CZ2007606A3

CZ2007606A3 - Príprava hyaluronanu modifikovaného cyklodextrinem a jeho aplikace

Info

Publication number: CZ2007606A3
Application number: CZ20070606A
Authority: CZ
Inventors: Velebný@Vladimír; Šedová@Petra; Knotková@Katerina
Original assignee: Cpn Spol. S R. O.
Priority date: 2007-09-06
Filing date: 2007-09-06
Publication date: 2009-03-18

Abstract

Rešení se týká zpusobu prípravy derivátu hyaluronanu modifikovaného cyklodextriny .alfa., .beta., .gama. nebo jejich deriváty pripravenými reakcí príslušného cyklodextrinu nebo jeho derivátu s 1-chlór-2,3-epoxypropanem a hyaluronanem. Fyzikálne chemické vlastnosti takto modifikovaného hyaluronanu významne rozširují jeho možnosti užití ve farmacii a v lékarství jako nosice nízkomolekulárních aktivních látek k cílenému transportu a rízenému uvolnování nebo jako látky vhodné pro tvorbu filmu, tuhých pen a nánosu pro bandáže ran a skefoldu ve tkánovém inženýrství.

Description

Příprava hyaluronanu modifikovaného cyklodextrinem a jeho aplikace

Oblast techniky

Vynález spadá do oblasti bio-medicínských přípravků založených na hyaluronanu nebo jeho solích a na jejich derivátech s cyklodextríny vzniklých chemickou reakcí.

Dosavadní stav techniky

Kyselina hyaluronová je významným polysacharidem a v přírodě se nachází zejména ve formě soli hyaluronátu sodného, který je stabilnější než volná kyselina při fyziologickém pH Kyselina hyaluronová a hyaluronát je souhrnně nazývan hyaluronan. Základní jednotkou hyaluronanu je disacharid tvořený kyselinou D-glukuronovou a N-acety!-l)-gkikosaminem, které jsou mezi sebou spojeny glykosidickou vazbou β(1->3)¹ (obr. 1).

Volný hyaluronan se v organismu nachází v synoviálni tekutině kloubu, v oku a ve formě komplexu s různými glykoproteiny a proteoglykanovými podjednotkami v mimobuněčné matrix vyšších živočichů, především v pojivových tkáních¹.

Hyaluronan se ve tkáních vyskytuje v širokém spektru molekulových hmotnosti od několika set až po miliony g/mol, a. jeho strukturou jsou podmíněny unikátní biologické i fyzikálně chemické vlastnosti Jako vysokomolekulárni reguluje obsah vody v extracelulární matrix, jako např. v pokožce, kloubu apod.'^v. V závislosti na své molekulové hmotnosti vykazuje charakteristické pasivní i aktivní biologické vlastnosti. Je imunologicky aktivní a váže se na proteiny v mimobuněčné matrix a na povrch buněk, což hraje roli například v buněčném dělení, v embryonálním vývoji^v, ve vývoji rakoviny ^v'^íV“, a při zánětech^Vl ^,xlv. Nemodifikovaný hyaluronan našel důležité uplatněni v transportu léčiv a v chirurgii ^lx Je používán v oftalmologii^M‘, při léčbě ran^xlí’^xl a za jeho přítomnosti se zvyšuje účinek některých léků^XIV, · · vw • 4 ··· 4 · 4 · · ·* · · 44· 4 ·44·4 ·· «444 · · ·144 >4 4 4 4 · *·*

Hyaluronan poskytuje dostatečné množství vhodných funkčních skupin k umělému navázání léčiv. Jeho užití může být rozšířeno chemickou modifikací polysacharidu, například navázáním cyklodextrinu.

Cyklodextriny (obr.2) jsou cyklické oligosacharidy tvořené a-J)-giukopyranosami spojenými ct(l—>4) vazbou, které obsahují relativně hydrofobní centrální kavitu a hydrofilní vnější povrch. Podle počtu a.-D-glukopyranosových jednotek v molekule cyklodextrinu se rozlišuje několik druhů, mezi nejznámějši a nej frekventovanější patři α,β,γ-cyklodextrin. Ve farmaceutickém průmyslu jsou cyklodextriny hlavně užívány jako komplexační činidla pro zvýšeni rozpustnosti málorozpustných látek (např. léčiv), ke zvýšení jejich chemické a fyzikální stability, k přenosu léčiv k a přes biologické membrány, k redukci lokálního podrážděni po kožní či orální aplikaci, k redukci nebo eliminaci nepříjemných pachů a chuti a k prevenci interakci lečivo-léčivo nebo léčivo-pomocná látka. Zvýšeni účinnosti je pak možné přídavkem malého množství vodou rozpustného polymeru, který zároveň stabilizuje komplex'.

Obr. 2 β-cyklodextnn

Šoltés et al. publikoval popis přípravy derivátu hyaluronanu s navázaným cyklodextrinem. Hyaluronát se rozpustil v dioxanu s diethyl azodikarboxylátem, k této disperzi se přidal β-cyklodextrin opět v dioxanu s přídavkem trifenylfosfinu. Po odpaření dioxanu se produkt vysrážel etanolem a rozpustil ve vodě a posléze zakoncentroval na ultrafiltru. Obsah cyklodextrinu se stanovil acidobazickou titrací. Ve stejné publikaci je také zmíněna možnost přípravy derivátu hyaluronanu s β-cyklodextrinem využívající epichlorhydrin, ale ani v odkazovaném článku ^wt není tato příprava popsána a tudíž ji nelze považovat za současný stav techniky.

Syntéza derivátu hyaluronanu a β-cyklodextrinu navázaného pomocí spaceru tvořeného dihydrazidem kyseliny adipové byla popsána ve zveřejněné mezinárodni přihlášce WOOI66601^X,A. Nejprve reaguje dihydrazid kyseliny adipové s hyaluronanem v přítomnosti 1

-ethyl-3-(3-dirnethy]aminopropyl)karbodiimidu a derivát se izoluje dialýzou Hydroxylové skupiny cyklodextrinu jsou aktivovány l-kyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborátem s triethylaminem, Derivát hyaluronanu pak reaguje s takto aktivovaným cyklodextrinem. Podobně pak reagují další deriváty cyklodextrinu jako např. hydroxyethyl-, hydroxypropyl- a sulfobutyl-cyklodextrin.

' Cen L. Ncoh K.G.. Kang E.T.: Langmuír 2002. 18. 8633.

¹¹ G.D. Prcstwich; www.glycoforum.gr.ip/scicncc/hyaluronan/HAl8ZHA18E.html,

Vercruyssc K.P.. Prcstwich G.D.: Crit. Rcv. Thcr. Drug Carrier Svsl. 1998. 15.513 ⁿ Frascr J.R.E. Laurent T C,. Laurent U.B.G.: J. Intcrn. Med. 1997.242. 27 ^v Toolc B.P.: Scmin Cell & Dcv. Biol. 2001. 12. 79.

Delpech B.. GirardN., BcrtrandP. etIntcrn Med. 1997. 242. 41.

^v Sakurai K.. Hořic K.. ct.ak 1984. JP 61000017.

™ Gcrdin B.. Hallgrcn R.; J Intcrn. Med. 1997. 242. 49.

^Λ Drobnit Adv Drug Dclivcry Rev. 1991. 7. 295.

' Sadtonc M.F., Giannaecini B.. Chctoni P.. Int. J Pharm. 1991. 72. 131.

^Xl Nakada K.. Kondo N.; 2000. JP 2000119196.

Juhlin L.; J. Intcrn. Med 1997, 242.61.

'^:;i Kuroyanagi Y.: 2002. WO 0245767.

Millcr J.A.. Ferguson R.L., Powcrs D L. etal.: J. Biomcd. Mater. Rcs. 1997.38. 25.

'^Λ Loftsson T.. http://www.cyclodcxtrin.is/About Cvclodcxtrins.htm ™ Kaur. I. P.. Chhabra. S.. Aggarwal. D Role of Cvclodextrin ín Ophthalmics. Current Drug Dclivcry 1. 2004. .351.360.

^λ™ Šoltés L. Steiner B.. ct al: Carbohyd. Polym. 1999. 39. 17.

^x'”' Šoltés. L. MisloviČová. D.. Sébille. B.. Riomedical Chrunuitography 1996. 10. 53-59.

^XIX Šoltés L. Stcincr B . clal: 2001. WOOl/66601 Al.

Popis grafu

Graf 1. FTIR spektra připravených derivátů k příkladům 1 (—), 2( ), 3 ( )

Graf 2. FTIR spektra připravených derivátů k příkladům 4 (—), 5( ),6 ( )

Graf 3. FTIR spektra připravených derivátů k příkladům 7 (—), 8( ),9 ( )

Graf 4. FTIR spektra připravených derivátů k příkladům 16 (—),17( ),18()

Graf 5. FTIR spektra připravených derivátů k příkladům 19 (—), 20 ( ), 21 () * · « ···· · * · ·♦ * ' I * * · · ··· ·· • « « · ·· ·· *t »· ·· ··“

Popis obrázků

Obr. 1 Kyselina hyaluronová

Obr. 2 Cyklodextrin

Obr. 3 Schéma reakce

Obr. 4 SEM fotografie porézního nerozpustného materiálu dle příkladu 22 při různém zvětšeni A x 50; B x 400

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je způsob přípravy modifikovaného hyaluronanu, kde hyaluronan je modifikovaný cyklodextriny α, β, γ nebo jejich deriváty připravenými reakcí příslušného cyklodextrinu nebo jeho derivátu s l-chlór-2,3-epoxypropanem a hyaluronanem. Navázaný cyklodextrin vnese do struktury hyaluronanu hydrofobni kavitu, která ovlivní fyzikální a chemické vlastnosti hyaluronanu natolik, že významně rozšíří jeho možnosti užití ve farmacii a v lékařství, Rozpustný, částečně rozpustný nebo nerozpustný přípravek tvořený derivátem hyaluronanu modifikovaného cyklodextriny může být použit jako nosič nízkomolekulárních aktivních látek k cílenému transportu a řízenému uvolňování. Takto modifikovaný hyaluronan může být dále využíván jako látka vhodná pro tvorbu filmů, tuhých pěn a nánosů pro bandáže ran a sketoldů ve tkáňovém inženýrství.

Podstatnou výhodou tohoto vynálezu oproti stávajícím syntézám je, že v molekule hyaluronanu zůstávají zachovány karboxylové skupiny a tím i jeho polyelektrolytový (polyanionický) charakter, což je velmi důležité pro zachování biologických vlastnosti hyaluronanu Hyaluronan je i po derivatizaci degradovatelný hyaluronidasou a je rozpoznatelný příslušnými buněčnými receptury

Tento způsob výroby zahrnuje navázání cyklodextrinu nebo jeho amino či hydrazino derivátu na hyaluronan pomocí bifunkčního činidla. Bifunkční činidlo (l-halogen-2,3-epoxypropan) obsahující epoxidovou a halogenovou skupinu aktivuje v silně alkalickém (pH>8) nebo silně kyselém prostředí (pH<5) cyklodextrin nebo jeho deriváty (amino-cyklodextrin, hydrazin-cyklodcxtrin, amino-alkyl-cyklodextrin, karboxyalkyl cyklodextrin, 6-O-a-D-glykosyl-β-cyklodextrin, hydroxylethyl cyklodextrin, sukcinyl cyklodextrin, hydroxypropyl cyklodextrin a sulphobutyl-cyklodextrin), který následně reaguje s hydroxyiovou skupinou hyaluronanu o různé molekulové hmotnosti (1 000 - 10 000 000 g.mol’¹) za vzniku éterové, esterové nebo aminové vazby (celkové schéma reakce je zobrazeno na obr.3) Příprava probíhá ve dvou krocích.

• ·

OH

Obr. 3 Schéma reakce

V prvním kroku probíhá aktivace hydroxylové skupiny cyklodextrinu, která se s výhodou provádí v alkalickém vodném roztoku při pH vyšším než 8 Reakce cyklodextrinu s aktivačním činidlem se s výhodou provádí při zvýšené teplotě v rozsahu 30 až 50 °C Pro aktivaci cyklodextrinu dle vynálezu se využívá l-chlór-2,3-epoxypropan. Aktivace hydroxylové skupiny cyklodextrinu se také provádí v kyselém vodném roztoku při pH nižším než 5.

Ve druhém kroku se pak hyaluronan rozpustí ve vodě a přidá se roztok aktivovaného cyklodextrinu a reakčni směs se míchá při teplotě v rozmezí od 10 do 70 °C. Produkt se z reakčni směsi izoluje dialýzou.

Produkt je dále upravován do formy vláken, folii, mikrosfér, hub a membrán, které mohou být dále používány pro tvorbu náhrady tkání. Na produkt je pak možno vázat biologicky aktivní látky jako léčiva, dezinfekční prostředky a antioxidanty (kys. 1'erulová, doxorubicin).

Příklady provedeni vynálezu

Příklady 1 až 3: Vliv molekulové hmotnosti hyaluronanu na reakci

17,016 g β-cyklodextrinu se rozpustilo v 80 ml demineralizované vody při 40 °C a přidalo se 8 ml 1M NaOH. Do roztoku β-cyklodextrinu se přidalo 8,22 ml l-chlór-2,3-epoxypropanu a roztok se míchal 10 min.

Roztok hyaluronanu se připravil rozpuštěním 4 g hyaluronanu o různých molekulových hmotnostech (viz. Tabulka I) v 400 ml demineralizované vody. Roztok se zahřál na 40 °C a přidal roztok aktivovaného cyklodextrinu. Reakčni směs se udržovala při 40 °C za intenzivního míchání po dobu 20 h a následně dialyzovala proti demineralizované vodě pres dialyzační střeva (Cut oíT 12 000 14 000) a lyofilizovala.

Obsah β-cyklodextrinu se stanovil na základě absorpce fenolftaleinu v kavitě cyklodextrinu. Molekulová hmotnost se stanovila pomocí SEC-MALLS.

• « ·

Graf 1. FTIR spektra připravených derivátů k příkladům 1 (--·), 2( —), 3 ( )

Tabulka I

Příklady 1-3: Různé výchozí molekulové hmotnosti

Příklad	M_W(HA) (g. mol¹)	M_w (Prod) (g. mol¹)	Rozpustný podíl (%)	c(CD) %	Bobtnavost (%)
1	96210	107000	59,2	5,87	4539,76
2	380000	341500	73,00	1,17	727,83
3	1109000	262000	27,82	0,9	336,62

Příklady 4 až 6: Vliv přidaného množství l-chlór-2,3-cpoxypropanu β-cyklodcxtrin se rozpustil v demineralizované vody při 40 °C a přidal se 1 ml IM NaOH. Do roztoku β-cyklodextrinu se přidalo různé množství l-chlór-2,3-epoxypropanu (viz Tabulka II) a po 5 minutách intenzivního míchání při 40 °C se roztok přidal postupně k roztoku hyaluronanu.

Roztok hyaluronanu (0,5 g) o koncentraci 1 hm. % se zahřál na 40 °C a intenzivně míchal s roztokem cyklodextrinu po dobu 20 h. Reakce se ukončila dialýzou proti demineralizované vodě přes dialyzační střeva (Cut offl 2000-14000). Produkt se izoloval lyofilizaci.

í

vlnciJd {cm¹)

Graf 2. FTIR spektra připravených derivátů k příkladům 4 (—), 5( —), 6 ( )

Tabulka II

Příklady 4-6: Různá množství přidaného l-chlór-2,3-epoxypropanu

V (l-chlór-2,3příklad m([3-CD) -epoxypropan) Poměr M_W(HA) M_w(Prod) c(CD) Rozpustný podíl Bobtnavost

	(g)	(ml)	Epich./CD (g. mol·¹) (g. mof¹)	(%)	(%)	(%)
4	2,127	1,365	0,64	380000	226600	0,43	39,11	532,1
5	1,418	0,685	0,48	380000	638350	0,40	54,78	2172,8
6	0,709	0,17	0,24	380000	439400	0,33	68,28	rozpustný

Příklady 7 až 9: Vliv doby reakce při bazické aktivaci cyklodextrinu

17,016 g β- cyklodextrinu se rozpustilo v 80 ml demineralizované vody při 40 °C a přidalo se 8 ml 1M NaOH. Do roztoku β-cyklodextrínu se přidalo 8,22 ml l-chlór-2,3-epoxypropanu a roztok se míchal po různě dlouhou dobu (viz Tabulka lil).

Roztok hyaluronanu se připravil rozpuštěním 4 g hyaluronanu v 400 ml demineralizované vody. Roztok se zahřál na 40 °C a přidal se roztok aktivovaného cyklodextrinu. Reakční směs se udržovala při 40 ^qC za intenzivního míchání po dobu 20 h a následně dialyzovala proti demineralizované vodě pres dialyzačni střeva (Cut off 12 000 - 14 000) a lyofilizovaia,

Graf 3. FTIR spektra připravených derivátů k příkladům 7 (—), 8( ),9( )

Tabulka III

Příklady 7-9: Různá doba reakce l-clilór-2,3-epoxypropanu s cyklodcxtnnem

Přiklad	Doba (h)	M_W(HA) (g. mol¹)	M_w (Prod) (g. mol'¹)	c(CD) %	Rozpustný podíl (%)	Bobtnavost (%)
7	0,16	310000	341500	U7	73,00	728
8	l	310000	383800	1,02	66,20	483
9	2	310000	291000	1,65	69,50	486

Příklady 10 až 12 : Vliv doby reakce v kyselém pH

4,254 g β-cyklodextrinu se rozpustilo ve 20 ml demineralizované vody při 40 °C a následně se přidal Iml IM HC1. 2,055 ml l-chlór-2,3-epoxypropanu se přidalo do okyseleného roztoku cyklodextrinu za intenzivního mícháni, Reakční směs se míchala dobu uvedenou v tabulce IV, a po jejím uplynutí se přidal roztok hyaluronanu.

Roztok hyaluronanu se připravil rozpuštěním I g hyaluronanu o molekulové hmotnosti 350000 g.mol'¹ ve 100 ml demineralizované vody. Po přidání roztoku hyaluronanu do roztoku aktivovaného cyklodextrinu se roztok udržoval při 40 °C za stálého míchání při této teplotě 20 h. Reakční produkt se izoloval dialýzou proti demineralizované vodě přes dialyzační střeva (Cut off 12000 - 14000).

Tabulka IV

Příklady 10-12: Různá doba aktivace v kyselém prostředí

Přiklad	Doba (li)	M_w (HA) (g.mol¹)	M_w (Prod) (gmol'¹)	c(CD) %	Rozpustný podíl (%)	Bobtnavost (%)
10	0,5	350 000	562300		44,2	4200
11	1	350 000	550800	8,4	30	6389
12	2	350 000	638000	8,3	50,5	2894

Příklady 13 až 15: Různá množství β-cyklodextrinu

Různá množství β-cyklodextrinu se rozpustila v 10 ml demíneralizované vody při 40 °C a následně se přidal lml 1M NaOH a do roztoku se přidalo ekvivalentní množství l-chlór-2,3epoxypropanu za intenzivního míchání (Reakční směs a výsledky jsou uvedeny v tabulce V). Reakční směs se míchala po 10 min a poté se přidal roztok hyaluronanu.

Roztok hyaluronanu se připravil rozpuštěním 0,5 g hyaluronanu o molekulové hmotnosti 350000 g.mol'¹ ve 50 ml demíneralizované vody. Po přidání roztoku hyaluronanu do roztoku aktivovaného cyklodextrinu se roztok udržoval při 40 °C a udržoval za stálého mícháni při této teplotě 20 h. Reakční produkt se izoloval dialýzou proti demíneralizované vodě pres dialyzační střeva (Cut oíT 12000 - 14000)

Tabulka V

Příklady 13-15: Vliv množství β-cyklodextrmu

Příklad	m (β-CD) ω	V (EP) (ml)	M_W(HA) (gmol'¹)	M_w (Prod) (g.mol¹)	c(CD) (%)	Rozpustný podíl (%)	Bobtnavost (%)
13	2,127	1,365	350 000	226600	5,7	39,11	238,2
14	1,418	0,685	350 000	638350	4,1	54,78	rozpuštěno
15	0,709	0,345	350 000	701650	1,8	68,96	rozpuštěno

Příklady 16 až 18: Příprava derivátu s γ-cyklodextrinem

19,444 g γ-cyklodextrinu se rozpustilo v 80 ml demivody při 40 °C a následně se přidal 1M NaOH (8 ml) a za intenzivního míchání se přidávalo do roztoku 9,395 ml l-chlór-2,3-epoxypropanu. Po 10 minutách se přidal roztok hyaluronanu φ ·

Roztok hyaluronanu se připravil rozpuštěním 4 g hyaluronanu o různých molekulových hmotnostech (viz. Tabulka VI) v 400 ml demineralizované vody. Po přidání roztoku hyaluronanu do reakční směsi cyklodextrinu se roztok udržoval při teplotě 40 °C a intenzivně míchal po dobu 20 h. Reakční produkt se izoloval dialýzou proti demineralizované vodě pres dialyzační střeva (Cut offl 2000-14000).

Graf 4. FTIR spektra připravených derivátů k příkladům 16 (—), 17 (—), 18 (-)

Tabulka VI

Příklady 16-18: Deivát s y-cyklodextrinem

Přiklad	M_W(HA) (g. mol¹)	M_w (Prod) (g. mol')	Rozpustný podíl (%)	c(CD) %	Bobtná vost (%)
16	96210	131900	61,90	1,1	918
17	310000	243600	4190	2,6	1029
18	1109000	450600	61,60	4,2	228

Příklady 19 až 21: Příprava derivátu s (i-cyklodextrinem

14,5872 g α-cyklodextrinu se rozpustilo v 80 ml demivody při 40 °C a následně se přidalo 8 ml 1M NaOH a 7,046 ml epichlorhydrinu do roztoku za intenzivního míchání. Po 10 minutách se přidal roztok hyaluronanu

Roztok hyaluronanu se připravil rozpuštěním 4 g hyaluronanu o různých molekulových hmotnostech (viz. Tabulka VII) v 400 ml demineralizované vody. Po přidáni roztoku hyaluronanu do reakční směsi cyklodextrinu se roztok udržoval při teplotě 40 °C a intenzivně míchal po dobu 20 h. Reakční produkt se izoloval dialýzou proti demineralizované vodě pres dialyzačni střeva (Cul oíT 12000-14000).

Graf 5. FTIR spektra připravených derivátů pro příklady 19 (—), 20 (- ), 21 ( )

Tabulka VII

Příklady 19-21: Derivát s a-cyklodextrinem

Přiklad	M_W(HA) mol·¹)	M_w (Prod) (g. mol’’)	Rozpustný podíl (%)	c(CD) %	Bobtnavost (%)
19	96210	100200	60,70	0,06	940
20	310000	427800	69,00	1,76	1271
21	1109000	241700	54,57	4,26	440

Příklad 22: Tvorba porézního nerozpustného materiálu

Derivát připravený dle příkladu 3 se rozpustil v demineralizované vodě, nalil na Pctriho misku a vysušil při teplotě 55 °C. Vzniklá fólie se následně ponořila na 24 h do demineralizované vody, kde nabobtnala a po zamražení se lyofiiizovala.

Derivát připraveny dle přikladu 3 se rozpustil v demineralizované vodě, zamrazil při teplotě -30 °C a lyofilizoval Tato porézní struktura se impregnovala 80% 2-propanolem a stabilizovala působením teploty 55 °C po dobu 12 h. Poréznost materiálů se charakterizovala pomoci rastrovací elektronové mikroskopie

Obr. 4 SEM fotografie porézního nerozpustného materiálu dle příkladu 22 při různém zvětšení A x 50;

B x 400

Příklad 23: Navázání léčiva

K roztoku derivátu γ HA-CD (TO mg/2,5 ml pufru o pH = 10,5) se přidalo 1,5 ml roztoku 2-amino-4_?6-dimethylpyrimidinu o koncentraci 7,3mg/250 ml pufru o pH ' 10,5. 2-Amino-4,6-dimethylpyrimidin je léčivo s antimikrobiálními a antituberkoloznimi účinky. Množství navázaného léčiva se kvantifikovalo pomocí fluorimetru při vlnových délkách X_ex= 290 nm a Xjm- 344 nm.

K roztoku derivátu β HA-CD o koncentraci 0,01mmol/l se přidalo různé množství ferulové kyseliny. Maximální přidané množství bylo l,2E-05 inmol/1. Toto množství se beze zbytku navázalo v komplexu HA-CD s ferulovou kyselinou. Komplexace byla ověřena měřením UV-Vls spektrofotometru a spektrofluorofotometru.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Způsob přípravy hyaluronanu modifikovaného cyklodextriny α, β, γ nebo jejich deriváty, vyznačující se tím, že hyaluronan se modifikuje cyklodextriny α, β, γ nebo jejich deriváty připravenými reakcí příslušného cyklodextrinu nebo jeho derivátu s 1-chlór-2,3-epoxypropanem a hyaluronanem.
2 Způsob přípravy modifikovaného hyaluronanu podle nároku 1, vyznačující se tím, že reakce se provádí v alkalickém prostředí s pH vyšším než 8 nebo v kyselém prostředí s pH nižším než 5.
3. Způsob přípravy modifikovaného hyaluronanu podle nároku 1, vyznačující se tím, že hyaluronan má molekulovou hmotnost v rozmezí I 000 až 10 000 000 g.mof¹.
4. Způsob přípravy modifikovaného hyaluronanu podle nároku 1, vyznačující se tím, že hyaluronan je ve formě volné kyseliny nebo jakákoli farmakologicky přijatelné soli.
5. Způsob přípravy modifikovaného hyaluronanu podle nároku 1, vyznačující se tím, že derivát je vybrán ze skupiny látek obsahující amino, hydrazino a alkybamino skupinu, jako například amino-cyklodextrin, hydrazin-cyklodextrin, amino-alkyl-cyklodextrin, karboxyalkyl cyklodextrin, 6-O-a-D-glykosyl-P-cyklodextrin, hydroxylethyl cyklodcxtrin, sukcinyl cyklodextrin, hydroxypropyl cyklodextrin a sulphobutyl-cyklodextrin.
6. Způsob přípravy modifikovaného hyaluronanu podle nároku 1, vyznačující se tím, že reakční poměr cyklodextrinu ku l-ha!ogen-2,3-epoxypropanu je v rozmezí 0,05.1 až 0,4:1, výhodně 0,106:1.
7. Způsob přípravy modifikovaného hyaluronanu podle nároku 1, vyznačující se tím, že reakční poměr cyklodextrinu ku dimeru hyaluronanu je v rozmezí 0,3:1 až 2:1, výhodně 1,5:1.

I « ·<· · · · · *

I · ··· · · 4 4 · 4 ·· · · «4 4* ·· *·
8. Přípravek tvořený hyaluronanem modifikovaným cyklodextriny α, β, γ nebo jejich deriváty připravenými reakci příslušného cyklodextrinu nebo jeho derivátu s 1-chlór-2,3-epoxypropanem a hyaluronanem vyznačující se tím, že je zpracovaný do formy folií, vláken, mikrosfér, hub, membrán.
9. Přípravek podle nároku 8, vyznačující se tím, že je rozpustný ve vodě.
10 Přípravek podle nároku 8, vyznačující se tím, že je nerozpustný ve vodě.
11. Přípravek podle nároku 8, vyznačující se tím, že je možno jej použít jako prostředek pro tvorbu náhrady tkáni.
12. Přípravek podle nároku 11, vyznačující se tím, že struktury prostředku pro tvorbu náhrady tkání tvoří krycí a antiadhezní materiály pro použiti v dermatologii, traumatologii nebo ortopedii.
13. Přípravek podle nároku 8, vyznačující se tím, že jsou na něj vázány biologicky aktivní látky.
14. Přípravek podle nároku 13, vyznačující se tím, že biologicky aktivní látky jsou léčiva, dezinfekční prostředky nebo antioxidanty.