CZ20014689A3

CZ20014689A3 - Method for selecting a lactobacillus strain for the preservation of green fodder, and preservation of green fodder

Info

Publication number: CZ20014689A3
Application number: CZ20014689A
Authority: CZ
Inventors: Eija Skyttä; Auli Haikara; Wright Atte Von; Seija Jaakkola; Pekka Huhtanen; Taina Jalava
Original assignee: Valtion Teknillinen Tutkimuskeskus; Maatalouden Tutkimuskeskus
Priority date: 1999-06-24
Filing date: 2000-06-21
Publication date: 2002-05-15
Also published as: FI991435A; WO2001000043A1; PL352407A1; FI991435A0; AU5537100A; EP1211953A1

Abstract

The invention concerns a method for selecting a lactic acid bacterial strain for the preservation of green fodder, in which method one or more parameters describing fermentation purity and/or speed of the decomposition reaction is/are determined in a substrate simulating a forage matrix and containing an addition of a lactic acid bacterial preparation being investigated, and a lactic acid bacterial strain is selected that during a given period of time reduces the amount of ammonium nitrogen, which is measured. The invention also concerns a method for the preservation of green fodder, a lactic acid bacterial strain intended for the preservation of green fodder, and a green fodder preserved by this method.

Description

Způsob výběru kmene laktobacilu pro konzervaci zelené píce a konzervace zelené píceMethod for selecting a lactobacillus strain for green fodder conservation and green fodder conservation

Oblast technikyTechnical field

Tento vynález se týká způsobu výběru kmene baktérie mléčného kvašení pro konzervaci zelené píce, způsobu konzervace zelené píce, použití tímto způsobem vybraného bakteriálního kmene mléčného kvašení pro konzervaci zelené píce a zelené píce konzervované tímto způsobem.The present invention relates to a method of selecting a lactic acid bacterial strain for preserving green forage, a method of preserving green forage, using a bacterial lactic acid bacterial strain selected for preserving green forage, and green forage preserved by this method.

Sklizeň a zpracování zelené píce, například luční píce, ve formě siláže pro krmení v zimní sezóně téměř zcela nahradilo výrobu sena. Důležitým nezbytným předpokladem pro široké využívání siláže je, aby z hlediska konzervace měla dobrou kvalitu.Harvesting and processing of green fodder, such as meadow fodder, in the form of silage for feeding in the winter season almost completely replaced hay production. An important prerequisite for the widespread use of silage is that it is of good conservation quality.

Dosavadní stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION

Výroba píce ve formě tak zvané zhutněné (kompaktní) siláže bez konzervačních prostředků často vede k poruše silážního procesu; v důsledku toho pak píce nedosahuje kvalitativních požadavků.Production of forage in the form of so-called compacted (compact) silage without preservatives often results in failure of the silage process; as a result, the forage does not meet the quality requirements.

Při použití konzervačních prostředků na bázi kyselin se zpravidla dosahuje dobré kvality píce i v obtížných podmínkách silážování. Nej lepší známý způsob konzervace kyselinami je způsob AIV, při které se k siláži přidávají organické anebo anorganické kyseliny pro snížení jejího pH výhodně na 4. Použitá kyselina je zpravidla kyselina mravenčí v množství asi 4 1/t trávy (100% kyselina). Použití kyselin však přináší určité nedostatky, jako je korozívní účinek kyselin.When using acid-based preservatives, good forage quality is usually achieved even under difficult silage conditions. The best known method of acid preservation is the AIV process, wherein organic or inorganic acids are added to the silage to lower its pH preferably to 4. The acid used is generally formic acid in an amount of about 4 L / t of grass (100% acid). However, the use of acids presents certain drawbacks, such as the corrosive effect of acids.

Použití tak zvaných biologických konzervačních prostředků na základě baktérie mléčného kvašení a/nebo enzymů má za cíl podnítit vznik mléčné kyseliny přirozenou fermentací siláže a tak zlepšit její trvanlivosti (patent FI 82354). Může být možné ovlivnit složení mléka cestou • · ··· · biologické konzervace krmivá. I z hlediska přírodní produkce se biologická konzervace považuje za lepší alternativu než konzervace kyselinou. V důsledku toho stále roste počet komerčně nabízených iniciačních kultur pro biologickou konzervaci zelené píce, ale vlastnosti komerčních kmenů a jejich speciální znaky z hlediska silážování nejsou často dostatečně známy. Znalost těchto vlastností je předběžnou podmínkou pro řízený proces silážování a proto je tu problém jak zvolit nejlepší možný kmen pro výrobu siláže, když se kvalita použité suroviny může měnit v širokých mezích. Navíc se například nepřítomnost proteolytické aktivity, jež je jedním z kritérií pro výběr baktérie mléčného kvašení používané při silážování, často stanovuje na laboratorním substrátu, který neobsahuje bílkovinné sloučeniny obsažené v píci, takže výsledky stanovení nelze považovat za dostatečně spolehlivé.The use of so-called biological preservatives based on lactic acid bacteria and / or enzymes aims to stimulate lactic acid formation by natural fermentation of silage and thus improve its shelf life (patent FI 82354). It may be possible to influence the milk composition through the biological preservation of feed. Even from a natural production point of view, biological preservation is considered a better alternative than acid preservation. As a result, the number of commercially available initiation cultures for the biological preservation of green fodder is increasing, but the characteristics of commercial strains and their special silage characteristics are often not sufficiently known. Knowledge of these properties is a prerequisite for a controlled silage process and therefore there is a problem of choosing the best possible silage strain when the quality of the raw material used can vary within wide limits. In addition, for example, the absence of proteolytic activity, which is one of the criteria for selecting lactic acid bacteria used in silage, is often determined on a laboratory substrate that does not contain protein compounds contained in forage, so that the results of the assay cannot be considered sufficiently reliable.

V současnosti se nepoužívá žádného spolehlivého . způsobu, který by umožňoval určit předem rychle a spolehlivě účinky určité baktérie mléčného kvašení na siláž. Problémem je, že kvalitu siláže lze zjistit pouze po ukončení časově náročného procesu silážování.No reliable is currently used. a method which makes it possible to determine in advance quickly and reliably the effects of a particular lactic acid bacterium on silage. The problem is that silage quality can only be determined after the time-consuming silage process has been completed.

Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION

Cílem tohoto patentu je odstranit výše uvedené problémy.The aim of this patent is to overcome the above problems.

Specifickým cílem tohoto vynálezu je najít způsob výběru kmene baktérie mléčného kvašení umožňující zkoušet předem rychle a spolehlivě účinek bakteriálního kmene mléčného kvašení na kvalitativní vlastnosti siláže.It is a specific object of the present invention to provide a method for selecting a lactic acid bacterial strain allowing to test in advance quickly and reliably the effect of a lactic acid bacterial strain on the quality properties of silage.

Dalším cílem tohoto vynálezu je nalézt způsob užití spolehlivého kmene baktérie mléčného kvašení vybraného tímto způsobem, umožňující dobrý výtěžek mléčné kyseliny a minimální degradaci proteinů prevencí aktivity organizmů, jež ji způsobují v průběhu silážování i po otevření sila.Another object of the present invention is to provide a method of using a reliable lactic acid bacterium strain selected by this method, allowing good lactic acid yield and minimal protein degradation by preventing the activity of the organisms that cause it during silage and after silo opening.

·· · ··· * · 4 4 4 ··· · ··· * · 4 4 4 ·

Dalším cílem vynálezu je nalézt způsob konzervace zelené píce pomocí vybraného kmene baktérie mléčného kvašení stejně jako samotná siláž ze zelené píce konzervované tímto způsobem.Another object of the invention is to find a method of preserving green fodder with a selected lactic acid bacterial strain as well as the green fodder silage itself preserved in this way.

Při silážování luční píce se kritické fáze procesu silážování koncentrují do dvou období. První pro úspěšné silážování kritická fáze je hned po uzavření sila, kdy by kmen baktérií mléčného kvašení vybraný jako iniciální kultura měl vykázat schopnost rychle a účinně se pomnožovat a snižovat pH suroviny v zájmu zpomalení růstu škodlivých mikrobů. Pro fermentační proces je výhodné, když tento kmen působí homofermentativně, takže pokles pH primárně určuje produkce mléčné kyseliny. Použitím homofermentativního kmene baktérií mléčného kvašení lze též snižovat ztráty v procesu silážování k nimž může dojít, když homofermentativní baktérie mléčného kvašení dominují v mikrobiální populaci v siláži. Kmen musí též být konkurenceschopný, protože je výhodné, když brání růstu škodlivých mikrobů v picni hmotě.When silage grassland, the critical phases of the silage process are concentrated in two periods. The first phase for successful silage is the critical phase immediately after closure of the silo, when the lactic acid bacteria strain selected as the initial culture should show the ability to rapidly and efficiently multiply and lower the pH of the feedstock in order to slow the growth of harmful microbes. For the fermentation process, it is preferred that this strain acts homofermentatively so that the pH drop primarily determines lactic acid production. By using a homofermentative lactic acid bacteria strain, silage process losses that may occur when homofermentative lactic acid bacteria dominate the silage microbial population can also be reduced. The strain must also be competitive because it is advantageous to prevent the growth of harmful microbes in the crop.

V surovině existují velké rozdíly v přírodní flóře baktérií mléčného kvašení z hlediska kvality i kvantity a zvolený kmen musí být schopen rychle získat dominantní postavení ve vztahu k růstu kompetitivních mikrobů. Tuto pozici si musí uchovat i v prvních několika týdnech, po kterých se mikrobiální aktivita v siláži stabilizuje. Druhá kritická fáze nastává po otevření sila, kdy se podmínky postupně stávají aerobními, což umožňuje aerobní narušení.In the raw material, there are large differences in the natural flora of lactic acid bacteria in terms of both quality and quantity, and the strain selected must be able to quickly gain a dominant position in relation to the growth of competitive microbes. It must retain this position for the first few weeks after which microbial activity in the silage has stabilized. The second critical phase occurs after opening the silo, when conditions gradually become aerobic, allowing aerobic disruption.

Kvalita siláže se většinou určuje na základě určitých parametrů chemické kvality, jež popisují čistotu fermentace a/nebo intenzitu rozkladných reakcí. Oficiální kvalitativní klasifikace se zakládá na množství mléčné, octové a máselné kyseliny obsažené v siláži, na podílu čpavkového dusíku z veškerého dusíku a na kyselosti. Pro stabilitu siláže je též velmi prospěšná dobrá mikrobiální kvalita siláže. Špatná mikrobiální kvalita se projevuje zvýšeným množstvím • · «· · • · ♦ t • · · <9 « 9 ·The silage quality is usually determined on the basis of certain chemical quality parameters that describe the purity of the fermentation and / or the intensity of the decomposition reactions. The official qualitative classification is based on the amount of lactic, acetic and butyric acid contained in the silage, the proportion of ammonia nitrogen from all nitrogen and the acidity. Good microbial silage quality is also very beneficial for silage stability. Poor microbial quality is manifested by increased levels of <9 «9 ·

klostridií, rozkladných kvasinek a plísní.clostridia, decaying yeasts and molds.

Způsob podle vynálezu se charakterizuje v nároku 1. Způsob konzervace zelené píce, použití vybraného kmene baktérie mléčného kvašení a silážování podle tohoto vynálezu se charakterizují v nárocích 7, 12 a 14.The method of the invention is characterized in claim 1. The method of preserving green fodder, the use of a selected strain of lactic acid bacteria and silage according to the invention are characterized in claims 7, 12 and 14.

Vynález se zakládá na výzkumu, který zkoumal konzervační účinek různých kmenů baktérií mléčného kvašení na zelenou píci a při kterém se zjistilo, že je prospěšné, když vybraný kmen snižuje množství čpavkového dusíku v substrátu z travního výluhu na počátku silážního procesu.The invention is based on research that investigated the conservation effect of different lactic acid bacteria strains on green fodder and found to be beneficial when the selected strain reduced the amount of ammonia nitrogen in the grass liquor substrate at the beginning of the silage process.

Způsob výběru kmene baktérie mléčného kvašení usiluje o zajištění dobrých podmínek podporujících aktivitu kmene baktérie mléčného kvašení při biologické konzervaci zelené píce. Způsob zahrnuje stanovení jednoho nebo více parametrů charakterizujících čistotu fermentace a/nebo rychlost rozkladné reakce v substrátu, který napodobuje picni hmotu a obsahuje přídavek zkoumaného přípravku s baktérií mléčného kvašení. Přípravek baktérie mléčného kvašení znamená antimikrobiální přípravek obsahující baktérii a/nebo produkující baktérii. Při tomto způsobu se stanovuje účinek bakteriálního kmene na množství čpavkového dusíku v substrátu zastupujícím picni hmotu. Z hlediska kvality siláže čím menší je množství proteinů a peptidů, jež se v · siláži rozkládají na čpavek, tím lépe. Změna množství čpavkového dusíku se určuje pro daný časový úsek, zpravidla 24 hodin. Kmeny baktérie mléčné kyseliny, jež snižují množství čpavkového dusíku během této periody prokázaly, že jsou účinnými a spolehlivými kmeny.The method for selecting a lactic acid bacterial strain seeks to provide good conditions supporting the activity of the lactic acid bacterium in the biological conservation of green fodder. The method comprises determining one or more parameters characterizing the purity of the fermentation and / or the rate of degradation reaction in a substrate that mimics the peat mass and comprises the addition of a lactic acid bacterial preparation of interest. Lactic acid bacterial preparation means an antimicrobial preparation comprising and / or producing a bacterium. In this method, the effect of the bacterial strain on the amount of ammonia nitrogen in the substrate representing the peat mass is determined. In terms of silage quality, the smaller the amount of proteins and peptides that break down into ammonia in the silage, the better. The change in the amount of ammonia nitrogen is determined for a given period of time, usually 24 hours. Lactic acid strains that reduce the amount of ammonia nitrogen during this period have proven to be effective and reliable strains.

Množství čpavkového dusíku se může určovat spektrofotometricky, iontově selektivními způsoby za použití například iontově selektivní elektrody, chromatografickými způsoby, například chromatografii v kapalné fázi, nebo některým dalším způsobem použitelným pro stanovení čpavkového dusíku.The amount of ammonia nitrogen can be determined spectrophotometrically, by ion-selective methods using, for example, an ion-selective electrode, chromatographic methods, for example liquid phase chromatography, or some other method useful for the determination of ammonia nitrogen.

• · · ·• · · ·

Při realizaci tohoto způsobu se použitelnost kmene baktérie mléčného kvašení určuje podle poklesu hodnoty pH substrátu simulujícího picni hmotu. Takový kmen by měl být schopen snížit pH substrátu rychle a účinně. Jako účinné a spolehlivé kmeny baktérie mléčného kvašení se osvědčuji ty kmeny, jež během určité časové lhůty, výhodně 14 hodin, sníží pH na < 4.In the practice of this method, the usefulness of a lactic acid bacterial strain is determined by a decrease in the pH value of the pellet-simulating substrate. Such a strain should be able to lower the pH of the substrate quickly and efficiently. Effective and reliable strains of lactic acid bacteria have proved to be those strains which reduce the pH to < 4 within a certain period of time, preferably 14 hours.

Jako substrát pro simulaci picni hmoty se používá substrát z travního výluhu připravený z rostlinného materiálu. Substrát z travního výluhu se připravuje například loužením posekané píce jako je kostřava, bojínek nebo jetel ve vodě, jejím zfiltrováním, autoklávováním nebo filtrací ve sterilních podmínkách s následným zahuštěním, dále zředěním koncentrátu podle potřeby a konečně přidáním jistého množství glukózy, například asi 1 %.As a substrate for the simulation of the peat mass, a grass liquor substrate prepared from plant material is used. The grass liquor substrate is prepared, for example, by leaching forage, fescue, timothy or clover in water, filtering, autoclaving or filtering under sterile conditions followed by concentration, diluting the concentrate as needed, and finally adding some glucose, for example about 1%.

Tento způsob se může použít pro zkoušení jakýchkoliv bakteriálních kmenů mléčného kvašení. Testy se uskutečnily pomocí bakteriálních přípravků pro mléčné kvašení izolovaných Státním technickým výzkumným centrem VTT (State Technical Research Centre), které prokázaly schopnost produkovat více antimikrobiálních sloučenin s malým rozměrem molekul. Příklady používaných kmenů představujíThis method can be used for testing any bacterial lactic acid strains. The tests were carried out using bacterial lactic acid fermentation preparations isolated by the State Technical Research Center (VTT), which demonstrated the ability to produce more antimicrobial compounds with small molecular sizes. Examples of strains used are

Lactobacillus plantarum (VTT E-78076, VTT E 79098),Lactobacillus plantarum (VTT E-78076, VTT E 79098)

Pediococcus parvulus (VTT E-88315), Pediococcus pentosaceus (VTT E-90390) a/nebo jejich směsi.Pediococcus parvulus (VTT E-88315), Pediococcus pentosaceus (VTT E-90390) and / or mixtures thereof.

Je možné ověřit funkčnost tohoto způsobu zkouškou, jak se bakteriální kmen vybraný touto metodou chová v reálné picni hmotě v minisilu. Dobré podmínky pro aktivitu bakteriálního kmene mléčného kvašení se zajistí stanovením středních kvalitativních parametrů finálního produktu, určením kompetitivnosti kmene a měřením ztrát při silážování v důsledku vzniku plynů. Konkurenceschopnost kmene se určí například technikou PCR nebo obdobnou technikou. Vznik plynu se může měřit například semikvantitativním způsobem za « · · · použití injekční stříkačky opatřené stupnicí nebo podobnou technikou. (Požadavky týkající se kvality siláže jsou uveřejněny v nařízení č. 181/94, § 4, článek 1 Ministerstva zemědělství a lesnictví).It is possible to verify the functionality of this method by testing how the bacterial strain selected by this method behaves in real picis mass in the minisil. Good conditions for the activity of the lactic acid bacterial strain are ensured by determining the mean quality parameters of the final product, determining the competitiveness of the strain and measuring the silage losses due to the formation of gases. The competitiveness of the strain is determined, for example, by PCR or a similar technique. The formation of gas can be measured, for example, by a semi-quantitative method using a syringe equipped with a scale or the like. (Requirements concerning the quality of silage are published in Regulation No. 181/94, § 4, Article 1 of the Ministry of Agriculture and Forestry).

Bakteriální kmeny mléčného kvašení vybrané popisovaným způsobem vykazují při silážování dobrou účinnost. Použitelné bakteriální přípravky mléčného kvašení zahrnují bakteriální kmeny mléčného kvašení izolované Státním technickým výzkumným centrem (VTT), u nichž bylo zjištěno, že produkují několik antimikrobiálních sloučenin s malým rozměrem molekuly. Antimikrobiální sloučeniny malých molekulárních rozměrů doplňují účinky bakteriálních kmenů mléčného kvašení na pH tím, že brání růstu organizmů podporujících hnití.The lactic acid bacterial strains selected by the method described show good silage efficiency. Useful lactic acid bacterial formulations include lactic acid bacterial strains isolated by the State Technical Research Center (VTT), which have been found to produce several small-molecule antimicrobial compounds. Antimicrobial compounds of small molecular size complement the pH effects of bacterial lactic acid strains by preventing the growth of rotting organisms.

Jako prospěšný se při konzervaci zelené píce projevil kmen Lactobacillus plantarum (VTT E-78076). Kmen Lactobacillus plantarum (VTT E-78076) byl popsán například v patentu F 94875. Kromě toho bylo zjištěno, že tento kmen odolává kyselině mravenčí, je-li její koncentrace v substrátu pod 1 % obj emové.Lactobacillus plantarum (VTT E-78076) proved to be beneficial in the conservation of green fodder. The Lactobacillus plantarum strain (VTT E-78076) has been described, for example, in patent F 94875. In addition, it has been found that this strain resists formic acid when its concentration in the substrate is below 1% by volume.

Při způsobu konzervace zelené píce podle vynálezu se vybraný bakteriální přípravek mléčného kvašení přidává do siláže v množství asi 10⁵ - 10⁷ CFU/g trávy, výhodně 10⁶CFU/g trávy. Bakteriální přípravek mléčného kvašení se může přidat společně s jedním nebo více ochrannými prostředky a případně i s jedním nebo více bakteriálními přípravky mléčného kvašení. Použitý ochranný prostředek může být na bázi například enzymů schopných štěpit rostlinná vlákna a například mít celulázovou aktivitu, nebo na bázi kyseliny mravenčí, kyseliny benzoové a/nebo kyseliny sorbové a jejich derivátů a/nebo jiných známých ochranných prostředků.In the method of preserving green fodder according to the invention, the selected lactic acid bacterial preparation is added to the silage in an amount of about 10 ⁵ - 10 ⁷ CFU / g grass, preferably 10 ⁶ CFU / g grass. The lactic acid bacterial preparation may be added together with one or more preservatives and optionally with one or more lactic acid bacterial preparations. The preservative used can be based, for example, on enzymes capable of cleaving plant fibers and, for example, having cellulase activity, or on the basis of formic acid, benzoic acid and / or sorbic acid and derivatives thereof and / or other known preservatives.

Při realizaci tohoto konzervačního způsobu se k píci přidá kyselina mravenčí společně s bakteriálním přípravkem mléčného kvašení. Množství kyseliny mravenčí je například 1/2,5 až 1/20 množství používaného při normální konzervaci • · · · » · « · · • · • · ·· ♦ · · φ ·In this preservation process, formic acid is added to the forage along with the lactic acid bacterial preparation. For example, the amount of formic acid is 1 / 2.5 to 1/20 of the amount used in normal preservation.

• ♦ · · · · za použití kyseliny, to znamená asi 1,6 až 0,2 1/t trávy, výhodně asi 1/10, to znamená asi 0,4 1/t trávy.Using an acid, i.e. about 1.6 to 0.2 l / t grass, preferably about 1/10, i.e. about 0.4 l / t grass.

Je výhodné přidávat bakteriální přípravek mléčného kvašení k trávě na poli při sekání, protože jinak množení přírodních mikrobů obsažených v trávě může zvrátit rovnováhu směrem ke kompetitivní situaci a způsobit, že fermentační proces nabere nežádoucí směr.It is advantageous to add the lactic acid bacterial preparation to the grass in the field when mowing, since otherwise the multiplication of natural microbes contained in the grass can reverse the balance towards a competitive situation and cause the fermentation process to take an undesired direction.

Vynález se též týká použití bakteriálního kmene mléčného kvašení vybraného způsobem výběru podle vynálezu pro konzervaci zelené píce. Je výhodné, když kmen použitý podle vynálezu je Lactobacillus plantarum (VTT E-78076).The invention also relates to the use of a lactic acid bacterial strain selected by the method of selection according to the invention for the conservation of green fodder. It is preferred that the strain used according to the invention is Lactobacillus plantarum (VTT E-78076).

V rozsahu vynálezu je též siláž konzervovaná konzervačním způsobem podle vynálezu.Also within the scope of the invention is silage preserved by the preservation method of the invention.

Vynález umožňuje snadno a rychle vybrat spolehlivou iniciační kulturu pro konzervaci zelené píce. Při použití tohoto nového způsobu výběru bakteriálního kmene mléčného kvašení je možno zvýšit spolehlivost silážního procesu a tím zajistit plnou spotřebu siláže a dobrou hygienickou kvalitu mléka.The invention makes it possible to quickly and easily select a reliable initiation culture for the conservation of green fodder. By using this new method of selecting the bacterial lactic acid strain, it is possible to increase the reliability of the silage process and thereby ensure full silage consumption and good hygienic milk quality.

V dalším se vynález detailně popisuje v následujících příkladech.In the following, the invention is described in detail in the following examples.

Příklady provedení vynálezuDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

PŘÍKLAD 1EXAMPLE 1

Tento pokus se prováděl za účelem zjištění účinků čtyř různých bakteriálních přípravků mléčného kvašení na množství čpavkového dusíku v travním substrátu a na snížení jeho pH. Použité kmeny byly Lactobacillus plantarum VTT E-78076 (=E76) a VTT E-78098 (=E98), Pediococcus parvulus VTT E88315 (E=315) a Pediococcus pentosaceus VTT E-90390 (=E390).This experiment was conducted to determine the effects of four different lactic acid bacterial preparations on the amount of ammonia nitrogen in the grass substrate and on reducing its pH. The strains used were Lactobacillus plantarum VTT E-78076 (= E76) and VTT E-78098 (= E98), Pediococcus parvulus VTT E88315 (E = 315), and Pediococcus pentosaceus VTT E-90390 (= E390).

Použitý travní substrát byl substrát na bázi bojínku, luční kostřavy a jetele a připravil se loužením 1 kg nasekané trávy v 5 1 vodní lázně 2 hodiny při 50 °C, načež • · · se výluh zfiltroval, autoklávoval 15 minut při 120 °C a zahušťoval do dosažení 20% roztoku. Pro potřeby zkoušky se výluh v dalším zředil na asi 10 % a přidala se do něj glukóza v množství 1 %.The grass substrate used was a Timothy, Meadow Fescue and Clover substrate and was prepared by leaching 1 kg of cut grass in a 5 L water bath for 2 hours at 50 ° C, after which the extract was filtered, autoclaved at 120 ° C for 15 minutes and concentrated. until a 20% solution was obtained. For the test, the extract was further diluted to about 10% and 1% glucose was added.

Množství čpavkového dusíku se určovalo pomocí iontově selektivní elektrody.The amount of ammonia nitrogen was determined using an ion-selective electrode.

V tabulce 1 se ukazuje účinek iniciační kultury na množství čpavkového dusíku v travním substrátu a na snížení pH.Table 1 shows the effect of the initiating culture on the amount of ammonia nitrogen in the grass substrate and on the pH reduction.

Tabulka 1Table 1

Výluh z bojínku - kostřavy + 1% glukóza Timothy extract - fescues + 1% glucose Výluh z jetele + 1% glukóza Clover extract + 1% glucose Kmen Strain 7 hod. 7 hours 14 hod. 14 hours 24 hod. 24 hours 7 hod. 7 hours 14 hod. 14 hours 24 hod. 24 hours PH PH čpavkový N, (mg/1) ammonia N, (mg / 1) čpavkový N, (mg/1) ammonia N, (mg / 1) E76 E76 5,47 5.47 3,95 3.95 -5,80 -5,80 5,55 5.55 4,55 4.55 -5,49 -5.49 E98 E98 5,37 5.37 3,92 3.92 -8,46 -8.46 5,33 5.33 4,15 4.15 -5,49 -5.49 E315 E315 5,41 5.41 3,80 3.80 3,26 3.26 5,16 5.16 3,83 3.83 7,89 7.89 E390 E390 5,15 5.15 3,79 3.79 -1,40 -1.40 5,28 5.28 3,98 3.98 6,20 6.20

Tabulka 1 ukazuje, že kmeny L.plantarum a P. pentosaceus E390 snížily během 24 hodin v substrátu z bojínku - luční kostřavy množství čpavkového dusíku a že všechny 4 kmeny snížily pH substrátu pod 4 do 14 hodin. . Snížení pH jetelového výluhu bylo slabší vzhledem k větší ústojné kapacitě jetele.Table 1 shows that the L.plantarum and P. pentosaceus E390 strains reduced ammonia nitrogen in the Timothy Substrate substrate and within 24 hours all 4 strains lowered the pH of the substrate below 4-14 hours. . The decrease in the pH of the clover extract was weaker due to the greater clover capacity of the clover.

PŘÍKLAD 2EXAMPLE 2

Tyto pokusy se prováděly pro zjišťování podmínek podporujících aktivitu vybraných bakteriálních kmenu mléčného kvašení v picni hmotě v měřítku minisila stanovením kvalitativních parametrů siláže, zjištěním konkurenceschopnosti kmene a určením ztrát silážováním na bázi tvorby plynných produktů. Užitý kmen byl Lactobacillus plantarum VTT E 78076 (=E76), použitý i v pokusu 1. Nasekaná • · ♦ » 0 0 · • 0 * ’These experiments were carried out to determine the conditions supporting the activity of selected bacterial lactic acid strains in the scale of minisil by determining the quality of the silage, determining the competitiveness of the strain, and determining the silage losses based on gaseous product formation. The strain used was Lactobacillus plantarum VTT E 78076 (= E76), also used in Experiment 1. Chopped 0 · · 0 0

0· tráva se založila do minisil o objemu 120 ml, které se naplnily 80 g trávy. Baktérie mléčného kvašení se dávkovaly v množství 10⁶ CFU/g trávy. Jako srovnávací pokus se pro kontrolu provedlo jednak silážování zhutněním bez konzervačních prostředků, jednak silážování s kyselinou mravenčí v množství 4 1/t trávy. Pokus trval 84 dní a nocí.· The grass was placed in 120 ml mini-silos, filled with 80 g of grass. Lactic acid bacteria were dosed at 10 ⁶ CFU / g grass. As a comparative experiment, compaction silage without preservatives was used for control as well as silage with formic acid in an amount of 4 l / t of grass. The experiment lasted 84 days and nights.

A. Kvalita silážeA. Quality of silage

Kvalita siláže v různých silážovaných šaržích se stanovila po 84 dnech silážování.The silage quality in the different silage lots was determined after 84 days of silage.

Kvalitativní parametry siláže ukazuje tabulka 2.The quality parameters of silage are shown in Table 2.

Z výsledků uváděných v tabulce 2 je zřejmé, že vybraný bakteriální kmen mléčného kvašení výrazně zlepšil výsledky silážování ve srovnání se zhutněnou siláží.From the results presented in Table 2, it is apparent that the selected lactic acid bacterial strain significantly improved silage results compared to compacted silage.

Ve všech skupinách píce bylo množství enterobakterií a plísní pod hranicí detekce.In all forage groups, the amount of enterobacteria and fungi was below the detection limit.

Tabulka 2Table 2

Konzervace při siláži Silage preservation Silážní pokus Silážní try E76 E76 Silážování zhutněním Silage compaction Kyselina mravenčí Acid ant Sušina (g/kg) Dry matter (g / kg) 2/96 2/96 248 248 233 233 231 231 II II 3/96* 3/96 * 164 164 175 175 173 173 II II 1/97 1/97 208 208 214 214 212 212 II II 2/97 2/97 258 258 255 255 261 261 Kvalitativní parametry Qualitative parameters Kyselina mléčná Lactic acid 2/96 2/96 104,2 104.2 124,3 124.3 46,8 46.8 (g/kg sušiny) (g / kg dry matter) 3/96* 3/96 * 91,0 91.0 95,2 95.2 72,2 72.2 fl fl 1/97 1/97 95,8 95.8 78,6 78.6 41,9 41.9 II II 2/97 2/97 105,5 105.5 106,5 106.5 48,0 48.0 II II průměr diameter 99,1 99.1 101,2 101.2 52,2 52.2 II II SD SD 6,9 6.9 19,2 19.2 13,6 13.6 Kyselina octová Acetic acid 2/96 2/96 12,9 12.9 24,7 24.7 24,3. 24.3. (g/kg sušiny) (g / kg dry matter) 3/96* 3/96 * 27,9 27.9 46,2 46.2 24,6 24.6 II II 1/97 1/97 8,2 8.2 16,1 16.1 11,8 11.8 It It 2/97 2/97 8,5 8.5 13,0 13.0 18,8 18.8

··»· • · · • · · , · · · ·, «···· · · · · · · · · · · · · · · ·

II II průměr diameter 14,4 14.4 25,0 25.0 20,6. 20.6. It It SD SD 9,3 9.3 15,0 15.0 4,8 4.8 Kyselina máselná Butyric acid 2/96 2/96 0,0 0.0 0,0 0.0 0,0 0.0 (g/kg sušiny) (g / kg dry matter) 3/96* 3/96 * 0,0 0.0 0,0 0.0 11,4 11.4 II II 1/97 1/97 0,0 0.0 2,4 2.4 0,0 0.0 II II 2/97 2/97 0,1 0.1 0,0 0.0 0,0 0.0 II II průměr diameter 0,0 0.0 0,6 0.6 2,9 2.9 II II SD SD 0,0 0.0 1,2 1,2 5,7 5.7 Čpavkový dusík Ammonia nitrogen 2/96 2/96 30,0 30.0 83,0 83.0 21,0 21.0 (g/kg veškerého (g / kg of total 3/96* 3/96 * 43,0 43.0 97,0 97.0 67,0 67.0 dusíku) nitrogen) 1/97 1/97 26,0 26.0 85,0 85.0 21,0 21.0 II II 2/97 2/97 35,7 35.7 47,4 47.4 20,3 20.3 II II průměr diameter 33,7 33.7 78,1 78.1 32,3 32.3 II II SD SD 7,4 7.4 21,4 21.4 23,1 , 23.1, PH PH 2/96 2/96 3,88 3.88 3,95 3.95 3,99 3.99 n n 3/96* 3/96 * 4,27 4.27 4,66 4.66 4,45 4.45 II II 1/97 1/97 3,80 3.80 3,85 3.85 3,88 3.88 II II 2/97 2/97 3,93 3.93 3,93 3.93 3,98 3.98 II II průměr diameter 3,97 3.97 4,10 4.10 4,08 4.08 II II SD SD 0,21 0.21 0,38 0.38 0,25 0.25

* Surovina: červený jetel, v ostatních testech bojínek luční - kostřava.* Raw material: red clover, in other tests timothy - fescue.

B. Konkurenceschopnost bakteriálního kmene mléčného kvašeníB. Competitiveness of lactic acid bacterial strain

Konkurenceschopnost vybraných kmenů se stanovila technikou PCR po 1, 5, 21 a 84 dnech od počátku procesu silážování.The competitiveness of selected strains was determined by PCR techniques 1, 5, 21 and 84 days after the start of the ensiling process.

Tabulka 3 ukazuje množství baktérie mléčného kvašení (log CFU/g). Množství mravenčí kyseliny (FA) se uvádí v 1/t (100% kyselina mravenčí).Table 3 shows the amount of lactic acid bacteria (log CFU / g). The amount of formic acid (FA) is given in 1 / t (100% formic acid).

• ·« ·• · «·

Tabulka 3Table 3

Doba, dny Time, days Zhutněná siláž Compacted silage FA 4 FA 4 FA 0,4 FA 0,4 E76 E76 FA 4 +E76 FA 4 + E76 FA 0,4 +E76 FA 0,4 + E76 1 1 6,66 6.66 5,08 5.08 5,73 5.73 6,89 6.89 4,40 4.40 6,84 6.84 5 5 9,03 9.03 5,28 5.28 8,90 8.90 9,24 9.24 4,78 4.78 9,11 9.11 21 21 8,69 8.69 8,43 8.43 8,51 8.51 8,70 8.70 8,72 8.72 8,48 8.48 84 84 7,94 7.94 7,18 7.18 7,58 7.58 8,27 8.27 7,63 7.63 9,16 9.16

Tabulka 4 ukazuje množství L. plantarum nalezené v různých časových úsecích (jako procenta testovaných kmenů LAB) .Table 4 shows the amount of L. plantarum found at different time points (as a percentage of LAB strains tested).

Tabulka 4Table 4

Doba, dny Time, days Zhutněná siláž Compacted silage FA 4 FA 4 FA 0,4 FA 0,4 E76 E76 FA 4 +E76 FA 4 + E76 FA 0,4 +E76 FA 0,4 + E76 1 1 20,0 20.0 0,0 0.0 40,0 40.0 84,0 84.0 60,0 60.0 100,0 100.0 5 5 80,0 80.0 40,0 40.0 40,0 40.0 96,0 96.0 60,0 60.0 80,0 80.0 21 21 60,0 60.0 100,0 100.0 60,0 60.0 72,0 72.0 100,0 100.0 40,0 40.0 84 84 0,0 0.0 0,0 0.0 20,0 20.0 24,0 24.0 40,0 40.0 40,0 40.0

¹ Bylo izolováno 5 kmenů a zkoušeno testem API 50 CHL. ¹ were isolated 5 strains tested, and API 50 CHL test.

² Bylo izolováno 25 kmenů a zkoušeno testem API 50 CHL. ² 25 strains were isolated and assayed by API 50 CHL test.

Tabulka 5 ukazuje podíl genotypu L. plantarum E76 v kmenech LAB.Table 5 shows the proportion of L. plantarum E76 genotype in LAB strains.

Tabulka 5Table 5

Doba, dny Time, days Zhutněná siláž Compacted silage FA 4 FA 4 FA 0,4 FA 0,4 E76 E76 FA 4 +E76 FA 4 + E76 FA 0,4 +E?6 FA 0,4 + E 6 6 1 1 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 20/25 20/25 2/5 2/5 4/5 4/5 5 5 1/5 1/5 0/5 0/5 2/5 2/5 22/25 22/25 3/5 3/5 4/5 4/5 21 21 2/5 2/5 2/5 2/5 0/5 0/5 20/25 20/25 1/5 1/5 2/5 2/5 84 84 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 3/25 3/25 1/5 1/5 0/5 0/5

¹ Izolováno 5 kmenů ² Izolováno 25 kmenů ¹ 5 strains isolated ² 25 strains isolated

Měření ztrát při silážování na základě vzniku plynůMeasurement of silage losses due to the formation of gases

Tabulka 6 ukazuje vznik plynu charakterizující ztráty při silážování v průběhu silážování.Table 6 shows the formation of gas characterizing losses during ensiling during ensiling.

Tabulka 6Table 6

Způsob silážování Silage method Silážní pokus Silage attempt E76 E76 Silážování zhutněním Silage compaction Mravenčí kyselina Ant acid 2/96 2/96 114 114 217 217 144 144 3/93* 3/93 * 88 88 209 209 320 320 1/97 1/97 89 89 192 192 90 90 2/97 2/97 134 134 167 167 174 174 Průměr Diameter 106 106 196 196 182 182 SD SD 19 19 Dec 19 19 Dec 85 85

* Jako surovina použit červený jetel. V ostatních pokusech bojínek luční - kostřava.* Red clover used as raw material. In other experiments timothy - fescue.

Podle měření vzniku plynu byly nejmenší ztráty při silážování v případě konzervace pomocí přípravku obsahujícího Lactobacillus plantarum VTT E-78076.According to the measurement of gas generation, the lowest silage losses in the case of preservation with a preparation containing Lactobacillus plantarum VTT E-78076.

Vliv bakteriálního kmene na množství čpavkového dusíku v substrátu z travního extraktu naznačuje rozsah rozkladu bílkovin k němuž dojde při zamýšleném silážování.The effect of the bacterial strain on the amount of ammonia nitrogen in the grass extract substrate indicates the extent of protein degradation that occurs during the intended silage.

PŘÍKLAD 3EXAMPLE 3

Tento pokus zjišťuje podmínky podporující aktivitu bakteriálních přípravků mléčného kvašení v picni hmotě z bojínku - kostřavy luční. Test byl proveden stejně jako v příkladu 2.This experiment investigates the conditions supporting the activity of bacterial lactic acid fermentation agents in picine matter from timothy - fescue. The test was performed as in Example 2.

Tabulka 7 ukazuje kvalitativní parametry různých siláží.Table 7 shows the qualitative parameters of the different silages.

» · ··· · • · ·*· · ► · · l · ·»♦· · · ♦ ♦ · · · · · · ·

Tabulka 7Table 7

Silážování zhutněním Silage compaction E315 E315 E390 E390 E76 E76 E98 E98 Sušina g/kg Dry matter g / kg 233 233 229 229 243 243 248 248 240 240 PH PH 3,95 3.95 3,93 3.93 3,91 3.91 3,88 3.88 3,92 3.92 V sušině obsaženo, g/kg In the dry matter, g / kg Ve vodě rozpustné glycidy Water soluble carbohydrates 6,2 6.2 20,1 20.1 15,4 15.4 33,8 33.8 46,0 46.0 Kyselina mléčná Lactic acid 124,3 124.3 102,0 102.0 97,1 97.1 104,2 104.2 105,4 105.4 Kyselina octová Acetic acid 24,7 24.7 17,0 17.0 14,8 14.8 12,9 12.9 14,4 14.4 Kyselina propionová Propionic acid 0,6 0.6 0,0 0.0 0,0 0.0 0,0 0.0 0,0 0.0 Kyselina valerová Valeric acid 0,5 0.5 0,0 0.0 0,0 0.0 0,0 0.0 0,0 0.0 Ethanol Ethanol 6,8 6.8 2,5 2.5 46,5 46.5 64,0 64.0 ^7,57.5 Z veškerého dusíku, g/kg N From all the nitrogen, g / kg N Čpavkový N Ammonia N 83 83 51 51 47 47 30 30 31 31 Rozpustný N Soluble N 646 646 570 570 585 585 587 587 641 641 Plyn, ml Gas, ml 217 217 102 102 103 103 114 114 119 119 Ztráta hmotnosti, g Weight loss, g 0,69 0.69 0,47 0.47 0,46 0.46 0,47 0.47 0,57 0.57

Z tabulky 7 je zřejmé, že množství čpavkového dusíku charakterizující rozklad bílkovin bylo největší v silážích konzervovaných za pomoci kmenů E315 a E390. Množství čpavkového dusíku bylo nejmenší v silážích konzervovaných s použitím kmenů E76 a E98, které v pokusu popsaném v příkladu 1 snižovaly množství čpavkového dusíku.It can be seen from Table 7 that the amount of ammonia nitrogen characterizing the degradation of proteins was greatest in the silages preserved using strains E315 and E390. The amount of ammonia nitrogen was the lowest in the silages preserved using strains E76 and E98, which reduced the amount of ammonia nitrogen in the experiment described in Example 1.

Příklad 4Example 4

Tento test se prováděl pro zjištění účinku přídavku kombinace bakteriálního přípravku mléčného kvašení a mravenčí kyseliny v množství poněkud pod obvyklou dávkou na kvalitu siláže. Zelené krmivo bojínek luční - kostřava se stejně jako v příkladu 2 založilo do minisil. Bakteriální přípravek mléčného kvašení byl Lactobacillus plantarum VTT E-78076 a kyselina mravenčí se použila v koncentracích 0, 0,2, 0,4, 0,8 a 1,6 1/t trávy. Chemické a mikrobiologické *· ··♦· ·· ·»·· ·· ···· t · ♦ • · · ·· • 4 « · ·· ··* • · ♦ ·* «· rozbory se prováděly po 84 dnech silážování při otevření sila. Kromě toho byl v průběhu silážování měřen vznik plynuThis test was performed to determine the effect of adding a combination of a lactic acid bacterial preparation and a formic acid in an amount somewhat below the usual dose on silage quality. The green fodder-fescue feed was set up in minisil as in Example 2. The lactic acid bacterial preparation was Lactobacillus plantarum VTT E-78076 and formic acid was used at concentrations of 0, 0.2, 0.4, 0.8 and 1.6 L / t grass. Chemical and microbiological analyzes were performed in increments of 84 days of silage when opening the silo. In addition, the formation of gas was measured during ensiling

Chemické složení siláže ukazuje tabulka 8.The chemical composition of silage is shown in Table 8.

4·»· •a ··♦·4 · »· • a ·· ♦ ·

Tabulka 8Table 8

FA 4- FA 4- 212 212 3,88 3.88 06 06 / 20,2 20.2 41,9 41.9 00 Γ- Η 00 Γ- Η O o O O o o O O O o O O 6,6 6.6 53,7 53.7 H ÍN H ÍN 670 670 FA 1,6+ FA 1.6+ 211 211 3,86 3.86 O H O H H H 79,0 79.0 H H H H o o O O o o O O o o O O r- r- 90,4 90.4 σ\ co σ \ what 710 710 FA 0,8 + FA 0.8 + 213 213 3,81 3.81 in kO in kO 22,2 22.2 93,8 93.8 O 00 O 00 o o O O o o O O o o O O co co what what 101,8 101.8 H H O σι kO O σι kO FA 0,4 + FA 0.4 + 214 214 3,83 3.83 ro in ro in 28,7 28.7 kO o σ\ kO O σ \ co Lfl what Lfl o o O O o o O O o o O O o CO O WHAT 95,9 95.9 H n H n 00 00 kO 00 00 kO + fa O + fa O 210 210 00 co 00 what 00 kO 00 kO 25,8 25.8 o σι 00 O σι 00 in in o o O O o o O O o o O O o CO O WHAT 95,5 95.5 U) CN AT) CN r- o r- O + + 208 208 3,80 3.80 σι 00 σι 00 22,8 22.8 95,8 95.8 C4 00 C4 00 o o O O o o O O o o O O 104,0 104.0 kO OJ kO OJ 00 o r* 00 O r * t < kD fa H t <kD fa H 216 216 3,76 3.76 o 00 O 00 18,7 18.7 96,4 96.4 ro Ch ro Ch o o O O o o O O o o O O σι CO σι WHAT 105,7 105.7 00 H 00 H FA 0,8- FA 0,8- 214 214 3,77 3.77 <N 00 <N 00 18,2 18.2 91,6 91.6 10,1 10.1 o o O O o o O O o o O O H H 101,7 101.7 kO kO σι kO σι kO FA 0,4- FA 0,4- ro H (N ro H (N 3,78 3.78 r·1 00 r · 1 00 15,2 15.2 104,4 104.4 H co H H what H o o O O o o O O o o O O CO CO WHAT WHAT 117,5 117.5 r- in r- in in σι in σι FA 0,2- FA 0,2- CJ H (N CJ H (N 3,82 I 3.82 AND H ΓΊ H H ΓΊ H 12,4 12.4 H σι σι H σι σι r- H r- H o o O O H o H O H o H O 00 00 113,9 113.9 00 kO 00 kO o O Kom- paktní siláž Kom- pakt silage ²¹⁴²¹⁴ 3,85 1 3.85 1 CN σι H CN σι H σι o σι O 78,6 78.6 16,1 16.1 co o what O OJ OJ o O o 00 O 00 00 r* σι 00 r * σι in 00 in 00 749 749 Sušina, g/kg Dry matter, g / kg w P. w P. Tvorba plynu, ml Gas formation, ml Obsaženo v kg sušiny, g Included in kg dry matter, g 1 Cukr 1 Sugar Kyselina mléčná Lactic acid Kyselina octová Acetic acid Kyselina propionová Acid propionová Kyselina máselná Butyric acid Kyselina isomáselná Acid isomáselná Ethanol Ethanol Kyseliny celkem Total acids Z celkového dusíku, g/kg N Of the total nitrogen, g / kg N Čpavkový N Ammonia N Rozpustný N Soluble N

Přídavek bakterie mléčného kvašení Žádný přídavek bakterie mléčného kvašeníAddition of lactic acid bacteria No addition of lactic acid bacteria

• A AAA* A A A AAA• AAA * AAA

AAA·AAA ·

Z výsledků je zřejmé, že přidáním bakterie mléčného kvašení a mravenčí kyseliny se ve srovnání se zhutněnou siláži omezil vznik plynu. Nejlepšího výsledku se docílilo použitím kombinace baktérie mléčného kvašení a mléčné kyseliny v množství 0,4 1/t trávy. I několik chemických kvalitativních parametrů dokazuje, že tato siláž byla z hlediska kvality nej lepší. Měla nejvyšší obsah cukru a nejnižší obsah octové kyseliny a čpavkového dusíku.The results show that the addition of lactic acid bacteria and formic acid reduced gas production as compared to compacted silage. The best result was obtained by using a combination of lactic acid bacteria and lactic acid in an amount of 0.4 l / t of grass. Several chemical quality parameters also show that this silage was the best in quality. It had the highest sugar content and the lowest acetic acid and ammonia nitrogen content.

Při mikrobiologických analýzách se v těchto silážích nenalezly žádné enterobakterie a množství klostridií bylo pod 50 CFU/g s výjimkou siláže konzervované s použitím nejmenšího množství kyseliny mravenčí (0,2 1/t). I z hlediska obsahu plísní byly tyto siláže v bezvadné kvalitě.In microbiological analyzes, no enterobacteria were found in these silages and the amount of clostridia was below 50 CFU / g except for the silage preserved using the lowest amount of formic acid (0.2 L / t). Even in terms of mold content, these silages were in perfect quality.

PŘÍKLAD 5EXAMPLE 5

Cílem tohoto pokusu bylo zjistit účinek užití kombinace bakteriálního kmene mléčného kvašení a mravenčí kyseliny na kvalitu siláže vyrobené v poloprovozních silech. Zkoušené siláže se připravily z trávy bojínku - kostřavy luční, jež se posekala travní sekačkou, slabě předsušila a sklidila za pomoci sklízeči sekačky. Použitý bakteriální preparát mléčného kvašení byl Lactobacillus plantarum VTT E-78076 (10⁶ CFU/g trávy, tedy dávka 5 1/t trávy) a srovnávací testy představovaly jednak zhutněná siláž bez konzervačních činidel, jednak siláž konzervovaná mravenčí kyselinou.The aim of this experiment was to determine the effect of using a combination of a lactic acid bacterial strain and formic acid on the quality of silage produced in pilot plants. The tested silage was prepared from timothy grass - fescue, which mowed with a lawn mower, slightly pre-dried and harvested with the help of a lawn mower. The lactic acid bacterial preparation used was Lactobacillus plantarum VTT E-78076 (10 ⁶ CFU / g grass, i.e. a dose of 5 L / t grass) and the comparative tests consisted of compacted silage without preservatives and silage preserved with formic acid.

Siláže se připravily v poloprovozních silech (300-400 kg siláže na silo). Bakteriální přípravek mléčného kvašení se aplikoval při sklizni sklízeči sekačkou.Silage was prepared in pilot plant silos (300-400 kg of silage per silo). The lactic acid bacterial preparation was applied at harvest by the harvester with a mower.

Chemické složení siláže představuje tabulka 9.The chemical composition of silage is shown in Table 9.

9 * • · ·9 *

Φ 9 · φ Φ ΦΦ·ΦΦ 9 · φ Φ ΦΦ · Φ

Tabulka 9Table 9

Bez očkovadla Without vaccine Očkovadlo E-76 Inoculum E-76 Kyselina mravenčí, 1/t Formic acid, 1 / t 0 0 0,4 0.4 4,0 4.0 0 0 0,4 0.4 4,0 4.0 Sušina, g/kg Dry matter, g / kg 182 182 191 191 187 187 201 201 188 188 195 195 PH PH 4,38 4.38 4,13 4.13 4,40 4.40 4,18 4.18 4,05 4.05 4,03 4.03 Obsaženo v kg sušiny, g Contained in kg dry matter, g Popeloviny Ash 79,1 79.1 77,8 77.8 77,3 77.3 79,1 79.1 75,9 75.9 74,6 74.6 Surový protein Crude protein 169 169 160 160 167 167 157 157 164 164 161 161 Cukr Sugar 3,2 3.2 4,9 4.9 16,0 16.0 5,4 5.4 10,6 10.6 37,3 37.3 Kyselina mléčná Lactic acid 71,7 71.7 89,8 89.8 59,1 59.1 89,1 89.1 94,2 94.2 58,6 58.6 Kyselina mravenčí Formic acid 0,5 0.5 2,7 2.7 5,6 5.6 0,5 0.5 2,8 2.8 12,2 12.2 Kyselina octová Acetic acid 42,2 42.2 30,5 30.5 29, 3 29, 3 27,5 27.5 23,2 23.2 16,7 16.7 Kyselina propionová Propionic acid 5,3 5.3 2,6 2.6 2,8 2.8 2,1 2.1 1,3 1.3 0,8 0.8 Kyselina máselná Butyric acid 0,1 0.1 0,0 0.0 0,9 0.9 0,5 0.5 0,2 0.2 0,0 0.0 Ethanol Ethanol 8,6 8.6 7,5 7.5 12,8 12.8 6,1 6.1 5,6 5.6 7,4 7.4 Z veškerého dusíku, g/kg N From all the nitrogen, g / kg N Čpavkový dusík Ammonia nitrogen 88 88 76 76 66 66 76 76 61 61 41 41 Rozpustný dusík Soluble nitrogen 772 772 746 746 730 730 790 790 770 770 671 671

I když byla surovina předsušena, její obsah sušiny zůstal dosti nízký. Rovněž obsah cukru byl malý. Baktérie mléčného kvašení měla příznivý účinek na několik kvalitativních parametrů. Siláž s přídavkem vybraného bakteriálního kmene mléčného kvašení měla nižší pH a obsahovala méně kyseliny propionové, ethanolu a čpavkového dusíku.Although the raw material was pre-dried, its dry matter content remained fairly low. The sugar content was also low. Lactic acid bacteria have had a beneficial effect on several qualitative parameters. The silage with the addition of the selected lactic acid bacterial strain had a lower pH and contained less propionic acid, ethanol and ammonia nitrogen.

Kromě toho užití bakteriálního preparátu mléčného kvašení přímo na poli po posečení trávy má příznivý účinek na kvalitu siláže, protože když je časová prodleva mezi posečením trávy a aplikací konzervační baktérie, může se přírodní mikrobiální flóra trávy stát dominantní, což by narušilo proces silážování.In addition, the use of a lactic acid bacterial preparation directly in the field after grass mowing has a beneficial effect on silage quality, because when the time lag between grass mowing and the application of a preservative bacterium, the natural microbial flora of grass can become dominant, disrupting the ensilage process.

Vynález se neomezuje na výše uvedené příklady jeho provedení; naopak jsou možné mnohé varianty v rozsahu vynálezecké myšlenky definované v nárocích.The invention is not limited to the above examples; on the contrary, many variations are possible within the scope of the inventive idea defined in the claims.

Claims

PATENT CLAIMS (Amended)

A method of selecting a bacterial lactic acid fermentation strain for preserving green fodder comprising determining one or more parameters characterizing the purity of the fermentation and / or the rate of degradation reactions in a pellet-simulating substrate and comprising the addition of the investigated lactic acid bacterial preparation, characterized The change in the amount of ammonia nitrogen in the grass liquor substrate is measured for 24 hours and a bacterial lactic acid fermentation strain is selected which reduces the amount of ammonia nitrogen.

Method according to claim 1, characterized in that the pH of the sample is measured and a bacterial lactic acid strain is selected which decreases the pH of the substrate to a value of < 4 within a given period of time.

The method of claim 3, wherein the pH is measured over about 14 hours.

A method of selecting a bacterial lactic acid fermentation strain for preserving green fodder comprising determining one or more parameters characterizing the purity of the fermentation and / or the rate of degradation reactions in a pictorial simulating substrate and comprising the addition of the investigated lactic acid bacterial preparation, characterized by measuring the pH of the sample and selecting a bacterial lactic acid strain to lower the pH of the substrate to < 4 within about 14 hours.

The method according to any one of claims 1 to 4, characterized by 4

By providing good conditions for the action of the bacterial lactic acid strain in the minisil scale sample matrix by determining the quality parameters of green fodder, the competitiveness of the bacterial lactic acid strain and / or by measuring gas generation .

Method according to any one of claims 1 to 5, characterized in that the selected lactic acid bacterial strain is Lactobacillus plantarum VTT E-78076, VTT E-79098, Pediococcus parvulus (VTT E-88315), Pediococcus pentosaceus (VTT E-90390). and / or a mixture thereof, preferably Lactobacillus plantarum (VTT E-78076) and / or a mixture thereof.

7. A method of preserving green fodder comprising adding to the green fodder a bacterial lactic acid strain selected by the method of any one of claims 1 to 6.

8. The method of claim 7, wherein the amount of lactic acid bacterial preparation added is about 10 ⁵ to 10 ⁷ CFU / g grass, preferably 10 ⁶ CFU / g grass.

9. A method according to claim 7 or 8, wherein the bacterial preparation is added to the forage together with one or more preservatives.

10. The method of claim 9, wherein the preservative is formic acid or a salt thereof.

The method according to claim 9 or 10,

999 ·> 999

9 ·

9 · • 9

9 «» ·

9 *

9 9

9999 characterized in that formic acid or a salt thereof is used in an amount of about 1.6 to 0.2 L / t grass, preferably about 0.4 L / t.

Use of a lactic acid bacterial strain selected by the method of any one of claims 1 to 6 for preserving green fodder.

Use according to claim 12, characterized in that the selected lactic acid bacterial strain is Lactobacillus plantarum (VTT E-78076, VTT E-79098), Pediococcus parvulus (VTT E-88315), Pediococcus pentosaceus (VTT E-90390). and / or a mixture thereof, preferably Lactobacillus plantarum (VTT E-78076) and / or a mixture thereof.

Green forage preserved by the method of any one of claims 7 to 11.