CZ20197A3 - Insekticidní prostředek a způsob potlačování hmyzu z řádu motýlů - Google Patents
Insekticidní prostředek a způsob potlačování hmyzu z řádu motýlů Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20197A3 CZ20197A3 CZ97201A CZ20197A CZ20197A3 CZ 20197 A3 CZ20197 A3 CZ 20197A3 CZ 97201 A CZ97201 A CZ 97201A CZ 20197 A CZ20197 A CZ 20197A CZ 20197 A3 CZ20197 A3 CZ 20197A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- acmnpv
- egt
- insect
- aalt
- genetically modified
- Prior art date
Links
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 title claims abstract description 113
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 title claims abstract description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 95
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 53
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 49
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 48
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 claims abstract description 34
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims abstract description 13
- 241000201370 Autographa californica nucleopolyhedrovirus Species 0.000 claims description 94
- 108010013770 ecdysteroid UDP-glucosyltransferase Proteins 0.000 claims description 59
- 241000255967 Helicoverpa zea Species 0.000 claims description 32
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 19
- 125000005077 diacylhydrazine group Chemical group 0.000 claims description 19
- PNKUSGQVOMIXLU-UHFFFAOYSA-N Formamidine Chemical class NC=N PNKUSGQVOMIXLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- -1 pyrethroids Chemical class 0.000 claims description 12
- 241000256244 Heliothis virescens Species 0.000 claims description 9
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 claims description 9
- VEMKTZHHVJILDY-UXHICEINSA-N bioresmethrin Chemical compound CC1(C)[C@H](C=C(C)C)[C@H]1C(=O)OCC1=COC(CC=2C=CC=CC=2)=C1 VEMKTZHHVJILDY-UXHICEINSA-N 0.000 claims description 8
- CWFOCCVIPCEQCK-UHFFFAOYSA-N chlorfenapyr Chemical group BrC1=C(C(F)(F)F)N(COCC)C(C=2C=CC(Cl)=CC=2)=C1C#N CWFOCCVIPCEQCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 150000008037 diacylhydrazines Chemical class 0.000 claims description 7
- AWDNYVXYMOKFDV-UHFFFAOYSA-N n-benzoyl-n'-tert-butylbenzohydrazide Chemical group C=1C=CC=CC=1C(=O)N(NC(C)(C)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 AWDNYVXYMOKFDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 241000239238 Androctonus australis Species 0.000 claims description 4
- 241001203868 Autographa californica Species 0.000 claims description 4
- LLMLSUSAKZVFOA-UJURSFKZSA-N (1S,3R)-3-(2,2-dichlorovinyl)-2,2-dimethylcyclopropanecarboxylic acid Chemical compound CC1(C)[C@@H](C=C(Cl)Cl)[C@@H]1C(O)=O LLMLSUSAKZVFOA-UJURSFKZSA-N 0.000 claims description 3
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000002919 insect venom Substances 0.000 claims description 3
- 239000002728 pyrethroid Substances 0.000 claims description 3
- QXAITBQSYVNQDR-UHFFFAOYSA-N amitraz Chemical group C=1C=C(C)C=C(C)C=1N=CN(C)C=NC1=CC=C(C)C=C1C QXAITBQSYVNQDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 101150093002 EGT gene Proteins 0.000 claims 4
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 abstract description 16
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 abstract description 16
- 239000005556 hormone Substances 0.000 abstract description 8
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 abstract description 8
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 abstract description 7
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 abstract description 7
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 abstract description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 6
- 108090000189 Neuropeptides Proteins 0.000 abstract description 5
- 102000003797 Neuropeptides Human genes 0.000 abstract description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 abstract description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 abstract description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 29
- 239000005946 Cypermethrin Substances 0.000 description 28
- 229960005424 cypermethrin Drugs 0.000 description 28
- KAATUXNTWXVJKI-UHFFFAOYSA-N cypermethrin Chemical compound CC1(C)C(C=C(Cl)Cl)C1C(=O)OC(C#N)C1=CC=CC(OC=2C=CC=CC=2)=C1 KAATUXNTWXVJKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 24
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 23
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 21
- 230000004044 response Effects 0.000 description 19
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 15
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 14
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 13
- 230000001418 larval effect Effects 0.000 description 13
- 238000007427 paired t-test Methods 0.000 description 13
- 229960002587 amitraz Drugs 0.000 description 10
- QXAITBQSYVNQDR-ZIOPAAQOSA-N amitraz Chemical compound C=1C=C(C)C=C(C)C=1/N=C/N(C)\C=N\C1=CC=C(C)C=C1C QXAITBQSYVNQDR-ZIOPAAQOSA-N 0.000 description 10
- 239000005893 Diflubenzuron Substances 0.000 description 9
- QQQYTWIFVNKMRW-UHFFFAOYSA-N diflubenzuron Chemical compound FC1=CC=CC(F)=C1C(=O)NC(=O)NC1=CC=C(Cl)C=C1 QQQYTWIFVNKMRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229940019503 diflubenzuron Drugs 0.000 description 9
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 241000700570 unidentified entomopoxvirus Species 0.000 description 8
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 7
- XYFMGGWVGACNEC-UHFFFAOYSA-N n-carbamoyl-n-phenylbenzamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1N(C(=O)N)C(=O)C1=CC=CC=C1 XYFMGGWVGACNEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 5
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 5
- 230000034994 death Effects 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 4
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000005660 Abamectin Substances 0.000 description 3
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 101150042515 DA26 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000255601 Drosophila melanogaster Species 0.000 description 3
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 3
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- NYPJDWWKZLNGGM-UHFFFAOYSA-N fenvalerate Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1C(C(C)C)C(=O)OC(C#N)C(C=1)=CC=CC=1OC1=CC=CC=C1 NYPJDWWKZLNGGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 3
- IDCPFAYURAQKDZ-UHFFFAOYSA-N 1-nitroguanidine Chemical class NC(=N)N[N+]([O-])=O IDCPFAYURAQKDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000701412 Baculoviridae Species 0.000 description 2
- 102000003922 Calcium Channels Human genes 0.000 description 2
- 108090000312 Calcium Channels Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- XZMCDFZZKTWFGF-UHFFFAOYSA-N Cyanamide Chemical compound NC#N XZMCDFZZKTWFGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 2
- UPEZCKBFRMILAV-JNEQICEOSA-N Ecdysone Natural products O=C1[C@H]2[C@@](C)([C@@H]3C([C@@]4(O)[C@@](C)([C@H]([C@H]([C@@H](O)CCC(O)(C)C)C)CC4)CC3)=C1)C[C@H](O)[C@H](O)C2 UPEZCKBFRMILAV-JNEQICEOSA-N 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 241000256259 Noctuidae Species 0.000 description 2
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 2
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- UPEZCKBFRMILAV-UHFFFAOYSA-N alpha-Ecdysone Natural products C1C(O)C(O)CC2(C)C(CCC3(C(C(C(O)CCC(C)(C)O)C)CCC33O)C)C3=CC(=O)C21 UPEZCKBFRMILAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 150000004657 carbamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000000544 cholinesterase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 2
- UPEZCKBFRMILAV-JMZLNJERSA-N ecdysone Chemical compound C1[C@@H](O)[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@@H]([C@H](O)CCC(C)(C)O)C)CC[C@]33O)C)C3=CC(=O)[C@@H]21 UPEZCKBFRMILAV-JMZLNJERSA-N 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 2
- YWTYJOPNNQFBPC-UHFFFAOYSA-N imidacloprid Chemical compound [O-][N+](=O)\N=C1/NCCN1CC1=CC=C(Cl)N=C1 YWTYJOPNNQFBPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- UHXUZOCRWCRNSJ-QPJJXVBHSA-N methomyl Chemical compound CNC(=O)O\N=C(/C)SC UHXUZOCRWCRNSJ-QPJJXVBHSA-N 0.000 description 2
- 230000006540 mitochondrial respiration Effects 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 150000003217 pyrazoles Chemical class 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000002708 spider venom Substances 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- ZZYSLNWGKKDOML-UHFFFAOYSA-N tebufenpyrad Chemical compound CCC1=NN(C)C(C(=O)NCC=2C=CC(=CC=2)C(C)(C)C)=C1Cl ZZYSLNWGKKDOML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- IQVNEKKDSLOHHK-FNCQTZNRSA-N (E,E)-hydramethylnon Chemical group N1CC(C)(C)CNC1=NN=C(/C=C/C=1C=CC(=CC=1)C(F)(F)F)\C=C\C1=CC=C(C(F)(F)F)C=C1 IQVNEKKDSLOHHK-FNCQTZNRSA-N 0.000 description 1
- IBSREHMXUMOFBB-JFUDTMANSA-N 5u8924t11h Chemical compound O1[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](OC)C[C@H](O[C@@H]2C(=C/C[C@@H]3C[C@@H](C[C@@]4(O3)C=C[C@H](C)[C@@H](C(C)C)O4)OC(=O)[C@@H]3C=C(C)[C@@H](O)[C@H]4OC\C([C@@]34O)=C/C=C/[C@@H]2C)/C)O[C@H]1C.C1=C[C@H](C)[C@@H]([C@@H](C)CC)O[C@]11O[C@H](C\C=C(C)\[C@@H](O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C3)[C@@H](OC)C2)[C@@H](C)\C=C\C=C/2[C@]3([C@H](C(=O)O4)C=C(C)[C@@H](O)[C@H]3OC\2)O)C[C@H]4C1 IBSREHMXUMOFBB-JFUDTMANSA-N 0.000 description 1
- 101800002326 Adipokinetic hormone Proteins 0.000 description 1
- 241000256118 Aedes aegypti Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- 241000670670 Amsacta Species 0.000 description 1
- 241000566553 Anagrapha falcifera Species 0.000 description 1
- 241001219494 Androctonus australis hector Species 0.000 description 1
- 241001415070 Arctiinae Species 0.000 description 1
- 241000142468 Bracon Species 0.000 description 1
- 229910001369 Brass Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- STUSTWKEFDQFFZ-UHFFFAOYSA-N Chlordimeform Chemical compound CN(C)C=NC1=CC=C(Cl)C=C1C STUSTWKEFDQFFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000011045 Chloride Channels Human genes 0.000 description 1
- 108010062745 Chloride Channels Proteins 0.000 description 1
- 108010009685 Cholinergic Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000255942 Choristoneura fumiferana Species 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 1
- 241001635274 Cydia pomonella Species 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 239000005947 Dimethoate Substances 0.000 description 1
- 101710158332 Diuretic hormone Proteins 0.000 description 1
- 240000007790 Donax canniformis Species 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- 102000005915 GABA Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010005551 GABA Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241001634830 Geometridae Species 0.000 description 1
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 1
- 241001147381 Helicoverpa armigera Species 0.000 description 1
- 239000005906 Imidacloprid Substances 0.000 description 1
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- 241000254022 Locusta migratoria Species 0.000 description 1
- 241000721703 Lymantria dispar Species 0.000 description 1
- 239000005949 Malathion Substances 0.000 description 1
- 241000555303 Mamestra brassicae Species 0.000 description 1
- 241000922538 Melanoplus sanguinipes Species 0.000 description 1
- 241000254071 Melolontha Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 239000005916 Methomyl Substances 0.000 description 1
- 102000010909 Monoamine Oxidase Human genes 0.000 description 1
- 108010062431 Monoamine oxidase Proteins 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 241000341511 Nematodes Species 0.000 description 1
- 241001126829 Nosema Species 0.000 description 1
- 241001521301 Notodontidae Species 0.000 description 1
- BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N Orthosilicate Chemical compound [O-][Si]([O-])([O-])[O-] BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 description 1
- 241000255964 Pieridae Species 0.000 description 1
- 241000500441 Plutellidae Species 0.000 description 1
- DTAPQAJKAFRNJB-UHFFFAOYSA-N Promecarb Chemical compound CNC(=O)OC1=CC(C)=CC(C(C)C)=C1 DTAPQAJKAFRNJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710203175 Prothoracicotropic hormone Proteins 0.000 description 1
- 241000238709 Pyemotes tritici Species 0.000 description 1
- 241000255893 Pyralidae Species 0.000 description 1
- 241000282806 Rhinoceros Species 0.000 description 1
- 241000253973 Schistocerca gregaria Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018674 Sodium Channels Human genes 0.000 description 1
- 108010052164 Sodium Channels Proteins 0.000 description 1
- 241000256248 Spodoptera Species 0.000 description 1
- 241000256247 Spodoptera exigua Species 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 239000005658 Tebufenpyrad Substances 0.000 description 1
- 241000255985 Trichoplusia Species 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 229950008167 abamectin Drugs 0.000 description 1
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 1
- 102000034337 acetylcholine receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000036982 action potential Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000008484 agonism Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- AFVLVVWMAFSXCK-VMPITWQZSA-N alpha-cyano-4-hydroxycinnamic acid Chemical group OC(=O)C(\C#N)=C\C1=CC=C(O)C=C1 AFVLVVWMAFSXCK-VMPITWQZSA-N 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 235000021405 artificial diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- RRZXIRBKKLTSOM-XPNPUAGNSA-N avermectin B1a Chemical compound C1=C[C@H](C)[C@@H]([C@@H](C)CC)O[C@]11O[C@H](C\C=C(C)\[C@@H](O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C3)[C@@H](OC)C2)[C@@H](C)\C=C\C=C/2[C@]3([C@H](C(=O)O4)C=C(C)[C@@H](O)[C@H]3OC\2)O)C[C@H]4C1 RRZXIRBKKLTSOM-XPNPUAGNSA-N 0.000 description 1
- RRZXIRBKKLTSOM-UHFFFAOYSA-N avermectin B1a Natural products C1=CC(C)C(C(C)CC)OC11OC(CC=C(C)C(OC2OC(C)C(OC3OC(C)C(O)C(OC)C3)C(OC)C2)C(C)C=CC=C2C3(C(C(=O)O4)C=C(C)C(O)C3OC2)O)CC4C1 RRZXIRBKKLTSOM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000002728 bioinsecticidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000010951 brass Substances 0.000 description 1
- 230000003491 cAMP production Effects 0.000 description 1
- 125000005708 carbonyloxy group Chemical group [*:2]OC([*:1])=O 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000013626 chemical specie Substances 0.000 description 1
- 230000034334 cuticle development Effects 0.000 description 1
- ZXQYGBMAQZUVMI-UNOMPAQXSA-N cyhalothrin Chemical compound CC1(C)C(\C=C(/Cl)C(F)(F)F)C1C(=O)OC(C#N)C1=CC=CC(OC=2C=CC=CC=2)=C1 ZXQYGBMAQZUVMI-UNOMPAQXSA-N 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- JXSJBGJIGXNWCI-UHFFFAOYSA-N diethyl 2-[(dimethoxyphosphorothioyl)thio]succinate Chemical compound CCOC(=O)CC(SP(=S)(OC)OC)C(=O)OCC JXSJBGJIGXNWCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KLXFSKITMRWDPM-UHFFFAOYSA-N diethyl 2-sulfanylbutanedioate Chemical compound CCOC(=O)CC(S)C(=O)OCC KLXFSKITMRWDPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- MCWXGJITAZMZEV-UHFFFAOYSA-N dimethoate Chemical compound CNC(=O)CSP(=S)(OC)OC MCWXGJITAZMZEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000010410 dusting Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- RDYMFSUJUZBWLH-SVWSLYAFSA-N endosulfan Chemical compound C([C@@H]12)OS(=O)OC[C@@H]1[C@]1(Cl)C(Cl)=C(Cl)[C@@]2(Cl)C1(Cl)Cl RDYMFSUJUZBWLH-SVWSLYAFSA-N 0.000 description 1
- 230000000967 entomopathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 1
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 102000017941 granulin Human genes 0.000 description 1
- 239000003630 growth substance Substances 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 229940056881 imidacloprid Drugs 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000000201 insect hormone Substances 0.000 description 1
- 238000004920 integrated pest control Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- 239000002949 juvenile hormone Substances 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 229960000453 malathion Drugs 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 125000002816 methylsulfanyl group Chemical group [H]C([H])([H])S[*] 0.000 description 1
- FXWHFKOXMBTCMP-WMEDONTMSA-N milbemycin Natural products COC1C2OCC3=C/C=C/C(C)CC(=CCC4CC(CC5(O4)OC(C)C(C)C(OC(=O)C(C)CC(C)C)C5O)OC(=O)C(C=C1C)C23O)C FXWHFKOXMBTCMP-WMEDONTMSA-N 0.000 description 1
- ZLBGSRMUSVULIE-GSMJGMFJSA-N milbemycin A3 Chemical class O1[C@H](C)[C@@H](C)CC[C@@]11O[C@H](C\C=C(C)\C[C@@H](C)\C=C\C=C/2[C@]3([C@H](C(=O)O4)C=C(C)[C@@H](O)[C@H]3OC\2)O)C[C@H]4C1 ZLBGSRMUSVULIE-GSMJGMFJSA-N 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- YIEDSISPYKQADU-UHFFFAOYSA-N n-acetyl-n-[2-methyl-4-[(2-methylphenyl)diazenyl]phenyl]acetamide Chemical compound C1=C(C)C(N(C(C)=O)C(=O)C)=CC=C1N=NC1=CC=CC=C1C YIEDSISPYKQADU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PPOSFCNLNROPTA-UHFFFAOYSA-N n-carbamoyl-2,6-difluorobenzamide Chemical compound NC(=O)NC(=O)C1=C(F)C=CC=C1F PPOSFCNLNROPTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000000712 neurohormone Substances 0.000 description 1
- 210000000715 neuromuscular junction Anatomy 0.000 description 1
- 108040002669 neuropeptide hormone activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000008434 neuropeptide hormone activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 230000000422 nocturnal effect Effects 0.000 description 1
- 108010003516 norsynephrine receptor Proteins 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000010627 oxidative phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 125000003854 p-chlorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C([H])C([H])=C1Cl 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229960000490 permethrin Drugs 0.000 description 1
- RLLPVAHGXHCWKJ-UHFFFAOYSA-N permethrin Chemical compound CC1(C)C(C=C(Cl)Cl)C1C(=O)OCC1=CC=CC(OC=2C=CC=CC=2)=C1 RLLPVAHGXHCWKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000001242 postsynaptic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009290 primary effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- QYMMJNLHFKGANY-UHFFFAOYSA-N profenofos Chemical compound CCCSP(=O)(OCC)OC1=CC=C(Br)C=C1Cl QYMMJNLHFKGANY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000019617 pupation Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- JXHJNEJVUNHLKO-UHFFFAOYSA-N sulprofos Chemical compound CCCSP(=S)(OCC)OC1=CC=C(SC)C=C1 JXHJNEJVUNHLKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000005062 synaptic transmission Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- BAKXBZPQTXCKRR-UHFFFAOYSA-N thiodicarb Chemical compound CSC(C)=NOC(=O)NSNC(=O)ON=C(C)SC BAKXBZPQTXCKRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000002435 venom Substances 0.000 description 1
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 description 1
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/50—Isolated enzymes; Isolated proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/40—Viruses, e.g. bacteriophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
- A01N37/18—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing the group —CO—N<, e.g. carboxylic acid amides or imides; Thio analogues thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
- A01N37/52—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing groups, e.g. carboxylic acid amidines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
- A01N43/34—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- A01N43/36—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom five-membered rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N53/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing cyclopropane carboxylic acids or derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Oblast techniky
Vynález se týká insekticidního prostředku a způsobu potlačování hmyzu z řádu motýlů.
Dosavadní stav techniky
Při potlačování hmyzích škůdců, kteří zamořují obchodně cenné plodiny, se uplatňovaly různé přístupy. Ve velkém měřítku se používalo chemických insekticidů, ačkoliv jejich aplikace způsobovala řadu problémů. Chemické insekticidy mají nepříznivý vliv nejen na cílové nežádoucí druhy hmyzu, ale i na druhy užitečné. Hmyz je náchylný k získání resistence vůči takovým chemickým látkám, a je tedy nutno vyvíjet nové chemikálie. Chemické látky přetrvávají v životním prostředí po určitou dobu po jejich aplikaci.
Při snaze snižovat používání chemických insekticidů bylo pro napadení hmyzu v larválním stádiu využito hmyzích virů. Hmyzí viry (viry spefické pro hmyz), zahrnují jak DNA-, tak i RNA-viry. Jako DNA-viry je možno uvést entomopoxviry (EPV) a viry Baculoviridae, jako jsou jaderné polyedrální viry (NPV), granulosní viry (GV) a Baculovirinae neokludované baculoviry (NOB) apod. Jako RNA-viry je možno uvést togaviry, flaviviry, pikornaviry, cytoplasmatické polyedrální viry (CPV) apod. Podčelecř virů Eubaculovirinae s dvouřetězcovou DNA zahrnuje dva rody, jaderné polyedrální viry a granulosní viry, které jsou zvláště užitečné pro biologické potlačování, protože ve svém buněčném cyklu produkují okluzní tělesa (OB).
• · · *» · · «· ··· · · · · * · ♦«·* * · ·· * · · ·· · » · · · · · • · · · * · · • ··· ·· ·· ·· ··
Jako příklady jaderných polyedrálních virů NPV je možno uvést NPV Lymantria dispar, NPV Autographa californica, NPV Syngrapha falcifera, NPV Spodoptera litturalis,
NPV Spodoptera frugiperda, NPV Spodoptera exigua, NPV Heliothis armigera, NPV Mamestra brassicae, NPV Choristoneura fumiferana, NPV Trichoplusia ni, NPV Helicoverpa zea atd. Jako příklady granulosních virů GV je možno uvést GV Cydia pomonella, GV Pieris brassicae, GV Trichoplusia ni atd. Jako příklady neokludovaných baculovirů NOB je možno uvést NOB
Orcytes rhinoceros a NOB Heliothis zea. Jako příklady.....
entomopoxvirů je možno uvést EPV Melolontha melonotha, EPV Amsacta moorei, EPV Locusta migratoria, EPV Melanoplus sanguinipes, EVP Schistocerca gregaria, EPV Aedes aegypti, EPV-Chironomus luridus atd.
Bylo popsáno přes 400 isolovaných baculovirů přítomných v bezobratlých. Vícejaderný polyedrální virus Autographa californica (AcMNPV) je prototypem viru z čeledi Baculoviridae a má široký hostitelský okruh. Virus AcMNPV byl původně izolován z Autographa californica (A. cal.) lepidopteran noctuid (který je ve stádiu dospělce nočným motýlem). Tento virus infikuje 12 čeledí a více než 30 druhů hmyzu z řádu Lepidoptera. Není známo, že by produktivně infikoval ostatní druhý.
Životní cyklus baculovirů, jejichž příkladem je AcMNPV, zahrnuje dvě stádia. Každé ze stádií Životního cyklu je představováno specifickou formou viru: extracelulárními virovými částicemi (ECV), které jsou neokludované, a okludovánými virovými částicemi (OV). Extrácelulární a okludované formy viru mají shodný.genom, ale vykazují různé biologické vlastnosti. Maturace obou dvou forem viru je řízena oddělenými sadami virových genů, které jsou jedinečné pro každou formu.
•« · * • * « · · · • ♦ · · · · · ·· « · «· * · 9 9 9 • · · « · » · ·« ·« ·* ** jaké se nacházejí v parakrystalické
V podobě infekční pro hmyz, v přírodě, jsou mnohé viriony uloženy do proteinové matrice známé jako okluzní těleso (OB), které je rovněž uváděno jako polyedrální inklusní těleso (PIB). Proteinová virová okluzní tělesa jsou označována také jako polyedry. Protein polyedrin, který má molekulovou hmotnost 29 kDa, je hlavním virově kódovaným strukturním proteinem virových okluzních těles. (Podobně granulosní viry produkují oklusní tělesa, která jsou spíše než polyedrinem, tvořena především granulinem). ....
Virové okluze jsou hlavní složkou přírodního životního cyklu baculovirů zajištující prostředky pro hořizonální (ze hmyzu na hmyz) přenos mezi susceptibilními druhy hmyzu. Susceptibilní hmyz (obvykle v larválním stádiu) v životním prostředí přij imá virová oklusní tělesa z kontaminovaného zdroje potravy, jako je rostlina. Krystalická oklusní tělesa se ve vnitřnostech susceptibilního hmyzu disociují, čímž se uvolní infekční virové částice. Tyto polyedron-derivované viry (PDV) pronikají a replikují se v buňkách tkáně středního střeva.
Má se za to, že virové částice vstupují do buňky endocytosou nebo fusí a virová DNA je zbavena obalu u jaderného kanálku nebo v jádře. Replikace virové DNA je detegována během 6 hodin. Do 10 až 12 hodin po infekci (p.i.), se pučením extracelulárního viru (ECV) z povrchu buňky rozvíjí sekundární infekce další hmyzí tkáně. Extracelulární forma viru je zodpovědná za šíření viru z buňky na buňku v infikovaném hmyzím individuu, jakož i za přenos infekce v buněčné kultuře.
V pozdějším stádiu infekčního cyklu (12 hodin po infekci) je v infikovaných buňkách možno detegovat protein polyedrin. Ne dříve než po 18 až 24 hodinách po infekci se a a • ·♦· v jádře infikované buňky sestaví polyedrinový protein a virové částice se obklopují proteinovými okluzemi. Během 4 až 5 dnů se shromáždí velký počet virových okluzí, když dochází k lysí buňky. Tyto polyedry nemají aktivní úlohu při rozvíjení infekce larvy. Rozšíření extracelulárních virů v infikované larvě vede k jejímu uhynutí.
I
Když infikovaná larva uhyne, v rozkládající se tkáni zůstanou miliony polyedrů, zatímco extracelulární viry jsou degradovány-. Když-je polyedrům vystavena jiná larva, například tak, že pozře jimi kontaminované rostliny nebo jinou potravu, cyklus se opakuje.
Je tedy možno shrnout, že okludovaná forma virů je zodpovědná za počáteční infekci hmyzu prostřednictvím střeva, jakož i za stabilitu viru v životním prostředí. Polyedron-derivované viry, podány injekčně, v podstatě nejsou infekční. Při orálním podání jsou však infekční vysoce. Neokludované formy virů (tj. extracelulární viry) jsou zodpovědné za virémii a šíření infekce z buňky na buňku ve tkáňové kultuře. Extracelulární viry jsou vysoce infekční pro buňky v kultuře nebo při injekčním podání pro vnitřní tkáně hmyzu, ale v podstatě neinfekční při orálním podání.
Tyto hmyzí viry nejsou patogenní pro obratlovce nebo rostliny. Kromě toho mají baculoviry obecně úzký hostitelský okruh. Řada kmenů je omezena na jeden druh nebo malý počet druhů hmyzu.
Použití baculovirů jako bioinsekticidů je velmi slibné. Jednou z hlavních překážek jejich hromadného používání v zemědělství je časový interval mezi počátkem infekce u hmyzu a jeho uhynutím. Tímto intervalem může být několik dní až několik týdnů. Během tohoto období larva »·
·· #* ·» • · ♦ v · · · • ···« · ·«· • · · · ·· ·· · · · • · α · · · pokračuje v ožeru, což způsobuje další škody na rostlinách. Řada badatelů se pokoušela překonat tuto nevýhodu prostřednictvím inserce heterologního genu do virového genomu tak, aby exprimoval hmyzí regulační nebo modifikující látku, jako je toxin, neuropeptid, hormon nebo enzym.
Takové geneticky modifikované hmyzí viry v kombinaci s chemickými insekticidy se přesto dosud nepoužívají jako součást integrovaných postupů zaměřených na zvládnutí škůdců. Byla oznámena kombinace hmyzích virů divokého typu s chemickými insekticidy, ale vzhledem k omezením virů divokého typu, získané výsledky nebyly optimální (Aspirot,
J. et al., US patent č. 4 668 511; Mohamed, A. I. et al., Environ. Entomology, 12, 478 až 481 (1983); Mohamed, A. I. et al,, Environ. Entomology, 12, 1403 až 1405 (1983); Veličkova-Kožucharova, M. et al., Rastenievdni Nauki 25, 80 až 86 (1988) a Jaques, R. P. et al., Compatibility of Pathogens with Other Methods of Pěst Control and with Different Crops, kap. 38, str. 695 až 715). Badatelé se také pokoušeli o ovlivňování hmyzu za použití jiných kontrolních činidel, jako jsou bakterie (například Bacillus thuringiensis), houby, prvoci a nemanodi, samotných nebo v kombinaci s hmyzími viry nebo chemickými insekticidy. Dosažené výsledky však také nebyly optimální (Mohamed, A. I. et al., Environ. Entomology, 12, 478 až 481 (1983); Mohamed,
A. I. et al., Environ. Entomology, 12, 1403 až 1405 (1983); Jaques, R. P. et al., Compatibility of Pathogens with Other Methods of Pěst Control and with Different Crops, kap. 38, str. 695 až 715; a Geervliet, J. B. F. et al., Med. Fac. Landbouww. Rijksuniv. Gent, 56, 305 až 311 (1991)). Proto je potřebné vyvinout kombinaci chemických insekticidů a geneticky modifikovaných hmyzích virů, která zajistí výhody obou složek za současného snížení použitého množství chemických látek a zkrácení doby úhynu dosažené s viry divokého typu prostřednictvím použití geneticky modifikovaných hmyzích virů.
«· ·<
» · .· « ► · · » »· * a 4 • · 4 «V ·· ·» ·· • v ♦ «·♦ • · « ► · · 4 • · ·«
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou insekticidní prostředky pro použití proti hmyzu z řádu motýlů, které zahrnují směsi geneticky modifikovaných hmyzích virů a chemických a biologických insekticidů pro zvýšené potlačování hmyzu. Genetická modifikace viru zahrnuje inserci genu, který exprimuje látku potlačující nebo modifikující hmyz, například toxin, neuropeptid, hormon nebo enzym. Genetická modifikace viru také zahrnuje deleci v genu. ........
Konkrétně je předmětem vynálezu insekticidní prostředek, jehož podstata spočívá v tom, že zahrnuje:
(a) účinné množství chemického insekticidu zvoleného z třídy sloučenin zahrnující pyrethroidy, arylpyrroly, diacylhydraziny a formamidiny a (b) účinné množství geneticky modifikovaného jaderného polyedrálního viru Autographa californica (AcMNPV), který obsahuje budf (i) insertovaný gen, který exprimuje hmyzí toxin Androctonus australis (AalT), nebo (ii) deleci v genu kódujícím ekdysteroidní UDP-glukosyl transferasu (EGT) AcMNPV, pro potlačování hmyzu z řádu motýlů, přičemž když je tímto hmyzem Heliothis zea a chemickým insekticidem je formamidin, potom geneticky modifikovaný AcMNPV obsahuje insertovaný gen, který exprimuje AalT.
Podle jednoho provedení je předmětem vynálezu insekticidní prostředek pro potlačování hmyzu Heliothis virescens, jehož podstata spočívá v tom, že zahrnuje
Ί • · 4
Μ ·· ·♦ • ♦ · * · · • · ♦ · · ··· ·»· ·· (a) účinné množství chemického insekticidu zvoleného z třídy sloučenin zahrnující pyrethroidy a arylpyrroly a (b) účinné množství geneticky modifikovaného AcMNPV, který obsahuje budí (i) ínsertovaný gen, který exprimuje hmyzí toxin Androctonus australis (AalT), nebo (ii) deleci v genu kódujícím EGT AcMNPV.
Podle jiného provedení je předmětem vynálezu insekticidní prostředek pro potlačování hmyzu Heliothis zea, jehož podstata spočívá v tom, že zahrnuje (a) účinné množství chemického insekticidu zvoleného z třídy sloučenin zahrnující arylpyrroly a diacylhydraziny a (b) účinné množství geneticky modifikovaného AcMNPV, který obsahuje budí (i) ínsertovaný gen, který exprimuje AalT, nebo (ii) deleci v genu kódujícím EGT AcMNPV.
Podle dalšího provedení je předmětem vynálezu insekticidní prostředek pro potlačování hmyzu Heliothis zea, jehož podstata spočívá v tom, že zahrnuje (a) účinné množství chemického insekticidu zvoleného z třídy sloučenin zahrnující formamidiny a (b) účinné množství geneticky modifikovaného AcMNPV, který obsahuje Ínsertovaný gen, který exprimuje hmyzí AalT.
Předmětem vynálezu je rovněž způsob potlačování hmyzu z řádu motýlů, jehož podstata spočívá v tom, že
4« *« ·* ·* • · * · · · ·«· · · ·· * · · * · ·♦ · · ♦ · » · · · · ·' * insekticidní prostředek popsaný výše se aplikuje na takový hmyz nebo na plodiny, kterými se tento hmyz živí.
Přehled obr, na výkresech
Na obr. 1 jsou graficky znázorněna data uvedená v následující tabulce 13, tj. mortalita v procentech v den 1, a 10 pro první tři ošetření uvedená v následující tabulce
13. Údaje z tabulky 13 pro kontrolní pokus bez ošetření na obr. 1 znázorněny nejsou.
Na obr. 2 jsou graficky znázorněna data uvedená v následující tabulce 14, tj. mortalita v procentech v den 1, 4a 10 pro první tři ošetření uvedená v následující tabulce
14. Údaje z -tabulky 14 pro kontrolní pokus bez ošetření na obr. 2 znázorněny nejsou. Výraz AcMNPV AalT-ins. v tabulce 14 má totožný význam jako výraz rNPV na obr. 2.
Následuje podrobnější popis vynálezu.
Hmyz, jako je hmyz z řádu motýlů, prochází během svého vývoje z vajíčka na dospělce sledem velmi příznačných stádií. Po vylíhnutí z vajíčka vstupuje hmyzí larva do období extensivního přijímání potravy. Během této doby se několikrát svléká, což jí umožňuje nepřetržitý růst. Stádia mezi následným svlékáním se označují jako instar. Na konci růstového období se larva zakuklí a vyvíjí se hmyzí dospělec. Cílem tohoto vynálezu je zvýšit úroveň potlačování škodlivého hmyzu během larválních stádií. Hmyz z řádu Lepídoptera, o němž je známo že je významným škůdcem ha plodinách, zahrnuje čeledi Noctuidae, Notodontidae, Arctiidae, Pyralidae, Plutellidae, Pieridae a Geometridae.
Pro stanovení, zda insekticidní prostředky poskytují účinnou kontrolu škodlivého hmyzu, se používá dvou * · 4« ·» ·Φ «« • · ·* · 4 · 4 4 4 4
9· * 4 4 4*4 4 «4 ** * · · ♦ φ * Φ Φ Φ *4 φ * • · « 4 φ φ 4 Φ · »·· ·»· (I φφ 4« ·· kritérií. Jedním z nich je počet larev uhynulých během časového intervalu. Toto kritérium se označuje jako mortalita a uvádí se v procentech. Druhým kritériem je rychlost úhynu. I když se procento mortality během závěrečné periody nezlepší, když více larev uhyne v ranějších stádiích, je to pozitivní, protožé se takto zkracuje doba ožeru a tím se snižují škody na plodinách. Pokud tedy dojde ke zlepšení v procentu mortality nebo rychlosti úhynu, je o zkoušeném prostředku možno říci, že představuje zlepšení ve srovnání s existujícími prostředky.
kombinace geneticky modifikovaného hmyzího viru s chemickým nebo biologickým insekticidem je tzv. synergická7 pokud mortalita kombinace je vyšší než součet mortalit jednotlivých složek, aplikovaných individuálně. Jako aditivní se označuje kombinace, pokud mortalita dosažená za jejího použití je rovna součtu mortalit jednotlivých složek aplikovaných individuálně. Subaditivní je kombinace, pokud mortalita dosažená za jejího použití je větší než mortalita každé z jednotlivých složek kombinace aplikovaných individuálně, ale nižší než je součet mortalit jednotlivých složek aplikovaných individuálně. Antagonistická je kombinace, když je její mortalita nižší než mortalita každé z jednotlivých složek aplikovaných individuálně.
Kladného výsledku se dosahuje, když je kombinace synergická nebo aditivní. I v případě, že je kombinace aditivní, snížení dávky jedné nebo obou jejích složek ve srovnání s dávkou při individuální aplikaci, se projevuje snížením nákladů. Prospěšný vliv má použití takové kombinace rovněž na životní prostředí, v důsledku sníženi množství chemického insekticidu a tím zkrácení persistence a snížení vývinu resistence.
• Φ ΦI «Φ * ·
V φ · φ φ φ φ φφφ φ φφφ φφ φφ φφφφ · φ φ · « φφφ
Insekticidní prostředek je užitečný, pokud zajistí zvýšené potlačování jak permisivního, tak semipermisivního hmyzu. Permisivní hmyz je obecně 100 až IOOOx susceptibilnější vůči hmyzím virům nebo chemickému insekticidu než hmyz semipermisivní. Tak například Heliothis virescens je permisivní vůči AcMNPV, zatímco Heliothis zea je vůči AcMNPV semipermisivní.
Doprovodnou výhodou tohoto vynálezu je, že kombinace chemického insekticidu a hmyzího viru zasahuje více typů hmyzu než samotné složky. Jak chemické insekticidy, tak hmyzí viry mají specifický hostitelský okruh. Kombinace mohou vlivem přítomnosti obou složek tento hostitelský okruh rozšířit. Tento účinek však-není způsoben žádnou interakcí mezi insekticidními složkami.
Při potlačování hmyzích škůdců se používá velkého počtu tříd insekticidních sloučenin. Dále je uveden souhrn těchto tříd a popis jejich účinku.
Pyrethroidy jsou sloučeniny, které se vážou k proteinu kanálu sodíkového iontu, který následně vyvolává změnu v akčním potenciálu na druhé straně axonové membrány. Následkem toho se naruší řádné fungování nervového systému hmyzu. Jako příklady pyrethroidů je možno uvést cypermethrin (a-kyano-3-fenoxybenzyl-cis/trans-3-(2,2-dichlorvinyl)-2,2dimethylcyklopropankarboxylát; FMC Corp.), Permethrin^R^ (3-fenoxybenzyl-cis/trans-3-(2,2-dichlorvinyl) -2,2-dimethylcyklopropankarboxylát, Coulston International Corp.), fenvalerát (a-kyano-3-fenoxybenzyl-2-(4-chlorfenyl)-3methylbutyrát) a cyhalothrin (a-kyano-3-fenoxybenzyl-3(2-chlor-3,3,3-trifluorprop-l-enyl)dimethylcyklopropankarboxylát ).
··· « ·* • * • · 9 • · · » · *' · · V * 9 9
99 it ·· *r
9 9 9
9 99 • ♦ > · * » • « · * 4 ·*
Formamidiny jsou sloučeniny, které vykazují několik předpokládaných typů účinku, tj. vazbu k receptoru oktopaminu (neurohormonu/neurotransmiteru) a agonistické působení, zvýšení produkce cAMP a indukci změn chování nebo inhibiční účinek na smíšené funkce nebo monoamin oxidasy. Jako příklady formamidinů je možno uvést Amitraz (N'-(2,4-dimethylfenyl)-N-[ [ (2,4-dimethylfenyl)imino]methyl]-N-methylmethanimidamid; NOR-AM, Schering AG) a chlordimeform (N'-(4-chloro-tolyl)-Ν,Ν-dimethylformamidin).
Arylpyrroly jsou mitochondriální toxiny, které vykazují lethální účinky prostřednictvím dekopulační oxidační fosforylace. Jako příklady arylpyrrolů je možno uvést 4brom-2-(p-chlorfenyl)-1-(ethoxymethyl)-5-(trifluormethyl)— pyrrol-3-karbonitril (US patent č. 5 310 938) a sloučeniny popsané v US patentu č. 5 010 098.
Diacylhydraziny jsou hmyzí nesteroidní regulátory růstu, jejichž primární účinek spočívá v agonismu ekdysonu. Jako příklady diacylhydrazinů je možno uvést dibenzoylterc.butylhydrazin (jehož příprava je popsána v US patentu č. 5 300 688) a MIMIc(R> (1-(1,1-dimethylethyl)-2-(4-ethylbenzoyl)hydrazid 3,5-dimethylbenzoové kyseliny; Rohm & Haas Co.).
Cyklodieny se vážou k receptorové podjednotce komplexu GABA. Jako příklady cyklodienů je možno uvést endosulfan (6,7,8,9,10,10-hexachlor-l,5,5,6,9,9-hexahydro-6,9-methano-2,4,3-benzodioxathiepin-3-oxid; Hoechst).
Karbamáty účinkují jako inhibitory cholinesterasy. Jako příklady karbamátů je možno uvést thiodikarb (dimethylN, N- (thiobis(methyliminoj karbonyloxy)bis(ethan imidothioát); Rhone-Poulenc) a methomyl (S-methyl-N-[(methylkarbamoyl)oxy]thioacetimidát).
t « « ♦ tf I « • · «·· · · ·· • * ► · 9 9 »··» · • I » 9 9 9 9 ·< ·» ··
Organofosfáty účinkují jako inhibitory cholinesterasy. Jako příklady organofosfátů je možno uvést profenofos (0-4-brom-2-chlorfenyl-0-ethyl-S-propylfosforothioát; CibaGeigy), malathion (Ο,Ο-dimethylfosforodithioát diethylmerkaptosukcinátu), sulprophos (0-ethyl-0-[4-(methylthio)fenyl]-S-propylfosforodithioát) a dimethoát (0,0-dimethyl(S-methylkarbamoyImethylj fosforodithioát.
Pyrazoly inhibují mitochondriální dýchání prostřednictvím specifického účinku na Komplex I elektronového transportního systému. Jako příklady pyrazolů je možno uvést tebufenpyrad (N-(4-terc.butylbenzyl)-4-chlor3-ethyl-l-methylpyrazol-5-karboxamid; Mitsubishi Kasei, American Cyanamid Company) a sloučeniny popsané v evropské patentové přihlášce č. 289 879.
Nitroguanidiny brání vazbě acetylcholinu k určitým receptorům acetylcholinu v postsynaptické membráně; tím, že se samy vážou k receptorům, tyto sloučeniny narušují neurotransmisi. Jako příklady nitroguanidinů je možno uvést imidacloprid (l-[(6-chlor-3-pyridyl)methyl]-N-nitro-2imidazolidinimin; Bayer) a jeho deriváty.
Milbemyciny se nejprve vážou k místu receptoru GABA/komplexu kanálu chloridového iontu a následně inhibici signální transmise neuromuskulární junkce vyvolávají paralýzu a smrt hmyzu. Jako příklad mylbemycinu je možno uvést abamektin {směs avermektinů, která obsahuje >80 % avermektinu Bia a <20% avermektinů Blb; Merck, Sharp &
Dohme).
Benzoylfenylmočoviny jsou hmyzí regulátory růstu, které interferují se syntézou chitinu a během svlékání hmyzu narušují proces tvorby kutikuly. Jako příklad benzoylfenylmočoviny je možno uvést diflubenzuron (1—<4-chlorfenyl)- 13 •
• 1 * · · . · · ···* « * * · · · · ··· ··· ··· ·· ·· »· ··
3-(2,6-difluorbenzoyl)močovina; Uniroyal Chemical Co., Inc.),
Amidinohydrazony jsou inhibitory mitochondriálního dýchání, přičemž inhibují transport elektronu u Komplexu II. Jako příklad amidinohydrazonu je možno uvést hydramethylnon ([3,-(4-(trifluormethyl)fenyl]-1-[2-[4-trifluormethyl)fenyl]ethenyl]-2-propenylidentetrahydro-5,5-dimethyl-2(IH) pyrimidinon; American cyanamid company).
Odborníkům v tomto oboru je zřejmé, že další příklady látek z výše uvedených tříd sloučenin jsou známé a dostupné bud z obchodních zdrojů nebo popsané v patentové a vědecké literatuře.
Insekticidní prostředek podle tohoto vynálezu zahrnuje insekticidní sloučeninu (nebo biologický insekticid popsaný výše) a geneticky modifikovaný hmyzí virus.
Podle jednoho provedení tohoto vynálezu genetická modifikace hmyzího viru zahrnuje inserci genu, který exprimuje látku potlačující nebo modifikující hmyz, kdekoliv vhodně umístěnou ve virovém genomu. Takovou látkou je například toxid> neuropeptid, hormon nebo enzym. Takto exprimovaná látka vyvolává zvýšení bioinsekticidního účinku viru.
Jako příklad výše uvedených toxinů je možno uvést toxin AalT specifický pro hmyz štíra Androctonus australis (Zlotkin, E. et al., Toxicon, 9, 1 až 8 (1971)), toxin roztoče druhu Pyemotes tritici (Tomalski, M. D. et al., US patent č. 5 266 317), toxiny Bacillus thuringiensis (Martens, J. W. M. et al., App. & Envir. Microbiology, 56, 2764 až 2770 (1990) a Federici, B. A., In Vitro, 28, 50A (1992)) a toxin izolovaný z pavoučího jedu (Jackson, • · · · · • · · * « » * • · · · · · ♦ · • · · · · · ··· « · • · ♦ * « · «· ·♦ ·« ·<
J. R. H. et al., US patent č. 4 925 664), Jako příklady neuropeptidů nebo hormonů je možno uvést hormon líhnutí (Eldridge, R. et al., Insect Biochem., 21, 341 až 351 (1992)), prothoraxokotropní hormon (PTTH), adipokinetický hormon, diuretický hormon a proktolin (Menn, J. J. et al., J. Agric. Food Chem., 37, 271 až 278 (1989)). Jako příklad enzymů je možno uvést juvenilní hormon esterasu (JHE) (Hammock, B. D. et al., Nátuře, 344, 458 až 461 (1990)).
- Vynález je ilustrován na příkladu, geneticky modi·^ fikovaného AcMNPV, který obsahuje insertovaný gen, který exprimuje AalT. Východiskem pro genetickou modifikaci je kmen AcMNPV divokého typu označovaný jako E2 (ATCC VR-1344). Toxinem insertovaným do tohoto virového kmene je AalT, který je produkován v jedu severoafrického štíra Androctonus australis Hector. Toxin, který je tvořen 70 aminokyselinami, se váže k vápníkovým kanálům hmyzu a u larev hmyzu v nanogramových až. miligramových množstvích způsobuje kontraktilní paralýzu. Jelikož se neváže k savčím vápníkovým kanálům, je AalT kandidátem pro použití jako bioinsekticidu při ochraně plodin, protože může být bez rizika pozřen lidmi.
Oblast proti směru exprese kódující oblasti AalT genu zahrnuje signální sekvenci, která řídí sekreci AalT z buňky. Konkrétně signální sekvence vede toxin sekreční drahou k buněčnému povrchu, kde je tento toxin sekretován z buňky. Během transportu enzymy štěpí signální sekvenci a výsledkem je maturovaný AalT.
Bylo zjištěno, že heterologní signální sekvence je užitečná při expresi a sekreci hmyzích toxinů, jako je AalT (US patentová přihláška č. 08/009 265 podaná 25. ledna 1993). Přednostní heterologní signální sekvencí je kutikulární signální sekvence Drosophila melanogaster (pro ·· ·· ·· ·· • · · * · · · • ···· · ··» • · · · · ···· · • · · · · · · ·· ·· ·· ·· exoskeletální protein), která vylučuje velké množství asociovaných maturovaných proteinů.
Používá se tedy kodonově optimalizované DNA sekvence kódující kutikulární signální sekvenci a AalT. Degenerace genetického kódu umožňuje variace nukleotidové sekvence, které stále ještě produkují polypeptid s identickou aminokyselinovou sekvencí kódovanou nativní DNA sekvencí. Postup známý jako optimalizace kodonu poskytuje prostředek pro konstrukci takové pozměněné sekvence DNA pro reflexi frekvence kodonu využívané hostitelským hmyzem. V tomto provedení se pro vytvoření kodonově optimalizované sekvence DNA kódující kutikulární signální sekvenci a AalT používá tabulek využití kodonu pro Drosophila melanogaster.
Dalším prostředkem pro zlepšení exprese AalT je použití AcMNPV DA26 časného promotoru. Tento promotor se insertuje do místa ležícího před (proti směru exprese) kodonově optimalizovalizovanou DNA kódující kutikulární signální sekvenci a AalT.
Vzorky geneticky modifikovaného kmene AcMNPV E2 obsahujícího DA26 promotor a kodonově optimalizovanou DNA kódující kutikulární signální sekvenci a AalT se zkonstruují za použití postupů uvedených v související US patentové přihlášce č. 08/070 164. Tato citace je zde uvedena náhradou za přenesení celého jejího obsahu do tohoto popisu. Vzorky získaného virového konstruktu, označovaného jako AC1001, byly uloženy u ATCC (American Type Culture Collection) a bylo jim přiděleno ATCC přírůstkové číslo VR-2404. Odborníci v tomto oboru mohou obvyklými postupy vyrábět další konstrukty za použití DNA sekvencí AalT divokého typu, dalších heterologních signálních sekvencí a dalších promotorů.
• ♦ « · » · ·
I · · · · »· » 4 * « • · ·* ·«
Zvyšování účinnosti hmyzího viru v potlačovaném hmyzu genetickou modifikací může také mít podobu delece v genu. Jako příklad je možno uvést deleci v genu kódujícím ekdysteroidní UDP-glukosyl transferasu (EGT) (Miller, L. K. et al., mezinárodní patentová přihláška WO 91/00014). Miller et al., uvádějí konstrukci takových EGT’ kmenů hmyzích virů. Konkrétně Miller popisuje konstrukci kmene AcMNPV EGT.
Exprese genu egt vyvolává produkci EGT. EGT inaktivu je hmyzí hormony svlékání (ekdyson), což zabraňuje larvě hmyzu ve svlékání nebo kuklení. Když je gen egt inaktivován, například vytvořením kmene EGT, svékání a kuklení larvy infikované hmyzím virem může pokračovat. V důsledku toho pokračuje vývoj hmyzu, což se projeví jako prospěšné pro ochranu plodin v důsledku snížení ožeru, zmenšení vzrůstu a rychlejšího úhynu. Příčinou toho je, že EGT hmyzí virus není schopen blokovat svlékání a zakuklení larvy současně s přerušením ožeru během přípravy na tyto změny. Následkem toho je hmyz infikovaný EGT mnohem více náchylný k časnějšímu úhynu, než hmyz infikovaný divokým typem (EGT+), když se pokouší svlékat během svého infekčního stádia. Vzhledem k hodnotám LT50 (doba po infekci virem, při níž zahyne polovina hmyzí skupiny) je infikování hmyzu kmeny EGT tedy efektivnější než infikování hmyzu virem divokého typu.
Gen egt je inaktivován substitucí nebo tak, že se do něj insertu je jiný gen, jako je nevirový markerový gen pro
J / β-galaktosidasu. Pro přerušení egt genu je možno použít kteroukoliv sekvenci DNA, pokud přeruší expresi egt kódující sekvence. Alternativně je možno z genomu zcela nebo částečně odstranit egt gen deleci nebo mutací vhodného kódujícího segmentu. Kromě toho je možno pozměnit nebo odstranit regulační část genomu, která řídí expresi egt genu. Následkem těchto modifikací je podexprese egt genu. Delece inaktivu-
• · jící egt gen je rovněž možno provést sériovým pasážováním viru v hmyzu nebo hmyzích kulturách. Všechny tyto inserce, delece nebo mutace se provádějí za použití obvyklých prostředku. Výsledné delecí modifikované hmyzí viry jsou výhodné v tom, že neobsahují cizorodou DNA a od virů divokého typu se liší pouze absencí funkčního egt genu.
Miller uvádí jako příklad viru AcMNPV EGT rekombinant označený vEGTDEL, v němž jé část genu egt deletována. Miller získal vEGTDEL kotransfekci plasmidu pEGTDEL (který je produktem štěpení plasmidu obsahujícího egt gen EcoRI a Xbal za účelem excize části genu) a DNA z viru vEGTZ (která obsahuje lacZ gen insertovaný do rámce s předchozí egt kódující sekvencí) do SF buněk. Homologní rekombinace má za následek nahrazení egt-lacZ fúzovaného genu v vEGTZ deletovaným egt genem z pEGTDEL za vzniku rekombinantního virového vEGTDEL, který je EGT“.
Miller použil kmene AcMNPV označeného jako Ll, který je klonálním isolátem původně izolovaného kmene divokého typu (ATCC VR-1345). Později byl izolován a charakterizován kmen AcMNPV označovaný jako V8. Vzorky tohoto kmene V8 byly uloženy ve sbírce American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland,
20852, USA, a bylo jim přiděleno přírůstkové číslo ATCC VR 2465. Postupy, které Miller popsal pro konstrukci kmene Ll EGT“, jsou snadno použitelné pro konstrukci kmene V8 EGT“.
Pro přípravu prostředků podle vynálezu se používá obvyklých výrobních postupů známých odborníkům v tomto oboru. Prostředky podle vynálezu mohou mít podobu smáčitelných prášků, granulí, suspenzí, emulsí, roztoků, roztoků pro aerosoly, návnad a jiných forem obvyklých přo insekticidní prostředky.
Prostředky často obsahují inertní nosič, který může být kapalný, jako je voda, alkohol, uhlovodíky nebo jiná organická rozpouštědla nebo minerální oleje, živočišné tuky nebo rostlinné oleje. Inertní nosič dále může mít formu prášku, jako je mastek, kaolin, křemičitan nebo infusoriová hlinka.
Insekticidní prostředky podle vynálezu je možno aplikovat obvyklými postupy známými odborníkům v tomto oboru. -Při těchto postupech se hmyz vystaví prostředku podle vynálezu inhalací (postříkáním nebo poprášením plodin v místě ožeru), pozřením nebo přímým stykem.
Insekticidní prostředky podle vynálezu je možno podávat několika způsoby. Virus a chemickou složku je možno podávat současně, budí v jedné dávkovači formě, nebo souběžně ve dvou dávkovačích formách. Pokud se použije dvou dávkovačích forem, jsou tyto formy baleny odděleně a následně se mísí, je-li to potřebné za přítomnosti ředidla, čímž se získá konečný prostředek. Alternativně je možno bučí virus nebo chemickou složku podat jako první, čímž je hmyz stresován, a druhou složku podat později.
Insekticidní prostředky podle tohoto vynálezu se podávají v dávkách v rozmezí 2,4xl08 až 2,4xl012 polyedrálních inklusních těles/ha geneticky modifikovaného viru a 0,001 až 1,0 kg/ha chemického insekticidu. Tyto dávky představují dávková rozmezí obvyklá v tomto oboru pro každou složku individuálně a rovněž zahrnují možné snížení při použití kombinovaného insekticidního prostředku podle tohoto vynálezu.
Koncentrace každé účinné složky potřebná pro výrobu prostředků s optimální insekticidní účinností pro ochranu rostlin závisí na typu organismu, použité chemické složce
Β «
| • · B | • • | ·· • ··· | • v v · | «* | ||
| • | ·· | |||||
| • | • | |||||
| • e | • | • · | • | |||
| • | « | • B | ·· |
a modifováném hmyzím viru a typu prostředku. Odborníci v tomto oboru tyto koncentrace snadno stanoví.
Jako alternativa k chemickým insekticidům se s hmyzími viry kombinují biologická regulátory. Biologické regulátory zahrnují bakterie, jako Bacillus thuringiensis, dostupné například od Abbott Laboratories jako XENTARI^R^ a DIPEl(r) 2X. Jako další biologické regulátory je možno uvést prvoky, jako Nosema polyvora, M. grandis a Bracon mellitor (Jaques, R. P. et al., Compatibility of Pathogens with Other Methods of Pěst Control and with Different Crops, kap. 38, str. 695 až 715). Jako ještě další biologické regulátory je možno uvést entomopatogenní houby (viz výše uvedená citace) a nematody, Nematodi se podávají v kapalných přípravcích nebo ve formě disperse v gelu, kde se nacházejí v dormantním stádiu až do použití.
Vynález je blíže objasněn v následujících příkladech provedení. Tyto příklady mají výhradně ilustrativní charakter a rozsah vynálezu v žádném ohledu neomezují.
Příklady provedení vynálezu
Přikladl
Bioesej
Bioesej se v těchto příkladech provádí za použití metody zahrnující překrytí potravní směsi (diet overlay method). Bioeseje se provádějí následujícím postupem: Jako hmyzu se použije H. virescens a H. zea. Larvy se chovají na standardní potravní směsi založené na agaru se sojovými/ pšeničnými klíčky (Stonevillská dieta) (USDA Insectary Labs, Stoneville, MS, USA). Každá kolonie se udržuje při 28‘C za konstantního osvitu zářivkou. Všechny bioeseje se provádějí s larvami ve druhém instaru (larvy H. virescens staré 4 dny a H. zea staré 3 dny) za použití Stonevillské diety.
• * «» ·· * · · · · * · • · ·♦ * · · « · * · « * · · ·«·« · • · · · v · ·· ·* 9» ··
Misky pro bioesej (C-D International, Inc., Pitman, NJ, USA) obsahují vždy 32 oddělených arén. Každá aréna o velikosti 4x4 cm obsahuje 5 ml Stonevillské diety. Po ošetření a zamoření se hmyz v aréně uzavře průhlednými větracími lepivými víčky (C-D International, Inc.). Průhledná víčka umožňují snadné vyhodnocení.
Za účelem analýz log/PROBIT^ (HRO Group, Inc.) se před každou zkouškou provede sériové ředění virového zásobního roztoku směsí acetonu a redestilované vody. Ředění se provádějí v logaritmických přírůstcích od 1 χ 108 do 1 χ 101 PIB/ml v závislosti na zkoušeném druhu. Virové zásobní roztoky se zkoncentrujί, je-li to žádoucí centrifugací. Insekticidy technické čistoty se zpracují na prostředky o různých koncentracích měřených jako hmotnostní díly insekticidu na milion dílů objemových ředidla (ppm).
Na povrch umělé stravy (která je ztužena) se pipetou přidají vždy 0,4 ml roztoku na bázi směsi acetonu a vody v poměru 60 : 40, který obsahuje bučí viry nebo chemikálie nebo viry a chemikálie současně nebo neobsahuje žádnou z těchto složek. Virové roztoky se desetinásobnými ředěními, ředí na koncentrace v rozmezí od lxlO8 až lxlO1 PIB/ml v závislosti na zkoušeném druhu hmyzu. Koncentrace chemických roztoků se v závislosti na zkoušeném druhu hmyzu a druhu chemikálie nastaví na 1000 až 0,1 ppm. Každé zředění se zkouší na 32 larvách a opakuje se se 3 až 4 replikacemi. Použité prostředky se rovnoměrně rozdělí otáčením misky a roztoky nechají odpařit v digestoři. Jakmile jsou roztoky odpařeny, umístí se do zkušební arény vždy jedna larva, která se zde ponechá přijímat potravu po dobu 8 až 10 dnů? tato doba činí u H. virescens 8 dnů a u H. zea 12 dnů. Misky pro bioesej se během zkušebního období udržují při 28C za konstantního osvitu zářivkou. Hodnocení se provádí jednou za den, aby se zjistil včas nástup infekce. Při každém hodnoce-
ní se larva považuje za mrtvou, pokud nevykazuje žádný pohyb ani při zatřepání misky s potravou nebo pokud je její tělo zkapalněno. Ze tří až čtyř replikací se vypočítají hodnoty chemické a virové LC20 a LC50 (koncentrace, při nichž je pozorována 20% nebo 50% mortalita). Statistické údaje závislosti mortality na dávce 8 nebo 10 dnů po ošetření se zpracují v počítači za použití programu SAS log/PROBIT^ .
Po vypočteno těchto hodnot PROBIT se provedou zkoušky se samotnými chemikáliemi v předvídané dávce LC20 a LC50, se samotnými viry v dávce odpovídající LC20 a LC50 a se všemi možnými permutacemi chemikálie/virus. Používá se stejné metody s překrytím potravy. Hodnota LC20 a LC^q představuje dávku, u níž je předvídána 20% nebo 50% mortalita larev při aplikaci produktu.
Koncentrace PIB/ml je uvedena v následujících tabulkách. Tak například pod označením 5E4 se rozumí hodnota 5 x 104 (E v tabelovaných údajích znamená, že se jedná o exponent). Pod označením DAT se v tabulkách rozumí počet dnů po ošetření. Pod označením AcMNPV AalT insertován se rozumí geneticky modifikovaný kmen E2 obsahující promotor DA26 s kodonově optimalizovanou DNA kódující kutikulární signální sekvenci a AalT.
Za použití prostředků obsahujících kombinaci geneticky modifikovaného hmyzího viru a chemického insekticidu se dosáhne zvýšeného potlačení hmyzu v tom případě, když některá z těchto látek nebo obě tyto látky vykazují zvýšenou mortalitu nebo rychlost usmrcování.
V příkladech 2 až 5 jsou uvedeny výsledky experimentu s Helicoverpa zea a v příkladech 6 až 8 jsou uvedeny výsledky experimenty s Heliothis virescens.
• »«
4» ·· «* 44 « 4 4 4 · · · • 4 44« · 4 · *« 44 · · ···· « • 4 4 · · 4 4 • 4 ·4 ·· «·
Příklad 2
Kombinace formamidinu, amitraz, s geneticky modifikovanými hmyzími viry
Při prvním experimentu se zkouší formamidin amitraz v kombinaci s hmyzím virem AcMNPV, který je geneticky modifikován tak, aby obsahoval AalT nebo byl EGT”. Výsledky jsou uvedeny v tabulkách 1 a 2.
Tabulka 1
Vliv formamidinu azitraz na virulencí AcMNPV-E2 AalT insertovaného proti Helicoverpa zea ve druhém instaru
Ošetření1 Střední hodnota mortality larev (%)ř
DAT 8 DAT
Amitraz o koncentraci
100 ppm 1
AcMNPV AalT insertovaný o koncentraci
5E4 PIB/ml 25
Amitraz o koncentraci
100 ppm spolu s
AcMNPV AalT insertovaným o koncentraci
5E4 PIB/ml 542
702 1Při zkoušce s překrytím potravní směsi se provedou čtyři replikace každého ošetření; při každé replikaci se použije 32 larev.
2Indikovaná odpovědf je významně odlišná od aditivní (párový t-test, P = 0,05) ·* 99 ·· 99
9 · 9
999 9 9 99
9 9 9 999 9 9 * · · · · · 9
999 999 99 99 99 99 •I ·
Tabulka 2
Vliv formamidinu azitraz na virulenci AcMNPV-V8 EGT deletovaného proti Helicoverpa zea ve druhém instaru
Ošetření1 Střední hodnota mortality larev (%)
DAT 8 DAT
Amitraz o koncentraci
100 ppm 1
AcMNPV EGT deletovaný o koncentraci
5E4 PIB/ml 29
Amitraz o koncentraci
100 ppm spolu s
ACMNPV EGT deletovaný o koncentraci
5E4 PIB/ml 222 1Při zkoušce s překrytím potravní směsi se provedou čtyři replikace každého ošetření; při každé replikaci se použije 32 larev, 2Indikovaná odpověčř není významně odlišná od aditivní (párový t-test, P = 0,05) • · • ··· • ··· • * * · · · « · «·· ·*· ·· ·· Μ ··
Lze učinit následující závěry: Amitraz při 100 ppm synergizuje biologickou účinnost AcMNPV AalT insertovaného proti larvám H. zea. Synergismus výše uvedeného viru je do jisté míry závislý na dávce, jelikož kombinace tohoto rekombinantního viru a Amitrazu při 1000 ppm má spíše aditivní než synergické účinky na H. zea.
Oproti tomu, Amitraz nemá významné účinky na biologickou účinnost AcMNPV EGT deletovaného proti larvám H. zea. Trend číselné řady svědčí o tom, že odpovědí H. zea na kombinaci formamidinu a viru EGT deletovaného je o něco málo slabší než aditivní.
Příklad 3
Kombinace arylpyrrolu s geneticky modifikovanými hmyzími viry
V následující zkoušce se zkouší kombinace arylpyrrolu , 4-brom-2-(p-chlorfenyl)-1-(ethoxymethy1)-5-(trifluormethyl)pyrrol-3-karbonitrilu, s hmyzím virem AcMNPV, který je geneticky modifikován tak, aby obsahoval AalT nebo byl EGT“. Výsledky jsou uvedeny v tabulkách 3 a 4.
«I «4 ·«• · · • · *·· • .· « · « · « « ·· ··' «· *·.
• « · · · • · « · ·♦· · · • ♦ * ·« ··
Tabulka 3
Vliv arrylpyrrolu, 4-brom-2-(p-chlorfenyl)-1-(ethoxymethyl)-5-(trifluormethyl)pyrrol-3-karbonitrilu, na virulenci AcMNPV-E2 AalT insertovaného proti Helicoverpa zea ve druhém instaru
Ošetření1 Střední hodnota mortality larev (%)
DAT 5 DAT 8 DAT
Arylpyrrol o koncentraci
1,7 ppm 29 41
AcMNPV AalT insertovaný o koncentraci 5E4 PIB/ml
Arylpyrrol o koncentraci
1,7 ppm spolu s
AcMNPV AalT insertovaným o koncentraci
5E4 PIB/ml 482 523
63' 1Při zkoušce s překrytím potravní směsi se provedou tři replikace každého ošetření; při každé replikaci se použije 32 larev.
2Indikovaná odpověčť je významně odlišná od aditivní (párový t-test, P < 0,05).
^Indikovaná odpověď není významně odlišná od aditivní (párový t-test).
| 99 | • « | • · | • V | ||||
| • · | » | 9 | • | ♦ | • » | * | |
| « • | * | 9 | 9 | 9 9 9- | « « | • · | • |
| • | * | « | 9 | 9 9 | * | • | |
| • <· | • 99 | 99 | 9 9 |
Tabulka 4
Vliv arrylpyrrolu, 4-brom-2-(p-chlorfenyl)-1-(ethoxymethyl)-5-(trifluormethyl)pyrrol-3-karbonitrilu, na virulenci AcMNPV-V8 EGT deletovaného proti Helicoverpa zea ve druhém instaru
Ošetření·1
Střední hodnota mortality larev (%)
DAT 5 DAT 8 DAT
Arylpyrrol o koncentraci
1,7 ppm 29 41
AcMNPV EGT deletovaný o koncentraci
5E4 PIB/ml 2
Arylpyrrol o koncentraci
1,7 ppm spolu s
ACMNPV EGT deletovaným o koncentraci
5E4 PIB/ml 402 502 ^-Při zkoušce s překrytím potravní směsi se provedou se třemi replikace každého ošetření; při každé replikaci se použije larev.
2Indikovaná odpověď není významně odlišná od aditivní (párový t-test, P = 0,05).
•ί « · ·· · · ·· β « . · * · · « ··'·' « · »· « * · ·<·· · • · · · * · ·* ·· *4 *4
Lze učinit následující závěry: arylpyrrol, 4-brom2- (p-chlorfenyl)-1-(ethoxymethyl)-5-(trifluormethyl)pyrrol3- karbonitril, významně posiluje vlastnosti AcMNPV AalT insertovaného, které se projevují v rychlosti úhynu larev H. zea (tento závěr je založen na údajích zjištěných po 3 dnech od ošetření). Po 5 a 6 dnech po ošetření je však odpovědí H. zea na tuto kombinaci arylpyrrolu a rekombinantniho viru aditivní (nebo o něco slabší než aditivní).
Arylpyrroly nemají statisticky významný účinek na střední hodnotu mortality AcMNPV-V8 EGT deletovaného u larev H. zea ve druhém instaru. Trend číselné řady (u 3 DAT) však naznačuje, že arylpyrrol mírně posiluje vlastnosti viru EGT deletovaného, které se odrážejí v rychlosti úhynu larev H. zea.
Příklad 4
Kombinace diacylhydrazinu s geneticky modifikovanými hmyzími viry
V následující zkoušce se zkouší kombinace diacylhydrazinu, dibenzoyl-terc.butylhydrazinu, s hmyzím virem AcMNPV, který je geneticky modifikován tak, aby obsahoval AalT nebo byl EGT-. Výsledky jsou uvedeny v tabulkách 5 a 6.
«V ·· ·· »4 • » · V » » ·♦♦ I « ·« • » · · fc t « « • » · · fc * fc « ·· «· ·*
Tabulka 5
Vliv diacylhydrazinu, dibenzoyl-terc.butylhydrazinu, na virulenci AcMNPV-E2 AalT insertovaného proti směsi
Helicoverpa zea ve druhém a^třetím instaru
Ošetření1 Střední hodnota mortality larev (%)
DAT 5 DAT 8 DAT
Diacylhydrazin o koncentraci 200 ppm
AcMNPV AalT insertovaný o koncentraci 5E5 PIB/ml
45
19
Diacylhydrazin o koncentraci 200 ppm spolu s
AcMNPV AalT insertováným o koncentraci
5E5 PIB/ml 452 633 1Při zkoušce s překrytím potravní směsi se provedou tři replikace každého ošetření; při každé replikaci se použije larev.
^Indikovaná odpovědí je významně odlišná od aditivní (párový t-test, P = 0,05).
3Indikovaná odpovědí není významně odlišná od aditivní (párový t-test, P = 0,05).
• •4 ·
Φ· Φ· ·· φ Φ » 9 8 « • Φ ΦΦΦ β · φφ * » Φ Φ * · ΦφΦ φ ·
Φ Φ Φ Φ · Φ Φ *· Φ* ·· ΦΦ
Tabulka 6
Vliv diacylhydrazinu, dibenzoyl-terc.butylhydrazinu, na virulenci AcMNPV-V8 EGT deletovaného proti směsi Helicoverpa zea ve druhém a třetím instaru
Ošetření1 Střední hodnota mortality larev (%)
DAT 5 DAT 8 DAT
Diacylhydrazin o koncentraci 200 ppm 11 45
AcMNPV EGT deletovaný o koncentraci
5E5 PIB/ml 6
Diacylhydrazin o koncentraci 200 ppm spolu s
ACMNPV EGT deletovaným o koncentraci
5E5 PIB/ml 292 543
893 3Při zkoušce s překrytím potravní směsi se provedou se třemi replikace každého ošetření; při každé replikaci se použije 32 larev.
2Indikovaná odpovědí je významně odlišná od aditivní (párový t-test, P = 0,05).
3Indikovaná odpověď není významně odlišná od aditivní (párový t-test, P = 0,05).
• · * · ·· ·· * · * · » * *«*· · · · · ·· ·· ···· · • · * · » » «V · · ♦ · ··
Je možno učinit následující závěry; Diacylhydrazin, dibenzoyl-terc.butylhydrazin, významně posiluje vlastnosti AcMNPV AalT insertovaného, které se projevují v rychlosti úhynu larev H. zea (tento závěr je založen na údajích uvedených ve sloupci 3 DAT).
Diacylhydrazin také významně posiluje vlastnosti AcMNPV EGT deletovaného, které se projevují v rychlosti úhynu larev H. zea (tento závěr je založen na údajích uvedených ve sloupci 3 DAT).
Příklad 5
Kombinace benzoylfenylmočoviny s geneticky modifikovanými hmyzími viry
V následující zkoušce se zkouší kombinace benzoylfenylmočoviny, diflubenzuronu, s hmyzím virem AcMNPV, který je geneticky modifikován tak, aby obsahoval AalT nebo byl EGT“. Výsledky jsou uvedeny v tabulkách 7 a 8.
• φ
Vliv benzoylfenylmočoviny, diflubenzuronu, na virulenci AcMNPV-E2 AalT insertovaného proti
Helicoverpa zea ve druhém instaru
Ošetření1 * Střední hodnota mortality larev (%) • φφφ φ · φ · φ φ φ · φ· φφ
Tabulka 7
DAT 5 DAT 8 DAT
Diflubenzuron o koncentraci 25 ppm
AcMNPV AalT insertovaný o koncentraci 5E4 PIB/ml
12
23
Diflubenzuron o koncentraci 25 ppm spolu s
AcMNPV AalT insertovaným*' o koncentraci
5E4 PIB/ml 63 223 1Při zkoušce s překrytím potravní směsi se provedou tři replikace každého ošetření; při každé replikaci se použije larev.
2Indikovaná odpovéčf je významně odlišná od aditivní (párový t-test, P = 0,05).
3Indikovaná odpověď není významně odlišná od aditivní (párový t-test, P = 0,05).
•« II
Tabulka 8
Vliv benzoylfenylmočoviny, diflubenzuronu, na virulenci AcMNPV-V8 EGT deletovaného proti
Helicoverpa zea ve druhém instaru
Ošetření
Střední hodnota mortality larev (%)
DAT 5 DAT
DAT
Diflubenzuron o koncentraci 25 ppm
AcMNPV EGT deletovaný o koncentraci 5E4 PIB/ml
Diflubenzuron o koncentraci 25 ppm spolu s ACMNPV EGT deletovaným o koncentraci
5E4 PIB/ml
10'
23'
30‘ q
Při zkoušce s překrytím potravní směsi se provedou se třemi replikace každého ošetření; při každé replikaci se použije 32 larev.
2Indikovaná odpovědf je významně odlišná od aditivní (párový t-test, P = 0,05).
2Indikovaná odpověčí není významně odlišná od aditivní (párový t-test, P «= 0,05).
• Β Β * ·« ·· * • » < Β · * « · « « • · Β * · · Β Β · · * * Β » * · Β · Β · · · « • Β Β Β Β · Β · ·
ΒΒΒ ·· ·* · «· «φ
Je možno učinit následující závěry: Benzoylfenylmočovina, diflubenzuron, nezlepšuje účinnost AcMNPV-E2 AalT insertovaného proti larvám H. zea; a dále, odpovědí H. zea na tuto kombinaci je méně než aditivní.
Benzoylfenylmočovina rovněž nezlepšuje účinnost AcMNPV-E2 EGT deletovaného proti larvám H. zea; a dále, odpovědí H. zea na tuto kombinaci je méně než aditivní.
Příklad 6
Kombinace pyrethroidu s hmyzími viry divokého typu nebo geneticky modifikovanými hmyzími viry
V následující zkoušce s H. virescens ve druhém instaru se zkouší kombinace pyrethroidu, cypermethrinu, s hmyzím virem AcMNPV, který je budí divokého typu nebo je geneticky modifikován tak, aby obsahoval AalT nebo byl EGT”. Výsledky jsou uvedeny v tabulkách 9 až 14.
V tabulce 9 jsou uvedeny výsledky zjištěné u kombinace cypermethrinu s kmenem divokého typu AcMNPV E2. V kombinaci je použito dávky ekvivalentní předvídané hodnotě LC20 každé ze složek použité individuálně.
.• * ♦» ·» * * 4« ♦ *' · · Φ · · φ φ · · • φ φ * · Φ · φ φφφ • Φ · Φ Φ « φφ φ·Φ Φ « • 4 Φ · ·. Φ · Φ • · 4 «4« ΦΦ φφ φφ Φ*
Tabulka 9
Střední hodnota mortality (%)
DAT 4 DAT 10 DAT
Cypermethrin (0,5 ppm) 11
AcMNPV divokého typu (400 PIB/ml) 0 cypermethrin (0,5 ppm) spolu AcMNPV divokého typu (400 PIB/ml) 5 kontrolní zkouška bez ošetření
0 0
Ve srovnání s jednotlivými složkami nebyla u kombinace zjištěna synergie, jak je také uvedeno v Aspirot, J. et al., US patent č. 4 668 511.
V tabulce 10 jsou uvedeny výsledky zjištěné u kombinace cypermethrinu s kmenem AcMNPV V8 EGT”. v kombinaci je použito dávky ekvivalentní předvídané hodnotě LC20 každé ze složek použité individuálně.
9« 99
9
9*99 9 9 99
9 9 9999 9
9 9 · 999 «9 99 99
Tabulka 10
Střední hodnota mortality (%)
DAT 4 DAT .*·
DAT
Cypermethrin (0,5 ppm) 11 19
AcMNPV EGT deletovaný (775 PIB/ml) 0 2
Cypermethrin (0,5 ppm) spolu AcMNPV EGT deletovaným (775 PIB/ml) 23 27 kontrolní zkouška bez ošetření
0 0
Ve srovnání s účinky jednotlivých složek byla u kombinace zjištěna synergie. Tato synergie kontrastuje s absencí synergie u kombinace cypermethrinu a viru divokého typu.
V tabulce ll jsou uvedeny výsledky zjištěné u kombinace cypermethrinu s kmenem AcMNPV E2 AalT insertováným. V kombinaci je použito dávky ekvivalentní předvídané hodnotě LC2q každé ze složek použité individuálně.
Tabulka 11 střední hodnota mortality (%)
DAT 4 DAT 10 DAT
Cypermethrin (0,5 ppm) 11 19
AcMNPV AalT ínsertovaný (1000 PIB/ml) 0 6
Cypermethrin (0,5 ppm) spolu AcMNPV EGT deletovaným (1000 PIB/ml) 22 38 kontrolní zkouška bez ošetření 0 0
Ve srovnání s účinky jednotlivých složek ve sloupcích 1 a 4 DAT byla u kombinace zjištěna synergie. Rychlost úhynu je u této kombinace lepší než u kombinace cypermethrinu a viru divokého typu.
V tabulce 12 jsou uvedeny výsledky zjištěné u kombinace cypermethrinu s kmenem divokého typu AcMNPV E2. V kombinaci je použito dávky ekvivalentní předvídané hodnotě LC2q každé ze složek použité individuálně.
♦ · · *· ·* «» • · · · « « · * « a » • a a · · ♦ · · ♦· • 4 4 4 · · · a · »· · • · b a « t ··» «· ·» ·· ·« ««
Tabulka 12
Střední hodnota mortality (%)
DAT 4 DAT 10 DAT
Cypermethrin (1 ppm) 39 58
AcMNPV divokého typu (1200 PIB/ml) 0 25
Cypermethrin (1 ppm) spolu AcMNPV divokého typu (1200 PIB/ml) 48 77 kontrolní zkouška bez ošetření
0 0
S výjimkou jednoho sloupce DAT nebyla u této kombinace při srovnání s účinky jednotlivých složek zjištěna synergie.
V tabulce 13 jsou uvedeny výsledky zjištěné u kombinace cypermethrinu s kmenem AcMNPV V8 EGT. V kombinaci je použito dávky ekvivalentní předvídané hodnotě LC20 pro cypermethrin a předvídané hodnotě LC50 pro kmen AcMNPV V8 EGT.
a « • · 'A'J t:
«« ,» · •« · · a · * • « · á * · · • fc a a a a • · a · « • ·· «a* «a a·
Tabulka 13
Střední hodnota mortality (%)
DAT 4 DAT 10 DAT
Cypermethrin (0,5 ppm) 11 19
AcMNPV EGT deletovaný (1100 PIB/ml) 0 0
Cypermethrin (1 ppm) spolu AcMNPV EGT deletovaným (1100 PIB/ml) 34 47 kontrolní zkouška bez ošetření
0 0
Výsledky z tabulky 13 jsou rovněž zobrazeny na obr.
1. Ve srovnání s účinky jednotlivých složek byla u kombinace zjištěna synergie. Tato synergie kontrastuje s absencí synergie u kombinace cypermethrinu a viru divokého typu, i když se spolu s geneticky modifikovaným virem použije menší dávky cypermethrinu.
V tabulce 14 jsou uvedeny výsledky zjištěné u kombinace cypermethrinu s .kmenem AcMNPV E2 AalT insertovaným. v kombinaci je použito dávky ekvivalentní předvídané hodnotě LC50 každé ze složek použité individuálně.
• « ·ι · • ·
Tabulka 14
Střední hodnota mortality (%)
DAT 4 DAT 10 DAT
Cypermethrin (1 ppm) 31 31
AcMNPV AalT insertovaný (5000 PIB/ml) 0 6
Cypermethrin (1 ppm) spolu AcMNPV EGT deletovaným (5000 PIB/ml) 25 63 kontrolní zkouška bez ošetření 0 o
Výsledky z tabulky 14 jsou rovněž zobrazeny na obr.
2. Ve srovnání s účinky jednotlivých složek byla u kombinace při 4a 10 DAT zjištěna synergie. Tato synergie kontrastuje s absencí synergie u kombinace cypermethrinu a viru divokého typu.
Kombinace cypermethrinu s virem, který je geneticky modifikován tak, aby obsahoval AalT, nebo byl EGT”, je tedy lepší než kombinace cypermethrihu a viru divokého typu. Tyto výsledky z dřívějších údajů o použití pouze kombinace viru divokého typu s pyrethroidy (Aspirot, J. et al., US patent č. 4 668 511) nebylo možno předvídat.
• · »· »· ♦ ♦ ·♦ • · ·« ♦ · » · fe fc » * · ♦ · ··· fc··· * fc · · fc ♦ ·· ··«· · * · fc · « · fcfcfc ··· fc·· ·· ·· ·· ·«
Příklad 7
Kombinace diacylhydrazinu s hmyzím virem divokého typu nebo geneticky modifikovaným hmyzím virem
V následující zkoušce s H. virescens ve třetím instaru se zkouší kombinace diacylhydrazinu, dibenzoylterc.butylhydrazinu s hmyzím vírem AcMNPV divokého typu nebo s hmyzím virem AcMNPV, který je geneticky modifikován tak, že je EGT“ (kmen Ll). Výsledky jsou uvedeny v tabulkách 15 až 16. V těchto kombinacích se používá nižšího dávkování než v kombinacích použitých v příkladu 6.
V tabulce 15 jsou uvedeny výsledky získané za použití kombinace diacylhydrazinu s kmenem AcMNPV Ll divokého typu.
Tabulka 15
Ošetření/dávka Mortalita (%)
DAT 4 DAT 10 DAT
AcMNPV divokého typu (1E2 PIB/ml)
Diacylhydrazin (100 ppm) 0
AcMNPV divokého typu (1E2 PIB/ml) spolu s diacylhydrazinem (100 ppm) 0 19
Kontrola (aceton:voda)
0 0 • · t* »· «« ·» ·♦ «V* · » t · * » * · »·· · ·· ·· * * · * · » «· ·* · * « « «««« « + » v** *·* ·· «· ·» ··
Synergie byla zjištěna u kombinace při 4 a 10 DAT.
V tabulce 16 jsou uvedeny výsledky zjištěné u kombinace diacylhydrazinu s geneticky modifikovaným kmenem AcMNPV EGT (kmen LI).
Tabulka 16
Ošetření/dávka Mortalita (%)
DAT 4 DAT 10 DAT
Rekombinant (1E3 PIB/ml) 0
Diacylhydrazin (100 ppm) 0
Rekombinant (1E3 PIB/ml) spolu s diacylhydrazinem (100 ppm) 0
88
100
Kontrola (aceton:voda)
Bylo zjištěno, že odpověd na kombinaci se mírně liší od aditivní při 4 DAT.
Příklade
Kombinace arylpyrrolu s hmyzím virem divokého typu nebo geneticky modifikovaným virem
V následující zkoušce se zkouší kombinace arylpyrrolu, 4-brom-2-(p-chlorfenyl)-l-(ethoxymethyl)-5-(trifluormethyl)pyrrol-3-karbonitrilu, s hmyzím virem AcMNPV divokého typu, nebo který je geneticky modifikován tak, aby φφ ♦· • «4
Φ φ Φφφ φ φ φ ·
Φ · φ φ ·* φ» φφ φφ φ φ· φ φ Φ φφ φφ · · Φ • * * φφ φ· * φ obsahoval AalT nebo byl V8 EGT“. Výsledky jsou uvedeny v tabulkách 17 až 19.
ť-l
Jt
V tabulce 17 jsou uvedeny výsledky zjištěné u kombinace arylpyrrolu s kmenem AcMNPV E2 divokého typu V kombinaci je použito dávky ekvivalentní předvídané hodnotě LC20 každé ze složek použité individuálně.
Tabulka 17
Mortalita (%)
DAT 4 DAT 10 DAT
Arylpyrrol (1 ppm)
AcMNPV divokého typu (400 PIB/ml)
Arylpyrrol (l ppm) spolu s AcMNPV divokého typu (400 PIB/ml) 2 19
Kontrola (bez ošetření) 0
Synergie byla zjištěna u kombinace při 4 a 10 DAT.
V tabulce 18 jsou uvedeny výsledky zjištěné u kombinace arylpyrrolu s geneticky modifikovaným kmenem AcMNPV EGT” (kmen V8).
•t. .·' • · 4· 4* 44 44 • 4 »4 · 4 4 4 4 4 * *, · 4 4 444 4 4 »* • 4 ·4 44 4 · 4444 4 « 4 4444 444 •44 444 44 «4 44 44
Tabulka 18
Střední hodnota mortality (%)
DAT 4 DAT 10 DAT
Arylpyrrol (2 ppm)
52
AcMNPV EGT deletovaný (1100 PIB/ml)
Arylpyrrol (2 ppm) spolu s AcMNPV EGT deletovaným (1100 PIB/ml) 33 50
Kontrola (bez ošetření)
Výsledky ukazují, že byla zjištěno zlepšená rychlost úhynu u této kombinace při 1 DAT oproti kombinaci arylpyrrolu a viru divokého typu.
V tabulce 19 jsou uvedeny výsledky zjištěné u kombinace arylpyrrolu s geneticky modifikovaným AalT insertovaným kmenem AcMNPV E2.
♦ 9 »« 9» 99 99 ·* 99 999 9999
V 9 9 99« 9 9 99
999 99 9» 999 9 9 • 9 99*9 99*
999 999 99 99 99 99
Tabulka 19
Střední hodnota mortality (%)
DAT 4 DAT 10 DAT
Arylpyrrol (2 ppm} 20 52
AcMNPV AalT insertovaný (1000 PIB/ml) 0 3
Arylpyrrol (2 ppm) spolu s AcMNPV AalT insertovaným (1000 PIB/ml) 39 69
Kontrola (bez ošetření) 0
U kombinace byla zjištěna synergie při 1 a 4 DAT, která indikuje zlepšenou rychlost úhynu u této kombinace oproti kombinaci árylpyrrolu a viru divokého typu.
Obecně je tedy možno říci, že kombinace arylpyrrolu, 4-brom-2-(p-chlorfenyl)-1-(ethoxymethyl)-5-(trifluormethyl )pyrrol-3-karbonitrilu, s hmyzím virem AcMNPV, který je geneticky modifikován tak, aby obsahoval AalT nebo byl EGT” je lepší než kombinace árylpyrrolu s virem divokého typu.
Claims (16)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Isekticidní prostředek, vyznačuj ící se t i i , že zahrnuje:(a) účinné množství chemického insekticidu zvoleného z třídy sloučenin zahrnující pyrethroidy, arylpyrroly, diacylhydraziny a formamidiny a (b) účinné množství geneticky modifikovaného jader ného polyedrálního viru Autographa californica, AcMNPV, který obsahuje budí (i) insertovaný gen, který exprimuje hmyzí toxin Androctonus australis, AalT,. nebo (ii) deleci v genu kódujícím ekdysteroidní UDP-glukosyl transferasu,EGT AcMNPV, pro potlačování hmyzu z řádu motýlů, přičemž když je tímto hmyzem Heliothis zea a chemickým insekticidem je formamidin, potom geneticky modifikovaný AcMNPV obsahuje insertovaný gen, který exprimuje AalT.
- 2. Isekticidní prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že zahrnuje:(a) účinné množství chemického insekticidu zvoleného z třídy sloučenin zahrnující pyrethroidy a arylpyrroly a (b) účinné množství geneticky modifikovaného AcMNPV, který obsahuje budí (i) insertovaný gen, který exprimuje hmyzí toxin Androctonus australis (AalT), nebo (ii) deleci v genu kódujícím EGT AcMNPV pro potlačování hmyzu Heliothis virescens.* »4 4·' 4 4 »444 4 4-4 4 4444 4 4' 4 4 4- 4 4 4 44 ·'' 4 44 «4 4444 44 4 4 4 4 444444 >44 44 44 44 44
- 3. Isekticidní prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že zahrnuje:(a) účinné množství chemického insekticidu zvoleΛ ného z třídy sloučenin zahrnující arylpyrroly a diacylhydraziny a (b) účinné množství geneticky modifikovaného AcMNPV, který obsahuje buď (i) insertovaný gen, který exprimuje AalT, nebo (ii) delecí v genu kódujícím EGT AcMNPV pro potlačování hmyzu Heliothis zea.
- 4. Isekticidní prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že zahrnuje:(a) účinné množství chemického insekticidu zvoleného z třídy sloučenin zahrnující formamidiny a (b) účinné množství geneticky modifikovaného AcMNPV, který obsahuje insertovaný gen, který exprimuje AalT pro potlačování hmyzu Heliothis zea.
- 5. Isekticidní prostředek podle nároku 2, vyznačující se tím, že chemický insekticid je zvolen z třídy sloučenin zahrnující pyrethroidy.
- 6. Isekticidní prostředek podle nároku 5, vyznačující se tím, že pyrethroidem je akyano-3-fenoxybenzyl-cis/trans-3-(2,2-dichlorvinyl)-2,2dimethylcyklopropankarboxylát.* ·- 47
- 7. Isekticidní prostředek podle nároku 2 nebo 3, vyznačující se tím, že chemický insekticid je zvolen z třídy sloučenin zahrnující arylpyrroly.
- 8. Isekticidní prostředek podle nároku 7, vyznačující se tím, že arylpyrrolem je 4brom-2-(p-chlorfenyl)-1-(ethoxymethyl)-5-(trifluormethyl) pyrrol-3-karbonitril.
- 9. Isekticidní prostředek podle nároku 3, vyznačující se tím, že chemický insekticid je zvolen z třídy sloučenin zahrnující diacylhydraziny.
- 10. Isekticidní prostředek podle nároku 9, vyznačující se tím, že diacylhydrazinem je dibenzoylterc.butylhydrazin.
- 11. Isekticidní prostředek podle nároku 4, vyznačující se tím, že formamidinem je N'(2,4-dimethylfenyl)-N-[[(2,4-dimethylfenyl)imino]methyl ] N-methylmethanimidamid.
- 12. Insekticidní prostředek podle některého z nároků 2, 3 nebo 4, vyznačující se tím, že účinné množství chemického insekticidu je 0,001 až 1,0 kg/ha.
- 13. Insekticidní prostředek podle některého z nároků 2, 3 nebo 4, vyznačující se tím, že geneticky modifikovaný AcMNPV obsahuje insertovaný gén, který exprimuje AalT.
- 14. Insekticidní prostředek podle některého z nároků 2, 3 nebo 4, vyznačující se tím, * « »· »· ·» • · · · * · _ Λ O _ * · *· »·.· · · »·HO * ··'»*···.··>» • « · · « · ·»· *·· «·» ·· «· «· «» že geneticky modifikovaný AcMNPV obsahuje deleci v genu kódujícím EGT AcMNPV.
- 15. Insekticidní prostředek podle některého z nároků 2, 3 nebo 4, vyznačující se tím, že účinné množství geneticky modifikovaného AcMNPV je2,4 x 10® áž 2,4 x 1012 polyedrálních inkluzních těles/ha.
- 16. Způsob potlačování hmyzu, z řádu motýlů, vyznačující se tím, že se na takový hmyz nebo na plodiny, jimiž se tento hmyz živí, aplikuje insekticidní prostředek podle nároku 1.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US28137494A | 1994-07-27 | 1994-07-27 | |
| US42515695A | 1995-04-26 | 1995-04-26 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20197A3 true CZ20197A3 (cs) | 1998-09-16 |
Family
ID=26960857
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ97201A CZ20197A3 (cs) | 1994-07-27 | 1995-07-27 | Insekticidní prostředek a způsob potlačování hmyzu z řádu motýlů |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0772399A1 (cs) |
| JP (1) | JPH10503650A (cs) |
| KR (1) | KR970704355A (cs) |
| AU (1) | AU708560B2 (cs) |
| BG (1) | BG64408B1 (cs) |
| BR (1) | BR9508445A (cs) |
| CA (1) | CA2195969A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ20197A3 (cs) |
| HU (1) | HU221352B1 (cs) |
| MX (1) | MX9700646A (cs) |
| NZ (1) | NZ291028A (cs) |
| PL (1) | PL184944B1 (cs) |
| RU (1) | RU2200394C2 (cs) |
| WO (1) | WO1996003048A1 (cs) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1119933C (zh) | 1994-07-05 | 2003-09-03 | 加利福尼亚大学董事会 | 用遗传工程生物杀虫剂控制昆虫的方法 |
| US6596271B2 (en) | 1996-07-12 | 2003-07-22 | The Regents Of The University Of California | Insect control method with genetically engineered biopesticides |
| AU722221B2 (en) | 1996-10-01 | 2000-07-27 | American Cyanamid Company | Biological insect control agents expressing insect-specific mite toxin genes, methods and compositions |
| DE60024826T2 (de) * | 1999-03-12 | 2006-06-14 | Basf Ag | Synergistische insektizide zusammensetzungen |
| US6506556B2 (en) * | 2000-01-07 | 2003-01-14 | Basf Aktiengesellschaft | Synergistic insect control |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4186195A (en) * | 1976-07-14 | 1980-01-29 | Sandoz, Inc. | Virus insecticide composition |
| FR2532522B1 (fr) * | 1982-09-03 | 1986-02-28 | Agronomique Inst Nat Rech | Procede de lutte biologique contre les insectes ravageurs des cultures et compositions insecticides |
| US5180581A (en) * | 1989-06-29 | 1993-01-19 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Biological insect control agents and methods of use |
| GB9106185D0 (en) * | 1991-03-22 | 1991-05-08 | Wellcome Found | Biological control agents |
| WO1995005741A1 (en) * | 1993-08-25 | 1995-03-02 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Insect baculovirus compositions |
-
1995
- 1995-07-27 BR BR9508445A patent/BR9508445A/pt not_active IP Right Cessation
- 1995-07-27 HU HU9700249A patent/HU221352B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1995-07-27 RU RU97103506/13A patent/RU2200394C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1995-07-27 WO PCT/US1995/009525 patent/WO1996003048A1/en not_active Ceased
- 1995-07-27 EP EP95928169A patent/EP0772399A1/en not_active Withdrawn
- 1995-07-27 PL PL95318360A patent/PL184944B1/pl unknown
- 1995-07-27 AU AU32029/95A patent/AU708560B2/en not_active Ceased
- 1995-07-27 MX MX9700646A patent/MX9700646A/es unknown
- 1995-07-27 KR KR1019970700494A patent/KR970704355A/ko not_active Ceased
- 1995-07-27 NZ NZ291028A patent/NZ291028A/xx unknown
- 1995-07-27 CA CA002195969A patent/CA2195969A1/en not_active Abandoned
- 1995-07-27 JP JP8505976A patent/JPH10503650A/ja not_active Ceased
- 1995-07-27 CZ CZ97201A patent/CZ20197A3/cs unknown
-
1997
- 1997-01-24 BG BG101169A patent/BG64408B1/bg unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MX9700646A (es) | 1997-04-30 |
| JPH10503650A (ja) | 1998-04-07 |
| NZ291028A (en) | 1999-03-29 |
| KR970704355A (ko) | 1997-09-06 |
| WO1996003048A1 (en) | 1996-02-08 |
| AU3202995A (en) | 1996-02-22 |
| PL184944B1 (pl) | 2003-01-31 |
| CA2195969A1 (en) | 1996-02-08 |
| BR9508445A (pt) | 1997-11-25 |
| HU221352B1 (en) | 2002-09-28 |
| BG64408B1 (bg) | 2005-01-31 |
| EP0772399A1 (en) | 1997-05-14 |
| HUT76840A (en) | 1997-11-28 |
| AU708560B2 (en) | 1999-08-05 |
| PL318360A1 (en) | 1997-06-09 |
| RU2200394C2 (ru) | 2003-03-20 |
| BG101169A (en) | 1997-10-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Usta | Microorganisms in biological pest control—a review (bacterial toxin application and effect of environmental factors) | |
| Moscardi et al. | Baculovirus pesticides: present state and future perspectives | |
| Nathan et al. | Combined effects of azadirachtin and nucleopolyhedrovirus (SpltNPV) on Spodoptera litura Fabricius (Lepidoptera: Noctuidae) larvae | |
| Bonning et al. | Development and potential of genetically engineered viral insecticides | |
| US5858353A (en) | Insect viruses, sequences, insecticidal compositions and methods | |
| Eldridge et al. | Efficacy of a baculovirus pesticide expressing an eclosion hormone gene | |
| Wood | Development of genetically enhanced baculovirus pesticides | |
| TW505506B (en) | Insecticidal compositions comprising genetically modified autographa calif ornica nuclear polyhedrosis viruses and methods using the compositions | |
| CZ20197A3 (cs) | Insekticidní prostředek a způsob potlačování hmyzu z řádu motýlů | |
| Ansari et al. | Potential of biopesticides in sustainable agriculture | |
| Kunimi et al. | Survival Times and Lethal Doses for Wild and RecombinantAutographa californicaNuclear Polyhedrosis Viruses in Different Instars ofPseudoplusia includens | |
| US6596271B2 (en) | Insect control method with genetically engineered biopesticides | |
| El-Sheikh | Efficacy of Spodoptera littoralis nucleopolyherdovirus on Spodoptera frugiperda (JE Smith) and Spodoptera exigua (Hübner): virulence, biological effects, and inhibition of juvenile hormone esterase | |
| Ibarra et al. | Insect viruses diversity, biology, and use as bioinsecticides | |
| Winstanley et al. | Insect viruses as biocontrol agents | |
| Shu-Jen et al. | Improved plant protective efficacy of a baculovirus using an early promoter to drive insect-specific neurotoxin expression | |
| McCutchen et al. | Joint actions of baculoviruses and other control agents | |
| Possee et al. | Genetically engineered viral insecticides: New insecticides with improved phenotypes | |
| Fernández et al. | Testing side-effects of pesticides on the most protected life stage of Eretmocerus mundus (Mercet)(Hymenoptera, Aphelinidae), parasitoid of the whitefly Bemisia tabaci (Gennadius)(Hemiptera, Aleyrodidae) in the laboratory | |
| El-Sheikh | Virulence and pathogenicity of recombinant nucleopolyhedroviruses expressing a scorpion toxin and an insect enzyme on Agrotis ipsilon (Lepidoptera: Noctuidae) larvae | |
| Leisy et al. | Natural and engineered viral agents for insect control | |
| O’Callaghan et al. | Biopesticides for control of insect pest incursions in New Zealand | |
| Muthamia | Characterization and evaluation of potential utilization of HearNPV and PlxyGV baculoviruses isolates for management of African Bollworm, Helicoverpa armigera and diamondback moth, Plutella xylostella in Kenya | |
| Tunckol | Lethal and Sublethal Effects of Three Insect Growth Regulators on Drosophila suzukii (Diptera: Drosophilidae) | |
| Coudron et al. | Mediated pathogenicity of the baculovirus AcMNPV by the venom from Euplectrus comstockii Howard (Hymenoptera: Eulophidae) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |