CZ289464B6 - Způsob konstrukce transgenní drůbeľe - Google Patents

Způsob konstrukce transgenní drůbeľe Download PDF

Info

Publication number
CZ289464B6
CZ289464B6 CZ19993186A CZ318699A CZ289464B6 CZ 289464 B6 CZ289464 B6 CZ 289464B6 CZ 19993186 A CZ19993186 A CZ 19993186A CZ 318699 A CZ318699 A CZ 318699A CZ 289464 B6 CZ289464 B6 CZ 289464B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
cock
acceptor
cells
donor
testicles
Prior art date
Application number
CZ19993186A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ9903186A3 (cs
Inventor
Pavel Ing. Csc. Trefil
Original Assignee
Biopharm Výzkumný Ústav Biofarmacie A Veterinárníc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biopharm Výzkumný Ústav Biofarmacie A Veterinárníc filed Critical Biopharm Výzkumný Ústav Biofarmacie A Veterinárníc
Priority to CZ19993186A priority Critical patent/CZ289464B6/cs
Priority to JP2001521147A priority patent/JP2003508068A/ja
Priority to EP00958098A priority patent/EP1211932B1/en
Priority to DE60041771T priority patent/DE60041771D1/de
Priority to AU69784/00A priority patent/AU6978400A/en
Priority to PCT/CZ2000/000064 priority patent/WO2001017344A2/en
Priority to AT00958098T priority patent/ATE424721T1/de
Publication of CZ9903186A3 publication Critical patent/CZ9903186A3/cs
Publication of CZ289464B6 publication Critical patent/CZ289464B6/cs

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01KANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01KANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00Genetically modified animals
    • A01K2217/05Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Conveying And Assembling Of Building Elements In Situ (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Konstrukce transgenn dr be e p°enosem prapohlavn ch spermatogoni ln ch bun k se prov d tak, e se varlata kohouta akceptora pomoc gama paprsk opakovan oz ° o s le 8 Gy v jednom oz °en . Po oz °en dojde k ·pln mu zlikvidov n p vodn ch prapohlavn ch spermatogoni ln ch bun k ve varlatech akceptora, kter² ji pak nad le nem e produkovat spermie, p°i em struktura varlat, v etn Sertoliho bun k, z stane zachov na pro implantaci ciz ch prapohlavn ch spermatogoni ln ch bun k kohouta donora. Z t chto nov implantovan²ch prapohlavn ch spermatogoni ln ch bun k jsou d le produkov ny spermie, kter jsou oplozen schopn a nesou celou genetickou informaci prapohlavn ch spermatogoni ln ch bun k kohouta donora. K implantaci dojde asi 85 a 100 dn od posledn ho oz °en . P° prava transgenn dr be e touto cestou je snadn , proto e spermatogoni ln bu ky kohouta donora mohou b²t transfekov ny pot°ebnou danou genetickou informac a tak po jejich ·sp n implantaci do varlat kohouta akceptora dojde takto k tvorb transgenn ho kohouta, kter² po inseminaci slepic jeho ejakul tem, i p°irozenou plemenitbou, bude z 1/2 p°ed vat genetickou informaci donora na svoje potomstvo.\

Description

Způsob konstrukce transgenní drůbeže
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu konstrukce transgenní drůbeže využitím prapohlavních spermatogoniálních buněk pro přenos genetické informace u drůbeže.
Dosavadní stav techniky
Biotechnologický výzkum v oblasti transgenní drůbeže není zdaleka tak úspěšný jako tomu je u savců. Hlavní příčinou tohoto stavuje unikátní rozmnožovací ústrojí ptáků.
Ptačí zygota na rozdíl od savců není přístupná a je spojena s mimořádně velkým žloutkovým vakem. Hmota žloutků brání identifikaci pronukleů, v procesu oplodnění dochází k polyspermii a není možné určit které povojádro používaná u myší je u drůbeže téměř nemožná. Práce v uvedené oblasti se u drůbeže proto zaměřily na manipulace s ještě nediferenciovanými drůbežími buňkami, ať již se jedná o blastodermální buňky, primordiální gonocyty či prapohlavní, spermatogoniální buňky.
Využití prapohlavních, spermatogoniálních buněk při konstrukci transgenních jedinců jako první popsal u myší Brinster, L.R. Avarbock, M.R. (1994) Germline transmission of donor haptolype following spermatogonial transplantation. Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 91, 11 303- 11 307.
Jedná se v podstatě o novou oblast možné produkce zárodečných chimér a to částečnou nebo úplnou destrukcí pohlavních buněk ve varlatech jedince a jejich opětovanou rekolonizací pohlavními buňkami jiného jedince. U drůbeže tato metoda nebyla popsána.
Prvním krokem zvládnutí výše uvedené techniky je sterilizace varlat akceptora, neboť destrukce právě těchto prapohlavních spermatogoniálních buněk (progenitorů spermií) není snadná a použití např. busulphanu není zcela odpovídající a dochází po jeho použití buď pouze k částečné sterilizaci donora Vick, L. Luke. G. Simkiss, K. (1993) Germ line chimaeras can produce both strains of fowl with high efficiency after partial sterilization. J. Reprod. Fertil., 98, 637-641., nebo při použití vyšších dávek naopak kjeho celkové retardaci - Smýkalová, Š.Kotrbová, A. Trefil, P. (1998) Effect of busulphan on growth and development of the chicken embryos, Vet.Med.-Czech, 43,105-109., což v žádném případě není žádoucí.
Druhým nezbytným krokem úspěšného využití popsaného postupu je nutné zvládnutí přenosu spermatogoniálních prapohlavních buněk akceptora, tedy těch spermatogoniálních buněk, které umožní po přenosu funkční zabudování a rekolonizací varlat akceptora a následnou produkci oplození schopných spermií. To zatím přináší řadu potíží a nejednoznačných výsledků.
Podstata vynálezu
Výše uvedené nedostatky odstraňuje způsob konstrukce transgenní drůbeže, zejména přenosem prapohlavních spermatogoniálních buněk podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že se pouze varlata kohouta akceptora opakovaně ozáří gama paprsky, načež se do jeho neporušených sterilních varlat v intervalu 60 dní až dvou let od posledního ozáření implantují cizí prapohlavní spermatogoniální buňky kohouta donora, z nichž se dále produkují oplození schopné spermie s celou genetickou informací od kohouta donora. Po inseminaci slepic těmito nově vzniklými spermiemi se vylíhne transgenní drůbež s 1/2 genetické informace od donora.
- 1 CZ 289464 B6
Způsob podle vynálezu se dále provádí tak, že se varlata kohouta akceptora 3x až 9x ozáří gama paprsky o síle alespoň 8 Gy vždy v intervalu 3 až 9 dnů.
Výhodně se způsob podle vynálezu provádí tak, že se varlata kohouta akceptora 5x ozáří gama paprsky o síle 8 Gy, vždy v týdenním intervalu.
Při tomto ozáření dojde na rozdíl od jiných současných technik k úplnému zlikvidování původních prapohlavních spermatogoniálních buněk ve varlatech akceptora, který již pak nadále nemůže produkovat spermie, přičemž struktura varlat včetně Sertoliho buněk zůstane pro následnou implantaci cizích prapohlavních spermatogoniálních buněk kohouta donora. V těchto nově implantovaných prapohlavních spermatogoniálních buňkách jsou dále produkovány spermie, které jsou oplození schopné a nesou genetickou informaci prapohlavních spermatogoniálních buněk kohouta donora, viz schéma č. 1 v příloze.
Příprava transgenní drůbeže způsobem podle vynálezu je snadná a se stoprocentním výsledkem, protože spermatogoniální buňky kohouta donora mohou být transfekovány potřebnou žádanou genetickou informací a tak po jejich úspěšné implantaci do varlat kohouta akceptora dojde takto k tvorbě transgenního kohouta, který po inseminaci, či při přirozené plemenitbě bude z 1/2 předávat genetickou informaci na svoje potomstvo.
Pouze fakt, že uvedený způsob přenosu prapohlavních spermatogoniálních buněk z jednoho jedince do druhého je funkční, je nesmírně cenný a kromě této vlastní skutečnosti nesmírně zajímavý právě při tvorbě transgenní drůbeže. Prapohlavní, spermatogoniální buňky lze snadno před vlastní implantací do kohouta akceptora in vitro transfekovat cizorodou genetickou informací, která bude dál z 1/2 přenášena na potomstvo v F1 generaci. Takto pravděpodobně bude otevřena reálná cesta pro využití drůbeže (drůbežího vejcovodu) jako bioreaktoru pro produkci specifických např. pro farmaceutický průmysl cenných proteinů.
Původci vynálezu bylo provedeno velké množství pokusů na ověření způsobu podle vynálezu, z nichž některé byly vybrány do následující příkladové části, která je dále podložena přílohou grafu, stránkou obrázků.
Příklady provedení
Příklad 1
- Úplná sterilizace kohouta akceptora
Dospělý kohout inbrední linie plemene Leghomka bílá (bílá barva peří způsobena dominantní alelou II v lokusu I) produkující ejakulát byl fixován v boxu tak, aby bylo možné zevně z boční strany těla provést ozáření přesně na plochu velikosti varlat pomocí gama paprsků. Jako vhodný se ukázal přístroj Theratron TI000 a izotop60 Co. Varlata kohouta byla pomocí ozařovacího přístroje 5x za sebou v týdenním intervalu ozářena minimálně dávkou 8 Gy. Aniž by se ozáření jakkoliv projevilo na zdravotním stavu a chovné kondici kohouta, zhruba po 90 dnech po posledním ozáření ztratí kohout trvale schopnost produkce spermií a je připraven po uvedené době ke kolonizaci varlat prapohlavními spermatogoniálními buňkami kohouta donora, viz graf č. 1 a graf č. 2 a obrázek č. 1 v příloze.
- Příprava a aplikace prapohlavních, spermatogoniálních buněk kohouta donora
Dospělému kohoutu inbrední linie plemene Minorka černá (černá barva peří způsobena recesivní alelou ii) produkujícímu ejakulát byl pomocí biopsie odebrán vzorek tkáně z varlat obsahující jeho prapohlavní spermatogoniální buňky. Tyto buňky byly umístěny po dobu 4 hodin do média
-2 CZ 289464 B6
Μ 199 Sigma (obsahující 10% hmotn. Fetal. bovine sérum, 2% hmotn. chicken sérum, 1 % hmotn. pyruvate sodium, 1 % hmotn. gentamycin) při poměru ředění 1 : 1 s uvedeným médiem. Inkubace buněk probíhala při standardních podmínkách: při 5 % hmotn. obsahu oxidu uhličitého a při teplotě 40 °C. Poté byly prapohlavní spermatogoniální buňky v celkovém objemu suspenze 200 mikrolitrů aplikovány pomocí injekční stříkačky do každého ozářeného varlete kohouta akceptora, v době kdy ozářený kohout ztratí po ozáření jakoukoliv produkci ejakulátu, tedy 85 až 100 dní od posledního ozáření.
- Funkční produkce ejakulátu po přenesení prapohlavních spermatogoniálních buněk kohouta donora
Ozářený kohout inbrední linie plemene Leghomka bílá - akceptor s neexistujícími funkčními varlaty po provedeném ozáření začal do 2 měsíců po provedené aplikaci cizích prapohlavních spermatogoniálních buněk kohouta inbrední linie plemene Minorka černá opět produkovat ejakulát s životaschopnými spermiemi.
- Biologická testace přenesených prapohlavních spermatogoniálních buněk kohouta donora
Po provedení inseminace slepice inbrední linie plemene Lenghomka žíhaná (šedivá žíhaná barva způsobená recesivní alelou ii genem žíhanosti vázaným na pohlaví B/~) ejakulátem odebraným od ozářeného kohouta inbradní linie plemene Lenghomka bílá - akceptora cizích prapohlavních spermatogoniálních buněk kohouta inbradní linie plemene Minorka černá byla inseminovaná vejce dána do inkubátoru a po 21 dnech inkubace se vylíhla pouze černá kuřata.
Tato černá kuřata jsou jasným důkazem, že implantace a kolonizace prapohlavních, spermatogoniálních buněk kohouta donora byla úspěšná, protože vylíhnou-li se pouze černá nebo žíhaná kuřata, to ve své podstatě znamená nepřítomnost dominantní alely II, ale pouze přítomnost recesivní alely ii, tedy pouze přítomnost funkčních spermií kohouta s recesivním založením barvy peří ii, tedy v tomto případě s černou barvou peří, viz schéma č. 1 v příloze.
Příklad 2
-Neúplná sterilizace kohouta akceptora
Dospělý kohout inbrední linie plemene Leghomka bílá (bílá barva peří způsobena dominantní alelou II v lokusu I) produkující ejakulát byl fixován pro ozáření stejně jako v příkladu 1. Varlata kohouta byla pomocí ozařovacího přístroje ozářena jednorázovou dávkou 18 Gy. Kohout, aniž by se ozáření jakkoliv projevilo na jeho zdravotním stavu a chovné kondici, neztratil ani po 200 dnech sledování trvale schopnost produkce spermií (oproti kontrole, graf č. 9 a č. 10), naopak po 150 dnech se koncentrace (viz. graf č. 3) a motilita (graf č. 4) vrátila do původních hodnot před ozářením a kohout nebyl připraven ke kolonizaci varlat prapohlavními, spermatogoniálními buňkami kohouta donora.
Příklad 3
- Neúplná sterilizace kohouta akceptora
Dospělý kohout inbrední linie plemene Leghomka bílá (bílá barva peří způsobena dominantní alelou II v lokusu I) produkující ejakulát byl fixován při ozáření stejně jako v příkladu 1. Varlata kohouta byla pomocí ozařovacího přístroje ozářena jednorázovou dávkou 22 Gy. Kohout, aniž by se ozáření jakkoliv projevilo na jeho zdravotním stavu a chovné kondici, neztratil ani po 200 dnech sledování trvale schopnost produkce spermií, naopak po 160 dnech se koncentrace (viz. graf č. 5) a motilita (graf č. 6) sice o něco nižší vrátila do původních hodnot před ozářením
-3 CZ 289464 B6 a kohout nebyl připraven ke kolonizaci varlat prapohlavními, spermatogoniálními buňkami kohouta donora.
Příklad 4
-Neúplná sterilizace kohouta akceptora
Dospělý kohout inbrední linie plemene Leghomka bílá (bílá barva peří způsobena dominantní alelou IIV lokusu I) produkující ejakulát byl fixován pro ozáření stejně jako v příkladu 1. Varlata kohouta byla pomocí ozařovacího přístroje ozářena jednorázovou dávkou 26 Gy. Tato dávka se projevila negativně na zdravotním stavu kohouta, místo ozáření bylo na kůži lehce zduřelé a načervenalé, kohout jevil známky únavy ještě několik dnů po ozáření. Kohout ztratil téměř po 160 dnech schopnost produkce spermií, viz graf č. 7, ale produkce ejakulátu v nepatrné míře pokračovala a spermie vykazovaly i určitou motilitu, viz graf č. 8. Bylo možné konstatovat, že tato dávka byla poměrně vysoká, zatížila zdravotní stav kohouta, ale nebyla z pohledu ještě pokračující produkce ejakulátu dostatečná a kohout nebyl připraven ke kolonizaci varlat prapohlavními spermatogoniálními buňkami kohouta donora.
Průmyslová využitelnost
Opakovaným ozářením gama paprsky varlat kohouta akceptora a implantací cizích prapohlavních spermatogoniálních buněk kohouta donora do neporušených sterilních varlat kohouta akceptora dojde u něj k opětovné produkci oplození schopných spermií s celou genetickou informací od kohouta donora. Po inseminaci slepic těmito produkovanými spermiemi vznikne transgenní drůbež s 1/2 genetické informace od donora. Uvedený postup bude využíván průmyslovým způsobem drůbežářskými šlechtitelskými a biotechnologickými společnostmi.

Claims (3)

1. Způsob konstrukce transgenní drůbeže, zejména přenosem prapohlavních spermatogoniálních buněk, vyznačující se tím, že se pouze varlata kohouta akceptora zevně opakovaně ozáří gama paprsky, načež se do jeho neporušených sterilních varlat v intervalu 60 dní až 2 let od posledního ozáření implantují cizí prapohlavní spermatogoniální buňky kohouta donora, z nichž se dále produkují oplození schopné spermie s celou genetickou informací od kohouta donora, z kterých po inseminaci slepic vznikne transgenní drůbež s 1/2 genetické informace od donora.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se varlata kohouta akceptora ozáří 3x až 9x gama paprsky o síle alespoň 8 Gy vždy v intervalu 3 až 9 dní.
3. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se varlata kohouta akceptora ozáří 5x gama paprsky o síle 8 Gy vždy v týdenních intervalech.
12 výkresů
-4CZ 289464 B6
Fotografie semenotvomých kanálků po opakovaném (5x8 Gy) ozáření varlat kohouta akceptora. V semenotvomých kanálkách jsou patrné pouze Sertoliho buňky, prapohlavní, spermatogoniální buňky nejsou patrné, (barveno Pas, x 400)
CZ19993186A 1999-09-08 1999-09-08 Způsob konstrukce transgenní drůbeľe CZ289464B6 (cs)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ19993186A CZ289464B6 (cs) 1999-09-08 1999-09-08 Způsob konstrukce transgenní drůbeľe
JP2001521147A JP2003508068A (ja) 1999-09-08 2000-09-08 トランスジェニック家禽を構築する方法
EP00958098A EP1211932B1 (en) 1999-09-08 2000-09-08 A method of transferring spermatogonial germline cells in cocks
DE60041771T DE60041771D1 (de) 1999-09-08 2000-09-08 Verfahren zum transferieren von spermatonialen keimzellen bei hähnen
AU69784/00A AU6978400A (en) 1999-09-08 2000-09-08 A method of transgenic fowl construction
PCT/CZ2000/000064 WO2001017344A2 (en) 1999-09-08 2000-09-08 A method of transgenic fowl construction
AT00958098T ATE424721T1 (de) 1999-09-08 2000-09-08 Verfahren zum transferieren von spermatonialen keimzellen bei hähnen

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ19993186A CZ289464B6 (cs) 1999-09-08 1999-09-08 Způsob konstrukce transgenní drůbeľe

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ9903186A3 CZ9903186A3 (cs) 2001-04-11
CZ289464B6 true CZ289464B6 (cs) 2002-01-16

Family

ID=5466297

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19993186A CZ289464B6 (cs) 1999-09-08 1999-09-08 Způsob konstrukce transgenní drůbeľe

Country Status (7)

Country Link
EP (1) EP1211932B1 (cs)
JP (1) JP2003508068A (cs)
AT (1) ATE424721T1 (cs)
AU (1) AU6978400A (cs)
CZ (1) CZ289464B6 (cs)
DE (1) DE60041771D1 (cs)
WO (1) WO2001017344A2 (cs)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ307102B6 (cs) * 2016-06-10 2018-01-10 Biopharm, Výzkumný Ústav Biofarmacie A Veterinárních Léčiv, A.S. Způsob produkce spermií a transgenních ptáků

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100569168B1 (ko) * 2003-08-08 2006-04-07 (주)아비코아생명공학연구소 조류 정원줄기세포의 배양방법 및 이에 의해 수득한 조류정원줄기세포
KR100569163B1 (ko) * 2003-08-11 2006-04-07 (주)아비코아생명공학연구소 정원세포를 이용한 조류 카이메라의 생산방법 및 조류 카이메라
WO2010036978A2 (en) 2008-09-25 2010-04-01 Transgenrx, Inc. Novel vectors for production of growth hormone
WO2010036976A2 (en) 2008-09-25 2010-04-01 Transgenrx, Inc. Novel vectors for production of antibodies
US9150881B2 (en) 2009-04-09 2015-10-06 Proteovec Holding, L.L.C. Production of proteins using transposon-based vectors
CN115589993A (zh) * 2022-12-15 2023-01-13 内蒙古大学(Cn) 通过x射线照射和原始生殖细胞移植使鸡精子再生的方法

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ307102B6 (cs) * 2016-06-10 2018-01-10 Biopharm, Výzkumný Ústav Biofarmacie A Veterinárních Léčiv, A.S. Způsob produkce spermií a transgenních ptáků

Also Published As

Publication number Publication date
EP1211932A2 (en) 2002-06-12
ATE424721T1 (de) 2009-03-15
JP2003508068A (ja) 2003-03-04
AU6978400A (en) 2001-04-10
WO2001017344A3 (en) 2002-01-10
WO2001017344A2 (en) 2001-03-15
CZ9903186A3 (cs) 2001-04-11
DE60041771D1 (de) 2009-04-23
EP1211932B1 (en) 2009-03-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Tajima et al. Production of germ line chimera by transfer of primordial germ cells in the domestic chicken (Gallusdomesticus)
Blesbois et al. Semen cryopreservation for ex situ management of genetic diversity in chicken: creation of the French avian cryobank
Nakamura Poultry genetic resource conservation using primordial germ cells
Petitte Avian germplasm preservation: embryonic stem cells or primordial germ cells?
Liptoi et al. Preliminary results of the application of gonadal tissue transfer in various chicken breeds in the poultry gene conservation
CZ289464B6 (cs) Způsob konstrukce transgenní drůbeľe
Song et al. Offspring produced from orthotopic transplantation of chicken ovaries
Pandey et al. Genetic transformation in chicken by the use of irradiated male gametes
Nakamura Avian biotechnology
Getachew et al. Effect of fructose addition in skim milk based extender on semen quality and fertility in white leghorn chicken
ES2525327T3 (es) Conservación y suministro/liberación controlado/a de espermatozoides
Dzoma et al. A retrospective study of egg production, fertility and hatchability of farmed ostriches in Botswana
Cassar et al. Observations on ploidy of cells and on reproductive performance in parthenogenetic turkeys
Rikimaru et al. Production of pure hinai-dori with normal reproductive capability from transferred primordial germ cells
Molekwa et al. Relationships between cock semen viability and the fertility of artificially inseminated South African indigenous chicken breeds
CZ307102B6 (cs) Způsob produkce spermií a transgenních ptáků
Zhang et al. Reproductive performance of artificially inseminated hens receiving saline drinking water
Furuta et al. Restoration of genetic resources from Ehime native chicken via transferred primordial germ cells (PGCs)
Sopiyana et al. Determination of production capacity of circulated primordial germ cells (circulated-PGCs) of KUB chicken using lysis buffer ammonium chloride potassium (ACK).
Baumgartner et al. An attempt at genetic transformation in chickens through cock sperm irradiation
Tarekegn Getachew et al. Effect of fructose addition in skim milk based extender on semen quality and fertility in white leghorn chicken.
Omeje et al. Effect of feed restriction on body weight and semen characteristics of native and exotic (broiler) cocks
Kowalczyk et al. Reproductive parameters of capercaillie kept ex situ in vivo.
RU2263318C2 (ru) Способ сравнительной оценки силы реакции гистонесовместимости у птиц
Getacheuv et al. tender on semen quality and fertility in vvhite leg

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MK4A Patent expired

Effective date: 20190908