CZ2000731A3

CZ2000731A3 - Zesítěné částice vhodné pro aplikaci farmaceutického prostředku, způsob jejich výroby, farmaceutický prostředek, který je obsahuje a způsob jeho výroby

Info

Publication number: CZ2000731A3
Application number: CZ2000731A
Authority: CZ
Inventors: Gregory John Russell-Jones; Scott Mathew Starling; John Fergus Mcewan
Original assignee: Biotech Australia Pty. Limited
Priority date: 1998-08-28
Filing date: 1998-08-28
Publication date: 2001-01-17

Abstract

Zesítěné částice obsahují alespoňjeden polymer schopný tvořit částice, který obsahuje reaktivní karboxylové skupiny kovalentně zesítěné prostřednictvím můstku vybraného ze skupiny, kterou tvoří hydrazin a skupina vzorce NH2NHCOR-CONHNH2, kde -R- je přímá vazba nebo Rje přímý nebo rozvětvený řetězec nebo cyklická alkylová skupina, alkenylová, alkinylová nebo arylová skupina. Způsob výroby zesítěné částice zahrnuje zesítění alespoň jednoho polymeru schopného tvorby částice s můstkem za použití karbodiimidu jako zesíťovacího činidla. Farmaceutický prostředek obsahuje farmaceutické činidlo, např. peptidové, proteinové léčivo, zachycené v zesítěné částici. Způsob výroby farmaceutického prostředku zahrnuje zesítění alespoň jednoho polymeru schopného tvorby částice s můstkem v přítomnosti farmaceutického činidla.

Description

Zesítěné částice vhodné pro aplikaci farmaceutického prostředku, způsob jejich výroby, farmaceutický prostředek, který je obsahuje a způsob jeho výroby

Oblast techaiKy

Předkládaný vynález se týká zesítěných částic vhodných pro doručení farmaceutického prostředků na místo určení. Vynález se především týká zlepšených způsobů stabilizace těchto částic a kontroly absorpce a .uvolnění farmaceutického činidla u obratlovců.

Dosavadní stav: -techniky

Účinné doručení farmaceutického činidla ná aktivní místo a dosažení přijatelné rychlosti uvolnění farmaceutických činidel jsou dlouhodobými problémy při vývoji a zlepšování farmaceutické léčby. Zejména bylo zjištěno, že gastrointestinální trakt obratlovců obsahuje mnoho fyzikálních a chemických bariér působících proti úspěšnému podávání terapeutických činidel. Například musí být terapeutická činidla schopná odolat útoku endogenních enzymů, žaludeční kyselosti a střevní alkalitě, aniž by ztratila aktivitu, a potom ještě musí proniknout přes gastrointestinální sliznici do krevního řečiště a na místo, kde se požaduje jejich aktivita. Kromě toho musí tento proces proběhnout vhodnou rychlostí, aby byla doručena správná terapeutická dávka.

V minulosti se při pokusech o řešení těchto problémů využívalo mnoho přístupů. Například podávání zvláště vysoké dávky aktivního činidla může být účinné pro zajištění toho, aby alespoň část činidla dosáhla požadovaného aktivního místa bez degradace. Tento přístup podávání enterických činidel je samozřejmě problematický a není ekonomický. V některých případech může být vhodné připravit jednoduché mechanické nosiče, jako jsou stlačené tablety nebo enterické povlaky, aby se zvýšila • · ········ ······ · · ········ • · · · ·· ·· ·· ·· enterická snášenlivost příslušného činidla a aby se regulovala rychlost uvolňování léčiva. V nedávné době se také 'prováděl výzkum za účelem vyvinutí lipozomů nebo lipidových mikrobublin, které se mohou použít pro opouzdření aktivního činidla. Tyto výzkumy byly ve všech případech neúspěšné.

Mikro a nanočástice, které mohou opouzdřit farmaceutické činidlo za účelem ochrany a regulace rychlosti jeho uvolňování, jsou popsány v US patentu číslo 5,352,461. Tento patent se týká samosestavitelných systému částic pro doručení léčiva, které jsou tvořeny 2,5-diketo-3,6-di(4-sukcinylaminobutyl)piperazinem, a u kterých je nárokováno, že jsou citlivé na pH, čímž se tedy rozpadnou a uvolní požadované farmaceutické činidlo při vysokém pH. Další činidla, která jsou navrhována jako schopná opouzdřit činidla, jako je insulin a heparin, a chránit tyto molekuly před žaludeční kyselostí a žaludečními enzymy, a která jsou schopná uvolnit činidla do krevního řečiště, jsou popsaná v mezinárodní patentové přihlášce číslo WO 88/01213. Samosestavitelné částicové systémy titrovatelné pomocí pH, založené na samosestavovacích vlastnostech bisamiddikarboxylových kyselin, jsou popsány v práci od Bergeron a kol., J. Am. Chem. Soc. 1995, 117, 6658-6665. Tyto částice mají rovněž tu vlastnost, že jsou stabilní při nízkém pH a nestabilní při vzrůstu'pH.

Mezinárodní patentová přihláška číslo WO 96/29991 popisuje vznik samosestavitelných částic, které jsou založeny na polyaminokyselinách, přesněji na polyleucinglutamátu. Tyto částice, které se připravuji z přírodních aminokyselin, mají kontrolovanou velikost částic a jsou stabilní v širokém rozmezí pH.

Částice pro zachycení farmaceutických činidel,, zejména peptidů a proteinu, se mohou také tvořit polyelektrolytovou komplexací různých aniontových polymerů s kationtovými polymery. Anionto-

······ · ··· · • · · * · · · • · · · · · · vé polymery mohou obsahovat přírodní látky, jako je mimo jiné alginát sodný, karboxymethylcelulóza, guaran, polyglutamová kyselina a její deriváty. Příklady kationtových polymerů zahrnují polylysin a želatinu. Další polykationty a polyanionty jsou popsané podrobně v Evropském patentu číslo 671169, US patentu číslo 4,835,248 a US patentu číslo 5,041,291, které jsou zde celé uvedeny jako odkaz.

Bohužel však existují omezení účinnosti částic pro transport léčiv podle dosavadního stavu techniky, což bylo zjištěno v mnoha případech, kdy tyto částice rychle uvolnily příslušné farmaceutické činidlo po parenterálním nebo enterálním podání. Bylo proto vynaloženo úsilí o přípravu stabilizovaných mikročástic za použití glutaraldehydového zesilujícího činidla. Tento způsob zesítění má však tu nevýhodu, že může vést k modifikaci příslušného farmaceutického činidla, což je samozřejmě nežádoucí. Další nevýhodou je, že toto zesítění se v ideálním případě provádí za alkalických podmínek, což jsou podmínky, při kterých mnoho těchto částic citlivých na pH rychle uvolní požadované farmaceutické činidlo.

ue proto zřejmé, že by bylo velmi vhodné nalézt praktický způsob stabilizace částic, které jsou vhodné pro použití s částicemi citlivými na pH, a který se může provádět s malým nebo s žádným nebezpečím modifikace příslušného farmaceutického činidla. Zejména je velmi žádoucí nalézt způsob, který,by se mohl použít pro transport farmaceutických činidel.

Podstata vynálezu

Předmětem podle předkládaného vynálezu je tedy poskytnout praktický způsob stabilizace částic, který sníží nebo eliminuje modifikaci příslušného farmaceutického činidla.

• · • · ······ ·· ··« ·« · ···«

Dalším předmětem podle předkládaného vynálezu je poskytnout způsob ^doručení farmaceutických činidel na místo určení, který sníží nebo vyloučí modifikaci farmaceutického činidla.

Při uskutečňování výše uvedených cílů byly v souladu s jedním provedením podle předkládaného vynálezu poskytnuty zesítěné částice, které se mohou formulovat, za použití následujících složek:

a) jednoho nebo více polymerů schopných tvořit částici, kdy každý z polymerů obsahuje reaktivní karboxylovou skupinu, hydrazidylovou skupinu, aminoskupinu a/nebo thiolovou skupinu; a

b) můstek obsahující dvě nebo více reaktivních karboxylových skupin, hydrazidylových skupin, aminoskupin a/nebo thiolových skupin;

kde se zesítění dosáhne pomocí karbodiimidové vazby mezi karboxylovou skupinou a hydrazidylovou skupinou, aminoskupinou a/nebo thiolovou skupinou polymeru(ů) a můstku.

Podle dalšího provedení předkládaný vynález poskytuje prostředek obsahující farmaceutické činidlo zachycené v zesítěné částici, kde zesítěná částice obsahuje:

a) jeden nebo více polymerů schopných tvořit částici, kdy každý z polymerů obsahuje reaktivní karboxylovou skupinu, hydrazidylovou skupinu, aminoskupinu a/nebo thiolovou skupinu; a

kde se zesítění dosáhne v přítomnosti farmaceutického činidla a je katalyzováno pomocí karbodiimidové vazby mezi karboxylo-

• ·«···· · · · · · • · ···· ·· ·*· · ·· «· ·· vou skupinou a hydrazidylovou skupinou, aminoskupinou a/nebo thiolovou skupinou polymeru(ú) a můstku.

Podle dalšího provedení předkládaný vynález poskytuje způsob přípravy zesítěných částic, který zahrnuje reakci (za vhodných podmínek):

a) jednoho nebo více polymerů schopných tvořit částice, kdy každý polymer obsahuje reaktivní karboxylovou skupinu, hydrazidylovou skupinu, aminoskupinu a/nebo thiolovou skupinu; a

b) můstku obsahujícího dvě nebo více reaktivních karboxylových skupin, hydrazidylových skupin aminoskupin a/nebo thiolových skupin; a kde se zesítění dosáhne pomocí karbodiimidové vazby mezi karboxylovou skupinou a hydrazidylovou skupinou, aminoskupinou a/nebo thiolovou skupinou polymeru(ů) a můstku.

Podle dalšího provedení předkládaný vynález poskytuje způsob výroby prostředku obsahujícího jedno nebo více farmaceutických činidel, který zahrnuje reakci zesítěných částic s jedním nebo více farmaceutickými činidly, kde částice obsahují:

a) jeden nebo více polymerů schopných tvořit částice, kdy každý polymer obsahuje reaktivní karboxylovou skupinu, hydrazidylovou skupinu, aminoskupinu a/nebo thiolovou skupinu; a

b) můstek obsahujícího dvě nebo více reaktivních karboxylových skupin, hydrazidylových skupin aminoskupin a/nebo thiolových skupin; a kde se zesítění dosáhne pomocí karbodiimidové vazby mezi karboxylovou skupinou a hydrazidylovou skupinou, aminoskupinou a/nebo thiolovou skupinou polymeru(ů) a můstku.

• ·

• · ······ ·· ··· · · · «·

Ještě podle dalšího provedení předkládaný· vynález poskytuje způsob kontrolovaného uvolňování farmaceutického činidla v těle pacienta, kdy tento způsob zahrnuje podávání účinného množství prostředku obsahujícího farmaceutické činidlo zachycené v zesítěné částici, pacientovi, kdy jmenované částice obsahuj í :

b) můstek obsahujícího dvě nebo více reaktivních karboxylových skupin, hydrazidylových skupin aminoskupin a/nebo thiolových skupin.

V těchto provedeních má můstek s výhodou vzorec:

NH₂NHCO-R-CONHNH₂, kde -R- je přímá vazba nebo R je přímý nebo rozvětvený řetězec nebo cyklická alkylová skupina, alkenylová skupina, alkinylová skupina nebo arylová skupina a kde alkylová skupina, alkenylová skupina nebo alkinylová skupina obsahují až 10 atomů uhlíku. Můstek může být také vybrán ze skupiny, kterou tvoří: hydrazin, dihydrazid kyseliny šfavelové, dihydrazid malonové kyseliny, dihydrazid jantarové kyseliny, dihydrazid glutarové kyseliny, dihydrazid adipové kyseliny, dihydrazid maleinové kyseliny, dihydrazid fumarové kyseliny nebo dihydrazid butadienové kyseliny, dihydrazid glutamové kyseliny, dihydrazid asparagové kyseliny, dihydrazid jablečné kyseliny, dihydrazid kyseliny vinné, dihydrazid terefthalové kyseliny, dihydrazid isofthalové kyseliny a dihydrazid fthalové kyseliny.

Podle dalšího provedení může být můstek vybrán ze skupiny, kterou tvoří malonová kyselina, maleinové kyselina, jablečná kyselina, citrónová kyselina, glutamová kyselina, asparagová kyselina, jantarová kyselina, adipová kyselina, glutarová ky• · · · • · « ·

7· · · · · « ···· • ·· · ·· · · · · ·* selina, dimethylglutarová kyselina, šfavelová kyselina, fumarová kyselina, fthalová kyselina, vinná kyselina, isofthalová kyselina, a terefthalová kyselina a jejich rozvětvené alkylové deriváty, kde alkylová skupina jmenovaného alkylového derivátu obsahuje až 10 atomů uhlíku.

V ještě dalších provedeních můstek obsahuje nejméně jednu reaktivní karboxylovou skupinu a nejméně jednu reaktivní nydrazidylovou skupinu. Můstek může také obsahovat nejméně jeden biologicky rozložitelný můstek. Biologicky rozložitelným můstkem může být esterový můstek, například můstek z 2-aminoethylesteru aminokyseliny. Ve výhodném provedení je můstkem 2-aminoethylester glycinu nebo fenylalaninu nebo jeho disukcinimidylový derivát. Ve výhodném provedení jsou disukcinimidylový derivát 2-aminoethylesterů glycinu a fenylalaninu vybrány ze skupiny, kterou tvoří Ν,N¹-disukcinimidyl-(2-amino-2-benzylethanoát), N,N'-disukcinimidyl-2-aminoethyl-ethanoát a ethylenglykolbis[sukcinimidylsukcinát].

Zesítěné částice mohou být kovalentně vázány k požadované sloučenině. V jiném provedení je farmaceutické činidlo vybráno ze skupiny, kterou tvoří peptidová a proteinová léčiba, DNA, RNA, protilátky, vakciny, zobrazovací činidla, hormony, polysacharidy, antibiotika, antikoagulanty, imunomodulační činidla, cytotoxická činidla, steroidy, činidla proti městnání krve, anestetika a sedativa. Ve výhodných provedeních je farmaceutické činidlo vybráno ze skupiny, kterou tvoři kalcitonin, erythropoietin, thrombopoietin, faktor stimulující kolonie granulocytů, faktor kmenových buněk, analoga LHRH, somatostatin, insulin, interferony a inhibitory aktivátoru plasminogenu.

Další předměty, rysy a výhody podle předkládaného vynálezu budou zřejmé z podrobného popisu, který následuje. Je však třeba poznamenat, že následující podrobný popis a specifické • · ·*···· · · · · • · · · · · ····

8· · · · « · · · · · • ·· · ·· · · ·· ·« příklady, které popisují výhodná provedení, jsou uvedena pouze za účelem ilustrace, protože mohou být provedeny změny a modifikace spadající do rozsahu předkládaného vynálezu, které budou odborníkům pracujícím v této oblasti zřejmé z podrobného popisu.

Popis obrázků na výkresech

Obr. 1 ukazuje změnu hladiny glukózy v séru u samců krys Wistar po nitrožilním podání insulinu a insulinu zachyceného na zesítěné částici připravené z želatiny a karboxymethylcelulózy (CMC). Obrázek ukazuje procentuální koncentraci glukózy v séru (vzhledem ke koncentraci glukózy v séru v čase nula) , proti času. Analýza krve se prováděla 0, 1, 2, 3, 4, 5 a 6 hodin po podávání. Krysám se podávaly bud' vysoce zesítěné částice, středně zesítěné částice, částice s nízkým stupněm zesítění nebo kontrolní insulin. Každé kryse se podávalo buď 100 gg insulinu nebo částicový prostředek obsahující 100 gg insulinu.

Obr. 2 ukazuje změnu hladiny insulinu v séru u samců krys Wistar po nitrožilním podání insulinu a insulinu zachyceného na zesítěné částici připravené z želatiny a polyglutamové kyseliny [Gel/P-Glu] nebo želatiny a adipylhydrazidylu [Gel/AHP-Glu]. Obrázek ukazuje procentuální koncentraci glukózy v séru (vzhledem ke koncentraci glukózy v séru v čase 0) proti času. Analýza krve se prováděla 0, 1, 2, 3, 4, 5 a 6 hodin po podávání. Každé kryse se podávalo buď 100 gg insulinu nebo částicový prostředek obsahující 100 gg insulinu.

Obr. 3 ukazuje vliv na hladinu glukózy u krys po podání částic obsahujících insulin. Zesítění EDAC a AH velice sníží rychlost uvolňování insulinu z částic.

Obr. 4 ukazuje vliv rostoucího množství zesífovadla štěpitelného esterázou na in vivo rychlost uvolňování insulinu z AHCMC nanočástic.

Obr. 5 ukazuje snížení hladiny glukózy v séru u krys po orálním podání insulinu konjugovaného s vitaminem B-12 obsahujícím I3CA nanočástice.

Podrobný popis vynálezu

Předkládaný vynález poskytuje zesítěné částice, které jsou vhodné pro doručení farmaceutických činidel, u kterých jinak dochází ke ztrátě účinnosti v důsledku jejich nestability, nepřiměřené absorpce nebo nevhodné rychlosti uvolňování. Činidla podle předkládaného vynálezu zejména obsahují peptidová a proteinová léčiva, která podléhají proteolytickému rozkladu nebo jsou jinak nestabilní v žaludku a v tenkém střevě.

somatostatinu, plasminogenu,

Obecně je výhodným způsobem podávání terapeutických činidel enterická a zejména orální cesta. Umožňuje snadné podávání a související vysokou úroveň snášenlivosti pacientem. Avšak mnoho terapeutických činidel nemůže být v současné době podáváno orální cestou. Mezi příklady takových činidel patří peptidová a proteinová léčiva, včetně kalcitoninu, erythropoietinu, thr.ombopoietinu, faktoru stimulujícího kolonie granulocytů, faktoru kmenových buněk, analoga LHRH, insulinu, interferonu, inhibitorů aktivátoru rekombinantních protilátek a monoklonálních protilátek. V popisu předkládaného vynálezu se termín „farmaceutické činidlo v žádném případě neomezuje na peptidová a proteinová léčiva, ale zahrnuje jakákoli léčebná, profylaktická nebo diagnostická činidla, jejichž dodání na místo určení se může usnadnit za použití zesítěných částic podle předkládaného vynálezu. Například se mohou doručit určité DNA a RNA („sense nebo „antisense), protilátky, vakcíny a také tradiční chemoterapeutická činidla. Termínem „farmaceutické • · ······ «· ·· ··· ·· · ««·· • · · · · · ···· • ·····< · · · · ·· · • · ···· ···· • · · · ·· · · · · · · činidlo se tedy rozumí, že zahrnuje jednoduché organické nebo anorganické sloučeniny, výživné látky a zobrazovací činidla, jako jsou kovy, radioaktivní izotopy, činidla nepropustná pro záření nebo látky vyzařující radioaktivní záření. Příklady „tradičních chemoterapeutických činidel jsou hormony, polysacharidy, jako je heparin, antibiotika, protizánětlivé sloučeniny, antivirová činidla, vasoaktivní a neuroaktivní činidla, antikoagulanty, imunomodulační činidla, cytotoxická činidla, steroidy, látky snižující překrvení, anestetika, sedativa a jakákoli jiná činidla, která je nutné dodat pacientovi za léčebnými, profylaktickými nebo diagnostickými účely. Tento seznam tříd farmaceutických činidel nelze považovat za vyčerpávající.

Dále se mohou farmaceutická činidla podle předkládaného vynálezu vyskytovat v různých formách, například jako nabité nebo nenabité molekuly, jako složky molekulových komplexů, jako soli, aminy, ethery, estery nebo amidy nebo jako další deriváty nebo proléČiva příslušných činidel.

Předkládaný vynález se neomezuje pouze na enterické dodání farmaceutických činidel. Podle předkládaného vynálezu muže být také výhodné parenterální dodání farmaceutických činidel na místo určení, jako například když musí farmaceutické činidlo překonat bariéru (jinou než gastrointestinální sliznici) v těle, aby dosáhlo cílového orgánu nebo cílového místa. Jedním z příkladů takové bariéry je bariéra krev-mozek. Dále se farmaceutická činidla mohou doručit na aktivní místo a tam se mohou zadržet.

V souvislosti s předkládaným vynálezem znamená termín „zesítěný, že v polymerech a/nebo mezi polymery, které tvoří částici jsou kovalentní chemické vazby. Toto zesítění zvyšuje stabilitu částice, čímž se dosáhne lepší ochrany zachyceného farmaceutického činidla a také se zvýší úroveň kontroly, což • · ·«···· · · ·· «·· « · 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 99 9 9 9 9 9 9 se může projevit při načasování a rychlosti uvolňování farmaceutického činidla.

Zesilovací techniky podle předkládaného vynálezu se mohou použít pro jakýkoli typ částic, které jsou buď již známé, nebo které se mohou vynalézt v budoucnosti, pod podmínkou, že polymerní složky částic buď obsahují nebo se mohou modifikovat tak, aby obsahovaly, reaktivní karboxylovou skupinu, hydrazidylovou skupinu, aminoskupinu a/nebo thiolovou skupinu. Termín „reaktivní znamená v této souvislosti, že tyto skupiny jsou přítomny s výhodou na vnějším povrchu částice a nejsou bráněny dalšími funkčními skupinami, čímž se umožní, aby proběhla zesífovací reakce podle předkládaného vynálezu.

Termín „částice také zahrnuje všechny částice pro dodání farmaceutického činidla bez ohledu na jejich třírozměrný tvar nebo konformaci. Částice podle předkládaného vynálezu mohou být takové, že plně nebo částečně opouzdřují farmaceutické činidlo nebo zachycují farmaceutické činidlo v polymérní matrici částice. Částice, které byly výše zatříděny jako mikro- nebo nanočástice, jsou do této definice zahrnuty takovým způsobem, že střední průměr částice se může měnit mezi 10 nm až 900 pm. Například částice, které jsou určené pro působení jako implantáty, které budou umístěny v příslušné oblasti těla pro kontrolované uvolňování farmaceutického činidla, mohou mít popřípadě střední průměr 400 až 800 pm, zatímco částice, u kterých se vyžaduje uložení uvnitř buněk nebo transport přes gastrointestinální sliznici, budou mít střední průměr nižší než 10 pm. Naproti tomu mohou být částice podávané podkožně popřípadě v průměru větší než 10 pm, čímž se zabrání, aby částice vstoupily zpět do oběhu.

Tvar a trojrozměrná konformace částice bude záviset na uvažovaném použití příslušné částice. Specificky se může tvar nebo konformace částice vybrat na základě znalosti trojrozměrného

tvaru nebo konformace farmaceutického činidla, které se má dodávat.

Následující dokumenty, které jsou zde uvedené jako odkaz, se týkají různých typů částic, které se mohou použít nebo modifikovat pro použití v souvislosti s předkládaným vynálezem. Tento seznam dokumentů a typů částic není v žádném ohledu vyčerpávající. US patent číslo 5,352,461; Mezinárodní patentová přihláška číslo WO 88/01213; Bergeron a kol., J. Am. Chem. Soc., 1995, 117, 6658-6665; Mezinárodní patentová přihláška číslo WO 96/29991; Evropský patent číslo 6712169; a US patenty číslo 4,835,248 5,041,291.

Obecně, a znovu aniž by došlo k omezení rozsahu podle vynálezu, mohou být Částice pro dodání farmaceutických prostředků na místo určení připraveny pomocí mnoha způsobů, z nichž některé jsou uvedeny níže:

(i) Odpaření rozpouštědla

Při této technice se sloučenina, která je rozpustná v jednom rozpouštědle disperguje do němísitelného rozpouštědla a první rozpouštědlo, se odpaří. Částice vzniklé tímto způsobem se používají pro parenterální podávání mnoha sloučenin rozpustných ve vodě. Příkladem takového systému může být vznik nanočástic polymléčné-glykolové kyseliny, ve kterých je zachyceno protihoubové činidlo, například griseofulvin.

(ii) Desolvatace

Při tomto způsobu se sloučenina rozpustí v první kapalině (rozpouštědlo) a přidá se druhá kapalina (která je mísitelná s první kapalinou, ale ve které není sloučenina rozpustná). Přidá se tolik druhé kapaliny, aby se sloučenina desolvatovala. Během procesu desolvatace fáze bohatá na sloučeninu (koacervát, shluh) obsahuje obohacené množství sloučeniny, která je dispergovaná jako mikrokapénky ve fázi s nedostatkem slou13 ······· · · · · · · · • · · · · · ···· • · · · · · · · · · · · ceniny. V tomto stupni se spojený materiál múze chemicky zesířovat pomocí vhodného zesilujícího činidla za vzniku mikro- nebo nanočástic. Tímto způsobem se mohou připravit nanočástice želatiny nebo BSA. Roztoky těchto proteinů se desolvatují pomocí přidání roztoku síranu sodného nebo síranu amonného. V bodě desolvatace vzroste zakalení, kdy mohou pomocí přidání vhodného zesítsovadla, jako je glutaraldehyd nebo butandion, vzniknout nanočástice.

(iii) Koacervace komplexu

Při tomto způsobu se ve vodném médiu smísí dva polyelektrolyty o opačném náboji tak, že proběhne spontánní rozdělení fází kapalína/kapalina. Jev se omezuje na polymery, které mají vhodnou hustotu iontového náboje a délku řetězce. Typicky tyto mikrokuličky vzniknou pomocí přidání polyaniontu, jako je polyglutamová kyselina, karboxymethylcelulóza, arabská guma, alginát nebo polyfosfát, k polykationtu, jako je želatina nebo polylysin.

(iv) Neslučitelnost polymer/polymer

Tento způsob je založen na zjištění, že chemicky různé polymery rozpuštěné v obecném rozpouštědle, jsou neslučitelné. Směs bude mít tedy sklon ke vzniku dvou fází. Nerozpustná fáze se může použít pro potažení jádra částic za vzniku mikrotobolek. Příkladem může být srážení ethylcelulózy z cyklohexanu pomocí přidání polyethylenu.

(v) Mezifázová polymerace

Při této technice se dva reaktanty, kdy je každý rozpuštěný ve vzájemně němísitelných kapalinách, difundují na rozhraní mezi dvěma kapalinami, kde reagují za vzniku stěny tobolky. K takovémuto vzniku tobolek může dojít například když se směs sebakoylchloridu rozpuštěná v olejové fázi emulguje do vodné fáze obsahující ethylendiamin.

• 0 »····· ·· ··

9 9 9 9 9 9 9 9 · ······· · ··· ·· · • · · · · · ···· ··· · · · ·· ·· · ·

Jak je zřejmé z popisu uvedeného výše, pro dodání farmaceutických činidel na místo určení se mohou použít různé třídy polymerů jsou schopny tvořit částice.

Způsob zesítění částic podle předkládaného vynálezu se provádí pomocí reakce mezi karboxylovou skupinou, hydrazidylovou skupinou, aminoskupinou a/nebo thiolovou skupinou na polymeru nebo polymerech, které tvoří částice, s můstkem, který obsahuje dvě nebo více karboxylových skupin, hydrazidylových skupin, aminoskupin a/nebo thiolových skupin, kdy je reakce obvykle katalyzována přítomností nejméně jednoho karbodiimidu. Výhodné zesífující reakce obvykle zahrnují: vznik hydrazidové vazby mezi hydrazidovou a karboxylovou skupinou; vznik emidu mezi aminem a karboxylovou skupinou; vznik thioesterové vazby karboxylovou skupinou a thiolovou skupinou; a vznik disulfidické vazby mezi dvěma thiolovými skupinami. Odborníkům v této oblasti je jistě zřejmé, že pokud polymer nebo polymery vybraného částicového systému neobsahují reaktivní karboxylovou skupinu, hydrazidylovou skupinu, aminoskupinu a/nebo thiolovou skupinu, budou se muset pro tento účel chemicky modifikovat. Při typické reakci se může polymer obsahující karboxylové skupiny substituovat hydrazidylovými skupinami pomocí reakce polymeru s dihydrazidylovým můstkem a vhodným karbodiimidem (viz. příklad 7 a 8 a Russell-Jones a kol., Bioconjugate Chemistry, 6, 459-465).

Mezi polymery vhodné pro použití podle předkládaného vynálezu patří: polyaminokyseliny, jako je polyglutamová kyselina, polyasparagová kyselina, polylysin; póly(N-acylhydroxypropinestery; polysebaková kyselina ; polyfumarová kyselina; polymléčná kyselina; polyglykolová kyselina; kopolymer polymléčné a glykolové kyseliny; karboxymethylcelulóza; arabská guma; alginát; polyfosfát; heparin; želatina; kopolymery kyseliny sebakové a fumarové; kopolymery biskarboxyfenoxypropanu a sebakové kyseliny; póly (karboxyfenoxyoctová) kyselina; póly(kar15 • »····· ·· »· • ·· ····· «»····· · ··· ·· · • · ·»·· · · · · ··· · ·· · · · · · · boxyfenoxyvalerová) kyselina; poly-e-kaprolakton a příbuzné polyestery, (poly-e-kaprolakton-ko-5-valerolakton) ; - poly-c-kaprolakton-ko-DL-mléčná kyselina; hyaluronová kyselina; chitin; chitosan; dextran; karboxydextran; kolagen; albumin; fibrinogen; a další přírodně se vyskytující polymery, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady.

Schéma 1 ukazuje příklad reakčního postupu podle předkládaného vynálezu. V tomto schématu se trikarboxylová kyselina, kyselina citrónová, nejprve reaguje s dvojnásobným molárním přebytkem EDAC a NHS. Získaný disukcinimidylester se potom reaguje s polymerem modifikovaným adipylhydrazidem za vzniku kovalentně zesítěného polymeru (viz. příklad 8).

Schéma 1:

II

A.

ch₂cooh

HOCCOOH

I ch₂cooh ch₂c-o-n

Póly!glu-ko-adipylhydrazidglu]

O

II

O

II —(NH-CH-C)^— (NH-CH-C)y

CH,	CH,
CH, \|	CH,
C=O	C=O
OH	NH
	NH
	C=O

	C=O
	NH
	NH,

+ 2-EDAC/2-NHS ,1

HOCCOOH ch₂c-o-n ¹¹ \ ⁰

Kyselina citrónová bis modifikovaná Póly[glu-ko-adipylhydrazidgl

Kyselina-citrónová

CHjCOOH

HOCCOOH I

CHjCOOH + 2-EDAC/2-NHS

O

II

O

II

O

II

I * CH,	CH, 1
CH,	CH, \|
1 C=O	C=O I
OH	NH 1
	NH
	C=O
	(CH_s)₄
OH	C=O
c=o	NH

NH—C—CH,-C—CH,-C—NH i

OH

II

O

NH

C=O (CH_ah c=o

NH

NH i

C=O

CH,

OH

C=O i

CH,

ČH, CH,

I 1 —(NH-CH-CMNH-CH-CJjO o ·· e··· ··· · · · · · · · * · · · » · · · · · ····*·· · · · · ·· · • · · · « · ···· • · · · ·· · < · · · ·

Následující schéma 2 uvádí další příklad obecného reakčního postupu podle předkládaného vynálezu. Ve schématu 2 se karboxylové kyseliny na polymeru reagují s EDAC v přítomnosti 0,5 molárního ekvivalentu adipylhydrazidu za vzniku kovalentně zesítěného polymeru (viz. příklad 3).

Schéma 2:

o o —NH-CH-Č—NH-CH-C-

CH, I *	CH,
CH, I	CH,
C=O	C=O
OH	OH

Bis modifikovaná adipylhydrazid-polyglutamová kyselina

Adipylhydrazid	O II	o II
NH, I * NH ♦ 2-EDAC	—NH-CH-C— 1 CH, 1 CH,	-NH-CH-C— l CH_a i CH_:

(CH,)4	Č=O	č=o
C=O	OH	NH
NH		NH
NH,		c=o
		(CH,)₄
		č=o
		NH
		NH	OH
		c=o	Č=O
		CHj \| *	CH,
		CH,	CH,

—NH-CH-C—NH-CH-C— II II

O O

Podle předkládaného vynálezu se může s výhodou použít jeden z následujících typu karbodiimudú: N-ethyl-N(3-dimethylaminopropyl ) -karbodiimid (známý jako EDC nebo EDAC), N,N'dicyklohexylkarbodiimid (DCC), Ν'-diisopropyl-karbodiimid, N'N'-di-terc.butylkarbodiimid, 1-cyklohexyl-3 -(4-diethylaminocyklohexyl)karbodiimid, 1,3-di-(4-diethylaminocyklo-hexyl)karbodiimid, 1-cyklohexyl-3 -(diethylaminoethyl)karbodiimid, 1cyklohexyl-3-(2-morfolinyl-(4)ethyl)karbodiimid, 1-cyklohexyl3 -(4-diethylaminocyklohexyl)karbodiimid (Sheehan et al, J. Org. Chem., 21, 439-441 (1956)), vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady. Může se však samozřejmě použít jakékoli „kondenzační činidlo, které generuje aktivní ester, například BOP, PyBOP, TSTU, HBTU, TBTU, HBPyU, DPPA, IIDQ, EEDQ.

0 00 0

0« 00

000 «0 0 *«00 • 00 00 · · 0 0 0 0000000 0 · 0 · « 0 0

Π · · 00000000

-¹- ' 000 0 ·· ·· 00 ··

Tato kondenzační činidla jsou dobře známá z oblasti syntézy peptidů.

Dihydrazidový můstek podle předkládaného vynálezu zahrnuje sloučeniny obecného vzorce I:

NH₂NHCO-R-CONHNH₂ vzorec I kde R je přímá vazba nebo přímá, rozvětvená nebo cyklická alkylová skupina, alkenylová skupina, alkinylová skupina nebo arylová skupina. R s výhodou obsahuje až 10 atomů uhlíku, vynález se však neomezuje pouze na tyto můstky.

Výhodné dihydrazidy jsou vybrány ze skupiny, kterou tvoří dihydrazid kyseliny šúavelové, dihydrazid kyseliny malonové, dihydrazid kyseliny jablečné, norbornendihydrazid, dihydrazid kyseliny fthalové, dihydrazid kyseliny vinné, dihydrazid kyseliny jantarové, dihydrazid kyseliny glutarové, dihydrazid kyseliny adipové, dihydrazid kyseliny maleinové, dihydrazid kyseliny fumarové nebo dihydrazid kyseliny butadienové. Může se' také použít hydrazin, vynález se však neomezuje pouze na tyto příklady.

Mezi můstky na bázi karboxylových kyselin, které se mohou použít podle předkládaného vynálezu, patří kyselina malonová, kyselina maleinová, kyselina citrónová, kyselina glutamová, kyselina asparagová, kyselina jantarová, kyselina adipová, kyselina glutarová, kyselina dimethylglutarová, kyselina šúavelová, kyselina fumarová, kyselina fthalová, kyselina vinná, kyselina isofthalová, kyselina terefthalová a jejich rozvětvené alkylované deriváty.

Můstek může také obsahovat více než dvě karboxylové skupiny, hydrazidylové skupiny, aminoskupiny a/nebo thiolové skupiny nebo dokonce kombinace karboxylové skupiny, hydrazidylové skupiny, aminoskupiny a/nebo thiolové skupiny, v závislosti na povaze reaktivních skupin přítomných na polymeru/polymerech.

« « ······ ·· ··« ·· · · · ♦ · ······· · · · · ·· · • · ···· ···· η g ··· · ♦* ·· ·· ··

Το znamená, že, pokud je na polymeru nebo polymerech přítomna pouze reaktivní karboxylová skupina,- potom se může použít můstek obsahující pouze hydrazidylovou reaktivní skupinu, amino reaktivní skupinu nebo thiolovou reaktivní skupinu a naopak. Pokud polymer nebo polymery obsahují například jak karboxylovou, tak hydrazidylovou skupinu, může být vhodné, aby můstek také obsahoval obě tyto reaktivní skupiny.

Obecně podmínky, které je nutné použít při provádění zesilovací reakce, obecně využívají molárních ekvivalentů můstku a karbodiimidu, v závislosti na úrovni zesítění, které se požaduje. Potom je nutné nechat reakci 2 až 24 hodin, s výhodou nejméně 4 hodiny, v klidu, aby se mohlo dokončit zesilování. Zesítěné opouzdřené částice se mohou získat pomocí dialýzy proti destilované vodě nebo jiným vhodným pufrům, jako je PBS, solanka, Hepes a podobně.

Farmaceutické činidlo se může začlenit do částice během vzniku částice, s výhodou pomocí přidání farmaceutického činidla do směsi složek potřebných pro přípravu částice. Alternativně, v případech, jako je vznik nanočástic pomocí komplexace polyelektrolytu, se může farmaceutické činidlo přidat bud' v polykationtové fázi nebo v polyaniontové fázi, v závislosti na jeho rozpustnosti, a směs se může pomalu přidat ke srážecí fázi (viz. příklady 1 a 2).

Ve výhodném provedení podle předkládaného vynálezu můstek zahrnuje biologicky rozložitelnou vazbu, která se může degradovat kontrolovaným způsobem za specifických okolností. Je například možné zařadit mezi můstky spojovací jednotky, které se budou štěpit v definovaném prostředí tak, že se biologicky rozložitelná vazba bude štěpit za uvolnění částic farmaceutického činidla, které jsou na něm zachycené. Tyto biologicky rozložitelné vazby mohou být vybrány specificky na míru tak, aby umožnily štěpení můstku v požadovaném prostředí. Příklady • · · · • · · · · · · · • · ·· c · · · ·

9··· · · » ··« ·· · • ···· ···· • · · · * ·· ·· biologicky rozložitelných vazeb zahrnují disulfidické vazby, azoskupiny a estery, které se mohou štěpit za definovaných podmínek. Vhodnými thiolově štěpitelnými vazbami jsou například cystamin, cystin a oxidovaný glutathion, kdy poslední dva jmenované se mohou aktivovat NHS a karbodiimidem a potom použit pro zesítění hydrazidylových skupin. Další thiolově štěpitelná zesíťovadla, která se mohou reagovat přímo s postranními hydrazidylovými skupinami, mimo jiné zahrnují bis-[β(4-azidosalicylamido)ethyl]disulfid, dithiobis-(sukcinimidylpropionát), dimethyl-3,3'-díthíobispropionimidát, 3,3'-dithiobis (sulfosukcinimidylpropionát), sulfosukcinimidyl-2-(m-azidoo-nitrobenzamido)ethyl-1,3'-dithiopropionát, N-sukcinimidyl-6(4'-azido-2'-nitrofenyl-amino)hexanoát a sulfosukcinimidyl-2(p-azidosalicylamido)ethyl-1,3-dithiopropionát.

Vhodnými můstky štěpitelnými esterázou jsou ty, které vznikají z 2-aminoethylesterú známých aminokyselin, včetně 2-aminoethylesteru glycinu, 2-aminoethylesterú fenylalaninu, a jejich disukcinimidylových derivátů, včetně Ν,N¹-disukcinimidyl-(2 amino-2-benzylethanoátu), Ν,N¹-disukcinimidyl-2-aminoethylethanoátu a ethylenglykolbis[sukcinimidylsukcinátu].

Podle dalšího provedeni podle předkládaného vynálezu je možné, aby zesítěné částice podle předkládaného vynálezu byly vázány ke sloučeninám (níže označované jako „směrovací sloučeniny), které jsou aktivně absorbovány přes gastroíntestinální sliznici nebo vázány k buňkám intestinálního epitelu. Částice podle předkládaného vynálezu mohou být například vázány k vitaminu B₁₂ nebo jeho analogům, které jim budou umožňovat vazbu k vnitřnímu faktoru (IF) , čímž bude moci být komplex aktivně odebírán ze střeva. Použití takových směrovacích sloučenin je popsáno v WO 87/02251, PCT/AU94/00273 a PCT/AU94/00274, které jsou zde celé uvedeny jako odkaz.

* · ·»···· ·· · » • · · · · · ···· • · · · · · ···· ······· · «·· ® · · • · ··>····· • · · * « · «· 9 9 9 9

Částice podle předkládaného vynálezu se mohou také vázat k virovým adhezinúm, bakteriálním řasinkám, vazebným podjednotkám toxinú, hemagglutininúm, lektinúm nebo bakteriálním invazinům, které jsou obvykle přítomny na povrchu bakterií a virů a které jsou schopné specificky se vázat k intestinálnímu epitelu. Vazba k těmto činidlům tedy vede ke směrování k intestinálnímu epitelu (k prodloužení přenosu farmaceutického činidla střevem níže) nebo může vést k vyvolání absorpce a transcytózy směrující molekuly a převedení léčiva přes bariéru buněk intestinálního epitelu.

Některé příklady bakteriálních adhezinů zahrnují proteiny izolované z různých druhů Streptococcal, jako jsou IgA vazebné proteiny (ARP2, ARP4, bac; Fischetti,. ASM News, 62, 405-410 (1996)), IgA vazebný protein ze skupiny B streptococci (Russell-Jones a kol. 1984); proteinové antigeny skupiny B streptococci se zvláštním důrazem na ibc antigeny, Russell-Jones a kol., J. Exp. Med., 160, 1476-1484 (1984); fibrinogenové vazebné proteiny (Mrp4, Sfb, PrtF, fnbA, fnbB, FnBP, FnBp; Fischetti, 1996, výše) a také kolagenový vazebný faktor (cna) a shlukovací faktor (clfA) z S. aureus.

Další struktury, které jsou zodpovědné za adhezi bakterií k povrchu epitelu, jsou vláknité povrchové adheziny nebo řasinky. Tyto adheziny zahrnují K88, K99 (Mouricout, a kol.

Infect. Immun., 58, 98-106 (1990)), F41 a 987P řasinky nacházející se v E. coli vyskytujících se u neonatálních telat a selat, CFA1 a CFAII řasinky nacházející se v kmenech E. coli způsobujících průjem u člověka, a Pseudomnas aeruginosa PAK pilus (Irvin a kol., Infect. Immun., 57, 37203726 (1989)) Doig a kol., Infect. Immun., 58, 124-130 (1990)). Existuje také typ „P řasinek izolovaný z kmenů E. coli související s pyelonefritidou člověka (Isberg,. Science, 252, 934-938 (1991)).

Fimbríae typu I a typu 2 nacházející se v A. viscosis a A. naeslundii (v tomto pořadí) hraje také potenciální roli při «» ·*···· »· « · · · · · ···· přilnutí a následné internalizaci těchto bakterií (Fischetti, 1996, výše). Podobně protein 36 kDa na povrchu N. gonorrhoeae je zahrnutý do vazby těchto organismu k povrchu laktosyceramidů u buněk lidského epitelu a múze být zodpovědný za absorpci těchto organismů buňkami epitelu (Paruchuri, a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 87, 333-337 (1990)).

Bylo prokázáno, že mnoho bakterií, nehledě na řasinky, má struktury povrchu, u kterých bylo prokázáno, že jsou zodpovědné za epiteliální invazi těchto bakterií, známých jako bakteriální invaziny, které se mohou použít podle předkládaného vynálezu. Například Internalin, což je povrchový protein kódovaný genem inlA L. monocytogenů^ je zodpovědný za internalizaci Listeria do buněk intestinálního epitelu (Cossart, J. Cell. Biochem. Suppl. 8001, str. 36 (1994); Falkow Cell, 65, 1099-1102 (1991)); Mengaud a kol., Cell, 84, 923-932 (1996)) Lingnau a kol., Infect. Immun., 63; 3896-3903 (1995)); Drevets a kol., Infect. Immun., 63; 4268-4276 (1995)). Internalizace Listeria je zahájena po vazbě internalinu k E-cadherinu na buňkách epitelu (Falkow, 1991, výše; Mengaud, a kol., 1996, výše). Protein s podobnou funkcí, jako má internalin, byl nalezen na povrchu Yersinia pseudotuberculosis; tento protein, invasin, je protein obsahující- 986 aminokyselin nacházející se ve vnější membráně Y. pseudotuberculosis (Falkow, (1991), výše; Isberg (1985) výše. Jednoduchý genetický lokus kódovaný Yersinia pseudotuberculosis umožňuje invazi kultivovaných živočišných buněk Escherichia coli K-12. Exprimace tohoto proteinu na povrch jiných gram negativních bakterií, jako jsou E. coli K12, umožňuje vhodné připojení a internalizaci těchto buněk k buňkám epitelu (Falkow, (1991), výše; Isberg a kol., (1985), výše. Podobně se latexové částice potažené internalinem internalizují pomocí kultivovaných buněk savců, Isberg, (1991). Druhý protein z Y. pseudotuberculosis, genový produkt ail, je zodpovědný za vazbu těchto organismů k mnoha euka22 • · ·»···· ·· ·· • · · · · · ··· • ···· « * · · « « · · · • · · · · · ···· • ·· · ·♦ · » · · tt ryotickým buňkám, ale pouze podporuje absorpci u mnoha typů buněk.

Další struktury/proteiny vhodné pro připojení částic podle předkládaného vynálezu zahrnují povrchové proteiny z mnoha virů, o kterých je známé, že zajišťují přístup do intestinálního nebo respiračního epitelu po vazbě k povrchovým strukturám na virech známých jako virové hemagglutininy. Tyto specifické vazebné proteiny se vyskytují na povrchu rotavirů (VP7), adenovirú, Norwalkových virů, (Fukuhara a kol., J. Virol., 62, 2209-2218 (1988)); Yolken, Lennette (Ed.) Vol. 6;

273-291 (1985)). Podobně jsou povrchové hemaglutininy zahrnuty do indukce kysele vyvolané fůze virů do membrán po navázání a absorpci chřipky (Wharton a kol., J. Biol. Chem., 263; 44744480 (1988)).

Na povrchu virů, jako jsou rotaviry, existují další molekuly hemaglutininú, které napomáhají vazbě, internalizaci a transcytóze těchto virů přes buňky intestinálního epitelu (Kelja a kol., J. Ped. Gastroenterol. Nutrition, 7, 249-256 (1988)).

Důkazy však napovídají, že po navázání některých virů k endocytu může být povrchový hemaglutinin štěpen za vzniku fusogenického proteinu, který umožňuje viru vstup do buněk pomocí přímé penetrace buněčnou membránou spíše, než pomocí endocytózy (Kaljot a kol., J. Virol, 62, 1136-1144 (1988));

Fukuhara, a kol., (1988), výše). Tyto molekuly mohou být využitelné při směrování léčiv k buňkám intestinálního epitelu, ale nejsou vhodné pro doručení léčiv do oběhu, protože se endocytosovaný materiál nemusí transcytosovat.

Nehledě na absorpci sliznicí a transport adhezinů, jako jsou řasinky a virové hemaglutininy, bylo také zjištěno, že je možné kovalentně vázat molekuly k vazebným podjednotkám různých toxinů a rostlinných lektinů a vyvolat absorpci vázaných molekul po orálním podávání. Toxiny vhodné pro vyvolání absorpce • · · · Φ · 6 · · « ♦ · · · · · Φ Φ φ · • ······ φ φφφ Φ« φ ~ ~ * · ······»· z J · · · · φφφ® φφφφ zprostředkované receptorem podle předkládaného vynálezu jsou ty, které obsahují strukturní podjednotku AB_n, kde podjednotka A je zodpovědná za toxicitu, zatímco podjednotka B působí jako specifická vazebná jednotka toxinu. Tyto toxiny zahrnují molekuly podobné toxinům cholery, jako je toxin E. coli citlivý na teplo, toxin cholery, toxin citlivý na teplo Campylobacter jejuni, toxin C. botulinum C2, toxin tetanu, toxin diftheria a Pseudomnas exotoxin A (Sears a kol,. Microbiol. Rev. 60, 167 215 (1996)); Waksman a kol., Biochem. Biophys.

Acta., 604, 249-296 (1980), verotoxin, Shiga-toxin (Okerman,

Veterinary Microbiol., 14, 33-46 (1987)). Všechny tyto toxiny mají obecnou vlastnost, že se musí nejprve vázat k membráně a potom projít membránou, aby se projevila jejich toxicita. Je to právě schopnost těchto toxinů vázat se a internalizovat se buňkami epitelu, která způsobuje, že jsou tyto molekuly vhodnými nosiči pro přenos molekul do buněk a přes buňky epitelu.

Bylo také nalezeno mnoho rostlinných toxinů obecné struktury AB, které mají schopnost vázat se k buňkám a být internalizovány a jsou vhodnými molekulami pro směrování podle předkládaného vynálezu. Všechny tyto toxiny jsou orálně aktivní a jako takové mají schopnost vázat se k enterocytům a být jimi internalizivány. Mezi tyto toxiny patří ricin, abrin, viscumin, modeccin a volkesin, které se váží k D-galaktóze (Stirpe a kol., FEBS, 195, 1-8 (1986)). Další A-B toxiny, které by se mohly potenciálně vázat k buňkám intestinálního epitelu a vyvolat absorpci, patří botulinum toxin (z C. botulinum) (Blaustein a kol., FEBS, 225, 115-120 (1987)).

Předkládaný vynález se také týká způsobu kontrolovaného uvolňování léčiva u pacienta, kdy se pacientovi podává prostředek obsahující farmaceutické činidlo, které je zachycené nebo opouzdřené pomocí zesítěné částice podle předkládaného vynálezu. V nej širším smyslu se může tento způsob použít pro léčení, profylaxi nebo diagnózu u mnoha obratlovců, i když je výhodné,

když jsou léčenými živočichy savci. Zvláště výhodná jsou laboratorní zvířata, jako jsou myši, morčata, králíci, domácí zvířata, jako jsou kočky, psi, zemědělská zvířata, jako jsou koně, skot, ovce, kozy, vepři, divoká zvířata v zajetí, jako jsou lvi, tygři, sloni nebo primáti, jako je člověk, šimpanz, pavián a lidoopi.

Účinné množství dodávaného farmaceutického činidla, když se vyskytuje v kombinaci se zesítěnými částicemi podle předkládaného vynálezu, závisí na mnoha faktorech. Povaha těchto faktorů bude odborníkům v této oblasti zřejmá. Mezi faktory tohoto typu patří například věk a pohlaví příslušného obratlovce, onemocnění, kterým trpí nebo ke kterému je náchylný, výška a hmotnost živočicha a typ farmaceutického činidla, které se má podávat. Dávka bude také záviset na tom, zda jsou zesítěné částice vázány k dalším činidlům, které vyvolávají absorpci, a také na stabilitě částice a úrovni kontroly při uvolňování zachyceného nebo opouzdřeného farmaceutického činidla, která bude souviset s povahou a rozsahem zesítění. Když vezme odborník pracující v této oblasti v úvahu všechny tyto faktory, bude moci určit vhodnou dávku. Odborníkům pracujícím v této oblasti jsou dobře známé běžné dávkovači režimy, které se mohou použít pro určení optimální nebo vhodné dávky farmaceutického činidla podle předkládaného vynálezu.

Prostředky podle předkládaného vynálezu se mohou také podávat ve spojení s jedním nebo více farmaceuticky přijatelnými nosiči a/nebo přísadami. Povaha nosiče nebo přísady bude záviset na faktorech, jako je způsob podávání, povaha zesítěné částice a povaha příslušného farmaceutického činidla. Ucelená diskuse o vhodných farmaceutických nosičích a přísadách je uvedena v Handbook of pharmaceutical excipients, druhé vydání, 1394, Wade a Weller (vydavatelé), The Pharmaceutical Press, Londýn, což je zde uvedeno jako odkaz.

• · ·*···· ·· · · ··· ·· · ···· » ···· · · · <ί · · ·· · • · ···· ···· • · · · · · ·· ·· ··

Jak bylo popsáno výše, prostředky podle předkládaného vynálezu se mohou podávat buď pomocí enterálního nebo parentálního způsobu podávání. Podle předkládaného vynálezu je výhodné podávání orální cestou, ačkoli je možné například rektální podávání nebo podávání přímo do žaludku nebo tenkého střeva. Dále mohou být farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu podávány intramuskulárně,, intraperitoneálně, podkožně, očně, ušně, vaginálně, místně, přímo do orgánu nebo pomocí dalších parenterálních způsobů. Odborníkům v této oblasti bude zřejmé, že pro tyto způsoby bude nutné, aby byly prostředky upraveny do vhodných dávkovačích pomocí vhodných nosičů a/nebo přísad, jak je popsáno v Handbook of Pharmaceutical Excipients, výše.

Takto popsaný vynález bude dále ilustrován pomocí následujících příkladů, které slouží pouze jako ilustrace vynálezu a v žádném ohledu neomezují jeho rozsah.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Syntéza nanočástic obsahující insulin pomocí komplexace polyelektrolytu za použití želatiny a karboxymethylcelulózy

Karboxymethylcelulóza .(nízká viskozita, 50-200 cps) se rozpustí při koncentraci 5 % v destilované vodě a pomocí 1M kyseliny chlorovodíkové se pH upraví na 3,9. Želatina (Bloom 175) se rozpustí v koncentraci 5 % v destilované vodě a pomocí 1M kyseliny chlorovodíkové se pH upraví na 3,9. Insulin se rozpustí při koncentraci 20 mg/ml v 20 mM kyselině chlorovodíkové a 400 μΐ se přidá k 4,0 ml želatiny, která se ohřála na 60 °C. Směs insulin/želatina se za energického míchání pomalu přidá ke 2,0 ml karboxymethylcelulózy (5%). Během dalších 15 minut míchání se přidá 12 ml destilované vody. K roztoku se přidá adipylhydrazid (48 mg při 100 mg/ml v destilované vodě) a • ·· ····· ·· · · · ···· ······ * ··· ·· · • · · · · ···· • · ·· · « · · ·· se míchá více než 4 dialýza proti dešti26 potom 4 8 ml EDAC (100 ml/ml). Roztok hodiny, potom se provede vyčerpávající 1ováné vodě.

Příklad 2

Příprava nanočástic želatina/polyglutamát, které obsahují insulin pomocí komplexace polyelektrolytu

Polyglutamát (MH 17500) se rozpustí při koncentraci 0,25 % v destilované vodě a pomocí 1M kyseliny chlorovodíkové se pH upraví na 3,9. Želatina (Bloom 175) se rozpustí při koncentraci 1,0 % v destilované vodě a pH se pomocí 1M kyseliny chlorovodíkové upraví na 3,9. Insulin se rozpustí při koncentraci 20 mg/ml v 20 mM kyselině chlorovodíkové a 350 μΐ se přidá k 4,0 ml želatiny, která byla zahřátá na 60 °C. Směs insulin/želatina se za energického míchání přidá pomalu k 4,0 ml 0,25% polyglutamátu. Míchání pokračuje dalších 15 minut, během kterých se přidá 8 ml destilované vody. K roztoku se přidá adipylhydrazid (5 mg při 100 mg/ml v destilované vodě), potom se přidá 5 mg EDAC (100 mg/ml). Roztok se míchá více než 4 hodiny, potom se provede vyčerpávající dialýza proti destilované vodě.

Příklad 3

Příprava nanočástic želatina/alginát, které obsahují insulin pomocí komplexace polyelektrolytu

Alginát sodný (nízká viskozita, 250 cps) se rozpustí při koncentraci 1,25 % v destilované vodě a pomocí 1M kyseliny chlorovodíkové se pH upraví na 3,9. Želatina (Bloom 175) se rozpustí při koncentraci 1,25 % v destilované vodě a pH se pomocí 1M kyseliny chlorovodíkové upraví na 3,9. Insulin se rozpustí při koncentraci 20 mg/ml v 20mM kyselině chlorovodíkové a 1,0 ml se přidá k 5,0 ml želatiny, která byla zahřátá na 60 °C. Směs insulin/želatina se za energického míchání přidá pomalu k

10,0 ml alginátu (1,25 %). Míchání pokračuje dalších 15 minut, během kterých se přidá 15 ml destilované vody. K roztoku se přidá adipylhydrazid (60 mg při 100 mg/ml v destilované vodě) , potom se přidá 60 mg EDAC (100 mg/ml) . Roztok se míchá více než 4 hodiny, potom se provede vyčerpávající dialýza proti deštilováné vodě.

Příklad 4

In vivo uvolnění isulinu z polyelektrolytu želatina/CMC

Samci krys Wistar se umístí do uzavřených zařízení a za vědomí se jim odeberou vzorky krve z ocasní cévy. Krysám se potom nitrožilně podá solný roztok obsahující buď 100pg dávku insulinu nebo nanočásticový přípravek želatina/CMC obsahující 100. ug insulinu. V 60, 120, 180 a 300 minutách po injekci se krysám odebere vzorek krve z ocasní cévy. Odebraná krev se nechá srazit při 4 °C, potom se sérum oddělí pomocí odstředění od sraženiny. Hladina glukózy v krvi se získá pomocí standardního glukózového testu, jako je ten, který prodává Sigma (#GAGO-20). Výsledky jsou uvedeny na obrázku 1.

Příklad 5

Modifikace uvolňování insulinu z nanočástic komplexu polyelektrolytu (PEC) změnou koncentrace EDAC a adipylhydrazidu

Rychlost uvolnění insulinu z nanočástic se modifikovala pomocí změn koncentrace EDAC a adipylhydrazidu použitého při zesítění nanočástic PEC připravených podle postupu výše. Rychlost uvolňování se zvýší pomocí snížení koncentrace zesífovadel; naopak zvýšením koncentrace zesífovadel se sníží rychlost uvolňování (viz. obr. 2).

Příprava hydrazidylpolyglutamové kyseliny

Příklad 6 ·· ····<*· · · ·· ··« ·· · · · · · ··· ·· · ···· • ···· · · » · · · ·· ·

Π Ο · · ········

Ζ Ο ···· ···· ····

Polyglutamát se rozpustí při koncentraci 25,8’ mg/ml v destilované vodě. Adipylhydrazid (87 mg/ml v destilované vodě) se přidá k polyglutamátu v objemovém poměru 2:5. K roztoku se přidá pevný EDAC (4 mg/ml polyglutamátu) a směs se nechá reagovat 2 hodiny. Získaný roztok se extensivně dialyzuje proti destilované vodě a lyofilizuje.

Příklad 7

Příprava hydrazidylkarboxymethylcelulózy

Karboxymethylcelulóza se rozpustí při koncentraci 25 mg/ml v destilované vodě. Adipylhydrazid (87 mg/ml) v destilované vodě) se přidá k polyglutamátu objemovém poměru 2:5. K roztoku se přidá pevný EDAC (4 mg/ml karboxymethylcelulózy) a směs se nechá reagovat 2 hodiny. Získaný roztok se extensivně dialyzuje proti destilované vodě a lyofilizuje.

Příklad 8

Příprava nanočástic PEC obsahujících insulin získaných s adipylhydrazidylpolyglutamovou kyselinou a želatinou

Adipyl-hydrazidyl-polyglutamát se rozpustí při 2,5 mg/ml v destilované vodě a pomocí 1,0 M kyseliny chlorovodíkové se pH upraví na 3,9. Insulin se rozpustí při 20 mg/ml v 20mM kyselině chlorovodíkové a přidá se k roztoku želatiny (Bloom 175; 10 mg/ml v destilované vodě, pH 3,9), který byl zahřátý na 60 °C, za získání roztoku 0,8 mg/ml insulinu v želatině. Roztok se za intenzivního míchání přidá ke stejnému objemu teplého roztoku (60 °C) adipyl-hydrazidyl-polyglutamátu. Po 15 minutách míchání se roztok zředí destilovanou vodou v poměru r

1:3. Kyselina citrónová (100 mg/ml) se smísí se stejnou hmotností NHS (100 mg/ml v acetonu) a NHS-ester vznikne reakcí s dvojnásobným hmotnostním přebytkem EDAC. Po 10 minutách aktivace se NHS₂-citrát přidá k mikročásticím při stejné hmotnosti, jako má adipyl-hydrazidyl-polyglutamát. Reakce se nechá • · ·«···· · · · · ··· ·· · ···· ··· · · · · · · · • ······ · ··· ·· · • · ···· ···· • · · · ·· ·· ·♦ ·· probíhat přes noc, potom se látka extenzivně dialyzuje proti destilované vodě.

Příklad 9

Příprava nanočástic PEC obsahujících insulin a tvořených hydrazidyl-karboxymethylcelulózou a želatinou

Adipyl-hydrazidyl-karboxymethylcelulóza se rozpouští při 25 mg/ml v destilované vodě a pomocí 1,OM kyseliny chlorovodíkové se pH upraví na 3,9. Insulin se rozpustí při 20 mg/ml v 20mM kyselině chlorovodíkové a přidá se k roztoku želatiny (Bloom 175, 8 mg/ml v destilované vodě, pH 3,9) za získání roztoku

0,8 mg/ml insulinu v želatině. Roztok se za intenzivního míchání přidá k polovičnímu objemu teplého roztoku (50 °C) adipyl-hydrazidyl-karboxymethylcelulózy. Po 15 minutách míchání se roztok zředí 1:3 destilovanou vodou. Kyselina citrónová (100 mg/ml) se smísí se stejnou hmotností NHS (100 mg/ml v acetonu) a NHS-ester vznikne reakcí s dvojnásobným hmotnostním přebytkem EDAC. Po 10 minutách aktivace se NHS₂-citrát přidá k mikročásticím při stejné hmotnosti, jako., má adipylhydrazidyl-karboxymethylcelulóza. Reakce se nechá probíhat přes noc, potom se látka extenzivně dialyzuje proti destilované vodě.

Příklad 10

Příprava 2-aminoethyl-2-aminoethanoátu (AEAE) (a) Kondenzace Boc-glycinu s BOC-ethanolaminem .OH

BocHN'

HOOC

NHBoc

CDI/DIEA

BocHN

NHBOC

O • · · · · I

Boc-glycin (12,0 g, 0,068 mol) a karbonyldiimidazol (12,1 g, 0,074 mol) se rozpustí v dimethylformamidu (50 ml) za pilného uvolňování oxidu uhličitého a roztok se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. K roztoku aktivního esteru se přikape roztok Boc-ethanolaminu (10,0 g, 0,062 mol) v dimethylformamidu (10 ml) a potom DIEA (11,9 ml, 8,80 g, 0,068 mol) a míchání poračuje při teplotě místnosti přes noc. Roztok se nalije do vody (200 ml) a extrahuje se etherem (3x75 ml), promyje se nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (1x100 ml), suší se nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za získání produktu (18,1 g, 92 %) ve formě bezbarvého' oleje, který se použije bez čištění.

(b) Odstranění chránící skupiny Boc a sukcinylace

Surový di-Bocester (22,9 g, 0,072 mol) se při 0 °C za silného uvolňování oxidu uhličitého rozpustí v kyselině trifluoroctové (20 ml) a roztok se míchá 1 hodinu při 0 °C. Kyselina trifluoroctová se odstraní za sníženého tlaku, zbytek se rozpustí v acetonitrilu (30 ml) a rozpouštědlo se znovu odstraní. Surová bis-TFA sul se rozpustí v tetrahydrofuranu (20 ml) a přidá se pevný bezvodý uhličitan draselný (20 g) a směs se míchá při teplotě místnosti 1 hodinu. Roztok se suší nad síranem sodným a filtruje se do roztoku anhydridu kyseliny jantarové (22,7 g, 0,23 mol) v tetrahydrofuranu (120 ml). Přidá se DIEA (30 ml, 22,3 g, 0,17 mol) za získání bazického roztoku a míchání pokračuje při teplotě místnosti. V jednohodinových intervalech se přidají dva alikvotní díly DIEA (5 ml, 3,70 g, 0,029 mol) a míchání pokračuje 24 hodin. Většina tetrahydrofuranu se odstraní za sníženého tlaku a suspenze se nalije do dvoufázové směsi nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (200 ml) a ethylacetátu (100 ml). Organická vrstva se odstraní a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (100 ml) , vodná vrstva se okyselí na pH asi 1 pomocí 10M kyseliny chlorovodíkové a extrahuje ethylacetátem (3x150 ml) , • · · » · · suší se nad síranem sodným a rozpouštědlo se odstraní. Zbytek se suspenduje v etheru (50,ml), ochladí se na 0 °C a filtruje se za získání produktu (6,01 g, 25 %) ve formě drobných jehel.

K roztoku dikyseliny připravené výše (987 mg, 3,10 mmol) v dimethylformamidu (20 ml) se přidá PyBOP (3,72 g, 7,15 mmol) a t-butylkarbazát (950 mg, 7,19 mmol) a potom DIEA (2,20 ml, 1,65 g, .0,013 mol) a míchání pokračuje při teplotě místnosti přes noc. Roztok se nalije do nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a extrahuje se ethylacetátem (3x50 ml), suší se nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za získání oleje, který se rozpustí v kyselině trifluoroctové (10 ml) a míchá se při teplotě místnosti 1 hodinu. Přidá se 20 ml ethanolu a rozpouštědla se odpaří za sníženého tlaku za získáni dihydrazidu ve formě žlutého oleje (506 mg, 47 %).

Příklad 11

Příprava 2-aminoethyl-2-amino-2-benzylethanoátu (AEABE) (a) ' Kondenzace Boc-fenylalaninu s Boc-ethanolaminem ,0H

SocHN'

Ph

CDI/DIEA

HOOC NHBoc

BOCHN

NHBoc

Ph

Boc-fenylalanin (15,7 g, 0,059 mol) a karbonyldiimidazol (10,1 g, 0,062 mol) se rozpustí v dimethylformamidu (60 ml) za ···· • « ··« · · · ···· • · · · · · ·«·· ······· * · · · ·· · • · ···· ···· ··· · ·« ·· ·· ·· intenzivního uvolňování oxidu uhličitého a roztok se míchá při teplotě místnosti 1 hodinu. K roztoku aktivního esteru se přikape roztok Boc-ethanolaminu (9,35 g, 0,058 mol) v dimethylformamidu (10 ml), potom DIEA (12,0 ml, 8,9 g, 0,069 mol) a míchání pokračuje při teplotě místnosti přes noc. Roztok se nalije do vody (200 ml) a extrahuje se etherem )3x75 ml), promyje se nasyceným roztokem hydrogenuhličitanů sodného (1x100 ml), suší se nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní za získání produktu (18,13 g, 92 %) ve formě bezbarvého oleje, který ztuhne a použije se bez čištění.

(b) Odstranění chránící skupiny Boc a sukcinylace

Surový di-Bocester (9,83 g, 0,024 mol) se při 0 °C za silného uvolňování oxidu uhličitého rozpustí v kyselině trifluoroctové (20 ml) a roztok se míchá 1 hodinu při 0 °C. Kyselina trifluoroctová se odstraní za sníženého tlaku, zbytek se rozpustí v acetonitrilu (30 ml) a rozpouštědlo se znovu odstraní. Surová bis-TFA sůl se rozpustí v tetrahydrofuranu (20 ml) a přidá se pevný bezvodý uhličitan draselný (20 g) a směs se míchá při teplotě místnosti 1 hodinu. Roztok se suší nad síranem sodným a filtruje se do roztoku anhydridu kyseliny jantarové (4,98 g, 0,050 mol) v tetrahydrofuranu (30 ml). Přidá se DIEA (20 ml, 14,8 g, 0,11 mol) za získání bazického roztoku a míchání pokračuje při teplotě místnosti 24 hodin. V jednohodinových intervalech se přidají dva alikvotní díly DIEA (5 ml, 3,70 g, 0,029 mol) a míchání pokračuje 24 hodin. Většina tetrahydrofuranu se odstraní za sníženého tlaku a suspenze se nalije do dvoufázové směsi nasyceného roztoku hydrogenuhličitanů sodného (200 ml) a ethylacetátu (100 ml). Organická vrstva se odstraní a vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (100 ml) , vodná vrstva se okyselí na pH asi l · 0 9 4 4 0··· • 00 ·· 0 9 9 9 · • 999449 0 ··· ·· ·

7 · 0 00000000

-J 000 0 00 ·· ·· ·· pomocí 10M kyseliny chlorovodíkové a extrahuje ethylacetátem (3x150 ml), suší se nad síranem sodným a rozpouštědlo se odstraní. Zbytek se rekrystalizuje ze směsi ethylacetát/hexan za získání produktu (2,04, 22 %) ve formě bezbarvého prášku.

Příklad 12

Syntéza nanočástic obsahující insulin za použití isobutylkyanoakrylátu (IBCA) a karboxymethylcelulózy

Insulin se rozpustí při 100 mg/ml v O,1M kyselině chlorovodíkové. Alikvotní díl insulinu (120 μΐ) se samísí se stejným objemem miglyolu. Roztok se rycle promíchá, přidá se 12 ml ethanolu a roztok se znovu promíchá. Nakonec se přidá 120 μΐ IBCA a roztok se pomalu přikape do 24 ml 0,25% PE6800. Po 15 minutách se k roztoku přidá 6 ml 0,25% CMC a nechá se míchat dalších 90 minut. Roztok se potom rozdělí do dvou částí o stejném objemu a k jednomu roztoku se přidá 24 mg adipylhydrazidu (AH) plus 48 mg EDAC. Částice se nechají zesířovat přes noc před tím, než se testují na krysách. Výsledky jsou uvedeny na obrázku 3. Přidání EDAC a AH k nanočásticím velmi sníží rychlost uvolňování insulinu, jak lze usoudit z modifikace množství glukózy v séru.

Příklad 13

Příprava polyelektrolytu nanočástic obsahujících insulin zesítěný esterázou štěpitelným AEABE

Adipyl-hydrazidyl-karboxymethylcelulóza se rozpustí při 2,5 mg/ml v destilované vodě a pomocí 1,0M kyseliny chlorovodíkové se pH upraví na 3,9. Insulin se rozpustí při 20 mg/ml v 20mM kyselině chlorovodíkové a 8 mg se přidá k 2 ml roztoku 2,5 mg/ml želatiny (pH 3,9). Roztok se za energického míchání přidá k 16 ml teplého roztoku (60 °C) adipyl-hydrazidyl-karboxymethylcelulózy. Po 15 minutách míchání se roztok rozdělí • * ·· ···· ·♦ ·· • · * ·· · »··· ··· · · · «••μα ···· · · · · φ · · · · • · · · φ · ΦΦΦ· ··· · ·· ·· φφ ·· do 4 stejných vzorků. AEABE (40 mg, 100 mg/ml) se smísí s 30 mg NHS (100 mg/ml v dimethylformamidu) a NHS-ester vznikne reakcí s 60 mg EDAC. Po 10 minutách aktivace se k nanočásticím přidá 20, 10 a 5 alikvotů (NHS)₂-AEABE. Reakce se nechá probíhat přes noc a testuje pomocí nitrožilního podávání krysám. Jak je zřejmé z obrázku 4, přidání zvýšeného množství zesífovadla štěpitelného esterázou vede ke snížení uvolňování insulinu in vivo.

Příklad 14

Orální podávání IBCA nanočásti obsahujících insulin zesítěný esterázou štěpitelným AEABE

Insulin se rozpustí při 100 mg/ml v 0,1M kyselině chlorovodíkové. Alikvotní díl insulinu (120 μΐ) se smísí se stejným objemem miglyolu. Roztok se rychle promíchá, přidá se 12 ml ethanolu a roztok se znovu promíchá. Nakonec se přidá 120 μΐ IBCA a roztok se pomalu přikape do 24 ml 0,25% PE6800. Po 15 minutách se k roztoku přidá 6 ml 0,25% adipyl-hydrazidyl-CMC a směs se nechá míchat přes noc. Částice se potom zahustí na 22 ml. AEABE (60 mg, 100 mg/ml) se smísí s 6 0 mg NHS (100 mg/ml v dimethylformamidu) a NHS-ester vznikne reakcí s 60 mg DCC (dicyklohexylkarbodiimid, 103 mg/ml v dimethylformamidu). Po 10 minutách aktivace se k llml alikvotním dílům nanočšstic přidají 5 a lOmg alikvotní díly (NHS) ₂-AEABE. Reakce se nechá probíhat přes npc. Částice se potom extensivně dialyzují proti destilované vodě za odstranění volného AEABE. Každý vzorek se rozdělí na 2. K jednomu vzorku se přidá adipyl-hydrazid-eVB12 (20 mg) plus 20 mg EDAC a do druhého vzorku se přidá TSTUaktivovaný-eVB12 (20 mg) a směs se nechá reagovat 2 hodiny. Vzorky se potom dialyzují proti destilované vodě a testují se po orálním podání krysám. Jak je vidět z obrázku 5, všechny částicové prostředky poskytly snížení hladiny glukózy v séru na dobu 5 hodin po orálním podání.

• »

Pokud není v kontextu uvedeno jinak, slovo „obsahuje nebo jeho varianty, jako je „obsahující, znamenají zahrnutí uvedeného prvku nebo čísla nebo skupiny prvků nebo čísel, ale ne vyloučení jakéhokoli jiného prvku nebo čísla nebo skupiny prvků nebo čísel.

2θΟΟ~¥$Ί

0 ······ 0 0 ·· • 00 · · * ·»«· • ······ · · · · ’» · • · » · · · ····

0·· 0 00 00 00 00

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Zesítěná částice vhodná pro dodání farmaceutického prostředku, vyznačující se tím, že obsahuje nejméně jeden polymer schopný tvořit částice, kde jmenovaný polymer obsahuje reaktivní karboxylové skupiny kovalentně zesítěné prostřednictvím můstku vybraného ze skupiny, kterou tvoří hydrazin a skupina vzorce: NH₂NHCO-R-CONHNH₂, kde -R- je přímá vazba nebo R je přímý nebo rozvětvený řetězec nebo cyklická alkylová skupina, alkenylová skupina, alkinylová skupina nebo arylová skupina, kde jmenovaná alkylová skupina, alkenylová skupina nebo alkinylová skupina obsahují až 10 atomů uhlíku.
2. Zesítěná částice podle nároku 1, vyznačující se tím, že jmenovaný můstek je vybraný ze skupiny, kterou tvoří: dihydrazid šúavelové kyseliny, dihydrazid malonové kyseliny, dihydrazid jantarové kyseliny, dihydrazid glutarové kyseliny, dihydrazid adipové kyseliny, dihydrazid maleinové kyseliny, dihydrazid fumarové kyseliny nebo dihydrazid butadienové kyseliny, dihydrazid glutamové kyseliny, dihydrazid asparagové kyseliny, dihydrazid jablečné kyseliny, dihydrazid kyseliny vinné, dihydrazid terefthalové kyseliny, dihydrazid isofthalové kyseliny a dihydrazid fthalové kyseliny.
3. Zesítěná částice vhodná pro dodání farmaceutického prostředku, vyznačující se tím, že obsahuje nejméně jeden polymer schopný tvořit částici, kde jmenovaný polymer obsahuje reaktivní aminoskupiny, hydrazidylové skupiny nebo thiolové skupiny, kovalentně vázané k můstku vybranému ze skupiny obsahující kyselinu malonovou, kyselinu maleinovou, kyselinu jablečnou, kyselinu citrónovou, kyselinu glutamovou, kyselinu asparagovou, kyselinu jantarovou, »···· · · · · · · • · · · · · · · • · · · · · · kyselinu adípovou, kyselinu glutarovou, kyselinu dimethylglutarovou, kyselinu séavelovou, kyselinu fumarovou, kyselinu ftalovou, kyselinu vinnou, kyselinu isoftalovou a kyselinu tereftalovou a jejich rozvětvené alkylové deriváty, kde alkylová skupina jmenovaných alkylových derivátů obsahuje až 10 atomů uhlíku.
4. Zesítěné částice vhodná pro dodání farmaceutického prostředku, vyznačující se tím, že obsahuje nejméně jeden polymer schopný tvořit částici, kde jmenovaný polymer obsahuje:

(i) reaktivní skupiny vybrané ze skupiny, kterou tvoří karboxylová skupina, hydrazidylová skupina aminoskupina a thiolová skupina, kovalentně vázané k (ii) · můstku obsahujícímu nejméně jednu reaktivní karboxylovou skupinu a nejméně jednu reaktivní hydrazidylovou skupinu.
5. Zesítěné částice podle kteréhokoli z nároků 1 až 4, v y z načující se tím, že jmenovaný můstek obsahuje nejméně jednu biologicky rozložitelnou vazbu.
6. Zesítěná částice podle nároku 5, vyznačující se tím, že jmenovaná biologicky rozložitelná vazba je esterová vazba.
7. Zesítěná částice podle nároku 6, vyznačující se tím, že jmenovaný můstek je 2-aminoethylester aminokyseliny.
8. Zesítěná částice podle nároku 7, vyznačující se tím, že můstek je vybrán ze skupiny, kterou tvoří: 2aminoethylestery glycinu a fenylalaninu a disukcinimidylové deriváty 2-aminoethylesterů glycinu a fenylalaninu.

• · • · ······ · · * · · · · · ··· ··· ·· · · · ♦ ······· « ··· ·· · « · · · · · ···· • · · · ·· · · · · ··
9. Zesítěná částice podle nároku 8, vyznačující se tím, že jmenované disukcinimidylové deriváty 2-aminoethylesterú glycinu a fenylalaninu jsou vybrány ze skupiny, kterou tvoří N,N'-disukcinimidyl-(2-amino-2-benzylethanoát), N,N'-disukcinimidyl-2-aminoethylethanoát a ethylenglykolbis[sukcinimidylsukcinát].

Zesítěná vyznač kovalentně částice u j i c i vázána ke podle kteréhokoli z nároků 1 až se tím, že jmenovaná částice směrující sloučenině.

9, j ^e
11. Prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje farmaceutické činidlo zachycené v zesítěné částici podle kteréhokoli z nároků 1 až 10.
12. Prostředek podle nároku 11, vyznačující se tím, že jmenované farmaceutické činidlo je vybráno ze skupiny, kterou tvoří peptidová a proteinová léčiva, DNA, RNA, protilátky, vakcíny, zobrazovací činidla, hormony, polysacharidy, antibiotika, antikoagulanty, imunomodulační činidla, cytotoxická činidla, steroidy, dekongestanty, anestetika a sedativa.
13. Prostředek podle nároku 12, vyznačující se tím, že jmenované farmaceutické činidlo je vybráno ze skupiny, kterou tvoří kalcitonin, erythropoietin, thrombopoietin, faktor stimulující kolonie granulocytů, faktor kmenových buněk, analoga LKRH, somatostatin, insulin, interferony a inhibitory aktivátoru plasminogenu.
14. Způsob výroby zesítěné částice vhodné pro doručení farmaceutického prostředku na místo určení, vyznačující se tím, že zahrnuje zesítění nejméně jednoho polymeru schopného tvorby částice s můstkem, kde jmenovaný polymer obsahuje reaktivní karboxylové skupiny, ······· · · · » · · · • · ···· «··· • ·· · « · · · · · ·· kde jmenovaný můstek je vybrán ze skupiny, kterou tvoří hydrazin a skupina vzorce NH2NHCO-R-CONHNH2, kde -R- je přímá vazba nebo R je přímý nebo rozvětvený řetězec nebo cyklická alkylová skupina, alkenylová skupina, alkinylová skupina nebo arylová skupina, kde jmenovaná alkylová skupina, alkenylová skupina nebo alkinylová skupina obsahují až 10 atomů uhlíku, a kde se jmenovaného zesítění dosáhne za použití karbodiimidu jako zesilovacího činidla.
15. Způsob podle nároku 14, vyznačující se tím, že jmenovaný můstek je vybrán ze skupiny, kterou tvoří: dihydrazid kyseliny šfavelové, dihydrazid kyseliny malonové, dihydrazid kyseliny jantarové, dihydrazid kyseliny glutarové, dihydrazid kyseliny adipové, dihydrazid kyseliny maleinové, dihydrazid kyseliny řumarové nebo dihydrazid kyseliny butadienové, dihydrazid kyseliny glutamové, dihydrazid kyseliny asparagové, dihydrazid kyseliny jablečné, dihydrazid kyseliny vinné, dihydrazid kyseliny terefthalové, dihydrazid kyseliny isořthalové a dihydrazid kyseliny fthalové.
16.. Způsob výroby zesítěné částice vhodné pro dodání farmaceutického prostředku na místo určení, vyznačuj ící se tím, že zahrnuje zesítění nejméně jednoho polymeru schopného tvorby částice s můstkem, kde jmenovaný polymer obsahuje reaktivní aminc-skupiny, hydrazidylové skupiny nebo thiolové skupiny, kde jmenovaný můstek je vybrán ze skupiny, kterou tvoří kyselina malonová, kyselina maleinová acid, kyselina jablečná, kyselina citrónová, kyselina glutamová, kyselina asparagová, kyselina jantarová, kyselina adipová, kyselina glutarová, kyselina dimethylglutarová, kyselina šfavelová, ·· ······ · ♦ «· ··· · · · *··· ······· · · · · ·· · • ···· ···« • · · · · · ·· · · · * kyselina fumarová, kyselina fthalová, kyselina vinná, kyselina isofthalová a kyselina terefthalová a jejich rozvětvené alkylové deriváty, kde alkylová skupina jmenovaných alkylových derivátů obsahuje až 10 atomů uhlíku a kde se jmenovaného zesítění dosáhne za použití karbodiimidu jako zesilovacího činidla.

7. Způsob výroby zesítěné částice vhodné pro dodání farmaceutického prostředku na místo určení, vyznačuj ící se tím, že zahrnuje zesítění nejméně jednoho polymeru schopného tvořit částici s můstkem, kde jmenovaný polymer obsahuje reaktivní skupiny vybrané ze skupiny, kterou tvoří karboxylová skupina, hydrazidylová skupina, aminoskupina a thiolová skupina a kde jmenovaný můstek obsahuje nejméně jednu reaktivní karboxylovou skupinu a nejméně jednu reaktivní hydrazidylovou skupinu a kde se jmenovaného zesítění dosáhne za použití karbodiimidu jako zesilovacího činidla.

8. Způsob podle kteréhokoli z nároků 14 až 17, vyznačující se tím, že jmenovaný karbodiimid je vybraný ze skupiny, kterou tvoří N-ethyl-N'-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid, Ν,N¹-dicyklohexyl-karbodiimid (DCC), N'-diisopropylkarbodiimid, N'N'-diterc.butylkarbodiimid, l-cyklohexyl-3- (4-diethylaminocyklohexyl)karbodiimid, 1,3-di-(4-diethylaminocyklohexyl)karbodiimid, l-cyklohexyl-3-(diethvlaminoethyl)karbodiimid, l-cyklohexyl-3-(2-morfolinyl-(4)-ethyl)karbodiimid a 1-cyklohexyl-3 -(4-diethylaminocyklohexyl )karbodiimid.

• 9
19. Způsob podle kteréhokoli z nároků 14 až 18, vyznačující se tím, že jmenovaný můstek obsahuje nejméně jednu biologicky degradovatelnou vazbu.
20. Způsob přípravy prostředku obsahujícího farmaceutické činidlo zachycené v zesítěné částici, vyznačuj ící se tím, že zahrnuje zesítění nejméně jednoho polymeru schopného tvořit částici s můstkem v přítomnosti jmenovaného farmaceutického činidla, kde jmenovaný polymer obsahuje reaktivní karboxylové skupiny, kde můstek je vybrán ze skupiny, kterou tvoří hydrazin a skupina vzorce NH₂NHCO-R-CONHNH₂, kde -R- je přímá vazba nebo R je přímý nebo rozvětvený řetězec nebo cyklická alkylová skupina, alkenylová skupina, alkinylová skupina nebo arylová skupina, kde jmenovaná alkylová skupina, alkenylová skupina nebo alkinylová skupina obsahuje až 10 atomů uhlíku a kde se jmenovaného zesítění dosáhne za použití karbodiimidu jako zesilovacího činidla.
21. Způsob podle nároku 20, vyznačující se tím, že jmenovaný můstek je vybrán ze skupiny, kterou tvoří dihydrazid kyseliny šfavelové, dihydrazid kyseliny malonové, dihydrazid kyseliny jantarové, dihydrazid kyseliny glutarové, dihydrazid kyseliny adipové, dihydrazid kyseliny maleinové, dihydrazid kyseliny fumarové nebo dihydrazid kyseliny butadienové, dihydrazid kyseliny glutamové, dihydrazid kyseliny asparagové, dihydrazid kyseliny jablečné, dihydrazid kyseliny vinné, dihydrazid kyseliny terefthalové, dihydrazid kyseliny isofthalové a dihydrazid kyseliny fthalové.

• · • ······ · · • · · 9 · · · ······ · ··· * · • · · · · · · · • · · · · ·
22. Způsob přípravy prostředku obsahujícího farmaceutické činidlo zachycené v zesítěné částici, vyznačuj icí se tím, že zahrnuje zesítění nejméně jednoho polymeru schopného tvořit částici s můstkem.v přítomnosti jmenovaného farmaceutického činidla, kde jmenovaný polymer obsahuje reaktivní aminoskupiny, hydrazidylové skupiny nebo thiolové skupiny, kde jmenovaný můstek je vybrán ze skupiny, kterou tvoří kyselina malonová, kyselina maleinová, kyselina jablečná, kyselina citrónová, kyselina glutamcvá, kyselina asparagová, kyselina jantarová, kyselina adipová, kyselina glutarová, kyselina dimethylglutarová, kyselina šfavelová, kyselina fumarová, kyselina fthalová, kyselina vinná, kyselina isofthalová a kyselina terefthalová a jejich rozvětvené alkylové deriváty, kde alkylová skupina jmenovaných alkylových derivátů obsahuje až 10 atomů uhlíku a kde se jmenovaného zesítění dosáhne za použití karbodiimidu jako zesilovacího činidla.
23. Způsob přípravy prostředku obsahujícího farmaceutické činidlo zachycené v zesítěné částici, vyznačuj ící se tím, že zahrnuje zesítění nejméně jednoho polymeru schopného tvořit částice s můstkem v přítomnosti jmenovaného farmaceutického činidla, kde jmenovaný polymer obsahuje reaktivní skupiny vybrané ze skupiny, kterou tvoří karboxylová skupina, hydrazidylová skupina, aminoskupina a thiolová skupina, kde jmenovaný můstek obsahuje nejméně jednu reaktivní karboxylovou skupinu a nejméně jednu reaktivní hydrazidylovou skupinu, • · • · ······ ·· • · · ·· · · · · » · · ·· 9 ··· ······· · · · · · · · • « ···· · · 9 · ··· · « · · · · ♦ 9 9 kde se jmenovaného zesítění dosáhne pomocí zesifovacího činidla.
24. Způsob podle kteréhokoli z nároků 20 až 23, vyznačující se tím, že jmenovaný karbodiimid je vybraný ze skupiny, kterou tvoří N-ethyl-N'-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid, N,N'-dicyklohexyl-karbodiimid (DCC), N'-diisopropylkarbodiimid, Ν'N¹-di-terč.butylkarbodiimid, 1-cyklohexyl-3 -(4-diethylaminocyklohexyl)karbodiimid, 1,3-di-(4 diethylaminocyklohexyl)karbodiimid, l-cyklohexyl-3-(β-diethylaminoethyl)karbodiimid, l-cyklohexyl-3-(2-morfolinyl(4)-ethyl)karbodiimid a 1-cyklohexyl-3 -(4-diethylaminocyklohexyl )karbodiimid.
25. Způsob podle kteréhokoli z nároků 20 až 24, vyznačující se tím, že jmenovaný můstek obsahuje nejméně jednu biologicky rozložitelnou vazbu.
26. Způsob podle kteréhokoli z nároků 20 až 25, vyznačující se tím, že jmenované farmaceutické činidlo je vybráno ze skupiny, kterou tvoří peptidová a proteinová léčiva, DNA, RNA, protilátky, vakcíny, zobrazovací činidla, hormony, polysacharidy, antibiotika, antikoagulanty, imunomodulační činidla, cytotoxickš činidla, steroidy, dekongestanty, anestetika a sedativa.
27. Způsob podle nároku 26, vyznačující se tím, že jmenované farmaceutické činidlo je vybráno ze skupiny, kterou tvoří kalcitonin, erythropoietin, thrombopoietin, faktor stimulující kolonie granulocytú, faktor kmenových buněk, analoga LHRH, somatostatin, insulin, interferony a inhibitory aktivátoru plasminogenu.
28. Způsob dosažení kontrolovaného uvolnění farmaceutického činidla u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání účinného množství prostředku obsahujícího • · ····*· · · • · · · · · · farmaceutické činidlo v zesítěné částici jmenovanému pacientovi, kde jmenovaná zesítěná částice obsahuje nejméně jeden polymer schopný tvořit částici, kde jmenovaný polymer obsahuje reaktivní karboxylové skupiny kovalentně zesítěné pomocí můstku vybraného ze skupiny, kterou tvoří hydrazin a skupina vzorce: NH₂NHCO-R-CONHNH₂, kde -R- je přímá vazba nebo R je přímý nebo rozvětvený řetězec nebo cyklická alkylová skupina, alkenylová skupina, alkinylová skupina nebo arylová skupina, kde jmenovaná alkylová skupina, alkenylová skupina nebo alkinylová skupina obsahuje až 10 atomů uhlíku.
29. Způsob podle nároku 28, vyznačující se tím, že jmenovaný můstek je vybraný ze skupiny, kterou tvoří: dihydrazid kyseliny štavelové, dihydrazid kyseliny malcnové, dihydrazid kyseliny jantarové, dihydrazid kyseliny glutarové, dihydrazid kyseliny adipové, dihydrazid kyseliny maleinové, dihydrazid kyseliny fumarové nebo dihydrazid kyseliny butadienové, dihydrazid kyseliny glutamové, dihydrazid kyseliny asparagcvé, dihydrazid kyseliny jablečné, dihydrazid kyseliny vinné, dihydrazid kyseliny terefthalové, dihydrazid kyseliny isofthalové a dihydrazid kyseliny fthalové.
30. Způsob dosažení kontrolovaného uvolnění farmaceutického činidla u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání účinného množství prostředku obsahujícího farmaceutické činidlo v zesítěné částici pacientovi, kde jmenované farmaceutické činidlo obsahuje nejméně jeden polymer schopný tvořit částici, kde jmenovaný polymer obsahuje reaktivní aminoskupiny, hydrazidylové skupiny nebo thiolové skupiny, kovalentně vázané k můstku vybranému ze skupiny, kterou tvoří kyselina • 0004·· · · ·· • 0 · · · · · · ······· 0 ··· ·· · • 0 0··0 0000 • 00 · 0· 00 ·· ·· malonová, kyselina maleinová, kyselina jablečná, kyselina citrónová, kyselina glutamová, kyselina asparagová, kyselina jantarová, kyselina adipová, kyselina glutarová, kyselina dimethylglutarová, kyselina šfavelová, kyselina fumarová, kyselina fthalová, kyselina vinná, kyselina isofthalová a kyselina terefthalová a jejich rozvětvené alkylové deriváty, kde alkylová skupina jmenovaných alkyiových derivátů obsahuje až 10 atomů uhlíku.
31. Způsob dosažení kontrolovaného uvolnění farmaceutického činidla u pacienta, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání účinného množství prostředku obsahujícího farmaceutické činidlo v zesítěné částici pacientovi, kde jmenovaná zesítěná částice obsahuje nejméně jeden polymer schopný tvořit částici, kde jmenovaný polymer obsahuje:

(i) reaktivní skupiny vybrané ze skupiny, kterou tvoří karboxylová skupina, hydrazidylové skupina, amincskupina a thiolové skupina, kovalentně vázané k (ii) můstku obsahujícímu nejméně jednu reaktivní karboxylovou skupinu a nejméně jednu reaktivní hydrazidylovou skupinu.
32. Způsob podle kteréhokoli z nároků 28 až 31, vyznačující se tím, že jmenovaný můstek obsahuje nejméně jednu biologicky degradovatelnou vazbu.
33. Zesítěná částice podle nároku 32, vyznačuj ící se t i m , že biologicky degradovatelnou vazbou je esterová vazba.
34. Zesítěná částice podle nároku 33, vyznačující se t i m , že jmenovaný můstek je 2-aminoethylester aminokyseliny .

• ·
35. Zesítěná částice podle nároku 34, vyznačuj ící se tím, že jmenovaný můstek je vybrán ze skupiny, kterou tvoří 2-aminoethylestery glycinu a fenylalaninu, a disukcinimidylové deriváty 2-aminoethylesterů glycinu a fenylalaninu.
36. Zesítěná částice podle nároku 35, vyznačující se tím, že jmenované disukcinimidylové deriváty 2-aminoethylesterů glycinu a fenylalaninu jsou vybrány ze skupiny, kterou tvoří Ν,N'-disukcinimidyl-(2-amino-2-benzylethanoát), N,N'-disukcinimidyl-2-aminoethylethanoát a ethylenglykolbis[sukcinimidylsukcinát].
37. Způsob podle kteréhokoli z nároků 28 až 36, vyznačující se tím, že jmenovaná částice je kovalentně vázaná ke směrující sloučenině.
38. Způsob podle kteréhokoli z nároků 28 až 37, vyznačující se tím, že jmenované farmaceutické činidlo je vybráno ze skupiny, kterou tvoří peptidová a proteinová léčiva, DNA, RNA, protilátky, vakciny, zobrazovací činidla, hormony, polysacharidy, antibiotika, antikoagulanty, imunomodulační činidla, cytotoxická činidla, steroidy, dekongestanty, anestetika a sedativa.
39. Způsob podle nároku 38, vyznačující se tím, že jmenované farmaceutické činidlo je vybráno ze skupiny, kterou tvoří kalcitonin, erythropoietin, thrombopoietin, faktor stimulující kolonie granulocytů, faktor kmenových buněk, analoga LHRH, somatostatin, insulin, interferony a inhibitory aktivátoru plasminogenu.
40. Prostředek pro doručení farmaceutického činidla na místo určení, vyznačující se tím, že obsahuje zesítěnou částici a farmaceutické činidlo zachycené na zesítěné částici, • · «····♦ ·« · · • 0 · 0 0 · · · · · kde jmenovaná částice obsahuje polykationtový polymer zesítěný k polyaniontovému polymeru přes mústkovou skupinu, kde jmenovaná mústková skupina obsahuje nejméně dvě reaktivní skupiny vybrané ze skupiny, kterou tvoří karboxylová skupina, hydrazidylová skupina, aminoskupina a chiolová skupina.
41. Prostředek podle nároku 40, vyznačující se tím, že jmenovaný můstek je vybrán ze skupiny, kterou tvoří hydrazin a skupina vzorce NH₂NHCO-R-CONHNH₂, kde -Rje přímá vazba nebo R je přímý nebo rozvětvený řetězec nebo cyklická alkylová skupina, alkenylová skupina, alkinylová skupina nebo arylová skupina, jmenovaná alkylová skupina, alkenylová skupina nebo alkinylová skupina obsahují až 10 a t omů uhlí ku.
42. Prostředek podle nároku 40, vyznačující se tím, že jmenovaný můstek je vybrán ze skupiny, kterou tvoří dihydrazid kyseliny stavelové, dihydrazid kyseliny malonové, dihydrazid kyseliny jantarové, dihydrazid kyseliny glutarové, dihydrazid kyseliny adipové, dihydrazid kyseliny maleinové, dihydrazid kyseliny fumarové nebo dihydrazid kyseliny butadienové, dihydrazid kyseliny glutamové, dihydrazid kyseliny asparagové, dihydrazid kyseliny jablečné, dihydrazid kyseliny vinné, dihydrazid kyseliny terefthalové, dihydrazid kyseliny isofthalové a dihydrazid kyseliny fthalové.
43. Prostředek podle nároku 40, vyznačující se tím, že jmenovaný můstek je vybraný ze skupiny, kterou tvoří kyselina malonová, kyselina maleinová, kyselina jablečná, kyselina citrónová, kyselina glutamová, kyselina asparagová, kyselina jantarová, kyselina adipová, kyselina glutarová, kyselina dimethylglutarová, kyselina šúavelová, kyselina fumarová, kyselina fthalová, kyselina vinná, kyše48 ······· · ··· · · · • · · · · · · · * · ·· · · · · ·· · · · · lina isofthalová a kyselina terefthalová a jejich rozvětvené alkylové deriváty, kde alkylová skupina jmenovaných alkylových derivátu obsahuje až 10 atomů uhlíku.
44. Prostředek podle nároku 40, vyznačující se tím, že jmenovaný můstek obsahuje nejméně jednu reaktivní karboxylovou skupinu a nejméně jednu reaktivní hydrazidy1ovou skupinu.
45. Prostředek podle kteréhokoli z nároků 40 až 44, vyznačující se tím, že jmenovaný můstek obsahuje nejméně jednu biologicky rozložitelnou vazbu.
46. Prostředek podle nároku 45, vyznačující se tím, že jmenovaná biologicky rozložitelná vazba je esterová vazba.
47. Prostředek podle nároku 46 tím, že jmenovaný můstek je vyznačuj i 2-aminoethylester o i se aminokyseliny .
48. Prostředek podle nároku 47, vyznačující se tím, že jmenovaný můstek je vybrán ze skupiny, kterou tvoří: 2-aminoethylestery glycinu a fenylalaninu a disukcinimidylové deriváty 2-aminoethylesterů glycinu a fenylalaninu.
49. Prostředek podle nároku 48, vyznačující se tím, že jmenované disukcinimidylové deriváty 2-aminoethylesterú glycinu a fenylalaninu jsou vybrány ze skupiny, kterou tvoří N,N'-disukcinimidyl-(2-amino-2-benzylethanoát), N,N'-disukcinimidyl-2-aminoethylethanoát a ethylenglykolbis[sukcinimidylsukcinát].
50. Prostředek podle kteréhokoli z nároků 40 až 49, vyznačující se tím, že jmenovaná částice je kovalentně vázaná k cílové sloučenině.

• » · · · ♦ částice vhodná pro doručení farmaceutického na místo určení, vyznačující se obsahuje nejméně jeden polymer schopný tvořit částici, kde jmenovaný polymer je připojený k můstku přes reaktivní kyanoakrylátovou skupinu.

• * + ·· ·
51. Zesitěná prostředku tím, že
52. Částice podle nároku 51, vyznačující se tím, že jmenovaným můstkem je 2-aminoethyl-2-amino-2benzylethanoát.
53. Částice podle kteréhokoli z nároků 51 nebo 52, vyznačující se tím, že jmenovaným kyanoakrylátem je isobutylkyanoakrylát.