CZ2022397A3 - The Xe_PB119 bacteriophage strain, a preparation based on this bacteriophage strain and their use against bacterial spot on tomatoes and peppers - Google Patents
The Xe_PB119 bacteriophage strain, a preparation based on this bacteriophage strain and their use against bacterial spot on tomatoes and peppers Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2022397A3 CZ2022397A3 CZ2022-397A CZ2022397A CZ2022397A3 CZ 2022397 A3 CZ2022397 A3 CZ 2022397A3 CZ 2022397 A CZ2022397 A CZ 2022397A CZ 2022397 A3 CZ2022397 A3 CZ 2022397A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- bacteriophage
- strain
- preparation
- bacteriophage strain
- pfu
- Prior art date
Links
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 title claims abstract description 73
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 33
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 title claims abstract description 17
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 title claims abstract description 14
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 title abstract description 14
- 241000758706 Piperaceae Species 0.000 title abstract description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title description 26
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 29
- 239000006002 Pepper Substances 0.000 claims abstract description 10
- 235000016761 Piper aduncum Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 235000017804 Piper guineense Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 235000008184 Piper nigrum Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 8
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims abstract description 7
- 241000722363 Piper Species 0.000 claims description 9
- 241000227653 Lycopersicon Species 0.000 claims 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 claims 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 claims 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims 2
- 244000203593 Piper nigrum Species 0.000 abstract 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 29
- 241001148118 Xanthomonas sp. Species 0.000 description 20
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 17
- 241000815873 Xanthomonas euvesicatoria Species 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 241000567019 Xanthomonas vesicatoria Species 0.000 description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 5
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 241000589634 Xanthomonas Species 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 238000001066 phage therapy Methods 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 240000004160 Capsicum annuum Species 0.000 description 2
- 235000008534 Capsicum annuum var annuum Nutrition 0.000 description 2
- 235000013162 Cocos nucifera Nutrition 0.000 description 2
- 244000060011 Cocos nucifera Species 0.000 description 2
- COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N Uranyl acetate Chemical compound O.O.O=[U]=O.CC(O)=O.CC(O)=O COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 239000001511 capsicum annuum Substances 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000005202 decontamination Methods 0.000 description 2
- 230000003588 decontaminative effect Effects 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 241001187099 Dickeya Species 0.000 description 1
- 241000952519 Dickeya sp. Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010061307 Neck deformity Diseases 0.000 description 1
- 241000531155 Pectobacterium Species 0.000 description 1
- 241000966114 Pectobacterium sp. Species 0.000 description 1
- 241000589615 Pseudomonas syringae Species 0.000 description 1
- 241000208292 Solanaceae Species 0.000 description 1
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 description 1
- 235000002597 Solanum melongena Nutrition 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000589649 Xanthomonas campestris pv. campestris Species 0.000 description 1
- 241000411046 Xanthomonas perforans Species 0.000 description 1
- 241001633980 Xanthonema Species 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000002925 chemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003032 phytopathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/40—Viruses, e.g. bacteriophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
- A01P1/00—Disinfectants; Antimicrobial compounds or mixtures thereof
Abstract
Řešení se týká kmene bakteriofága uloženého v Polské sbírce mikroorganismů Institutu imunologie a experimentální terapie, Polská akademie věd, Vratislav, ul. Weigla 12, pod přírůstkovým číslem Xe_PB119. Kmen bakteriofága může být použit proti bakteriím způsobujícím skvrnitost rajčete a papriky. Řešení se dále týká přípravku proti bakteriím způsobujícím skvrnitost rajčete a papriky, který obsahuje kmen bakteriofága Xe_PB119 o koncentraci alespoň 106 PFU/ml. Přípravek může dále obsahovat kmen bakteriofága Xe_NED111 a dále kmen bakteriofága Phi966.The solution concerns a strain of bacteriophage deposited in the Polish Collection of Microorganisms of the Institute of Immunology and Experimental Therapy, Polish Academy of Sciences, Wroclaw, Weigla Street 12, under accession number Xe_PB119. A strain of bacteriophage can be used against bacteria causing tomato and pepper spot. The solution further relates to a preparation against bacteria causing spotting of tomatoes and peppers, which contains the strain of bacteriophage Xe_PB119 with a concentration of at least 106 PFU/ml. The preparation may also contain the Xe_NED111 bacteriophage strain and the Phi966 bacteriophage strain.
Description
Kmen bakteriofága Xe_PB119, přípravek na bázi tohoto kmene bakteriofága a jejich použití proti onemocnění bakteriální skvrnitosti rajčete a paprikyBacteriophage strain Xe_PB119, preparation based on this bacteriophage strain and their use against bacterial spot disease of tomato and pepper
Oblast technikyField of technology
Vynález se týká kmene bakteriofága, přípravku na bázi tohoto kmene bakteriofága a jejich použití proti onemocnění bakteriální skvrnitosti rajčete a papriky.The invention relates to a strain of bacteriophage, a preparation based on this strain of bacteriophage and their use against bacterial spot disease of tomato and pepper.
Dosavadní stav technikyCurrent state of the art
Bakterie Xanthomonas vesicatoria (Xv), Xanthomonas euvesicatoria pv. euvesicatoria (Xee) a Xanthomonas axonopodis pv. vesicatoria (Xav), jsou fytopatogenní bakterie, které infikují rostliny z čeledi lilkovitých (Solanaceae) a způsobují jejich onemocnění označované jako bakteriální skvrnitost rajčete a papriky. Zdrojem infekce je nejčastěji bakteriemi infikované osivo. Mezi rostlinami se onemocnění přenáší mechanickým kontaktem rostlin způsobeným různými činiteli (větrem, deštěm, pohybem mechanizace, pohybem člověka apod.). Symptomy onemocnění viditelné na listech jsou mimo jiné fialově šedé skvrny s černým středem a žlutým lemem, na zelených plodech to jsou vodnaté, mírně vyvýšené skvrny, které později praskají, a opad květů. Onemocnění snižuje výnos rostlin, znehodnocuje plody a snižuje jejich tržní hodnotu. K zabránění výskytu choroby se používá selekce a likvidace napadených rostlin, dezinfekce rukou a nářadí, používá se nekontaminované nebo chemicky desinfikované osivo.Bacteria Xanthomonas vesicatoria (Xv), Xanthomonas euvesicatoria pv. euvesicatoria (Xee) and Xanthomonas axonopodis pv. vesicatoria (Xav), are phytopathogenic bacteria that infect plants from the eggplant family (Solanaceae) and cause their disease known as bacterial spot of tomato and pepper. The source of infection is most often bacteria-infected seed. The disease is transmitted between plants by mechanical contact of plants caused by various factors (wind, rain, mechanized movement, human movement, etc.). Symptoms of the disease visible on the leaves include purple-grey spots with a black center and a yellow border, on green fruits they are watery, slightly raised spots that later crack, and flower drop. The disease reduces the yield of plants, degrades the fruits and reduces their market value. Selection and disposal of infected plants, disinfection of hands and tools, uncontaminated or chemically disinfected seed are used to prevent the occurrence of the disease.
Laboratorně lze bakterie rodu Xanthomonas inhibovat antibiotiky, jejich použití v produkci potravin je však nežádoucí. Na rostliny je možné aplikovat i jiné mikroorganismy, především jiné bakterie, které mohou konkurovat v životních potřebách patogenním bakteriím a nespecificky tak snižovat jejich výskyt. Nevýhodou tohoto přístupu je pouze omezující účinek na patogenní bakterie, nikoli jejich destrukce. Princip virové neboli fágové terapie proti bakteriím je znám velmi dlouho, rozvíjel se v humánní medicíně především v první polovině 20. století, později však převážila terapie pomocí antibiotik. Fágová terapie využívá rozeznání hostitelské bakterie fágem neboli bakteriofágem, infekce bakterie fágovou nukleovou kyselinou, namnožení fága v buňce a její závěrečný zánik při uvolňování fága z buňky. Projevy infekce fága, jako je rychlost množení fága či množství uvolňovaných virionů na testovacích miskách se liší v závislosti na konkrétní bakterii a konkrétním fágu. Výhodou fágové terapie je její cílení a specificita pouze na bakterie, jako cílové organismy, a proto je bezpečná pro rostliny, hmyz, člověka a jiné organismy. Hostitelským okruhem konkrétního fága může být jen několik málo bakteriálních druhů, jeden bakteriální druh, nebo jen několik kmenů daného druhu. V tom je skryta na druhou stranu i nevýhoda fágové terapie, protože může být neúčinná například na odlišné kmeny hostitelské bakterie, než jsou ty, na které byly fágy selektovány.Bacteria of the genus Xanthomonas can be inhibited by antibiotics in the laboratory, but their use in food production is undesirable. It is also possible to apply other microorganisms to plants, especially other bacteria, which can compete with pathogenic bacteria in their vital needs and thus non-specifically reduce their occurrence. The disadvantage of this approach is only the limiting effect on pathogenic bacteria, not their destruction. The principle of viral or phage therapy against bacteria has been known for a very long time, it was developed in human medicine mainly in the first half of the 20th century, but later antibiotic therapy prevailed. Phage therapy uses recognition of the host bacterium by a phage or bacteriophage, infection of the bacterium with phage nucleic acid, multiplication of the phage in the cell and its final destruction when the phage is released from the cell. Manifestations of phage infection, such as the rate of phage multiplication or the amount of virions released on test dishes, vary depending on the particular bacterium and the particular phage. The advantage of phage therapy is its targeting and specificity only to bacteria as target organisms, and therefore it is safe for plants, insects, humans and other organisms. The host range of a particular phage can be only a few bacterial species, one bacterial species, or only a few strains of a given species. On the other hand, this also hides the disadvantage of phage therapy, because it can be ineffective, for example, on different strains of the host bacteria than those for which the phages were selected.
Dokument EP 2195419 popisuje obecnou existenci bakteriofága či bakteriofágů, které jsou obecně účinné proti bakteriím rodu Xanthomonas, zejména Xanthomonas campestris pv. vesicatoria. Dokument se zabývá zejména přípravou suchého bakteriofágového přípravku, následně použitelného ve formě roztoku. V dokumentu však není uvedeno, jakým způsobem lze přípravek použít, není uvedeno rozmezí hostitelů, proti kterým by zmiňovaný fág či fágy byly účinné, ani nejsou uvedeny žádné podmínky využití tohoto fága či fágů.Document EP 2195419 describes the general existence of a bacteriophage or bacteriophages which are generally effective against bacteria of the genus Xanthomonas, in particular Xanthomonas campestris pv. vesicatoria. The document mainly deals with the preparation of a dry bacteriophage preparation, which can subsequently be used in the form of a solution. However, the document does not state how the product can be used, does not state the range of hosts against which the mentioned phage or phages would be effective, nor does it state any conditions for the use of this phage or phages.
Úkolem vynálezu je proto najít vhodný kmen bakteriofága, který by byl schopen účinně a rychle působit proti specifickým bakteriálním kmenům způsobující onemocnění bakteriální skvrnitost rajčete a papriky, a vytvořit přípravek, který by byl účinný proti těmto bakteriálním kmenům a najít jejich vhodné použití proti onemocnění bakteriální skvrnitosti rajčat a paprik.The task of the invention is therefore to find a suitable strain of bacteriophage that would be able to act effectively and quickly against specific bacterial strains causing bacterial spot disease of tomato and pepper, and to create a preparation that would be effective against these bacterial strains and to find their appropriate use against bacterial spot disease tomatoes and peppers.
- 1 CZ 2022 - 397 A3- 1 CZ 2022 - 397 A3
Podstata vynálezuThe essence of the invention
Tento úkol je vyřešen pomocí bakteriofága uloženého v Polské sbírce mikroorganismů Institutu imunologie a experimentální terapie, Polská akademie věd, Vratislav, ul. Weigla 12, (Polish Collection of Microorganisms, Institut of Immunology and Experimental Therapy, Polish Academy of Science, ul. Weigla 12, Wroclaw) pod přírůstkovým číslem Xe_PB119. Vynález se rovněž zabývá přípravkem obsahujícím tohoto bakteriofága a jeho použitím.This task is solved with the help of bacteriophage stored in the Polish Collection of Microorganisms of the Institute of Immunology and Experimental Therapy, Polish Academy of Sciences, Wroclaw, Weigla Street 12, (Polish Collection of Microorganisms, Institute of Immunology and Experimental Therapy, Polish Academy of Science, Weigla Street 12 , Wroclaw) under accession number Xe_PB119. The invention also deals with a preparation containing this bacteriophage and its use.
Přípravek obsahující kmen bakteriofága Xe_PB119, také přípravek s výhodou obsahující dále kmen bakteriofága Xe_NED111 a také přípravek obsahující s výhodou dále kmen bakteriofága Phi966 využívá působení přirozeného antagonisty bakterií Xv, Xee a Xav, kterým je specifický bakteriální virus (bakteriofág, fág). Virus využívá tyto bakterie jako své hostitele, po dokončení svého replikačního cyklu bakteriální buňku zahubí (lyzuje) a sám se uvolní do prostředí. Virus nemá kromě bakterií jiné hostitele, pokud se v prostředí nenachází vhodný hostitel, virus působením fyzikálních a chemických vlivů prostředí postupně zaniká. Druhou složkou přípravku je bakteriofág Xe_NED111, který je uložený taktéž v Polské sbírce mikroorganismů Institutu imunologie a experimentální terapie, Polská akademie věd, Vratislav, ul. Weigla 12, a třetí složkou přípravku je bakteriofág Phi966, které mají odlišný genom od genomu bakteriofága Xe_PB119, ale stejné rozmezí hostitelů, je proto oprávněné předpokládat, že v případě výskytu rezistentní bakterie k jedné složce přípravku, lytickou funkci bude vykonávat druhá složka přípravku, případně třetí složka přípravku. Přípravek může tedy s výhodou obsahovat 30 až 70 % počtu PFU kmene bakteriofága Xe_PB119 a 30 až 70 % počtu PFU kmene bakteriofága Xe_NED111 a dále může obsahovat 10 až 30 % počtu PFU kmene bakteriofága Phi966. Virus Xe_PB119 je přijímán kořenovým systémem rostlin a je distribuován v rostlinách.The preparation containing the Xe_PB119 bacteriophage strain, also the preparation preferably also containing the Xe_NED111 bacteriophage strain, and also the preparation containing preferably the Phi966 bacteriophage strain uses the action of the natural antagonist of the bacteria Xv, Xee and Xav, which is a specific bacterial virus (bacteriophage, phage). The virus uses these bacteria as its host, after completing its replication cycle it kills (lyses) the bacterial cell and releases itself into the environment. The virus has no host other than bacteria, if there is no suitable host in the environment, the virus gradually disappears due to the physical and chemical effects of the environment. The second component of the preparation is bacteriophage Xe_NED111, which is also stored in the Polish Collection of Microorganisms of the Institute of Immunology and Experimental Therapy, Polish Academy of Sciences, Wrocław, ul. Weigla 12, and the third component of the preparation is bacteriophage Phi966, which have a different genome from that of bacteriophage Xe_PB119, but the same range of hosts, it is therefore justified to assume that in the event of the occurrence of bacteria resistant to one component of the product, the lytic function will be performed by the second component of the product, or the third component of the product. The preparation can therefore advantageously contain 30 to 70% of the number of PFU of the Xe_PB119 bacteriophage strain and 30 to 70% of the number of PFU of the Xe_NED111 bacteriophage strain, and may also contain 10 to 30% of the number of PFU of the Phi966 bacteriophage strain. Xe_PB119 virus is taken up by the plant root system and distributed in plants.
Ze vzorku půdy z území ČR byl izolován bakteriální virus neboli bakteriofág označený Xe_PB119, který jako své hostitele využívá kmeny bakterie Xanthomonas euvesicatoria neboli X. euvesicatoria neboli Xe. Na miskách s hostitelem X. euvesicatoria 1940 vytváří bakteriofág Xe_PB119 po 16hodinové inkubaci lytické zóny o průměru 4 mm. Typový izolát viru má dsDNA genom a na základě molekulárně genetických kritérií byl klasifikován v čeledi Schitoviridae jako představitel dosud nepojmenovaného rodu. Podstatou přípravku je směs fágových lyzátů viru Xe_NED111 a jeho přirozených variant, např. bakteriofágu Phi966, a fágového lyzátu viru Xe_PB119 a jeho přirozených variant ve stabilizovaném vodném roztoku o výsledném titru alespoň 106 PFU/ml, s účinností proti bakteriím způsobujícím bakteriální skvrnitost rajčete a paprik na území ČR. Účinek přípravku byl sledován na souboru 26 kmenů X. euvesicatoria, X. vesicatoria, X. campestris pv. campestris a Xanthonema sp. izolovaných ze symptomatických rostlin pěstovaných na území České republiky, nebo z prostředí farem nebo deponovaných ve sbírkách mikroorganismů.A bacterial virus or bacteriophage designated Xe_PB119 was isolated from a soil sample from the territory of the Czech Republic, which uses strains of the bacterium Xanthomonas euvesicatoria or X. euvesicatoria or Xe as its host. On plates with a host X. euvesicatoria 1940, bacteriophage Xe_PB119 forms a lytic zone with a diameter of 4 mm after 16 hours of incubation. The type isolate of the virus has a dsDNA genome and, based on molecular genetic criteria, was classified in the Schitoviridae family as a representative of an as yet unnamed genus. The substance of the preparation is a mixture of phage lysates of the virus Xe_NED111 and its natural variants, e.g. bacteriophage Phi966, and phage lysate of the virus Xe_PB119 and its natural variants in a stabilized aqueous solution with a final titer of at least 10 6 PFU/ml, with effectiveness against bacteria causing bacterial spotting of tomato and paprika in the territory of the Czech Republic. The effect of the preparation was monitored on a set of 26 strains of X. euvesicatoria, X. vesicatoria, X. campestris pv. campestris and Xanthonema sp. isolated from symptomatic plants grown in the territory of the Czech Republic, or from the environment of farms or deposited in collections of microorganisms.
Výhody kmene bakteriofága Xe_PB119 a přípravku obsahujícího bakteriofága Xe_PB119 a bakteriofága Xe_NED111 spočívají zejména v tom, že přípravek obsahuje bakteriální lyzát virů specifických k českým kmenům bakterií způsobujících bakteriální skvrnitost rajčat a paprik, je efektivní, neboť rychle a účinně eliminuje přítomnost bakterií způsobující onemocnění bakteriální skvrnitosti rajčat a paprik. Přípravek obsahující výše uvedené dva bakteriofágy je doplněn třetím bakteriofágem, který rozšiřuje rozmezí kmenů, proti kterým je přípravek účinný.The advantages of the Xe_PB119 bacteriophage strain and the preparation containing the Xe_PB119 bacteriophage and the Xe_NED111 bacteriophage mainly consist in the fact that the preparation contains a bacterial lysate of viruses specific to the Czech strains of bacteria causing bacterial spotting of tomatoes and peppers, it is effective because it quickly and effectively eliminates the presence of bacteria causing the bacterial spotting disease of tomatoes and paprika. The preparation containing the two bacteriophages mentioned above is supplemented with a third bacteriophage, which extends the range of strains against which the preparation is effective.
Objasnění výkresůClarification of drawings
Uvedený vynález bude blíže objasněn na následujících výkresech, kde:Said invention will be explained in more detail in the following drawings, where:
obr. 1 znázorňuje morfologii viru Xe_PB119 pozorovaného v elektronovém mikroskopu po kontrastování uranyl-acetátem,Fig. 1 shows the morphology of the Xe_PB119 virus observed in an electron microscope after contrasting with uranyl acetate,
- 2 CZ 2022 - 397 A3 obr. 2 zobrazuje graf účinnosti jednotlivých bakteriofágů v tekutém médiu, obr. 3 zobrazuje graf porovnání účinnosti směsí bakteriofágů a samotného fága Xe_PB 119.- 2 CZ 2022 - 397 A3 Fig. 2 shows a graph of the efficiency of individual bacteriophages in a liquid medium, Fig. 3 shows a graph comparing the efficiency of mixtures of bacteriophages and the Xe_PB 119 phage itself.
Příklady uskutečnění vynálezuExamples of implementation of the invention
Příklad 1 - Způsob nalezení bakteriofága Xe_PB119Example 1 - Method of finding bacteriophage Xe_PB119
Jeden gram půdy byl ve zkumavce doplněn 5 ml sterilního LB média, kultivován na třepačce 16 hodin při 20 °C a poté odstředěn při 8 000 x g 10 minut. Supernatant byl filtrován přes bakteriální filtr o velikosti pórů 0,22 μm a uchován při 10 °C pro další použití. Přítomnost lytických bakteriofágů v jednotlivých vzorcích půdy byly testovány v tekuté kultuře v provedení v ELISA destičce. Do jednotlivých jamek bylo aplikováno 100 μl exponenciálně rostoucí kultury bakteriálního kmenu X. euvesicatoria 1940 a přidáno po 10 μl jednotlivých filtrovaných supernatantů. Na přístroji Tecan Spectra byl proveden odečet absorbance při 405 nm. Po inkubaci 16 h při 27 °C byl znovu proveden odečet absorbance a obě hodnoty porovnány. Jamky, ve kterých byl zaznamenán největší pokles hodnot absorbance při 405 nm, obsahovaly bakteriofágy a byly vybrány pro další selekci.One gram of soil was supplemented with 5 mL of sterile LB medium in a test tube, cultured on a shaker for 16 h at 20 °C, and then centrifuged at 8,000 x g for 10 min. The supernatant was filtered through a 0.22 μm pore size bacterial filter and stored at 10 °C for further use. The presence of lytic bacteriophages in individual soil samples was tested in liquid culture in an ELISA plate. 100 μl of the exponentially growing culture of the bacterial strain X. euvesicatoria 1940 was applied to individual wells and 10 μl of individual filtered supernatants were added. Absorbance was read at 405 nm on a Tecan Spectra instrument. After incubation for 16 h at 27 °C, the absorbance was read again and both values were compared. The wells in which the largest decrease in absorbance values at 405 nm were recorded contained bacteriophages and were selected for further selection.
Metodika testování účinnosti byla založena na principu fágové typizace. Na Petriho misky obsahující pevnou vrstvu vytvořenou z 15 ml LB média (Sigma-Aldrich L3147) s 1,5% agarem, byly nality 4 ml LB média obsahujícího 0,45% agar temperovaný na 45 °C a 20 μl exponenciálně rostoucí kultury testovaného bakteriálního kmene. Po ztuhnutí bylo na misky aplikováno po 1 μl vzorku fága Xe_NED111, nebo Xe_PB119, nebo jiného, v rozsahu ředění 100 až 10-5 (celkem 6 kapek po 1 μ!). Po inkubaci 16 h při 27 °C byly misky vizuálně hodnoceny. Jako lyžující daný bakteriální kmen byl označen fág tehdy, pokud se lyze projevila aspoň v rozsahu tří ředění. Virus Xe_PB119 lyzoval 23 z 26 kmenů Xanthomonas, virus Xe_NED111 lyzoval stejných 23 kmenů z 26 testovaných (viz tabulka 1).The efficacy testing methodology was based on the principle of phage typing. On Petri dishes containing a solid layer formed from 15 ml of LB medium (Sigma-Aldrich L3147) with 1.5% agar, 4 ml of LB medium containing 0.45% agar tempered at 45 °C and 20 μl of an exponentially growing culture of the tested bacterial tribes. After solidification, 1 μl sample of phage Xe_NED111, or Xe_PB119, or another, in the dilution range of 10 0 to 10 -5 (a total of 6 drops of 1 μ!), was applied to the dishes. After incubation for 16 h at 27 °C, the dishes were visually evaluated. A phage was designated as lysing a given bacterial strain if lysis occurred at least in the range of three dilutions. The Xe_PB119 virus lysed 23 of the 26 Xanthomonas strains, the Xe_NED111 virus lysed the same 23 of the 26 strains tested (see Table 1).
- 3 CZ 2022 - 397 A3- 3 CZ 2022 - 397 A3
Tabulka 1. Lytický účinek bakteriofágů proti bakteriím Xanthomonas a jiným druhůmTable 1. Lytic effect of bacteriophages against Xanthomonas bacteria and other species
+ = bakteriofág způsobuje lyži buněk, - = bakteriofág nelyžuje buňky, Phi966 = přirozená varianta fága Xe_NED 111+ = bacteriophage causes cell lysis, - = bacteriophage does not lyse cells, Phi966 = natural phage variant Xe_NED 111
V jiném pokusu byly lyzovací schopnosti jednotlivých bakteriofágů testovány v tekutém 10 prostředí ve formátu ELISA. Do jamek bylo aplikováno 100 μΐ exponenciálně rostoucí bakteriální kultury. Byl připraven přípravek, konkrétně z purifikátu bakteriofágů bylo připravenoIn another experiment, the lysis abilities of individual bacteriophages were tested in a liquid medium in an ELISA format. 100 μΐ of exponentially growing bacterial culture was applied to the wells. A preparation was prepared, specifically from purified bacteriophages
-4CZ 2022 - 397 A3 ředění v rozsahu 10-3 až 10-5 a do jamek bylo přidáno 10 μΐ z každého ředění, destička byla kultivována při 27 °C a absorbance při 405 nm byla odečítána v 30 min intervalech, jak je zobrazeno v grafU na obr. 2. Za daných podmínek docházelo přibližně od 60. minuty působení bakteriofágů k trvalému snížení hustoty bakteriální kultury způsobené lytickým působením fága Xe_PB119 na hostitelské bakterie. Stejné působení můžeme pozorovat i u bakteriofága Xe_NED111, u bakteriofága Phi966 až kolem 120. minuty. V kontrolní reakci bez přítomnosti bakteriofágů docházelo ke kontinuálnímu zvyšování hustoty bakterie.-4CZ 2022 - 397 A3 dilutions in the range of 10 -3 to 10 -5 and 10 μΐ of each dilution was added to the wells, the plate was cultured at 27 °C and the absorbance at 405 nm was read at 30 min intervals as shown in graphU in Fig. 2. Under the given conditions, there was a permanent decrease in the density of the bacterial culture caused by the lytic action of the Xe_PB119 phage on the host bacteria from approximately the 60th minute of bacteriophage exposure. The same action can be observed in bacteriophage Xe_NED111, in bacteriophage Phi966 up to around the 120th minute. In the control reaction without the presence of bacteriophages, there was a continuous increase in the density of bacteria.
V jiném pokusu byly testovány lyzovací schopnosti směsí bakteriofágů v tekuté kultuře ve formátu ELISA. Do jamek bylo aplikováno 100 μl exponenciálně rostoucí kultury testovaného bakteriálního kmene a 106 pfu fágů samostatně, nebo v kombinacích, v maximálním objemu 10 pl. Destička byla inkubována při 27 °C a absorbance při 405 nm byla odečítána v časových intervalech, jak je zobrazeno v grafu na obr. 3. Byly použity přípravky obsahující směs bakteriofágu Xe_NED111 a bakteriofágu Xe_PB119 v poměru počtu PFU 50:50 a dále byl použit přípravek obsahující směs bakteriofágu Xe_NED111 a bakteriofágu Xe_PB119 a bakteriofágu Phi966 v poměru počtu PFU 40:50:10. Z grafu na obr. 3 vyplývá, že v případě použití přípravku obsahující směs bakteriofágů Xe_NED111 a Xe_PB119 a směs Xe_NED111, Xe_PB118 a Phi966 dochází k poklesu koncentrace bakterií ještě před 60. minutou, zatímco koncentrace v kontrolním vzorku bez bakteriofágů roste.In another experiment, the lysis abilities of bacteriophage mixtures in liquid culture were tested in ELISA format. 100 μl of an exponentially growing culture of the tested bacterial strain and 106 pfu of phages were applied to the wells individually or in combinations, in a maximum volume of 10 μl. The plate was incubated at 27 °C and the absorbance at 405 nm was read at time intervals as shown in the graph in Fig. 3. Preparations containing a mixture of bacteriophage Xe_NED111 and bacteriophage Xe_PB119 in the ratio of the number of PFU 50:50 were used and further containing a mixture of bacteriophage Xe_NED111 and bacteriophage Xe_PB119 and bacteriophage Phi966 in the ratio of the number of PFU 40:50:10. The graph in Fig. 3 shows that in the case of using a preparation containing a mixture of bacteriophages Xe_NED111 and Xe_PB119 and a mixture of Xe_NED111, Xe_PB118 and Phi966, the concentration of bacteria decreases even before the 60th minute, while the concentration in the control sample without bacteriophages increases.
Příklad 2 - Způsob přípravy koncentrovaného roztoku bakteriofágaExample 2 - Method of preparing a concentrated bacteriophage solution
Selektovaný vzorek podle Příkladu 1 byl naředěn 101 až 105 x v PB pufru (150 mM NaCl, 40 mM Tris-HCl pH 7,2, 10 mM MgSOA smíchán s 20 pl exponenciálně rostoucí kultury X. euvesicatoria 1940 a 4 ml živného média v 0,45% agaru temperovaného na 45°C a vylit na povrch Petriho misek s vrstvou LB média v 1,5% agaru. Po 16hodinové inkubaci při 27 °C byly dobře oddělené čiré zóny (plaky) jednotlivě odebrány do PB pufru a pasážovací postup byl opakován 4x. Do exponenciálně rostoucí kultury X. euvesicatoria 1940 v tekutém živném médiu byl přidán bakteriofág po 4. pasáži a kultura byla inkubována 16 hodin při 27°C. Bakteriální lyzát byl odstředěn centrifugací 10 min při 20 000 x g a supernatant filtrován přes bakteriální filtr o velikosti pórů 0,22 pm. Filtrovaný lyzát byl naředěn 1:1 (v:v) v 20 mM Tris-HCl pH 7,2 pufru, aplikován na FPLC kolonu CIMmultus QA (Sartorius), která byla promývána stejným pufrem. Bakteriofág, který byl zachycen kolonou, byl z ní uvolněn vymytím 1M NaCl v 20 mM Tris-HCl pH 7,2 pufru a poté dialyzován proti pufru PB. Koncentrace získaného purifikátu fága byla zjištěna metodou fágové typizace, jak bylo uvedeno výše. Takto připravený purifikát fága obsahoval 109 až 1011 PFU/ml. Na obr. 1 je znázorněn vzhled částice viru Xe_PB119 pozorovaný v elektronovém mikroskopu po kontrastování uranyl-acetátem. Na částicích o rozměrech 55 (±3) x 60 (±3) nm je viditelný jen velmi krátký krček, částice netvoří bičík.The selected sample according to Example 1 was diluted 10 1 to 10 5 x in PB buffer (150 mM NaCl, 40 mM Tris-HCl pH 7.2, 10 mM MgSOA mixed with 20 µl of an exponentially growing culture of X. euvesicatoria 1940 and 4 ml of nutrient medium in 0.45% agar tempered to 45°C and poured onto the surface of Petri dishes with a layer of LB medium in 1.5% agar.After 16 hours of incubation at 27°C, well-separated clear zones (plaques) were individually collected in PB buffer and passaged procedure was repeated 4x. Bacteriophage was added to an exponentially growing culture of X. euvesicatoria 1940 in liquid nutrient medium after the 4th passage and the culture was incubated for 16 hours at 27°C. The bacterial lysate was centrifuged for 10 min at 20,000 x g and the supernatant was filtered through a bacterial filter with a pore size of 0.22 pm. The filtered lysate was diluted 1:1 (v:v) in 20 mM Tris-HCl pH 7.2 buffer, applied to a CIMmultus QA FPLC column (Sartorius), which was washed with the same buffer. Bacteriophage, that was captured by the column was released from it by washing with 1 M NaCl in 20 mM Tris-HCl pH 7.2 buffer and then dialyzed against PB buffer. The concentration of the purified phage obtained was determined by the phage typing method as mentioned above. The purified phage thus prepared contained 10 9 to 10 11 PFU/ml. Fig. 1 shows the appearance of the Xe_PB119 virus particle observed in an electron microscope after contrasting with uranyl acetate. Only a very short neck is visible on particles with dimensions of 55 (±3) x 60 (±3) nm, the particles do not form a flagellum.
Příklad 3 - Dekontaminace bakterií na povrchu semen paprik a rajčatExample 3 - Decontamination of bacteria on the surface of pepper and tomato seeds
Semena je možné povrchově sterilizovat inkubací v roztoku fága např. postupem: Semena papriky nebo rajčat byla povrchově sterilizována 10 minut v 5% roztoku Sava, propláchnuta destilovanou vodou a vysušena mezi filtračními papíry. Semena byla uměle infikována inkubací 15 minut v pufrovaném roztoku bakterie X. euvesicatoria 1940 o koncentraci 104 CFU/ml. Po odsátí roztoku byla semena osušena mezi filtračními papíry a poté inkubována 60 minut v pufrovaném roztoku viru Xe_PB119 o koncentraci 106 PFU/ml. Po odsátí roztoku byla semena osušena mezi filtračními papíry a inkubována 15 minut v 1 ml živného média (LB). 0,1 ml média bylo rozetřeno na povrch živného média v Petriho misce a inkubováno 16 hodin při 27 °C. Po inkubaci nebyly na misce viditelné žádné kolonie X. euvesicatoria. Konstatujeme tedy, že fágový roztok způsobil snížení koncentrace bakterie pod detekovatelnou mez.Seeds can be surface sterilized by incubating in a phage solution, e.g. following the procedure: Pepper or tomato seeds were surface sterilized for 10 minutes in a 5% Sava solution, rinsed with distilled water and dried between filter papers. The seeds were artificially infected by incubation for 15 minutes in a buffered solution of the bacterium X. euvesicatoria 1940 with a concentration of 10 4 CFU/ml. After aspirating the solution, the seeds were dried between filter papers and then incubated for 60 minutes in a buffered solution of Xe_PB119 virus with a concentration of 10 6 PFU/ml. After aspirating the solution, the seeds were dried between filter papers and incubated for 15 min in 1 ml nutrient medium (LB). 0.1 ml of the medium was spread on the surface of the nutrient medium in a Petri dish and incubated for 16 hours at 27°C. After incubation, no colonies of X. euvesicatoria were visible on the plate. Thus, we conclude that the phage solution caused a decrease in the concentration of bacteria below the detectable limit.
- 5 CZ 2022 - 397 A3- 5 CZ 2022 - 397 A3
Příklad 4 - Inokulace rostlin virem Xe_PB119 a jeho detekceExample 4 - Inoculation of plants with Xe_PB119 virus and its detection
Virus Xe_PB119 je přijímán kořenovým systémem rostlin a je distribuován v rostlinách. Semenáče rajčat ve stadiu 2 pravých listů byly pěstovány ve sterilním substrátu z kokosové drti o objemu 250 cm3. Do substrátu bylo nalito 25 ml pufrovaného roztoku viru o koncentraci 106 PFU/ml a rostliny byly pěstovány další dva měsíce. Virus byl detekován metodou PCR s použitím SapphireAmp fast PCR mix (Takara Bio), primerů 2647: 5'GAATGCAGCGGGTTGTTCC-3' a 2648: 5'-CGACATTGATCTGACCTCCG-3' a extraktu nukleových kyselin z řapíků listů. Amplifikační protokol byl 98 °C/1 min, 2 x 35 cyklů 95 °C/10 s, 60 °C/20 s a 72 °C/30 s. Po elektroforetickém rozdělení na agarózovém gelu měl virový produkt velikost 375 pb.Xe_PB119 virus is taken up by the plant root system and distributed in plants. Tomato seedlings at the stage of 2 true leaves were grown in a sterile substrate made of shredded coconut with a volume of 250 cm 3 . 25 ml of a buffered virus solution with a concentration of 10 6 PFU/ml was poured into the substrate and the plants were grown for another two months. Virus was detected by PCR method using SapphireAmp fast PCR mix (Takara Bio), primers 2647: 5'GAATGCAGCGGGTTGTTCC-3' and 2648: 5'-CGACATTGATCTGACCTCCG-3' and nucleic acid extract from leaf petioles. The amplification protocol was 98 °C/1 min, 2 x 35 cycles of 95 °C/10 s, 60 °C/20 s and 72 °C/30 s. After electrophoretic separation on an agarose gel, the viral product had a size of 375 bp.
Příklad 5 - Inokulace rostlin virem Xe_PB119 ve směsi s jinými viryExample 5 - Inoculation of plants with Xe_PB119 virus mixed with other viruses
Inokulační roztok obsahoval 5 % bakteriofága Xe_PB119 o koncentraci 106 PFU/ml a celkem 95 % nepříbuzných fágů Dickeya virus Ds3 a Pectobacterium virus P251, specifických vůči bakterií Dickeya sp. a Pectobacterium sp. (o koncentraci 106 PFU/ml), resp. 50 % Xe_PB119 a celkem 50 % virů Ds3 a P251. Semenáče rajčat ve stadiu 2 pravých listů byly pěstovány ve sterilním substrátu z kokosové drti o objemu 250 cm3. Do substrátu bylo nalito 25 ml pufrovaného roztoku virů a rostliny byly pěstovány další měsíc. Virus byl detekován způsobem jako v příkladu 4. Po elektroforetickém rozdělení na agarózovém gelu měl virový produkt velikost 375 pb.The inoculation solution contained 5% bacteriophage Xe_PB119 with a concentration of 106 PFU/ml and a total of 95% unrelated phages Dickeya virus Ds3 and Pectobacterium virus P251, specific for Dickeya sp. and Pectobacterium sp. (with a concentration of 106 PFU/ml), or 50% Xe_PB119 and a total of 50% Ds3 and P251 viruses. Tomato seedlings at the stage of 2 true leaves were grown in a sterile substrate made of shredded coconut with a volume of 250 cm 3 . 25 ml of buffered virus solution was poured into the substrate and the plants were grown for another month. The virus was detected as in Example 4. After electrophoretic separation on an agarose gel, the virus product had a size of 375 bp.
Příklad 6 - Dekontaminace předmětů povrchově kontaminovaných bakterií Xanthomonas sp.Example 6 - Decontamination of objects surface contaminated with bacteria Xanthomonas sp.
Sterilní skleněná tyčinka o průměru 5 mm a ocelová laboratorní špachtle byly v délce 5 cm po dobu 5 minut ponořeny do pufrovaném roztoku X. euvesicatoria (1940) o koncentraci 104 CFU/ml. Poté byly vyňaty a ponechány oschnout 5 minut na filtračním papíru. Poté byly ponořeny v délce 5 cm po dobu 60 minut do roztoku viru Xe_PB119 o koncentraci 106 PFU/ml. Po vynětí a oschnutí 5 minut byly ponořeny v délce 5 cm do živného média po dobu 5 minut a poté bylo 0,1 ml média inokulováno na povrch živného média v Petriho misce a inkubováno 16 hodin při 27 °C. Po inkubaci nebyly na misce viditelné žádné kolonie Xee.A sterile glass rod 5 mm in diameter and a steel laboratory spatula were immersed 5 cm in length for 5 min in a buffered solution of X. euvesicatoria (1940) at a concentration of 10 4 CFU/ml. They were then taken out and allowed to dry for 5 minutes on filter paper. They were then immersed in a 5 cm length for 60 minutes in a solution of the Xe_PB119 virus with a concentration of 10 6 PFU/ml. After being taken out and dried for 5 minutes, they were immersed 5 cm into the nutrient medium for 5 minutes, and then 0.1 mL of the medium was inoculated onto the surface of the nutrient medium in a Petri dish and incubated for 16 hours at 27°C. After incubation, no Xee colonies were visible on the dish.
Průmyslová využitelnostIndustrial applicability
Kmen bakteriofága Xe_PB119 a přípravek obsahující tento kmen, případně přípravek obsahující dále kmen bakteriofága Xe_NED111 případně přípravek obsahující dále kmen bakteriofága Phi966 je možné aplikovat za účelem eliminace nebo potlačení bakteriální infekce rostlin spolu se závlahou nebo výživou nebo postřikem nadzemních částí nebo mechanickým očkováním nebo ve směsi s jinými viry nebo také za účelem eliminace bakterií z kontaminovaných nástrojů a prostředí nebo za účelem eliminace bakterií z povrchu semen.Bacteriophage strain Xe_PB119 and a preparation containing this strain, or a preparation containing the Xe_NED111 bacteriophage strain or a preparation containing the Phi966 bacteriophage strain can be applied for the purpose of eliminating or suppressing bacterial infection of plants together with irrigation or nutrition or spraying of above-ground parts or mechanical inoculation or in a mixture with by other viruses or also to eliminate bacteria from contaminated tools and environments or to eliminate bacteria from the surface of seeds.
Claims (6)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2022-397A CZ309961B6 (en) | 2022-09-20 | 2022-09-20 | The Xe_PB119 bacteriophage strain, a preparation based on this bacteriophage strain and their use against bacterial spot on tomatoes and peppers |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2022-397A CZ309961B6 (en) | 2022-09-20 | 2022-09-20 | The Xe_PB119 bacteriophage strain, a preparation based on this bacteriophage strain and their use against bacterial spot on tomatoes and peppers |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2022397A3 true CZ2022397A3 (en) | 2024-03-06 |
| CZ309961B6 CZ309961B6 (en) | 2024-03-06 |
Family
ID=90056494
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2022-397A CZ309961B6 (en) | 2022-09-20 | 2022-09-20 | The Xe_PB119 bacteriophage strain, a preparation based on this bacteriophage strain and their use against bacterial spot on tomatoes and peppers |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ309961B6 (en) |
-
2022
- 2022-09-20 CZ CZ2022-397A patent/CZ309961B6/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ309961B6 (en) | 2024-03-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Elhalag et al. | Potential use of soilborne lytic Podoviridae phage as a biocontrol agent against Ralstonia solanacearum | |
| Fujiwara et al. | Biocontrol of Ralstonia solanacearum by treatment with lytic bacteriophages | |
| Czajkowski et al. | Isolation and characterization of novel soilborne lytic bacteriophages infecting Dickeya spp. biovar 3 (‘D. solani’) | |
| Ahmad et al. | The filamentous phage XacF1 causes loss of virulence in Xanthomonas axonopodis pv. citri, the causative agent of citrus canker disease | |
| JP7276901B2 (en) | Methods and compositions for treating and controlling plant diseases | |
| Di Lallo et al. | Isolation and partial characterization of bacteriophages infecting Pseudomonas syringae pv. actinidiae, causal agent of kiwifruit bacterial canker | |
| Flaherty et al. | H-mutant bacteriophages as a potential biocontrol of bacterial blight of geranium | |
| Yu et al. | Isolation and characterization of bacteriophages against Pseudomonas syringae pv. actinidiae causing bacterial canker disease in kiwifruit | |
| Gašić et al. | Complete genome of the Xanthomonas euvesicatoria specific bacteriophage KΦ1, its survival and potential in control of pepper bacterial spot | |
| Ramírez et al. | Bacteriophages as promising agents for the biological control of Moko disease (Ralstonia solanacearum) of banana | |
| US11976265B2 (en) | Method for treatment and control of plant disease | |
| Kalpage et al. | Isolation of bacteriophages and determination of their efficiency in controlling Ralstonia solanacearum causing bacterial wilt of tomato | |
| JP6799329B2 (en) | Bacteriophage, brown rot of potato control agent and brown rot of potato control method | |
| Addy et al. | Detection of bacterial wilt pathogen and isolation of its bacteriophage from banana in Lumajang area, Indonesia | |
| US8440446B2 (en) | Bacteriophage strains for the treatment of bacterial infections, especially drug resistant strains of the genus Enterococcus | |
| Kizheva et al. | Broad host range bacteriophages found in rhizosphere soil of a healthy tomato plant in Bulgaria | |
| Jagdale et al. | Green approach to phytopathogen: Characterization of lytic bacteriophages of Pseudomonas sp., an etiology of the bacterial blight of pomegranate | |
| Svircev et al. | Control of the fire blight pathogen with bacteriophages. | |
| WO2022024287A1 (en) | Bacteriophage, bacterial wilt control agent, and bacterial wilt control method | |
| Jain et al. | Isolation of bacteriophages infecting Xanthomonas oryzae pv. oryzae and genomic characterization of novel phage vB_XooS_NR08 for biocontrol of bacterial leaf blight of rice | |
| WO2015194540A1 (en) | Bacteriophage, agent for preventing xanthomonas campestris disease, and method for preventing xanthomonas campestris disease | |
| CZ2022397A3 (en) | The Xe_PB119 bacteriophage strain, a preparation based on this bacteriophage strain and their use against bacterial spot on tomatoes and peppers | |
| CZ2022395A3 (en) | The Xe_NED111 bacteriophage strain, a preparation based on this bacteriophage strain and their use against bacterial spot on tomatoes and peppers | |
| JP2018024589A (en) | Wilt disease control agent and control method | |
| Liu et al. | Isolation and characterization of novel phages targeting Xanthomonas oryzae: culprit of bacterial leaf blight disease in rice |