CZ2007487A3 - Imunostimulacní úcinky trilobolidu a zpusob jeho prípravy - Google Patents
Imunostimulacní úcinky trilobolidu a zpusob jeho prípravy Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2007487A3 CZ2007487A3 CZ20070487A CZ2007487A CZ2007487A3 CZ 2007487 A3 CZ2007487 A3 CZ 2007487A3 CZ 20070487 A CZ20070487 A CZ 20070487A CZ 2007487 A CZ2007487 A CZ 2007487A CZ 2007487 A3 CZ2007487 A3 CZ 2007487A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- trilobolide
- chromatography
- extracted
- immune system
- ifn
- Prior art date
Links
- FIAZIVNRHQWTPY-QAAPNFDWSA-N Trilobolide Chemical compound CC[C@H](C)C(=O)O[C@H]1C[C@](C)(OC(C)=O)[C@H]2C[C@@H](OC(=O)C(\C)=C/C)C(C)=C2[C@@H]2OC(=O)[C@@](C)(O)[C@@]12O FIAZIVNRHQWTPY-QAAPNFDWSA-N 0.000 title claims abstract description 90
- FIAZIVNRHQWTPY-FZMVEPMHSA-N Trilobolide Natural products CC[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]1C[C@@](C)(OC(=O)C)[C@@H]2C[C@H](OC(=O)C(=CC)C)C(=C2[C@@H]3OC(=O)[C@@](C)(O)[C@@]13O)C FIAZIVNRHQWTPY-FZMVEPMHSA-N 0.000 title claims abstract description 85
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 17
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 title description 6
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims abstract description 45
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 33
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 23
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims abstract description 14
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 244000016313 Laserpitium siler Species 0.000 claims abstract description 5
- 244000186327 Laser trilobum Species 0.000 claims abstract description 4
- 235000015291 Laser trilobum Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 235000001656 Laserpitium siler Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 claims description 36
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 17
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 16
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 12
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical group O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 10
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 10
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims description 8
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 8
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 8
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims description 8
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 8
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 8
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 6
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 4
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 4
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010033647 Pancreatitis acute Diseases 0.000 claims description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 4
- 201000003229 acute pancreatitis Diseases 0.000 claims description 4
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 claims description 4
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 claims description 4
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 claims description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims description 3
- 230000007815 allergy Effects 0.000 claims description 3
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims description 3
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 claims description 3
- 229940121357 antivirals Drugs 0.000 claims description 3
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 claims description 3
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 claims description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims description 2
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 claims description 2
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 claims description 2
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 claims description 2
- 241000206389 Helleborus Species 0.000 claims 1
- 241000124806 Laserpitium Species 0.000 claims 1
- 241000985694 Polypodiopsida Species 0.000 claims 1
- 241000063156 Squatina squatina Species 0.000 claims 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 20
- 241001187259 Laserpitium archangelica Species 0.000 abstract description 3
- 235000004035 Cryptotaenia japonica Nutrition 0.000 abstract 1
- 241000287181 Sturnus vulgaris Species 0.000 abstract 1
- 102000007641 Trefoil Factors Human genes 0.000 abstract 1
- 235000015724 Trifolium pratense Nutrition 0.000 abstract 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 22
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 19
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 12
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 12
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 11
- HATRDXDCPOXQJX-UHFFFAOYSA-N Thapsigargin Natural products CCCCCCCC(=O)OC1C(OC(O)C(=C/C)C)C(=C2C3OC(=O)C(C)(O)C3(O)C(CC(C)(OC(=O)C)C12)OC(=O)CCC)C HATRDXDCPOXQJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 10
- IXFPJGBNCFXKPI-FSIHEZPISA-N thapsigargin Chemical compound CCCC(=O)O[C@H]1C[C@](C)(OC(C)=O)[C@H]2[C@H](OC(=O)CCCCCCC)[C@@H](OC(=O)C(\C)=C/C)C(C)=C2[C@@H]2OC(=O)[C@@](C)(O)[C@]21O IXFPJGBNCFXKPI-FSIHEZPISA-N 0.000 description 10
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 9
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 9
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 9
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 9
- 210000003024 peritoneal macrophage Anatomy 0.000 description 9
- FIAZIVNRHQWTPY-ARYPRELUSA-N Trilobolid Natural products CC[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]1C[C@@](C)(OC(=O)C)[C@@H]2C[C@H](OC(=O)C(=CC)C)C(=C2[C@@H]3OC(=O)[C@](C)(O)[C@@]13O)C FIAZIVNRHQWTPY-ARYPRELUSA-N 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 5
- 238000005325 percolation Methods 0.000 description 5
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 4
- CNZIQHGDUXRUJS-UHFFFAOYSA-N Cyclopiazonic acid Natural products CC(=C/1C(=O)C2C3C(Cc4cccc5[nH]cc3c45)C(C)(C)N2C1=O)O CNZIQHGDUXRUJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CNZIQHGDUXRUJS-DQYPLSBCSA-N alpha-cyclopiazonic acid Natural products CC(O)=C1C(=O)[C@@H]2[C@@H]3[C@@H](Cc4cccc5[nH]cc3c45)C(C)(C)N2C1=O CNZIQHGDUXRUJS-DQYPLSBCSA-N 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- ZKSIPEYIAHUPNM-ZEQRLZLVSA-N butobendine Chemical compound C([C@H](CC)N(C)CCN(C)[C@@H](CC)COC(=O)C=1C=C(OC)C(OC)=C(OC)C=1)OC(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 ZKSIPEYIAHUPNM-ZEQRLZLVSA-N 0.000 description 4
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 108091006112 ATPases Proteins 0.000 description 3
- 102000057290 Adenosine Triphosphatases Human genes 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 230000029662 T-helper 1 type immune response Effects 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- 241001225321 Aspergillus fumigatus Species 0.000 description 2
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 2
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000007336 Cryptococcosis Diseases 0.000 description 2
- 241000221204 Cryptococcus neoformans Species 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 2
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 2
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 2
- 102100034170 Interferon-induced, double-stranded RNA-activated protein kinase Human genes 0.000 description 2
- 101710089751 Interferon-induced, double-stranded RNA-activated protein kinase Proteins 0.000 description 2
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 2
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 2
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 102000011779 Nitric Oxide Synthase Type II Human genes 0.000 description 2
- 108010076864 Nitric Oxide Synthase Type II Proteins 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 2
- 229940091771 aspergillus fumigatus Drugs 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000004094 calcium homeostasis Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- VNFPBHJOKIVQEB-UHFFFAOYSA-N clotrimazole Chemical compound ClC1=CC=CC=C1C(N1C=NC=C1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 VNFPBHJOKIVQEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004022 clotrimazole Drugs 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 2
- DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N imiquimod Chemical compound C1=CC=CC2=C3N(CC(C)C)C=NC3=C(N)N=C21 DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 2
- 238000011694 lewis rat Methods 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000002417 nutraceutical Substances 0.000 description 2
- 235000021436 nutraceutical agent Nutrition 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 2
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 210000001908 sarcoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000000194 supercritical-fluid extraction Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007445 2',5'-Oligoadenylate Synthetase Human genes 0.000 description 1
- 108010086241 2',5'-Oligoadenylate Synthetase Proteins 0.000 description 1
- 238000012586 2D rotating frame Overhauser effect spectroscopy experiment Methods 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 229940121819 ATPase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000055025 Adenosine deaminases Human genes 0.000 description 1
- 108700040115 Adenosine deaminases Proteins 0.000 description 1
- 244000061520 Angelica archangelica Species 0.000 description 1
- 206010059313 Anogenital warts Diseases 0.000 description 1
- 240000005528 Arctium lappa Species 0.000 description 1
- 241000228197 Aspergillus flavus Species 0.000 description 1
- 206010004146 Basal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 1
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 241000646197 Carex nigra Species 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 241000606153 Chlamydia trachomatis Species 0.000 description 1
- 241000223203 Coccidioides Species 0.000 description 1
- 241000223936 Cryptosporidium parvum Species 0.000 description 1
- 229920001076 Cutan Polymers 0.000 description 1
- 102100025621 Cytochrome b-245 heavy chain Human genes 0.000 description 1
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 241000224432 Entamoeba histolytica Species 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 241000589602 Francisella tularensis Species 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 241000224467 Giardia intestinalis Species 0.000 description 1
- 241000245654 Gladiolus Species 0.000 description 1
- 235000001287 Guettarda speciosa Nutrition 0.000 description 1
- 229910004373 HOAc Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 241000228404 Histoplasma capsulatum Species 0.000 description 1
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- YWZRKODHWXAKHS-QNKWTIDMSA-N Laserolide Chemical compound [C@@H]1([C@H](C/C(C)=C/CC/C(C)=C/2)OC(C)=O)[C@H]\2OC(=O)[C@@]1(C)OC(=O)C(\C)=C/C YWZRKODHWXAKHS-QNKWTIDMSA-N 0.000 description 1
- 241000589242 Legionella pneumophila Species 0.000 description 1
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 1
- 241000222727 Leishmania donovani Species 0.000 description 1
- 208000004554 Leishmaniasis Diseases 0.000 description 1
- 241000408533 Lento Species 0.000 description 1
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 1
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010062207 Mycobacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000186366 Mycobacterium bovis Species 0.000 description 1
- 241000186364 Mycobacterium intracellulare Species 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- 231100000678 Mycotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000604972 Neorickettsia risticii Species 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 description 1
- 244000020186 Nymphaea lutea Species 0.000 description 1
- 241000606693 Orientia tsutsugamushi Species 0.000 description 1
- 241000526686 Paracoccidioides brasiliensis Species 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 241000577979 Peromyscus spicilegus Species 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 240000009188 Phyllostachys vivax Species 0.000 description 1
- 241000224017 Plasmodium berghei Species 0.000 description 1
- 241000224024 Plasmodium chabaudi Species 0.000 description 1
- 241000224028 Plasmodium cynomolgi Species 0.000 description 1
- 241000223960 Plasmodium falciparum Species 0.000 description 1
- 241000233872 Pneumocystis carinii Species 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000158504 Rhodococcus hoagii Species 0.000 description 1
- 241000606699 Rickettsia conorii Species 0.000 description 1
- 241000606697 Rickettsia prowazekii Species 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 241000223997 Toxoplasma gondii Species 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 1
- 241000607447 Yersinia enterocolitica Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- ACOGMWBDRJJKNB-UHFFFAOYSA-N acetic acid;ethene Chemical group C=C.CC(O)=O ACOGMWBDRJJKNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000362 adenosine triphosphatase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 1
- 229940060265 aldara Drugs 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000000081 body of the sternum Anatomy 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002026 chloroform extract Substances 0.000 description 1
- 239000002036 chloroform fraction Substances 0.000 description 1
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 1
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 1
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 1
- 208000016532 chronic granulomatous disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000005100 correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 229910052571 earthenware Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 229940007078 entamoeba histolytica Drugs 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012259 ether extract Substances 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940118764 francisella tularensis Drugs 0.000 description 1
- 125000000457 gamma-lactone group Chemical group 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 229940085435 giardia lamblia Drugs 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000001052 heteronuclear multiple bond coherence spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229960002751 imiquimod Drugs 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940124622 immune-modulator drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 108020004201 indoleamine 2,3-dioxygenase Proteins 0.000 description 1
- 102000006639 indoleamine 2,3-dioxygenase Human genes 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 230000017307 interleukin-4 production Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 description 1
- JTEGQNOMFQHVDC-NKWVEPMBSA-N lamivudine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1O[C@@H](CO)SC1 JTEGQNOMFQHVDC-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- 229960001627 lamivudine Drugs 0.000 description 1
- YWZRKODHWXAKHS-VWNVYAMZSA-N laserolide Natural products CC=C(C)/C(=O)O[C@@]1(C)[C@@H]2[C@H](CC(=C/CCC(=C/[C@@H]2OC1=O)C)C)OC(=O)C YWZRKODHWXAKHS-VWNVYAMZSA-N 0.000 description 1
- 229940115932 legionella pneumophila Drugs 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 201000000626 mucocutaneous leishmaniasis Diseases 0.000 description 1
- 230000004118 muscle contraction Effects 0.000 description 1
- 208000027531 mycobacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002636 mycotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008289 pathophysiological mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000008288 physiological mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229940046939 rickettsia prowazekii Drugs 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229930009674 sesquiterpene lactone Natural products 0.000 description 1
- 150000002107 sesquiterpene lactone derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000005055 short column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011255 standard chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 201000011138 superficial basal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000006257 total synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000029069 type 2 immune response Effects 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000001790 virustatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 229940098232 yersinia enterocolitica Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/23—Apiaceae or Umbelliferae (Carrot family), e.g. dill, chervil, coriander or cumin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/365—Lactones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/10—Anthelmintics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Immunology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Botany (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Virology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Rešení se týká trilobolidu pro použití ke stimulaci imunitního systému, zejména ke stimulaci sekrece interferonu gamma, a využití tohoto úcinku v terapii. Dále se týká zpusobu prípravy trilobolidu z rostlin timoje trojlalocného (Laser trilobum (L.) Borkh.), hladýše andelikového (Laserpitium archangelica Wulf, in Jacq.) nebo hladýšovce horského (Laserpitium siler L.).
Description
Imunostimulační účinky trilobolidu a způsob jeho přípravy
Oblast techniky
Vynález se týká imunostimulačních účinků trilobolidu, přípravku obsahujícího trilobolid a způsobu přípravy trilobolidu.
Dosavadní stav techniky
Seskvitcrpenoidní iaktony jsou skupinou přírodních nízkomolekulárních látek, vyskytujících se v rostlinách a vykazujících široké spektrum účinků. Mezi seskviterpenoidní Iaktony patří trilobolid (vzorec I).
(I)
Trilobolid lze získat z kořene rostliny timoje trojlaločncho (Laser trilobum (L.) Borkh.) (Smítalová, Z.; Buděšínský, M.; Šaman, D.; Holub, M. Coll Czech Chem Commun 1986, 51, 1323-1339) nebo dvou druhů hladýše (Laserpitium archangelica Wulf. in Jacq. a Laserpitium siler L.), ve kterých je tato látka obsažena ve značném množství, a lze ji poměrně snadno, v dobrém výtěžku a ve vysoké čistotě, získat extrakcí a chromatograříckou separací. Sběr rostlinného materiálu je, vzhledem k tomu, že se jedná o sběr kořenů rostlin, náročný a pro vytrvalou rostlinu i destruktivní, navíc nutně omezený jen do nechráněných oblastí jejího výskytu. Pro některé látky příbuzné trilobolidu (např. thapsigargin) byla navržena totální syntéza (Ley, S. V.; Antoncllo, A.; Balskus, Ε. P.; Booth, D. T.; Christensen, S. B.; Cleator, E.; Gold, H., Hógcnauer, K.; Iíůnger, LL; Mycrs, R. M.; Oliver, S. F.; Sítnic, O.; Smith, M. D.; Sohoel, IL; Woolford, J. A. PNAS 2004, 101, 12073-12078; Balí, M.; Andrews, S. P.;
Wierschetn, F.; Cleator, E.; Smith, M. D.; Ley, S. V. Org Lett 2007, 9, 663-666). Provedení těchto totálních syntéz je velmi náročné, protože obsahují desítky reakčních stupňů a dosahují celkových výtěžků nižších než 1 %.
V cukaryotní buňce mají významnou úlohu ionty vápníku, protože ovlivňují řadu fyziologických a patofyziologických mechanismů. Endoplazmatické retikulum (ER) je buněčná organela, která má klíčovou úlohu v udržení homeostáze vápníku v buňce. Hladina volných iontů vápníku je ve “zdravé” buňce udržována na velmi nízké úrovni, řádově 10'7 mol/1. Gradient koncentrace Ca2+je v ER o 3-4 řády vyšší než v cytosolu. Po signálu, např. hormonem, je vápník z organely uvolňován do cytosolu. Transport vápníku zpátky do ER je zajišťován ATPasou sarko/endoplazmatíckého retikula (SERCA). Existují čtyři izoformy tohoto enzymu, SERCA 1, SERCA 2a a 2b, SERCA 3. SERCA 3 je přítomna v imunokompetentních buňkách, zejména makrofázích. Při transportu Ca jsou předávány dva ionty Ca z cytosolu buňky přes membránu ER do lumen ER. lento proces vyžaduje energii (ATP) a dochází při něm ke konformační změně (Berridge, M. J, Cell Calcium 2002, 32, 235-249; Wu, K. D.; Lee, W. S.; Wcy, J.; Bungard, D,; Lytton, J. Am J Physiol 1995, 269, C775-C784).
Je-li Ca2t-pumpa (SERCA) zablokována, zvyšuje se hladina intracelulámího vápníku vyprázdněním zásob Ca2+ v ER. Současně dochází i k dalšímu přesunu Ca2+ z extracelulámího prostoru do cytosolu buňky. Výsledkem je dlouhodobé zvýšení hladiny intracelulámího vápníku. Dysbalance intraluminálního vápníku v ER vede zároveň k tz.v. stresu ER. Tyto jevy modulují buněčnou signalizaci a genovou expresi (Berridge, M. J. Cell Calcium 2002, 32,235-249; Wu, K. D.; Lee, W. S.).
Existují standardní inhibitory SERCA: thapsigargin (TG), cyklopiazonová kyselina (CPA),
2,5-di-(t-butyl)-l,4-benzohydrochinon (DBJIQ). Mechanismus účinku inhibitoru spočívá v konformační změně enzymu a tedy snížení afinity SERCA jak pro Ca2+, tak pro ATP (Sagara, Y.; Wade, J. B.; Inesi, G. J Biol Chem 1992, 267, 1286-1992). Inhibitor TG je selektivní pro všechny 4 isozymy SERCA (Šuplat, D.; Targos, B.; Sabala, P.; Baranska, J.; Pomorski, P. Biochem Biophys Res Commun 2004, 323, 870-875) a nemá afinitu k ATPasam jiného typu (Seidler, N. W.; Joana, L; Vegh, M.; Martonosí, A. J Biol Chem 1989, 264, 17816-17823). Inhibice isozymů SERCA je řádově 10'7 mol/1. CPA je mykotoxin produkovaný kmeny Penicillium eyelopium a Aspergillus flavus. Jeho účinnost je podobná jako u TG (Šuplat, D.; Targos, B.; Sabala, P.; Baranska, J.; Pomorski, P, Biochem Biophys Res Commun 2004, 323, 870-875; Seidler, N. W.; Joana, L; Vegh, M.; Martonosí, A. J Biol • » a « • · • · · · ·
V fc
Chem 1989, 264, 17816-17823). DBHQ je méně účinný inhibitor (EC5„ jc 580 x 10’7 mol/1 oproti EC50 je 35 x 10'7 mol/1 pro TG v membránách krevních destiček). Působí jen u izoformy SERCA 3 (Authi, K. S.; Bokkala, S.; Patel, Y.; Kakkar, V. V.; Munkonge, F. Biochem J 1993, 294, 119-126; Authi, K. S.; Bokkala, S.; Patel, Y.; Kakkar, V. V.; Munkonge, F. Biochem J 1993, 294, 119-126). Inhibitory SERCA se používají experimentálně k zvýšení hladiny intracelulárního vápníku.
Změny koncentrace vápníku (Ca2+) vcytoplasmě ovlivňují v podstatě všechny buněčné funkce. Děje se tak prostřednictvím Ca2+-rcgulačních proteinů, specifických kinas a fosfatas. Tyto enzymy modulují rychlé procesy, jako jsou svalová kontrakce a sekrece nebo pomalejší procesy, jako jsou buněčný růst a diferenciace (Groencndyk, J.; Lynch, J.; Michalek, M. Mol Cells 2004,17,383-389).
Z literatury vyplývá, že terapeutický potenciál SERCA inhibitorů se prezentuje především v oblastech infekčních a nádorových onemocnění. Experimentálně byla prokázána inhibice replikace virů ve vztahu k změně homcostáze Ca2+ a stresu ER (např. rotavirus, hepatitis C virus, herpes simplex virus, cytomegalovirus aj.) (Michclangeli, F.; Liprandi, F.; Chemello, Μ. E.; Ciarlet, M.; Ruiz, M.-C. J Virol 1995, 69, 3838-3847; Cheshenko, N.; Del Rosario, B.; Woda, C.; Marcellino, D.; Satlin, L. M.; Herold, B. C. J Cell Biol 2003, 163, 283-293; Isícr, J. A.; Maguire, T. G,; Alwine, J. C. J Virol 2005, 79, 15388-15397; Nakagawa, M.; Sakamoto,
N.; Tanabe, Y.; Koyama, T.; ítsui, Y.; Takeda, Y.; Chen, C. FL; Kakinuma, S.; Oooka, S.; Maekawa, S.; Enomoto, N.; Watanabe, M. Gastroenterology 2005, 129, 1031-1041). Mykobakteriální infekce jsou standardně léčeny clotrimazolcm (Ahmad, Z.; Sharma, S.; Khuller, G. K. FEMS Microbiol Lett 2005, 251, 19-22). Tato látka imidazolového typu a její další deriváty se rovněž řadí mezi SERCA inhibitory (Snajdrova, L.; Xu, A.; Narayanan, N. J Biol Chem 1998,273, 28032-28039).
Protinádorové účinky SERCA inhibitorů (TG a clotrimazolu) byly experimentálně dokumentovány (Khalid, Μ. H.; Tokunaga, Y.; Caputy, A. J.; Waltcrs, E. J Neurosurg 2005, 103, 79-86; Meira, D. D.; Marinho-Carvalho, Μ, M.; Tcixcira, C. A.; Veiga, V. F.; Da Poian, A. T.; Holandino, C.; de Freitas, M. S.; Sola-Penna, M, Mol Genet Metab 2005, 84, 354-362). Zvýšení intracelulárního Ca2+ do mikromolárních koncentraci vyvolává apoptózu buněk. Tohoto efektu je využito pro léčbu nádoru prostaty nezávislého na androgenu. Je vyvíjeno proléčivo, směrované pouze k nádorovým buňkám (Denmeade, S. R.; Jakobscn, C. M.;
Janssen, S.; Khan, S. R.; Garrett, E. S.; Lílja, H.; Christensen, S. B.; Isaacs, J. T. J Nat Cancer Inst 2003, 95, 990-1000; Janssen, S.; Rosen, D. M.; Ricklis, R. M.; Dionne, C. A.; Lilja, H.; Christensen, S. B.; Isaacs, J. T.; Denmeade, S. R. Prostatě 2006, 66, 358-368).
Údajů o účincích SERCA inliibitorů na imunitní systém je málo. Imunomodulačni účinky látek se prezentují jako schopnost produkovat cytokiny a chemokiny. Imunostímulační účinek TG byl dokumentován v myších makrofázích a lidských epiteliálních buňkách, které produkovaly cytokiny IL-6 a ÍL-8, resp. (Bost, K. L.; Mason, M. J. J Imntunol 1995, 155, 285-296; Yu, Y.; De Waele, C.; Chadcc, K. Inflamm Res 2001, 50, 220-226). Všechny tři inhibitory SERCA (TG, CPA a DBIIQ) aktivují produkci IL-4 (Onose, J.-i.; Teshima, R.; Sawada, J.-i. Immunol Lett 1998, 64,17-22). Sekrece prozánětlivých cytokinů TNF-α a ΙΕ-1 β není jednoznačná a závisí na typu buněk. Je prokázáno, že sekrece IL-8 aktivovaná TG je závislá na Ca2+. Všechny tři inhibitory rovněž stimulují produkci chemotaktického proteinu MCP-1 (Steube, K. G.; Meyer, C.; Drcxler, II. G. Mol Cell Biol Res Commun 2000, 3, 6065). Dosud však nebyla připravena žádná imunomodulačni léčiva založená na inhibitorech SERCA.
V současné době je známo, že trilobolid je účinným inhibitorem Ca -ATPasy s afinitou v nanomolární koncentraci (Wictome, M.; Plolub, M,; East, J. M.; Lee, A. G. Biochem Biophys Res Commun 1994, 199, 916-921). Trilobolid inhibuje SERCA jak v živočišných buňkách, tak buňkách vyšších rostlin (Thomson, L. J.; Halí, J. L.; Williams, L. E. Plant Physiol 1994, 104, 1295-1300). Až doposud nebylo navrženo žádné terapeutické využití tohoto laktonu.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je trilobolid pro použití ke stimulaci imunitního systému.
Význakem vynálezu jc, že stimulací imunitního systému je stimulace sekrece interferonu gamma (IFN-γ).
Dalším význakem vynálezu je trilobolid pro použití pro léčbu stavů vybraných zc skupiny zahrnující choroby způsobené viry, bakteriemi, prvoky, červy nebo houbami, atopické alergie, stavy snížené aktivity imunitního systému, zejména při léčbě glukokortikoidy, způsobené stresovými situacemi, kolorektálním karcinomem a akutní pankreatitidou.
...... « » • ·· * · ♦ • *.......
• · · « · · · ··· ·· ·· ·
Imunokompetentní buňky jsou v přítomnosti trilobolidu stimulovány k produkci IFN-γ. Tento účinek je způsoben jejich schopností proniknout do buňky, selektivně se navázat na ATPasu sarko/endoplazmatického retikula (SERCA) a ireverzibilně ji inhibovat. Koncentrace trilobolidu vyvolávající produkci IFN-γ aplikovaného kc kultivovaným buňkám je v řádech nmol/1 - μηιοί/ΐ. Stanovení koncentrace IFN-γ v kultivačním médiu nebo v biologických tekutinách lze provádět nejlépe přímo, např. pomocí metody ELISA nebo nepřímo na základě biosyntézy oxidu dusnatého (NO). Efekt trilobolidu je pozorovatelný u různých zvířecích druhů (např. myš, lab. potkan, člověk).
IFN-γ je eytokin, který je produkovaný imunokompetentními buňkami jako jsou lymfocyty skupin: CD8+ T buňky, Thl CD4+ T buňky, NK, NK. T buňky a makrofágy. Existuje více mechanismů jeho přímých protivirových a dalších antimikrobiálních účinků. Patří mezi ně především stimulace proteinů z rodiny 2',5 ’-oligoadenylát syntetas (OAS), stimulace proteinové kinasy R (PKR) (Esteban, M.; Patino, C. J Interferon Cytokine Res 2000, 20, 867877), deaminasy adenosinu (Boehm, U.; Klamp, T.; Groot, M.; Howard, J. C. Annu Rev Immunol 1997, 15, 749-795), indolamin 2,3-dioxygenasy (Bodaghi, B.; Goureau, 0.; Zipeto, D.; Laurent, L.; Virelizier, J.-L.; Míchelson, S. .1 Immunol 1999, 162, 957-964), a v neposlední řadě také inducibilní syntasy oxidu dusnatého (iNOS) (Karupiah, G.; Xie, Q.-w.; Buller, R, M, L·.; Nathan, C.; Duarte, C.; MacMicking, J. D. Science 1993, 261,1445-1448).
IFN-γ je typickým představitelem tzv. Thl imunitní odpovědi a v procesu aktivity imunitního systému zastává klíčové místo. Při nedostatečné Thl odpovědi se zvyšuje citlivost organizmu k rozvoji infekčních, ale i nádorových onemocnění. Pro velký počet infekčních onemocnění (např, AIDS, tuberkulóza, leishmanióza, lepróza, atd.) je naopak charakteristický tzv. Th2 imunitní profil, ve kterém má rozhodující význam interleukin-4 (IL-4). Th2 imunitní fenotyp je z hlediska obranyschopnosti proti mnohým infekčním onemocněním nežádoucí. Z hlediska léčby je naopak žádoucí Thl imunitní odpověď zvýšit (Xing, Z.; Wang, J. Curr Pharmaceut Design 2000, 6, 599-611). Proto je IFN-γ považován za vážného kandidáta pro léčbu různých typů onemocnění a patologických stavů, zvláště takových, kdy jc potřeba poměr Thl/Th2 imunitní odpovědi zvrátit ve prospěch odpovědi Thl, jmenovitě vzhledem k produkci IFN- γ.
Způsob využití trílobolidu vychází ze známých a výše zmíněných mechanismů účinku IFN-y. Především jde o virová onemocnění ze skupin DNA virů, RNA virů i retrovirů, např.: herpes simplex typ 1 a 2 (HSV-1, -2) (Gosselin, J.; Tomolu, A.; Gallo, R. C.; Flamand, L. Blood 1999, 94, 4210-4219; Melkova, Z.; Esteban, M. J Immunol 1995, 155, 571 1-5718), cytomegalovirus (CMV) (Bodaghi, B.; Goureau, 0.; Zipeto, D.; Laurent, L,; Virelizíer, J.-L.; Michelson, S. J Immunol 1999, 162, 957-964; Lučin, P.; Jonjic, S.; Messerle, M.; Polic, B.; Hengcl, H.; Kosztnowski, U. H. J Gen Virol 1994, 75, 101-110), virus Epstein-Barrové (EBV) (Kawanishi, M. Intcrvirology 1995, 38, 206-213), polio virus (Komatsu, T.; Bi, Z.; Reiss, C. S. J Neuroimmunol 1996, 68, 101-108), virus vakcinie (VV) (Tanaka-Kataoka, M,; Kunikata, T.; Takayama, S.; Iwaki, K.; Ohashi, K.; Ikeda, M.; Kurimoto, M, Gytokine 1999, 11, 593-599), virus vesikulární stomatitidy (Komatsu, T.; Bi, Z.; Reiss, C. S. J Neuroimmunol 1996, 68, 101-108; Lohoff, M,; Marsig, E.; Rollinghoff, M. J Immunol 1990, 144, 960-963), hepatitis B virus (HBV) (Guidotti, L. G.; McClary, H.; Loudis, J. M.; Chisari, F. V. J Exp Med 2000, 191, 1247-1252), hepatitis C virus (Sharara, A. I.; Perkins, D. J.; Misukonis, M. A.; Chán, S. U.; Dominitz, J. A.; Weinberg, J. B, J Exp Med 1997,186,1495-1502), coxackie virus B4 (Flodstrom, M.; Horwitz, M, S.; Maday, A.; Balakrishna, D.; Rodriguez, E.; Sarvetnick, N. Virology 2001, 281,205-215) a dalších.
Inliíbiční účinky IFN-γ na růst byly zjištěny i u nevirových patogenních organismů (Murray, H. W, Am J Med 1994, 97, 459-467): protozoa - Toxoplasma gondii, Leishmania donovani, L. major, L. mexicana, Trypaiwsoma cruzi, Plasmodium falciparum, Ρ. vivax, P. berghei, P. chabaudi,, P. cynomolgi, Cryptosporidium parvum. Entamoeba histolytica, Giardia lamblia:, červi - Schístosoma mansonr, houby: Histoplasma capsulatum, Candida albicans,, C. purapsilosis, Cryptococcus neoformans, Coccidioides immits, Paracoccidioides brasiliensis, Pneumocystis carinii, Aspergillus fumigatus; bakterie: Listeria monocytogenes, Legionella pneumophila, Mycobacterium tuberculosis, M. bovis, M. intracellulare, Salmonella íyphimurium, Francisella tularensis, Bručela abortus, Nocardia asteroidu, Chlamydia psiltaci, C. trachomatis, Klebsiella pneumoniae, Rickettsia prowazekii, R. conorii, R. tsutsugamushi, Yersinia enterocolitica, Rhodococcus equi, Ehrlichia risticii, Staphylococcus aureus.
• ·
Ί
Při imunosupresivních stavech se z klinického hlediska považuje za účelné provádět cílenou stimulaci Thl imunitní odpovědi. Zvýšení hladiny IFN-γ je vhodné např. v oblasti léčby alergických onemocnění (např. atopická dermatitida), při akutní pankreatitidě, kolorektálním karcinomu nebo při déletrvající léčbě glukokortikoidy.
Dosavadní poznatky o příznivém terapeutickém působení IFN-γ vycházejí z experimentálních, ale i mnohých klinických testů, kdy byl podán jako léčivo samotný IFN-γ, tedy nikoliv látka (léčivo), která by endogenní syntézu IFN-γ v organizmu aktivovala. Limitujícími faktory farinakoterapie interferonem-γ jsou zejména: složitý výrobní proces, způsob podání pacientům a vysoká tržní cena. Dávky doporučované pro terapeutický antimikrobiální efekt jsou udávané v rozmezí 25-100 pg/m2, přičemž u aktivních infekcí je u doporučováno 5-7 injekcí týdně (Murray, H. W. Am J Med 1994, 97, 459-467). Oproti podání exogenního re kombi nantního IFN-γ, jehož biologický poločas je 4-8 hod. (Grassegger, A.; Hópfl, R. Clin Exp Dermatol 2004, 29, 584-588), je výhodnou farmakologickou alternativou endogenní produkce IFN-γ. Stimulátorů endogenní produkce IFN-γ však existuje velmi omezený počet a v klinické praxi pouze jeden, který současně indukuje další cytokiny (Gupta, A. K..; Cherman, A. M.; Tyring, S, K, J Cutan Med Surg 2004, 8, 338-352). Jde o 5 % krém Aldara (Laboratories 3M Santé). Účinnou látkou je imiquímod. Tento léčivý přípravek je v České republice (a podobně v jiných státech) schválen pouze pro topickou léčbu zevních genitálních a perianálních kondylomat a malých povrchových bazocelulárních karcinomů dospělých. Zatím je však s tímto přípravkem málo klinických zkušeností. Jsou zaznamenány časté reakce na lokální aplikaci (asi 33 % pacientů) a chybí údaje o vymizení nálezu více než 24 měsíců po ukončení léčby. Výhodou předkládaného vynálezu je, že byla nalezena látka, která má v imunokompetentních buňkách schopnost velmi účinné stimulovat produkci cytokinů, zejména IFN-γ.
Význakem vynálezu je dále stimulace imunitního systému podáváním trilobolidu. Trilobolid stimuluje sekreci IFN-γ.
Význakem vynálezu dále je způsob léčby stavů vybraných ze skupiny zahrnující choroby způsobené viry, bakteriemi, prvoky, červy nebo houbami, atopické alergie, stavy snížené aktivity imunitního systému, zejména při léčbě glukokortikoidy, stresových situacích, kolorektálním karcinomu a akutní pankreatitidě, podáváním trilobolidu.
* · · · « · • · * * « ··· ·* ··
Význakem předkládaného vynálezu je dále trilobolid pro použití pro stimulaci imunitního systému v kombinaci s antívírotíky, antibiotiky a antimykotiky. U některých závažných virových onemocnění je současná léčba antívírotíky málo účinná. Autority v oboru proto doporučují, aby budoucí léčba byla prováděna pomocí kombinace virostatik a imunostimulátorů, jmenovitě IFN-γ, např. u hepatitidy C (Bedossa, P.; Paradis, V. Clin Liver Dis 2003, 7, 195-210). Při rozvoji systémových mykóz (např. Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus) u imunosuprimovaných pacientů, kteří neodpovídali na léčbu běžnými antimykotiky, pomohl IFN-γ velmi rychle k úplnému vyléčení během 4-6 týdnů (Summers, S. A.; Dorling, A.; Boyle, J. J,; Shaunak, S, Am J Trnasplant 2005, 5, 2067-2069). Kombinace s IFN-γ pomáhá snížit rezistenci ke klasickým antivirotikům u hepatitidy B (Parvez, Μ. K.; Sehgal, D.; Sarin, S. K.; Basir, S. F.; Jameel, S. World J Gaslroenterol 2006, 12, 3006-3014). Obdobná situace ohledně rezistence na standardní léčívaje u dalších infekčních onemocnění (např. život ohrožující chronické granulomatózní onemocnění (Marciano, Β. E.; Wesley, R.; De Carlo, E. S.; Anderson, V. L.; Barnliart, L. A,; Darnell, D.; Málech, H. L.; Gallin, J. J.; Holland, S. M. Clin Infect Dis 2004, 39, 692-699), TBC (Suárez-Méndez, R.; García-García,
1.; Fcrnández-OIivera, N.; Valdés-Quintana, M,; Milanés-Virelles, Μ, T.; Carbonell, D.; Machado-Molina, D.; Valenzuela-Silva, C. M.; López-Saura, P. A. BMC Infect Dis 2004, 4, 44). IFN-γ se může uplatnit nejen ve fázi klinických příznaků jako účinná adjuvantní terapie u pacientů s rezistencí na standardní chemoterapii, ale i proiýlakticky. U protozoálního onemocnění (prvok rodu Leishmania) je klinicky přínosná i monoterapie interferonem-γ (Sundar, S.; Murray, II. W. J Infect Dis 1995, 172, 1627-1629). Kombinace protiinfekčních léčiv s IFN-γ je přínosná i z hlediska zkrácení celkové doby léčby, jak to bylo prokázáno např. při léčbě hepatitidy B (kombinace antivirotika lamivudinu + IFN-γ) (Parvez, Μ. K.; Sehgal, D.; Sarin, S. K.; Basir, S. F.; Jameel, S. World J Gastroenteroi 2006,12, 3006-3014).
Předmětem předkládaného vynálezu jc takc terapeutický přípravek pro stimulaci imunitního systému, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje jako účinnou látku trilobolid a případně farmaceuticky přijatelné pomocné látky.
Po vyhodnocení dostupnosti zdrojů a praktické i ekonomické náročnosti jednotlivých způsobů přípravy čistých látek nebo analyticky přesně charakterizovaných preparátů • · * fl ··« · obsahujících trilobolid byl zvolen postup přípravy vycházející z dobře přístupného rostlinného zdroje, schopného pěstování v polních podmínkách.
• fl » ·
Bylo nově zjištěno, že rostlina Laser irilobum obsahuje trilobolid i v dalších orgánech než 1 v kořenech, z nichž byl trilobolid již dříve izolován, a to především v semenech, což bude využito pro pěstování této rostliny ve vhodných polních podmínkách a pro sběr semen, respektive celých okolíků k extrakci účinných látek. Výhodou využití semen k izolaci trilobolidu a jeho derivátů je to, že rostlina není při sběru rostlinného materiálu zničena, jak je tomu v případě použití kořenů.
Předmětem vynálezu je také způsob přípravy trilobolidu, jehož podstata spočívá v tom, že rozdrcené nebo rozemleté čerstvé nebo sušené kořeny a/nebo semena, případně celé semenné okolíky rostliny vybrané ze skupiny zahrnující timoj trojlaločný (Laser trilobum (L.) Borkh.), hladýš andělikový (Laserpitium archangelica Wulf. in Jacq.) nebo hladýšovec horský Laserpitium siler L., syn. Siler montanum Crantz) se postupně extrahují organickými rozpouštědly, stanoví se extrakt, který obsahuje trilobolid, rozpouštědlo z tohoto extraktu se pak odpaří a odparek se chromatograficky rozdělí gradientovým vymýváním rozpouštědly od nejméně polárních s postupným přidáváním polárnějších rozpouštědel, přičemž se obsah jednotlivých látek v takto získaných frakcích po odpaření rozpouštědla sleduje, například chromatografií na tenke vrstvě silikagelu (obvykle stejnými kombinacemi rozpouštědel), frakce obsahující trilobolid se pak spojí a trilobolid se z nich oddělí.
Význakem vynálezu jc, žc pokud je rostlinný materiál, tj. kořeny, semena nebo semenné okolíky, čerstvý, extrahuje se vodou v kombinaci s polárními organickými rozpouštědly například methanolem nebo etanolem, a pak se po odpaření části organického rozpouštědla l vodního podílu extrahuje požadovaná frakce octanem etylnatým.
Pokud je rostlinný materiál suchý, extrahuje se organickými rozpouštědly postupně v pořadí stoupající polarity, například petroléterem, octanem etylnatým, chloroformem, etanolem. Zvláštním postupem jc extrakce superkritickým oxidem uhličitým, v případě potřeby pak s přidáním malého podílu polárního unášeče, například etanolu,
Význakem vynálezu dále je, že extrakt obsahující trilobolid se stanoví chromatograficky, například metodou tenko vrstvě chromatografie nebo metodou vysoko účinné kapalinové chromatografie (HPLC), například s ultrafialovou nebo hmotově spektometrickou detekcí.
Ve výhodném provedení vynálezu je chromatografickým nosičem pro dělení odparku extraktu obsahujícího trilobolid silikagel. S výhodou je pak silikagel v koloně deaktivovaný zakotvenou vodou, nejlépe v rozsahu 10 - 15 % hmoty vody k silikagelu.
Význakem vynálezu je, že chromatografická frakce děleného odparku extraktu, obsahující trilobolid, se stanoví buď chromatograficky použitím standardu (pokud je k dispozici) nebo vyhodnocením infračervených spekter či spekter získaných z tandemového spojení chromatografie s vysokým rozlišením s hmotnostním detektorem (HPLC-MS). Z dobře ošetřené chromatograíické frakce (pro typický HPLC záznam víz Obr. 2) lze pak první podíl trilobolidu získat např. krystalizaci.
Význakem vynálezu dále je, že trilobolid se z původní surové frakce základního ehromatografického dělení na koloně silikagelu oddělí další chromatografií (např. preparativní HPLC) nebo krystalizaci.
Z matečných louhů, přečištěných na krátkém sloupci silikagelu, lze pak získat ještě další podíly trilobolidu. Konečné množství trilobolidu a jednotlivých jeho minoritních derivátů lze ze zbylých matečných louhů nakonec získat preparativní HPLC. Pro praktické použití je ekonomicky výhodný postup spočívající v krystalizaci. Opakovanou krystalizaci lze dosáhnout až 98% čistoty (stanovené analytickou HPLC).
Podstatou vynálezu je využití imunostimulačních vlastností trilobolidu. Konkrétně jde o farmakologický účinek, tj. schopnost aktivovat produkci IFN-γ. Součástí vynálezu je i způsob přípravy trilobolidu z rostlinného zdroje s úmyslem snadné a finančně dostupné přípravy pro farmaceutické nebo nutraceutické technologie.
Přehled obrázků
Obr. 1. představuje strukturní chemický vzorec trilobolidu.
Obr, 2. znázorňuje záznam UV absorpcí HPLC spektra látek ve frakci obsahující maximum trilobolidu (víz Příklad 1). Analytické podmínky chromatografie na koloně 4 x 250 mm, naplněné obrácenou fází (Separon SGX C-18) a promývané kombinací rozpouštědel (50100% vody v metanolu) v gradientovcm režimu po dobu 60 min, při průtoku 0,6 ml/min, je Rt trilobolidu 35,21 min.
Obr. 3. ukazuje vliv trilobolidu na aktivaci buněk (peritoneální makrofágy, laboratorní potkan) imunitního systému v podmínkách in vitro.
Obr. 4. ukazuje vliv trilobolidu na aktivaci buněk (peritoneální makrofágy, myš) imunitního systému v podmínkách in vitro.
Obr. 5. ukazuje vliv trilobolidu na aktivaci buněk (peritoneální makrofágy, laboratorní potkan) imunitního systému.
Obr. 6, znázorňuje rychlost aktivace buněk imunitního systému z hlediska sekrece inlerferonu-gamma (IFN-γ) po přidání trilobolidu.
Obr. 7. ukazuje vliv trilobolidu na aktivaci buněk (peritoneální makrofágy, myš) imunitního systému v podmínkách in vitro.
Obr, 8, ukazuje vliv trilobolidu na aktivaci mononukleárnícb buněk z lidské periferní krve (PBMC) v podmínkách in vitro.
Vynález jc dále objasněn na následujících příkladech, aniž je jimi jakkoliv omezen.
Příklady
Metody
Body tání byly stanovovány na Kofflerově bloku firmy Boetius bez provedených korekcí. Optická rotace byla měřena polarimctrem Rudolph Research Analytical Autopol IV, Infračervená spektra byla zaznamenána zařízením Bruker IPS-88. NMR spektra byla měřena spektrometrem Varían Unity-500 (*H při 500 MHz, 13C při 125,7 MHz). Chemické posuny protonových spekter byly vztaženy na TMS (v CDC1-?) a uhlíkových spekter na signál rozpouštědla 6(CDCb) 77,0. Homonukleámí 2D-COSY a 2D-ROESY spektra byla použita pro strukturní určení protonových signálů a heteronukleámí 2D-IIMQC nebo 2D-HMBC spektra v kombinaci s l3C APT spektry byla použita pro přiřazení všech uhlíkových signálů. Hmotová spektra byla zaznamenána přístrojem Waters Q-tof Microspectromctcr vybaveném ionizačním zdrojem El nebo ESI (v kombinaci s HPLC). Spektra HPLC byla zaznamenána na zařízení sestaveném z prvků firem Waters, Spectra-Physics a LDC s použitím kolon uvedených v analytických podmínkách záznamu znázorněného na Obr. 2.
Příklad 1
Příprava trilobolidu
Rostlinný niateriál, v tomto případě kořeny a oddenky, jsou volně na vzduchu a ve stínu usušeny, rozemlety a pak extrahovány organickými rozpouštědly. Vhodným typem extrakce je perkolace v kameninové nebo skleněné nádobě rozpouštědly o postupně se zvyšující polaritě (bez plynulého gradientu). Dostatečným je postup, kdy po extrakci jedním rozpouštědlem následuje extrakce dalším polárnějším, vždy v několika opakováních, až do vyčerpání extrahovaných látek, t.j. do nulového odparku (obvykle 3 až 5 opakování). Perkolace bez míchání materiálu (jen několikahodinovým stáním rozpouštědla překrývajícího celou náplň) se provádí za laboratorní teploty. Z takto získaného extraktu je pak odstraněno rozpouštědlo odpařením za sníženého tlaku (ve vakuové odparce). Odparek extraktu je pak dále dělen chromatografií na koloně naplněné silikagelem do několika chromatografických frakcí obsahujících jednotlivé látky nebo skupiny látek o stejné polaritě.
V tomto případě byl materiál (1300 g) napřed extrahován petroléterem (o b.v. 50 - 80 °C) pětkrát po sobě, a pak ještě třikrát chloroformem. Získaný odparek petroléterového extraktu (50 g) byl po předchozím oddělení krystalického laserolidu (ze zahuštěného extraktu) chromatograficky dělen na sloupci silikagelu (deaktivovaného zakotvením 12 % vody) promýváním směsí petroléteru s octanem etylnatým (v postupném gradientu Pe - AcOEt = 1:0 až 1:1). Touto chromatografií bylo získáno dvacet frakcí (spojených podle obsahu stejných látek monitorovaných tenkovrstvou chromatografií) a pak z frakcí obsahujících trilobolid byl izolován trilobolid napřed krystalizaci (0,8 g) v čistotě 98 % a z matečných louhů (1,5 g) pak následnou chromatografií ještě další podíl (0,6 g),
Chloroformový podíl (20 g) obsahuje podle HPLC analýzy (provedené na koloně s obrácenou fází Separon SGX C-18) ještě 43 % trilobolidu. Ten byl taktéž frakcionován napřed sloupcovou chromatografií (jako nahoře), a pak dočištěn preparativní HPLC chromatografií na stejné obrácené fázi v koloně 26 x 600 mm, v gradientovém režimu s kombinací rozpouštědel (55-100 % vody v metanolu) po dobu 360 min, při průtoku 5 ml/min. V dalších přísunech byla perkolace petroléterem redukovaná (jen do dvojího * φ • · φ • φ » ” φ » »· • · φ
Φφφ φφφ φφ
Φφφ • · » opakování) pro odstranění méně polárních látek (včetně řady seskviterpenových laktonů), čímž se trilobolid stal pak hlavní složkou chloroformového extraktu, ze kterého byl výhodně získán krystalizací.
Příklad 2
Příprava trílobol idu
Další vylepšený postup se vyhýbá použití rozpouštědel s nezanedbatelnou toxickou a velkou ekologickou zátěží (chloroformu), a též destrukci rostliny tím, že se namísto kořenů a oddenků zpracovávají její semena.
Vysušená a rozdrcená semena (60 g) byla extrahována ve stejném zařízení jak uvedeno v Příkladu 1. Krátkodobá perkolace (1 hod) petroléterem byla provedena jen pro odstranění nízkopolámích alifatických (voskových a olejovitých) látek a nepolárních částí chlorofylu. Pak následovala pětinásobná perkolace octanem etylnatým (AcOEt) až do úplného vyčerpání extrahovaných látek. Po odpaření rozpouštědla ve vakuové odparce byl získán AcOEt extrakt (3,8 g), který podle HPLC analýzy (v podmínkách popsaných v Příkladu 1) obsahoval 10 hlavních látek, mezi nimi v pořadí pátý i trilobolid (0,95 g). Ten byl pak z extraktu izolován stejnou chromatograíiekou frakcionací a dočištěním HPLC preparací jak je uvedeno v příkladu 1.
Příklad 3
Příprava trílobol idu
Tento postup již maximálně redukuje použití organických rozpouštědel a využívá výhod extrakce superkritickým oxidem uhličitým v kapalném stavu, které se provádí ve specializovaném komerčním zařízení pro extrakce superktitickými kapalinami (supercritical fluid extractions: SFE).
Vysušená a na jemný prášek rozdrcená semena (4 g) byla vložena do extraktoru mezi vrstvy skleněných kuliček sloužících pro rozptýlení toku extrakční kapaliny do celého objemu náplně. Extraktor byl opatřen teplotně řízenou vodní lázní. Dávkování superkritického CO2 a pak přídavného etanolu bylo prováděno vysokotlakými čerpadly. Tlak kapaliny odcházející z extrakční kolony byl redukčním ventilem snížen na atmosférický, a jednotlivé extrakční « « frakce byly sbírány do skleněných záchytných nádob. Extrakce byla provedena za mírného zvýšení teploty extrakce (40 °C) v oblasti nižších tlaků (200 bar) a s postupným přidáváním etanolu jako modifikátoru polarity extrakční kapaliny. Čistým CO2 byla napřed odstraněna převážná většina nízko polárních balastníeh látek. Trilobolid byl získán v dalších frakcích, nejvíce při přidání 10 % etanolu k CO2, Frakce obsahující trilobolid byly soustředěny a tento souhrnný extrakt byl pak chromatografií na krátkém sloupci zbaven polárních balastů. Z takto přečištěného podílu extraktu byl získán čistý trilobolid krystalizací.
Strukturní a chemická identita trilobolodu je charakterizovaná těmito fyzikálně chemickými a spektroskopickými údaji: Bod tání 190-192 °C; optická rotace [a]n2° - 66.3° (c 0,74 v metanolu). Charakteristické pásy infračerveného spektra 3455, 3480 cm’1 (hydroxyly), 1785 cm'1 (y-lakton), 1725, 1250 cm'1 (acetát) 1712 (ester konjugovaný s dvojnou vazbou), 1652 cm'1 (dvojná vazba). Charakteristická data hmotnostního spektra ESI-MS: 545 (522+23; M+Na) a fragmentace zEI-MS: m/z 462 (522-60; M-HOAc), m/z 362 (522-60-100; MHOAc-Cj-nenasycená kyselina), m/z 360 (522-60-102; M-HOAc-Cs-nasycená kyselina), m/z 260 (522-60-100-102; M-všecliny tři estery). Úplná strukturní informace vyplývající z protonových a uhlíkových spekter jaderné magnetické rezonance (Ha C NMR) je shrnuta v Tabulce 1).
Tabulka 1: Charakteristická lH a 13C NMR data trilobolidu v CDCI3____
| CH, | ||||||
| Í4 | / | |||||
| H-iC O XCH, ý f | ||||||
| CH μ Ί Λ ΛΓ h3c CO—OH........<3 | CH3 7\ 1 \ /CH «)..........O—C& H, | <3 | ||||
| 7/ - \ —OH | ||||||
| HjC J í5 | ,,¾......ll0H | |||||
| co | ||||||
| 12 | ||||||
| Charakteristická NIV | R data trilobolidu | |||||
| 'H | δ (ppm) | l3c | δ (ppm) | |||
| 1 | 4.44 m | 1 | 50.53 | |||
| 2a | 1.63 ddd (J= 14.6, 5.8,4.8) | 2 | 32.01 | |||
| 2b | 2.53 dt (J = 14,6, 8.6, 8,6) | 3 | 79.62 | |||
| 3 | 5.58 tn | 4 | 131.44 | |||
| 6 | 5.68 m | 5 | 143.26 | |||
| 8 | 5.65 t(J = 3.8, 3.8) | 6 | 77.53 | |||
| 9a | 2.09 dd (J= 14.8,3.8) | 7 | 78.63 |
• 4· « I · « » e ··* • 4 * « • 4 «
4« »
| 9b | 3.20 bdd (J= 14.8,3.8) | 8 | 66.48 |
| 13 | 1.48 s | 9 | 38.48 |
| 14 | 1.31 bs | 10 | 85.90 |
| 15 | 1.90 m | 11 | 78.68 |
| 3-OAng: | 6.12 qq (J = 7.2(3x), 1.5(3x)) | 12 | 175.66 |
| 2.02 dq (J = 7.2, 1.5(3x)) | 13 | 16.26 | |
| 1.915 p (J= 1.5(4x)) | 14 | 22.33 | |
| 7-OH | 3.68 bs | 15 | 13.08 |
| 8-OMeBut: | 2.34 m | 3-OAng: | 167.11 |
| 1.69m+ 1.44 m | 127.73 | ||
| 0.901 ((J = 7.4) | 138.52 | ||
| 1.14 d (J = 7.2) | 15.86 | ||
| 10-OAc: | 1,97 s | 20.70 | |
| 11-OII | 2.79 s | 8-OMeBut: | 175.52 |
| 41.40 | |||
| 26.12 | |||
| 11.63 | |||
| 16.26 | |||
| 10-OAc: | 171.06 | ||
| 22.46 |
Příklad 4
Vliv trilobolidu na aktivaci buněk imunitního systému v podmínkách in vitro - produkce NO
Produkce oxidu dusnatého (NO) byla měřena u peritoncálních makrofágů, získaných z potkanů inbredního kmene Lewis. Buňky byly získány výplachcm peritoneální dutiny fyziologickým roztokem (16 ml). Buňky byly v množství 2 χ 106/ml kultivovány na 96jamkových mikrodesíičkách v kompletním RPMI -1640 kultivačním médiu (10% fetální sérový albumin, 2 mmol/1 L-glutamin, 50 pg/ml gentamicin, 50 pmol/l 2-merkaptoetanol), finální objem 100 μΐ/jamka, při 37 °C, 5% CO?, 100% vlhkost, po dobu 24 hodin, a to v nepřítomnosti (tj. kontroly), a nebo v přítomností vzrůstajících koncentrací trilobolidu. K významnému zvýšení biosyntézy NO, stanovené na základě vzniklé koncentrace dusitanů (měřeno spektrofotometricky pomocí Griesseova činidla při 540 mn) v kultivačním médiu, dochází ve srovnání s kontrolními buňkami v koncentracích 0,1 - 1,0 pmol/l trilobolidu. Výsledky jsou uvedeny na obr. 3.
Příklad 5
Vliv trilobolidu na aktivaci buněk imunitního systému v podmínkách in vitro - produkce NO t * · · · · » ·« · · · · · « > · ·«* * · · mm ·· · ·· ·
Byla měřena produkce oxidu dusnatého (NO) u perítoneálních makrofágů, získaných z myší inbredního kmene C57BL/6. Buňky byly získány výplachem peritoneální dutiny fyziologickým roztokem (8 ml). Buňky byly v množství 2 χ 10'7ml kultivovány způsobem uvedeným v Příkladu 4 po dobu 24 hodin, a to v nepřítomnosti (tj. kontroly) nebo v přítomnosti vzrůstajících koncentrací trilobolidu. Trilobolid byl podán buď samotný nebo současně s další imunostimulaění látkou, tj. bakteriálním lipopolysacharidem (LPS, 100 pg/ml). U myších buněk dochází k malému zvýšení produkce NO po trilobolidu samotném.
Jeho biosyntéza je však podstatně zvýšena v kombinaci sLPS, a to v koncentracích 1-5 pmol/l trilobolidu. Výsledky jsou uvedeny na obr. 4.
Příklad 6
Vliv trilobolidu na aktivaci buněk imunitního systému in vitro - sekrece IFN-γ
Tento experiment demonstruje sekreci zástupce tzv. Thl cytokinů, interferonu-gamma (IFNγ) u perítoneálních makrofágů, získaných z potkanů inbredního kmene Lewis. Buňky byly v množství 2 χ 106/ml kultivovány způsobem uvedeným v Příkladu 4 po dobu 24 hodin, a to v nepřítomnosti (tj. kontroly) a nebo v přítomnosti vzrůstajících koncentrací trilobolidu. Koncentrace cytokinů byla měřena v kultivačním médiu imunochemickou metodou ELISA dle instrukcí komerčně dostupného ELISA kitu pro IFN-γ, měřeno při 450 nm.
K významnému zvýšení produkce IFN-γ dochází ve srovnání s kontrolními hodnotami již v koncentraci 0,05 pmol/l trilobolidu a se vzrůstající koncentrací trilobolidu produkce IFN-γ dále velmi výrazně vzrůstá. Výsledky jsou uvedeny na obr. 5.
Příklad 7
Rychlost aktivace buněk imunitního systému
Byl sledován časový průběh aktivace perítoneálních buněk z hlediska sekrece interferonugamma (IFN-γ) po přidání trilobolidu, a to v koncentraci 0.1 gmol/l. Pokus byl proveden in vitro s použitím perítoneálních makrofágů (2 χ 106/ml), získaných z potkanů a kultivovaných obdobně jako v Příkladu 4. Zatímco kontrolní buňky neprodukují téměř žádný IFN-γ, v intervalu 2-5 hodin dochází k výrazné sekrecí tohoto cytokinů do kultivačního média.
Výsledky jsou uvedeny na obr. 6.
Přiklad 8
Vliv triloboíidu na aktivaci buněk imunitního systému v podmínkách m vitro
Na základě výsledku uvedeném v Příkladu 7 byla měřena sekrece interferonu-gamma (ÍEN-y), zástupce skupiny tzv. Thl cytokinů, u peritoneálních makrofágů, získaných z myší inbredního kmene C57BL/6. Buňky byly v množství 2 x 106/ml kultivovány po dobu 5 hodin, kultivační podmínky uvedené v příkladu 4 a 5, a to v nepřítomnosti (tj. kontroly) a nebo v přítomnosti 1 pmol/l triloboíidu. Trilobolid byl testován buď samotný nebo současně s dalším referenčním imunostimulátorem, tj. bakteriálním lipopolysacharidem (EPS, 100 pg/ml). Samotný trilobolid je schopný aktivovat produkci IFN-γ, efekt je vysoce signifikantní. Tento účinek je ještě výraznější v kombinaci s LPS. Výsledky jsou uvedeny na obrázku 7.
Příklad 9
Vliv triloboíidu na aktivaci mononukleárních buněk z lidské periferní krve v podmínkách in vitro
Účinek triloboíidu na aktivaci imunitního systému u člověka je demonstrován kultivací lidských mononukleárních buněk (PBMC). Buňky byly v množství 2,5 x 106/ml kultivovány po dobu 24 hodin v přítomností 1 pmol/l triloboíidu za obdobných podmínek uvedených v příkladu 4, Sekrece interferonu-gamma (IFN-γ), zástupce skupiny tzv. Thl cytokinů, je nulová u kontrolních, tj. nestimulovaných buněk, zatímco v přítomnosti triloboíidu stoupá více než 300x. Výsledky jsou uvedeny na obr. 8.
Průmyslová využitelnost:
Trilobolid ajeho účinky podle vynálezu lze využít ve farmaceutickém průmyslu jako léčiva nebo jako nutraceutika v humánní a veterinární praxi.
Claims (14)
1. Trilobolid pro použití ke stimulaci imunitního systému.
2. Trilobolid pro použití podle nároku 1, kde stimulací imunitního systému je stimulace sekrece interferonu gamnia (IFN-γ).
3. Trilobolid pro použití podle nároku 2 pro léčbu stavu vybraných ze skupiny zahrnující choroby způsobené viry, bakteriemi, prvoky, červy nebo houbami, atopické alergie, stavy snížené aktivity imunitního systému, zejména při léčbě glukokortikoidy, stresových situacích, kolorcktálním karcinomu a akutní pankreatitidč.
4. Trilobolid pro použití podle nároku 2 nebo 3 v kombinaci s antivirotíky, antibiotiky a antimykotiky.
5. Terapeutický přípravek pro stimulaci imunitního systému, vyznačený tím, že obsahuje jako účinnou látku trilobolid a případné farmaceuticky přijatelné pomocné látky.
6. Způsob přípravy trilobolidu, vyznačený tím, že rozdrcené nebo rozemleté čerstvé nebo sušené kořeny a/nebo semena, případně celé semenné okolíky rostliny vybrané ze skupiny zahrnující timoj trojlaločný (Laser trilobum (L.) Borkh.), hladýš andělikový (Laserpitium archangeiica Wulf. in Jacq.) nebo hladýšovec horský (Laserpitium siler I... syn, Šifer montemum Crantz) se postupně extrahují organickými rozpouštědly, stanoví se extrakt, který obsahuje trilobolid, rozpouštědlo z tohoto extraktu se pak odpaří a odparek se chromatograficky rozdělí na koloně gradientovým vymýváním rozpouštědly od nejméně polárních s postupným přidáváním polárnějších rozpouštědel, přičemž se sleduje obsah jednotlivých látek v takto získaných frakcích po odpaření rozpouštědla, frakce obsahující trilobolid se pak spojí a trilobolid se z nich oddělí.
7. Způsob podle nároku 6, vyznačený tím. že pokud jc rostlinný materiál, tj. kořeny, semena nebo semenné okolíky, čerstvý, extrahuje se vodou v kombinaci s polárními organickými rozpouštědly, s výhodou metanolem nebo etanolem, a pak se po odpaření části organického rozpouštědla z vodního podílu extrahuje požadovaná frakce oetanem etylnatým.
8. Způsob podle nároku 6. vyznačený tím. že pokud je rostlinný materiál suchý, extrahuje se organickými rozpouštědly postupně v pořadí stoupající polarity, s výhodou petroléterem, octanem etylnatým. chloroformem, etanolem.
9. Způsob podle nároku 6, vyznačený tím, že se suchý rostlinný materiál extrahuje superkritickým oxidem uhličitým.
10. Způsob podle nároku 9. vyznačený tím, žc se suchý rostlinný materiál extrahuje superkritickým oxidem uhličitým s přidáním malého podílu polárního unášeče, s výhodou etanolu.
11. Způsob podle nároku 6, vyznačený tím, že extrakt obsahující trilobolid se stanoví chromatograficky, s výhodou metodou tenkovrstvé chromatografie (TLC) nebo vysokoúčínné kapalinové chromatografie (HPLC).
12. Způsob podle nároku 6, vyznačený tím, že chromatografickým nosičem pro dělení odparku extraktu obsahujícího trilobolid je silikagcl. s výhodou deaktivovaný zakotvenou vodou v rozsahu 10 - 15 % hm. vody, vztaženo na hmotnost silikagelu.
13. Způsob podle nároku 6, vyznačený tím. že frakce z chromatografického dělení odparku extraktu, obsahující trilobolid. se stanoví buď chromatograficky použitím standardu nebo vyhodnocením infračervených spekter či spekter získaných /.tandemového spojení chromatografie s vysokým rozlišením s hmotnostním detektorem (HPLC-MS).
14. Způsob podle nároku 6, vyznačený tím, že trilobolid se z frakce z chromatografického dělení odparku extraktu, obsahující trilobolid, oddělí chromatografií nebo krystalizací.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20070487A CZ300806B6 (cs) | 2007-07-18 | 2007-07-18 | Imunostimulacní úcinky trilobolidu a zpusob jeho prípravy |
| PCT/CZ2008/000083 WO2009010021A1 (en) | 2007-07-18 | 2008-07-16 | Immunostimulatory activity of trilobolide and method of preparation thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20070487A CZ300806B6 (cs) | 2007-07-18 | 2007-07-18 | Imunostimulacní úcinky trilobolidu a zpusob jeho prípravy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2007487A3 true CZ2007487A3 (cs) | 2009-01-28 |
| CZ300806B6 CZ300806B6 (cs) | 2009-08-12 |
Family
ID=40083687
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20070487A CZ300806B6 (cs) | 2007-07-18 | 2007-07-18 | Imunostimulacní úcinky trilobolidu a zpusob jeho prípravy |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ300806B6 (cs) |
| WO (1) | WO2009010021A1 (cs) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113855708A (zh) * | 2021-10-28 | 2021-12-31 | 闽江学院 | 一种具有抑菌和抗肿瘤活性的海洋长颈虫提取物浸膏 |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105050662B (zh) * | 2012-08-20 | 2018-04-13 | 欧莱雅 | 翅果南星属(Laserpitium siler L.)精油抗皮肤老化的征兆和作为抗氧化剂的美容用途 |
| FR2994527B1 (fr) * | 2012-08-20 | 2014-08-15 | Oreal | Utilisation cosmetique de l'huile essentielle de laserpitium siler l. contre la peau grasse. |
| FR2994529B1 (fr) * | 2012-08-20 | 2014-08-15 | Oreal | Utilisation cosmetique de l'huile essentielle de laserpitium siler l., a titre d'agent antioxydant. |
| FR3015281B1 (fr) * | 2013-12-20 | 2016-01-22 | Oreal | Utilisation cosmetique d'une huile essentielle de laserpitium siler l. pour eclaircir les matieres keratiniques |
| GB201805665D0 (en) * | 2018-04-05 | 2018-05-23 | Univ Nottingham | Antiviral Compounds And Methods |
| CN116077639A (zh) * | 2023-01-05 | 2023-05-09 | 国药中生生物技术研究院有限公司 | 雷公藤红素或其可药用衍生物在制备疫苗佐剂中的用途 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI268153B (en) * | 2004-06-23 | 2006-12-11 | Univ Nat Cheng Kung | A medicine composition for increasing leukocyte immunity wherein a leukocyte treated by sarcoplasmic/endoplasmic reticulum Ca2+ ATPase |
| US9107863B2 (en) * | 2006-03-27 | 2015-08-18 | The Buck Institute For Age Reasearch | Reagents and methods for cancer treatment and prevention |
-
2007
- 2007-07-18 CZ CZ20070487A patent/CZ300806B6/cs not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-07-16 WO PCT/CZ2008/000083 patent/WO2009010021A1/en active Application Filing
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113855708A (zh) * | 2021-10-28 | 2021-12-31 | 闽江学院 | 一种具有抑菌和抗肿瘤活性的海洋长颈虫提取物浸膏 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2009010021A1 (en) | 2009-01-22 |
| CZ300806B6 (cs) | 2009-08-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fatima et al. | Antifungal activity of Glycyrrhiza glabra extracts and its active constituent glabridin | |
| Rasheed et al. | Butrin, isobutrin, and butein from medicinal plant Butea monosperma selectively inhibit nuclear factor-κB in activated human mast cells: Suppression of tumor necrosis factor-α, interleukin (IL)-6, and IL-8 | |
| Fukuda et al. | Anti-tumor promoting effect of glycosides from Prunus persica seeds | |
| Das et al. | Antileishmanial and immunomodulatory activities of lupeol, a triterpene compound isolated from Sterculia villosa | |
| Pandey et al. | Immunosuppressive properties of flavonoids isolated from Boerhaavia diffusa Linn. | |
| Hayashi et al. | Ellagitannins from Lagerstroemia speciosa as activators of glucose transport in fat cells | |
| Singh et al. | Withania somnifera inhibits NF‐κB and AP‐1 transcription factors in human peripheral blood and synovial fluid mononuclear cells | |
| Li et al. | Ganoderic acid X, a lanostanoid triterpene, inhibits topoisomerases and induces apoptosis of cancer cells | |
| Lu et al. | Ganoderma lucidum extracts inhibit growth and induce actin polymerization in bladder cancer cells in vitro | |
| Zhang et al. | Anti-HIV diphyllin glycosides from Justicia gendarussa | |
| Lee et al. | Immune-suppressive activity of punicalagin via inhibition of NFAT activation | |
| CZ2007487A3 (cs) | Imunostimulacní úcinky trilobolidu a zpusob jeho prípravy | |
| Li et al. | Anti‐inflammatory effects of chemical components from Ginkgo biloba L. male flowers on lipopolysaccharide‐stimulated RAW264. 7 macrophages | |
| Tanaka et al. | Antileishmanial activity of indole alkaloids from Aspidosperma ramiflorum | |
| Lee et al. | Anti-inflammatory effect of tribulusamide D isolated from Tribulus terrestris in lipopolysaccharide-stimulated RAW264. 7 macrophages | |
| Nguyen et al. | Anti-inflammatory terpenylated coumarins from the leaves of Zanthoxylum schinifolium with α-glucosidase inhibitory activity | |
| de Mello et al. | Beneficial effect of Ageratum conyzoides Linn (Asteraceae) upon inflammatory response induced by carrageenan into the mice pleural cavity | |
| Ryu et al. | Echinocystic acid isolated from Eclipta prostrata suppresses lipopolysaccharide-induced iNOS, TNF-α, and IL-6 expressions via NF-κB inactivation in RAW 264.7 macrophages | |
| Bedane et al. | Bioactive constituents of Lobostemon fruticosus: Anti-inflammatory properties and quantitative analysis of samples from different places in South Africa | |
| Soltani et al. | Cordycepin: A biotherapeutic molecule from medicinal mushroom | |
| Bae et al. | Anti-inflammatory effects of dehydrogeijerin in LPS-stimulated murine macrophages | |
| Choi et al. | Phenolic glycosides from Lindera obtusiloba and their anti-allergic inflammatory activities | |
| Chen et al. | Structure and functions of γ-dodecalactone isolated from Antrodia camphorata for NK cell activation | |
| Matawali et al. | In vitro evaluation of antikinase, antiphosphatase and cytotoxic activities of Mikania micrantha HBK (Asteraceae) from Malaysia | |
| Choi et al. | In vitro anti-inflammatory activity of the components of Amomum tsao-ko in murine macrophage raw 264.7 cells |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20170718 |