CZ2001655A3

CZ2001655A3 - Cyclic peptide, preparation containing thereof, myelination induction method, method of suppressing neuron degeneration and treatment method

Info

Publication number: CZ2001655A3
Application number: CZ2001655A
Authority: CZ
Inventors: David E. Wright; John S. O´Brien
Original assignee: Myelos Corporation
Priority date: 1998-08-28
Filing date: 1999-08-20
Publication date: 2001-11-14
Also published as: CA2341810A1; PL346346A1; JP2002523518A; HUP0103265A2; JP4528443B2; HUP0103265A3; PL204359B1; JP2010150272A; BR9913490A; EP1105420A1; ZA200102489B; IL141586A0; WO2000012553A1; KR20010079695A; CN1324367A; AU751034B2; AU5690599A

Abstract

Cyclic neurotrophic and analgesic peptides derived from the active region of prosaposin having the consensus sequence X1X2X3NNX4TX5X6X7X8 (SEQ ID NO:4), wherein X1 is a hydrophobic amino acid (leucine, isoleucine, valine, tyrosine, tryptophan, phenylalanine or methionine); X2 is a hydrophobic amino acid, X3 is aspartic acid, glutamic acid, lysine or arginine; N is asparagine, X4 is any amino acid; T is threonine; X5 is glutamic acid or aspartic acid; X6 is any amino acid, X7 is a hydrophobic amino acid; and X8 is a hydrophobic amino acid. The peptides are useful in the promotion of neural outgrowth, prevention of cell death, promotion of myelination, treatment of neurodegenerative disorders and treatment and prevention of neuropathic pain.

Description

(57) Anotace:(57)

Cyklické neurotropní a analgetické peptidy odvozené od aktivní oblasti prosaposinu, obsahující sekvenci Χ_]Χ₂Χ₃ΝΝΧ₄ΤΧ₅Χ₆Χ₇Χ₈ (sekvence č. 4), kde X_t je hydrofóbní aminokyselina (alanin, leucin, izoleucin, valin, tyrozin, tryptofan, fenylalanin nebo methionin), X₂ je hydrofóbní aminokyselina, X₃ je kyselina asparagová, kyselina glutamová, lysin nebo arginin, N je asparagin, X₄ je jakákoliv aminokyselina, T je threonin, X₅ je kyselina glutamová nebo asparagová X₆ je jakákoliv aminokyselina, X₇je hydrofóbní aminokyselina a X₈ je hydrofóbní aminokyselina. Tyto peptidy jsou použitelné pro zajištění růstu neuronů, prevenci buněčné smrti, zajištění myelinizace, léčbu neurodegradativních poruch a potlačení či prevenci neuropatické bolesti.Cyclic neurotrophic and analgesic peptides derived from the active region of prosaposin, containing the sequence Χ _] Χ ₂ Χ ₃ ΝΝΧ ₄ ΤΧ ₅ Χ ₆ Χ ₇ Χ ₈ (SEQ ID NO: 4), where X _t is a hydrophobic amino acid (alanine, leucine, isoleucine, valine , tyrosine, tryptophan, phenylalanine or methionine), X ₂ is a hydrophobic amino acid, X ₃ is aspartic acid, glutamic acid, lysine or arginine, N is asparagine, X ₄ is any amino acid, T is threonine, X ₅ is glutamic or aspartic acid X ₆ is any amino acid, X ₇ is a hydrophobic amino acid, and X ₈ is a hydrophobic amino acid. These peptides are useful for securing neuronal growth, preventing cell death, securing myelination, treating neurodegradative disorders, and suppressing or preventing neuropathic pain.

(13) Druh dokumentu: A3 (51) Int. Cl.(13) Type of document: A3 (51) Int. Cl.

C 07 K 14/475OJ C 07 K 14/475

A61K 38/18A61K 38/18

A61P 25/00A61P 25/00

ř!/ř! /

CYKLICKÝ PEPTID, PROSTŘEDEK, ZPŮSOB INDUKCE MYELINIZACE, ZPŮSOBCYCLIC PEPTIDE, MEANS, METHOD OF INDICATION OF MYELINIZATION, METHOD

POTLAČENÍ DEGENERACE NEURONŮ A ZPŮSOB LÉČBYREPRESSION OF DEGENERATION OF NEURONS AND METHODS OF TREATMENT

OBLAST TECHNIKYTECHNICAL FIELD

Navrhovaný vynález popisuje neurotropní a analgetické peptidy. Konkrétně vynález popisuje cyklické peptidy odvozené od aktivní oblasti saposinu C, který má neurotropní a analgetické účinkyThe present invention describes neurotrophic and analgesic peptides. In particular, the invention provides cyclic peptides derived from the active region of saposin C having neurotrophic and analgesic effects

DOSAVADNÍ STAV TECHNIKYBACKGROUND OF THE INVENTION

Neurotropní faktory jsou proteiny nebo peptidy schopné ovlivnit životaschopnost nervového systému pacienta, nebo funkce buněčné populace neuronů (Barde , Neuron 2: 1525 - 1534, 1989). Účinky neurotropních faktorů in vitro a in vivo jsou dobře známé v současném stavu techniky. Například nervový růstový faktor (NGF) funguje jako trofický faktor pro cholinergní neurony předního mozku a periferní a senzorické neurony (Hefti et al., Neurobiol. Aging 10: 515-533, 1989) a dokáže zvrátit přirozená, stejně jako fyzická traumata periferních nervů (Rich et al., J. Neurocytol. 16:261-268, 1987). Neurotropní faktor mozku (BDNF) je trofícký faktor pro periferní senzorické neurony, dopaminergní neurony v Substantia Nigra, centrální cholinergní neurony a retinální ganglia (Henderson et al., Restor. Neutrol. Neurosci. 5:15-28, 1993). BDNF, jak bylo prokázáno, ochraňuje buňku před přirozenou smrtíjak in vitro tak in vivo (Hofer et al., Nátuře 331:262-262, 1998). Ciliámí neurotropní faktor (CNTF) zlepšuje přežívání ciliámích ganglií z kuřecích embryí in vitro a podporuje přežívání sympatických senzorických a spinálních motorických neuronů v kultuře (Ip et al., J. Physiol. Paris 85:122-130, 1991). Demyelinizace je porucha běžná u řady chorob centrálního nervového systému (CNS) a nej zřetelnější je při roztroušené skleróze (MS). Roztroušená skleróza je chronická porucha, která vede k totální neschopnosti, je charakteristická poškozením myelinové pochvy, zatímco axony zůstávají v zásadě nepoškozené. V současné době v případě roztroušené sklerózy neexistuje žádný účinný léčebný postup. Dalšími poruchami centrálního nervového systému, během nichž dochází k demyelinizaci jsou např. akutní roztroušená encefalomyelytida, amyotropní laterální skleróza, akutní hemorhagická leukodystrofie, progresivní multifokální leukoencefalityda, metachromatická leukodystrofie a adrenální leukodystrofie. Demyelinizaci může být napaden i periferní nervový systém, jako v případě sybdromu Guaillian-Barré (phatologic Basis of Disease, Robbins et al. Eds., W.B. Saunders, Phialadelphia, 1979, str. 1578-1582).Neurotropic factors are proteins or peptides capable of affecting the viability of the patient's nervous system, or the function of the cell population of neurons (Barde, Neuron 2: 1525-1534, 1989). The effects of neurotrophic factors in vitro and in vivo are well known in the art. For example, nerve growth factor (NGF) acts as a trophic factor for forebrain cholinergic neurons and peripheral and sensory neurons (Hefti et al., Neurobiol. Aging 10: 515-533, 1989) and can reverse the natural as well as physical trauma of peripheral nerves ( Rich et al., J. Neurocytol. 16: 261-268 (1987). Brain Neurotrophic Factor (BDNF) is a trophic factor for peripheral sensory neurons, dopaminergic neurons in Substantia Nigra, central cholinergic neurons, and retinal ganglia (Henderson et al., Restor. Neutrol. Neurosci. 5: 15-28, 1993). BDNF has been shown to protect the cell from natural death both in vitro and in vivo (Hofer et al., Nature 331: 262-262, 1998). Ciliary neurotrophic factor (CNTF) improves in vitro survival of ciliary ganglia from chicken embryos and promotes the survival of sympathetic sensory and spinal motor neurons in culture (Ip et al., J. Physiol. Paris 85: 122-130, 1991). Demyelination is a disorder common to many diseases of the central nervous system (CNS) and is most pronounced in multiple sclerosis (MS). Multiple sclerosis is a chronic disorder that leads to total inability, characterized by damage to the myelin sheath, while axons remain essentially intact. Currently, there is no effective treatment for multiple sclerosis. Other central nervous system disorders during which demyelination occurs include acute multiple encephalomyelitis, amyotropic lateral sclerosis, acute haemorrhagic leukodystrophy, progressive multifocal leukoencephality, metachromatic leukodystrophy and adrenal leukodystrophy. Demyelination can also be attacked by the peripheral nervous system, as in the case of the Guaillian-Barré Sybdrome (Phatologic Basis of Disease, Robbins et al. Eds., W. B. Saunders, Phialadelphia, 1979, pp. 1578-1582).

···· ·· · · · · • · · 9 · 99 • 9 9 9 9···· • · · · ·· · ·9 · 99 · 9 9 9 9 ··························

9999 99 9 99 99 ··99999 99 9 99 99 ·· 9

Poškození periferních nervů a periferní neuropatie, jako jsou ty, které jsou následkem chemoterapie při cukrovce, jsou nejběžnější poruchy periferních nervů. Současná léčba většiny poruch periferních nervů je zaměřena pouze na potlačení projevů poruch, ale neodstraňují příčiny poruchy.Peripheral nerve damage and peripheral neuropathy, such as those resulting from chemotherapy in diabetes, are the most common peripheral nerve disorders. Concomitant treatment of most peripheral nerve disorders is aimed only at suppressing the manifestations of the disorders, but does not eliminate the causes of the disorder.

Neuropatická bolest je důsledkem poškození nervů, jako je jejich stlačením, zmáčknutím nebo traumatickým poškozením míchy a obvykle je dlouhotrvající nebo chronické. Nejhorší poškození nervů také může být způsobeno vznikem neuronů, kdy bolest je důsledkem nenormální regenerace nervů. Dalším příkladem mohou být neuropatické bolesti způsobené nádorovým onemocněním, kdy rostoucí nádor tlačí na přilehlý nerv, mozkovou tkáň nebo míchu. Neuropatické bolesti jsou také spojeny s průběhem některých chorob, jako je diabetes a alkoholismus. Ve většině případů jsou neuropatické bolesti rezistentní k potlačení současnými léčivy. Tato léčiva mají mnohdy vážné vedlejší účinky, patentová přihláška US 08/611 307 popisuje způsob potlačení nebo prevence neuropatických bolestí podáním efektivního množství aktivního fragmentu prosaposinu pacientovi.Neuropathic pain is the result of nerve damage such as compression, squeezing, or traumatic spinal cord injury and is usually prolonged or chronic. The worst nerve damage can also be caused by neurons, where pain is the result of abnormal nerve regeneration. Another example may be neuropathic pain caused by cancer, where the growing tumor presses the adjacent nerve, brain tissue or spinal cord. Neuropathic pain is also associated with the course of some diseases such as diabetes and alcoholism. In most cases, neuropathic pain is resistant to suppression by current drugs. These drugs often have serious side effects, U.S. patent application Ser. No. 08 / 611,307 describes a method for suppressing or preventing neuropathic pain by administering an effective amount of an active fragment of prosaposin to a patient.

Prosaposin je prekursor skupiny malých, termostabilních glykoproteinů, které jsou nezbytné pro hydrolýzu glykosfingolipidů lysozomálními hydrolázami (Kishimi et al., J. Lipid Res. 33:12551267, 1992). Prosaposin je proteolyticky štěpen v lysozómech, čímž vznikají saposiny A, B, C a D (O'Brien et al., FASEB J. 5:301-308, 1991). O'Brien et al. (Proč. Nati. Acad. Sci USA, 91:9593-9596, 1994), patent US 5 571 787 a publikovaná PCT aplikace č. WO 95/03 821 popisují, že prosaposin, saposin C stimulují růst neuritů a zvýšenou myelinizaci. Navíc, patenty US 5 571 787, US 5 696 080, US 5 714 459 a publikovaná PCT aplikace č. WO 95/03 821 popisují, že 22 aminokyselin dlouhý peptid (CEFLVKEVTKLIDNNKTEKEIL, sekvence č. 1) obsahující aminokyseliny 8 až 29 z lidského saposinu C stimuluje nárůst neuritů. Tyto publikace také říkají, že 18 aminokyselin dlouhý peptid (YKEVTKLIDNNKTEKEIL, sekvence č. 2) obsažený v 22 aminokyselin dlouhém saposinu C (kde V je nahrazeno Y) také zvyšuje růst neuritů a je schopen projít přes krevně - mozkovou bariéru. O'Brien et al., (FASEB J. 9:681-685, 1995) ukazuje, že 22 aminokyselin dlouhý peptid stimuluje cholínovou acetyltransferázovou aktivitu a chrání neurony před smrtí. Aktivní neuritogenní fragment byl lokalizován v lineární 12 aminokyselin dlouhé sekvenci nacházející se na amino konci saposinu C (LIDNNKTEKEIL, sekvence č. 3) (O'Brien et al., FASEB J. 9:681-685, 1994). Liepinsh et al., (Nátuře Struct. Biol. 4:793-795) ukazuje, že konformace smyčky neurotropně aktivního segmentu peptidu NK lysinu (jednotky 17 až 30) může být napodobena kruhovým peptidem.Prosaposin is a precursor of a group of small, thermostable glycoproteins that are essential for the hydrolysis of glycosphingolipids by lysosomal hydrolase (Kishimi et al., J. Lipid Res. 33: 12551267, 1992). Prosaposin is proteolytically cleaved in lysosomes to form saposins A, B, C and D (O'Brien et al., FASEB J. 5: 301-308, 1991). O'Brien et al. (Proc. Natl. Acad. Sci USA, 91: 9593-9596, 1994), U.S. Pat. No. 5,571,787 and published PCT application No. WO 95/03 821 disclose that prosaposin, saposin C stimulate neurite outgrowth and increased myelination. In addition, U.S. Pat. Nos. 5,571,787, 5,696,080, 5,714,459 and published PCT Application No. WO 95/03 821 disclose that a 22 amino acid long peptide (CEFLVKEVTKLIDNNKTEKEIL, SEQ ID NO: 1) containing amino acids 8 to 29 of human saposin C stimulates neurite outgrowth. These publications also say that the 18 amino acid long peptide (YKEVTKLIDNNKTEKEIL, SEQ ID NO: 2) contained in the 22 amino acid long saposin C (where V is replaced by Y) also increases neurite outgrowth and is able to cross the blood-brain barrier. O'Brien et al., (FASEB J. 9: 681-685, 1995) shows that a 22 amino acid long peptide stimulates choline acetyltransferase activity and protects neurons from death. The active neuritogenic fragment was located in a linear 12 amino acid long sequence located at the amino terminus of saposin C (LIDNNKTEKEIL, SEQ ID NO: 3) (O'Brien et al., FASEB J. 9: 681-685, 1994). Liepinsh et al., (Nature Struct. Biol. 4: 793-795) shows that the loop conformation of the neurotrophically active segment of the NK lysine peptide (units 17 to 30) can be mimicked by a circular peptide.

Hlavní překážkou terapeutického in vivo použití těchto peptidů je jejich citlivost k proteolytické degradaci. Navrhovaný vynález popisuje cyklické peptidy napodobující části prosaposinu, která jsou však odolné k proteolytickému štěpení a schopné prostoupení přes krevně - mozkovou bariéru.A major obstacle to the therapeutic in vivo use of these peptides is their sensitivity to proteolytic degradation. The present invention describes cyclic peptides mimicking portions of prosaposin, but which are resistant to proteolytic cleavage and capable of crossing the blood-brain barrier.

PODSTATA VYNÁLEZUSUMMARY OF THE INVENTION

Jednou variantou navrhovaného vynálezu je cyklický peptid s neurotropními a analgetickými účinky který je složen z 11 až 25 aminokyselin a jeho struktura je odvozena od sekvence X1X2X3NNX4TX5X6X7X8, kde Xi je hydrofóbní aminokyselina (alanin, leucin, izoleucin, valin, tyrozin, tryptofan, fenylalanin nebo methionin), X2 je hydrofóbní aminokyselina, X3 je kyselina asparagová, kyselina glutamová, lysin nebo arginin, N je asparagin, X4 je jakákoliv aminokyselina, T je threonin, X₅ je kyselina glutamová nebo asparagová, Xď je jakákoliv aminokyselina, X₇ je hydrofóbní aminokyselina a Xs je hydrofóbní aminokyselina. Nejvhodnější je pokud peptid má aminokyselinovou sekvenci uvedenou jako sekvence č. 5 nebo 6.One variant of the present invention is a cyclic peptide with neurotrophic and analgesic effects consisting of 11 to 25 amino acids and its structure is derived from the sequence X1X2X3NNX4TX5X6X7X8, where X1 is a hydrophobic amino acid (alanine, leucine, isoleucine, valine, tyrosine, tryptophan, phenylalanine) X2 is a hydrophobic amino acid, X3 is aspartic acid, glutamic acid, lysine or arginine, N is asparagine, X4 is any amino acid, T is threonine, X ₅ is glutamic or aspartic acid, Xd is any amino acid, X ₇ is a hydrophobic amino acid and X 5 is a hydrophobic amino acid. Most preferably, the peptide has the amino acid sequence shown as SEQ ID NO: 5 or 6.

Navrhovaný vynález popisuje prostředek obsahující výše popsaný peptid v neprodyšně uzavřených nádobách upravených tak aby se produkt nerozpadal v lyofílizované formě, ve formě lipozómů, ve formě vhodné pro povrchovou aplikaci nebo v jednotkové dávkovači formě.The present invention provides a composition comprising the above-described peptide in a sealed container adapted to not disintegrate in lyophilized form, in liposome form, in a form suitable for topical application or in unit dosage form.

Další možností navrhovaného vynálezu je popsat způsob indukce myelinizace nebo inhibici demyelinizace u savců, představující podání savcům trpícím demyelinizací farmaceuticky efektivní dávku cyklických peptidů schopnou potlačit demyelinizací, přičemž peptid je složen z 11 až 25 aminokyselin a obsahuje sekvenci X1X2X3NNX4TX5X6X7X8, kde X| je hydrofóbní aminokyselina (alanin, leucin, izoleucin, valin, tyrozin, tryptofan, fenylalanin nebo methionin), X2 je hydrofóbní aminokyselina, X3 je kyselina asparagová, kyselina glutamová, lysin nebo arginin, N je asparagin, X4 je jakákoliv aminokyselina, T je threonin, X5 je kyselina glutamová nebo asparagová, Xď je jakákoliv aminokyselina, X₇ je hydrofóbní aminokyselina a Xs je hydrofóbní aminokyselina. V jedné z konkrétních variant navrhovaného vynálezu, je demyelinizace způsobena roztroušenou sklerózou, ischemickým nebo traumatickým poraněním. Je vhodné, aby podání mělo formu nitrožilní, intramuskulámí, intradermální, podkožní, intrakraniální, intracerebrospinální nebo povrchové aplikace. Je vhodné aby peptid byl podáván ve farmaceuticky přijatelném nosiči. V jiné variantě navrhovaného vynálezu, je peptid zahrnut v lamelámí struktuře. Je vhodné, aby peptid měl sekvenci uvedenou jako sekvence č. 5 nebo 6. Další možností navrhovaného vynálezu je, že savcem je člověk.Another possibility of the present invention is to provide a method for inducing myelinization or inhibiting demyelination in mammals, comprising administering to a mammal suffering from demyelination a pharmaceutically effective dose of cyclic peptides capable of suppressing demyelination, wherein the peptide consists of 11-25 amino acids and comprises sequence X1X2X3NNX4TX5X6X7X8. is a hydrophobic amino acid (alanine, leucine, isoleucine, valine, tyrosine, tryptophan, phenylalanine or methionine), X2 is a hydrophobic amino acid, X3 is aspartic acid, glutamic acid, lysine or arginine, N is asparagine, X4 is any amino acid, T is threonine X 5 is glutamic or aspartic acid, X ₆ is any amino acid, X ₇ is a hydrophobic amino acid, and X ₅ is a hydrophobic amino acid. In one particular variant of the present invention, demyelination is caused by multiple sclerosis, ischemic or traumatic injury. It is desirable that the administration be in the form of intravenous, intramuscular, intradermal, subcutaneous, intracranial, intracerebrospinal or topical application. Suitably, the peptide is administered in a pharmaceutically acceptable carrier. In another variation of the present invention, the peptide is included in the lamellar structure. Suitably, the peptide has the sequence shown as SEQ ID NO: 5 or 6. Another possibility of the present invention is that the mammal is a human.

Navrhovaný vynález dále popisuje způsob inhibice neurální degenerace nebo zajišťuje růst neuritů v nervové tkáni, který je charakteristický tím, že zahrnuje: kontakt nervové tkáně postižené touto degenerací s farmaceuticky efektivní dávkou cyklických peptidů schopnou potlačit demyelinizaci, přičemž peptid je složen z 11 až 25 aminokyselin a obsahuje sekvenci X1X2X3NNX4TX5X6X7X8, kde X] je hydrofóbní aminokyselina (alanin, leucin, izoleucin, valin, tyrozin, tryptofan, fenylalanin nebo methionin), X2 je hydrofóbní aminokyselina, X₃ je kyselina asparagová, kyselina glutamová, lysin nebo arginin, N je asparagin, X4 je jakákoliv aminokyselina, T je threonin, X5 je kyselina glutamová nebo asparagová, Xó je jakákoliv aminokyselina, X₇ je hydrofóbní aminokyselina a Xs je hydrofóbní aminokyselina. Je vhodné, aby peptid měl sekvenci uvedenou jako sekvence č. 5 nebo 6. Je vhodné, aby podání mělo formu nitrožilní, intramuskulámí, intradermální, podkožní, intrakraniální, intracerebrospinální nebo povrchové aplikace. Je vhodné aby peptid byl podáván ve farmaceuticky přijatelném nosiči. V jiné variantě navrhovaného vynálezu, je peptid zahrnut v lamelámí struktuře. Je vhodné, aby peptid měl sekvenci uvedenou jako sekvence č. 5 nebo 6. Je vhodné aby savcem byl člověk.The present invention further provides a method of inhibiting neural degeneration or providing neurite outgrowth in nerve tissue, the method comprising: contacting nerve tissue affected by such degeneration with a pharmaceutically effective dose of cyclic peptides capable of suppressing demyelination, wherein the peptide is 11-25 amino acids; comprises a sequence X1X2X3NNX4TX5X6X7X8 wherein X] is a hydrophobic amino acid (alanine, leucine, isoleucine, valine, tyrosine, tryptophan, phenylalanine or methionine), X2 is a hydrophobic amino acid, _X3 is aspartic acid, glutamic acid, lysine or arginine, N is asparagine, X 4 is any amino acid, T is threonine, X 5 is glutamic or aspartic acid, X ₆ is any amino acid, X ₇ is a hydrophobic amino acid, and X ₅ is a hydrophobic amino acid. Preferably, the peptide has the sequence shown as SEQ ID NO: 5 or 6. It is preferred that the administration be in the form of intravenous, intramuscular, intradermal, subcutaneous, intracranial, intracerebrospinal or topical application. Suitably, the peptide is administered in a pharmaceutically acceptable carrier. In another variation of the present invention, the peptide is included in the lamellar structure. Preferably, the peptide has the sequence shown as SEQ ID NO: 5 or 6. Preferably, the mammal is a human.

Další variantou navrhovaného vynálezu, je způsob léčby neuropatické bolesti u savců, kteří touto poruchou trpí, zahrnující krok podání farmaceuticky efektivní dávky cyklických peptidů schopné tuto bolest potlačit savcům trpícím neuropatickou bolestí, přičemž peptid je složen z 11 až 25 aminokyselin a obsahuje sekvenci X1X2X3NNX4TX5X6X7X8, kde X] je hydrofóbní aminokyselina (alanin, leucin, izoleucin, valin, tyrozin, tryptofan, fenylalanin nebo methionin), X₂ je hydrofóbní aminokyselina, X₃ je kyselina asparagová, kyselina glutamová, lysin nebo arginin, N je asparagin, X4 je jakákoliv aminokyselina, T je threonin, X₅ je kyselina glutamová nebo asparagová, Xď je jakákoliv aminokyselina, X7 je hydrofóbní aminokyselina a Xs je hydrofóbní aminokyselina. Je vhodné, aby podání mělo formu nitrožilní, intramuskulámí, intradermální, podkožní, intrakraniální, intracerebrospinální nebo povrchové aplikace. Je vhodné, aby peptid měl sekvenci uvedenou jako sekvence č. 5 nebo 6. Je vhodné aby peptid byl podáván ve farmaceuticky přijatelném nosiči. V jiné variantě navrhovaného vynálezu, je peptid zahrnut v lamelámí struktuře. Je vhodné aby savcem byl člověk.Another variant of the present invention is a method of treating neuropathic pain in a mammal suffering from the disorder, comprising the step of administering a pharmaceutically effective dose of cyclic peptides capable of suppressing this pain to mammals suffering from neuropathic pain, the peptide consisting of 11-25 amino acids and comprising sequence X1X2X3NNX4TX5X6X7 X 1 is a hydrophobic amino acid (alanine, leucine, isoleucine, valine, tyrosine, tryptophan, phenylalanine or methionine), X ₂ is a hydrophobic amino acid, X ₃ is aspartic acid, glutamic acid, lysine or arginine, N is asparagine, X4 is any amino acid , T is threonine, X ₅ is glutamic or aspartic acid, X ₅ is any amino acid, X 7 is a hydrophobic amino acid, and X ₅ is a hydrophobic amino acid. It is desirable that the administration be in the form of intravenous, intramuscular, intradermal, subcutaneous, intracranial, intracerebrospinal or topical application. Preferably, the peptide has the sequence shown as SEQ ID NO: 5 or 6. Preferably, the peptide is administered in a pharmaceutically acceptable carrier. In another variation of the present invention, the peptide is included in the lamellar structure. Preferably, the mammal is a human.

Navrhovaný vynález dále popisuje cyklický peptid, který je složen z 11 až 25 aminokyselin a obsahuje sekvenci X1X2X3NNX4TX5X6X7X8, kde Xj je hydrofóbní aminokyselina (alanin, leucin, izoleucin, valin, tyrozin, tryptofan, fenylalanin nebo methionin), X2 je hydrofóbní aminokyselina, X₃ je kyselina asparagová, kyselina glutamová, lysin nebo arginin, N je asparagin, X₄ je jakákoliv aminokyselina, T je threonin, X5 je kyselina glutamová nebo asparagová, Xó je jakákoliv aminokyselina, X₇ je hydrofóbní aminokyselina a X» je hydrofóbní • ·The present invention further provides a cyclic peptide, that is composed of 11 to 25 amino acids and including the sequence X1X2X3NNX4TX5X6X7X8 wherein Xi is a hydrophobic amino acid (leucine, isoleucine, valine, tyrosine, tryptophan, phenylalanine or methionine), X2 is a hydrophobic amino acid, X ₃ is aspartic acid, glutamic acid, lysine or arginine, N is asparagine, X ₄ is any amino acid, T is threonine, X5 is glutamic or aspartic acid, X6 is any amino acid, X ₇ is a hydrophobic amino acid and X »is hydrophobic • ·

aminokyselina, pro indukci myelinizace nebo inhibici demyelinizace u savců. Je vhodné, aby peptid měl sekvenci uvedenou jako sekvence č. 5 nebo 6.an amino acid, for inducing myelination or inhibiting demyelination in mammals. Suitably, the peptide has the sequence shown as SEQ ID NO: 5 or 6.

Další variantou navrhovaného vynálezu, je cyklický peptid, který je složen z 11 až 25 aminokyselin a obsahuje sekvenci X1X2X3NNX4TX5X6X7X8, kde X; je hydrofóbní aminokyselina (alanin, leucin, izoleucin, valin, tyrozin, tryptofan, fenylalanin nebo methionin), X₂ je hydrofóbní aminokyselina, X3 je kyselina asparagová, kyselina glutamová, lysin nebo arginin, N je asparagin, X₄ je jakákoliv aminokyselina, T je threonin, X5 je kyselina glutamová nebo asparagová, Xe je jakákoliv aminokyselina, X7 je hydrofóbní aminokyselina a Xs je hydrofóbní aminokyselina, pro inhibici neurální degenerace nebo zajištění nárůstu množství neuritů. Je vhodné, aby peptid měl sekvenci uvedenou jako sekvence č. 5 nebo 6.Another variant of the present invention is a cyclic peptide which is composed of 11 to 25 amino acids and comprises the sequence X1X2X3NNX4TX5X6X7X8, wherein X; is a hydrophobic amino acid (alanine, leucine, isoleucine, valine, tyrosine, tryptophan, phenylalanine or methionine), X ₂ is a hydrophobic amino acid, X3 is aspartic acid, glutamic acid, lysine or arginine, N is asparagine, X ₄ is any amino acid, T is threonine, X5 is glutamic or aspartic acid, Xe is any amino acid, X7 is a hydrophobic amino acid, and X5 is a hydrophobic amino acid, to inhibit neural degeneration or increase neurite outgrowth. Suitably, the peptide has the sequence shown as SEQ ID NO: 5 or 6.

Navrhovaný vynález dále popisuje cyklický peptid, který je složen z 11 až 25 aminokyselin a obsahuje sekvenci X1X2X3NNX4TX5X6X7X8, kde Xi je hydrofóbní aminokyselina (alanin, leucin, izoleucin, valin, tyrozin, tryptofan, fenylalanin nebo methionin), X₂ je hydrofóbní aminokyselina, X3 je kyselina asparagová, kyselina glutamová, lysin nebo arginin, N je asparagin, X₄ je jakákoliv aminokyselina, T je threonin, X₅ je kyselina glutamová nebo asparagová, Xď je jakákoliv aminokyselina, X7 je hydrofóbní aminokyselina a Xg je hydrofóbní aminokyselina, pro léčbu neuropatické bolesti. Je vhodné, aby peptid měl sekvenci uvedenou jako sekvence č. 5 nebo 6.The present invention further provides a cyclic peptide, that is composed of 11 to 25 amino acids and including the sequence X1X2X3NNX4TX5X6X7X8, wherein X is a hydrophobic amino acid (leucine, isoleucine, valine, tyrosine, tryptophan, phenylalanine or methionine), _X2 is a hydrophobic amino acid, X3 is aspartic acid, glutamic acid, lysine or arginine, N is asparagine, X ₄ is any amino acid, T is threonine, X ₅ is glutamic or aspartic acid, X ₄ is any amino acid, X7 is a hydrophobic amino acid and Xg is a hydrophobic amino acid, for treatment neuropathic pain. Suitably, the peptide has the sequence shown as SEQ ID NO: 5 or 6.

Navrhovaný vynález popisuje cyklické peptidy odvozené od saposinu C, které jsou složeny z 11 až 25 aminokyselin a obsahují sekvenci Χ)Χ₂Χ₃ΝΝΧ₄ΤΧ₅Χ6Χ7Χ8, kde X] je hydrofóbní aminokyselina (alanin, leucin, izoleucin, valin, tyrozin, tryptofan, fenylalanin nebo methionin), X₂ je hydrofóbní aminokyselina, X3 je kyselina asparagová, kyselina glutamová, lysin nebo arginin, N je asparagin, X₄ je jakákoliv aminokyselina, T je threonin, X₅ je kyselina glutamová nebo asparagová, Xň je jakákoliv aminokyselina, X7 je hydrofóbní aminokyselina a Xg je hydrofóbní aminokyselina. Je vhodné, aby peptid měl sekvenci: cyklo-(LLDNNKTEKLY) (sekvence č. 5) nebo cyklo-(LIDNNATEEIL) (sekvence č. 6). Díky své vynucené struktuře, jsou tato cyklická prosaposinová peptidomimetika výrazně rezistentnější k enzymatické degradaci a jsou schopna překročit krevně-mozkovou bariéru v daleko větší míře než odpovídající lineární peptidy. Cyklické peptidy podle navrhovaného vynálezu jsou stejně, nebo více účinnější pro stimulaci růstu neuritů než známá lineární vysoce aktivní prosaposinová peptidomimetika („prosaptidy“) se sekvencí TXLIDNNATEEILY, kde X je D-alanin (sekvence č. 7) (příklad 1). . Navíc jsou cyklické peptidy podle navrhovaného vynálezu efektivnější, než prosaptidy v prevenci buněčné smrti neuronů in vitro (příklad 2). Tyto cyklické peptidy postrádají amino- i •· r ·· ···· · · • · · · · * * ··· • · ···· · · · • · · · ··· · · · · · · · · · karboxy- konec. Jsou tedy daleko rezistentnější k degradaci in vivo aminopeptidázami a karboxypeptidázami které degradují peptidy od amino- nebo karboxy- konce.The present invention describes saposin C-derived cyclic peptides consisting of 11 to 25 amino acids and comprising the sequence Χ) Χ ₂ Χ ₃ ΝΝΧ ₄ ΤΧ ₅ Χ6Χ7Χ8, wherein X 1 is a hydrophobic amino acid (alanine, leucine, isoleucine, valine, tyrosine, tryptophan, phenylalanine or methionine), X ₂ is a hydrophobic amino acid, X 3 is aspartic acid, glutamic acid, lysine or arginine, N is asparagine, X ₄ is any amino acid, T is threonine, X ₅ is glutamic or aspartic acid, X 3 is any amino acid, X 7 is a hydrophobic amino acid, and X 8 is a hydrophobic amino acid. Preferably, the peptide has the sequence: cyclo- (LLDNNKTEKLY) (SEQ ID NO: 5) or cyclo- (LIDNNATEEIL) (SEQ ID NO: 6). Due to their forced structure, these cyclic prosaposin peptidomimetics are significantly more resistant to enzymatic degradation and are able to cross the blood-brain barrier to a much greater extent than the corresponding linear peptides. The cyclic peptides of the present invention are equally or more effective for stimulating neurite outgrowth than the known linear highly active prosaposin peptidomimetics ("prosaptides") with the sequence TXLIDNNATEEILY, where X is D-alanine (SEQ ID NO: 7) (Example 1). . In addition, the cyclic peptides of the present invention are more effective than prosaptides in preventing cell death of neurons in vitro (Example 2). These cyclic peptides lack amino- and amino-acid-free peptides. Carboxy-terminus. Thus, they are far more resistant to degradation in vivo by aminopeptidases and carboxypeptidases that degrade peptides from the amino or carboxy terminus.

Cyklické peptidy odvozené od saposinu C obsahující aktivní 11 aminokyselin dlouhou oblast (sekvence č. 4), a jejich neurotropní analogy, jsou použitelné pro zajištění funkční regenerace po otravě, traumatu, ischémii a degenerativní nebo dědičné lézi v periferním nervstvu nebo centrální nervové soustavě. Navíc tyto peptidy stimulují proces myelinizace a působí proti poruchám způsobujícím demyelinizaci. Tyto peptidy stimulují tvorbu neuritů, zajišťují myelinizaci, chrání nervové buňky a zabraňují programované buněčné smrti nervové tkáně u savců, lépe pak u lidí. Peptidy podle navrhovaného vynálezu mohou být také použity pro léčbu celé řady neuropatií, jako jsou například neuropatie motorické, senzorické, periferní, indukované taxolem a diabetické. Jak je používán zde termín „neuropatie“ popisuje funkční poruchu nebo patologickou změnu v periferním nervovém systému a je charakterizovatelná klinicky senzorickými nebo motorickými neuronálními abnormalitami. Tyto peptidy jsou také použitelné jako analgetika, konkrétně pak pro léčbu neuropatické bolesti u savců, spíše u lidí, která může nastat dny nebo týdny po traumatickém poranění a obvykle trvají dlouhou dobu a jsou chronické. Druhý asparagin v přirozené sekvenci prosaposinu (odpovídá druhému „N“ v sekvenci č. 4) je, jak je známo, glykosylován N-acetylglukozaminem, což mu dodává jistou ochranu před proteolytickým štěpením. Syntetické modifikace tohoto asparátu uvnitř modifikované sekvence odvozené od saposinu C standartní technikou (např. Merrifíeldovou syntézou) s různými sacharidy, nejčastěji glukózou, spadá také do rámce navrhovaného vynálezu.Saposin C-derived cyclic peptides containing an active 11 amino acid long region (SEQ ID NO: 4), and their neurotrophic analogs, are useful for providing functional regeneration after poisoning, trauma, ischemia and degenerative or hereditary lesions in the peripheral nerve or central nervous system. In addition, these peptides stimulate the process of myelination and counteract the disorders causing demyelination. These peptides stimulate neurite formation, provide myelination, protect nerve cells, and prevent programmed cell death of nerve tissue in mammals, preferably humans. The peptides of the present invention can also be used to treat a variety of neuropathies, such as motor, sensory, peripheral, taxol-induced, and diabetic neuropathies. As used herein, the term "neuropathy" describes a functional disorder or pathological change in the peripheral nervous system and is characterized by clinically sensory or motor neuronal abnormalities. These peptides are also useful as analgesics, in particular for the treatment of neuropathic pain in mammals, rather in humans, which may occur days or weeks after traumatic injury and usually last for a long time and are chronic. The second asparagine in the natural prosaposin sequence (corresponding to the second "N" in sequence # 4) is known to be glycosylated with N-acetylglucosamine, giving it some protection from proteolytic cleavage. Synthetic modifications of this aspartate within a modified saposin C-derived sequence by a standard technique (eg, Merrifeldel synthesis) with various carbohydrates, most commonly glucose, are also within the scope of the present invention.

Jedna varianta navrhovaného vynálezu popisuje způsob indukce růstu neuritů a nárůstu myelinizace v diferenciovaných nebo nediferenciovaných neuronech pomocí podání efektivního množství peptidu odvozeného od saposinu C, indukujícího nárůst neuritů a tvorbu myelinu, který obsahuje aktivní 11 aminokyselin dlouhou sekvenci uvedenou jako sekvence č. 4.One variant of the present invention describes a method of inducing neurite outgrowth and an increase in myelination in differentiated or undifferentiated neurons by administering an effective amount of a saposin C-derived peptide inducing neurite outgrowth and myelin production comprising an active 11 amino acid long sequence shown in SEQ ID NO: 4.

Cyklické peptidové analogy saposinu C podle navrhovaného vynálezu se mohou odlišovat od saposinu C v sekvencích označených jako sekvence č. 4 až 6, například nahrazením jednoho nebo více lysinů anebo argininů, nahrazením jednoho nebo více tyrosinů anebo fenylalaninů, odstraněním jednoho nebo více fenylalaninů anebo konzervativní záměnou jednou nebo více aminokyseliny uvnitř peptidu. Nahrazení nebo odstranění lysinu, argininů nebo tyrosinů, fenylalaninů sníží citlivost peptidu ke štěpení trypsinem anebo chymotrypsinem. Cyklické neurotropní a myelinotropní peptidové sekvence podle navrhovaného vynálezu obsahují zpravidla okolo 50 aminokyselin, lépe pak okolo 30 aminokyselin a nejlépe mezi 11 až 25 aminokyselinami, které odpovídají sekvenci uvedené jako sekvence č. 4.The cyclic peptide analogues of saposin C according to the present invention may differ from saposin C in the sequences designated as Sequences No. 4 to 6, for example by replacing one or more lysines or arginines, replacing one or more tyrosines or phenylalanines, removing one or more phenylalanines or by conservative substitution. one or more amino acids within the peptide. Replacement or removal of lysine, arginines or tyrosines, phenylalanines will reduce the sensitivity of the peptide to trypsin or chymotrypsin cleavage. The cyclic neurotrophic and myelinotropic peptide sequences of the present invention generally comprise about 50 amino acids, preferably about 30 amino acids, and most preferably between 11 to 25 amino acids, which correspond to the sequence shown in SEQ ID NO: 4.

·· · · · < · · 4«· • t · · t · · · ·· • · · · 4 4 · *· ···· ··· ·· »4 «··4·· 4 · 4 · 4 · 4 · 4 · 4 · 4 · 4 · 4 · 4 4

Dalšími variantami sekvencí těchto peptidů určených pro použití podle navrhovaného vynálezu jsou minoritní vložení, odstranění a náhrada. Například je možno použít konzervativní záměnu aminokyselin. Takové nahrazení, například takové, při kterém se nahradí aminokyseliny patřící do jedné skupiny a chemická povaha jejich postranních řetězců si je proto blízká. Skupiny aminokyselin se dělí na zásadité aminokyseliny (lysin, arginin, histidin), kyselé aminokyseliny (kyselina asparagová, glutamová), nepolární aminokyseliny (alanin, valin, leucin, isoleucin, prolin, fenylalanin, methyonin a tryptofan), neutrální polární aminokyseliny (glycin, asparagin, glutamin, cystein, serin, threonin, tyrosin) a aromatické aminokyseliny (fenylalanin, tryptofan a tyrosin). Obecně se má za to, že konzervativní náhrada aminokyselin představovaná například jednoduchou záměnou leucinu isoleucinem nebo valinem nebo kyseliny asparagové kyselinou glutamovou, nebo threoninu se serinem nebo podobných konzervativních náhrad aminokyselin se strukturálně podobnými aminokyselinami neovlivní podstatně vlastnosti peptidu. Cyklické sekvence odvozené od saposinu C, včetně sekvence č. 4, mohou být pozměněny tak, aby bylo dosaženo několika vylepšení, zejména jako je zvýšení aktivity a zlepšení stability. Mohou být přítomné také jiné aminokyseliny uvnitř této sekvence, včetně přirozené sekvence saposinu C, kdy konzervativní náhrada této přirozené sekvence, nebo nezávislé peptidové sekvence za účelem dosáhnouti zvýšení vazebné aktivity, hydrofobicity, hydrofílity apod. Sekvence mimo aktivní neurotropní oblast nejsou obvykle nezbytné pro aktivitu peptidu. Ve většině případů tedy bude získaný peptid aktivní bez ohledu na původ těchto sekvencí. Jakýkoliv takový peptid může být poté testován vzhledem ke své aktivitě za použití dále popsaných protokolů. Schopnost těchto cyklických peptidů stimulovat růst neuritů, chránit buňky před přirozenou smrtí, zlepšovat myelinizaci, inhibovat demyelinizaci, potlačit neuropatickou bolest a léčit senzorickou neuropatii může být snadno stanovena jakýmkoliv odborníkem v oboru za použití postupů popsaných v příkladech 1 až 9. Způsoby stanovení vlastností těchto peptidů vzhledem k indukci myelinizace a inhibici demyelinizace jsou uvedeny v příkladech 3 a 4 dále. Typické minimální množství peptidů podle navrhovaného vynálezu pro neurotropní aktivitu v buněčné médium je obvykle 5 ng/ml. Toto množství nebo vyšší množství cyklických syntetických peptidů podle navrhovaného vynálezu je také zamýšleno pro použití in vitro. Obvykle jsou použity koncentrace v rozsahu 0,1 pg/ml do asi 10 mp/ml těchto peptidů. Efektivní množství pro konkrétní tkáň pak může být stanoveno podle příkladu 1. Neurony mohou být léčeny in vitro nebo ex vivo přímým podáním peptidu podle navrhovaného vynálezu buňkám. Toho může být dosaženo například inkubováním těchto buněk v živném médiu vhodném pro příslušný buněčný typ, následovným přidáním peptidu do média. Pokud mají být buňky léčeny in vivo, obvykle u savců, prostředek může být ♦ · » «· <*·9 9Other sequence variants of these peptides for use in the present invention are minor insertion, deletion, and replacement. For example, a conservative amino acid substitution may be used. Such a replacement, for example one in which amino acids belonging to one group is replaced and the chemical nature of their side chains is therefore close. The amino acid groups are divided into basic amino acids (lysine, arginine, histidine), acidic amino acids (aspartic acid, glutamic acid), nonpolar amino acids (alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, phenylalanine, methyonine and tryptophan), neutral polar amino acids (glycine, asparagine, glutamine, cysteine, serine, threonine, tyrosine) and aromatic amino acids (phenylalanine, tryptophan and tyrosine). It is generally believed that a conservative amino acid substitution represented by, for example, a simple replacement of leucine with isoleucine or valine or aspartic acid with glutamic acid, or threonine with serine or similar conservative amino acid substitutions with structurally similar amino acids will not substantially affect the properties of the peptide. The saposin C-derived cyclic sequences, including SEQ ID NO: 4, may be altered to achieve several enhancements, particularly such as increased activity and stability. Other amino acids may also be present within this sequence, including the natural saposin C sequence, where a conservative replacement of this natural sequence, or an independent peptide sequence to increase binding activity, hydrophobicity, hydrophilicity, etc. Sequences outside the active neurotrophic region are not usually necessary for peptide activity. . Thus, in most cases, the peptide obtained will be active regardless of the origin of these sequences. Any such peptide can then be tested for its activity using the protocols described below. The ability of these cyclic peptides to stimulate neurite outgrowth, protect cells from natural death, improve myelination, inhibit demyelination, suppress neuropathic pain, and treat sensory neuropathy can be readily determined by any one of ordinary skill in the art using the procedures described in Examples 1-9. with respect to induction of myelination and inhibition of demyelination, they are shown in Examples 3 and 4 below. A typical minimum amount of the peptides of the present invention for neurotrophic activity in the cell medium is usually 5 ng / ml. This amount or more of the cyclic synthetic peptides of the present invention is also contemplated for use in vitro. Generally, concentrations in the range of 0.1 pg / ml to about 10 mp / ml of these peptides are used. The effective amount for a particular tissue can then be determined according to Example 1. Neurons can be treated in vitro or ex vivo by direct administration of the peptide of the invention to cells. This can be achieved, for example, by incubating these cells in a nutrient medium suitable for the cell type in question, followed by adding the peptide to the medium. If the cells are to be treated in vivo, usually in a mammal, the composition may be

V 9 99 9 F 9 · ·9V 9 99 9 F 9 · · 9

9 9 9 9 9 9 9 999 9 9 9 9 9 99

9 9 9 9 9 9 999 9 9 9 9 99

9999 999 99 99 ·«999 aplikován různými způsoby. Nejvhodnější je injikovat prostředek přímo do krve nebo tkáně v dostatečném množství, čímž bude dosaženo požadované lokální koncentrace peptidu. V peptidech postrádajících zbytky lysinu a argininu je značně snížená proteolytická degradace. Menší peptidy (20 aminokyselin nebo méně) nejlépe překročí krevně-mozkovou bariéru a vstoupí tak do centrálního nervového systému, kde potom může léčit poruchy CNS (Banks et al., Peptides, 13:1289-1294,1992).9999 999 99 99 · «999 applied in different ways. It is best to inject the composition directly into the blood or tissue in sufficient quantity to achieve the desired local peptide concentration. Proteolytic degradation is greatly reduced in peptides lacking lysine and arginine residues. Smaller peptides (20 amino acids or less) best cross the blood-brain barrier and enter the central nervous system where they can then treat CNS disorders (Banks et al., Peptides, 13: 1289-1294, 1992).

Peptidy podle navrhovaného vynálezu mohou být také esterifikované mastnými kyselinami tak, aby vznikly estery peptidů mastných kyselin podle běžné kyselinou katalyzované esterifikace. Alternativně je možné poslední aminokyselinu přidat k syntetickému produktu a může se jednat o komerčně dostupnou esterifikovanou aminokyselinu, čímž je možno obejít esterifikační reakci. Mastné kyseliny použitelné pro použití při tvorbě esteru peptidů jsou kyselina laurová, myristová, palmitová, stearová, olejová, linoleová.The peptides of the present invention may also be fatty acid esterified to form fatty acid peptide esters according to conventional acid catalyzed esterification. Alternatively, the last amino acid may be added to the synthetic product and may be a commercially available esterified amino acid to bypass the esterification reaction. Fatty acids useful in peptide ester formation are lauric, myristic, palmitic, stearic, oleic, linoleic.

Použité peptidy mohou být acetylovány použitím komerčně dostupného acetylovaného lysinu, argininu nebo asparaginu během postupu syntézy. Tyto modifikované peptidy si zachovají aktivitu rodičkovského peptidu. Pomocí těchto modifikací je možné ovlivnit vlastnosti peptidu a jejich schopnost projít skrz mozkovou bariéru díky zvýšené hydrofobicitě.The peptides used may be acetylated using commercially available acetylated lysine, arginine, or asparagine during the synthesis process. These modified peptides retain the activity of the parent peptide. With these modifications, it is possible to influence the properties of the peptide and their ability to cross the brain barrier due to increased hydrophobicity.

Pro léčbu neurálních poruch je možné také použít přímou nitrolebeční injekci nebo injekci do cerebrospinální tekutiny, čímž je dosaženo dostatečné množství a účinné lokální koncentrace neurotrofínu. V obou případech musí být použit farmaceuticky přijatelný injikovatelný nosič. Těmito nosiči může být například fyziologický roztok nebo Ringerův roztok. Další možností je aplikaci do periferní nervové tkáně přímou lokální injekcí nebo systémovou aplikací. Je možné také použít celou řadu konvečních způsobů aplikace, jako je nitrožilní, intracerebrospinální, intramuskulární, intradermální, podkožní, intrakraniální, intranasální, epidurální, povrchová nebo orální. Pro použití jako analgetika je nejvhodnějším způsobem podání přímá intramuskulární nebo intravenózní injekce. Peptidový prostředek podle navrhovaného vynálezu může být balen a podáván v jednotkových dávkách, jako je prostředek určení pro podání pomocí injekcí nebo jako lokální preparát obsahující ekvivalent dávky odpovídající denní dávce podávané pacientovi nebo jako prostředek s kontrolovaným uvolňováním. Vzduchotěsné nádoby obsahující denní dávku aktivní složky buď v PBS nebo lyofilizované formě jsou příkladem jednotkových dávek. Přibližnou denní systémovou dávkou peptidu podle navrhovaného vynálezu založenou na tělesné hmotnosti obratlovce trpícího neurologickou poruchou, demyelinizací, nebo jako analgetické dávky obecně pro léčbu neuropatické bolesti je v rozsahu od 0,01 do asi 10 000 pg/kg. Spíše je však denní systémová dávka v rozmezí od 0,1 do 1000 pg/kg. Nejvhodnější systémová dávka jeFor the treatment of neural disorders, direct intracranial injection or injection into the cerebrospinal fluid may also be used to achieve a sufficient amount and effective local concentration of neurotrophin. In both cases, a pharmaceutically acceptable injectable carrier must be used. Such carriers may be, for example, saline or Ringer's solution. Another possibility is application to the peripheral nerve tissue by direct local injection or systemic administration. A variety of conventional routes of administration may also be employed, such as intravenous, intracerebrospinal, intramuscular, intradermal, subcutaneous, intracranial, intranasal, epidural, superficial or oral. For use as analgesics, the most appropriate route of administration is by direct intramuscular or intravenous injection. The peptide composition of the present invention may be packaged and administered in unit doses, such as a formulation for injection or as a topical formulation containing a dose equivalent to the daily dose administered to a patient or as a controlled release formulation. Airtight containers containing a daily dose of the active ingredient in either PBS or lyophilized form are exemplary unit doses. The approximate daily systemic dose of the peptide of the present invention based on vertebrate body weight suffering from neurological disorder, demyelination, or as an analgesic dose generally for the treatment of neuropathic pain is in the range of from 0.01 to about 10,000 pg / kg. Rather, however, the daily systemic dose is in the range of 0.1 to 1000 pg / kg. The most suitable systemic dose is

mezi 10 a 100 μg/kg. Tedy pro 70 kg těžkého člověka může být denní dávka od 0,7 do 700 000 pg na den, lépe pak mezi 7 a 70 000 pg na den a nejlépe mezi 700 a 7 000 pg na den. Denní dávka lokálně aplikovaného léčiva bude v rozmezí pořád nižším. Stejně tak v případě orální aplikace.between 10 and 100 μg / kg. Thus, for a 70 kg heavy human, the daily dose may be from 0.7 to 700,000 pg per day, preferably between 7 and 70,000 pg per day, and most preferably between 700 and 7,000 pg per day. The daily dose of topical drug will be in the range of ever lower. The same applies to oral administration.

V jedné preferované variantě navrhovaného vynálezu jsou neurotropní peptidy podávány lokálně k neuronům in vivo pomocí implantace. Například kyselina polylakotózová, polygalaktózová, regenerovaný kolagen, mnohovrstevné lipozómy a řada dalších konvenčních transportních systémů je široce využitelné pro použití v navrhovaném vynálezu. Infúzní pumpy systémy zachycující se v mezibuněčné hmotě a kombinace zařízení pro transdermální aplikaci jsou rovněž použitelné. Peptidy je možno před implantací obalit pomocí polyethylenglykolu jak popisuje patent US 5 529 914.In one preferred variant of the present invention, the neurotrophic peptides are administered locally to the neurons in vivo by implantation. For example, polylactose, polygalactose, regenerated collagen, multilayered liposomes, and many other conventional delivery systems are widely applicable for use in the present invention. Infusion pump systems trapped in the extracellular matrix and combinations of devices for transdermal administration are also applicable. The peptides may be coated with polyethylene glycol prior to implantation as described in U.S. Patent No. 5,529,914.

Neurotropní peptidy podle navrhované vynálezu je možné také podávat uzavřené v micelách nebo lipozómech. Enkapsulační technologie používající lipozómy jsou velmi dobře známé v současném stavu techniky. Lipozómy mohou být směrovány proti specifické tkáni, jako je například nervová tkáň za použití receptorů, ligandů nebo protilátek schopných vázat se na cílovou tkáň. Příprava těchto lékových forem je dobře známá v současném stavu techniky (Radin, et al., Meth. Enzymol., 98 : 613-618, 1983).The neurotropic peptides of the present invention may also be administered encapsulated in micelles or liposomes. Encapsulation technologies using liposomes are well known in the art. Liposomes can be directed against a specific tissue, such as nerve tissue, using receptors, ligands, or antibodies capable of binding to the target tissue. The preparation of these dosage forms is well known in the art (Radin, et al., Meth. Enzymol., 98: 613-618, 1983).

V současné době nejsou komerčně dostupné žádné léky schopné zlepšit funkční regeneraci a obnovu strukturní integrity nervového systému. To se však týká pouze centrálního nervového systému. Regenerace periferních nervů pomocí neurotropních faktorů je popisováno navrhovaným vynálezem. Neurotropní faktory mohou být navíc terapeuticky použity při léčbě neurodegenerativních poruch spojených s degenerací populace neuronů ve specifických oblastech mozku. Příčinami Parkinsonovy choroby je degenerace dopaminergních neuronů v substantia nigra.Jelikož protilátky proti prosaposinu imunohistochemicky značí dopaminergní neurony v substantia nigra na lidských preparátech, je možné použít neurotropní peptidy podle navrhovaného vynálezu při léčbě Parkinsonovy choroby. Neuropatie rohovky a neurodegenerativní poruchy očí vedoucí ke ztrátě zraku ve stáří jsou rovněž použitelné za použití peptidů podle navrhovaného vynálezu.There are currently no commercially available drugs capable of improving functional regeneration and restoring the structural integrity of the nervous system. However, this only applies to the central nervous system. Regeneration of peripheral nerves by neurotrophic factors is described by the present invention. In addition, neurotrophic factors can be used therapeutically in the treatment of neurodegenerative disorders associated with degeneration of a population of neurons in specific areas of the brain. The causes of Parkinson's disease are degeneration of dopaminergic neurons in the substantia nigra. Since prosaposin antibodies immunohistochemically label dopaminergic neurons in the substantia nigra on human preparations, it is possible to use the neurotropic peptides of the present invention in the treatment of Parkinson's disease. Corneal neuropathy and neurodegenerative eye disorders resulting in loss of vision in old age are also useful using the peptides of the present invention.

Dlouho se věřilo, že pro léčbu populace neuronů v mozku musí neurotropní faktory být podávány výhradně nitrolebečně, neboť tyto proteiny nejsou schopny překročit krevně-mozkovou bariéru, patent US 5 571 787 popisuje, že jodovaný neurotropní fragment dlouhý 18 aminokyselin odvozený ze saposinu C je schopen krevně-mozkovou bariérou projít. Peptidy podle navrhovaného vynálezu, které nejsou delší než 22 aminokyselin jsou také schopny touto bariérou •· « · · ···· • · · · ··· ··· • · · ·· · · • · · · ·····It has long been believed that for the treatment of a population of neurons in the brain, neurotrophic factors must be administered exclusively intracranially, as these proteins are unable to cross the blood-brain barrier, U.S. Pat. No. 5,571,787 discloses that an 18-amino acid iodine derived neurotrophic fragment derived from saposin C blood-brain barrier to cross. Peptides of the present invention that are no longer than 22 amino acids are also capable of this barrier. &Lt; tb > ______________________________________ > ·

W. · ·····« ···· · · · ·· · ·«· · projít a mohou tedy výt podávány nitrožilně, přičemž menší peptidy procházejí rychleji. Jiné populace neuronů, jako jsou motorické neurony, mohou také léčeny pomocí nitrožilních injekcí, ačkoli přímá injekci do cerebrospinální tekutiny je také použitelná jako alternativní cesta.W. may pass through and may therefore be administered intravenously, with smaller peptides passing faster. Other neuronal populations, such as motor neurons, can also be treated by intravenous injection, although direct injection into the cerebrospinal fluid is also useful as an alternative route.

Buňky mohou být léčeny pro dosažení lepší tvorby myelinu nebo pro zabránění demyelinizace, a to jakýmkoliv způsobem in vivo, ex vivo nebo in vitro. Nemoci způsobující demyelinizace nervových vláken, včetně roztroušené sklerózy, akutní roztroušené leukoencefalitidy, progresivní multifokální leukoencefalitidy, metachromatické leukodystrofie a adrenální leukodystrofíe mohou být zpomaleny nebo zastaveny aplikací neurotropních peptidů podle navrhovaného vynálezu k buňkám zasaženým chorobou. Uvažuje se i o procesu zvrácení demyelinizace nebo jiného poškození neuronů.Cells may be treated to achieve better myelin production or to prevent demyelination by any means in vivo, ex vivo or in vitro. Diseases causing nerve fiber demyelination, including multiple sclerosis, acute multiple leukoencephalitis, progressive multifocal leukoencephalitis, metachromatic leukodystrophy and adrenal leukodystrophy may be slowed or stopped by the application of the neurotropic peptides of the present invention to the cells affected by the disease. Consideration is also given to reversing demyelination or other neuronal damage.

Prostředky podle navrhovaného vynálezu mohou být použité in vitro jako nástroje výzkumu pro studium efektu neurotropních faktorů a látek ovlivňujících tvorbu myelinu. Praktičtější je však jejich použití v laboratoři jako složky buněčného média pro udržení růstu a životaschopnosti neuronů in vitro.The compositions of the present invention can be used in vitro as research tools to study the effect of neurotrophic factors and agents affecting myelin production. However, it is more practical to use them in the laboratory as a component of the cell medium to maintain neuronal growth and viability in vitro.

Peptidy podle navrhovaného vynálezu jsou připravovány na pevném podkladu za použití standardních postupů a Fmoc chemie podle automatizovaného protokolu pro pevnou fázi velmi dobře známého v současném stavu techniky (Traeciak et al., Tetrahedron Lett. 33 : 4557-4561, 1992) na syntetizátoru peptidů Protein Technologies Symphony. Zacyklené peptidy jsou odštěpovány z pevného podkladu pomocí roztoku TFA/voda/triisopropylsilan (95 : 2,5 : 2,5). Peptidy byly přečištěny pomocí HPLC v reverzní fázi na C-18 koloně pomocí 0,3 % kyseliny trifluorooctové (TFA) v acetonitrilu. Analýza pomocí hmotnostní spektrometrie pro sekvenci č. 5 (peptid A) a sekvenci č. 6 (peptid B) potvrdila, že byly připraveny syntetické cyklické peptidy (pro sekvenci č. 5 byla MH předpokládaná 1333 a získaná 1333, pro sekvenci č. 6 byla MH předpokládaná 1127 a získaná 1127).The peptides of the present invention are prepared on a solid support using standard procedures and Fmoc chemistry according to an automated solid phase protocol well known in the art (Traeciak et al., Tetrahedron Lett. 33: 4557-4561, 1992) on a Protein peptide synthesizer. Technologies Symphony. Cyclic peptides are cleaved from the solid support with TFA / water / triisopropylsilane (95: 2.5: 2.5) solution. The peptides were purified by reverse phase HPLC on a C-18 column using 0.3% trifluoroacetic acid (TFA) in acetonitrile. Mass spectrometry analysis for sequence # 5 (peptide A) and sequence # 6 (peptide B) confirmed that synthetic cyclic peptides were prepared (for sequence # 5, MH predicted 1333 and obtained 1333, for sequence # 6 was MH (assumed 1127 and obtained 1127).

Následující příklady jsou uvedeny pouze pro ilustraci a nemohou být brány jako limit myšlenky navrhovaného vynálezu.The following examples are given by way of illustration only and should not be construed as limiting the spirit of the invention.

PŘÍKLADY PROVEDENÍ VYNÁLEZUEXAMPLES OF EMBODIMENTS OF THE INVENTION

PŘÍKLAD 1. Stimulace růstu neuritů in vitroEXAMPLE 1. In vitro stimulation of neurite outgrowth

Neuroblastom NS20Y rostl v médiu DMEM osahujícím 10 % fetálního telecího séra (FCS). Buňky byly sebrány pomocí trypsinu a přeneseny na 30 mm Petriho misku na krycí sklíčka. Po 20 až 24 hodinách bylo médium nahrazeno 2 ml média DMEM obsahujícího 0,5 FCS s různými koncentracemi peptidů A, peptidů B nebo TX14 (A). Buňky byly kultivovány dalších 24 hodin, promyty v PBS a fixovány Bouinovým roztokem (nasycená vodná kyselina pikrová/formalin/ kyselina octová 15:5:1) po dobu 30 minut. Fixační roztok byl odstraněn, Buňky byly promyty v PBS a nárůst neuritů byl stanoven pod mikroskopem pomocí kontrastní fáze. Buňky s jedním nebo více jasně definovanými neurity, které jsou dlouhé nebo delší než je průměr buňky, byly spočteny jako pozitivní. Celkem bylo stanoveno 200 buněk v různých částech každé misky pro co nejpřesnější stanovení % neuronů tvořících neurit.NS20Y neuroblastoma was grown in DMEM medium containing 10% fetal calf serum (FCS). Cells were harvested with trypsin and transferred to a 30 mm Petri dish on coverslips. After 20-24 hours, the medium was replaced with 2 ml DMEM medium containing 0.5 FCS with varying concentrations of peptides A, peptides B or TX14 (A). Cells were cultured for an additional 24 hours, washed in PBS and fixed with Bouin solution (saturated aqueous picric acid / formalin / acetic acid 15: 5: 1) for 30 minutes. Fixation solution was removed, Cells were washed in PBS, and neurite outgrowth was determined under a microscope using a contrast phase. Cells with one or more clearly defined neurites that are longer or longer than the cell diameter were counted as positive. A total of 200 cells in different portions of each dish were determined to determine as accurately as possible the% neurite-forming neurites.

Všechny tři peptidy indukovaly tvorbu neuritů u NS20Y buněk. Hodnota Tj/2 (ED50) je koncentrace, při které bylo jako pozitivních bráno 50 % neuronů, a ta byla pro TX14 (A) a pro peptid B 1 ng/ml. Hodnota Ti/₂ pro peptid A byla 0,6 ng/ml. Z toho vyplývá, že peptid B je stejně účinný jako TX14 (A), zatímco peptid A je účinnější. To dokazuje, že zacyklené peptidy podle navrhovaného vynálezu mají lepší aktivitu ve srovnání se standardním „prosaptidem“.All three peptides induced neurite formation in NS20Y cells. The T 1/2 value (ED 50) is the concentration at which 50% of the neurons were taken as positive, and that for TX14 (A) and for peptide B was 1 ng / ml. The Ti / ₂ value for peptide A was 0.6 ng / ml. Thus, peptide B is as effective as TX14 (A), while peptide A is more effective. This demonstrates that the cyclic peptides of the present invention have better activity compared to the standard "prosaptide".

PŘÍKLAD 2: Blokování buněčné smrti in vitroEXAMPLE 2: Blocking cell death in vitro

Neuroblastom NS20Y byly kultivovány stejně jako v příkladu 1 a byly ponechány narůst na krycích sklíčkách v 0,5 % fetálním telecím séru po dobu 2 dní v přítomnosti nebo absenci TX14(A), peptidu A nebo peptidu B. Kultivační médim bylo odstraněno a do každé jamky byla přidána 0,2 % trypanová modř. Byly spočítány modře obarvené (mrtvé) buňky a byly stanoveny jako procento z celkové populace pomocí inverzního mikroskopu, kdy bylo v každém preparátu spočítáno 400 buněk. Průměrná odchylka duplicitních součtů byla 5 %. TX14(A), peptid A a peptid B snížily počet buněk obarvených trypanovou modří (mrtvých buněk). Hodnota Tj/₂(ED50) pro ochranu před programovanou smrtí u TX14(A) byla 1,0 ng/ml. Peptidy A aB byly účinnější, když jejich hodnota Ti/₂ byla 0,6 ng/ml a 0,8 ng/ml. To dokazuje, že zacyklené peptidy podle navrhovaného vynálezu mají lepší aktivitu při potlačování buněčné smrti ve srovnání se standardním „prosaptidem“.NS20Y neuroblastoma was cultured as in Example 1 and grown on coverslips in 0.5% fetal calf serum for 2 days in the presence or absence of TX14 (A), peptide A, or peptide B. The culture medium was removed and into each wells were added 0.2% trypan blue. Blue (dead) cells were counted and determined as a percentage of the total population using an inverted microscope where 400 cells were counted in each preparation. The average deviation of duplicate totals was 5%. TX14 (A), peptide A and peptide B reduced the number of cells stained with trypan blue (dead cells). The Tj / ₂ (ED50) value for protection from programmed death in TX14 (A) was 1.0 ng / ml. Peptides A and B were more effective when their Ti / ₂ was 0.6 ng / ml and 0.8 ng / ml. This demonstrates that the cyclic peptides of the present invention have better activity in suppressing cell death compared to the standard "prosaptide".

PŘIKLAD 3: myelinizační technika ex vivoEXAMPLE 3: ex vivo myelination technique

Cerebrální exptantáty byly vyjmuty z novorozené myši podle Satomi (Zool. Sci. 9:127-137, 1992). Rychlost růstu neuritů a jejich myelinizace byla pozorována během 22 dní v kultuře, během období, kdy mozek novorozence prochází neuronální diferenciací a začíná se myelinizovat. Cyklické deriváty saposinu C o délce 11 až 25 aminokyselin, které obsahovaly sekvenci č. 4 (10 pg/kg) byly přidáványdruhý den po vyjmutí explantátů (tři kontroly a tři ovlivněné vzorky) a rychlost růstu neuritů a myelinizace byla sledována mikroskopicky ve světlém poli pomocí videokamery. Osmý den bylo patrné, že kultury s přidanými peptidy jsou tenčí a více rozprostřené než kontrolní vzorky. V patnáctý den kultury s peptidem obsahovaly mnoho buněk s dlouhými výběžky na periferii explantátu, což u kontrolního vzorku nebylo patrné. Kultury s peptidem obsahovaly prokazatelně výše myelinovaných axonů v subkortikální bílé hmotě 22 den vzhledem k kontrolním vzorkům. To dokazuje, že zacyklené peptidy podle navrhovaného vynálezu mají lepší aktivitu při indukci myelinizace při diferenciaci mozku ex vivo.Cerebral extracts were removed from newborn mice according to Satomi (Zool. Sci. 9: 127-137, 1992). The rate of neurite outgrowth and myelination was observed within 22 days in culture, during a period in which the neonatal brain undergoes neuronal differentiation and begins to myelinate. Cyclic saposin C derivatives of 11 to 25 amino acids in length containing sequence No. 4 (10 pg / kg) were added the second day after the explants were removed (three controls and three treated samples) and neurite outgrowth and myelination were monitored microscopically in a bright field using camcorders. On day 8, it was apparent that the cultures with added peptides were thinner and more spread than the control samples. On the fifteenth day, the peptide cultures contained many cells with long protuberances at the periphery of the explante, which was not evident in the control sample. Peptide cultures contained demonstrably higher myelinated axons in subcortical white matter 22 days relative to control samples. This demonstrates that the cyclic peptides of the present invention have better activity in inducing myelination in brain differentiation ex vivo.

PŘÍKLAD 4: Prevence myelinizaceEXAMPLE 4: Prevention of myelination

Ochrana Schwannových buněk před smrtí souvisí s prevencí demyelinizace. Schwannovy buňky mají silnou myelinovou pochvu. Přidáním cyklického peptidu odvozeného od saposinu C s 11 až 25 aminokyselinami obsahujícím sekvenci č. 4, ke Schwannovým buňkám v kultuře potlačuje míru jejich umírání v závislosti na dávce a stimuluje inkorporaci sulfatidů, myelin specifických lipidů do Schwannových buněk. To prokazuje, že cyklické peptidy podle navrhovaného vynálezu mohou zabraňovat demyelinizaci díky ochraně Schwannových buněk před smrtí.Protection of Schwann cells from death is associated with the prevention of demyelination. Schwann cells have a strong myelin sheath. Addition of a saposin C-derived cyclic peptide of 11 to 25 amino acids containing sequence No. 4 to Schwann cells in culture suppresses their dose-dependent death rate and stimulates the incorporation of sulfatides, myelin-specific lipids into Schwann cells. This demonstrates that the cyclic peptides of the present invention can prevent demyelination by protecting Schwann cells from death.

PŘÍKLAD 5: Použití peptidů při léčbě traumatické ischemie lézí v CNSEXAMPLE 5: Use of peptides in the treatment of traumatic ischemia of lesions in the CNS

Lidé trpící traumatickými lézemi v prodloužené míše dostávali intracerebrospinálně nebo přímo injekce asi 100 pg/ml cyklického peptidu odvozeného od saposinu C s 11 až 25 aminokyselinami obsahujícím sekvenci č. 4, ve sterilním fyziologickém roztoku, nebo v takové lékové formě, která umožňuje pomalé plynulé uvolňování peptidu v místě lézí. Zlepšení stavu pacientů bylo hodnoceno podle zlepšení funkčnosti jejich motorických nervů (např. podle pohyblivosti končetin). Léčba pokračovala dokud pacienti nepřestali vykazovat zlepšování.People suffering from traumatic lesions in the prolonged spinal cord received intracerebrospinally or directly injections of about 100 pg / ml of a saposin C-derived cyclic peptide of 11 to 25 amino acids comprising sequence # 4, in sterile saline, or in a dosage form that allows slow sustained release peptide at the lesion site. Improvement of patients' condition was assessed by improving the functionality of their motor nerves (eg limb mobility). Treatment was continued until patients no longer showed improvement.

PŘÍKLAD 6: Použití peptidů při léčbě demyelinizačních poruchEXAMPLE 6: Use of peptides in the treatment of demyelinating disorders

Pacientům s diagnostikovanou roztroušenou sklerózou v ranném stádiu byl podáván cyklický peptidu odvozený od saposinu C s 11 až 25 aminokyselinami obsahujícím sekvenci č. 4, pomocí přímé intravenózní injekce do mozkomíšní tekutiny, při použití stejných dávek jako v příkladu 3. Dávky jsou podávány denně po dobu 2 až 5 dnů, nebo týdně a zlepšení v svalové síle, koordinaci kosterního svalstva a myelinizaci (jak bylo stanoveno pomocí MRI) bylo vyhodnocováno.Patients diagnosed with multiple sclerosis at an early stage were administered a saposin C-derived peptide of 11 to 25 amino acids containing sequence # 4, by direct intravenous injection into cerebrospinal fluid, using the same doses as in Example 3. Doses are administered daily for a period of time. 2-5 days or week and the improvement in muscle strength, skeletal muscle coordination and myelination (as determined by MRI) were evaluated.

PŘÍKLAD 7: potlačení neuropatické bolesti u Chungova krysího modeluEXAMPLE 7: Suppression of neuropathic pain in the Chung rat model

Tento příklad popisuje effekt intratekální injekce cyklického peptidu odvozeného od saposinu C sil až 25 aminokyselinami obsahujícím sekvenci č. 4, u Chungova experimentálního krysího modelu periferní neuropatické bolesti. Každý peptid je chemicky syntetizován, přečištěn a • ···· · · · · • · ···· ·· ···· ··· · · ·· · · rozpuštěn v sterilním PBS a jeho pH je vyrovnáno na neutrální hodnotu. Chirurgický proces popsaný dříve v Kim et al., (Pain, 50:335, 1992) byl proveden na samcích laboratorních potkanů aby byli převedeni do alodynního stavu. Do míchy byl zaveden spinální katetr dva týdny po chirurgickém zákroku. Pět následujících dní byly podávány peptidy v množství 0,007, 0,07 a 0,7 pg/zvíře. Změny tlaku byly poté stanoveny za použití kalibrovaného von Freyova vlákna.Delší čas nezbytný pro zířata aby odtáhla končetinu jako reakci na tlak, který vyvolával neuropatickou bolest. Peptidy podle navrhovaného vynálezu značně zvyšovaly míru tlaku, což naznačuje značné potlačení neuropatické bolesti.This example describes the effect of intrathecal injection of a saposin C-derived cyclic peptide with up to 25 amino acids containing sequence # 4, in the Chung experimental rat model of peripheral neuropathic pain. Each peptide is chemically synthesized, purified, and dissolved in sterile PBS and its pH is neutralized. . The surgical process described previously in Kim et al., (Pain, 50: 335, 1992) was performed in male rats to be brought to an allodyne state. A spinal catheter was inserted into the spinal cord two weeks after surgery. For the next five days, the peptides were administered at 0.007, 0.07 and 0.7 pg / animal. The pressure changes were then determined using a calibrated von Frey fiber. More time was required for the animals to withdraw the limb in response to pressure that caused neuropathic pain. The peptides of the present invention greatly increased the level of pressure, suggesting a significant suppression of neuropathic pain.

PŘÍKLAD 8: Léčba senzorické neuropatieEXAMPLE 8: Treatment of Sensory Neuropathy

Myším byl podán taxol a tím u nich byla vyvolána senzorická neuropatie. Těmto myším, kterým byl dříve podán taxol, byla po té podána dávka 50 pg/kg, ΙΟΟρ/kg nebo 250 pg/kg cyklického peptidu odvozeného od saposinu C, který obsahuje 11 až 25 aminokyselin a obsahuje sekvence uvedené jako sekvence č. 4. Ztráta citlivosti na teplotu byla měřena použitím Hargreavesova senzorického testovacího přístroje, pomocí něhož byla měřena míra senzorické neuropatie. Každá ze tří uvedených dávek peptidu byla shledána účinnou v prevenci nebo pro léčbu senzorické neuropatie vyvolané taxolem u myší. Z těchto závěrů vyplývá, že syntetické peptidy odvozené od saposinu C podle navrhovaného vynálezu jsou schopné účinně potlačovat senzorickou neuropatii.Mice were given taxol and induced sensory neuropathy. Those mice previously administered taxol were then dosed with 50 pg / kg, ΙΟΟρ / kg, or 250 pg / kg of a saposin C-derived cyclic peptide of 11 to 25 amino acids and comprising the sequences shown in SEQ ID NO: 4. Loss of temperature sensitivity was measured using a Hargreaves sensory tester to measure sensory neuropathy. Each of the three doses of peptide was found to be effective in preventing or treating taxol-induced sensory neuropathy in mice. These conclusions suggest that the saposin C-derived synthetic peptides of the present invention are capable of effectively suppressing sensory neuropathy.

PŘÍKLAD 9: Potlačení neuropatické bolesti u diabetických potkanůEXAMPLE 9: Suppression of neuropathic pain in diabetic rats

Tento příklad popisuje účinek cyklického derivátu saposinu C, který obsahuje mezi 11 až 25 aminokyselinami a zahrnuje sekvenci uvedenou jako sekvence č. 4 po intraperitoneálním podání u krysího modelu diabetické neuropatie. U laboratorních potkanů byl vyvolán diabetes jednou intraperitoneální injekcí streptozotocinu (50pg/kg tělesné váhy, čerstvě rozpuštěno v 0,9 % sterilním PBS), který zničí pankreatické β buňky a tím indukuje inzulínový deficit, jak popisuje Calcutt et Al. (Pain, 68:293-299, 1996). Po dvou dnech byl potvrzen diabetes u potkanů, kterým byl injikován streptozotocin pomocí stanovení hladiny krevní glukózy. Zvířata, kterým byl podán streptozotocin, ale jejichž hladina krevní glukózy byla nižší než 15 mmol/1 byla vyřazena z následujících studií podle běžně akceptované definice nepropagující hyperglykémie při studiích s diabetózními potkany.This example describes the effect of a cyclic saposin C derivative that contains between 11 to 25 amino acids and comprises the sequence shown as SEQ ID NO: 4 after intraperitoneal administration in a rat model of diabetic neuropathy. In rats, diabetes was induced by a single intraperitoneal injection of streptozotocin (50 µg / kg body weight, freshly dissolved in 0.9% sterile PBS) that destroys pancreatic β cells and thereby induces insulin deficiency as described by Calcutt et al. (Pain, 68: 293-299,1996). After two days, diabetes was confirmed in streptozotocin-injected rats by determining blood glucose levels. Animals treated with streptozotocin but whose blood glucose levels were less than 15 mmol / l were excluded from the following studies according to the commonly accepted definition of non-propagating hyperglycemia in studies in diabetic rats.

Jak diabetické, tak kontrolní myši byly studovány 8 týdnů analýzou jejich reakcí na nebezpečnou chemikálii - formalin jako indikátor alodinie (Calcutt et Al., viz. výše). Zkráceně, potkanům byla • ♦ podkožně vstříknuta injekce čerstvě připraveného formalinu (50 μΐ 0,5 roztoku ve sterilním PBS) na vrchní stranu jejich pravé zadní tlapky. Tato koncentrace formalinu indukuje submaximální reakci v chování u kontrolních potkanů a umožňuje detekci hperalgézie u diabetických potkanů během fází Q a 2 (Calucutt et Al., Eur. J. Pharmacol., 286:189-197, 1995). Zvířata byla přenesena do pozorovací komory, konstruované tak, aby byla umožněna nepřetržitá vizualizace jejich končetiny. Počet trhnutí během jedné minuty bylo počítáno v pětiminutovém intervalu následujících 60 minut pozorovatelem, který nevěděl, která skupina zvířat byla léčena. Fáze 1 je definována jako původní měření cukání (1 až 2 a 5 až 6 minut po injekci), fáze Q (klidová) byla podle měření v 10 až 11, 15 až 16 a 20 až 21 minut a fáze 2, jako všechna následující měření po injekci, jak bylo dříve uvedeno u studií diabetických potkanů (viz. např. Malmberg et al., Neurosci. Lett. 161:45-48, 1993). Porovnání aktivity během těchto fází bylo stanoveno jako součet škubnutí během této fáze.Both diabetic and control mice were studied for 8 weeks by analyzing their response to the hazardous chemical formalin as an indicator of allodynia (Calcutt et al., Supra). In short, rats were injected subcutaneously with a freshly prepared formalin (50 μΐ 0.5 solution in sterile PBS) on top of their right hind paw. This concentration of formalin induces a submaximal behavioral response in control rats and allows the detection of hperalgesia in diabetic rats during phases Q and 2 (Calucutt et al., Eur. J. Pharmacol., 286: 189-197, 1995). The animals were transferred to an observation chamber designed to allow continuous visualization of their limb. The number of twitches per minute was counted at a five minute interval of 60 minutes by an observer who did not know which group of animals was treated. Phase 1 is defined as the original measurement of twitching (1 to 2 and 5 to 6 minutes after injection), Phase Q (resting) was measured at 10 to 11, 15 to 16 and 20 to 21 minutes and Phase 2 as all subsequent measurements post-injection, as previously reported in diabetic rat studies (see, e.g., Malmberg et al., Neurosci. Lett. 161: 45-48, 1993). Comparison of activity during these phases was determined as the sum of the twitches during this phase.

Potkani s diabetem byli rozděleni do 2 skupin o 4 zvířatech, kdy každé bylo podáváno PBS nebo peptid odvozený od saposinu Co 11 až 25 aminokyselinách, který obsahuje sekvence uvedené jako sekvence č. 4. Dvě hodiny před podáním 0,5 % formalinu bylo diabetickým potkanům podáno buď PBS, nebo 200 pg/kg peptidů intraperitoneálně. Podání peptidů zcela potlačí abnormální křeče během fáze 1 a křeče ve fázi 2 potlačí o 70 %. Z toho vyplývá, že podání peptidů potlačí bolest způsobenou injekcí formalinu a zlepší motorické funkce neuronů u krysího modelu bolestivé diabetické neuropatie.Diabetic rats were divided into 2 groups of 4 animals each administered PBS or a saposin Co-derived peptide of 11 to 25 amino acids containing the sequences shown in SEQ ID NO: 4. Two hours prior to administration of 0.5% formalin was diabetic rats. given either PBS or 200 µg / kg peptides intraperitoneally. Peptide administration completely suppressed abnormal convulsions during phase 1 and suppressed convulsions in phase 2 by 70%. Accordingly, peptide administration suppresses the pain caused by formalin injection and improves motor neuronal function in a rat model of painful diabetic neuropathy.

«· ···· ·· « · »· ·· · ··· «·«· ··· ·· ·« ·· ···«· ······························

VÝPIS SEKVENCÍ (1) OBECNÉ INFORMACE (i) APLIKANT: MYELOS CORPORATION (ii) NÁZEV VYNÁLEZU: CYKLICKÝ PEPTID, PROSTŘEDEK, ZPŮSOB INDUKCE MYELINIZACE, ZPŮSOB POTLAČENÍ DEGENERACE NEURONŮ A ZPŮSOB LÉČBY (iii) POČET SEKVENCÍ: 6 (iv) KORESPONDENČNÍ ADRESA:DESCRIPTION OF SEQUENCES (1) GENERAL INFORMATION (i) APPLICANT: MYELOS CORPORATION (ii) NAME OF THE INVENTION: CYCLIC PEPTID, MEANS, METHOD OF INDICATION OF MYELINIZATION, METHOD OF REPRESSION OF DEGENERATION OF NEURONS AND METHODS OF TREATMENT (6) METHODS:

(A) ADRESA: Knobbe, Martens, Olson & Bear (B) ULICE: 620 Newport Centre Drive, 16. poschodí (C) MĚSTO: Newport Beach (D) STÁT: CA (E) ZEMĚ: USA (F) ZIP: 92660 (v) POČÍTAČOVÝ FORMÁT:(A) ADDRESS: Knobbe, Martens, Olson & Bear (B) STREET: 620 Newport Center Drive, 16th Floor (C) CITY: Newport Beach (D) COUNTRY: CA (E) COUNTRY: USA (F) ZIP Code: 92660 (v) COMPUTER FORMAT:

(A) TYP MÉDIA: disketa (B) POČÍTAČ: kompatibilní s IBM (C) operační systém: Windows (D) SOFTWARE: FastSEQ for Windows Version 2.0b (vi) ÚDAJE O APLIKACI (A) ČÍSLO APLIKACE:(A) MEDIA TYPE: diskette (B) COMPUTER: IBM compatible (C) operating system: Windows (D) SOFTWARE: FastSEQ for Windows Version 2.0b (vi) APPLICATION DATA (A) APPLICATION NUMBER:

(B) DATUM PODÁNÍ:(B) DATE OF ADMINISTRATION:

(C) KLASIFIKACE:(C) CLASSIFICATION:

(vii) ÚDAJE O PŘEDCHOZÍ APLIKACI (A) ČÍSLO APLIKACE: 60/098 359 ·· · · · · ·· • · · · ·· · ··« (B) DATM PODÁNÍ: 28. 7. 1998 (vii) ÚDAJE O PRÁVNÍM ZÁSTUPCI:(vii) PREVIOUS APPLICATION DATA (A) APPLICATION NUMBER: 60/098 359 (B) SUBMISSION DATE: 28/07/1998 (vii) ABOUT THE LEGAL REPRESENTATIVE:

(A) JMÉNO: Bartfield, Neil S (B) ČÍSLO REGISTRACE: 39 901 (C) REFERENCE / ČÍSLO KANCELÁŘE: MYELOS.014PR (ix) TELEKOMUNIKAČNÍ INFORMACE:(A) NAME: Bartfield, Neil S (B) REGISTRATION NUMBER: 39 901 (C) REFERENCE / OFFICE NUMBER: MYELOS.014PR (ix) TELECOMMUNICATION INFORMATION:

(A) TELEFON: 619 235 8550 (B) TELEFAX: 619 235 0176 (C) TELEX:(A) TELEPHONE: 619 235 8550 (B) TELEFAX: 619 235 0176 (C) TELEX:

(2) INFORMACE O SEKVENCI Č. 1 :(2) INFORMATION ON SEQUENCE 1:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(D) DÉLKA: 21 aminokyselin (E) TYP: aminokyselina (F) POČET ŘETĚZCŮ: jeden (G) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (xi) OZNAČENÍ SEKVENCE: sekvence č.l(D) LENGTH: 21 amino acids (E) TYPE: amino acid (F) NUMBER OF CHAINS: one (G) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (xi) SEQUENCE LABEL: sequence no.1

Cys Glu Phe Leu Val Lys Glu Val Thr Lys Leu Ile Asp Asn Asn LysLys Leu Ile Asp Asn Asn Lys

10 1510 15

Thr Glu Lys Glu Lys (2) INFORMACE O SEKVENCI Č. 2:Thr Glu Lys Glu Lys (2) SEQ ID NO: 2:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A)DÉLKA: 18 aminokyselin(A) LENGTH: 18 amino acids

(B) TYP: aminokyselina (C) POČET ŘETĚZCŮ: jeden (H) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (xi) OZNAČENÍ SEKVENCE: sekvence č.2(B) TYPE: amino acid (C) NUMBER OF CHAINS: one (H) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (xi) SEQUENCE IDENTIFICATION: sequence No.2

Tyr Lys Glu Val Thr Lys Leu Ile Asp Asn Asn Lys Thr Glu Lys GluLys Glu Lys Glu Lys Glu Lys Glu Lys Glu

10 1510 15

Ile Leu (2) INFORMACE O SEKVENCI Č. 3:Ile Leu (2) SEQ ID NO 3:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DÉLKA: 12 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) POČET ŘETĚZCŮ: jeden (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (xi) OZNAČENÍ SEKVENCE: sekvence č.3(A) LENGTH: 12 amino acids (B) TYPE: amino acid (C) NUMBER OF CHAINS: one (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (xi) SEQUENCE LABEL: sequence no.3

Leu Ile Asp Asn Asn Lys Thr Glu Lys Glu Ile LeuLeu Ile Asp Asn Asn Lys Thr

5 10 (2) INFORMACE O SEKVENCI Č. 4:5 10 (2) SEQ ID NO 4:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DÉLKA: 11 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina(A) LENGTH: 11 amino acids (B) TYPE: amino acid

(C) POČET ŘETĚZCŮ: jeden (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: peptid (ix) CHARAKTERISTIKA:(C) NUMBER OF CHAINS: one (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (ix) CHARACTERISTICS:

(A) JMÉNO / KLÍČ: jiný (B) UMÍSTĚNÍ: 1....2 (D) DALŠÍ INFORMACE: Ala, Leu, Ile, Val, Tyr, Trp, Phe nebo Met (A) JMÉNO / KLÍČ: jiný (B) UMÍSTĚNÍ: 3....3 (D) DALŠÍ INFORMACE: Asp, Glu, Lys nebo Arg (A) JMÉNO / KLÍČ: jiný (B) UMÍSTĚNÍ: 6....6 (D) DALŠÍ INFORMACE: jakákoliv aminokyselina (A) JMÉNO / KLÍČ: jiný (B) UMÍSTĚNÍ: 8....8 (D) DALŠÍ INFORMACE: Asp nebo Glu (A) JMÉNO/KLÍČ: jiný (B) UMÍSTĚNÍ: 9....9 (D) DALŠÍ INFORMACE: jakákoliv aminokyselina (A) JMÉNO/KLÍČ: jiný (B) UMÍSTĚNÍ: 10....11 (D) DALŠÍ INFORMACE: Ala, Leu, Ile, Val, Tyr, Trp, Phe nebo Met (xi) OZNAČENÍ SEKVENCE: sekvence Č.4(A) NAME / KEY: other (B) LOCATION: 1 .... 2 (D) ADDITIONAL INFORMATION: Ala, Leu, Ile, Val, Tyr, Trp, Phe or Met (A) NAME / KEY: other (B) ) LOCATION: 3 .... 3 (D) ADDITIONAL INFORMATION: Asp, Glu, Lys or Arg (A) NAME / KEY: other (B) LOCATION: 6 .... 6 (D) ADDITIONAL INFORMATION: any amino acid ( A) NAME / KEY: other (B) LOCATION: 8 .... 8 (D) ADDITIONAL INFORMATION: Asp or Glu (A) NAME / KEY: other (B) LOCATION: 9 .... 9 (D) MORE INFORMATION: any amino acid (A) NAME / KEY: other (B) LOCATION: 10 .... 11 (D) ADDITIONAL INFORMATION: Ala, Leu, Ile, Val, Tyr, Trp, Phe or Met (xi) SEQUENCE MARKING: sequence No. 4

Xaa Xaa Xaa Asn Asn Xaa Thr Xaa Xaa Xaa XaaXaa Xaa Xaa Asn Asa Xaa Thr Xaa Xaa Xaa Xaa

5 10 (2) INFORMACE O SEKVENCI Č. 5:5 10 (2) SEQ ID NO 5:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DÉLKA: 11 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) POČET ŘETĚZCŮ: jeden (D) TOPOLOGIE: kruhová (ii) TYP MOLEKULY: peptid (xi) OZNAČENÍ SEKVENCE: sekvence Č.5(A) LENGTH: 11 amino acids (B) TYPE: amino acid (C) NUMBER OF CHAINS: one (D) TOPOLOGY: circular (ii) MOLECULA TYPE: peptide (xi) SEQUENCE LABEL: sequence No.5

Leu Leu Asp Asn Asn Lys Thr Glu Lys Leu TyrLeu Leu Asp Asn Lys Thr Glu Lys Leu Tyr

5 10 (2) INFORMACE O SEKVENCI Č. 6:5 10 (2) SEQ ID NO 6:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DÉLKA: 11 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) POČET ŘETĚZCŮ: jeden (D) TOPOLOGIE: kruhová (ii) TYP MOLEKULY: peptid (xi) OZNAČENÍ SEKVENCE: sekvence č.6(A) LENGTH: 11 amino acids (B) TYPE: amino acid (C) NUMBER OF CHAINS: one (D) TOPOLOGY: circular (ii) MOLECULA TYPE: peptide (xi) SEQUENCE LABEL: sequence no.6

Leu Ile Asp Asn Asn Ala Thr Glu Glu Ile LeuLeu Ile Asn Asn Ala Thr Glu Ilu Leu

Claims

PATENT CLAIMS

A cyclic peptide having about 11 to 25 amino acids and comprising the sequence X1X2X3NN X4TX5X6X7X8, wherein X 1 is a hydrophobic amino acid (alanine, leucine, isoleucine, valine, tyrosine, tryptophan, phenylalanine or methionine), X 2 is a hydrophobic amino acid, X ₃ is acid glutamic acid, lysine or arginine, N is asparagine, _X4 is any amino acid, threonine is T, X5 is glutamic acid or aspartic acid, X (, is any amino acid, _X7 is a hydrophobic amino acid and X is a hydrophobic amino acid.

The peptide of claim 1, wherein the peptide has the amino acid sequence shown as SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 6.

A composition comprising the peptide of claim 1, wherein the peptide is in membrane-enclosed ampoules.

A composition comprising the peptide of claim 1, wherein the composition is in the form of a controlled release material.

A composition comprising the peptide of claim 1, wherein the peptide is in lyophilized form.

6. A composition comprising the peptide of claim 1, wherein the peptide is in the form of liposomes.

7. A composition comprising the peptide of claim 1, wherein the peptide is in a form suitable for topical application.

8. A composition comprising the peptide of claim 1, wherein the peptide is in unit dosage form.

9. A method for inducing or suppressing demyelination in a mammal, comprising:

administering a pharmaceutically effective amount of a cyclic peptide suppressing demyelination, which is comprised of about 11 to 25 amino acids and including the sequence X1X2X3NNX4TX5X6X7X8 wherein X] is a hydrophobic amino acid (alanine, leucine, isoleucine, valine, tyrosine, tryptophan, phenylalanine or methionine) X ₂ is a hydrophobic amino acid, X ₃ is aspartic acid, glutamic acid, lysine or arginine, N is asparagine, X4 is any amino acid, T is • threonine, X ₅ is glutamic or aspartic acid, Xe is any amino acid, X ₇ is a hydrophobic amino acid and Xg is a hydrophobic amino acid, a mammal suffering from demyelination.

The method of claim 9, wherein the demyelination is caused by multiple sclerosis, ischemic injury, or traumatic injury.

The method of claim 9, wherein the administration is by intravenous, intramuscular, intradermal, subcutaneous, intracranial, intracerebrospinal and topical administration.

The method of claim 9, wherein the peptide is administered in a pharmaceutically acceptable carrier.

The method of claim 9, wherein the peptide is encapsulated in a lamellar structure.

The method of claim 9, wherein the peptide has the sequence shown as SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 6.

15. The method of claim 9, wherein the mammal is a human.

16. A method of suppressing neuronal degeneration or promoting neurite outgrowth in nerve tissue comprising:

contacting nerve tissue affected by this degeneration with an effective amount of a cyclic peptide that suppresses neuronal degeneration, which is composed of about 11 to 25 amino acids and comprises the sequence X ₁ X ₂ X ₃ NNX ₄ TX ₅ X ₆ X ₇ X ₈ wherein X 1 is a hydrophobic amino acid (alanine, leucine , isoleucine, valine, tyrosine, tryptophan, phenylalanine or methionine), X ₂ is a hydrophobic amino acid, X 3 is aspartic acid, glutamic acid, lysine or arginine, N is asparagine, X ₄ is any amino acid, T is threonine, X5 is glutamic acid or aspartic acid, X ₆ is any amino acid, _X7 is a hydrophobic amino acid, and Xg is a hydrophobic amino acid

17. The method of claim 16, wherein the administration is by intravenous, intramuscular, intradermal, subcutaneous, intracranial, intracerebrospinal and topical administration.

• · · ····· 4 4 4 4 · · · · · · · ·

The method of claim 16, wherein the peptide is administered in a pharmaceutically acceptable carrier.

The method of claim 16, wherein the peptide is encapsulated in a lamellar structure.

The method of claim 16, wherein the peptide has the sequence shown as SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 6.

21. The method of claim 16 wherein the mammal is a human.

22. A method of treating neuropathic pain in a mammal in need thereof, comprising:

administering an effective amount of a cyclic peptide effective to reduce neuropathic pain comprising about 11 to 25 amino acids and comprising the sequence X1X2X3NNX4TX5X6X7X8, wherein X1 is a hydrophobic amino acid (alanine, leucine, isoleucine, valine, tyrosine, tryptophan, phenylalanine) or methionine X2 is a hydrophobic amino acid, X ₃ is aspartic acid, glutamic acid, lysine or arginine, N is asparagine, X4 is any amino acid, T is threonine, X ₅ is glutamic or aspartic acid, X ₆ is any amino acid, X ₇ is hydrophobic amino acid and Xg is a hydrophobic amino acid, a mammal suffering from a neurodegenerative disease.

23. The method of claim 22, wherein the administration is by intravenous, intramuscular, intradermal, subcutaneous, intracranial, intracerebrospinal and topical administration.

24. The method of claim 22, wherein the peptide is administered in a pharmaceutically acceptable carrier.

25. The method of claim 22, wherein the peptide is enclosed within a lamellar structure.

26. The method of claim 22, wherein the peptide has the sequence shown as SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 6.

27. The method of claim 22, wherein the mammal is a human.

• • no no * * * * * * * * * * * * *

28th cyclic peptide composed of about 11 to 25 amino acids and containing a sequence X1X2X3NNX4TX5X6X7X8 wherein X] is a hydrophobic amino acid (alanine, leucine, isoleucine, valine, tyrosine, tryptophan, phenylalanine or methionine), X2 is a hydrophobic amino acid, _X3 is aspartic acid , glutamic acid, lysine or arginine, N is asparagine, X ₄ is any amino acid, T is threonine, X ₅ is glutamic or aspartic acid, X ₆ is any amino acid, X7 is a hydrophobic amino acid and X ₈ is a hydrophobic amino acid useful for induction myelination, or suppression of demyelination in mammals.

29. The peptide of claim 28, wherein the peptide has the sequence shown as SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 6.

30th cyclic peptide composed of about 11 to 25 amino acids and containing a sequence X1X2X3NNX4TX5X6X7X8 wherein X] is a hydrophobic amino acid (alanine, leucine, isoleucine, valine, tyrosine, tryptophan, phenylalanine or methionine), X2 is a hydrophobic amino acid, _X3 is aspartic acid , glutamic acid, lysine or arginine, N is asparagine, X ₄ is any amino acid, T is threonine, X ₅ is glutamic or aspartic acid, Xe is any amino acid, X7 is a hydrophobic amino acid and X ₈ is a hydrophobic amino acid useful for neuronal suppression degeneration and promoting neurite outgrowth.

31. The peptide of claim 30, wherein the peptide has the sequence shown as SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 6.

32. The cyclic peptide of about 11-25 amino acids and containing a sequence X1X2X3NNX4TX5X6X7X8, wherein X is a hydrophobic amino acid (leucine, isoleucine, valine, tyrosine, tryptophan, phenylalanine or methionine), X2 is a hydrophobic amino acid, _X3 is aspartic acid, glutamic acid, lysine or arginine, N is asparagine, X ₄ is any amino acid, T is threonine, X5 is glutamic or aspartic acid, Xe is any amino acid, X ₇ is a hydrophobic amino acid and X ₈ is a hydrophobic amino acid useful for treating neuropathic pain .

33. The peptide of claim 32, wherein the peptide has the sequence shown as SEQ ID NO: 5 or SEQ ID NO: 6.