CZ20023275A3 - Způsob stanovení profilu genové regulace Ginkgo biloba extraktu nebo jeho složek - Google Patents
Způsob stanovení profilu genové regulace Ginkgo biloba extraktu nebo jeho složek Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20023275A3 CZ20023275A3 CZ20023275A CZ20023275A CZ20023275A3 CZ 20023275 A3 CZ20023275 A3 CZ 20023275A3 CZ 20023275 A CZ20023275 A CZ 20023275A CZ 20023275 A CZ20023275 A CZ 20023275A CZ 20023275 A3 CZ20023275 A3 CZ 20023275A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- cdna
- treated
- untreated
- ginkgo biloba
- cells
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6834—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase
- C12Q1/6837—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase using probe arrays or probe chips
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6809—Methods for determination or identification of nucleic acids involving differential detection
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Oblast techniky
Předložený vynález se týká způsobů pro stanovení pravosti Gingo biloba listů nebo izolovaného ginkgolidu B (GKB), složek extraktu z Ginkgo biloba listů získáním „profdu genové regulace“. Vynález se také týká způsobů pro kontrolní identifikaci Ginkgo biloba extraktu srovnáním profilu genové regulace Ginkgo biloba extraktu neznámého nebo diskutabilního původu s profilem genové regulace Ginkgo bilola extraktu známého původu. Termín „známý původ“ se odvolává na komerční zdroje extraktu. Vhodným aspektem předloženého vynálezu je, kde je Ginkgo biloba extrakt známého původu EGB 761 produkovaný a značený IPSEN v Paříži a ve Francii. Tento vynález se zvláště týká způsobů určujících pravost extraktu neznámého původu vydávaného za EGB 761. Předložený vynález se dále týká způsobů stanovení profilu genové exprese ginkgolidu A, ginkgolidu B nebo jakékoli jiné složky izolované z Ginkgo biloba extraktu, zejména z EGB 761.
Dosavadní stav techniky
Farmaceutické zpracování je založeno na kontrole profilu biologické aktivity přes složení a konzistenci zpracované vsádky. Tato standartizace a kontrola poskytují reprodukovatelný materiál v předvídatelném a důsledném léčení pacientů. Standartizace a kontrola chránící proti obchodování s padělanými extrakty vydávanými za EGB 761 je prospěšná pro pacienty tím, že ujišťuje pacienty, že získali nebo obdrželi extrakt s příslušným biologickým profilem.
Ginkgo biloba je jednou ze starobylých rostlin a extrakty z jeho listů jsou využívány v tradiční medicíně po několik stovek let. Mnoho studií popisuje prospěšné efekty Ginkgo biloba extraktů na pacienty s poruchami spánku, paměti, poznávacích funkcí spojených se stárnutím a senilitou, a se všemi typy demence, náladovosti a schopnostmi vyrovnat se s denními stresy. Standartizovaný extrakt z listů Ginkgo biloba nazvaný EGB 761 byl použit v mnoha z těchto studií. Tento extrakt je také známý tím, že působí jako ochrana srdce (DeFeudis F.V. Ginkgo biloba extrakt (EGF 761): From chemistry to clinic. Ullstein Medical, Wisbaden, Germany. 400 pp. 1998; Tosaki, A., Droy-Lefaix, M.T., Pali, T., and Das, D.K., Free Rad. Biol. Med., 14: 361 370, 1993). Tyto efekty byly aspoň zčásti přisuzovány očišťovacím vlastnostem EGF 761 od volných radikálů, pravděpodobně kvůli přítomnosti flavonoidových a terpenoidových složek v extraktu. Dřívější in vivo a in vitro studie demonstrují, že terpenové složky EGB 761, ginkgolidy a bilobalidy mají antioxidační vlastnosti (Pietri, S., Maurelli, E., Drieu, K., and t « ««·· • flfl » · • « < · « fl « • a · « · • · · ' ♦ ♦ r ···« · »·· ♦·· ·· ····
Culcasi, M., J. Mol. Cell. Cardiol., 29: 733-742, 1997; Yao, Z., Boujrad, N., Drieu, K., and Papadopoulos, V., Adv. Ginkgo Biloba Res. 7: 129-138, 1998). Jiné studie EGB 761 mají popisovat medicinální množství produktu pro léčení různých klinických poruch zahrnujících choroby mozkových a periferních cév souvisejících s věkem a senilitou. Viz například Ginkgo biloba Extrakt (EGB 761) Pharmacological Activities and Clinical Applications, DeFeudis, F.V., Eds, Elsevier, 1991; and Ullstein Medical 1998, Ginkgo biloba extrakt (EGB 761), Eds. Wiesbaden, DeFeudis, F.V. Extrakt obsahuje 24 % ginkgo-flavonových glykosidů, 6 % terpenových laktonů (ginkgolidy a bilobalid), asi 7 % proanthocyanidů a několik jiných složek. Viz Boralle, N., et al.: Ginkgolides, Chemistry, Biology, Pharmacology and Clinical perspectives, Ed: Braquet, P., J.R. Prous Science Publishers, 1988.
Častěji jsou dány do oběhu padělané prostředky vydávané za EGB 761. Takové padělky neobsahují stejnou skladbu složek, která je podstatou pravého EGB 761. Pacienti, kteří obdrží padělaný EGB 761 s vírou, že padělek je pravý, jsou připraveny o prospěšnost EGB 761 s plnou biologickou aktivitou. Dále je narušena pověst EGB 761. Proto je potřeba způsobu pro stanovení profilu biologické aktivity padělaného EGB 761 pro prověření takových padělků na trhu.
Podstata vynálezu
Předložený vynález se týká způsobu stanovení profilu genové regulace Gingko biloba extraktu nebo složky Ginkgo biloba extraktu, který zahrnuje kroky:
Získání aspoň jedné vsádky neošetřených buněk;
ošetření první vsádky buněk Ginkgo biloba extraktem nebo složkami Ginkgo biloba extraktu ke získání ošetřené vsádky buněk;
kvantifikace efektu na expresi jednoho nebo více genů ošetřených buněk ke získání kvantity afektovaných genů; a srovnání kvantity afektovaných genů s kvantitou buněk neošetřených Ginkgo bilobou nebo složkou Ginkgo biloba extraktu ke získání profilu genové regulace Ginkgo biloba extraktu nebo složek Ginkgo biloba extraktu.
Vhodným způsobem z předchozích způsobů je kvantifikační krok zahrnující:
Izolaci póly A+RNA z ošetřené vsádky buněk ke získání ošetřené póly A+RNA;
Izolaci póly A+RNA z vsádky neošetřených buněk ke získání neošetřené póly A+RNA;
Příprava značených cDNA sond z ošetřené póly A+RNA ke získání ošetřených značených cDNA sond;
hybridizace ošetřených cDNA sond ke skupině mající jednu nebo více cDNA ke získání ošetřené hybridizující skupiny cDNA;
» · · · · · hybridizace neošetřených cDNA sond ke skupině mající jednu nebo více cDNA ke získání neošetřené hybridizující skupiny cDNA;
kvantifikace každé cDNA ošetřené hybridizující skupiny cDNA ke získání množství ošetřené cDNA;
kvantifikace každé cDNA neošetřené hybridizující skupiny cDNA ke získání množství neošetřené cDNA; a srovnání množství každé ošetřené cDNA s množstvím neošetřené cDNA ke získání profilu genové regulace.
Vhodným bezprostředně předcházejícím způsobem je způsob kde jsou použity buňky MDA-231, Ginkgo biloba extraktem je EGB 761; skupinou je genový čip s četnými geny.
Vhodným bezprostředně předcházejícím způsobem je způsob, kde profil genové regulace EGB 761 srovnává zvýšenou expresi c-Myc protoonkogenu a snížení exprese následujících genů: prothymosin-α, CDK2, p55CDC, myeloblastin pl20 bující antigen buněčného jádra, NET1, ERK2, adenosinový A2A receptor, Flt3 ligand, Grb2, Clusterin, RXR-β, Glutathion Stransferasa P, N-Myc, TRADD, SGP-2, NIP-1, Id-2, ATF-4, ETR101, ETR103, stimulační faktor makrofágové kolonie 1, heparin vazný růstový faktor podobný EGF, proteinu podobný hepatocytový růstový faktor, inhibin a, CD19 B-lymfocytový antigen, LI CAM, β-catenin, podjednotka integrinu a3, podjednotka integrinu a4, podjednotka integrinu a6, podjednotka integrinu β5, podjednotka integrinu aM, APC, PE-1, RhoA, c-Jun, prothymosin-α, CDK2, p55CDC a myeloblastin.
Vhodným bezprostředně předcházejícím způsobem je způsob kde je profil genové regulace EGB761 je asi c-Myc=+75 %, c-Jun=-78 %, RhoA=-93 %, APC=-59 %, PE-1 =-42 %, prothymosin-a=-79 %, Myeloblastin=-66% p55CDC=-63 %, pl20 bující antigen buněčného jádra=-68 %, CDK2=-83 %, NETl=-55 %, ERK2=-46 %, Adenosinový receptor A2A=-40 %, Flt3 ligand=-58 %, Grb2=-70 %, Klusterin=-54 %, RXR- β=-5 5 %, Glutathion S-transferasa P=39 %, N-Myc=-74 %, TRADD=-51 %, NIP-l=-40 %, Id-2=-65 %, ATF-4=-42 %, ETR103=-65 %, ETR101=-60 %, CD19 B-lymfocytový antigen=-62 %, LlCAM=-72 %, βΑ3ίεηϊη=-58 %, podjednotka integrinu aM=-41 %, podjednotka integrinu β5=-55 %, podjednotka integrinu a4=49 %, podjednotka integrinu a3=-77 %, podjednotka integrinu a6=-53 %, stimulační faktor makrofágové kolonie 1 (CSF-1)=-31 %, heparin vazný EGF podobný růstový faktor (HBEGF)=-62 %, proteinu podobný hepatocytový růstový faktor (HGFLP)=-81 %, a inhibin a=-69 %, kde uvedená procenta mohou být ±20 %.
• · · · • ·· ·· • · · · · • · · * • · · · · • · · · ··· ··· ·· ····
Vhodným bezprostředně předcházejícím způsobem je způsob kde buňky jsou MDA-231 buňky, složkou Ginkgo biloba extraktu je ginkgolidu B; a skupinou je genový čip s četnými geny.
V jiném aspektu poskytuje předložený vynález způsob kontroly identity Ginkgo biloba extraktu, která porovnává kroky:
získání profilu genové regulace Ginkgo biloba extraktu ke získání profilu genové regulace;
získání profilu genové regulace EGB 761 ke získání profilu EGB 761 genové regulace; srovnání profilu genové regulace Ginkgo biloba extraktu s regulačním profilem genu
EGB761.
určení zda hodnoty profilu genové regulace Ginkgo biloba extraktu jsou ±10 % hodnot EGB 761 profilu genové regulace ke získání důkazu identity Ginkgo biloba extraktu.
Vhodným bezprostředně předcházejícím způsobem je způsob získání profilu genové regulace Ginkgo biloba extraktu a profilu EGB 761 genové regulace srovnávající kroky:
izolace póly A±RNA z ošetřené vsádky buněk ke získání ošetřené póly A+RNA; izolace póly A+RNA z vsádky neošetřených buněk ke získání neošetřené póly A+RNA; tvorba značených cDNA sond z ošetřené póly A+RNA ke získání ošetřených značených cDNA sond;
tvorba značených cDNA sond z neošetřené póly A+RNA ke získání neošetřených značených cDNA sond;
hybridizace ošetřené cDNA sondy ke skupině jedné nebo více cDNA ke získání ošetřené hybridizující skupiny cDNA;
hybridizace neošetřené cDNA sondy ke skupině jedné nebo více cDNA ke získání neošetřené hybridizující skupiny cDNA;
kvantifikace každé cDNA ošetřené hybridizující skupiny cDNA ke získání množství ošetřené cDNA;
kvantifikace každé cDNA neošetřené hybridizující skupiny cDNA ke získání množství neošetřené cDNA; a srovnání množství každé ošetřené cDNA s množstvím neošetřené cDNA ke získání profilu genové regulace.
Detailní popis vynálezu
Pojem „ginkgo terpenoid“ zahrnuje všechny přírodně získané terpeny, které jsou odvozeny z nahosemenné rostliny Ginkgo biloba, stejně tak synteticky produkované ginkgové • · terpenoidy a farmaceuticky aktivní deriváty a jejich soli a jejich směsi. Příklady ginkgových terprenoidů jsou popsány v Ginkgolides, Chemistry, Bilogy, Pharmacoligy, a Clinial Perspectives, J.R. Provs. Science Publishers, Edited by P. Brauet (1988); F.V. DeFeudis, Ginkgo Biloba Extract (EGB-761); Pharmacological Activities and Clinical Applications, Elsevier, Chapter Π (1991).
Pojem „ginkgolide“ jak se zde používá zahrnuje různé ginkgolidy popsané v knihách výše popsaných, stejně tak jejich netoxické farmaceuticky aktivní deriváty, acetyl deriváty a alkyl estery jako monoacetátové deriváty a triacetátové deriváty zahrnující tetrahydroderivýty, acetylderiváty, a alkylestery jako monoacetátové deriváty a triacetátové deriváty popsané v Okabe, et al., J. Chem. Soc. ©, pp. 2201-2206 (1967). Zde použitý Ginkgolid B následujícího obecného vzorce odpovídá izolovanému ginkgolidu B:
Pojem „Gingo biloba extrakt“ jak je zde použit zahrnuje sbírku přírodních molekul zahrnující terpenoidy z listů stromu Ginkgo biloba. Vhodný je extrakt specifického prostředku Ginkgo biloba extraktu jako EGB 761.
Profil genová exprese extraktu Ginkgo biloba nebo jeho složek může být získán metodami známými v technice. Tradičně byly takové profily získány RNA Nothem blot analýzami nebo zkouškou ochrany proti ribonukleasám pro každý individuální genový produkt, Avšak tyto analýzy byly náročné na čas a trvaly asi 2 až 3 dny pro analýzu každého genu. Nyní může být profil genové exprese získán využitím technologie nukleokyselinové skupiny jako je Atlas human cDNA expression array I z Clontech (Palo Alto, CA); GeneFilters Microarrays by Research Genetics (Huntsville, AL); a Gene Expression Microarrays by Genome Systems, lne. (St. Louis, MO). GeneFilters Microarray jsou skupiny DNA s vysokou hustotou produkované na 5 cm x 7 cm membránách. V současnosti jsou dostupné čtyři membrány pro lidské geny a jedna pro krysí geny. Každá membrána obsahuje asi 5 000 sekvencí. Některé z těchto sekvencí jsou známé geny, zatímco většina reprezentuje EST neznámé funkce. Research Genetics bude brzy vyrábět dostupné genové skupiny na bázi affymetrixového genového čipu, kde jsou geny imobilizovány na silikonové čipy, výsledky hybridizace (s vybranou mRNA) jsou fluorescenčně detekovány a analyzovány podle rozpoznávacího vzoru ve srovnání s fluorescencí a • · · · radioaktivitou, které mohou být použity pro detekci výsledků hybridizace v membránových skupinách.
Způsob genomového systému využívá GEM technologii, kde soubor komplementárních DNA (cDNA) molekul, které obsahují genetickou informaci z užitečných biologických systémů, jsou uloženy a navázány na skleněný povrch ve skupinovém uspořádání. Dále, velké části z jedné poloviny dvouřetězcové DNA jsou odstraněny, a tak se aktivují jednotlivé části skupiny a připravují se na reakci s jejich unikátním párovacím DNA protějškem v testovaných buňkách. GEM technologie může použít 10 000 unikátních genů v jedné skupině. GEM technologie také používá barevně kódované techniky ke zkoušce odlišnosti v expresi mezi dvěma mRNA vzorky.
Skupina cDNA obsahuje mnoho zvířat jako je krysa nebo člověk, výhodně člověk, jsou vyvinuty PCR amplifíkované cDNA fragmenty imobilizovány na positivně nabitých nylonových membránách, skleněných sklíčkách, silikonových čipech nebo jiných površích, kde je brána v úvahu interakce DNA/matrice. Buněčné typy, které jsou předmětem zájmu, jsou ošetřeny s a bez extraktu Ginkgo biloby nebo jeho složkou na 48 h. Póly A+RNA je izolována z kontrolních a extraktem ošetřených buněk. Když jsou použity skleněné nebo silikonové čipové skupiny, jsou tvořeny z každé póly A+RNA a hybridizovány k skupině podle pokynů výrobce 32P-značenými, fluorescentními, chemiluminiscentními nebo kolorimetrickými cDNA sondami, zejména fluorescentně a kolorimetricky znčenými. Autoradiografie je provedena expozicí blotu na fdm při asi -70 °C na 4 až 96 h. Kvantifikace hybridizace je provedena použitím zobrazovacího systému jako SigmaGel software, který může detekovat fluorescenci nebo chemiluminiscenci a pak zachytit obraz a analyzovat data. Několikanásobné expozice jsou použity pro detekci genů exprimovaných v nízkých hladinách. Tři interní kontroly, ubiquitin, G3PDH a β-aktin jsou použity pro srovnání relativní expresní hladiny detekčních genových produktů v kontrole extraktem ošetřených buněk. Experimentální odlišnosti jsou přepočteny použitím poměrů genové exprese ku interním kontrolám. Efekt ošetření extraktem každého genového produktu je vyjádřen jako % kontroly (neošetřených) buněk.
Příklady provedení vynálezu
Příklady předcházejících typů profilu genové exprese jsou následující.
Atlas human cDNA expression array I, Clontech (Palo Alto, CA) obsahuje 588 lidských PCR-amplifikovaných cDNA fragmentů délky 200 až 500 bp imobilizovaných na positivně nabitou nylonovou membránu. MDA-231 buňky byly ošetřeny s a bez 20 pg/ml EGB761 na 48 hodin. Póly A+RNA byly izolovány z kontroly a EGB 761 ošetřených buněk. 32P-značené cDNA sondy byly vytvořeny z každé póly A+RNA a hybridizovány k Atlas array podle pokynů • ·
výrobce. Autoradiografie byla provedena expozicí blotů na X-OMAT AR film (Kodak, Rochester, NY) při -70°C na 4 až 96 h. Kvantifikace hybridizace byla provedena použitím SigmaGel softwaru (Jandel Scientific, San Rafael, CA). Četné expozice byly použity za účelem detekce genů exprimovaných v nízkých hladinách. Tři interní kontroly, ubiquitin, G3PDH a βaktin byly použity pro srovnání relativních expresních hladin detekovaných genových produktů v kontrolních a EGB 761 ošetřených buňkách. Experimentální rozdíly byly přepočteny použitím poměru genové exprese k interním kontrolám. Efekt EGB 761 ošetření na každý genový produkt je vyjádřen jako % kontroly (neošetřených) buněk. Výsledky tohoto experimentu, jsou presentovány v tabulce I, uvedené geny o hladině okolo 30 % kontroly, a byly důsledně ošetřené EGB 761. V souhrnu tabulka I uvádí, že ošetření zvyšuje expresi c-Myc protoonkogenu a snižuje expresi 35 genových produktů zahrnujících onkogeny (AP-1, PE-1, RhoA, n-Myc), regulátory buněčného cyklu (CDK2, p55CDC, PCNA pl20), signální transdukční modulátory (NET1, ERK2), produkty související sapoptosou (SGP-2, ΝΓΡ1) receptory (A2A, RXR-beta, Grb2), transkripční faktory (Id-2, ATF-4, ETR101, ETR-103), růstové faktory (ΗΒ-EGF, HGFpodobné), a moduly buněčné adhese (CD 19, LI CAM, integriny a3, a4, a5, Mac-1, β-katenin) které jsou přímo obsaženy v různých drahách regulujících buněčné bujení.
Profily genové exprese mohou být stanoveny pro Ginkgo biloba extrakty známého původu a pak mohou být srovnány s profilem genové exprese Ginkgo biloba extraktů neznámého původu nebo extraktů, které obsahují jistý komerční extrakt. Srovnání profilů může být použito jako způsoby prověření původu extraktu.
Tabulka 1: Efekt EGB 761 na MDA-231 genovou expresi testovaný použitím Atlas human cDNA expression arrayjak je popsáno pro nukleokyselinové skupiny.
| Název | změna % | Funkce | Literatura |
| Onkogeny a tumorové supresory | |||
| c-Myc | +75 % | - základní helix-otáčka-helix-leucinový zip traskripční faktor - Myc/Max heterodimery indukují progresi buněčného cyklu, apoptosu a malignantní transformace | (37) |
| c-Jun | -78 % | - část AP-1 traskripčního faktoru, který reguluje geny zahrnuté v buněčném | (38) |
| bujení | |||
| RhoA | -93 % | - GTP-vazný protein, který je důležitým regulátorem buněčného bujení - RhoA inaktivace inhibuje HL60 buněčné bujení | (39) (40) |
| APC | -59 % | - APC mutace jsou asociovány v dědičných a ojedinělých nádorech - negativní posttranskripční regulátor β- kateninu | (41) (42) |
| PE-1 | -42 % | - transkripční faktor | (43) |
| Proteiny kontroly buněčného cyklu | |||
| Prothymosin-a | -79 % | - kyselý nukleární protein, který je doregulovaný v bujících thymocytech, lymfocytech z pacientů s leukémii a maligních prsních leží | (44) |
| Myeloblastin | -66 % | - serinová proteasa zahrnutá do diferenciace leukemiových buněk | (45) |
| p55CDC | -63 % | - podobný mitosovým regulátorům CDC4 a CDC20 - positivně korelovaná exprese buňkami ve stádiu bujení | (46) |
| pl20 antigen jádra bující buňky | -68 % | - nukleární protein exprimovaný v bujících buňkách - prognostický indikátor prsních nádorů pacientů a adenokarcinomu prostaty | (47) (48) |
| CDK2 | -83 % | - na cyklinu závislá tyrosinová kinasa zahrnutá ve vývoji přes buněčný cyklus - cyklin E/Cdk2 inaktivuje retinoblastomový nádorový zesilovač dovolující vývoj buňky k S fázi - inhibice vitaminem D LNCaP buněčného bujení v souladu s redukcí Cdk2 aktivity | (49) (50) |
• · • · · ·
| Intracelulární transduktorv | |||
| NET1 | -55 % | - RhoA-specifícký quanin měnící faktor - NIH3T3-transformační protein | (51) |
| ERK2 | -46 % | - zástupce proteinkinasové skupiny týkající se extracelulámí ch signálů - aktivovaný při buněčné stimulaci | (52) |
| Proteiny tykaiící se apoptosy | |||
| Adenosin A2A receptor | -40 % | - G proteinový párovací receptor obsažený v cAMP signální dráze | ((53) |
| Flt3 ligand | -58 % | - ligand pro Flt3 cytokinový receptor tyrosin kinasy - indukuje bujení myelinových buněk leukemie | (54) |
| Gbr2 | -70 % | - proteinový adapter, který váže receptor tyrosin kinasy na Ras/MAPK signální dráhu přes jejich SH2 doménu | (55) |
| Klusterin | -54 % | - glykoprotein spojený s buněčnou adhezi a apoptosou - zvýšená exprese souvisí s Alzheimrovou chorobou | (56,57) (58) |
| RXR-β | -55 % | - traskripční faktor aktivovaný zánětem sliznice - inhibice chondrocytového bujení retinoovou kyselinou způsobuje redukci v RXR-β mRNA expresi | (59) (60) |
| Glutathion S-transferasa P | -39 % | - multidrogový resistenční gen, který je exprimován v různých lidských tumorech - chemická inhibice GST-P inhibuje bujení Jurkat T buněk | (61,62) (63) |
| N-Myc | -74 % | - zástupce c-myc rodiny - spojený s časným retinoblastomem | (64) |
• » · »
| TRADD | -51 % | - TNFR-asociovaný smrtící doménový protein - zahrnutý v TNFR indukovaném buněčném růstu a diferenciaci | (65) |
| NIP-1 | -40 % | - původně popsaný j ako kvasničný nukleární transkripční protein - část translačního iniciačního faktoru 3 (elF3) jaderného komplexu | (66) (67) |
| DNA-vazné/transkripČní faktory | |||
| Id-2 | -65 % | - zástupce id helix-otáčka-helix rodiny transkripčních inhibitorů - obsažený v bujení lidských pankreatických nádorových buňkách | (68) |
| ATF4 | -42 % | - zástupce ATF/CREB rodiny transkripčních faktorů - reguluje Ras indukovanou transformaci NIH3T3 buněk | (69) |
| ETR103 | -65 % | - makrofág přidružený přímo časnému genu | (70) |
| ETR101 | -60 % | - lymfocyt přidružený přímo časnému genu | (71) |
| Antigen buněčného povrchu a adhesní molekuly | |||
| CD 19 B-lymfocytový antigen | -62 % | - B-lymfocytový integrální membránový protein - exprese je doregulována během retinoidové inhibice buněčného bujení lymfoblastoidu B | (72) |
| L1CAM | -72 % | - neurální buněčná adhesní molekula - zvýšení L1 CAM exprese j e spoj ena s prvotřídní migrací glyomových buněk | (73) |
| β-katenin | -58 % | - zahrnut v kadherin způsobených buňka- buňka interakcích - interakce s TCF/LEF transkripčními | (74) |
• « · ·
| faktory ve WNT signální dráze | |||
| Integrinová podjednotka | |||
| αΜ | -41 % | - způsobuje buněčnou adhesi lidské nervové tkáně s LFA-Ιβ - a podjednotka elastasového receptorů | (75) |
| β5 | -55 % | - β podjednotce vitronektinového receptorů (VR) - zahrnuta do zástavy oligodendrocytového bujení - zahrnuta v murinové retinální angiogenesi | (76) (77) (78) |
| α4 | -49 % | - sesítěné a4 integriny inhibující bujení LB lymfatických buněk - také zahrnuty v metastázích melanomu a lymfatických buňkách | (79) (80) |
| α3 | -77 % | - funkčně porušený oc3 integrinová protilátka inhibuje lidské epitelální buněčné bujení | (81) |
| α6 | -53 % | - exprese a6 integrinu spolupracuje s ErbB2 k indukci více maligních fenotypů v NIH3T3 buňkách | (82) |
| Extracelulární signální/komunikační proteiny | |||
| Stimulační faktor makrofágové kolonie 1 (CSF-1) | -31 % | - reguluje bujení, diferenciaci a přežití monocytů, makrofágů a jejich prekursorů - iniciuje mitogenický signál, který je vyžadován v G1 fázi - CSF-1 stabilně transfektované buňky obalu vaječníků zvyšují buněčné bujení | 1 ΠΊ oo oo |
| Heparin-vazný EGF růstový faktor (HB-EGF) | -62 % | - exprimovaný v mnoha lidských gliomových buněčných liniích a ve většině glioblastomů - stimuluje bujení lidských gliomových | (85) |
• · · ·
| buněk | |||
| Protein podobný hepatocytovému růstovému faktoru (HGFLP) | -81 % | - tyrosin kinasa, transmembránový protein, je exprimována v hepatoblastomu a lidských primárních jaterní ch nádorech - indukuje bujení a migraci murinových keratinocytů | OO 00 |
| Inhibin a | -69 % | - zástupce inhibinové rodiny heterodimerických růstových faktorů - inhibin a je markér tropoblastových novotvarů a je vysoce exprimován v mužských nádorech | OO O 00 OO |
Popis obrázků na výkresech
Obrázek 1 Transkripční odpověď na EGB761 značí vliv genů zahrnutých do rozmnožování buňky. Znázorněné výsledky reprezentují kvantitativní analýzu Atlas human cDNA expression array obsahující 588 PCR-amplifikovaných cDNA fragmentů (Clontech lne.). mRNA byly získány z kontrolní EGB761 (20 pg/ml), po 48 h ošetřených MDA-231 buněk. Pro normalizaci mRNA nadbytku bylo denzitometrické množství získáno z podobných analýz, které byly normalizovány použitím interních genů poskytovaných ve skupině. Byly uvažovány pouze trvalé významné změny nad 30 %.
• · • · · · ♦ · · ·
Použitá literatura
37. Amati, B., Aleyizopoulos, K., and Vlach, J. Myc and the Cell Čyde. Frontiers in Bioscience, 3:250-268, 1998.
38. Huang, W. and Eňkson, R.L Signa! Transduction. p. 161. Chapman and Halí, 1996.
39. Hu, W., Beílone, C.J., and Baldassare, JJ. RhoA stimulates p27(Kip) degradation through íts regufation of cyclín E/CDK2 activity. J. Biol. Chem., 274: 3396-3401, 1999.
40. Aepfelbacher, M., Essier, M., Luber, D.Q., and Weber, P.C. ADP-ribosylafion of the GTP-binding protein RhoA blocks cytoplasmic division in human myelomonocytic cells. Biochem. J., 308: 853-858,1995.
41. Jeanteur, P. The role of APC in colon cancer Zeroing in on Myc. Bulletin du Cancer (France), 85: 925-928,1998.
• ♦ · · ί ί
42. Munemitsu, S., Albert, I., Souza, B„ Rubinfeld, B., and Polakis, P. Regulatíon of intracellular beta-catenin levels by the adenomatous polyposis coli (APC) tumorsuppressor protein. Proč. Nati. Acad. Sá. U.SA., 92: 3046-3050,1995.
43. Klemsz, M., Hromas, R., Raskind, W., Bruno, E., and Hoffman, R. PE-1, a novel ETS oncogene family member, localizes to chromosome 1q21-q23. Genomics, 20: 291-2943994.
44. Gomez-Marquez, J., Segade, F., Došil, M„ Pichel, J.G., Bustelo, X.R., and Freire, M. The expression of prothymosin alpha gene in T lymphocytes and leukemíc lymphoid cells is tied to lymphocyte proírferation. J. Biol. Chem., 264: 8451-8454, 1989.
45. Bories, D., Raynal, M.C., Solomon, D.H., Darzynkíewicz, Z., and Cayre, Y.E. Down-regulation of a serine protease, myeloblastin, causes growth arrest and differentiation of promyelocytic leukemia cells. Cell, 59:959-968,1989.
46. Kao, C.T., Lin, M., 0'Shea-Greenfield, A., Weinstein, J., and Sakamoto, K.M. Over-expression of p55Cdc inhibits granutocyte differentiation and accelerates apoptosis in myeloid cells. Oncogene, 13:1221-1229,1996.
47. Landberg, G. and Roos, G. The Cell Cycle in Breast Cancer. APMIS, 105: 575589, 1997.
48. Perlaky, L, Valdez, B.C., Busch, R.K., Larson, R.G., Jhiang, S.M., Zhang, W.W., Brattain, M., and Busch, H. Increased growth of NIH/3T3 cells by transfection with human p120 complementary DNA and inhibition by a p120 antísense construct Cancer Res., 52428-436,1992.
49. Zhuang, S.H. and Bumstein, K.L. Antiproliferative Effect of 1alpha,25dihydroxyvitamin D3 in Human Prostatě Cancer Cell Line LNCaP Involves Reduction of Cyclin-dependent Kinase 2 Activity and Persistent G1 Accumulation. Endocrinology, 139:1197-1207,1998.
50. Chán, A.M., Takai, S., Yamada, K, and Miki, T. Isolation of a novel oncogene, NET1, from neuroepitbeJioma cells by expression cDNA cloning. Oncogene, 12: 1259-1266, 1996.
51. Ahn, N.G. and Tolwinski, N.S. U0126: An Inhibitor of MKK/ERK Signál Transduction in Mammaiian Cells. Promega Notes, 71:4-13,1999.
52. Coppee, F., Gerard, A.C., Denef, J.F., Ledent, C., Vassart, G., Dumont, J.E., and Parmentier, M. Early occurrence of metastatic differentiated thyroid cardnomas in transgenic mice expressing the A2a adenosine receptor gene and the human papillomavirus type 16 E7 oncogene. Oncogene, 131471-1482,1996.
53. Dehmel, U., Zaborski, M„ Meierhoff, G., Rosnet, O., Bimbaum, D„ Ludwig, W.D., Quentmeier, H., and Drexler, H.G. Effects of FLT3 ligand on human leukemia cells. I. Proliferative response of myeloid leukemia cells. Leukemia, 10:261-270, 1996.
• · · ·
54. Benřto, M., Vaiverde, A.M., and Lorenzo, M. IGF-I: a mitogen also ínvoíved in differentiation processes in mammalian cells. IntJ Biochem. Cell Biol., 28: 499510,1996.
55. Chevalier.R.L. Effects of ureteral obstruction on renal growth. Semin. Nephrol., 15:353-360, 1995.
56. Truong, L.D., Sheikh-Hamad, D., Chakraborty, S., and Suta', W.N. Cell Apoptosis and Proliferation in Obstructive Uropathy. Semin. Nephrol., 18: 641-651, 1998.
57. ChoWWiura, N.H. and Oda, T. Re/ationship between multifunctionaf protein clusterin and Alzheimer disease. Neurobiol. Aging, 17:7Λ7-722,1.996.
58. Lotan, R. Retinoids and chemopreventíon of aerodigestive tract cancers. Cancer Metastasis Rev., 16: 349-356,1997.
59. Hagiwara, H., Inoue, A., Nakajo, S., Nakaya, K., Kojima, S., and Hirose, S. Jnhibition of proliferation of chondrocytes by specific receptors in response to retinoids. Biochem. Biophys. Res. Cómmun., 222.220-224,1996.
60. Campos, L, Oriol, P., Sabido, O., and Guyotat, D. Simultaneous expression of Pglycoprotein and BCL-2 in acute myetoid teukemia biast cells. Leuk. Lymphoma., 27:119-125,1997.
61. Lacave, R., Coulet, F., Ricd, S., Touboui, E., Rahault, A., Rateau, J.G., Cesari, D., Lefranc, J.P., and Bemaudin, J.F. Comparative evaluation by semiquantitative reverse transcriptase poJymerase chain reacOon of MDR1, MRP and GSTp gene expression in breast carcinomas. Br. J. Cancer, 77:694-702,1998.
62. McCaughan, F.M., Brown, A.L., and Harrison, D.J. The effect of inhibition of glutathione S-transferase P on the growth of the Jurkat human T cell line. J. Pathol., 172. 357-362,1994.
63. Kim, C.J., Chi, J.G., Choi, H.S., Shin, H.Y., Ahn, H.S., Yoo, Y.S., and Chang, K.Y. Proliferation not Apoptosis as a Prognostic Indicator in Retinoblastoma. Virchows Arch., 434:301-305,1999.
64. Newton, K., Harris, A.W., Bath, M.L, Smith, K.C., and Strasser, A. A dominant interfering mutant of FADD/MORT1 enhances deletion of autoreactive thymocytes and inhibits proliferation of mature T lymphocytes. EMBOJ., 17:706-718, 1998.
65. Gu. Z„ Moerschell, R.P., Sherman, F., and Goldfarb, D.S. NIP1, a gene required for nuclear transport in yeast Proč. Nati. Acad. Sd. U.S.A., 89: 10355-10359, 1992.
66. Phan, L, Zhang, X., Asano, K., Anderson, J., Vomlocher, H.P., Greenberg, J.R., Qin, J„ and Hinnebusch, A.G. Identification of a translation initiation factor 3 (elF3) core complex, conserved in yeast and mammals, that interacts wíth elF5. Mol. Cell Biol., 18: 4935-4946, 1998.
67. Kleeff, J., Ishiwata, T., Friess, H., Buchler, M.W., Israei, M.A., and Korc, M. The helix-loop-helix protein Id2 is overexpressed in human pancreatic cancer. Cancer Res., 58: 3769-3772,1998.
68. Mielnicki, XJVI., Hughes, R.G., Chevray, P.M., and Pruitt, S.C. Mutated Atř4 suppresses c-Ha-ras oncogene transcript ievels and celiular transformatíon in NIH3T34ibreblasts. Biochem. Biophys. Res.Commun., 228: 586-595, 1996.
69. Shimizu, N., Ohia, M., Fujiwara, C., Sagara, J„ Mochizuki, N., Oda, T., and Utiyama, H. A gene coding for a zinc finger protein is induced during 12-0tetradecanoylphorbol-13-acetate-stimulated HL-60 cell differentiation. J. Biochem. (Tokyo.), 111:272-277,1992.
70. Shimizu, N., Ohta, M., Fujiwara, C., Sagara, J., Mochizuki, N., Oda, T., and Utiyama, H. Expression of a novel immediate earty gene during 12-0tetradecanoylphorboH3-acetate-induced macrophagic differentiation of HL-60 celíš. J. Bioi. Chem., 266:12157-12161, 1991.
71. Dolcetti, R., Zancai, P., Cariati, R., and Boiocchi, M. In vitro effects of retinoids on the proliferation and differentiation features of Epstein-Barr virus-immortalized B lymphocytes. Leuk.Lymphoma, 29. 269-281,1998.
72. Tsuzuki, T., lzumoto, S., Ohnishi, T., Hiraga, S., Arita, N., and Hayakawa, T. Neural cell adhesion mdecule L1 in gliomas: correlation with TGF-beta and p53. J. Clin. Pathol., 51:13-17,1998.
73. Young, C.S., Kitamura, M., Hardy, S., and Kitajewski, J. Wnt-1 induces growth, cytosoiic beta-catenin, and Tcf/Lef transcriptional activation in Rat-1 fibroblasts. Mol .Cell Biol., 18: 2474-2485, 1998.
74. Cai, T.Q. and Wright, S.D. Human leukocyte elastase is an endogenous ligand for the integrin CR3 (CD11b/CD18, Mac-1, alpha M beta 2) and modulates polymorphonuclear leukocyte adhesion. J. Exp. Med, 184:1213-1223, 1996.
75. De Deyne, P.G., 0’Neiil, A., Resneck, W.G., Dmytrenko, G.M., Pumpiin, D.W., and Bloch, R.J. The Vitronectin Receptor Associates with Clathrin-coated Membrane Domains Via the Cytoplasmic Domain of its beta5 Subunit J. Cell Sci., 111: 2729-274Q, 1998.
76. Milner, R. and Ffrench-Constant C. A developmental analysis of oligodendroglial integrins in primary celis: changes in alpha v-associated beta subunits during differentiation. Development 120:3497-3506,1994.
77. Friedlander, M„ Theesfeld, C.L, Sugita, M., Fruttiger, M., Thomas, M.A., Chang, S., and Cheresh, D.A. Involvement of integrins alpha v beta 3 and alpha v beta 5 in ocular neovascular diseases. Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A., 93: 9764-9769, 1996.
« · · · » ·
78. Bittner, M., Gosslar, U., Luz, A., and Holzmann, B. Sequence Motífs in the Integrin alpha4 Cytopiasmic Tail Required for Reguiatíon of In Vivo Expansion of Murine Lymphoma Cells. J. Immunol., 161: 5978-5986,1998.
79. Holzmánfi/B., Gosslar, U„ and Bittner, M. alpha 4 integrins and tumor metastasis. Curr.Top. Microbiol. Immunol., 231:125-141,1998.
80. Gonzales, M., Haan, K., Baker, S.E., Fitchmun, M., Todorov, L, Weitzman, S., and Jones, J.C. A Cell Signál Pathway Involving Laminin-5, aípha3beta1 Integrin, and Mitogen-actívated Protein Kinase can ReguJate Epithelial Cell Proliferation. Mol. Biol. Cell, 16. 259-270, 1999.
81. Falcioni, R., Antoníni, A., Nistico, P., Di, S.S., Crescenzi, M., Natali, P.G., and Sacchi, A. Alpha 6 beta 4 and alpha 6 beta 1 integrins associate with ErbB-2 in human carcinoma cell lineš. Exp. Cell Res., 236: 76-85, 1997.
82. Roussel, M.F. Reguiatíon of cell cyde entry and G1 progression by CSF-1. Mol. Reprod. Dev., 46; 11-18,1997.
83. Keshava, N., Gubba, S., and Tekmaí, R.R. Overexpression of Macrophage Colony-stimulatíng Factor (CSF-1) and its Receptor, c-fms, in Normál Ovarian Granulosa Cells Leads to Cell Proliferation and Tumoňgenesis. J. Soc. Gynecol. Investíg., 6:41-49,1999.
84. Mishima, K, Higashiyama, S., Asai, A., Yamaoka, K., Nagashima, Y., Taniguchi, N., Kitanaka, C., Kirino, T., and Kuchino, Y. Heparin-binding Epidermal Growth Factor-like Growth Factor Stímulates Mitogenic Signaling and is Highly Expressed in Human Malignant Gliomas. Acta Neuropathologica, 96.322-328,1998.
85. Zhu, M. and Paddock, G.V. Expression of the Hepatocyte Growth Factor-like Protein Gene in Human Hepatocellular Carcinoma and lnterteukin-6-induced Increased Expression in Hepatoma Cells. Biochim. Biophys. Acta, 1449: 63-72, 1999.
86. Wang, M.H., Dlugosz, A.A., Sun, Y., Suda, T., Skeel, A., and Leonard, E.J. Macrophage-stímulating protein induces proliferation and migration of murine keratinocytes. Exp. Cell Res., 226.39-46,1996.
87. Pelkey, T.J., Frierson, H.F., Mills, S.E., and Stoier, M.H. Detectíon of the alphasubunit of Inhibin in Trophoblastíc Neoplasia. Hum. Pathol., 36 26-31,1999.
88. Arola, J., Liu, J., Heikkila, P., Voutilainen, R., and Kahri, A. Expression of inhibin alpha in the human adrenal gland and adrenocortical tumors. Endocrine Res., 24: 865-867, 1998.
89. Kallakury, B.S., Sheehan, C.E., Rhee, S.J., Fisher, H.G., Kaufman, R.P.J., Rifkin, M.D., and Ross, J.S. The prognostic significance of proliferatíon-associated nucJeolar protein p120 expression in prostatě adenocardnoma: A comparison with cydins A and B1, Ki-67, proliferating cell nuciear antigen, and p34(cdc2). Cancer, 85: 1569-1576, 1999.
Claims (8)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob stanovení profilu genové regulace Ginkgo biloba extraktu nebo jeho složek, vyznačující se tím, že se získá alespoň jedna vsádka neošetřených buněk;se první vsádka buněk se ošetří Ginkgo biloba extraktem nebo složkou Ginkgo biloba extraktu ke získání ošetřené vsádky buněk;se kvantifikuje vliv na expresi jednoho nebo více genů ošetřených buněk ke zjištění množství ovlivněných genů; a srovnává se množství ovlivněných genů s množstvím genů neošetřených buněk s Ginkgo bilobou nebo složkou Ginkgo biloba extraktu.
- 2. Způsob podle nároku 1, vyznačuje tím, že se použije kvantifikace, která obsahuje izolaci póly A+RNA z ošetřené vsádky buněk ke získání ošetřené póly A+RNA; izolaci póly A+RNA z vsádky neošetřených buněk ke získání neošetřené póly A+RNA;přípravu značených cDNA sond z ošetřené póly A+RNA ke získání neošetřených značených cDNA sond;hybridizaci ošetřených cDNA sond ke skupině jedné nebo více cDNA ke získání ošetřené hybridizované skupiny cDNA;hybridizaci neošetřených cDNA sond ke skupině jedné nebo více cDNA ke získání neošetřené hybridizované skupiny cDNA;kvantifikaci každé cDNA z ošetřené hybridizované cDNA skupiny ke zjištění množství ošetřené cDNA;kvantifikaci každé cDNA z neošetřené hybridizované cDNA skupiny ke zjištění množství neošetřených cDNA; a srovnání množství každé ošetřené cDNA s množstvím neošetřené cDNA ke získání profilu genové regulace.
- 3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že použitými buňky jsou MDA-231; použitým extraktem Ginkgo biloby je EGF761; a použitou skupinou je genový čip s četnými geny.
- 4. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že použitý profil genové regulace EGB 761 obsahuje zvýšenou expresi c-Myc protoonkogenu a snížení exprese následujících genů: prothymosin-α, CDK2, p55CDC, myeloblastin pl20 jadrného antigenu bující buňky, NRT1, ERK2, receptor adenosinu A2A, Flt3 ligand, Grb2, klusterin, RXR-/9, glutathion • * ····S-transferasa P, N-Myc, TRADD, SGP-2, NIP-1, Id-2, ATF-4, ETR101, ETR-1O3, stimulační faktor-1 makrofágové kolonie, heparin-vazný EGF podobný růstový faktor, hepacytový růstový faktor, inhibin a, CD 19 B-lymfocytový antigen, LI CAM, /3-katenin, integrinová podjednotka «4, integrinová podjednotka o6, integrinová podjednotka /35, integrinová podjednotka oM, APC, PE-1, RhoA, c-Jun, prothymosin- a, CDK2, p55CDC a myeloblastin.
- 5. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že použitý profil genové regulace EGB761 je: c-Myc=+75 %, c-Jun=-78 %,RhoA=-93 %,APC=-59 %,PE-1 =-42 %,Prothymosin- o=-79 %,Myeloblastin=-66 %P55CDC—63 %,P120 jaderný antigen bující buňky=-68 %,CDK2=-83 %,NETl=-55 %,ERK2-46 %,Adenosinový A2A receptor=-40 %,Flt3 ligand-58 %,Grb2=-70 %,Klusterin=-54 %,RXR-/3=-55 %,Glutathion S-transferase P=-39 %,N-Myc=-74 %,TRADD=-51 %,NIP-1=-40 %,Id-2=-65 %,ATF4—42 %,ETR103=-65 %,ETR101=-60 %,CD 19 B-lymfocytový antigen=-62 %,LlCAM=-72 %,99 9·99B-katenin=-58 %, integrinová podjednotka οΜ=-41 %, integrinová podjednotka /35=-55 %, integrinová podjednotka a4=-49 %, integrinová podjednotka «3=77 %, integrinová podjednotka o6=-53 %, stimulační faktor 1 makrofágové kolonie (CSF-1)=-31 %,Heparin vazný EGF podobný růstový faktor (HB-EGF)=-62 %,Hepacitový protein podobný růstovému faktoru (HGFLP)=-81 %, a Inhibin o=-69 %, kde jsou uvedené hodnoty v procentech ±20 %.
- 6. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že použitými buňkami jsou MDA-231; použitou složkou Ginkgo biloba extraktu je ginkgolid B; a použitou skupinou je genový čip s četnými geny.
- 7. Způsob potvrzení identity Ginkgo biloba extraktu, vyznačující se tím, že se získává profil genové regulace Ginkgo biloba extraktu pro získání profilu genové regulace;se získává profil EGB 761 genové regulace pro zisk EGB 761 profilu genové regulace;se srovnává profil genové regulace Ginkgo biloba extraktu s EGB 761 profilem genové regulace;se určuje zdali je hodnota profilu genové regulace Ginkgo biloba extraktu liší ±10 % od hodnoty EGB 761 profilu genové regulace z důvodu potvrzení identity Ginkgo biloba extraktu.
- 8. Způsob získání profilu genové regulace Ginkgo biloba extraktu a EGF 761 profilu genové regulace podle nároku 7, vyznačující se tím, že se izoluje póly A±RNA z ošetřené vsádky buněk ke získání ošetřené póly A+RNA; se izoluje póly A+RNA z neošetřené vsádky buněk ke získání neošetřené póly A±RNA;se připravují značené cDNA sondy z ošetřené póly A±RNA ke získání ošetřených značených cDNA sond;se připravují značené cDNA sondy z neošetřené póly A±RNA ke získání neošetřených značených cDNA sond;·» ···· • · se hybridizují ošetřené cDNA sondy se skupinou jedné nebo více cDNA ke získání ošetřené hybridizované skupiny cDNA;se hybridizují neošetřené cDNA sondy se skupinou jedné nebo více cDNA ke získání neošetřené hybridizované skupiny cDNA;se kvantifikuje každá cDNA ošetřené hybridizované skupiny cDNA ke získání množství ošetřené cDNA;se kvantifikuje každá cDNA neošetřené hybridizované skupiny cDNA ke získání množství neošetřené cDNA; a srovnává se množství každé ošetřené cDNA s množstvím neošetřené cDNA ke získání profilu genové regulace.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US19388900P | 2000-03-31 | 2000-03-31 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20023275A3 true CZ20023275A3 (cs) | 2003-03-12 |
Family
ID=22715430
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20023275A CZ20023275A3 (cs) | 2000-03-31 | 2001-03-27 | Způsob stanovení profilu genové regulace Ginkgo biloba extraktu nebo jeho složek |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1292706A2 (cs) |
| JP (1) | JP2003529377A (cs) |
| KR (1) | KR100479151B1 (cs) |
| CN (1) | CN1185354C (cs) |
| AU (2) | AU2001247832B2 (cs) |
| CA (1) | CA2403303A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ20023275A3 (cs) |
| HK (1) | HK1053150A1 (cs) |
| HU (1) | HUP0301997A3 (cs) |
| IL (1) | IL151856A0 (cs) |
| MX (1) | MXPA02009412A (cs) |
| NO (1) | NO20024611L (cs) |
| NZ (1) | NZ521728A (cs) |
| PL (1) | PL365418A1 (cs) |
| RU (1) | RU2271393C2 (cs) |
| WO (1) | WO2001075181A2 (cs) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2609631C2 (ru) * | 2009-12-23 | 2017-02-02 | Курна, Инк. | Лечение заболеваний, связанных с фактором роста гепатоцитов (фрг), посредством ингибирования природного антисмыслового транскрипта к фрг |
| CN109694903A (zh) * | 2019-01-09 | 2019-04-30 | 中国药科大学 | 基于银杏内酯含量与基因表达关联分析筛选银杏内酯合成关键基因的方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1051516A1 (en) * | 1998-01-26 | 2000-11-15 | Schering Aktiengesellschaft | Gene expression methods for screening compounds |
-
2001
- 2001-03-27 KR KR10-2002-7012597A patent/KR100479151B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-03-27 NZ NZ521728A patent/NZ521728A/en unknown
- 2001-03-27 RU RU2002129104/13A patent/RU2271393C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-03-27 JP JP2001573053A patent/JP2003529377A/ja active Pending
- 2001-03-27 MX MXPA02009412A patent/MXPA02009412A/es unknown
- 2001-03-27 IL IL15185601A patent/IL151856A0/xx unknown
- 2001-03-27 CZ CZ20023275A patent/CZ20023275A3/cs unknown
- 2001-03-27 CN CNB018074847A patent/CN1185354C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-03-27 EP EP01920817A patent/EP1292706A2/en not_active Withdrawn
- 2001-03-27 PL PL01365418A patent/PL365418A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2001-03-27 HU HU0301997A patent/HUP0301997A3/hu unknown
- 2001-03-27 AU AU2001247832A patent/AU2001247832B2/en not_active Ceased
- 2001-03-27 AU AU4783201A patent/AU4783201A/xx active Pending
- 2001-03-27 WO PCT/US2001/009832 patent/WO2001075181A2/en not_active Application Discontinuation
- 2001-03-27 CA CA002403303A patent/CA2403303A1/en not_active Abandoned
-
2002
- 2002-09-26 NO NO20024611A patent/NO20024611L/no not_active Application Discontinuation
-
2003
- 2003-07-16 HK HK03105143.2A patent/HK1053150A1/zh unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MXPA02009412A (es) | 2005-02-03 |
| HUP0301997A3 (en) | 2005-11-28 |
| CN1185354C (zh) | 2005-01-19 |
| RU2271393C2 (ru) | 2006-03-10 |
| AU2001247832B2 (en) | 2005-07-21 |
| CA2403303A1 (en) | 2001-10-11 |
| HK1053150A1 (zh) | 2003-10-10 |
| NZ521728A (en) | 2004-10-29 |
| HUP0301997A2 (hu) | 2003-09-29 |
| IL151856A0 (en) | 2003-04-10 |
| WO2001075181A3 (en) | 2002-11-07 |
| NO20024611D0 (no) | 2002-09-26 |
| CN1439059A (zh) | 2003-08-27 |
| WO2001075181A2 (en) | 2001-10-11 |
| AU4783201A (en) | 2001-10-15 |
| PL365418A1 (en) | 2005-01-10 |
| NO20024611L (no) | 2002-11-19 |
| EP1292706A2 (en) | 2003-03-19 |
| KR100479151B1 (ko) | 2005-03-28 |
| JP2003529377A (ja) | 2003-10-07 |
| KR20020089409A (ko) | 2002-11-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ito et al. | Molecular mechanisms of thalidomide and its derivatives | |
| EP1064404B1 (en) | P53-regulated genes | |
| DE10296990B4 (de) | Verwendung eines Biochips zur Diagnose von Sepsis und sepsisähnlichem Syndrom | |
| Balasubramanian et al. | H3K4me3 inversely correlates with DNA methylation at a large class of non-CpG-island-containing start sites | |
| US20070020623A1 (en) | Method for determining homeostasis of the skin | |
| JP2007126472A (ja) | イチョウ抽出物の使用 | |
| US20060182821A1 (en) | Use of a plant extract | |
| Brachat et al. | Comparative microarray analysis of gene expression during apoptosis-induction by growth factor deprivation or protein kinase C inhibition | |
| WO2004016809A1 (de) | Nukleinsäurearray bestehend aus selektiven monozyten-makrophagen-gene | |
| KR100479151B1 (ko) | 식물 추출물의 프로파일을 얻는 방법 | |
| AU2001247832A1 (en) | Method of profiling a plant extract | |
| Ahn et al. | The gene expression profile of human umbilical vein endothelial cells stimulated with lipopolysaccharide using cDNA microarray analysis | |
| US20030211456A1 (en) | Method of profiling a plant extract | |
| Song et al. | Monitoring the gene expression profiles of doxorubicin-resistant acute myelocytic leukemia cells by DNA microarray analysis | |
| Hartmann et al. | Gene expression profiling of advanced head and neck squamous cell carcinomas and two squamous cell carcinoma cell lines under radio/chemotherapy using cDNA arrays | |
| AU2005203029A1 (en) | Method of profiling a plant extract | |
| EP1691199B1 (en) | Method of predicting spot formation on the skin with the use of spot site-accelerating genes as indication and method of screening inhibitor for spot formation on the skin | |
| EP1365033A1 (en) | Method of molecular diagnosis of chronic myelogenous leukemia | |
| Abe et al. | Construction and characterization of a vestibular-specific cDNA library using T7-based RNA amplification | |
| Gebicke‐Haerter | Expression profiling methods used in drug abuse research | |
| Waisfisz et al. | Analysis of baseline and cisplatin-inducible gene expression in Fanconi anemia cells using oligonucleotide-based microarrays | |
| EP1865319A1 (en) | Method of testing whether a tumor is susceptible to treatment with a ginkgo biloba extract or Ginkgolide B by testing whether the cancer is characterized by an over-expression of peripheral-type benzodiazepine receptor protein | |
| Hussein et al. | Characterization of human septic sera induced gene expression modulation in human myocytes | |
| McEachern et al. | BRCA1 splice variants exhibit overlapping and distinct transcriptional transactivation activities | |
| Wolfl et al. | Monitoring therapy with gene expression profiling reveals physiological differences in drug action |