CZ20032707A3

CZ20032707A3 - Agonisté somatostatinu

Info

Publication number: CZ20032707A3
Application number: CZ20032707A
Authority: CZ
Inventors: David H. Coy; Walajapet G. Rajeswaran
Original assignee: The Administrators Of The Tulane Educational Fund
Priority date: 2001-04-09
Filing date: 2002-04-08
Publication date: 2004-01-14
Also published as: JP2004531520A; EP1397150A2; NO20034497D0; NO20034497L; CN1541102A; PL368941A1; US7312304B2; RU2003132548A; RU2259375C2; HUP0303727A2; JP2008069160A; KR20030088494A; CA2443085A1; MXPA03009048A; IL158051A0; WO2002081499A3; US20080090756A1; EP1397150A4; WO2002081499A2; AU2002256105B2

Description

Předkládaný vynález se týká řad agonistů somatostatinu nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí a jejich použití.

Dosavadní stav techniky

Somatostatin (dále jen SRIF), tetradekapeptid, který objevil Brazeau a kol., prokázal, že má silné inhibiční účinky na různé sekreční procesy v tkáních jako jsou hypofýza, slinivka břišní a gastrointestinální trakt. SRIF také působí jako neuromodulátor v centrálním nervovém systému. Tyto biologické účinky SRIF, všechny inhibiční z hlediska povahy, jsou vyvolány prostřednictvím řady G proteinem vázaných receptorů, z nichž bylo charakterizováno pět různých podtypů (SSTR-1 až SSTR-5). Těchto pět podtypů má podobné afinity pokud jde o endogenní ligandy SRIF, ale vykazuje odlišnou distribuci v různých tkáních. Somatostatin se váže k pěti podtypům odlišných receptorů (SSTR) s relativně vysokou a stejnou afinitou pro každý podtyp. SRIF vytváří řadu účinků, včetně modulace uvolňování hormonů např. růstového hormonu, glukagonu, insulinu, amylinu a uvolňování nerotransmitéru. Některé z těchto účinků jsou spojeny s jeho vázáním k specifickému receptorů SRIF. Například inhibice růstového hormonu je připisována receptorů somatostatinu typu-2 („SSTR2) (Raynor a kol., Molecular Pharmacol., 43, 838 (1993);

Lloyd a kol., Am. J. Physiol., 268, G 102 (1995)), zatímco inhibice insulinu je připisována receptorů somatostatinu typu-5 („SSTR-5) (Coy a kol., 197, 366 až 371 (1993)). Aktivace typů 2 a 5 je spojována se supresí růstového hormonu a podrobněji s adenomy vylučujícími GH (růstový hormon) (akromegalie) a adenomy vylučujícími TSH (tyreostimulační hormon). Aktivace typu 2, ale nikoliv typu 5, je spojována s léčením adenomů vylučujících prolaktin.

Jak je dobře známo odborníkovi v oboru, somatostatin a jeho analogy jsou užitečné při léčení široké škály nemocí a/nebo stavům Příkladný, ale nikterak vyčerpávající seznam takových nemocí a/nebo stavů zahrnuje: Cushingovu nemoc (viz Clark R. V. a kol., Clin. Res., 38, 943A (1990)), gonadotropinomii (viz Ambrosi B. a kol., Acta Endocr., Kodaň, 122, 569 až 576 (1990)), hyperparatyreidismus (viz Miller D. a kol., Canad. Med. Ass. J. , 145, 227 až 228 (1991), Pagetovu nemoc (viz Palmieri G. M. A. a kol., J. of Bone and Minerál Research, 7 (dodatek 1), S240 (abstrakt 591) (1992)), VlPomii (viz Koberstein B. a kol., Z. Gastroenterology, 28, 295 až 301 (1990) a Ghristensen C., Acta Chir. Scand., 155, 541 až 543 (1989)), nesidioblastomii a hyperinzulinismus (viz Laron Z., Israel J. Med. Sci., 26 (1), 1 až 2 (1990), Wilson D. C., Irish J. Med. Sci., 158 (1) , 31 až 32 (1989) a Micic D. a kol., Digestion, 16 (dodatek 1), 70 (abstrakt 193) (1990), gastrinómii (viz Bauer F. E. a kol., Europ. J. Pharmacol., 183, 55 (1990)), nemoc Zollinger-Ellison (viz Mozell E. a kol., Surg. Gynec. Obstet., 170, 476 až 484 (1990)),

AIDS a jiné stavy hypersekreční diarheu příslušnou 1 (způsobené AIDS, viz Cello J. P. a kol., Gastroenterology, 98 (5), část 2, dodatek, A163 (1990)), způsobené zvýšeným obsahem peptidů uvolňujícím gastrin, viz Alhindawi R. a kol., Cam J. Surg., 33, 139 až 142 (1990), druhotnou k střevnímu štěpu versus onemocnění hostitele, viz Bianco J. A. a kol., Transplantation, 49, 1194 až 1195 (1990), diarhea spojená s chemoterapií, viz Petrelli N. a kol., Proč. Amer. Soc. Clin. Oncol., 10, 138 (abstrakt č. 417) (1991)), dráždivě onemocnění střev (viz 0'Donnel L. J. D. a kol., Aliment. Pharmacol.

Therap., 4, 177 až 181 (1990)), pankreatitidu (viz Tulassay Z. a kol., Gastroenterology, 98 (5), (část 2), (dodatek), A238 (1990)), Črohnovu nemoc (viz Fedorak R. N. a kol., Can. J. Gasroenterology, 2 (2) , 53 až 57 (1989)), systémovou sklerózu (viz Soudah H. a kol., Gastroenterology, 98 (5), část 2 (dodatek), A129 (1990)), rakovinu štítné žlázy (viz Modigliani

É. a kol., Výroční endokrinologické sympozium (Ann., Endocr.) (Paříž), .50, 483 až 488 (1989)), pšoriázu (viz Camisa C. a kol., Cleveland Clinic J. Med., 57 (.1), 71 až 76 (1990)), hypotenzi (viz Hoeldtke R. D. a kol·., Arch. Phys. Med. Rehabil., 69, 895 až 898 (1988) a Kooner J. S. a kol., Brit. J. Clin. Pharmacol., 28, 735P až 736P (1989)), záchvaty úzkosti (viz Abelson J. L. a kol., Glig. Psychopharmacol., 10,

128 až 132 (1990) skleredém (viz Soudah H.

Cl

Res., 39, 303A (1991)), malou střevní obstrukci (viz Nott D.

M. a kol., Brit. J. Surg., 77, A691 (1990)), gastroesofagální reflux (viz Branch M. S. a kol., Gastroenterology, 100 (_5) , část 2 (dodatek), A425 (1991)), duodenogastrický reflux (viz Hasler W. a kol., Gastroenterológy, 10, (5), část 2 (dodatek),

A448 (1991)), Gravesovu nemoc (viz Chahg T. C. a kol., Brit. Med. J., 304, 158 (1992)), polycystické onemocnění vaječníku

M. a kol., Metabolism Clinical and dodatek 2, 76 až 79 (1992)), krvácení

S. A. a (viz Prelevic G. Experimental, 41, z horního gastrointestinálního traktu (viz Jenkins kol., Gut. , 33, 404 až 407 (1992) a Arrigoni A. a kol.,

American Journal of Gastroenterology, 87, 1311 (abstrakt 275) (1992)), pankrěatické nepravé cysty a ascites (viz Hartley J. E. a kol., J. Roy. Soc. Med., 85, 107 až 108 (1992)), leukémii (viz Santirii a kol., 78 (dodatek 1), 429A (abstrakt 1708) (1991), meningiom (viz Koper J. W. a kol., J. Clin. Endocr.

Metab., 74, 543 až 547 (1992) a rakovinnou kachexii (viz

Bartlett D.L. a kol., Surg. Fórum, 42, 14 až 16 (1991) v• ·

• · · ·

enterokutánniho a onemocnění střev,

Jinými indikacemi spojovanými s aktivací podtypů receptorů somatostatinu jsou inhibice insulinu a/nebo glukagonu a podrobněji cukrovky, angiopatie, proliferativní retinopatie, Downovy choroby a nefropatie; inhibice sekrece žaludeční kyseliny a podrobněji peptických vředů, pankreatikokutánního píštěle, dráždivého dumping syndromu, syndromu vodové stolice, diarey spojené s AIDS, chemoterapií vyvolané diarey, akutní nebo chronické pankreatitidy a nádorů vylučujících gastrointestinální hormon; léčení rakoviny jako je hepatom; inhibice angiogeneze, léčení zánětlivých poruch jako je artritida; retinopatie; chronické odmítnutí štěpu; angioplastie; odmítnutí cévního štěpu a gastrointestinální krvácení.

Je výhodné mít analog, který je selektivní pro subtyp nebo subtypy specifického receptorů somatostatinu zodpovědné za požadovanou biologickou reakci, a tak snižující interakci s ostatními podtypy receptorů, které mohou vést k nežádoucím vedlejším účinkům. Dále byly z důvodu krátkého poločasu rozkladu přírodního SRIF vyvinuty různé analogy SRIF, např pro léčení akromegalie (Raynor a kol., Molecular Pharmacol., 43, 838 (1993)). Vývoj silných agonistů SRIF s menší molekulou, vedl k objevu odlišných afinit různých omezených ligandů pro odlišné podtypy. Zdá se, že zbytek Trp⁸-Lys⁹ je často přítomný o

v ligandech, které jsou rozlišovány receptorem. Zbytek Trp -Lys⁹ tvoří část β-ohybu, který je obvykle stabilizován cestou substituce D- za L-Trp, cyklizací hlavního řetězce, disulfidového můstku nebo všech sférických pnutí. Jedním z nezamýšlených důsledků takového strukturálního zjednodušení, které bylo prováděno před objevením mnohočetných podtypů receptorů, byla ztráta širokého spektra vazebné afinity. To je symbolizováno pomocí vysokých afinit peptidů typu 2 ale nízkých afinit typu 1, 3, 4 a 5 v řadách OCTREOTIDU®. Tudíž

• · · · • · A ·· « mnoho základních biologických studií s tímto typem analogu neuspělo při zjištění účinků zprostředkovávaných pomocí všech, s výjimkou jednoho, podtypů receptorů somatostatinu.

Podstata vynálezu

Původci zjistili, žě sterické pnutí hlavního řetězce může být zavedeno pomocí N-alkylace. Tato modifikace do značhé míry omezuje postižený zbytek a aminokyselinu, která ho v rozšířené konformaci předchází a navíc blokuje potenciální intramolekulární vazebná místa vodíku a také místa štěpení proteolytického enzymu a tak silně zvyšuje farmakokinetické vlastnosti peptidu. Pouze málo N-methylovaných aminokyselin je průmyslově dostupných a jejich syntéza je obtížná. Avšak v některých aspektech předkládaného vynálezu, původci objevili postup vedoucí k analogům somatostatinu omezeným v každém zbytku aminokyseliny N-methylátem za použití způsobu přípravy v pevné fázi, přejatého z nedávno vydané publikace, kterou zveřejnili Miller a Scanlan (J. Am. Chem. Soc., 119, 2301 až 2302 (1997)).

V jednom aspektu se tento vynález týká peptidu obecného vzorce (I)

A¹-cyklo {Cys-A²-D-Trp-A³-A⁴-Cys } -A⁵-Y¹ (I) ve kterém:

A¹ je popřípadě substituovaná D- nebo L-aromatická a-aminokyselina nebo popřípadě substituovaný D- nebo L-cyklo(C3-6) alkylalanin,

A² je popřípadě substituovaná aromatická «-aminokyselina nebo popřípadě substituovaný cyklo (C3-6) alkylalanin,

A³ je Lys nebo Orn,

A⁴ je β-hydroxyvalin, Ser, hSer nebo Thr,

A⁵ je β-hydroxyvalin, Ser, hSer nebo Thr, a

Y¹ je skupina OH, NH2 nebo NHR¹, kde R¹ je (Ci-ε) alkyl;

ve kterém každá uvedená popřípadě substituovaná aromatická α-aminokyselina a každý popřípadě substituovaný cyklo{C3-6)alkylalanin je popřípadě substituovaný jedním nebo více substituenty, z nichž každý je nezávisle vybrán ze souboru skládajícího se z halogenu, skupin NO2, OH, CN, (C1-6) alkylu, (C2-6) alkenylu, (C2-6) alkynylu, (Ci-ε) alkoxyskupiny, skupin Bzl, O-Bzl a NR⁹R¹⁰, kde R⁹ a R¹⁰ jsou každý nezávisle H, nebo (C1-6)alkyl, a ve kterém aminový dusík každé z peptidových vazeb a aminové skupiny z A¹ podle- obecného vzorce (I) je popřípadě substituován methylovou skupinou, za předpokladu, že se tam vyskytuje při nejmenším jedna uvedená methylová skupina, a dále za předpokladu, že uvedenou sloučeninou není D-Phe-cyklo[Cys-Phe-D-Trp-Lys-(N-Me-Thr)-Cys]-Thr-NH2, nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli.

Výhodnou skupinou sloučenin obecného vzorce (I) jsou ty sloučeniny, ve kterých:

A¹ je Phe, D-Phe, Tyr, D-Tyr, β-Nal, ϋ-β-Nal, Cha nebo D-Cha,

A² je Phe, Tyr, β-Nal nebo Cha, a

Y¹ je OH nebo NH2, nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Výhodnou skupinou sloučenin z bezprostředně předcházející skupiny sloučenin jsou ty sloučeniny, ve kterých A je D-Phe nebo Tyr, nebo ve kterých A je Phe, nebo ve kterých A je Lys, nebo ve kterých A⁴ je Thr, nebo ve kterých A⁵ jp Thr, nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.

V ještě výhodnějším ztělesnění tohoto vynálezu je pozornost věnována sloučenině obecného vzorce (I), ve kterém uvedená sloučenina je sloučeninou podle vzorce:

(N-Me-D-Phe)-[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH2,

D-Phe-[(N-Me-Cys)-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH2,

D-Phe-cyklo[Cys-(N-Me-Phe)-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH2,

D-Phe-[Cys-Phe-(N-Me-D-Trp)-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH2,

D-Phe-[Cys-Phe-D-Trp-(N-Me-Lys)-Thr-Cys]-Thr-NHz,

D-Phe-cyklo[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-(N-Me-Cys)]-Thr-NH2, D-Phe-cyklo[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-(N-Me-Thr)-NH2, (N-Me-Tyr)-[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH2,

Tyr-[(N-Me-Cys)-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH2,

Tyr-[Cys-(N-Me-Phe)-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH2,

Tyr-[Cys-Phe-(N-Me-D-Trp)-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH2,

Tyr-[Cys-Phe-D-Trp-(N-Me-Lys)-Thr-Cys]-Thr-NH2,

Tyr-[Cys-Phe-D-Trp-Lys-(N-Me-Thr)-Cys]-Thr-NH2,

Tyr-[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-(N-Me-Cys)]-Thr-NH2, nebo Tyr-[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-(N-Me-Thr)-NH2 ·· ···· · · ·· ···· 9 · · ···· · · · • · · · · ··· (II) • · · • · ♦ nebo její farmaceuticky přijatelnou solí.

V jiném aspektu tento vynález věnuje pozornost podle obecného vzorce (II)

Ri \

A’-A²-Af-D-Trp-Lys-A⁶-A⁷-A⁸-R3 / r₂ ve kterém

A¹ je D- nebo L- isomer Ala, Leu, Ile, Val, Nle, Thr, Ser, β-Nal, β-Pal, Trp, Phe, 2,4-dichlor-Phe, pentafluor-Phe, p-X-Phe nebo o-X-Phe, ve kterém X je CH3, Cl, Br, F, OH, OCH3 nebo NO2,

A² je Ala, Leu, Ile, Val, Nle, Phe, β-Nal, pyridyl-Ala, Trp,

2,4-dichlor-Phe, pentafluor-Phe, o-X-Phe nebo p-X-Phe, ve kterém X je CH3, Cl, Br, F, OH, OCH3 nebo NO2,

A³ je pyridyl-Ala, Trp, Phe, β-Nal, 2,4-dichlor-Phe, pentafluor-Phe, o-X-Phe nebo p-X-Phe, ve kterém X je CH3., Cl, Br, F, OH, OCH₃ nebo N0₂,

A⁶ je Val, Ala, Leu, Ile, Nle, Thr, Abu nebo Ser,

A⁷ je Ala, Leu, Ile, Val, Nle, Phe, β-Nal, pyridyl-Ala, Trp,

2,4-dichlor-Phe, pentafluor-Phe, o-X-Phe nebo p-X-Phe, ve kterém X je CH3, Cl, Br, F, OH, OCH3 nebo NO2, • · · · ♦ · •·· · · · ·· ·· sloučenině

A je D- nebo L-isomer Ala, Leu, Ile, Val, Nle, Thr, Ser,

Phe, β-Nal, pyridyl-Ala, Trp, 2,4-dichlor-Phe, pentafluor—

-Phe, p-X-Phe nebo o-X-Phe, ve kterém X je CH3, Cl, Br, F,

OH, OCH3 nebo NO2, každý Ri a R2 je nezávisle H, nižší acyl nebo nižší alkyl, a R3 je OH nebo NO2, ve kterém aminový dusík každé z amidových vazeb peptidu a N-konce aminokyseliny je popřípadě substituován methylovou skupinou, za předpokladu, že existuje při nejmenším jedna methylová skupina v sloučenině obecného vzorce (II), že nejméně jeden z A a A a jeden z A a A musí být aromatickou aminokyselinou, a že A¹, A², A⁷ a A⁸ nemohou všichni být aromatickými aminokyselinami, npbo její farmaceuticky přijatelné soli.

V jednom ztělesnění tento vynález věnuje pozornost sloučenině obecného vzorce (II), ve kterém je uvedená sloučenina vybrána ze seznamu, který se skládá z:

H-D-Phe-p-chlor-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2,

H-D-Phe-p-NO2-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH2,

H-D-Nal-p-chlor-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH2,

H-D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2,

H-D-Phe-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH2,

H-D-Phe-p-chlor-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH2, a

H-D-Phe-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Ala^-D-Nal-NH2, nebo její farmaceuticky přijatelné soli.

4444

V jiném ztělesnění tento vynález věnuje pozornost peptidů vybranému ze seznamu peptidů, označených jako „skupina III, která se skládá z:

D-p-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2,

D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-p-Nal-NH2,

D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-3-Nal-NH2,

D-p-Nal-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2,

D-Phe-CyS-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr-NH2,

D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr-NH2,

D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr-OH,

D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr-OH,

Gly-Pen-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-OH,

Phe-Pen-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-OH,

Phe-Pen-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr-OH,

H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol,

H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cyp-Thr-NH2,

H-D-Trp-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2,

H-D-Trp-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Ťhr-NH2,

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2,

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Trp-NH2,

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2,

Ac-D-Phe-Lys*-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Asp-Thr-NH2 (amidový můstek je vytvořen mezi Lys* a Ajsp),

Ac-hAřg(Et)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2,

Ac-D-hArg (Et)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2,

Ac-D-hArg(Bu)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2,

Ac-D-hArg(Et)2-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2,

Ac-L-hArg (Et)2-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2,

Ac-D-hArg(CH2CF3) 2-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2,

Ac-D-hArg(CH2CF3) 2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2, Ac-D-hArg(CH2CF3) 2~Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Phe-NH2, Ac-D-hArg(CH2CF3) 2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NHEt, ·«·· · 0 00 ···· «0 0 0000 00 0 000 0 0 000

Ac-L-hArg(CH2CF3) 2-Gly-Cyg-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂, Ac-D-hArg(CH2CF3) ₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys(Me)-Thr-Cys-Thr-NHž, Ac-D-hArg(CH2CF3) 2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys(Me)-Thr-Cys-Thr-NHEt, Ac-hArg(CH3, hexyl)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂, H-hArg (hexyl2) -Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2, Ac-D-hArg (Et) ₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NHEt, Ac-D-hArg (Et) z-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Phe-Nfo, Propioftyl-D-hArg (Et)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys(iPr)-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-p-Nal-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Gly-hArg(Et) ₂-NH₂, Ac-D-Lys(iPr)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-hArg (CH2CF3) 2-D-hArg (CH2CF3) ₂-Gly-Cys~Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-hArg (CH2CF3) 2-D-hArg (CH2CF3) 2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Phe-NH2,

Ac-D-hArg (Et) 2-D-hArg (Et) ₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-Cys-Lys-Asn-4-Cl-Phe-Phe—D-Trp-Lys-Thr^Phe-Thr-Ser-D-Cys-NH2,

Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂,

Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Vai-Cys-Phe-NH₂,

Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-p-Cl-Phe-NH2,

Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-p-Nal-NH₂,

H-D-p-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lyá-Val-Cýs-Thr-NH2,

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2,

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Ahu-Cys-p-Nal-NH2,

H-pentafluor-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂,

Ac-DT-p-Nal-Cys-pentafluor-Phe-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂,

H-D~3-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-p-Nal-NH₂,

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-p-Nal-NH2,

H-D-p-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH₂,

H-D-p-Cl-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-p-Cl-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH₂,

ΦΦ φφφφ φ φ ·· φφφφ « * · φφ φφ φ · φ φφφ φ φ φφφ φφφ φ φ φφφφ φ φφφ φ φ φφφφ φφ φ φφφ φφφ φφ φφ

H-D-Phe-Cys-p-Nal-D-Trp~Lys-Val-Cys-Thr-NH₂,

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Cys~Thr-NH₂, cyklo(Pro-Phe-D-Trp-N-Me-Lys-Thr-Phe), cyklo(Pro-Phe-D-Trp-Lys-N-Me-Thr-Phe), cyklo(Pro-Phe-D-Trp-Lys-Thr-N-Me-Phe), cyklo(N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe), cyklo(Pro-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe) , cyklo(Pro-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe) , cyklo(Pro-Phe-L-Trp-Lys-Thr-Phe), cyklo(Pro-Phe-D-Trp(F)-Lys-Thr-Phe) , pyklo(Pro-Phe-Trp(F)-Lys-Thr-Phe), cyklo(Pro-Phe-D-Trp-Lys-Ser-Phe), cyklo(Pro-Phe-D-Trp-Lys-Thr-p-Cl-Phe), cyklo(D-Ala-N-Me-D-Phe-D-Thr-D-Lys-Trp-D-Phe), cyklo(D-Ala-N-Me-D-Phe-D-Val-Lys-D-Trp-D-Phe) , cyklo(D-Ala-N-Me-D-Phe-D-Thr-Lys-D-Trp-D-Phe), cyklo(D-Abu-N-Me-D-Phe-D-Val-Lys-D-Trp-D-Tyr), cyklo(Pro-Tyr-D-Trp-tM-AchxAla-Thr-Phe), cyklo(Pro-Phe-D-Trp-t-4-AchxAla-Thr-Phe), cyklo(N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe), cyklo(N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-t-4-AchxAla-Thr-Phe), cyklo(Pro-Tyr-D-Trp-4-Amphe-Thr-Phe), cyklo(Pro-Phe-D-Trp-4-Amphe-Thr-Phe), cyklo (N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-4-Ainphe-Thr-Phe) , cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba-Gaba), cyklo(Asn-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-NH(CH₂) 4C0) , cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-p-Ala), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-D-Glu)-OH, cyklo(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe) , cyklo(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gly), cyklo(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba), ·· ···· · · ·· ···· • · · ·· ·· · · · • · · · · · · · ··· · · · · · · • · · ···,··· · · ·· cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gly) , cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp(F)-Lys-Thr-Phe-Gaba) , cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp (NO2)-Lys-Thr-Phe-Gaba) , cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp(Br)-Lys-Thr-Phe-Gaba), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe(I)-Gaba), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Tyr(But)-Gaba), cyklo(Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Pro-Cys)-OH, cyklo(Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Pro-Cys)-OH, cyklo (Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D~Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-T£>o-Cys) -OH, cyklo(Birtp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-MeLeu-Cys)-OH, cyklo(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-Gaba), cyklo(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-D-Phe-Gaba), cyklo(Phe-Phe-D-Trp(5F)-Lys-Thr-Phe-Phe-Gpba), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys(Ac)-Thr-Phe-NH-(CH₂) 3-CO), cyklo(Lys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba) , cyklo(Lys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba) , cyklo(Orn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba) ,

H-Cys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys-NH2, ' /~\

HO(CH₂)₂-N\_yM-(CH₂)-CO-D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH₂

ΛΛ

HO(CH₂)₂-I^_^N-(CH₂)2-SO₂-D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH₂ nebo jejich farmaceuticky přijatelných soli, ve kterých disulfidová vazba existuje v těch sloučeninách, které obsahují dva zbytky Cys a kde aminový dusík každé amidové vazby peptidů a aminoskupiny z N-konce aminokyseliny je popřípadě substituován methylovou skupinou, za předpokladu,- že ve sloučenině existuje nejméně jedna uvedená methylová skupina.

V dalším aspektu předkládaný vynález věnuje pozornost agonistům SRIF, které zahrnují N-methylované analogy agonistů SRIF, které pokrývá obecný vzorec nebo těm, které jsou výslovně uvedeny v publikacích uvedených níže.

Evropská přihlášky č. P5 164 EU (vynálezce G. Keři),

Van Binst G. a kol., Peptide Research, 5, 8 (1992),

Horvath A. a kol., abstrakt, „Conformations of

Somatostatin Analogs Having Antitumor Activity, 22. Evropské sympozium o peptidech (22^nd European peptide Sympozium), 13 až

19. září 1992, Interlaken, Švýcarsko,

US	patent	č.	6	001	801	(1999)
US	patent	č.	4	904	642	(1990)
US	patent	č.	4	871	717	(1989)
US	patent	č.	4	853	371	(1989)
US	patent	č.	4	725	577	(1988)
US	patent	č.	4	684	620	(1987)
US	patent	č.	4	650	787	(1987)
US	patent	č.	4	603	120	(1986)
US	patent	č.	4	5β5	755	(1986)

Evropská patentová přihláška EP-A 0 203 031 A2 (1986),

US	patent	č.	4	522	813	(1985)
US	patent	č.	4	486	415	(1984)
US	patent	č.	4	485	101	(1984)
US	patent	č.	4	435	385	(1984)
US	patent	č.	4	395	403	(1983)
US	patent	č.	4	369	179	(1983)
US	patent	č.	4	360	516	(1982)
US	patent	č.	4	358	439	(1982)
US	patent	č.	4	328	214	(1982)
US	patent	č.	4	316	890	(1982)
US	patent	č.	4	310	518	(1982)
US	patent	č.	4	291	022	(1981)

US	patent	č.	4	238	481	(1980),
US	patent	č.	4	235	886	(1980),
US	patent	č.	4	224	190	(1980),
US	patent	č.	4	211	693	(1980),
US	patent	č.	4	190	648	(1980),
US	patent	č.	4	146	612	(1979)>
US	patent	č.	4	133	782	(1979),
US	patent	č.	5	506	339	(1996),
US	patent	č.	4	261	885	(1981),
US	patent	č.	4	728	638	(1988),
US	patent	č.	4	282	143	(1981),
US	patent	č.	4	215	039	(1980),
US	patent	č.	4	209	426	(1980),
US	patent	č.	4	190	575	(1980),

Evropská patentová přihláška EP-A 0

363 589 A2 (1990),

Evropský	patent č.	EP 0 389	180	(1990),
Evropská	patentová	přihláška	č.	EP-A	0	505	680	(1982) ,
Evropská	patentová	přihláška	č.	EP-A	0	083	305	(1982) ,
Evropská	patentová	přihláška	č.	EP-A	0	030	920	(1980),

PCT	přihláška	č.	WO	97/01579	(1997),
PCT	přihláška	č.	WO	91/18016	(1991),
PCT	přihláška	č.	WO	91/09056	(1991),
PCT	přihláška	č.	WO	90/12811	(1990),
PCT	přihláška	č.	WO	88/05052	(1988),

Přihláška spojeného království č. Francouzská patentová přihláška č

GB 2 095 261

FR 2 522 655 (1981) a (1983) .

Sloučeniny obecného vzorce (I), obecného vzorce (II) a skupiny (III) podle nynější přihlášky jsou užitečné pro stejná použití jako SRIF, v závislosti na vazebné specificitě nebo jejím nedostatku, jak je možno stanovit zde popsanými zkouškami vázání.

• · • · · · • 9 • 9 • 9

999 999 • 99« 9

9

Tudíž v jiném aspektu tento vynález věnuje pozornost způsobu vázání jednoho nebo více receptorů somatostatinu podtypu -1, -2, -3, -4 a -5, který zahrnuje krok podávání jedné nebo více sloučenin obecného vzorce (I) a/nebo obecného vzorce (II) a/nebo skupiny (III) nebo farmaceuticky přijatelné soli(i) takové sloučeniny nebo sloučenin příjemci, který to potřebuje.

Ve výhodném ztělesnění podle bezprostředně předcházejícího způsobu je pozornost věnována způsobu vyvolání agonistického účinku somatostatinu, který zahrnuje krok podávání jedné nebo více sloučenin obecného vzorce (I) á/nebo obecného vzorce (II) a/nebo skupiny (III) nebo farmaceuticky přijatelné soli (i) takové sloučeniny nebo sloučenin příjemci, který to potřebuje.

Ve výhodnějším ztělesnění bezprostředně předcházejícího způsobu je pozornost Věnována léčení nemoci nebo stavu u člověka nebo jiného živočicha, který nehí člověkem, který to potřebuje, a který zahrnuje podávání jedné nebo více sloučenin obecného vzorce (I) a/nebo obecného vzorce (II) a/nebo skupiny (III) nebo farmaceuticky přijatelné soli(i) takové sloučeniny nebo sloučenin, uvedenému člověku nebo jinému živočichovi, ve kterém uvedená nemoc nebo stav je vybrán ze skupiny skládající se z Cushingovy nemoci, gonadotropinomie, hyperparatyreidismu, Pagetovy nemoci, VlPomie, nesidioblastomie, hyperinsulinizmu, gastrinomie, nemoci Zollinger-Ellison, hypersekreční di.arhei spojené s AIDS a jiných stavů, dráždivého onemocnění střev, pankreatitidy, Crohnovy nemoci, systemické sklerózy, systémové sklerózy, rakoviny štítné žlázy, psoriázy, hypotenze, záchvatů úzkosti, sklerodému, malé střevní obstrukce, gastroesofagálního refluxu, duodenogastrického refluxu, Gravesovy nemoci, polycystické nemoci vaječníku, krvácení z horního gastrointestinálního

·· • •	··«· • · • ·	• ·· •	4 ·· •	··	···· • •
• •	• •
•	• ·	*	•	•	•	9 9
·»	•	···	···	··		99

traktu, pankreatických pseudocyst, pankreatické ascites, leukemie, meningiomu, rakovinné kachexie, akromegalie, restenózy, hepatomu, rakoviny plic, melanomu, inhibice zrychleného růstu pevných nádorů, snižování tělesné hmotnosti, léčení inzulínové resistence, syndromu X, prodloužení přežití pankreatických buněk, fibrózy, hyperlipidemie, hyperamylinemie, hyperprolaktinemie a prolaktinomie.

S výjimkou N-konce aminokyseliny, všechny zkratky (např. Phe pro A¹) aminokyselin v tomto vynálezu znamenají strukturu -NH-CH(R)-C0-, ve které R v bezprostředně předcházejícím obecném vzorci je vedlejší řetězec aminokyseliny (např. CH3 pro Ala). Pro N-konec aminokyseliny zkratka znamená strukturu (R¹R²)-N-CH (R)-CO-, ve kterém R je vedlejší řetězec aminokyseliny a R¹ a R² mají zde uvedený význam;

Nomenklatura pro podtypy receptorů somatoStatinu je

v souladu	s doporučeními IUPHAR, ve kterých se SSTR-4 týká
receptorů,	který původně klonoval Bruno a kol., a SSTR-5 se
týká receptorů, který klonoval 0'Carrol a kol. Zkratky běžných
aminokyselin jsou v souladu s doporučeními IUPAC-IUB.
Následuj i	zkratky určitých α-aminokyselin jak se m°hou
vyskytnout	zde:
Abu	oí-aminobutyrová kyselina,
Aib =	oí-aminoisobutyrová kyselina,
β-Ala	β-alanin,
Amp =	4-aminofenylalanin,
Ava =	5-aminovalerová kyselina,
Cha =	cyklohexylalanin,
Gaba =	γ-aminobutyrová kyselina,
Lys =	lysin,
B-Nal	β-(2-naftyl)alanin,

• · · · · ·

Nle	=	norleucin,
Nva	=	norvalin,
Orn	=	órnithin,
Pal	=	β-(3-pyridinyl)alanin,
Phe	=	fenylalanin,
Ser	=	serin,
hSer	=	homoserin,
Thr	=	threonin, a
Tyr	=	tyrosin.
	Další	zkratky zahrnují:
DBU	=	1,8-diazabicyklo[5.4.0]undek-7-en,
DCM	=	dichlormethan,
DIC	=	dicyklohexylkarbodiimid,
DIEA	=	diisopropylethylamin,
DMF	=	dimethylformamid,
MTBD	⁼	1,3,4,6,7,8-hexahydro-Í-methyl-2H-pyrimido- [1,2-a]pyrimidin,
NPS	=	2-nitrofenylsulfonyl,
TBTU		o-benztriazol-l-yl-N,Ν,Ν',Ν'-tetramethyl-

uroniumtetrafluorborát, a TFA = trifluoroctová kyselina.

Sloučenina podle přítomného vynálezu nebo její farmaceuticky přijatelná sůl může být podávána orálně, parenterálně (např. nitrosvalovými, nitropobřišnicovými, nitrožilními nebo subkutáními injekcemi nebo implantáty), nasálními, vaginálními, rektálními, subligválními nebo lokálními způsoby podávání a může být formulována s farmaceuticky přijatelnými nosiči pro získání dávkových forem vhodných pro každý způsob podávání.

• ·

Dávkové formy v pevném stavu pro orální podávání zahrnují kapsle, tablety, pilulky, prášky dávkových formách v pevném stavu a granule, je aktivní

V takových sloučenina smíchána s nejméně jedním inertním farmaceuticky přijatelným nosičem jako jsou sacharóza, laktóza nebo škrob. Takové dávkové formy mohou také obsahovat, jak je běžné v praxi, než taková inertní ředidla, např. jako je stearát hořečnatý. V případě dávkové formy také pomocné látky jiné lubrikační činidla, kapslí, tablet nebo pilulek, mohou obsahovat pufrovací činidla. Tablety připraveny s enterickými povlaky.

a pilulky mohou být

Kapalné dávkové formy pro orální podávání zahrnují farmaceuticky přijatelné emulze, roztoky, suspenze, sirupy a elixíry obsahující inertní ředidla běžně používaná v oboru, jako je voda. Kromě takových inertních ředidel, může kompozice také obsahovat adjuvans, jako jsou zvhlčovací činidla, emulgační a suspenzační činidla, a sladidla, příchuti a parfumační činidla.

Prostředky pro parenterální podávání podle tohoto vynálezu zahrnují sterilní vodné nebo nevodné roztoky, suspenze nebo emulze. Příklady nevodných rozpouštědel nebo vehikul jsou propylenglykol, polyethylenglykol, rostlinné oleje, jako jsou olivový olej a kukuřičný olej, želatina, a injektovatelné organické estery, jako je ethyl-oleát. Takové dávkové formy mohou také obsahovat adjuvans, taková jako jsou konzervační činidla, zvlhčovadla, emulgační a dispergační činidla. Mohou být sterilizovány, například filtrací přes bakterie zadržující filtr, začleněním sterilizačního činidla do kompozice, pomocí ozařování kompozice nebo zahříváním kompozice. Mohou být také vyráběny ve formě sterilních kompozic v pevném stavu, které mohou být rozpuštěny v sterilní vodě nebo některých jiných • · sterilních injektovatelných mediích bezprostředně před použitím.

Kompozicemi pro rektální nebo vaginální podávání jsou výhodně čípky, které mohou obsahovat, navíc k aktivní látce, excipiens, jako je kakaové máslo nebo čípkový vosk.

Kompozice pro nasální nebo sublingvální pódávání jsou také připravovány se standarními excipiens dobře známými v oboru.

Dávka aktivní složky v kompozicích podle tohoto vynálezu se může lišit, avšak je nezbytné, aby množství aktivní složky bylo takové, že je získána vhodná dávková forma. Zvolená dávka závisí na požadovaném léčebném účinku, na způsobu podávání a na době trvání léčení. Obecně jsou pro získání požadovaného léčebného účinku podávány úrovně dávek mezi 25 pg/kg/den a 100 mg/kg/den tělesné hmotnosti denně jako jedna dávka nebo rozdělené do více dávek lidem nebo jiným živočichům, např. savcům.

Výhodný obecný rozsah dávky je od 250 pg/kg/den do 5,0 mg/kg/den tělesné hmotnosti denně, který může být podáván jako jedna dávka nebo rozdělen do více dávek.

Dále může být sloučenina podle tohoto vynálezu nebo její farmaceuticky přijatelná sůl podávána v kompozici se setrvalým uvolňováním, jako jsou kompozice popsané v následujících patentech. Mezi těmito prostředky, jsou výhodné prostředky se 14-denním nebo 28-denním pomalým uvolňováním. US patent č. 5 zdůrazňuje kompozice polyester.

672 659 obsahující peptid a se setrvalým US patent č.

zdůrazňuje kompozice se setrvalým uvolňováním uvolňováním

595 760 obsahuj ící peptid v gelovatelné formě. US patent č. 5 821 221 zdůrazňuje • · · · · ·

polymerní kompozice se setrvalým uvolňováním obsahující peptid a chitosan. US patent č. 5 916 883 zdůrazňuje kompozice se setrvalým uvolňováním obsahující Mezinárodní patentová přihláška č. WO 99/38536, z 5. srpna, 1999) peptid a cyklodextrin. PCT/US99/01180 (publikace zdůrazňuje absorbovatelné kompozice peptidu se setrvalým uvolňováním. Obsahy dříve uvedených patentů a přihlášek jsou zde zahrnuty ve formě odkazů.

Použití kompozic s okamžitým nebo setrvalým uvolňováním závisí na typu indikací, které jsou cílem. Jestliže indikaci tvoří akutní nebo nadakutní poruchy, bude upřednostňováno léčení pomocí formy s okamžitým uvolňováním proti stejnému léčení pomocí kompozice se setrvalým uvolňováním. Proti tomu pro preventivní dlouhodobé léčení bude obecně upřednostňována kompozice s prodlouženým uvolňováním.

Dále následuje podrobný popis tohoto vynálezu.

Odborník v oboru může na základě zde uvedeného popisu využít předkládaný vynález v jeho nejplnějším rozsahu. Následující specifická ztělesnění jsou próto konstruována pouze jako ilustrace tohoto vynálezu a jejich konstrukce není zamýšlena jako omezení plného rozsahu tohoto vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Syntéza

4-Methylbenzenhydrylaminhydrochloridová pryskyřice (0,25 nebo 0,5 mekv.g’¹) se získá od společnosti AdvancedChemTech lne., Louisville, KY. N“-terc-butyloxykarbonylem (Boc) chráněné aminokyseliny se zakoupí od společností Bachem lne., Torrance, ·«· · · · · *

ČA, Advanced ChemTech lne. a Synthetech lne. Albany, OR. Reaktivní vedlejší řetězce aminokyselin se stíní jednou z následujících skupin: Cys, 4-methylbenzyloxykarbonylové skupiny, Lys, 2-chlorben^yloxylarbonylové skupiny, Thr, 0-benzylové skupiny, Tyr, 0-2,6-dichlorbenzylové skupiny. Všechna činidla a rozpouštědla mají kvalitu ACS (American Chemical Society) nebo vyšší a používají se bez dalšího čištění.

Sloučeniny podle přítomného vynálezu, např. sloučeniny obecného vzorce (I) se mohou a syntetizují se na 4-methylbenzhydrylaminem funkcionalizované z 1 % křížově zesíťované polystyrénové pryskyřici (0,25 nebo 0,5 miliekvalentu.g ¹) , v 0,25mmol měřítku v syntetizéru společnosti AdvancedChemTech (model 2000), za využití následujícího protokolu: deblokace., 40% TFA (2 min, 20 min); cyklus promytí DCM (tři promytí); neutralizace, 10% DlEA (1 min, 5 min)/ cyklus promytí DMF, cyklus promytí DCM (dvě promytí); dvojnásobná kondenzace; první s estery 1, 3-diisopropylkarbodiimidu (3 ekv.), 30 min v DCM; promytí DCM (tři promytí); druhá kondenzace s předem připravenými estery TBTU (3 ekv.), 90 min v DMF s katalytickým nožstvím DIEA; promytí DMF (jedno promytí); promytí DCM (tři promytí). Kondenzační reakce jsou sledovány pomocí kvalitativně pomocí ninhydrinového testu.

Bránění N^a

Po té	co	se aminoskupina zbaví	ochrany	v místě žádoucí
methylace,	se	pryskyřice suspenduje	v DCM	(20 ml).	K této
suspenzi	se	přidá kolidin (3	ekv.)	a	o-nitro-

benzensulfonylchlorid (3 ekv.) a směs se protřepává za použití syntetizéru společnosti AdvancedChemTech (model 2000) po 2 h. Potom se pryskyřice promyje DCM (dvě promytí) a DMF (tři

	23	······ « a • · · «I .i ······ • · · . Ϊ · · · ·· · ··· ·ί. ·..··..·
promytí).	Bránění	se	sleduje	kvalitativně pomocí
ninhydrinového testu.

Methylace Ν^α

Pryskyřice bráněná o-nitrobenzensulfonamidem se suspenduje v DMF (20 ml), do kterého se přidá MTÉD (3 ekV.) a methyl-4-nitrobenzehsulfonát nebo dimethylsulfát (pokud jde o Cys). Směs se potom protřepává za použití syntetizéru společnosti AdvancedChemTech (model 2000) po 0,5 h a pryskyřice se promyje DMF (4 promytí).

Zbavení ochrany N^a-Me

Jakmile se požadovaný zbytek zmethyluje, pryskyřice se znovu suspenduje v DMF (20 ml) . K suspenzi se přidá DBU (3 ekv.) a 2-merkaptoethanol (3 ekv.) a směs se protřepává 0,5 h v syntetizéru od společnosti AdvancedChemTech (model 2000). Pryskyřice se potom pečlivě promyje DMF (5 promytí).

Odštěpení peptidu

Peptidy se odštěpí od pryskyřicového nosiče tím, že se postranní řetězec simultánně zbaví ochrany acidolýzou za použití bezvodého fluorovodíku, který jako látku zachycující vedlejší produkty obsahuje anisol (~30 % objem/objem), působícího po 45 min při 0 °C. Peptidy se cyklizují v 90% kyselině octové (~600 ml) s mírným přebytkem I2 (15 min.). Přebytek I2 se poté odstraní přidáním kyseliny askorbové.

Čištění • · · ·

Surové peptidy se čistí preparativní vysokotlakou kapalinovou qhromatografií s reverzními fázemi (RP-HPLC) na C-18 vázaném silikagelu za použití axiálních kompresních kolon (Dynamax-30 nm, 5 nebo 8 pm, 21,4 x 250 mm) . Používá se eluční systém s lineárním gradientem při rychlosti toku 20 ml.min¹:

A, 0,1 % TFA; B, 0,1 % TFA v 80 % MeCN, 20 % B : 50 % B při 1 % min¹. Separace se sledují pomocí analytické vysokotlaké kapalinové chromatografie s reverzními fázemi při 215 nm. Frakce obsahující produkt se spojí, odpařují se ve vakuu a lyofilizují se. Každý peptid se získá lyofilizaci z vodné kyseliny octové jako chmýřovitý bílý prášek o konstantní hmotnosti. Čistota finálních peptidů se hodnotí při 215 nm pomocí analytické vysokotlaké kapalinové chromatografie s reverzními fázemi. Analytická vysokotlaká kapalinová chromatografie s reverzními fázemi se provádí Za použití nosiče Vydac C-18 (4,6 x 250 mm, 5 pm, velikost pórů 30 nm,

Liquid Separations Group). Lineární gradientový systém se používá při rychlosti toku 1,5 ml.min ¹: HPLC-1, A, 0,1 % TFA;

B, 0,1 % TFA v 80 % MeCN; 20 % B : 50 % B při 1 % min¹; HPLC-2, C, 5 % MeCN v TEAP (0,1 M, pH 3); D, 20 % C v MeCN, 10 % D : 70 % D při 1 % min¹. Eluent kolony se sleduje při 215 ηηι.

Retenční čas a čistota každého peptidu se hodnotí pomocí způsobu řízení vysokotlaké kapalinové chromatografie Rainin Dynamax (Rainin Dynamax HPLC Method Manager).

Analýza aminokyseliny

Peptidy se hydrolyzují ve vakuu (110 °C, 20 h) v 4M kyselině methansulfonové obsahující 0,2 % 3-(2-aminoethyl)indolu (Pierce). Analýza aminokyseliny se provádí na hydrolyzátech po derivatizaci s o-ftalidaldehydovým činidlem (Sigma Chemical Co.) za použití automatického systému vysokotlaké kapalinové chromatografie (Rainin Instrument Co.) ·· ····

vybaveného 100 x 4,6 mm, 3 pm C18 axiální kompresní kolonou s integrální předkolonou (Microsorb AAAnalysis , type O; Rainin Instrument Co.). Derivatizované primární aminokyseliny se eluují za použití binárního gradientu pufru A, 0,10M roztok octanu sodného obsahující 4,5 % objem/objem methanolu a 0,5 % objem/objem tetrahydrofuranu při pH 7,2 a pufru B, methanol. Používá se sled gradientu; 0 % A v čase 0 min.; 35 % A v čase

16.5 min; 90 % A v čase 30 min a 90 % A v čase 33 min s rychlostí toku 1,0 ml.min^-1 při teplotě místnosti. Eluent se sleduje při 340 nm a integruje pomocí způsobu řízení Dynamax HPLC Method Manager (Rainin). Standardní retenční časy jsou následující: Asp, 6,6 min; Arg, 19,9 min; Trp, 25,4 min a Lys,

29.5 min. Každý peptid z tabulky 1 poskytuje pro primární aminokyseliny očekávané analytické výsledky. Cystein není kvantifikován.

Hmotnostní spektrometrie

Peptidy se analyzují pomocí hmotnostní spektrometrie prováděné měřením doby průletu laserového paprsku při desorpci/ionizaci podporované základní hmotou za použití hmotnostního spektrometru LaserMat 2000 (Ťhermal Bioanalysis, San Jose, CA) a za použití kyseliny a-kyano-4-hydroxyskořicové jako základní hmoty s látkou P (Substance P) (1348,7 daltonů) jako vnitřního standardu. V každém případě se spektrum skládá z píku hlavního iontu M-H⁺ pro vnitřní standard, očekávaného píku stanovovaného M-H⁺ a několika plků spojených se základní hmotou (<500 daltonů). Takto odvozené hodnoty hmotnosti pro určité představitele sloučenin podle současného vynálezu jsou uvedeny v tabulce 1.

Inhibice uvolňování růstového hormonu !GH) analogem somatostatinu (SRIF) φ · • φ ' • ΦΦΦ dárců, 1 gentamyčinem (Gibco), (10 000

Přední laloky hypofýzy z dospělých samců krys se odeberou a dispergují se pomocí dříve popsaného způsobu trypsin/DNase (Murphy W. A., Taylor J., Moreau J.-P. a Coy D. H., Peptide Res., 2), 128 až 132 (1989)) . Dispergované buňky se zředí sterilně filtrovaným mediem Eagle modifikovaným podle Dulbeka (Dulbecco's modified Eagle medium) (MEM, Gibco Laboratories, Grand Island, NY) , které se doplní 2,5 % fetálního telecího séra (Gibco), 3 % koňského séra (Gibco), 10 % čerstvého krysího séra (skladovaného na ledu ne déle než 1 h) z hypofýz MEM neesenciální aminokyseliny (10 ng/ml; Sigma) a nystatinem jednotek/ml; Gibco). Buňky se nahodile plotnují při hustotě přibližně 200 000 buněk/jamku (Costar cluster É4; Rochester

Scientific Co., Rochester, NY) . Plotnované buňky se udržují v dříve uvedeném Dulbekově rtediu ve zvlhčované atmosféře z 95 % vzduchu/5 % oxidu uhličitého při 37 °C po 4 až 5 dní. Při přípravě na vyvolání hormonální odezvy se buňky promyjí mediem 199 (Gibco, 3x1 ml). Každá dávka sloučeniny podle tohoto vynálezu se zkouší ve třech jamkách v celkovém objemu 1 ml media 199 obsahujícího 1 % BSA (frakce V; Sigma Chemical Co.). Všechny jamky obsahují GHRH(1-29)NH₂ (1 nM) . Po inkubaci v atmosféře vzduch/oxid uhličitý (95/5 %, 3 h při 37 °C) se medium odstraní a skladuje se při -20 °C dokud není testováno na obsah hormonu. Růstový hormon v mediu se měří pomocí standardní dvojité protilátky RIA za použití složek, které běžně dodává Dr. A. F. Parlow z Národního programu pro výzkum hormonů a hypofýzy (National Hormone and Pituitary Program (NHHP)), Torrance, CA. Hodnoty IC50 agonisty se počítají za použití programu Sigmaplot (Jandel Scientific, San Rafael,

CA). Hodnoty se vyjadřují jako průměrná (nM)fstandardní chyba měření (dále jen SEM) z reakce na jednotlivé dávky.

hodnota IC50 (n) křivek

» · · · · · • · · • · ·	9 9 9 9	9 9 9 9	99	···· • •
9 9	• •
9 9 9	9	9	9	•	• ·
9 9 9	999	999	• ·		• ·

Funkční exprese klonovaných receptorů lidského somatostatinu

Genomické klony obsahující receptory lidského somatostatinu (hSSTR-1 až hSSTR-5) (Yamada Y. a kol., Proč.

Nati. Acad. Sci, USA, 89, 251 až	255	(1992	) ; Yasuda K. a	kol.,
J. Biol. Chem., 267, 20 422 až	20	428	(1992); Yamada	Y. a
kol., Mol. Pharmacol., 42, 2136	až	2142	(1992); Rohrer	L. a

kol., Proč. Nati. Acad. Sci., USA, 90, 4196 až 4200 (1993)), laskavě poskytl Dr. Graeme I. Bell z Chicagské university (University of Chicago). Tyto hSSTR-1, hSSTR-2, hSSTR-3, hSSTRⁱ-4 a hSSTR-5 komplementárních DNA se izolují jako 1,5-kilobázový fragment Pstl-Xmnl, 1,7-kilobázový fragment BamHI-HindlII, 2,0-kilobázový fragment Ncol-HindlII, 1,4-kilobázový fragment Nhel-Ndel a 1,2-kilobázový fragment HihdlII-Xbal, z nichž každý obsahuje úplnou kódující oblast o celé délce receptorů. Tyto fragmenty se nezávisle subklonují do příslušných míst restrikční endonukleážy v savčím vektoru exprese pCMV5, po směru exprese od lidského cytomegalovirového (CMV) promotoru, pro přípravu plasmidů exprese pCMV5/hSSTR-l, pCMV5/hSSTR-2, pCMV5/hSSTR-3, pCMV5/hSSTR-4 a pCMV5/hSSTR-5. Pro transfekci se do buněk CHO-K1 přidá plasmid pRSV-neo (Sbírka amerických typových kultur (American Type Culture Collection), Rockville, MD), který nese selektovatelný neomycinový signální znak savčí buňky.

Exprese a transfekce receptoru

Transfekce se provádí kalciumfosfátovým způsobem. Buňky CHO-K1 se uchovávají v oí-minimálním základním mediu (a-MEM; Gibco) doplěném 10% fetálním telecím sérem a transfekují se s každým z plasmidů exprese za použití precipitace fosforečnanem vápenatým. Klony, které zdědily plasmid exprese se vybírají v α-MEM doplněném 500 pg/ml genetýcinu (G418;

·· ···· ♦

·· ·♦··

Gibco). Nezávislé klony CHO-K1 se vyberou pomocí klonování metodou glass-ring a exprimují se v kultuře v selektivním mediu. Z izolovaných klonů se připraví membrány a exprese hSSTR se zpočátku posuzuje pokud jde o vázáni s [ I]Tyr -SRIF a [¹²⁵I]MK-678 (pro SSTR-2) .

Zkoušky vázáním radioligandů

Buněčné membrány z 5 typů receptorů se získají z homógenátů (nastavení Polytronu 6, 15 s) příslušných buněk

CHO-K1, v ledově studené tris-HCl (50 mM) a odstředěných CHO-Kl, v ledově studené tris-HCl (50 mM) a odstředěných (39 000 g, 10 min x 2), s resuspenzací meziproduktu v čerstvém pufru. Finální pelety se pro zkoušku resuspendují v tris-HCl (10 mM). Stejné podíly z rfiembrán se inkubují (30 min při 37 °C) s 0,05 nM [¹²⁵I] Tyr¹¹-SRIF (typy 1, 3, 4, 5) nebo [¹²⁵I]MK-678 (typ 2) v 50 mM HEPES (pH 7,4) obsahujícího BSA (10 mg.ml’¹), chlorid hořečnatý (200 -i.

tisíc mezinárodních a fenylmethansulfonyl(5 mM), trasylol jednotek.mf’¹) , bacitracin (0,02 mg.ml fluorid (0,02 mg.ml’¹) . Objem finální zkoušky je 0,3 ml a inkubace se zastaví rychlou filtrací přes filtry GF/C předem nasáknuté v 0,3% póly(ethyleniminu) za použití Brandelova modulu pro rychlou filtraci. Každá trubice a filtr se potom promyje stejnými podíly studeného pufru (3 x 5 ml).

Specifické vázání se definuje jako celková vazba radioligandů minus tato vazba za přítomnosti 1,0 μΜ SRIF. Následující hodnoty celkového vázání radioligandů a nespecifického vázání (nsb) se obvykle získají s pomocí těchto testovacích systémů: hSSTR-Ι, celkově 7000 cyklů za minutu (cpm) proti 3500 cyklů za minutu nsb; hSSTR-2, celkově 9000 cyklů za minutu proti 1000 cyklům za minutu nsb; hSSTR-3, celkově 8000 cyklů za minutu proti 1000 cyklům za minutu nsb;

hSSTR-4, celkově 6000 cyklů za minutu proti 3500 cyklům za minutu nsb a hSSTR-5, celkově 7500 cyklů za minutu proti 3500 cyklům za minutu nsb. Vazebné afinity se vyjadřují jako hodnoty Ki±SEM (nM) pro každý z pěti podtypů receptorů. Hodnoty Ki odvozené pro představitele sloučenin podle přítomného vynálezu jsou podrobně uvedeny v tabulce 2.

Molekulární modelování

Molekulární modelování se provádí na počítači Silicon Graphics Indigo² High Impact 10 000 za použití softwaru pro molekulární modelování SYBYL, verze 6.6 (Tripos Associates Ιηε., St. Louis MO, USA) pomocí Kollmanova celoatomového silového pole. Kartotéka PDB pro tři roztoky NMR struktur výchozí sloučeniny Sandostatin/Oktreotid®: D-Phe⁵-cyklo[Cys⁶-Phe⁷-D-Trp⁸-Lys⁹-Thr¹⁰-Cys¹¹] -Thr¹²-ol (1SOC a 2SOC) se získají z databáze PDB. Tyto struktury se importují do SYBYL 6.6 a mutují se do formy N-methylovaných sloučenin založených na příkladu 9. Kollmanovy parciální atomové náboje se vloží podle slovníku monomerů. Struktury se optimalizují pomocí spojení mutovaných zbytků a potom pomocí úplné minimalizace energie za použití konjugovaného algoritmu gradientu do čtverce finální průměrné hodnoty kořene (rms) gradientu ^0,0042 kJ.mol.nm~¹(0,01 Kcal .mol .Á^_1) . Dielektrická funkce závislá na vzdálenosti se použije společně s nastavením prodlevy pro všechny oštatní minimalizační volby.

Příklady 9 a 18 jsou alkylované v každém zbytku pomocí způsobu v pevné fázi, zatímco jsou vytvářeny na methylbenzenhydrylaminové pryskyřici. Po odstranění terc-butoxykarbonylové (Boc) skupiny v požadovaném místě N-methylace je volný amin z pryskyřicí vázaného peptidů bráněn použitím o-nitrobenzensulfonylchloridu a kollidinu v dichlormethanu. Potom se ··· ··· • · · ·· ·· amidová N-H z nitrobenzensulfonamidu selektivně deprotonizuje silnou, bráněnou, neiontovou bází MTBD a methyluje se za použití methyl-p-nitrobenzensulfonátu v DMF. Methylovaný sulfonamid se zbaví ochrany pomocí β-merkaptoethanolu a DBU v DMF a tato reakce se snadno sleduje pomocí toho, že se objeví světle žlutá barva v roztoku což naznačuje odstranění o-nitrobenzertsulfonylové skupiny z peptidu vázaného pryskyřicí. Také je toto zbavení ochrany pomalejší když N-sulfonamid není alkylován a tudíž se čepičkou upravuje nealkylovaný peptid. Následné aminokyseliny se kondenzují dvakrát za použití TBTU/DIPEA místo DIC.

Sekvence (o-NBS) NH-Cys¹¹ (4-MeZ)-Thr¹² (Obzl)-R se nemůže methylovat za použití methyl-o-nitrobenzensulfonátu. Tento problém se však obchází použitím dimethylsulfátu jako methylačního činidla místo objemného methyl-o-nitrobenzensulfonátu.

Vazebné afinity (Kd, nM) všech analogů SRIF se stanovují jej ich 125_n za použití z radioaktivně I izolovaných z buněk na koncentraci závislého vytěsňování označených ligandů petidu z membrán CHO transfekovaných s odpovídajícím receptorem lidského somatostatinu. Pro srovnání se používají vazebné afinity SRIF-14 a SRIF-28 zjištěné stejným systémem. SRIF-28 vykazuje zvláště vysokou afinitu pro receptory typu 5 ve srovnání se SRIF-14. Uvedený zásadní účinek, který má konformace a vedlejší řetězec N-konce aminokyseliny na biologické aktivity tohoto typu anologu, pokud jde o předkládanou studii využívají se dvě řady základní struktury (sloučeniny 9 a 18) - jedna obsahující D-Phe (analog 9) a druhá obsahující zbytek Tyr (analog 18) pro získání souhrnu z 16 N-methylovaných analogů, jejichž struktury a fyžiochemické charakteristiky jsou uvedeny v tabulce 1.

• fc ···· • ·· · fc

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu se syntetizují podle výše uvedeného popisu a/nebo podle popisu v různých odkazech zde citovaných.

Tabulka 1. Struktury a analytická data N-methylovaných analogů

Př. č.	Sekvence A¹-cyklo{Cys-A²-D-Ťrp-A³— A⁴-Cys}-A^-Y¹	Hmotové spektrum (M-H⁺)	HPLC^c
vypoč.^a	pozor.^Ď	( tR-l ) ^d	(t_R-i) ^e
1	NmeD-Phe-cyklo(Cys-Phe- -D-Trp-Lys-Thr-Cys)-Thr- -nh₂	1047,3	1047,7	12,7	12, 6
2	D-Phe-cyklo(NMeCys-Phe- -D-Trp-Lys-Thr-Cys)-Thr- -nh₂	1047,3	1048,0	16,3	16, 4
3	D-Phe-cyklo(Cys-NMePhe-D— -Trp-Lys-Thr-Cys)-Thr-NH₂	1047,3	1048,8	14,4	14,8
4	D-Phe-cyklo(Cys-Phe-NMeD— -Trp-Lys-Thr-Cys)-Thr-NH₂	1047,3	1047,3	16, 6	17,3
5	D-Phe-cyklo(Cys-Phe-D- -Trp-NMeLys-Thr-Cys)-Thr— -nh₂	1047,3	1047,6	15, 6	15,7
6	D-Phe-cyklo(Cys-Phe-D- -Trp-Lys-NMeThr-Cys)-Thr— -NH₂	1047,3	1047,8	9,4	9,4
7	D-Phe-cyklo(Cys-Phe-D- -Trp-Lys-Thr-NMeCys)-Thr— -NH₂	1047,3	1047,8	13,2	12,1
8	D-Phe-cyklo(Cys-Phe-D- -Trp-Lys-Thr-Cys)-NMeThr— -NH₂	1047,3	1048,1	10,9	10, 8
9	D-Phe-cyklo(Cys-Phe-D- -Trp-Lys-Thr-Cys)-Thr-NH₂	1033,2	1032,7	12,9	12,3

9 9·99 ·

9 · « ·· 9 ··«

Tabulka 1 - pokračování

10	NMeTyr-cyklo(Cys-Phe-D- -Trp-Lys-Thr-Cys)-Thr-NH₂	1063,3	1063,8	13,4	13,7
11	Tyr-cyklo(NMeCys-Phe-D- -Trp-Lys-Thr-Cys)-Thr-NH₂	1063,3	1063,7	14,3	14,7
12	Tyr-cyklo(Cys-NMePhe-D- -Trp-Lys-Thr-Cys)-Thr-NH₂	1063,3	1063,4	13,6	13,4
13	Tyr-cyklo(Cys-Phe-NMeD- -Trp-Lys-Thr-Cys)-Thr-NH₂	1063,3	1063,7	15, 8	15,9 '
14	Tyr-cyklo(Cys-Phe-D-Trp- -NMeLys-Thr-Cys)-Thr-NH₂	1063,3	1063,2	17,7	18,2
15	Tyr-cyklo(Cys-Phe-D-Trp- -Lys-NMeThr-Cys)-Thr-NH₂	1063,3	1063,0	11,5	11,7
16	Tyr-cyklo(Cys-Phe-D-Trp- -Lys-Thr-NMeCys)-Thr-NHž	1063,3	1063,4	14,2	14,2
17	Tyr-cyklo(Cys-Phe-D-Trp- Lys-Thr-Cys)-NMeThr-NH₂	1063,3	1063,7	11, 6	11,9
18	Tyr-cyklo(Cys-Phe-D-Trp- -Lys-Thr-Cys)-Thr-NH₂	1049,2	1050,0	13,6	13, 6

^a teoretická molekulová hmotnost (M-H⁺, daltonů).

^b pozorovaná molekulová hmotnost (M-H⁺, daltonů).

^c retenční časy (min) vysokotlaké kapalinové chromatografíe s reverzními fázemi (C-18, 5 pm, 4,6 x 250 mm, λ = 215 nm) .

Pomocí vysokotlaké kapalinové chromatografíe se zjistilo, že každá sloučenina má čistotu >98 %.

^d eluční systém vysokotlaké kapalinové chromatografíe: A, 0,1 % TFA; B, 0,1 % TFA v 80 % MeCN, 20 % B : 50 % B při 1 % min'¹ a

1,5 ml.min^-1.

^e eluční systém vysokotlaké kapalinové chromatografie-2 (HPLC-2) : C, 5 % MeCN v TEAP (0,1M, pH 3) ; D, 20 % C v MeCN, 10 % D : 70 % D při 1 % min’¹ a 1,5 ml.min’¹.

• · • · • · • 4 ·· ·· * ·

Tabulka 2. Vazebné afinity (Kd) analogů uvedených v tabulce 1 pro klonované lidské receptory hSSTR-í až hSSTR-5 a (IC50) aktivity agonisty v kultuře buněk krysí hypofýzy

Př. č.	K_d ^a±SEM (nM)	Agonista ICso+SEM (n)^b(nM)
hSSTR-1	hSSTR-2	hSSTR-3	hSSTR-4	hSSTR-5
SRIF— 14	2,0+0,35	0,25+0,03	1,2+0,23	2,0+0,25	1,4+0,29	0,17+0,054
SRIF- -28	1,9+0,42	0,31+0,06	1,3+0,29	5,4+2,5	0, 4+0,05	0,23+0,052
1	316+11	1,03+0,26	17,9+2,5	>1000	4,89+1,4	0,32+0,13(7)
2	378+119	1,04+0,18	13+0,5	>1000	23,71	0,36+0,19(4)
3	>1000	13,17+3,85	830+86	>1000	83,24+25,8	7,29+2,08(2)
4	1200	23,5+3,92	11,05+1,03	>1000	0,061+0,36	18,7+8,1(2)
5	867+102	1,84+0,21	67,48+10,02	>1000	8,41+6,85	0,74+0,14(4)
6	>1000	>1000	>1000	>1000	>1000	nd^c
7	622+172	56,23+26, 4	44,4+8,36	574	28,42+19,3	nd^c
8	>1000	14,84+1,53	124,3+11,7	182	313	28,8+8,0(2)
9	761	0,15+0,08	11,84+0,9	>1000	8,35	0,16+0,04(5)
10	811+188	9,74+1,87	3,01+1,05	nd^c	27,00+14,3	11,3+2,5(5)
11	862+162	8,96+1,66	2,73+2,43	nd^c	114,0	11,9+4,1 (2)
12	653+245	40,09+3,79	94,20+16,71	nd^c	94,99+22,0	103+4,0(2)
13	1000	120,4+22,2	8,00+0,9	nd^c	50,38+28,6	nd^c
14	956+43	14,25+3,12	51,02+6,93	nd^c	629+371	27,4+14,1(2)
15	1000	61,35+6,95	440+126	1000	92,79+0,7	nd^c
16	1255	56,23+26, 4	17,00+2,75	321	16, 89	41,2+31,9(2)
17	611+3,5	26,17+10,3	535+200	353	71,84+15,5	nd^c
18	1000	10,33+3,53	18,19+4,21	nd^c	32,95+15,3	1,11+0,07(2)

^a vyjadřuje se jako průměrná hodnota+SEM, jednotlivé hodnoty udávají výsledky jednoho vazebného pokusu.

• · · · · · ·· A ·· «· ^b ICso (nM) krysího anatgonisty in vitro versus SRIF (1,0 nM), vyjádřená jako průměrná hodnotalSEM z (n) samostatných křive^ odezvy na dávku.

^c nestanoveno.

^d neaplikovatelné.

Rozumí se, že zatímco tento vynález byl popsán ve spojení se svým podrobným popisem, je následující popis zamýšlen pro ilustraci a ne pro omezení rozsahu tohoto vynálezu, který je vymezen rozsahem připojených patentových nároků. Ostatní aspekty, výhody a modifikace jsou v těchto nárocích zahrnuty. Také obsah každé publikace zde citované je zahrnut formou odkazu ve své úplnosti.

Claims

1. Sloučenina obecného vzorce (I)

A¹-cyklo {Cys-A²-D-Trp-A³-A⁴-Cys} -A⁵-Y¹ (I) ve kterém:

A¹ je popřípadě substituovaná D- nebo L-aromatická «-aminokyselina nebo popřípadě substituovaný D- nebo L-cyklo(C3-6) alkylalanin,

A² je popřípadě substituovaná aromatická α-aminokyselina nebo popřípadě substituovaný Cyklo (C3-6) alkylalanin,

A je Lys nebo Orn,

A⁴ je β-hydroxyvalin, Ser, hSer nebo Thr,

A⁵ je β-hydroxyvalin, Ser, hSer nebo Thr, a

Y¹ je skupina OH, NH2 nebo NHR¹, kde R¹ je (C1-6) alkyl;

ve kterém každá uvedená popřípadě substituovaná aromatická oí-aminokyselina a každý uvedený popřípadě substituovaný cyklo (C3-6) alkylalanin je popřípadě substituovaný jedním nebo více substituenty, z nichž každý je nezávisle vybrán ze souboru skládajícího se z halogenu, skupin NO2, OH, CN, (Ci-δ)alkylu, (C2-6) alkenylu, (C2-6) alkynylu, (Ci-δ) alkoxyskupiny,

Q 1 Π Q 1 n skupin Bzl, O-Bzl a NR R , kde R a R jsou každý nezávisle H, nebo (Ci-e) alkyl, a

·· ···· ve kterém aminový dusík každé z vazeb peptidu a aminové skupiny z A podle obecného vzorce (I) je popřípadě substituován methylovou skupinou, za předpokladu, že se tam vyskytuje při nejmenším jedna uvedená methylová skupina, a dále za předpokladu, že uvedenou sloučeninou není D-Phe-cyklo[Cys-Phe-D-Trp-Lys-(N-Me-Thr)-Cys]-Thr-NH2, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

2. Sloučenina podle nároku 1, ve které:

A¹ je Phe, D-Phe, Tyr, D-Tyr, β-Nal, Ο-β-Nal, Cha nebo D-Cha,

A² je Phe, Tyr, β-Nal nebo Cha, a

Y¹ je OH nebo NH₂, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

3. Sloučenina podle nároku 2, ve které A¹ je D-Phe nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

4. Sloučenina podle nároku 2, ve které A¹ je Tyr nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

5. Sloučenina podle nároku 2, ve které A² je Phe nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

6. Sloučenina podlé nároku 2, ve které A³ je Lys nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

• · · · · · • * • · ·

2, ve které A⁴ je Thr nebo její

7. Sloučenina podle nároku farmaceuticky přijatelná sůl.

8. Sloučenina podle nároku

2, ve které A je Thr nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

9. Sloučenina podle nároku 3, ve kterém sloučeninou je (N-Me-D-Phe)-[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH2.

10. Sloučenina podle nároku 3, ve kterém sloučeninou je D-Phe-[(N-Me-Cys)-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH2 .

11. Sloučenina podle nároku 3, ve kterém sloučeninou je D-Phe-cyklo[Cys-(N-Me-Phe)-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH2.

12. Sloučenina podle nároku 3, ve kterém sloučeninou je D-Phe-[Cys-Phe-(N-Me-D-Trp)-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH2.

13. Sloučenina podle nároku 3, ve kterém sloučeninou je D-Phe-[Cys-Phe-D-Trp-(N-Me-Lys)-Thr-Cys]-Thr-NH2.

14. Sloučenina podle nároku 3, ve kterém sloučeninou je D-Phe-cyklo[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-(N-Me-Cys)]-Thr-NH2.

15. Sloučenina podle nároku 3, ve kterém sloučeninou je D-Phe-cyklo[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-(N-Me-Thr)-NH2 .

16. Sloučenina podle nároku 4, ve kterém sloučeninou je (N-Me-Tyr)-[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH2.

17. Sloučenina podle nároku 4, ve kterém sloučeninou je Tyr-[(N-Me-Cys)-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH2.

• ·

18. Sloučenina podle nároku 4, ve kterém sloučeninou je Tyr-[Cys-(N-Me—Phe)-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH₂.

19. Sloučenina podle nároku 4, ve kterém sloučeninou je Tyr-[Cys-Phe-(N-Me-D-Trp)-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH₂ .

20. Sloučenina podle nároku 4, ve kterém sloučeninou je Tyr-[Cys-Phe-D-Trp-(N-Me-Lys)-Thr-Cys]-Thr-NH₂.

21. Sloučenina podle nároku 4, ve kterém sloučeninou je Tyr-[Cys-Phe-D-Trp-Lys-(N-Me-Thr)-Cys]-Thr-NH₂.

22. Sloučenina podle nároku 4, ve kterém sloučeninou je Tyr-[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-(N-Me-Cys)]-Thr-NH₂ .

23. Sloučenina podle nároku 4, ve kterém sloučeninou je Tyr-[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-(N-Me-Thr)-NH₂ .

24. Sloučenina podle nároku 4, ve kterém sloučeninou je Tyr-cyklo(Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys)-Thr-NH₂ nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

25. Sloučenina vybraná ze skupiny, která se skládá z:

D-p-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-p-Nal-NH₂,

D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-3-Nal-NH₂,

D-p-Nal-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr-NH₂,

D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr-NH₂,

D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr-OH,

D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr-OH,

Gly-Pen-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-OH, • · · « • · ^w * ··

Phe-Pen-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-OH,

Phe-Pen-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr-OH,

H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol,

H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2,

H-D-Trp-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2,

H-D-Trp-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2,

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂,

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Trp-NH2,

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Ťrp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-Phe-Lys*-Tyr—D-Trp-Lys-Val-Asp-Thr-NH2 (amidový můstek je v . * vytvořen mezi Lys a Asp) ,

Ac-hArg(Et)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2,

Ac-D-hArg(Et)₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-hArg(Bu)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-hArg(Et)₂-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-L-hArg(Et)₂-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2,

Ac-D-hArg(CH2CF3) ₂-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2,

Ac-D-hArg(CH2CF3) 2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2, Ac-D-hArg(CH2CF3) 2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Phe-NH₂, Ac-D-hArg(CH2CF3) 2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NHEt, Ac-L-hArg(CH2CF3) ₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂, Ac-D-hArg(CH2CF3) ₂-Gly-Cys-Phe-D~Trp-Lys(Me)-Thr-Cys-Thr-NH₂, Ac-D-hArg(CH2CF3) ₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys(Me)-Thr-Cys-Thr-NHEt, Ac-hArg(CH3, hexyl)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

H-hArg (hexyl2) -Gly-Cys-Phe-D-ⁱTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-hArg(Et)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NHEt,

Ac-D-hArg(Et)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Phe-NH2, Propionyl-D-hArg(Et)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys(iPr)-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-p-Nal-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Gly-hArg(Et) 2-NH2, Ac-D-Lys(iPr)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-hArg (CH2CF3) ₂-D-hArg (CH₂CF₃) 2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂, • * « · β ·· *

Ac-D-hArg (CH2CF3) 2-D-hArg (CH2CF3) ₂-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Phe-NH₂,

Ac-D-hArg (Et) 2-D-hArg (Et) 2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH₂,

Ac-Cys-Lys-Asn-4-Cl-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-tSer-D-Cys-nh₂,

Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂,

Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Phe-NH₂,

Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-p-Cl-Phe-NH2,

Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys^-Nal-NH₂,

H-D~p-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂,

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH₂,

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-3~Nal-NH₂,

H-pentafluor-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-p-Nal-Cys-pentafluor-Phe-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH₂,

H-D-£-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-3~Nal-NH₂,

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-p-Nal-NH₂,

H-D-p-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH₂,

H-D-p-Cl-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH₂,

Ac-D-p-Cl-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH₂,

H-D-Phe-Cys-p-Nal-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-Nth,

H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Cys-Thr-NH₂, cyklo(Pro-Phe-D-Trp-N-Me-Lys-Thr-Phe), cyklo(Pro-Éhe-D-Trp-Lys-N-Me-Thr-Phe), cyklo(Pro-Phe-D-Trp-Lys-Thr-N-Me-Phe) , cyklo(N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe), cyklo(Pro-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe), cyklo(Pro-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe), cyklo(Pro-Phe-L-Trp-Lys-Thr-Phe), cyklo(Pro-Phe-D-Trp(F)-Lys-Thr-Phe), cyklo(Pro-Phe-Trp(F)-Lys-Thr-Phe) , cyklo(Pro-Phe-D-Trp-Lys-Ser-Phe) , cyklo(Pro-Phe-D-Trp-Lys-Thr-p-Cl-Phe), • · · · · · cyklo(D-Ala-N-Me-D-Phe-D-Thr-D-Lys-Trp-D-Phe), cyklo(D-Ala-N-Me-D-Phe-D-Val-Lys-D-Trp-D-Phe) , cyklo(D-Ala-N-Me-D-Phe-D-Thr-Lys-D-Trp-D-Phe) , cyklo(D-Ala-N-Me-D-Phe-D-Thr-Lys-D-Trp-D-Phe) , cyklo(D-Abu-N-Me-D-Phe-D-Val-Lys-D-Trp-D-Tyr), cyklo(Pro-Tyr-D-Trp-t-4-AchxAla-Thr-Phe), cyklo(Pro-Phe-D-Trp-t-4-AchxAla-Thr-Phe), cyklo(N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe), cyklo(N-Me-Ala-Tyr-D~Trp-t-4-AchxAla-Thr-Pfre), cyklo(Pro-Tyr-D-Trp-4-Amphe-Thr-Phe), cyŘlo(Pro-Phe-D-Trp-4-Amphe-Thr-Phe), cyklo(N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-4-Amphe-Thr-Phe) , cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phé-Gaba-Gaba), cyklo(Asn-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-NH(CH2) 4CO) , cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe~3-Ala), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-D-Glu)-OH, cyklo(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe) , cyklo(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gly), cyklo(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba) , cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gly), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp(F)-Lys-Thr-Phe-Gaba), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp (NO2)-Lys-Thr-Phe-Gaha), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp(Br)-Lys-Thr-Phe-Gaba), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe(I)-Gaba), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Tyr(But)-Gaba), cyklo(Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Pro-Cys)-OH, cyklo(Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Pro-Cys)-OH, cyklo(Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Tpo-Cys)-OH, cyklo(Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-MeLeu-Cys)-OH, cyklo(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-Gaba) , cyklo(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-D-Phe-Gaba) ,

42 ·..· :

cyklo(Phe-Phe-D-Trp(5F)-Lys-Thr-Phe-Phe-Gaba), cyklo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys(Ac)-Thr-Phe-NH-(CH2) 3-CO) , cyklo(Lys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba), cyklo(Lys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba), cyklo(Orn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba), a H-Cys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys-NH2, ve které disulfidová vazba existuje v té sloučenině, která obsahuje dva zbytky Cys a kde aminový dusík z každé amidové vazby peptidů a aminoskupiny z N-konce aminokyseliny je popřípadě substituován methylovou skupinou, za předpokladu, že ve sloučenině existuje nejméně jedna uvedená methylová skupina.

26. Sloučenina podle obecného vzorce (II)

Ri \

A^-A^D-Tip-Lys-A/V-A⁸-!^ (II) /

R₂ ve kterém

A¹ je D— nebo L- isomer Ala, Leu, Ile, Val, Nle, Thr, Ser, β-Nal, β-Pal, Trp, Phe, 2,4-dichlor-Phe, pentafluor-Phe, p-X-Phe nebó o-X-Phe, ve kterém X je CH3, Cl, Br, F, OH, OCH3 nebo N0₂,

A² je Ala, Leu, Ile, Val, Nle, Phe, β-Nal, pyridyl-Ala, Trp,

2,4-dichlor-Phe, pentafluor-Phe, o-X-Phe nebo p-X~Phe, ve kterém X je CH₃, Cl, Br, F, OH, OCH₃ nebo N0₂, ♦· ····

A³ je pyridyl-Ala, Trp, Phe, β-Nal, 2,4-dichlor-Phe, pentafluor-Phe, o-X-Phe nebo p-X-Phe, ve kterém X je CH3, Cl, Br, F, OH, OCH3 nebo N0₂,

A⁶ je Val, Ala, Leu, Ile, Nle, Thr, Abu nebo Ser,

A⁷ je Ala, Leu, Ile, Val, Nle, Phe, β-Nal, pyridyl-Ala, Trp,

2,4-dichlor-Phe, pentafluor-Phe, o-X-Phe nebo p-X-Phe, ve kterém X je CH₃, Cl, Br, F, OH, OCH3 nebo N0₂,

A⁸ je D- nebo L-isomer Ala, Leu, Ile, Val, Nle, Thr, Ser, Phe, β-Nal, pyridyl-Ala, Trp, 2,4-dichlor-Phe, pentafluor— -Phe, o-X-Phe nebo p-X-Phe, ve kterém X je CH3, Cl, Br, F, OH, OCH3 nebo NO2, každý Ri a R₂ je nezávisle H, nižší acyl nebo nižší alkyl, a R3 je OH nebo NH₂, za předpokladu, že nejméně jeden z A¹ a A⁸ a jeden z A a A musí být aromatickou aminokyselinou, a dále 12 7 8 za předpokladu, že A , A , A a A nemohou všichni být aromatickými aminokyselinami, ve kterém aminový dusík každé z amidové vazby peptidu je popřípadě substituován methylovou skupinou za předpokladu, že ve sloučenině obecného vzorce (II) existuje nejméně jedna methylová skupina.

27. Sloučenina podle nároku 26, ve kterém je uvedená sloučenina vybrána ze skupiny, která se skládá z:

H-D-Phe-p-chlor-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH₂,

H-D-Phe-p-NO₂-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH₂,

H-D-Nal-p-chlor-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH₂, ·· φφφφ

H~D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2,

H-D-Phe-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH₂,

H-D-Phe-p-chlor-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH₂, a

H-D-Phe-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Ala-p-D-Nal-NH₂, ve které aminová skupina každé z amidových vazeb peptidů a N—konce aminokyseliny je popřípadě substituovaná methylovou skupinou za předpokladu, že ve sloučenině existuje nejméně jedna taková methylová skupina.

28. Sloučenina vzorce

HO(CH2)2-N^^\-(CH2)-CO-D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2 nebo

HO(CH2)2-I^^N-(CH₂)2-SO₂-D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2 ve kterém aminový dusík z každé z amidových vazeb peptidů a aminové skupiny sulfonamidové vazby je popřípadě substituován methylovou skupinou za předpokladu, že ve sloučenině existuje nejméně jedna taková methylová skupina.

29. Způsob vázání jednoho nebo více z receptorů lidského somatostatinu podtypu -1, -2, -3, -4 a -5, vyznačující se t í m, že zahrnuje krok při kterém se podává sloučenina podle nároku 1 nebo nároku 24 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl příjemci, který to potřebuje.

• » · · i j . · · ♦ ··· * ϊ*·· » ·· · ··» · ·* ·

30. Způsob vázání jednoho nebo více z receptorů lidského somatostatinu podtypu -1, -2, -3, -4 a -5, vyznačující se fc x m, že zahrnuje krok při kterém se podává sloučenina podle nároku 25 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl příjemci, který to potřebuje.

31. Způsob vázání jednoho nebo více z receptorů lidského somatostatinu podtypu -1, -2, -3, -4 a -5, vyznačující se fc x m, že zahrnuje krok při kterém se podává sloučenina podle nároku 26 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl příjemci, který to potřebuje.

32. Způsob vázání jednoho nebo více z receptorů lidského somatostatinu podtypu -1, -2, -3, -4 a -5, vyznačující 3 e fc x m, že zahrnuje krok při kterém se podává sloučenina podle nároku 27 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl příjemci, který to potřebuje.

33. Způsob vázání jednoho nebo více z receptorů lidského somatostatinu podtypu -1, -2, -3, -4 a -5, vyznačující se t x m, že zahrnuje krok při kterém se podává sloučenina podle nároku 28 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl příjemci, který to potřebuje.

34. Způsob vyvolání agonistického působení vůči somatostatinu, vyznačující se tím, že zahrnuje krok při kterém se podává účinné množství sloučeniny podle nároku 1 nebo podle nároku 24 nebo její farmaceuticky přijatelné soli pacientovi, který to potřebuje.

35. Způsob vyvolání agonistického působení vůči somatostatinu, vyznačující se tím, že zahrnuje krok při φφφ • · · ·· · ·· ···· • · · • φ φ • · φ φ • · φ φ φφ φφ kterém se podává účinné množství sloučeniny podle nároku 25 nebo její farmaceuticky přijatelné soli pacientovi, který to potřebuj e.

36. Způsob vyvolání agonistického působení vůči somatostatinu, vyznačující se tím, že zahrnuje krok při kterém -se podává účinné množství sloučeniny podle nároku 26 nebo její farmaceuticky přijatelné soli pacientovi, který to potřebuj e.

37. Způsob vyvolání agonistického působení vůči somatostatinu, vyznačující se tím, že zahrnuje krok při kterém se podává účinné množství sloučeniny podle nároku 27 nebo její farmaceuticky přijatelné soli pacientovi, který to potřebuj e.

38. Způsob vyvolání agonistického působení vůči somatostatinu, vyznačující se tím, že zahrnuje krok při kterém se podává účinné množství sloučeniny podle nároku 28 nebo její farmaceuticky přijatelné soli pacientovi, který to potřebuj e.

39. Způsob léčení nemoci nebo stavu v člověku nebo jiném živočichovi, který to pořebuje, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání sloučeniny podle nároku 1 nebo nároku 24 nebo její farmaceuticky přijatelné soli uvedenému savci, přičemž uvedená nemoc nebo stav je vybrán ze skupiny, která se skládá z Cushingovy nemoci, gonadotropinomie, hyperparatyreidismu, Pagetovy nemoci, VlPomie, nesidioblastomie, hyperinzulinismu, gastrinomie, nemoci Zollinger-Ellison, hypersekreční diarhei spojené s AIDS a jiných stavů, dráždivého onemocnění střev, pankreatitidy,

Crohnovy nemoci, systémové sklerózy, rakoviny štítné žlázy, ·· ···· ·· ···· • · · • · · • · · * • · · * ·· ·· psoriázy, hypotenze, záchvatů úzkosti, skleredému, malé střevní obstrukce, gastroesofagálního refluxu, duodenogastrického refluxu, Gravesovy nemoci, polycystického onemocnění vaječníků, krvácení z horního gastrointestinálního traktu, pankreatických nepravých cyst, pankreatické ascites, leukemie, meningiomu, rakovinné kachexie, akromegalie, restenózy, hepatomu, rakoviny plic, melanomu, inhibice zrychleného růstu pevného nádoru, snižování tělesné hmotnosti, léčení insulinové resistence, syndromu X, prodlogžení přežívání pakreatických buněk, fibrózy, hyperlipidemie, hyperamylinemie, hyperprolaktinemie a prolaktinomie.

40. Způsob léčení nemoci nebo stavu v člověku nebo jiném živočichovi, který to pořebuje, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání sloučeniny podle nároku 25 nebo její farmaceuticky přijatelné soli uvedenému savci, přičemž uvedená nemoc nebo stav je vybrán ze skupiny, která se skládá z Cushingovy nemoci, gonadotropinomie, hyperparatyreidismu, Pagetovy nemoci, VlPomie, nesidioblastomie, hyperinzulinismu, gastrinomie, nemoci Zollinger-Ellison, hypersekreqní diarhei spojené s AIDS a jiných stavů, dráždivého onemocnění střev, pankreatitidy, Crohnovy nemoci, systémové sklerózy, rakoviny štítné žlázy, psoriázy, hypotenze, skleredému, malé střevní obstrukce, refluxu, duodenogastrického refluxu, polycystického onemocnění vaječníků, gastrointestinálního traktu, pankreatických nepravých cyst, pankreatické ascites, leukemie, meningiomu, rakovinné kachexie, akromegalie, restenózy, hepatomu, rakoviny plic, melanomu, inhibice zrychleného růstu pevného nádoru, snižování tělesné hmotnosti, léčení insulinové resistence, syndromu X, prodloužení přežívání pakreatických buněk, fibrózy, záchvatů úzkosti, gastroesofagálního

Gravesovy nemoci, krvácení z horního ·» ···· • · hyperlipidemie, prolaktinomie.

hyperamylinemie, hyperprolaktinemie a

41. Způsob léčeni nemoci nebo stavu v člověku nebo jiném živočichovi, který to pořebuje, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání sloučeniny podle nároku 25 nebo její farmaceuticky přijatelné soli uvedenému savci, přičemž uvedená nemoc nebo stav je vybrán ze skupiny, která se skládá z Cushingovy nemoci, gonadotropinomie, hyperparatyreidismu, Pagetovy nemoci, VlPomie, nesidioblastomie, hyperinzulinismu, gastrinomie, nemoci Zollinger-Ellison, hypersekreční diarhei spojené s AIDS a jiných stavů, dráždivého onemocnění střev, pankreatitidy, Crohnovy nemoci, systémové sklerózy, rakoviny štítné žlázy, psoriázy, hypotenze, skleredému, malé střevní obstrukce, refluxu, duodenogastrického refluxu, polycystického onemocnění vaječníku, gastrointestinálního traktu, pankreatických nepravých cyst, pankreatické ascites, leukemie, meningiomu, rakovinné kachexie, akromegalie, restenózy, hepatomu, rakoviny plic, melanomů, inhibice zrychleného růstu pevného nádoru, snižování tělesné hmotnosti, léčení insulinové resistenče, syndromu X, prodloužení přežívání pakreatických buněk, fibrózy, hyperlipidemie, hyperamylinemie, hyperprolaktinemie a prolaktinomie.

záchvatů úzkosti, gastroesofagálního

Gravesovy nemoci, krvácení z horního

42. Způsob léčení nemoci nebo stavu v člověku nebo jiném živočichovi, který to pořebuje, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání sloučeniny podle nároku 25 nebo její farmaceuticky přijatelné soli uvedenému savci, přičemž uvedená nemoc nebo stav je vybrán ze skupiny, která se skládá z Cushingovy nemoci, gonadotropinomie, hyperparatyreidismu, Pagetovy nemoci, VlPomie, nesidioblastomie, hyperinzulinismu, •9 ···9 gastrinomie, nemoci Zollinger-Ellison, hypersekreční diarhei spojené s AIDS a jiných stavů, dráždivého onemocnění střev, pankreatitidy, Crohnovy nemoci, systémové sklerózy, rakoviny štítné žlázy, psoriázy, hypotenze, záchvatů úzkosti, skleredému, malé střevní refluxu, duodenogastrického polycystického onemocnění obstrukce, refluxu, vaječníku, gastroesofagálního Gravesovy nemoci, krvácení z horního gastrointestinálního traktu, pankreatických nepravých cyst, pankreatické ascites, leukemie, meningiomu, rakovinné kachexie, akromegalie, restenózy, hepatomu, rakoviny plic, melanomu, gnhibice zrychleného růstu pevného nádoru, snižování tělesné hmotnosti, léčení insulinové resistence, syndromu X, prodloužení přežívání pakreatických buněk, fibrózy, hyperlipidémie, hyperamylinemie, hyperprolaktinemie a prolaktinomie.

43. Způsob léčení nemoci nebo stavu v člověku nebo jiném živočichovi, který to pořebuje, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání sloučeniny podle nároku 25 nebo její farmaceuticky přijatelné soli uvedenému savci, přičemž uvedená nemoc nebo stav je vybrán ze skupiny, která se skládá z Cushingovy nemoci, gonadotropinomie, hyperparatyreidismu, Pagetovy nemoci, VlPomie, nesidioblastomie, hyperinzulinismu, gastrinomie, nemoci Zollinger-Ellison, hypersekreční diarhei spojené s AIDS a jiných stavů, dráždivého onemocnění střev, pankreatitidy, Crohnovy nemoci, systémové sklerózy, rakoviny štítné žlázy, psoriázy, hypotenze, obstrukce, refluxu, vaj ečníku, záčhvatů úzkosti, gastroesofagálního

Gravesovy nemoci, krvácení z horního skleredému, malé střevní refluxu, duodenogastrického polycystického onemocnění gastrointestinálního traktu, pankreatických nepravých cyst, pankreatické ascites, leukemie, meningiomu, rakovinné kachexie, akromegalie, restenózy, hepatomu, rakoviny plic, *· ···· • · · • · · · • · · · ·· ·· melanomu, inhibice zrychleného růstu pevného nádoru, snižování tělesné hmotnosti, léčení insulinové resistence, syndromu X, prodloužení přežívání pakreatických buněk, fibrózy, hyperlipidemie, hyperamylinemie, hyperprolaktinemie a prolaktinomie.