CZ287849B6

CZ287849B6 - Steroidní deriváty užitečné jako skelety pro tvorbu nepeptidových knihoven, způsob jejich výroby a jejich použití

Info

Publication number: CZ287849B6
Application number: CZ19952405A
Authority: CZ
Inventors: Alexander Rndr. Drsc. Kasal; Ladislav Rndr. Csc. Kohout
Original assignee: Ústav organické chemie a biochemie AV ČR
Priority date: 1995-09-15
Filing date: 1995-09-15
Publication date: 2001-02-14
Also published as: CZ240595A3

Abstract

Jsou popsány steroidní deriváty obecného vzorce I, v němž R znamená atom vodíku, R.sup.1.n., R.sup.2.n. a R.sup.3.n. znamenají aminové skupiny, acylaminové skupiny obecného vzorce R.sup.4.n.CONH, hydroxylové skupiny, chráněné hydroxylové skupiny nebo oxoskupiny a X znamená skupinu OH nebo NHR.sup.5.n., přičemž R.sup.4.n. znamená terc.butoxy- nebo allyloxyskupinu, R.sup.5.n. znamená část nosiče, který je schopen přes aminovou skupinu vázat steroidní kyselinu amidovou vazbou, a vlnovka znamená, že substituent může mít konfiguraci .alfa. nebo .beta.. Je popsán způsob výroby steroidních derivátů obecného vzorce I, podle kterého se postupně jednotlivé hydroxylové skupiny převádějí na aminovou skupinu nebo takovou skupinu, ze které lze aminovou skupinu snadno získat. Získané steroidní deriváty jsou vhodné jako skelet, scaffold, pro tvorbu nepeptidových knihoven.ŕ

Description

Oblast techniky

Tento vynález se týká steroidních derivátů užitečných jako skelety pro tvorbu nepeptidových knihoven, způsobu výroby těchto derivátů a jejich použití.

Dosavadní stav techniky

V literatuře je známo použití některých rigidních skeletů (v anglické literatuře „scaffolds“) jako podkladu pro přípravu proteinů. Jako rigidní skelet byly použity např. derivát naftalenu (Ernest I., Kalvoda G., Rihs G., Mutter M.M.: Tetrahedron Lett. 31, 4011 (1990).) nebo disubstituovaný steroidní derivát (Hirschmann R., Sprengeler P.A., Kawasaki T., Leathy E.M., Shakespeare W.C., Smith III, A.B.: J. Amer. Chem. Soc. 114, 9692 (1992). Hirschmann R., Sprengeler P.A., Kawasaki T., Leathy E.M., Shakespeare W.C., Smith III, A.B.: Tetrahedron 49, 3665 (1993).). Některé nesteroidní skelety byly použity i pro přípravu nepeptidových knihoven (viz např. Desai M.C., Zuckermann R.N., Moos W. H.: Drug. Develop. Res. 33, 174 (1994), Gordon E.M., Barrett R.W., Dower W.J., Fodor S.P.A., Gallop M.A.: J. Med. Chem. 37, 1385 (1994), Lebl M., Krchňák V., Sepetov N. F., Seligmann B., Štrop P. et al.: Biopolymers (Pept. Sci.) 37, 177 (1995).). Pro přípravu nepeptidových knihoven však dosud nebyly použity steroidní deriváty. Steroidní deriváty jsou zvláště výhodné, protože mohou nést několik různě reaktivních funkcí. Je proto nanejvýš potřebné syntetizovat takové sloučeniny.

Podstata vynálezu

Tento vynález se týká steroidních derivátů obecného vzorce I

v němž R znamená atom vodíku,

R¹, R² a R³ znamenají aminové skupiny, acylaminové skupiny obecného vzorce R⁴CONH, kde R⁴znamená terc.butoxy skupinu a allyloxy skupinu; hydroxylové skupiny, chráněné hydroxylové skupiny nebo oxoskupiny s tím, že každý z R¹, R² a R³ znamená jinou skupinu,

X znamená skupinu OH nebo NHR⁵, kde R⁵ znamená část nosiče, který je schopen přes aminovou skupinu vázat steroidní kyselinu amidovou vazbou, a vlnovka znamená, že substituent může mít konfiguraci a nebo β.

Tento vynález se týká také způsobu výroby steroidních sloučenin, které jsou užitečné pro syntetizování velkého množství derivátů, tak zvaných knihoven, mezi nimiž mohou být i sloučeniny biologicky významné.

-1 CZ 287849 B6

Způsobem podle tohoto vynálezu se skelety pro nepeptidové knihovny připravují a používají pro náhodné acylace vybraných aminových skupin za tvorby směsí, jejichž aktivity se testují in vitro.

Výhodným výchozím materiálem podle tohoto vynálezu je steroidní derivát vzorce II

(II), nebo vzorce III

(III).

v němž X znamená skupinu OH a vlnovka znamená, že substituent může mít konfiguraci a nebo β, působí reaktivními deriváty kyselin obecného vzorce R⁶OH, v němž R⁶ znamená acylovou část kyseliny s 1 až 18 atomy uhlíku. Hydroxylové skupiny sloučenin vzorce II a III se používají pro převedení na aminové skupiny buď přímo, nebo po navázání těchto sloučenin na pevný nosič obsahující aminovou skupinu, která je schopna tvořit amidovou vazbu.

Převedení jakékoliv hydroxylové skupiny přítomné ve výchozí sloučenině vzorce II nebo III na aminovou skupinu podle tohoto vynálezu se obecně provádí tak, že se nejdříve ochrání ostatní přítomné hydroxylové a/nebo aminové skupiny a potom se nechá zreagovat přístupná, tj. nechráněná hydroxylová skupina. Tato ochrana se provádí acylací reaktivními deriváty kyselin obecného vzorce R⁶OH, v němž R⁶ znamená acylovou část s 1 až 18 atomy uhlíku kyseliny použité k ochraně hydroxylové a/nebo aminové skupiny, s výhodou takových kyselin, které lze snadno z molekuly odstranit, nejvýhodněji snadno hydrolyzovatelných kyselin. Tímto chráněním se získá sloučenina obecného vzorce Ha

(Ha) , respektive lila

-2CZ 287849 B6

(lila), v nichž X, R⁶ a vlnovka znamenají jak shora uvedeno.

Zbývající, nechráněná hydroxylová skupina se potom oxiduje na oxoskupinu sloučeniny obecného vzorce IV

(IV) , v němž X, R⁶ a vlnovka znamenají jak shora uvedeno. Tato reakce se provádí N-bromacetamidem jako oxidačním činidlem. Získaná sloučenina nechá zreagovat s diazomethanem za vzniku methylesterové sloučeniny obecného vzorce IV, v němž R⁶ a vlnovka znamená jak shora uvedeno a X znamená methoxyskupinu. Tato sloučenina se reduktivní aminací, tj. nechá se zreagovat s hydrochloridem a adukt potom s vodíkem v přítomnosti oxidu platičitého převede na sloučeninu obecného vzorce V

(V), v němž R⁶ a vlnovka znamenají jak shora uvedeno a X znamená methoxyskupinu.

Vytvořený amin obecného vzorce V se pak působením di-terc.butylkarbonátu převede na BOCderivát obecného vzorce VI

(VI), v němž R⁶ a vlnovka znamenají jak shora uvedeno, X znamená methoxyskupinu a R⁸ znamená terc.butoxykarbonylovou skupinu.

Tato sloučenina se nechá zreagovat stejným způsobem jak shora uvedeno u sloučeniny obecného vzorce IV, tedy s N-bromacetamidem, potom s hydrochloridem hydroxylaminu a pak s vodíkem

-3CZ 287849 B6 v přítomnosti oxidu platičitého, takže se získá steroidní derivát obecného vzorce I, v němž R a vlnovka znamenají jak shora uvedeno, R¹ znamená skupinu OR⁶, kde R⁶ znamená jak shora uvedeno, R² znamená skupinu R⁸-NH, kde R⁸ znamená terc.butoxykarbonylovou skupinu, R³znamená skupinu NH₂ a X methoxyskupinu, ten se dále nechá zreagovat s monohydrátem hydroxidu lithného, čímž se získá steroidní derivát obecného vzorce I, v němž R, R¹, R²a vlnovka znamenají jak shora uvedeno a X znamená skupinu OH. Tento produkt pak reakcí s pevným nosičem s aminovou skupinou poskytne sloučeninu obecného vzorce I, v němž X a R, R¹, R² a vlnovka znamenají jak shora uvedeno a X znamená skupinu NHR⁵.

Sloučeniny obecného vzorce I, kde R znamená atom vodíku, vlnovka znamená, že substituent může mít konfiguraci a nebo β, R¹ znamená skupinu OR⁶, kde R⁶ znamená acylovou část kyseliny s 1 až 18 atomy uhlíku, R² znamená skupinu R⁸-NH, kde R⁸ znamená terc.butoxykarbonylovou skupinu, R³ znamená skupinu NH₂ a X znamená skupinu NHR⁵, kde R⁵ znamená část nosiče, který je schopen přes aminovou skupinu vázat steroidní kyselinu amidovou vazbou, se mohou vyrábět také tak, že se nejdříve provede navázání na nosič a teprve potom se provede obměna příslušných steroidních funkčních skupin v molekule. Podle tohoto způsobu se steroidní deriváty obecného vzorce I vyrábějí tak, že se steroidní derivát obecného vzorce II nebo III

v nichž X znamená skupinu OH a vlnovka znamená, že substituent může mít konfiguraci a nebo β, nechá zreagovat s pevným nosičem s aminovou skupinou za vzniku sloučeniny obecného vzorce II, respektive obecného vzorce III, v nichž vlnovka znamená jak shora uvedeno a X znamená skupinu NHR⁵, na tyto deriváty se působí reaktivními deriváty kyselin obecného vzorce R⁶OH, v němž R⁶ znamená acylovou část kyseliny s 1 až 18 atomy uhlíku, potom se takto získaná sloučenina obecného vzorce Ha

(Ha) , respektive lila

(lila),

-4CZ 287849 B6 v nichž R⁶ a vlnovka znamenají jak shora uvedeno a X znamená skupinu NHR⁵, nechá zreagovat s N-bromacetamídem za vzniku sloučeniny obecného vzorce IV

(IV), v němž R⁶ a vlnovka znamenají jak shora uvedeno a X znamená skupinu NHR⁵, načež se získaná sloučenina nechá zreagovat nejdříve s hydrochloridem hydroxylaminu a potom s vodíkem v přítomnosti oxidu platičitého za vzniku sloučeniny obecného vzorce V

(V), v němž R⁶ a vlnovka znamenají jak shora uvedeno a X znamená skupinu NHR⁵, vytvořený amin obecného vzorce V se pak působením diterc.butylkarbonátu převede na sloučeninu obecného vzorce VI

(VI), v němž R⁶ a vlnovka znamenají jak shora uvedeno, X znamená skupinu NHR⁵ a R⁸ znamená terc.butoxykarbonyloxyskupinu, tato sloučenina se nechá zreagovat s N-bromacetamidem, potom s hydrochloridem hydroxylaminu a pak s vodíkem v přítomnosti oxidu platičitého, takže se získá steroidní derivát obecného vzorce I, v němž R a vlnovka znamenají jak shora uvedeno, R¹ znamená skupinu OR⁶, kde R⁶ znamená jak shora uvedeno, R² znamená skupinu R⁸-NH, kde R znamená jak shora uvedeno, R znamená skupinu NH₂ a X znamená skupinu NHR .

Předmětné steroidní sloučeniny se mohou použít pro navázání peptidovou vazbou na aminokyselinu, respektive na peptidový derivát, a sloužit tak pro přípravu steroidních knihoven sloučenin s potenciálním biologickým účinkem.

-5CZ 287849 B6

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Syntéza methylesteru 3a-ethoxykarbonyloxy-7a,12a-dihydroxy-5p-cholanové kyseliny

Ethylester kyseliny chlormravenčí (30 ml, 107,0 mmolu) se pomalu přidává k roztoku sloučeniny vzorce II (45,2 g, 107,0 mmolu) v pyridinu (130 ml) za míchání při 0 °C. Po přidání se směs ío udržuje na 0 °C dalších 45 minut a pak se vlije na led (800 g), sraženina se odfiltruje, rozpustí se v chloroformu, promyje se vodou, rozpouštědlo se odpaří a odparek se překrystaluje z methanolu. Získá se titulní produkt (44,8 g, 84,6% hmot.), t.t. 151 až 153 °C, [a]_D +41° (c 1.1). °C). 'HNMR spektrum: 0,69 (s, 3H, H-18), 0,91 (s, 3H, H-19), 0,98 (d, J = 6,1, H-21), 1,29 (t, J = 7,0, 3H, CH₃), 3,67 (s, 3H, OCH₃), 3,85 (m, 1H, W = 13, H-l2), 3,98 (m, 1H, W = 16, H-7), 15 4,16 (q, J = 7,0, 2H, OCPbCHj), 4,44 (m, 1H, W = 39, H-3).

Příklad 2

Syntéza methylesteru 3 α-ethoxy karbony loxy-12a-hydroxy-7-oxo-5p-cholanové kyseliny

N-Bromoacetamid (2,5 g, 18,5 mmolu) a potom kyselina octová (5,0 ml) se přidají k roztoku shora připraveného esteru (5,0 g, 10,1 mmolu) ve vodném acetonu (190 ml, 20 % obj. vody). Po 1 hodině se směs vlije do vody (500 ml), sraženina se odfiltruje a promyje se vodou. Po vysušení 25 bezvodým síranem sodným se rozpouštědlo oddestiluje a odparek se rozpustí v etheru (100 ml).

Přidá se roztok diazomethanu v etheru (1,3 g, 125 ml). Po 5 minutách stání za teploty místnosti se přidá 5% (hmotn.) vodná kyselina chlorovodíková (3 ml), směs se nalije do vody, etherová vrstva se oddělí, promyje se 10% (hmotn.) hydrogenuhličitanem draselným, vodou, vysuší nad bezvodým síranem hořečnatým a rozpouštědlo se oddestiluje. Získá se tak produkt s TLC (25 % obj. 30 etheru v benzenu): Rf 0,40; stopy lipofíIních nečistot se odstraní krystalizací, která poskytne titulní sloučeninu, t.t. 183 až 185 °C (methanol, 4,05 g, 81,3 % hmotn.). 'H NMR spektrum: 0,68 (s, 3H, H-18), 0,97 (d, J - 6,1, H-21), 1,19 (s, 3H, H-19), 1,29 (t, J = 7,0, 3H, CH₃), 3,67 (s, 3H, OCH₃), 4,00 (m, 1H, W = 13, H-12), 4,16 (q, J = 7,0, 2H, OCHíCHj), 4,54 (m, 1H, W = 39, H3).

Příklad 3

Syntéza methylesteru 3a-ethoxykarbonyloxy-12a-hydroxy-7-oximino-5P-cholanové kyseliny 40

Hydroxylamin-hydrochlorid (7,0 g, 100,7 mmolu) se přidá k roztoku ketonu připraveného podle předchozího příkladu (20,0 g, 40,6 mmolu) v pyridinu (50 ml) a směs se udržuje na 90 °C za míchání. Po 8 hodinách se roztok vlije na led (300 ml) a olejovitý produkt se oddělí, rozpustí se v chloroformu a promyje se vodou. IČ spektrum: 3600, 3400 (OH); 3592, 3288 (N-OH); 1732 45 (C=O); 1 653 (C=N); 1271, 1259 (C-O); 1175 (CH₃). Produkt (16,2 g, 78,6 % hmot.) byl překrystalován z toluenu, t.t. 156-157 °C, [a]_D +21° (c 1.0). Pro C28H45NO7 (507,7) vypočteno: 66,25 % C, 8,93 % H, 2,76 % N; nalezeno: 66,28 % C, 9,05 % H, 2,85 % N. 'H NMR spektrum: 0,69 (s, 3H, H-18), 0,98 (d, J = 6,1, H-21), 1,06 (s, 3H, H-19), 1,29 (t, 3H, CH₃), 3,11 (dd, J = 13,4 a 1,5, H-6a), 3,66 (s, 3H, OCH₃), 4,00 (m, 1H, W = 13, H-12), 4,16 (q, J = 7,0, 2H, 50 OCH>CH₃), 4,55 (m, 1H, W = 39, H-3), 7,31 (m, 1H, N=OH).

-6CZ 287849 B6

Příklad 4

Syntéza methylesteru 7a-amino-3a-ethoxykarbonyloxy-12a-hydroxy-53-cholanové kyseliny

Suspenze hydrátu oxidu platičitého (200 mg, 0,88 mmolu) a shora připravený oxim (3,6 g,

7.1 mmolu) v kyselině octové (30 ml) se míchá v atmosféře vodíku 60 hodin. Rozpouštědlo se odpaří a vedlejší produkt (710 mg, 19,6 % hmot.) se překrystaluje z toluenu. T.t. 203 až 206 °C (methanol). Matečné louhy (2,89 g) se protřepou s chloroformem (20 ml) a hydroxidem amonným (4 ml), organická fáze se promyje vodou a vysuší se nad síranem sodným. Chloroform se odstraní ve vakuu a odparek (2,35 g, 67,1 % hmotn. vztaženo na oxim) se překrystaluje z toluenu. T.t. 189 až -192 °C, [a]_D +32° (c 0,9). IČ spektrum: 3618, 3444 (OH); 1733, 1438 (COOR); 1620 (NH₂); 1272, 1261 (OH). Pro C₂₈H4₇NO₆ (493,7): vypočteno: 68,12 % C, 9,60 % H, 2,84 % N; nalezeno: 68,17 % C, 9,69 % H, 2,76 % N. *H NMR spektrum: 0,69 (s, 3H, H-18), 0,92 (s, 3H, H-19), 0,98 (d, J = 6,1, H-21), 1,29 (t, J = 7,0, 3H, CH₃), 3,08 (m, 1H, W = 16, H15 7), 3,67 (s, 3H, OCHj), 3,97 (m, 1H, W = 13, H-12), 4,16 (q, J = 7,0, 2H, OCH₂CH₃), 4,41 (m,

1H, W = 39,H-3).

Příklad 5

Syntéza methylesteru 7a-amino-3a-ethoxykarbonyloxy-12a-hydroxy-5p-cholanové kyseliny

Směs připraveného ketonu (128 mg, 0,26 mmol), octanu amonného (160 mg, 2,07 mmol a kyanhydridoboritanu sodného (40 mg, 0,64 mmolu) v methanolu (3 ml) se míchá při 50 °C. Reakce je 25 ukončena během 18 h (TLC). Reakční činidlo se rozloží 1 ml solného roztoku. Směs se zředí toluenem (6 ml) a zahustí se ve vakuu na poloviční objem. Tato směs se rozdělí mezi solný roztok (10 ml) a toluen (10 ml), organická vrstva se promyje vodou, vysuší a odpaří. Chromatografie (2 desky, 200 x 200 x 1 mm, 96 % obj. chloroformu zpracovaného s amoniakem a 4 % obj. methanolu). Hlavní složka (85 mg, 66,5 % hmot., t.t. 189 až -192 °C) byla identická ve všech 30 směrech se shora popsaným 7a-aminem.

Příklad 6

Syntéza methylesteru 7a-(N-t-butoxykarbonyl)amino-3a-ethoxykarbonyloxy-12a-hydroxy5|3-cholanové kyseliny

Vodný hydroxid draselný (10% (hmotn.), 1,4 ml, 2,5 mmol) se přidá k roztoku shora připraveného aminu (1,2 g, 2,4 mmolu) v tetrahydrofuranu (15 ml). Tato směs se třepe s di40 terc.butyldikarbonátem (880 mg, 4,0 mmolu) 30 minut, potom se okyselí vodnou kyselinou citrónovou (10% (hmot.), 5,2 mmolu, 10 ml). Tato směs se zředí etherem (50 ml), promyje sodným roztokem, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. T.t. 181 až 182 °C (heptan); výtěžek:

1.1 g (76,2 % hmot.). [a]_D +25° (c 1.6); IČ spektrum: 3619, 3529 (OH); 3455, 3404 (NH); 1734 (COOCH₃); 1705 (COO); 1495 (amid II); 1270, 1059, 1024 (C-O). Pro C₃₃H₅₅NO₈ (593,8):

vypočteno: 66,76 % C, 9,34 % H, 2,36 % N; nalezeno: 66,58 % C, 9,48 % H, 2,29 % N.

'HNMR spektrum: 0,71 (s, 3H, H-18), 0,97 (s, 3H, H-19), 0,99 (d, J = 6,1, H-21), 1,33 (t, J = 7,0, 3H, CH₃), 3,68 (s, 3H, OCH₃), 3,69 (s, 3H, OCH₃), 3,70 (m, 1H, W = 16, H-7), 4,02 (m, 1H, W = 13, H-12), 4,20 (q, J = 7,0, 2H, OCH,CH₃), 4,45 (m, 1H, W = 39, H-3), 4,91 (d, 1H, NHCOO).

Příklad 7

Syntéza methylesteru 7a-(N-terc.butoxykarbonyl)amino-3a-ethoxykarbonyloxy-12-oxo-5|3cholanové kyseliny

Shora uvedený produkt (6,79 g, 13,8 mmolu) se oxiduje v acetonu (30 ml) při 0 °C Jonesovým činidlem. Po 5 minutách se nadbytek činidla rozloží několika kapkami methanolu a směs se vlije do vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (5% (hmot.), 100 ml). Produkt se extrahuje chloroformem, promyje se vodou a vysuší se nad síranem sodným. Keton (6,56 g, 96,6 % hmot.) se překrystaluje z acetonu a heptanu, t.t. 104-106 °C; [a]_D + 111° (c 1.1); IČ spektrum: 1734 (COOR); 1706 (NCOOR); 1495 (amide II); 1437, 1167 (Me); 1393, 1367 (terc.Bu), 1269, 1255 (C-O). Pro C33H53NO8 (591,8) vypočteno: 66,98 % C, 9,03 % H, 2,37 % N; nalezeno 67,14 % C, 9,23 % H, 2,26 % N. 'H NMR spektrum: 0,92 (s, 3H, H-18), 0,93 (d, J = 6,1, H-21), 1,03 (s, 3H, H-19), 1,30 (t, J = 7,0, 3H, CH₃), 1,43 (s, 9H, COOQCPLh), 3,33 (dd, J = 8,8 a 2,4, H-l 1), 3,66 (s, 3H, OCH3), 4,18 (q, J = 7,0, 2H, OCíhCHj), 4,45 (m, 2H, W = 40, H-3 a NH).

Příklad 8

Syntéza methylesteru 7a-(N-terc.butoxykarbonyl)amino-3a-ethoxykarbonyloxy-l 2-oximino5fJ-cholanové kyseliny

Shora uvedený keton (6,4 g, 10,8 mmolu) se rozpustí v pyridinu (15 ml) a přidá se hydrochlorid hydroxylaminu (3,0 g, 43,2 mmol). Tato směs se míchá při 80 °C 2 h. Ochlazená reakční směs se vlije na led (200 g) a nechá se stát přes noc v ledničce. Pevný produkt (6,4 g, 97,5 % hmot.) se odfiltruje, rozpustí se v chloroformu a promyje se solným roztokem. TLC (chloroform zpracovaný sammoniakem a 5 % obj. acetonu: R_f 0,50, žádný výchozí keton (Rf 0,67). T.t. 116 až 117 °C (ether); [a]_D +126° (c 1.1.); IČ spektrum: 3589, 3271 (N-OH); 3455 (NH); 1732 (COOR); 1706 (NCOOR); 1494 (amid II); 1439 (Me); 1392, 1367 (t-Bu); 1270, 1257 (C-O); 937 (N-O). Pro C33H54N2O8 (606,8) vypočteno: 65,32 % C, 8,97 % H, 4,62 % N; nalezeno: 65,27 % C, 9,18 % H, 4,53 % N. *H NMR spektrum: 0,84 (d, J = 6,1, H-21), 1,03 (s, 3H, H-18), 1,06 (s, 3H, H-19), 1,31 (t, J = 7,0, 3H, CH₃), 1,43 (s, 9H, COOQCHsh), 3,66 (s, 3H, OCH₃), 3,83 (m, W = 30, 1H, NHCO), 4,18 (q, J = 7,0, 2H, OCH2CH3), 4,43 (m, 2H, W = 40, H-3 and NH).

Příklad 9

Syntéza methylesteru 12p-amino-7a-(N-terc.butoxykarbonyl)amino-3a-ethoxy-karbonyloxy5|3-cholanové kyseliny

Shora uvedený oxim (3,3 g, 5,4 mmolu) se hydrogenuje podle toho, jak je popsáno při přípravě 7a-aminu. Surový produkt se vyčistí chromatografií na koloně (250 ml silikagelu, chloroform s 2,5 % obj. methanolu a 1 % obj. kyseliny octové). Hlavní složka (2,8 g, 78,9 % hmot, sůl aminu s kyselinou octovou tající při 103-109 °C) se protřepe s chloroformem (20 ml) zpracovaným s hydroxidem amonným (5 ml) a potom vodou. Volná báze taje při 180 až 182 °C (benzenheptan); [a]_D +20° (c 1.1); IČ spektrum: 3455 (NH); 1734 (COOR); 1705 (MHCOOR); 1492 (amid II); 1270, 1170 (C-O). Pro C33H₅₆N₂O₇ (592,8) vypočteno: 66,81 % C, 9,52 % H, 4,73 % N; nalezeno: 66,89 % C, 9,42 % H, 4,50 % N. *HNMR spektrum: 0,73 (s, 3H, H-18), 0,94 (s, 3H, H-19), 0,97 (d, J = 6,1, H-21), 1,31 (t, J = 7,0, 3H, CH₃), 1,44 (s, 9H, COOQCPbh), 3,24 (dd, J = 9,7 a 1,2, 1H, H-l 2), 3,67 (s, 3H, OCH₃), 4,18 (q, J = 7,0, 2H, OCH2CH3), 4,33 (m, 1H, W = 39, H-3), 4,86 (m, 1H, W = 32, NH).

-8CZ 287849 B6

Příklad 10

Syntéza methylesteru 12|3-amino-7a-(N-terc.butoxykarbonyl)amino-3a-ethoxy-karbonyloxy5|3-cholanové kyseliny

Směs shora připraveného 12-ketonu (1,0 g, 1,69 mmolu), octanu amonného (1,2 g, 15,6 mmolu) a kyanhydridoboritanu sodného (245 mg, 3,9 mmol) v terc.butanolu (6 ml) se míchá při teplotě 75 °C v dusíkové atmosféře. Reakce byla ukončena během 5 h (TLC), činidlo se rozloží vodnou kyselinou citrónovou (10% hmot., 10 ml). Tato směs se rozdělí mezi solný roztok (40 ml) a ethylacetát (40 ml), organická vrstva se promyje vodou, vysuší a odpaří. Produkt se chromatografuje na koloně silikagelu (50 g). Směsí toluenu, etheru a methanolu (10:10:1, obj. díly) se eluuje 380 mg (37,9 % hmot.) olejovitého produktu, jeho *H NMR spektrum bylo identické se spektrem 12-aminoderivátu.

Příklad 11

Syntéza methylesteru 12(3-(N-allyloxykarbonyl)amino-7a-(N-terc.butoxy-karbonyl)amino3 α-ethoxycarbony loxy-5 β-cholanové ky se 1 iny

Roztok allylchlormravenčanu (0,8 ml, 7,5 mmol) v toluenu (2 ml) se přidá k roztoku shora uvedeného 12[3-aminoderivátu (1,44 g, 2,4 mmolu) v pyridinu (3 ml) během 10 minut za míchání při 0 °C. Po 1 h se směs vlije na led, produkt se oddělí, rozpustí se v chloroformu, promyje se vodou a vysuší se nad síranem, sodným. Po odpaření se odparek překrystaluje z methanolu při -18 °C (1,5 g, 91,2 % hmot.). T.t. 130-133 °C, [a]_D + 85° (c 1.0): IČ spektrum: 3452, 3399 (NH); 1730, 1392, 1367 (COOR); 1706, 1268, 1250 (NCOOR); 1528, 1511 (amid II). Pro C₃₇H₆oN₂09 (676,9) vypočteno: 65,65 % C, 8,93 % H, 4,14 % N; nalezeno; 65,37 % C, 8,85 % H, 4,01 % N. 'HNMR spektrum: 0,81 (s, 3H, H-18), 0,88 (d, J = 6,1, H-21), 0,95 (s, 3H, H-19), 1,30 (t, J = 7,0, 3H, CH₃), 1,42 (s, 9H, COOC(CH₃)₃), 3,69 (s, 3H, OCH₃), 4,06 (dd, J = 9,7 a 1,2, 1H, H-12), 4,17 (q, J = 7,0, 2H, OCfLCH^, 4,44 (m, 1H, W = 39, H-3), 4,45 (d, J = 5,6, 2H, OCH₂CHCH₂), 5,10 (m, 1H, W = 32, NH), 5,28 (dd, J = 10,3 a 1,5, 1H, cis-CH₂CH=CH2), 5,29 (dd, 1H, J = 16,6 and 1,5, trans-CH₂CH=CH₂), 5,54 (m, 1H, W = 32, NH), 5,90 (ddd, 1H, J = 16,6, 10,3 a 1,5, CH₂CH=CH₂).

Příklad 12

Syntéza methylesteru 12p-(N-allyloxykarbonyl)amino-7a-(N-terc.butoxykarbonyl)amino-3o'hydroxy-5 β-cholanové kyseliny

Uhličitan draselný (130 mg, 0,94 mmolu) ve vodě (1 ml) se přidá k roztoku shora uvedeného produktu (640 mg, 0,94 mmolu) v methanolu (50 ml) a tato směs se udržuje na 20 °C 18 h a při 50 °C 30 minut. Roztok se zahustí ve vakuu na 5 ml, přidá se solný roztok, sraženina se odfiltruje a promyje se vodou. Produkt (464 mg, 81,1 % hmot.) se překrystaluje z acetonu, teplota tání 214 až 216 °C; [a]_D +65° (c 0,9); IČ spektrum: 3609 (OH); 3452, 3347 (NH); 3088, 1654 (C=C); 1705, 1392, 1367, 1243, 1067 (COOR); 1528, 1513 (amid II). Pro C₃₄H₅₆N₂O7 (604,8) vypočteno: 67,52 % C, 9,33 % H, 4,63 % N; nalezeno: 67,47 % C, 9,28 % H, 4,49 % N. 'H NMR spektrum: 0,81 (s, 3H, H-18), 0,88 (d, J = 6,1, H-21), 0,93 (s, 3H, H-19), 1,45 (s, 9H, COOC(CH3)₃), 3,50 (m, 1H, W = 39, H-3), 3,68 (s, 3H, OCH₃), 4,05 (dd, J = 9,7 a 1,2, 1H, H12), 4,59 (d, J = 5,6, 2H, OCH₂CHCH₂), 4,95 (m, 1H, W = 32, NH), 5,24 (dd, J = 10,3 a 1,5, 1H, cis-CH₂CH=CH₂), 5,32 (dd, 1H, J = 16,6 a 1,5, trans CH₂CH=CH,), 5,92 (ddd, 1H, J = 16,6, 10,3 a 1,5,CH3CH=CH₂).

-9CZ 287849 B6

Příklad 13

Syntéza methylesteru 12p-(N-allyloxykarbonyl)amino-7a-(N-terc.butoxykarbonyl)amino-3aoxo-5 β-cholanové kyseliny

Shora uvedený 3a-hydroxyderivát (1,52 g, 2,5 mmolu) se oxiduje jak shora uvedeno. Produkt (1,4 g, 92,4 % hmot.) se překrystaluje ze směsi aceton-heptan, t.t. 217-218 °C; [a]_D +82° (c 1.1); IČ spektrum: 3369 (NH); 3100, 1650 (C=C); 1704, 1392, 1366, 1247, 1164, 939 (COOR); 1524, 1521 (amid II). Pro C34H54N2O7 (602,8) vypočteno: 67,74 % C, 9,03 % H, 4,65 % N; nalezeno: 67,70 % C, 9,11 % H, 4,39 % N. 'H NMR spektrum: 0,85 (s, 3H, H-18), 0,91 (d, J = 6,1, H-21), 1,04 (s, 3H, H-19), 1,42 (s, 9H, COOC(CH3)₃), 3,63 (s, 3H, OCH₃), 3,72 (m, 1H, W = 16, H-7), 4,13 (dd, J = 9,7 a 1,2, 1H, H-12), 4,55 (d, J = 5,6, 2H, OCILCHCHj), 5,22 (dd, J = 10,3 a 1,5, 1H, cis-CH₂CH=CH2), 5,28 (dd, 1H, J = 16,6 a 1,5, trans CH₂CH=CH₂), 5,69 (m, 1H, W = 32, NH), 5,89 (ddd, 1H, J = 16,6, 10,3 a 1,5, CH>CH=CH₂).

Příklad 14

Syntéza 12p-(N-allyloxykarbonyl)amino-7a-(N-terc.butoxykarbonyl)amino-3-oxo-5P-cholanové kyseliny

Shora uvedený keton (2,09 g, 3,5 mmolu) se rozpustí v methanolu (80 ml). Přidá se roztok monohydrátu hydroxidu lithného (1,5 g, 40,5 mmolu) ve vodě (7 ml). Směs se zahřívá na 50 °C 1 h. Alkalita směsi se potlačí přidáním kyseliny citrónové (2,7 g, 14,0 mmolu) a objem se zredukuje na polovinu odpařením ve vakuu. Přidá se solný roztok (100 mt) a sraženina se odfiltruje, promyje vodou a rozpustí v chloroformu. Extrakt se promyje vodou, vysuší nad síranem sodným a odpaří se ve vakuu. Odparek se překrystaluje ze směsi aceton-heptan, t.t. 217 až 218 °C (1,4 g, 68,6 % hmot.). Matečné louhy se přečistí chromatografií, čímž poskytnou další výtěžek 269 mg produktu (celkový výtěžek: 81,7 % hmot.). [a]_D +177° (c 0.9); IČ spektrum: 3628 (OH); 3450 (NH); 1708 (NHCOOR); 1648, 1009 (H₂C=CH-CH₂O); 1270, 1198 (OR); 1502 (amid II). Pro C₃₃H₅₂N₂O₇ (588,8) vypočteno: 67,32 % C, 8,90 % H, 4,76 % N; nalezeno: 67,14 % C, 8,95 % H, 4,55 % N. *H NMR spektrum: 0,82 (s, 3H, H-18), 0,90 (d, J = 6,1, H-21), 1,01 (s, 3H, H-19), 1,47 (s, 9H, COOCXCH^), 3,45 (m, 1H, W = 16, H-7), 4,13 (dd, J = 9,7 a 1,2, 1H, H-12), 4,33 and 4,77 (dublety, J = 5,6, 2H, OCH₂CHCH₂), 5,15 (dd, J = 10,3 a 1,5, 1H, cis-CH₂CH=CH₂), 5,23 (dd, 1H, J = 16,6 a 1,5, trans-CH₂CH=CH₂), 5,86 (ddd, 1H, J = 16,6, 10,3 a 1,5, CILCHCH,), 6,78 (m, 1H, W = 32, NH).

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Steroidní deriváty obecného vzorce I v němž R znamená atom vodíku,

-10CZ 287849 B6

R¹, R² a R³ znamenají aminové skupiny, acylaminové skupiny obecného vzorce R⁴CONH, kde R⁴znamená terc.butoxy- nebo allyloxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku s přímým nebo rozvětveným řetězcem; hydroxylové skupiny, hydroxylové skupiny chráněné acylovou částí kyseliny s 1 až 5 18 atomy uhlíku nebo oxoskupiny, s tím, že každý z R¹, R² a R³ znamená jinou skupinu,

X znamená skupinu OH nebo NHR⁵, přičemž R⁵NH znamená část nosiče, který je schopen přes aminovou skupinu vázat steroidní kyselinu amidovou vazbou, a ío vlnovka znamená, že substituent může mít konfiguraci a nebo β.
2. Způsob výroby steroidních derivátů podle nároku 1 obecného vzorce I, kde R znamená atom vodíku, R¹ znamená skupinu OR⁶, kde R⁶ znamená acylovou část kyseliny s 1 až 18 atomy 15 uhlíku, R² znamená skupinu R⁸-NH, kde R⁸ znamená terc.butoxykarbonylovou skupinu, R³ znamená skupinu NH₂, vlnovka znamená, že substituent může mít konfiguraci a nebo β a X má výše uvedený význam, vyznačující se tím, že se na steroidní derivát obecného vzorce II (II) nebo obecného vzorce III (III)/ v nichž X znamená skupinu OH a vlnovka znamená, že substituent může mít konfiguraci a nebo β, působí reaktivními deriváty kyselin obecného vzorce R⁶OH, v němž R⁶ znamená acylovou část kyseliny s 1 až 18 atomy uhlíku, potom se získaná sloučenina obecného vzorce Ha (Ha) , respektive lila

-11CZ 287849 B6 (lila), v nichž X, R⁶ a vlnovka znamenají jak shora uvedeno, nechá reagovat s N-bromacetamidem za vzniku sloučeniny obecného vzorce IV (IV), v němž X, R⁶ a vlnovka znamenají jak shora uvedeno, načež se získaná sloučenina nechá reagovat s diazomethanem za vzniku methylesterové sloučeniny obecného vzorce IV, v němž R⁶a vlnovka znamenají jak shora uvedeno a X znamená methoxyskupinu, tato sloučenina se nechá reagovat nejdříve s hydrochloridem hydroxylaminu a potom s vodíkem v přítomnosti oxidu platičitého za vzniku sloučeniny obecného vzorce V (V), v němž R⁶ a vlnovka znamenají jak shora uvedeno a X znamená methoxyskupinu, vytvořený amin obecného vzorce V se pak působením diterc.butylkarbonátu převede na sloučeninu obecného vzorce VI (VI), v němž R⁶ a vlnovka znamenají jak shora uvedeno, X znamená methoxyskupinu a R⁸ znamená terc.butoxykarbonylovou skupinu, tato sloučenina se nechá reagovat s N-bromacetamidem, potom s hydrochloridem hydroxylaminu a pak se vodíkem v přítomnosti oxidu platičitého, takže se získá steroidní derivát obecného vzorce I, v němž R a vlnovka znamenají jak shora uvedeno, R¹ znamená skupinu OR⁶, kde R⁶ znamená jak shora uvedeno, R² znamená skupinu R⁸-NH, kde R⁸ znamená terc.butoxykarbonylovou skupinu, R³ znamená skupinu NH₂ a X methoxyskupinu, ten se dále nechá reagovat s monohydrátem hydroxidu lithného, čímž se získá steroidní derivát obecného vzorce I, v němž R, R¹, R² a vlnovka znamenají jak shora uvedeno a X znamená

-12CZ 287849 B6 skupinu OH, a v případě, že X znamená skupinu NHR⁵, kde R⁵ má výše uvedený význam, se nechá reagovat s pevným nosičem s aminovou skupinou za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, v němž X a R, R¹, R² a vlnovka znamenají jak shora uvedeno a X znamená skupinu NHR⁵.
3. Způsob přípravy steroidních derivátů podle nároku 1 obecného vzorce I, kde R znamená atom vodíku, vlnovka znamená, že substituent může mít konfiguraci a nebo β, R¹ znamená skupinu OR⁶, kde R⁶ znamená acylovou část kyseliny s 1 až 18 atomy uhlíku, R² znamená skupinu R⁸-NH, kde R⁸ znamená terc.butoxykarbonylovou skupinu, R³ znamená skupinu NH₂ a X znamená skupinu NHR⁵, kde R⁵ znamená část nosiče, který je schopen přes aminovou skupinu vázat steroidní kyselinu amidovou vazbou, vyznačující se tím, že se steroidní derivát obecného vzorce II nebo III v nichž X znamená skupinu OH a vlnovka znamená, že substituent může mít konfiguraci a nebo β, nechá reagovat s pevným nosičem s aminovou skupinou za vzniku sloučeniny obecného vzorce II, respektive obecného vzorce III, v nichž vlnovka znamená jak shora uvedeno a X znamená skupinu NHR⁵, na tyto deriváty se působí reaktivními deriváty kyselin obecného vzorce R⁶OH, v němž R⁶ znamená acylovou část kyseliny s 1 až 18 atomy uhlíku, potom se takto získaná sloučenina obecného vzorce Ila

Λ k u >cox (Ila), R‘0^ [ OH respektive lila r é (lila) R«O^ 1 >H

v nichž R⁶ a vlnovka znamenají jak shora uvedeno a X znamená skupinu NHR⁵, nechá reagovat s N-bromacetamidem za vzniku sloučeniny obecného vzorce IV

-13CZ 287849 B6 (IV), v němž R⁶ a vlnovka znamenají jak shora uvedeno a X znamená skupinu NHR⁵, načež se získaná sloučenina nechá reagovat nejdříve s hydrochloridem hydroxylaminu a potom s vodíkem v přítomnosti oxidu platičitého za vzniku sloučeniny obecného vzorce V (V), v němž R⁶ a vlnovka znamenají jak shora uvedeno a X znamená skupinu NHR⁵, vytvořený amin obecného vzorce V se pak působením diterc.butylkarbonátu převede na sloučeninu obecného vzorce VI (VI), v němž R⁶ a vlnovka znamenají jak shora uvedeno, X znamená skupinu NHR⁵ a R⁸ znamená terc.butoxykarbonyloxyskupinu, tato sloučenina se nechá reagovat s N-bromacetamidem, potom s hydrochloridem hydroxylaminu a pak s vodíkem v přítomnosti oxidu platičitého, takže se získá steroidní derivát obecného vzorce I, v němž R a vlnovka znamenají jak shora uvedeno, R¹znamená skupinu OR⁶, kde R⁶ znamená jak shora uvedeno, R² znamená skupinu R⁸-NH, kde R⁸znamená jak shora uvedeno, R³ znamená skupinu NH₂ a X znamená skupinu NHR⁵.
4. Použití steroidních derivátů obecného vzorce I podle nároku 1 jako skeletu pro syntetizování knihovny nepeptidových derivátů.