CZ304883B6 - Salophenové komplexy železa s heterocyklickými N-donorovými ligandy, způsob jejich přípravy a jejich použití jako léčiv v protinádorové terapii - Google Patents

Abstract

Komplexní sloučeniny železa v oxidačních stupních +II a +III se salophenem {2,2´-((1E,1´E)-(1,2-fenylenbis(azanylyliden))bis(methanylyliden))difenolát(2-)} a doplňkovými N-donorovými heterocyklickými ligandy a jejich krystalosolváty, vyjádřené strukturními vzorci I a II, kde X.sub.1.n. až X.sub.4.n. představuje libovolnou kombinaci n methanylylidenových skupin a (4-n) azanylylidenových skupin, kde n může nabývat hodnot 1 až 2, R.sub.1.n. až R.sub.8.n. představuje atom vodíku, alkyl, substituovaný alkyl, alkenyl, aryl, substituovaný aryl, hydroxy a amino skupinu. Způsoby přípravy těchto sloučenin, farmakologický prostředek pro použití v lékařství a farmakologický prostředek pro použití jako léčiva pro léčbu nádorových onemocnění.

Description

s Oblast techniky

Předložený vynález se týká komplexů železa_: v oxidačních stupních +Π nebo +111 obecného vzorce (Fe(silop1tfcnXt.)], kde salophen {2,2? ~{ 1ml ,2-teny íenbts(&z&nylyl iden))bis* nneíhanylyiídei',}} dítenoláky -t: vystupuje jako „nosný’¹ chelštový ligand a L jsou doplňkové A' donorově heterocyklické ligandy, způsobu přípravy uvedených komplexů a jejich použiti v lékařské ptau jako léčiv nádorových onemocnění nebo součásti farmaceutických kompozic pro pmveuct nebo léčbu nádorových onemocněni, které hto komplexy obsahují jako účinnou látku.

i s Dosavadní stav techniky

Nádorová onemocněni jsou dlouhodobé ve zdravotnických statistikách. World Health Organízatlen (WHO) na druhem, místě v morbiditě i mortalitě zejména v rozvinutějších krajinách. Proto je silným společenským imperativem hledání nových, účinnějších a bezpečnějších sloučenin pro použití v terapeutické praxi těchto nemocí.

Je obecně přijímaným poznatkem, že regulace hladin železa v cílových tkáních hraje významnou roli při metabolické regulací růstu nádorových -tkání (Zitou, T, et al. ZWtem F?w$-. 41, 2012,. 6371-6389; Vlsca, P. et < Jntímtomfe, JgcMr Omoífer, 57, 2013, 2432-2433), Dále bylo zjištěno, že cheiatačni činidla váza; tel nechelaiovaué železo do stabilních komplexních sloučenin působí antiangiogenné f Fermaty Á. and Kurz. Γ. AnHux/d. (žerfox. Nýmí/. 18, 2013, 888-898), přičemž některé nizkomoíekulově látky na bázi komplexů železa v oxidačních stupních Hi nebo -ΗΠ s ligandy mi voženými od Schíffových bází působí jiným mechanizmem, založeným na interakci sl>NA a dalšími významnými biomolekulami atak působí jako vysoce účinné protínádoro3fl ve látky tn víme (Hcrchel, R. et al Da/fon ímns. 44, 2009, 9g70-9880).

Ntzkomoíekníové komplexy železa v oxidačních stupních ťíI nebo -NU s vhodnými ligandy proto tvoří víabílní alternativu kjiž. používaným komplexním sloučeninám platiny, k jejichž, stále ještě celosvětově nej hojně; i používaným zástupcům patři např. vri-digmmdíchíorido-píatnaiý komplex (cispkiiítw) obecného vzorce (víz. Schéma A), postrádají -ale nedostatky v podobě rezistence na působeni derivátů <;wp,Wmy s některé nežádoucí účinky spojeně s terapeutickým používáním derivátů cisp&ittóy, např. nevolnost nefřotoxieita, ofotoxictta a podobné.

V uplynulých letech bylo zjištěno, že aqsa-, chlorido- a acetáto-komplcxy s nosnými ehelátový40 mi ligandy typu Schlffevých bázi, zejména pak s&lophenu (viz Schéma B)

a jeho methoxy··;, hydroxy-, Cl-€4~alkýl~_$ C 1-C4-alkoxy· - a trihalomethyl-denvátů š centrálnimi atomy železa v -oxidačních stupních+11 nebo +-IU vykazuji \ysokou protinádorovou aktivitu m yiíft·a m vvo í\YO 2(W»90 081 A i; 1Ρ 1 949 899 Ál; ÚS 2009/320061 AI; Hihe. A. et at. J. Bím'. .herny. Chem. 14» 2009, 711-725; Hille. A. et al. .4«./?. řfem Chem. Λ?/, j I, 2011,

217-223; Lange. '1, S. «i al, Plos ONE 3, 2008, 62303; Lange, T.5. et al, Drttg Des. Der. Ther. .3,

I 2oí, krčte jc u/ 56krát vyšíi jako aktivita vM/ubfno za temnarclných ekpentncníáimeší podmínek (Hilte, A. et ai. 7. £6.7 toorg. Chem. 14, 2009, 7! l-⁷25} a byly popsány mechanizmy, kterými tyto látky působí ng různé linie lidských nádorových buněk i mechanizmy, kterými tyto látky překonávají rezistenci proti léčivům odvozeným od cůpfatwy (Kim, Κ. K, et al P/ov tAC so 6.. 2011, ei9049; Azani, M R, et al. Ra«. J. Phv>:. GWw 4 04. 2010, 2284-2289; Ansnri. K.l, et al. 7. Biomm. 5e?vem 16, 2.011.. 26-35; Lee, S.V. et al. M. Rcr. 35, 2011, 387-393).

Z patentových dokumentů (WO 2008/090 08I A.1; EP 1949 899 Al; US 2009/326061 Al) a vědeckých pracs {Ross, Γ..Μ, et al. ZAdnw Tm»,* 3010 149-159; Lccuvtenkamp. O,R. C al.

• !S ΡοΙϊΕ><bo?< 6, 1987, 295 -302; Nishida, Y. et ai. J. Chem. Soc., Dahmi Trans, 1987, 115 7 -1161; Cboudhury, H.K. and Medhi, O.K.. fodiat? J. Chem. -Seci A i.mrrg. Phys, Thear Anet:

Ch<m 32A. 1993. 351 -354. Hernandez-Moima. R. et al, mory. Chem. 37, 1998, 5102-5198; Jana, $ eta! Ι'μΊΜκ·? 18, 2G2, 189 ^8, Axhols, P 3 et -d te-ug Chem 2<\ :<>S8. 2~ U 2090, Nabei. A, et al. Á/Oí-g. Ch/m. .4c/a 361, 2008, 3489 -3493; ilerchel R. et al. DaPon Trems,

40, 2011,11896-11903), popisujících přípravu a bipíogu'kou aktivitu komplexů s nosným eheiátovým ligandem salophenept a jeho metboxy--, hydroxy -., €.3-C4-alkyl·-, Cl-C4~alkoxy- a tribalometbyl-derlváty s eentzáknnn atomy železa v oxnkK 'teb stupních +1.1 nebo +IÍÍ a doplňkovými (λ-, /?-. .V - nebo ter/ogeno-ligandy nebo jejích kombinaci je patrné, že i malá zrněná jejich struktury vede k dramatické zrněné učínnocti. což potvrzuje j práce Hille, Á, and Hust, R. Eur. J.

2,v AW Ckem, 45, 2010, 5486- 5492 popisující vliv metboxy-substimee na torném ligandu sálophenu na intenzitu a selektivitu protinádorového účinku látek. Z výše uvedeného je tedy zřejmé, proč jsou v současnosti hledány nejen vhodné možností substituce základního *ak»phcnoveho skeletu, ale také hledány vhodné doplňkové N-donorově ligandy do Lmrdínacníbe sféry atomu železa, vedoucí ke vzniku komplexních sloučenin železa, u kterých by byla výrazné vyšsi proti.«} nádorová aktivita, než.je terno, u v současnosti využívaných léčiv oa hází komplexů platiny

Z literární rešerše je potom zřejmé, že mezi dosud známými salophenosýmí komplexními sloučeninami železa v oxidačních stupních +H nebo +ΠΙ zcela absentuji komplexy se ět^crcově-pynimldálni geometrií, obsahující ve své koordinační sféře kromě salophenového derivátu také jeden doplňkový N-donorový heterocyklický ligand, Příprava, charakterizace a zjištění výrazných protlnádorových účinku na úrovni in vuro, je potom předmětem předkládaného vynálezu.

Poýýatejx nálezu

4<í

Podstatou vynálezu jsou komplexní sloučeniny železa v Oxidačních stupních +ÍI a +-ΠΙ sjedním salophcuovy m hgándem í 7,2 -tíI'/'>-(iý R-ny lenbí^azany (vínkuAbís(methany lylidensnb~ fenolát(2~)' a jedním doplňkovým íY-donor«nym heíeroey kličky m ligandem a jejich krystalesolváty, vyjádřené strukturními vzorci i a 1.1,

- 2 CZ. 304883 86

kde

Xj azX₄ představuje 'kombinaci » rnedt&nyíylídsnosýbh skupin a (d---s) azanýíylideuoyýeh skupin, kde73 muže nabývat hodnot i až 2,

Ri až R8 představuje atom vodíku, alkyl substituovaný alkyl, alkenyl, uryl a substituovaný and, •hydroxy a amine skupinu, kde íennm;

oňW jako takový nebo jako součást jiné skupiny představme rozvětvený nebo ««rozvětvený uhlovodíkový řetězce z až 4, především pak z I až 2, atomu uhlíku,

-~ťdfe«d jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec z až 4 atomů uhlíku obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu mezi :0 atomy uhlíku, zejména pak viny 1 a aílyí, ~(&yi je fenyl, ~ sžíůsíóúiowřý a/fyí « and jako takové nebe jako součástí jiných skupin představují alkyl a aryl substituovaný ve kterékoli pozici substituenty z množiny alkyl, alkenyl a aryk nebo andov&oě s stylem.

e

Další podstatou vynálezu jsou krystafosolváty komplexů obecného složení [Fe(salo~ phenXL)l-x,v?A; kde L reprezentuje monodestálnl AMonorově pětičlenné heteroeykly

ν.·ζ> *

/ ¹ ζ v nichž Xj Ě1Ž X4 a R_s až Rg jsou definovány výše, a-kde-x je I až 6 a fib/v představuje molekulu konkrétního rozpouštědla a/nebo jednu z reakčních komponent vybranou ze stopiny voda, pří5 mámí alkohol, sekundární alkohol, aceton, iV.Xtoímelhvlbsretamid, dítnethýlsulfoxld, chloroform, diehiomethan, acetonitril, nitfobenzetí, nebo diethy hther, a to buď samostatně, nebo v kombinací «vedených solvátových molekul,.

Také je podstatou vynálezu způsob přípravy sloučenin sírukuiraích vzorců íl) α 1 líc a to reakcí ta p~oxo-bís<2,2‘~ď ί£,1 T>--<1,2- iímylenbisfazanylyUdeiýdbtstnkUhany ly hdenpdsíenolatoželezštéhol, te-mplcvc nsakfph?nd'C-~íM'etoak)pheutj buď pumo shetcroeykhvkvmi Φιμιιμιώι obraňujícími dusík. nebo nepřm-m ? vletu to skos e látky ezido~í2,2''~fi' IfJ {1,2 íěnylenbi,; (azanylyhdím)')bís(methřus¥lyhden)dihu;fuáfóželezitého) komplexu [řXs»lophc«XN.?)J a vhodného adíčního činidla, ktvté vytvoří vhodný heteroeyklsoky ligand m shu,

ÍS

Ve výhodném provedeni se sloučenina obecného vzorce I připraví tak, že k jednomu mokimimu ekvivalentu komplexu [(sklophvn)Fe-0-Fe{salophen)| rozpuštěného vmimmáímm množství n~butanolu se přidá čtvřieetmasopny nadbytek poslušného derte atu triazoln nebo tetmzolu, pote »e vytvořená směs přivede k varu a zreakční soustavy se oddestdujt 2/5 přnodmho objem» roz20 potsštědla, načež se ochlazením směsi na laboratorní teplotu vyloučí v n-butanoln téměř nerozptsstný produkt, který se oddělí filtrací za sníženého tlaku.

Ve výhodném provedení se sloučenina obecného vzorce II sdoplňkovým ligundem 5 methy Itetrazol-i -tdemí i ) připraví tak, že jeden molámí ekvivalent komplexts [i'e{salophc.«XN-11 se rozpustí v -40 ml acetonitrilu a refluxuje se 30 hodin, poté se ochlazením reakční směsi sut laňoratorm teplotu vyloučí produkt (5-rnethylíetrazol“l-ido}-2,2'-ít loj THfi2· ibnyleubisfazaÍrylyhden)}bis(methany1yiidcn))dítenoiáto(2---;železhé komplex, který se oddělí filtrací za sníženého tlaku,

Další podstatou vynálezu je fármakologický prostředek obsahující terapeuticky účinné .množství komplexu železa vzorců I nebo II nebo terapeuticky účinné množství komplexů železa vzorců 1 nebo 11 § jednou ci více učhutýruí látkami, přijatelnými nosiči a pomocnými. látkami.

Nedílnou součástí podstaty vynálezu je také použití komplexů v lékařské praxí jako léčiv nádorových onemocnění nebo součástí farmaceutických kompozic, s jedním či více přijatelnými nosiči 3 pomocný mi látkami pro prevenci nebo léčbu nádorových onemocnění, které tylo komplexy -obsahují jako účinnou, látku.

'Qhksalgí výkresů

Konkrétní příklady provedení vynálezu jsou doloženy připojenými výkresy, kde

- obr, 1 je molekulová struktura komplexu {Fo^li(saiopheu)(imz}j vyřešená užitím, mottoktystafové 4ž rentgestové strukturní analýzy·' .4.

- obr. 2 je znázornění spektra knmpicxu [Fě^i!(safophe«}rimz)j měřeného v středhí i.nímcervené oblastí (4000 - 400 cm⁵) v KBr tabletě, identifikující všechny specifické vibrace vazeb a skupin odpovídajíc! utčenémn složeni komplexu [Fe^b(salophen)(itnz)j s -- obr 3 je znázornění měření teplotní závislosti efektivního magnetického momentu komplexu n'e^!X:míophen)íimž}] na teplotě, potvrzující přítomnost centráhiko iontu železa s oxidačmm smpui -li — obr, 4 je znázornění Mossháuérova spektra komplexu. [Ffe^saiophenjflníz)] při teplotě 300 R, io. přičemž hodnoty tzomermho posunu δ ~ 0,851(3) mm/s a kvadrupoípvého štěpeni Eq ~ 2,085(5) mm/s potvrzují přítomnost centrálního lonty železa v oxidačním stupni. HI ve spinověm stavu 0-2 ···· obr. $ je znázornění Mdssbauetosa spektra komplexu [Fe^ii!(salophen)(triz)] při teplotě 300 K, is přičemž hodnoty izomerního posunu ó Ο3°05(Γ7) mm/s a kvadrupůlového Štěpení Eq ™ L237S(34)raWs· potvrzují přítomnost cenrr.dmho iontu železa v oxidačním stupni tlil ve spinověm stavu <9-5/2,

2« -í^k&«^íeě^ntyy^l^i

V následující části je vynález doložen, nikoli však limitován, konkrétními příklady jeho uskutečnění. Rozsah vynálezu je pak jednoznačně určen patentovými nároky.

25- V níže uvedených příkladech byly připravené látky charakterizovány nástedujfctnn tyzikálně-ehemÍGkými: metodami:

- elementární analýza s procentovým zastoupením prvků C, H a N (Thermo Scientific Flash 2000)

- infračervená spektroskopie v oblastí 400 až 4OO0 onť’^! byla prcsvedena technikou Or tablet (FT-IR spektrometr Ferkín Ebner Spěchům One B)

- monofoyslaiová rentgenová stmkturní analýza (Xc&liburŽ, Oxford Dlífractíon Ltd.)

- teplota! závislost magaetizace (5--300 K) a efektivní magnetický moment pri teplotě 300 K (SQUID magnetometr model XL-7 od firmy Quantum Design)

- Mčsshauerova spektra byla měřena. na přístroji s ''Co(Rh) zdrojem při teplot© 300 K, Hodnoty te ísomermho posunu byly kalibrovány vůči hodnotám kovového a-Fe.

Vynález syužňá p-<i\o-hís(2,2' riiófr 7:>-í i.Ž-fenyienbisíazanyíy liden))bss(mcthanyíybdeuj)ddeuoiteožcteziís i komplex [(míophen)Ec <3 í-etsak'phen)h nebo azído (2,? \Q/\1 Γ) d.3 fenyienbis(íizanyl---y íiden'! ibisi methany iylidsnlidifcnoíáíožsteziřs·! komplex, prečsalophenMN·.·)].

-ts sako sychozt bitky pro přípravu sloučenin uvedených v patentových nárocích. Uvedené výchozí sloučeniny nejsou komerčně dostupné, nicméně lze je připrat it dosud publikovanými postupy (Mi-cheh, F.C.H. and Parker D.A. <7. Chem, „Sne.. Do/fón Tfrw. 1.976, 182L 1.824’, Jana, S. etaí. Pofytefrřw 48, 201.2, 139-198).

te « ·

CZ 304883 86

Přiklad S\ r.éza [(imidampKA^;3>-{2,2''--((1£ 1 7i>-(i ,2-festyíen.bis(azanylyiíden))bis(metha>· nySybděntáhlenaroí2 Ůžclcznatchol komplexu, rtale pn 1 etsulophenkhnzfi

Jeden molární ckvtvakm k.-mpiexn [salophentrc ‘2 remalophenfi fikl y: 0.2Ommi'l) by! rozpuštěn v >0 ml íj-butoyohi a byl kněmu přidán ětyřícetinásobnv molární nadbytek iroídazolu (0,54 g; 8 mmol). Vytvořená směs se přivedla kvaru (118 až 120 °C) a z reakční soustavy se odtiestilovalo 20 tni původního objemu, rozpouštědla. Ochlazením směsi «a 40 °C se vyloučily krystaly v ro-butaítoiu téměř nerozpustného produktu, který se oddělil od nadbytku imidazolu ío rozpuštěného v n-huíanoin filtrací za sníženého tlaku. Výtěžek: 0,07 g, tj. 66 % počítáno na Fe),

Získané krystaly byly vhodné pro řnontikrysíalovoa rentgenovou strokturai analýzu, Molekulová strukturo komplexu [Fe(saÍophenXimz)] je znázorněna v obrázku 1.

t5 Procetttové zastoupeni prvků G, Η, N ve .forotě: vypočtená, hodnota (y závorce nalezená hodnota.) pto CzíHtofoNA: ¢, 633« <*3.13); K 3>02 (4,1); N, 12,81 (12.84)%. GV-Vis (vNujol/cm'^!): 761, 560, 435. IR ívKBf/em ^!); 3437, 3134, 3050, 2927, 2856, 1606, !$'·><?, {536, i464, 1446, 1381, 1315, i 183, 114% 1068. «22, 757.65 8,538. Záznam FT IR spektra je předložen na obrázku 2, Magnetické vlastnosti: efektivní magnetický moment při laboratorní teplotě je μ,.§78.Μ, »

5/1, což společně s výsledky měření teplotní závislosti na teplotě (záznam předložen na obrázku 3) a Mossbauerova spektra (záznam předložen na obrázku 4) potvrzují přítomnost centrálního iontu žefeza v oxidačním stupni -bil a spinovém stavu. 5-2.

Příklad 2: Syntéza sesquihydrátu ([1,2. fotri;3zol--l-~idoH:2_;f2^ř---((l.£,l^7-(1,?-~foayfenbís(áM« nyíylíde»)} bísCmefosnylylídenptisfenolaít? ijzeleřitéhoj komplexu, dále lett [Feísalophen)(triz)i

Jeden molámí ekvivalent komplexu !salcph«si)Fe-0~Fe(salophen)] (O,i g; 0,26 mmol) byl roz3« míchán v 30 ml n-butanolu a byl kněmu přidán čtyřicetinásobný molámí nadbytek 1,2,4tríazoln (0,55 g; 8 mmol). Vytvořená směs ss přivedla kvaru tl 18 až 120%') a z reakční soustavy se oddestiifivaio 18 mi původního objemu rozpouštědla. Ochlazením směsi na 40 ''€ se vyloučily krystaly v n-butanolu téměř nerozpustného produktu, který se oddělil od nadbytku 1,2,4mmrom rozpuštěného vn butanolu filtrací /a siuXnelro Páku \ cězel 0,08 g, tj 'O % (počítáno na Fe),

Procentové zastoupeni prvku C, 11, N ve formě: vypočtená hodnota {v závorce nalezená hodnota) pro C, 60,29 /59.25); H, 3.68 (3,75); N.. 15,98 (15.23t %. UV-Vis (vNujolfom’):

761,560, 435. IR (vKBFem ^!): 3428, 1606, 1579, 1535, 1462. 1136, 1310, 1191, 1150, 607, 751, <! ?37, Magnetuke vlastnosn. eiextisro magneticky moment ptt Ubotateroi teplou-je u,,» 8.M

5,67, což společně s výsledky měření .Mossbíiuerovs spektra ízaznarn předložen na obrázku 5) jednoznačné potvrzuje přítomnost centrálního iontu železa v oxidačním stupni -Hlt a spinovém stavu 6-5/2,

-ts

Přiklad 5 Syntézu scsqmhydmtn líbeuzojt/ll 1,2,3jtriazol- 1-ίι1ο)-(2,2'··<(Ι£,ί'ol (1,2-fenyienhistazany iy bděn }p~bí V metharn Iy I ídefo ldtfenolat(2 tjžele/ítéhoi komplexu, dále jen

I Fe( salophenXbmz) i

5ď Jeden nrnlanh ekvivalent komplexu |(sa'ophen)Fc-O Fep>aiophc«}l tíhl g; 0,2omrooh hy; rozmíchán s 30 ml n-butanolu a byl k nětmt přidán ČtyNeetinásobný molároi nadbytek henzo|íZj[ i,2,3jtríazolu Í0.95 g; 8 mmol). Vytvořená směs se přivedla kvaru 1118 až 120 C) a z reakční soustavy se oddestilovaio 18 ml původního objemu rozpouštědla. Ochlazením směsi na 40 ^eC se vy loučily krystaly v «-butanolu téměř nerozpustného produktu. který se oddělil od nad- 6 byte beszo[<^(.h23]^ía2»l.u rozpuštěného v n-butanoln fdwi .2» sníženého tlaku, Výtěžek;: 0,08 g, tj. 63 % {počítá® na Fe).

Procentové zastoupení prvků C. Η, N ve formě; vypočtená hodnota (v závorce nalezená hodnota) s pro C JBdeNte -· C. o«},60 «60,29); 11. k 11 t V68): X, i .<?*' 15.071 %. UV V?v (zNujoi emfo

650, S 70, 420, IR (vRIJrcm⁵): ..fot'¹, 1606, 1579, 1534, 1489, 1444. 1381, 1190. 1150, II26, 921, 809, 746, 610, 53~ Magnetické vlastnosti; efektivní magneticky moment při laboratorní teplotě je μ^ΖΒ,Μ. ~ 4,78, což společně s výsledky měření MOssbauerova spektra (záznam předložen na obrázku 6) nmmaěiye na přítomnost centrálního iontu železa v oxidačním stupal +HL iíí

Příklad 4; Syntézu. [(5~amin«>4:etrazol--l --ido)-(2_s2’~((7£jI^ř£H i,2--teny leuhist azanylylideu))bls(ntethmtyi.yliden))dlienolá.to(2'--)]žefezltéhoj komplexu, dále jen IFe(salophen)íatz)) ss Jeden molámí ekvivalent komplexu [(salophcnjFe <) f eísalopben)] (0,1 g; 0,26 mmol) byl rozmíchán v30 ml n-butanoiu a byl kněmu přidán ětyřmetinásoboý molátui nadbytek 5amiootetrazolu <0,68 g; 8 mmol). Vytvořená směs se přivedla k vare (118 až 120 ^aC) a z reakcni soustavy se oddestilovalo 18 ml původního objemu rozpouštědlu. Ochlazením směsi na 40 °C se vyloučily krystaly v n butanolu téměř nerozpustného produktu, která se oddělil od nadbytku 5— amhiotetrazolu rozpuštěném v n-butanolu filtrací za sníženého tlaku. Výtěžek: 0,08 g, tj, 68 % (počítáno na Fe),

Procentové zastoupeni prvků C, Η. N ve formě' vypočtejtá hodnota (v závorce nalezená .hodnotit) p<o telh-ďeX Oy C. 55,53 (54.81): H. 3,55 i3.19): N, 21.58 (215*fi _Ď i 'V-Vís ívbmy-.fom ')·

800, 640, 460. IR tvRBocní '); 1627, 1599, 1542. 1467. 1446. I39|. 1304, i0S5, 760. 616, 419,

Magnetické vlastností; efektivní magnetický moment při laboratorní teplotě je μ,,^Β,Μ., ~ 5,86, což jednoznačně dokazuje přítomnost centrálního iontu železa v oxidačním stupni -bili a spinovem stavu ,9==5/2.

Přiklad 5: Syn téza ((5—feny 1 - tetrazol-1 - ido)-(2.2'~((1 £. 1 '.£>-( 1.2- řcnylenbís(azanyíy 1 íden))bis{methanyfy iidcn))diťc«toláíot 2-jjžchtzitéhoj komplexu, dále jen ÍFe(salophe.n.Xphtz.)| leden molární ekvivalent komplexu ((salopheo)Fe-O-Fe(salophen)] (OJ g; 0,26 mmol) byl roz.55 míchán v 30 ml n-butunolu a byl k němu přidán ětyřlcetínásobný molární nadbytek $-fenyl.íetrazolu (1,17 g; 8 mmol). Vytvořená směs se přivedla kvaru (118 až I2O^SC) a zreakčni soustavy se oddcstilovaio 18 ml původního objemu rozpouštědla. Ochlazením směsi nu 40 ^aU se vyloučily krystaly v u-hutanolu téměř nerozpustného produktu, který se oddělil od nadbytku 5Íenyl-teírazohi rozpuštěného v u-butanolu 11 hrací za sníženého tlaku. Výtěžek: 0,09 g, tj. 67 %

4<i t počítáno na Fe).

Procentově zastoupeni prvků C, Η, N ve formě; vypočtená hodnota (v závorce nalezená hodnotu) pro C.4I.,ďeK<V C. 62 o? (62.78), ti. V2 í <65< b>. >u,3l (.16,38) %. UV-Vis (vNuioI/cm ) 679, 459. IR (rKBr/em ‘): 3964. 3916, 1695, 1579. 1539. 1463. 1437. 1583. 1313. 1192, 1146,

815, 742,698, 625. 538, Magnetické vlastnosti: efektivní magnetický moment při laboratorní teplotě je μ^/β.Μ. - 6,0, což jednoznačně dokazuje přítomnost centrálního iontu železa v oxidačním stupni 4-111 a spisovém stavu ,9-5/2.

so Příklad 6; Syntéza j(,5--metbyl--teůazol-i~ldo)~(2_s2''-{{l£,r£’}-( 1,2-fenyfe’nhís(azsnylyilden))bisí.metha.nyiybden))dífenoiáto(2-)lželezitéhol komplexu, dále jen IFe(salophen t(mtz)j

Jeden molární ekvivalent komplexu {Fe(saiophenXNj)j «0,5 g; 1,37 mmol) byl rozpuštěn v 40 ml 'acetonitrilu'.» rcfluxováu 30 hodin. Ochlazením reakční směsi na laboratorní teplotu se vyloučil *7

CZ 3H883 86 produkt (5--ínethyltetrazoi~itdo)-2,2'-(i£.l '£Hl,2-fe‘fiylenbis(azanýliytden))bts(methanyíyliden)) dlfenolátot,2--}železltý komplex, který· byl oddělen z© směsi fihrači za sníženého tlaku •a vysušen v exsikátoru nad kuspvýnt KOH, Výtěžek; 0_s4 g, t,j, 72% (počítáno aa Fe),

S Procentové zastoupeni prvku C, Η, N ve formě, vypočtená hodnota (v závorce nalezená hodnota) pro CM-foFeNAb C, 58,30 (57,90); H. 3,78 (3,81); N, 18,54 (18,20} %. IR (vKBr/cm”’)· 3436, .1606,1578, 1534,1461, 1445,1380, 13.16,1189, 1149, 808, 7SI₅ 608, 508, Magnetické vlastností; efektivní magnetický moment při laboratorní teplotě je μ^'Β M. ” 5,89, což jednoznačně dokazuje přítomnost centrálního iontu železa v oxidačním, stupni + 111 a sptnovém stavu ,$===5/2.

m

Příklad 7: M vlw cytotoxická aktivita médnatých komplexů na lidských nádorových liniích

Pro stanoveni cytotoxické aktivity připravených. komplexů byl použit MTT test. Metoda je za tots žena na schopností metabolický aktivních buněk redukovat žlutou sůl 3--(4,5--dimcthyithiazoi--2· ylV-2.5•-'dííenyltetrazoiium bromid (MTT) za vzniku modrého fonpazanovéhv barviva, Jelikož k této přeměně dochází pouze v žívýfch. brníkách, lze tímto způsobem stanovit cytotoxieitu různých chemických látek. V rámci budky jsou za redukci zodpovědné mitochondriálni. dehydrogenasv. Vznikající tbnnazanovébarvivo je nerozpustné a je následně -kvantifikováno po rozpuštění v DMSO s amoniakem za použití s|>éktrofotometrie ve viditelně oblastí, to vitro testy cytotoxické aktivity byly provedeny fta sedmi lidských nádorových buněčných Lunch' odsky osn,vyuskom tíh lidský prsní adenokarmnoín (MCE 7j lidsky epiteliabn adcuekarctnom (As-loi, cervlkálni karcinom (HeLa), lidský ovariální karcinome (A2780). lidský ovaríaku karcinom rezidentní na cisplatbu (Á2780e«j a lidský maligní ©elanotrs. (G-361). Linie byly udržovány v plastikových lahvích vDMEM. médiu ($ g/1 -glukosy, 2 mM giutamínu, 100 l.bmi penicilinu, 100 pg/ml streptomycmu, 10% fetálmho telecího séra. a hydrogenuhllčhanu sodného) pro buněčné kultury.

Suspenze buněk (cca 1,25x10' buněk v 1 ml) byly rozpipeíovány po 80 pl na 96- jamkově plastové mikrotitrační destičky. Tyto byly ptemkubovány při 37' %' v atmosféře Cf.L po dobu 24 hodin. Testované komplexy železa a eisp!afina jako terapeutický standard byly rozpuštěny νΝ,Ν'-diínetisylformamsdu s tyto sloužily jako zásobní roztoky. Pro vlastni experiment byly zásobní roztoky ředěny 1 000 x v kultivačním médiu (max. koncentrace 1,0 u.M u komplexů železa a 50 μΜ η ο/ψ/ί,νόη·,' a po odsáti kultivačního média byla směs přidána k nádorovým buňkám po ínkubaění dobu 24 bodlu, MTT analýza bylá prováděna spektroíoiontelrlcky (TECAN, Schoeller Instruments tl.C} pří vlnové délce 540 um. Koncentrace testovaných komplexi) (μΜ) toxická pro 50 15 nádorových buněk (inhibiční koncentrace 1C_ÍO) byla vypočtena z koncentračních křivek a jsou uvedeny v Tabulkách I a 2,

Tabulka I: íC<v koncentrace ňí vfoo testovaných komplexu (!C,o a směrodatná odchylka ze tři nezávislých měřeni (S.D.l. μΜ) toxická pro 50 % lidských nádorových buněk, (asteostukom, 110$; prsni adenokarctnom, MÍT-?; epiteliáhu adenokareinom, A549, eervikálni karcinom,

HeLa; ovariální karcinom, Λ2780; ovariální karcinom rezistentní na císplatlnu, /$27800» a maligní melanum, G-3ol) w srovnám s rispiatáw.

Komplex	ínhiPIčro koncentrace ÍcQsA) (μΜ)
HQS	t»CF»7	A849	HěU	A2788	A2780chs	G-361
[Pe{saiophen)(řmz)l	W)	070(8}	0,57(25}	0,87(13)	073(7}	0,35(3)	0,32(2)
IřeCsalophenXtrte):	>1	0,35(12}	>1	0,43(8}	879(7}	0,32(4)	0,43(13}
iR^tephonWrtei	1,8(4}	0,38(18)	W)	1,28(27}	0,352(5)	0,32(2}	0,42(10)
[Fe(safopheRMatz)j	>1	0,04(27}	>1	070(5)	0,31(13}	0,32(4}	0,34(11)
(Fe(anlephen)(pMz)}	2,1(1)	070(28}	1,8(2)	8,74(25)	8,33(2}	0,35(4)	0,40(13)
(FeíssIophenMfptz)]	>1	0,33(11}	0,47(6}	0,50(71}	0,058(10}	0,30(7)	073(6}
cíap/sSda	34(6}	20(4}	>50	40(3)	12(2}	30(6}	7(2)

PATENTOVÉ NAfiOKV

Claims (7)

1. PATENTOVÉ NAfiOKV

   1» Komplexní sloučeniny železa v oxidačních stopních tlí. a ΉΗ se salophenem {2,2’~ ((1 Ε, I^f EH1,2---fenyfenhis(82anyly Me« ))feís(meihanylybden))dlfenoiáí(2·'·)} a doplňkovými hetcroevklíckými AMonorovýmí likandv a ísyieh fcmtalosolvátv* vyjádřeně strukturními vzorci i aíí.

   kde

   Xi až Xí představuje kombinaci » metlumylylídenových skupin a (4~n) azanylylidenových skupin, kde » může nabýval hodnot 1 až 2,

   Ri alRg předsíavtye atom vodíku, alkyl substituovaný alkyl, alkenyl, atyl a substituovaný aryl,. hydroxy a amino skupinu, kde

   -alfy) jako takový nebo jako součást jiné skupiny představuje rozvětvený nebo nerozvětveuý uhlovodíkový řetězec z až 4, pfcdevšún pak z I. až 2, atomu uhlíku.

   CZ 304883 86

   - alkenyl jako takový nobo jako součást jiné skupiny představuje rozvětvený nebo mwzvětvený nhlcs vodíkový řetězec z až 4 atomů uhlíku obsahující alespoň jednu dvojnou vazbo mezi atomy uhlíku, zejména pak vinyl aallyl,

   - orfe s o je fenyl, ~ S7řfetřwmný «dky/ & aryl jako takové nebo jako součástí jiných skupin představuji alkyl a aryl subsutuosanv ve kteréts Holi pozici, substituenty z množiny alkyl, alkenyl a aryl, nebo anelované s ary lem
2. 2, Krystalosedváty komplexů I, a 11 podle nároku 1, kde u sloučenin obecného složeni {Fe(salo.phenXLjj-xSalv reprezentuje 1, nionodentální AMcnorové pětičlenné hetoroey kly

   20 / / v nichž Xi až X._; a R· až R* jsou definovány v nároku 1. a kde xje 1 až 6 a 5,>/v představuje molekulu konkrétního rozpouštědla a/nebo jednu z reakčních komponent vyhranou ze skupiny voda, primánu' alkohol, sekundární alkohol, aceton, AUV-dnnethylforraatnid» dimethj isulfbxid,

   25 chloroform, dichlormethan, acetonitril, mtrobenzen, nebo diethylether, a to bud' samostatně, nebo v kombinaci uvedených solvátovýeh molekul.
3. 3. Způsob přípravy sloučenin podle nároku 1, vyzusěsjíe 1 se tím, žv se sloučenina oheumlm \zoue 1 priprav uk. žc k jednomu rnclarnunu ekw;dentu komplexu daafophenjhe

   30 Q~féísak*pheo}} rozpuštěného v minimálním množství «--butanolu se přidá étyncetinásohný nadbytek příslušného derivátu imidazolů, pote se vytvořená směs přivede kveru a z reakční soustavy s;e oddesbh-jí 2/3 původního objemu rozpouštědla, načež se ochlazením směsi na 40 °C vyloučí v «·· butanolu téměř nerozpusmý produkt, který se oddělí filtraci za sníženého tlaku.

   35 4. Způsob pr-pravy sloučenin podle nároku I, v v»a aČn j i cí se í i'ra, žc se sloučenina obecného s/osce 11 připraví tak, že k jednomu molámímu ekvivalentu komplexu lísalophenfoe--O Ix-ísnlcphenjj rozpuštěného v minimálním množství n butanolu se přidá čtyřiceti ráso.hný nadbytek příslušného derivátu uíazolu nebo tetrazolů. poté se vyti clena směs přivede k varu a z reakční soustavy se oáde&íihijí 3/5 původního objemu rozpouštědla, načež sc ochlazením směsi
4. 4ti na laboratorní teplotu vyloučí v n-butanolu téměř nerozpustný produkt kter> se odděl! filtrací za sníženého tlaku.
5. 5. Způsob přípravy sloučenin podle nároku I, vyznačující se tím. že se sloučenina obecného t/orce 11 s doplňkovém llgandem 5~meíhyi-fetrazsd-l~tdemí 1-t připraví ntk, ze jeden

   45 moloroi ektozfeef komplexu h vtsalophen\N.Y| se jozpusts i -fis ^1 acctonítrdn u reduxme se 30 hodin, poté se ochlazením reakční směsi na laboratorní teplotu vyloučí produkt (o-methyl• 10CZ

   Bd:

   tetmoH -660)-2,2^1 E,1 ,2~-teny1enb:is(aranylyíjden}}hi<methanyiyÍidea))difenoIá to(2~-)železitý^: komplex, [Fe{s&tophe«Xmtz}], který $e oddělí filtrací za sníženého tkku.
6. 6, ..Farmakoiogjcký prostředek, *y»aač'« jí-éi se- tím, že obsahuje terapeuticky řtemne množství komplexů železa vzorců Ϊ nebo 11 podle nároku 1. nebo terapeuticky účinné množství komplexů železa vzorců I nebo 11 podle nároku | sjednou cí více účinnými látkami, přijatelnými nosiči a pomocnými látkami, ?, Fannakologický prostředek podle nároku 6 pro použití v lékařství.
7. 8. Farmakologicky prostředek podle nároku 6 pro použiti jako léčiva pro leěbu nádorových onemocnění