CZ281887B6 - Determination of antimycotics of polyene type by biological method - Google Patents
Determination of antimycotics of polyene type by biological method Download PDFInfo
- Publication number
- CZ281887B6 CZ281887B6 CZ95419A CZ41995A CZ281887B6 CZ 281887 B6 CZ281887 B6 CZ 281887B6 CZ 95419 A CZ95419 A CZ 95419A CZ 41995 A CZ41995 A CZ 41995A CZ 281887 B6 CZ281887 B6 CZ 281887B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- test
- determination
- clone
- antimycotics
- nystatin
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Oblast technikyTechnical field
Vynález se týká způsobu stanovení obsahu antimykotických látek pomocí biologického testu.The invention relates to a method for determining the content of antifungal agents by means of a biological assay.
Dosavadní stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION
Rezidua inhibičních látek v potravinách mohou být potencionálním zdravotním rizikem a mohou způsobovat problémy v některých potravinářských technologiích. Příkladem takových nejdůležitějších inhibičních látek mohou být veterinární farmaka, která se mohou dostat do potravního řetězce v tělech hospodářských zvířat. K. těmto látkám patří i polyenová antimykotika, například nystatin.Inhibitory residues in food can be a potential health risk and cause problems in some food technologies. Examples of such most important inhibitory substances are veterinary pharmaceuticals that can enter the food chain in farmed animals. These include polyene antifungals such as nystatin.
Polyenová antibiotika mají různý stupeň aktivity proti kvasinkám, dimorfním houbám dermatophytům, plísním a protozoím. Zvýšení permeability buněčné membrány citlivých mikroorganismů vlivem těchto antimykotik působí uvolnění aminokyselin, cukrů a jiných metabolitů z cytoplasmy. Důsledkem procesu je lyže a smrt buněk. Jde o kolaps protonového 20 gradientu na plasmatické membráně. Byla prokázána přímá souvislost mezi citlivostí organismů k polyenům a přítomností sterolů v plasmatické membráně buněk na něž se polyeny váží. Taktéž byla prokázána vazba amphotericinu a ostatních polyenů na erytrocyty hostitelských buněk. Toxicita polyenových antibiotik spočívá v jejich aktivitě vůči živočišným buňkám. Vzhledem k problémům s toxicitou, rozpustností, stabilitou a absorpci jsou využívána jen některá z řady 25 polyenových antibiotik, např. nystatin, Natamycin, amphotericin B a Kandicin. Prvním z těchto antibiotik, které bylo terapeuticky využíváno je nystatin.Polyene antibiotics have varying degrees of activity against yeast, dimorphic fungi, dermatophytes, fungi, and protozoa. Enhancement of the cell membrane permeability of susceptible microorganisms due to these antifungal agents results in the release of amino acids, sugars and other metabolites from the cytoplasm. The result is lysis and cell death. It is a collapse of the proton 20 gradient on the plasma membrane. There is a direct correlation between the sensitivity of organisms to polyenes and the presence of sterols in the plasma membrane of cells to which the polyenes bind. Binding of amphotericin and other polyenes to erythrocytes of host cells has also been demonstrated. The toxicity of polyene antibiotics lies in their activity against animal cells. Due to toxicity, solubility, stability and absorption problems, only a few of the 25 polyene antibiotics are used, such as nystatin, Natamycin, amphotericin B and Candicin. The first of these antibiotics to be used therapeutically is nystatin.
Dokonalá metoda stanovení cizorodých látek neexistuje. Testování reziduí je možné provádět buďto přístrojovou technikou, anebo některou z mikrobiálních plošných metod. Výběr metody je 30 dán především účelem, kterému mají výsledky sloužit. Nutno však vzít v úvahu i další kritéria, jako např. cena testu, rychlost stanovení výsledku, univerzálnost metody a možnost jejího plošného (screeningového) využití, potřeba stanovení limitních hodnot, specifikace a kvantifikace jednotlivých cizorodých látek, pracnost použití metody, ale i požadavky na přístrojové vybavení.There is no perfect method of determining foreign matter. Residue testing may be carried out either by instrumentation or by one of the microbial surface methods. The choice of method is determined mainly by the purpose for which the results are intended. However, other criteria must be taken into account, such as the cost of the test, the speed of the result determination, the universality of the method and the possibility of its screening, the need to set limit values, specification and quantification of individual foreign substances, instrumentation.
Přístrojová technika je obecně nákladná, pracná a je nutno provádět samostatně vlastní analýzu pro každou skupinu látek. Celkové množství analýz je limitováno kapacitou daného přístroje. Tím se značně prodlužuje doba k získání výsledků.Instrumentation is generally costly, laborious and needs to be analyzed separately for each group of substances. The total number of analyzes is limited by the capacity of the instrument. This greatly extends the time to obtain results.
Použití plošných mikrobiálních metod pro stanovení toxicity je většinou cenově výhodné, relativně rychlé a ve značné míře univerzální. Nevýhodou těchto metod je relativně nízká citlivost k některým antibiotikům.The use of surface microbial methods for toxicity determination is mostly cost-effective, relatively fast and largely universal. A disadvantage of these methods is the relatively low sensitivity to some antibiotics.
Ve světě se používá mnoho mikrobiálních plošných testů s různými mikroorganismy, např. 45 Bacillus subtilis. Bacillus stearotermophilus nebo Streptococus thermophilus. Příkladem takového postupuje řešení podle amerických patentů č. 4,239,745 a 4,239,852 z r. 1980. Popisují se zde antibiotické detekční metody vhodné pro rychlé stanovení antibiotik ve vzorku tekutiny, např. mléka, jejichž limitní koncentrace je tisícina jednotek na mililitr vzorku. Postup se skládá podle vynálezu z několika kroků. Inkubace vzorku obsahujícího sledované antibiotikum s 50 buňkami citlivými k danému antibiotiku za podmínek, které dovolují molekulám antibiotika navázat se na zásahové místo v buňce nebo na ní. Po oddělení buněk s navázaným antibiotikem od zbytku reakční směsi se stanoví množství tohoto navázaného antibiotika, které je funkcí celkového množství antibiotika ve vzorku.Many microbial blanket tests with various microorganisms are used worldwide, eg 45 Bacillus subtilis. Bacillus stearotermophilus or Streptococus thermophilus. An example of such a process is the solution described in U.S. Pat. Nos. 4,239,745 and 4,239,852 of 1980. Described herein are antibiotic detection methods suitable for the rapid determination of antibiotics in a fluid sample, e.g. The process comprises several steps according to the invention. Incubate a sample containing the antibiotic of interest with 50 cells susceptible to the antibiotic under conditions that allow the antibiotic molecules to bind to the site of intervention in or on the cell. After separating the antibiotic-bound cells from the remainder of the reaction mixture, the amount of this antibiotic that is a function of the total amount of antibiotic in the sample is determined.
- 1 CZ 281887 B6- 1 GB 281887 B6
V potravinářství je používání plošných mikrobiálních metod nejvíce rozšířeno v mlékárenském průmyslu, kde inhibiční vlastnosti cizorodých látek mají významný vliv na zhroucení biotechnologie výroby sýrů a kysaných výrobků. Požadavky na stanovení cizorodých látek v potravinách se v poslední době rozšiřují. Vyskytují se požadavky na stanovení antibiotik nejen v mléce, ale v řadě dalších potravin, mase, rybách, medu. V medu je přítomnost nystatinu např. rizikovým faktorem nejen zdravotním, ale i technologickým, neboť inhibuje kvasné procesy při produkci medoviny. Stanovení těchto antimykotik v potravinách pomocí kvasinky Saccharomyces ceerevisiae s dostatečnou citlivostí není známo.In the food industry, the use of surface microbial methods is most widespread in the dairy industry, where the inhibitory properties of foreign substances have a significant impact on the collapse of the biotechnology of cheese and fermented products. The requirements for the determination of foreign substances in foodstuffs have been increasing recently. There are requirements for the determination of antibiotics not only in milk but also in many other foods, meat, fish, honey. In honey, the presence of nystatin is a risk factor not only for health but also for technology, as it inhibits the fermentation processes in mead production. The determination of these antifungals in food using yeast Saccharomyces ceerevisiae with sufficient sensitivity is unknown.
Používané mikrobiální testy na antimykotika jsou méně citlivé. Existuje standardní plotnová metoda na stanovení nystatinu v lécích. Metoda je málo citlivá, vhodná jen pro vysoké koncentrace nystatinu v lékových formách. Pro stanovení nízkých koncentrací je tato plotnová metoda nevyhovující, protože se inhibiční látka vyředí do živné půdy pod minimální inhibiční koncentraci rychleji než může ovlivnit testovací kulturu. Pro stanovení polyenových antimykotik není známá screeningová metoda.The microbial tests used for antifungals are less sensitive. There is a standard plate method for the determination of nystatin in drugs. The method is poorly sensitive, suitable only for high concentrations of nystatin in dosage forms. For the determination of low concentrations, this plate method is unsatisfactory because the inhibitor substance is diluted into the culture medium below the minimum inhibitory concentration faster than it can affect the test culture. A screening method is not known for the determination of polyene antifungals.
Podstata wnálezuThe essence of the invention
Nová metoda stanovení inhibičních látek podle vynálezu je založena na použití nového citlivějšího klonu mikroorganismu s minimální heterogenitou populace v citlivosti k nystatinu, resp. s vysokou stabilitou kmene v citlivosti k nystatinu, na modifikaci živné půdy a na uspořádání testu tak, že se projeví snížená intenzita metabolických pochodů vlivem inhibiční látky na kvasinkovou kulturu, kultivovanou způsobem dle vynálezu. Jako detektor inhibiční látky je použit mikroorganismus Saccharomyces cerevisiae var. ellipsoideus RJFIS 20, klon 20 - C7, uložený v České sbírce mikroorganismů přírodovědné fakulty Masarykovy univerzity Brno pod číslem CCM 8195, charakterizovaný vysokou citlivostí k nystatinu na půdě připravené dle předloženého vynálezu. Zvýšená citlivost testu je umožněna modifikací standardních živných půd vynecháním glukózy, přídavkem 30% laktózy.The novel method for the determination of inhibitory substances according to the invention is based on the use of a new, more sensitive clone of a microorganism with minimal population heterogeneity in nystatin and resp. with high strain stability in nystatin susceptibility, nutrient modification, and test setup such that reduced intensity of metabolic processes is exerted by the inhibitory agent on the yeast culture cultured by the method of the invention. Saccharomyces cerevisiae var. ellipsoideus RJFIS 20, clone 20 - C7, deposited at the Czech Collection of Microorganisms at the Faculty of Science, Masaryk University in Brno under number CCM 8195, characterized by high sensitivity to nystatin on the soil prepared according to the present invention. Increased sensitivity of the assay is made possible by modification of standard broths by omitting glucose, adding 30% lactose.
Ve vlastním testu na stanovení inhibiční látky se používá sterilních vaniček např. ve formě blistrů, které jsou za sterilních podmínek naplněné agarovým médiem s kvasinkovou kulturou. Toto médium se nechá ztuhnout ve vodorovné poloze vaničky. Pak se vaničky uzavřou fólií a spojí se svařením. Při vlastním provádění testu se fólie v horní části propíchne a do vaničky se přidá 100 až 300 μί. vzorku s fosfátovým pufrem o finální koncentraci 0.0ÍM pH 6.1. Na každém blistru je jedna kontrolní vanička se slepým vzorkem bez inhibiční látky a druhá s limitním množstvím nystatinu. Takto připravený test se uloží do chladu na 3 až 10 °C po dobu 0.5 až 2 h, aby inhibiční látky prod i fundovaly do agaru. Pak se vaničky inkubují v termostatu při teplotě 30 až 35 °C ve svislé poloze 16 až 24 hodin. Tím je testovaný vzorek ve spodní části vaničky a kultura v horní části agaru roste za aerobních podmínek. Po 16 h inkubační doby se kontroluje změna zabarvení agaru, která přechází z modrofialové do žluté barvy. Konec kultivace je dán dobou, kdy je kontrolní vzorek bez nystatinu zežloutlý a kontrolní vzorek s limitním množstvím nystatinu je beze změny zabarvení. Změna barvy vzorků se porovnává se dvěma kontrolními vaničkami, z nichž jedna je se slepým vzorkem bez inhibiční látky a druhá s limitním množstvím nystatinu. Míra změny zabarvení agaru s testovacím vzorkem je úměrná obsahu rezidua inhibiční látky ve zkoumaném vzorku.In the assay for the determination of the inhibitory substance, sterile trays are used, for example in the form of blisters, which are filled under sterile conditions with agar medium with a yeast culture. Allow this medium to solidify in the horizontal position of the tray. The trays are then sealed with foil and welded together. To perform the test, the foil is punctured at the top and 100 to 300 μί is added to the tray. sample with phosphate buffer at a final concentration of 0.0 µM pH 6.1. Each blister contains one control tray with a blank sample without inhibitor and the other with a limit of nystatin. The assay thus prepared is refrigerated at 3 to 10 ° C for 0.5 to 2 hours to allow the inhibitory substances to be loaded into the agar. The trays are then incubated in a thermostat at 30 to 35 ° C in an upright position for 16 to 24 hours. This is the test sample at the bottom of the tray and the culture at the top of the agar grows under aerobic conditions. After an incubation time of 16 h, the change in color of the agar, which changes from blue-violet to yellow, is checked. The end of the culture is determined by the time when the nystatin-free control is yellow and the nystatin-limiting control is unchanged. The color change of the samples is compared with two control trays, one with a blank free of inhibitor and the other with a limit of nystatin. The degree of color change of the agar with the test sample is proportional to the residue content of the inhibitory substance in the test sample.
Jako negativní se odečítají vzorky, které vykazují větší míru zežloutnutí než kontrolní blistr s nystatinem. Jako pozitivní na inhibiční látky se vyhodnocují vzorky, které nevykazují žádnou změnu zabarvení, anebo jejichž změna barvy je menší než u blistru s nystatinem.Samples showing a greater degree of yellowing than the nystatin control blister are read as negative. Samples showing no discoloration or color change less than the nystatin blister are evaluated as positive for inhibitory substances.
Příklady provedení vynálezuDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Příklad 1Example 1
Universální test k prokázání antimykotických inhibičních látekUniversal test for the detection of antifungal inhibitors
Test se provádí na upravené agarové půdě obsahující kvasinkovou kulturu.The test is performed on conditioned agar broth containing yeast culture.
ío Příprava kvasinkové suspenze byla provedena tak, že kultura byla pasážována na šikmém agarovém médiu KSP, jehož 1 litr obsahuje 10 g kaseinového hydrolyzátu, 4,3 g masového extraktu, 10 g NaCl, 100 ml sladiny 7°B a 20 g agaru. pH se upravuje tak, aby po sterilaci 20 min. při tlaku 1,2 kPa bylo její pH 6,1 ±0,1. Inokulum bylo připraveno zaočkováním do tekutého média KSP bez přídavku agaru. Kultivace probíhala při 30 °C za třepání do konce logaritmické 15 fáze růstu. Poté byla kultura ochlazena na 7 °C ve vodní lázni.The preparation of the yeast suspension was carried out by passing the culture on a sloping KSP agar medium containing 1 g of casein hydrolyzate, 4.3 g of meat extract, 10 g of NaCl, 100 ml of wort 7 ° B and 20 g of agar. The pH is adjusted so that after sterilization 20 min. at a pressure of 1.2 kPa, its pH was 6.1 ± 0.1. The inoculum was prepared by seeding in KSP liquid medium without addition of agar. Cultivation was carried out at 30 ° C with shaking until the end of the logarithmic 15 phase of growth. Then the culture was cooled to 7 ° C in a water bath.
Živná půda testu KSL obsahovala v 1 litru hotové agarové půdy 10 g enzymatického kaseinového hydrolyzátu, 4,3 g masového extraktu, 10 g NaCl, 300 g laktosy, 100 ml sladiny 7°B, 15 až 20 g agaru, upravené tak, že po sterilaci 20 min. při tlaku 1,2 kPa bylo její pH 6,1 ± 20 0,1. Do takto připravené tekuté půdy, vychlazené na 45 až 50 °C bylo na 100 ml média přidánoThe KSL broth contained 10 g of enzymatic casein hydrolyzate, 4.3 g of meat extract, 10 g of NaCl, 300 g of lactose, 100 ml of wort 7 ° B, 15 to 20 g of agar per liter of finished agar medium. Sterilization 20 min. at a pressure of 1.2 kPa, its pH was 6.1 ± 20 0.1. To the liquid broth thus prepared, cooled to 45 to 50 ° C, 100 ml of medium was added
2,5 ml 0,4% vodného roztoku chloramfenikolu a 2 ml 0,4% standardně připraveného bromkresolpuru. Do hotového média ochlazeného na 45 °C byla přidána kvasinková kultura tak, že finální optická denzita byla 0,05. Do každé vaničky blistru bylo napipetováno 300 gL média s kulturou a ponecháno ztuhnout ve vodorovné poloze. Tekutý vzorek se zředil fosfátovým pufrem 25 0,1 M o pH 6,1 v poměru 9:1.2.5 ml of a 0.4% aqueous solution of chloramphenicol and 2 ml of a 0.4% standard prepared bromocresolpur. Yeast culture was added to the final medium cooled to 45 ° C so that the final optical density was 0.05. 300 gL of culture medium was pipetted into each blister tray and allowed to set in a horizontal position. The liquid sample was diluted with phosphate buffer 25 0.1 M at pH 6.1 in a ratio of 9: 1.
Vlastní test byl proveden v lékových blistrech na 500 mg tobolky. Blistry byly přikryty přivařovací fólií a zavařeny. Fólie byla desinfikována otřením etanolem. Do každé vaničky byla propíchnuta ve středu horní části asi 3 mm od krajů sterilní jehlou. Do vaniček bylo 30 napipetováno po 300 pL naředěného vzorku. Na každém blistru se dává do jedné vaničky kontrola se slepým vzorkem bez inhibičních látek a jedna kontrola s limitním množstvím nystatinu. Blistry byly inkubovány v lednici 1 h při teplotě 8 °C ve vodorovné poloze, tak aby inhibiční látky prodifundovaly do agaru. Po této době byly blistry ve svislé poloze, tak aby bylo dosaženo aerobních podmínek a kultivovány při 30 °C v termostatu 16 h.The test was performed in drug blisters of 500 mg capsules. Blisters were covered with welding foil and sealed. The film was disinfected by wiping with ethanol. Each tray was pierced at the center of the upper part about 3 mm from the edges with a sterile needle. 30 µL of 300 µL of the diluted sample was pipetted into the trays. A control with a blank sample without inhibitory substances and one control with a limit of nystatin are placed in one tray per blister. The blisters were incubated in the refrigerator for 1 hour at 8 ° C in a horizontal position so that the inhibitory substances were diffused into the agar. After this time, the blisters were in an upright position to achieve aerobic conditions and cultured at 30 ° C in a thermostat for 16 h.
Po 16ti h byla kontrolována změna zabarvení z modrofialové do žluté barvy pomocí bromkresolpuru, který umožňuje detekci metabolických pochodů v kultuře. Jako negativní byly odečteny vzorky které vykazují stejnou nebo větší míru zežloutnutí než kontrolní vanička s nystatinem. Jako pozitivní na inhibiční látky byly vyhodnoceny vzorky beze změny zabarvení 40 anebo s menší mírou než kontrolní vanička s nystatinem.After 16 h, the change in color from blue-violet to yellow was controlled by bromocresolpur, which allows the detection of metabolic processes in culture. Samples showing the same or greater yellowing rate than nystatin control tray were read as negative. Samples with no color change of 40 or less than the nystatin control tray were evaluated as positive for inhibitory substances.
Příklad 2Example 2
Test pro stanovení inhibičních látek v meduTest for the determination of inhibitory substances in honey
Provedení testu bylo shodné s příkladem ad 1. s odchylkami v odstavcích přípravy půdy a ředění vzorku.The test was performed as in Example 1. with variations in soil preparation and sample dilution.
V 1 litr média KS obsahoval 10 g kaseinového hydrolyzátu, 4,3 g masového extraktu, 10 g NaCl, 100 ml sladiny 7°B a 20 g agaru. Další zpracování bylo shodné s příkladem 1. Hotové médium bylo ochlazeno na 45 °C a přidána kvasinková kultura v takovém množství, aby finální optická denzita byla 0,1. Med se ředil fosfátovým pufrem 0,3 M o pH 7.2 v poměru 1:1.In 1 liter KS medium contained 10 g casein hydrolyzate, 4.3 g meat extract, 10 g NaCl, 100 ml wort 7 ° B and 20 g agar. Further processing was as described in Example 1. The finished medium was cooled to 45 ° C and the yeast culture was added in an amount such that the final optical density was 0.1. Honey was diluted 1: 1 with phosphate buffer 0.3 M at pH 7.2.
-3 CZ 281887 B6-3 CZ 281887 B6
Vyhodnocení bylo obdobné jako v příkladě 1.The evaluation was similar to Example 1.
Průmyslová využitelnostIndustrial applicability
Test je využitelný jednak pro screening obsahu inhibičních látek antimykotického typu v potravinách, jako sekundární metabolity přirozené kontaminace potravin, kterým je zatím věnována malá pozornost, přestože z několika set zatím vyizolovaných metabolitů se používá pouze několik vzhledem ke všeobecné vysoké toxicitě těchto látek. Významným způsobem se může působit při ochraně kvasinkových biotechnologických procesů k vytypování kontaminovaných surovin, které mohou negativně ovlivňovat technologický proces. Test může být využitelný i ve zdravotnictví pro kontrolu hladiny antimykotik v tělních tekutinách během terapie.The test is useful for screening the content of antifungal type inhibitory substances in foods as secondary metabolites of natural food contamination, which has so far received little attention, although only a few of the hundreds of isolated metabolites have been used due to their generally high toxicity. It can play an important role in the protection of yeast biotechnological processes for the identification of contaminated raw materials that may negatively affect the technological process. The test may also be useful in healthcare to control the level of antifungals in body fluids during therapy.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ95419A CZ281887B6 (en) | 1995-02-17 | 1995-02-17 | Determination of antimycotics of polyene type by biological method |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ95419A CZ281887B6 (en) | 1995-02-17 | 1995-02-17 | Determination of antimycotics of polyene type by biological method |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ41995A3 CZ41995A3 (en) | 1996-09-11 |
| CZ281887B6 true CZ281887B6 (en) | 1997-03-12 |
Family
ID=5461680
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ95419A CZ281887B6 (en) | 1995-02-17 | 1995-02-17 | Determination of antimycotics of polyene type by biological method |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ281887B6 (en) |
-
1995
- 1995-02-17 CZ CZ95419A patent/CZ281887B6/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ41995A3 (en) | 1996-09-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU609794B2 (en) | A test set and a process for the determination of antibiotics in milk and a novel streptococcus thermophilus strain to be used therein | |
| US6867015B1 (en) | Rapid microbiological test for the detection of antibacterial compounds | |
| WO2009122069A1 (en) | Method for the real-time detection of microorganisms in a liquid culture medium by agglutination | |
| CZ251094A3 (en) | Unit for detecting residues of antibacterial substances in liquids | |
| NO851165L (en) | DOOR IDENTIFICATION SYSTEM IN MINIATURE SCALE | |
| US4279995A (en) | Selective salmonella carbohydrate and medium constructed therefrom | |
| CN108254348B (en) | pH sensitive fluorescent sensor for high-throughput detection of active microorganisms and construction method | |
| Singh et al. | Evaluation of biomass | |
| GB2037811A (en) | Identification of Microorganisms | |
| GB2059990A (en) | Enhancement of the sensitivity of viable microbial cell count by bioluminescent assay of ATP and its use for identification of microbes by means of a short incubation in nutrient media | |
| JPH06125791A (en) | Method of measuring number of bacteria in milk serum and substance containing the same and analyzing kit | |
| US4766063A (en) | Process and device for detecting the activity of a substance on a micro-organism or on a mixture of micro-organisms | |
| Rose et al. | Studies on the biochemical basis of the minimum temperatures for growth of certain psychrophilic and mesophilic micro-organisms | |
| US5418144A (en) | Spindle pole body screen for fungicides | |
| US4532206A (en) | β-Streptococcus selective medium | |
| Harirchi et al. | Sampling, preservation, and growth monitoring of filamentous fungi | |
| CZ281887B6 (en) | Determination of antimycotics of polyene type by biological method | |
| EP0286434A2 (en) | Method for the detection of bacteria and fungi | |
| EP0418113A2 (en) | Microbiological assay kit and method for detecting antibacterial compounds | |
| EP1222469A2 (en) | One step test to detect antimicrobial residues in eggs | |
| EP2252700B1 (en) | Method for real-time detection of microorganisms in a liquid culture medium using cellular lysis | |
| NZ548223A (en) | Methods for detecting the presence of Streptococcus in a sample | |
| CN109971669A (en) | The detection method and application of bifidobacterium pseudocatenulatum and Residue of Antibiotics in Milk | |
| Pitt et al. | Modem methods for detecting and enumerating foodborne fungi | |
| Jewell et al. | Rapid detection of lytic antimicrobial activity against yeast and filamentous fungi |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20070217 |