometrů v ose (y) kolmé na paprsek excitačního záření, přičemž se alespoň jedním optickým detektorem (5) přímého rozptylu snímá přímý rozptyl excitačního záření způsobený referenčními částicemi v měřicím bodu průtokového cytometru (1), a z histogramu digita-- 5 CZ 306640 B6 lizovaného signálu tohoto optického detektoru (5) se stanoví poloha kyvety (2) s nejužším pikem tohoto signálu, do které se kyveta (2) v této ose (y) přesune, načež se kyveta (2) uvede do krokového lineárního pohybu s krokem v řádu desítek až stovek mikrometrů v ose (x) rovnoběžné s paprskem excitačního záření, přičemž se alespoň jedním optickým detektorem (6) bočního 5 rozptylu snímá boční rozptyl excitačního záření způsobený referenčními částicemi v měřicím bodě průtokového cytometru (1), a z histogramu digitalizovaného signálu tohoto optického detektoru (6) se stanoví poloha kyvety (2) s nejvyšší intenzitou tohoto signálu, do které se kyveta (2) v této ose (x) přesune, a poté se kyveta (2) uvede do lineárního krokového pohybu s krokem v řádu jednotek až desítek mikrometrů postupně ve dvou vzájemně kolmých osách (x, y), které 10 jsou současně kolmé k podélné ose (20) kyvety (2) a jedna z nich je kolmá na paprsek excitačního záření, přičemž se alespoň jedním optickým detektorem (71, 72, 73) fotoluminiscence snímá fotoluminiscence referenčních částic, načež se z histogramu digitalizovaného signálu tohoto optického detektoru/detektorů (71, 72, 73) fotoluminiscence stanoví poloha kyvety (2) s nejvyšší intenzitou tohoto signálu, do které se kyveta (2) přesune, a v této poloze se zahájí nebo znovu15 zahájí průtokové cytometrické měření měřených částic (30).
- 2. Způsob provádění průtokového cytometrického měření podle nároku 1, vyznačující se tím, že kyveta (2) se před nalezením a přesunutím do polohy s nejvyšší intenzitou signálu optického detektoru (71, 72, 73) fotoluminiscence přesune do polohy, ve které probíhalo některé 20 z předcházejících cytometrických měření.
- 3. Způsob provádění průtokového cytometrického měření podle nároku 1, vyznačující se tím, že kyveta (2) se před nalezením a přesunutím do polohy s nejvyšší intenzitou signálu optického detektoru (71, 72, 73) fotoluminiscence přesune do polohy, ve které je v pomocném 25 objektivu průtokového cytometru (1) viditelný proud vzorku.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2015-590A CZ306640B6 (cs) | 2015-08-31 | 2015-08-31 | Způsob provádění průtokového cytometrického měření |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2015-590A CZ306640B6 (cs) | 2015-08-31 | 2015-08-31 | Způsob provádění průtokového cytometrického měření |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2015590A3 CZ2015590A3 (cs) | 2017-04-12 |
| CZ306640B6 true CZ306640B6 (cs) | 2017-04-12 |
Family
ID=58699383
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2015-590A CZ306640B6 (cs) | 2015-08-31 | 2015-08-31 | Způsob provádění průtokového cytometrického měření |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ306640B6 (cs) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3523737A (en) * | 1964-12-16 | 1970-08-11 | Gilford Instr Labor Inc | Cuvette positioning device for optical density analytical apparatus |
| JP2004257756A (ja) * | 2003-02-24 | 2004-09-16 | Nippon Koden Corp | フローセル位置決め方法およびフローセル位置調整可能なフローサイトメータ |
| US20100273208A1 (en) * | 2009-04-28 | 2010-10-28 | Kei Takenaka | Microorganism testing apparatus |
| US20150057787A1 (en) * | 2012-03-30 | 2015-02-26 | Sony Corporation | Microchip-type optical measuring apparatus and optical position adjusting method thereof |
-
2015
- 2015-08-31 CZ CZ2015-590A patent/CZ306640B6/cs not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3523737A (en) * | 1964-12-16 | 1970-08-11 | Gilford Instr Labor Inc | Cuvette positioning device for optical density analytical apparatus |
| JP2004257756A (ja) * | 2003-02-24 | 2004-09-16 | Nippon Koden Corp | フローセル位置決め方法およびフローセル位置調整可能なフローサイトメータ |
| US20100273208A1 (en) * | 2009-04-28 | 2010-10-28 | Kei Takenaka | Microorganism testing apparatus |
| US20150057787A1 (en) * | 2012-03-30 | 2015-02-26 | Sony Corporation | Microchip-type optical measuring apparatus and optical position adjusting method thereof |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| KUBA JIRÍ: Rízení pohonu mikrotitracní desticky a odberové jehly v prutokovém cytometru. Bakalárská práce, TU Liberec, 2012 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2015590A3 (cs) | 2017-04-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10234392B2 (en) | Optical engine for flow cytometer, flow cytometer system and methods of use | |
| JP5381741B2 (ja) | 光学的測定装置及び光学的測定方法 | |
| US9372143B2 (en) | Scanning image flow cytometer | |
| JP5481035B2 (ja) | 液体処理装置用の光学センサシステムおよび検査方法 | |
| US9243992B2 (en) | Method and device for flow cytometry without sheath fluid | |
| US20060177348A1 (en) | Cell sorter chip having gel electrodes | |
| JP3720799B2 (ja) | 花粉センサ | |
| KR20200047735A (ko) | 스펙트럼 산란 유세포 분석을 위한 광학적 구성 방법 | |
| US11002654B2 (en) | Method and device for detection and/or morphologic analysis of individual fluid-borne particles | |
| KR20120013297A (ko) | 매질 내의 고체 입자를 분석하는 방법 및 시스템 | |
| WO2017060105A1 (en) | Particle sensor for particle detection | |
| US5456102A (en) | Method and apparatus for particle counting and counter calibration | |
| EP2843410B1 (en) | Sample analyzing method and sample analyzer | |
| CN110865054A (zh) | 一种颗粒分选设备及颗粒分选方法 | |
| US7217937B2 (en) | Automatic identification of suspended particles | |
| WO2017060164A1 (en) | Optical sensor for particle detection | |
| CA2784073A1 (en) | Arrangement for measuring the optical properties of particles of a dispersion | |
| CZ306640B6 (cs) | Způsob provádění průtokového cytometrického měření | |
| KR101897232B1 (ko) | 용액내 미립자 검출용 화상검출장치 | |
| CN114907960A (zh) | 一种基于液滴微流控的无标记活细胞筛选系统和方法 | |
| RU2797528C1 (ru) | Учет ошибок при оптических измерениях | |
| KR101895760B1 (ko) | 혈구 분석 시스템 및 그의 제어방법 | |
| WO2019207988A1 (ja) | 微小粒子分取装置及び微小粒子分取方法 | |
| CN117546006A (zh) | 浓度测量装置 | |
| US20170370772A1 (en) | Led spectrofluorometer for analysis of an object |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20230831 |