CZ20002504A3

CZ20002504A3 - Sloučeniny s vlastnostmi uvolňující růstový hormon

Info

Publication number: CZ20002504A3
Application number: CZ20002504A
Authority: CZ
Inventors: Michael Ankersen
Original assignee: Novo Nordisk A/S
Priority date: 1999-01-15
Filing date: 1999-01-15
Publication date: 2001-03-14

Abstract

Sloučenina obecného vzorce I ajejí použití pro přípravu léčiva pro léčbu chorob vzniklých z nedostatku růstového hormonu.

Description

Sloučeniny s vlastnostmi uvolňující růstový hormon

Oblast techniky

Vynález se týká nových sloučenin, přípravků je obsahujících a způsobů jejich použití pro léčení onemocnění vzniklých z nedostatku růstového hormonu.

Dosavadní stav techniky

Růstový hormon je hormon, který stimuluje růst všech tkání, schopných růstu. Kromě toho je známo, že růstový hormon má mnoho účinků v metabolických procesech, například: stimulace proteinové syntézy a mobilizace volných mastných kyselin a také způsobuje přepnutí energetického metabolismu z karbohydrátového metabolismu na metabolismus mastných kyselin. Nedostatek volného růstového hormonu může vyústit v množství závažných onemocnění, například zakrslost.

Růstový hormon je uvolňován z hypofýzy. Vylučování je pod přísnou kontrolou mnoha hormonů a neurotransmiterů, a to přímo i nepřímo. Vylučování růstového hormonu může být stimulováno hormonem uvolňujícím růstový hormon (GHRH) a inhibováno somatostatinem. V obou případech jsou hormony uvolňovány z hypotalamu, ovšem jejich působení je zprostředkováno primárně s pomocí specifických receptorů umístěných v hypofýze. Další látky, stimulující uvolňování růstového hormonu z hypofýzy byly již také popsány. Například arginin, L-3,4dihydroxyfenylalanin (L-Dopa), glukagon, vasopresin, PACAP (peptid aktivující adenylylcyklázu v hypofýze), agonisté muskarinového receptorů a syntetické hexapeptidy, GHRP (peptid uvolňující růstový hormon) uvolňují endogenní růstový hormon buď přímým působením na hypofýzu nebo ovlivňováním uvolňování GHRH a/nebo somatostatinu z hypotalamu.

Při onemocněních nebo za situace, kdy je požadováno zvýšení úrovně růstového hormonu, proteinová podstata růstového hormonu činí jakékoliv jiné podávání než parenterální nemožným. Kromě toho, další přímo působící přírodní sekrety, například GHRH a PACAP jsou dlouhými polypeptidy, z kteréhož důvodu je parenterální podávání preferováno.

• ·

Použití určitých sloučenin pro zvýšení úrovně růstového hormonu u savců bylo již navrženo například v EP 18 072, EP 83 864, WO 89/07110, WO 89/01711, WO 89/1093, WO 88/9780, WO 83/02272, WO 91/18016, WO 92/01711, WO 93/04081, WO 95/17422, WO 95/17423, WO 95/14666, WO 94/19367, WO 95/34311, WO 96/02530, WO 96/15148, WO 96/13265, WO 96/22997, WO 96/35713, WO 96/38471, WO 96/32943, WO 97/00894, WO 97/06803, WO 97/09060, WO 97/07117, WO 97/11697, WO 97/22620, WO 97/23508, WO 97/24369 a WO 97/34604.

Přípravky sloučenin uvolňujících růstový hormon jsou důležité pro jejich schopnost silně uvolňovat růstový hormon stejně jako pro svoji biodostupnost. Proto je objektem tohoto vynálezu poskytnutí nových hydrazidových sloučenin s vlastnostmi uvolňující růstový hormon. Dále je objektem tohoto vynálezu poskytnutí nových sloučenin uvolňujících růstový hormon, které jsou specifické a/nebo selektivní a které nemají žádné, nebo v podstatě žádné vedlejší účinky, jako je uvolňování LH, FSH, TSH, ACTH, vasopresinu, oxytocinu, kortisolu a/nebo prolaktinu. Předmětem vynálezu je také poskytnutí sloučenin, které mají dobrou orální biodostupnost.

Podstata vynálezu

Tento vynález poskytuje sloučeniny, které působí přímo na buňky hypofýzy za normálních experimentálních podmínek in vitro, aby z nich uvolnily růstový hormon.

Tyto sloučeniny uvolňující růstový hormon mohou být použity in vitro jako jedinečný výzkumný prostředek pro porozumění, mezi jiným jak je regulována sekrece růstového hormonu na úrovni hypofýzy.

Kromě toho mohou být sloučeniny uvolňující růstový hormon podle tohoto vynálezu podávány také in vivo za účelem zvýšení uvolňování endogenního růstového hormonu.

Tento vynález se tedy vztahuje ke sloučeninám obecného vzorce I • ·

/

D

R⁴?

I

N

R^5a vzorec I kde

R¹ a R² jsou nezávisle vodík nebo Ci-6-alkyl případně substituovaný jedním nebo více arylem nebo heteroarylem;

R^3a je vodík, Ci^-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více arylem nebo heteroarylem, nebo aryl, nebo heteroaryl případně substituovaný jedním nebo více Ci_6-alkylem;

R⁴³ je Ci-6-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více arylem nebo heteroarylem nebo Ci-7-acyl;

R^5a je vodík, Ci.₆-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více arylem nebo heteroarylem nebo aryl nebo heteroaryl, případně substituovaný jedním nebo více Ci-e-alkylem; nebo

R^3aa R⁴³ společně s atomy dusíku ke kterým jsou vázány mohou tvořit heterocyklický systém, případně substituovaný jedním nebo více Ci_6-alkylem, halogenem, amino, hydroxylem, arylem nebo heteroarylem; nebo

R^3a a R^5a společně s atomy dusíku ke kterým jsou vázány mohou tvořit heterocyklický systém, případně substituovaný jedním nebo více Ci_6-alkylem, halogenem, amino, hydroxylem, arylem nebo heteroarylem; nebo

p4a _a p5a _Sp₀|_e£_ně s atomy dusíku ke kterým jsou vázány mohou tvořit heterocyklický systém, případně substituovaný jedním nebo více Ci-6-alkylem, halogenem, amino, hydroxylem, arylem nebo heteroarylem;

a a b jsou nezávisle 0, 1 nebo 2;

Gje vodík, -O-(CH₂)_k-R²⁷,

kde R²⁷, R²⁸, R²⁹, R³⁰, R³¹, R³², R³³, R³⁴, R³⁵ a R³⁶ jsou nezávisle vodík, halogen aryl, heteroaryl, Ci-e-alkyl nebo Ci-6-alkoxy; k a I jsou nezávisle 0, 1 nebo 2;

D je • 4

HN

(CH,), (CH₂)—M —(CH₂)HN.

(CH₂)„

W™ </(CH₂>.n ^Z^CH—(CH₂)— _r7_HN-(CR”R⁹)-(CH₂)Z^ — ^X<ch₂)„

TCH₂)_n kde R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸ a R⁹ jsou nezávisle vodík nebo Ci-6-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více halogenem, amino, hydroxylem, arylem nebo heteroarylem;

n, m a q jsou nezávisle 0, 1, 2 nebo 3;

p je 0 nebo 1;

M je-CR¹¹=CR^11a-, arylen, heteroarylen, -0-, -S- nebo valenční vazba;

R¹¹ a R^11a jsou nezávisle vodík nebo Ci-6-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více arylem nebo heteroarylem; nebo

D je

R⁷-NH-(CR⁸R⁹)p-(CH2)m-M-(CHR¹⁰)o-(CH2)nkde R⁷, R⁸, R⁹ a R¹⁰ jsou nezávisle vodík nebo Ci-6-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více halo, amino, hydroxy, arylem nebo heteroarylem nebo R⁷ a R⁸ nebo R⁷ a R⁹ nebo R⁸ a R⁹ mohou případně tvořit -(CH₂)i-U-(CH₂)j-, kde i a j jsou nezávisle 1 nebo 2 a U je -0-, -S- nebo valenční vazba; n a m jsou nezávisle O, 1, 2 nebo 3;

o a p jsou nezávisle O nebo 1;

M je-CR¹¹=CR^11a-, arylen, heteroarylen, -0-, -S- nebo valenční vazba;

R¹¹ a R¹² jsou nezávisle vodík nebo Ci_6-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více arylem nebo heteroarylem; nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.

Dále sloučeniny obecného vzorce I mohou zahrnovat jakékoliv optické isomery ve formě oddělených, čistých, částečně čištěných optických isomerů nebo jejich racemických směsí.

Ve sloučenině obecného vzorce I se nacházejí dva chirální atomy uhlíku, které mohou být v R- a/nebo S-konfiguraci. V jednom provedení jsou oba chirální atomy v R-konfiguraci.

Dále, sloučeniny obecného vzorce I mohou mít jednu nebo více dvojných vazeb uhlík-uhlík s možností geometrické izomerie a je třeba vzít v úvahu, že pokud není určen specifický izomer, jsou do rozsahu vynálezu zahrnuty všechny možné stereoizomery (E a Z izomery).

V jednom provedení sloučeniny obecného vzorce I je R¹ vodík. V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I je R¹ Ci-e-alkyl, jako je C-i-4-alkyl, zejména methyl.

V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I je R² vodík. V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I je R² Ci^-alkyl, jako je Ci-4-alkyl, zejména methyl.

Ještě v dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I je R^3a vodík. V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I je R^3a Ci-₆-alkyl, jako je Ci-4-alkyl, zejména methyl.

Ještě v dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I je R⁴³ Ci_6-alkyl, jako je Cm alkyl, zejména methyl. V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I je R⁴³ C1-7acyl, jako je C2-4-acyl, zejména acetyl.

Ještě v dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I je R⁵³ vodík. V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I je R^5a Ci_₆-alkyl, jako je Cw-alkyl, zejména methyl. ^V

V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I mohou R^3aa R⁴³ tvořit společně s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány heterocykl ický systém, který je případně substituován jedním nebo více Ci-e-alkylem, halo, amino, hydroxy, arylem nebo ·* ·· • · · · • « ·« • 9 heteroarylem. Takový heterocyklický systém může být aromatický nebo nearomatický a může být vybrán například z pyrazolu, pyridazinu, triazinu, indazolu, ftalazinu, cinnolinu, pyrazolidinu, oxopyrazolidinu nebo pyrazolinu. Zvláštním provedením heterocykl ického sytému je oxopyrazolidin.

Ještě v dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I mohou R^3aa R^5a tvořit společně s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány heterocyklický systém, který je případně substituován jedním nebo více Ci-e-alkylem, halo, amino, hydroxy, arylem nebo heteroarylem. Takový heterocyklický systém může být aromatický nebo nearomatický a může být vybrán například z pyrazolu, pyridazinu, triazinu, indazolu, ftalazinu, cinnolinu, pyrazolidinu nebo pyrazolinu.

Ještě v dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I mohou R^a R^5a tvořit společně s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány heterocyklický systém, který je případně substituován jedním nebo více C-t-6-alkylem, halo, amino, hydroxy, arylem nebo heteroarylem. Takový heterocyklický systém může být aromatický nebo nearomatický a může být vybrán například z aziridinu, dithiazinu, pyrrolu, imidazolu, pyrazolu, isoindolu, indolu, indazolu, purinu, pyrrolidinu, pyrrolinu, imidazolidinu, imidazolinu, pyrazolidinu, pyrazolinu, piperidinu, piperazinu, indolinu, isoindolinu nebo morfolinu, zejména pyrrolidinu a piperidinu.

Jestliže R^3a a R⁴³ tvoří heterocyklický systém, R^4a a R^5a mohou současně tvořit také heterocyklický systém nebo R^5a může být vodík, Ci-6-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více arylem nebo heteroarylem nebo aryl nebo heteroaryl, případně substituovaný jedním nebo více Ci-6-alkylem.

Jestliže R^3a a R^5a tvoří heterocyklický systém, R^4a a R^5a mohou současně tvořit také heterocyklický systém nebo R⁴³ může být C-i-6-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více arylem nebo heteroarylem nebo Ci.₇-acyl.

Ještě v dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I je a 1.

Ještě v dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I je b 1. V dalším provedení je b2.

• · ·· ·· 99 ftft •· ·· · 99 9 · 99 9 « · ···· · 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

999 999 99 99 99 99

V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I je G

kde R²⁷ a R²⁸ znamenají nezávisle vodík, halogen, aryl, heteroaryl, Ci_₆-alkyl nebo Ci-6-alkoxy. V dalším provedení jsou obě R²⁷ a R²⁸ vodík. Ještě v dalším provedení G je 1-naftyl nebo 2-naftyl. Ve sloučenině shora uvedeného obecného vzorce je G výhodně 2-naftyl.

Ještě v dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I je G

kde R²⁷, R²⁸, R²⁹, R³⁰ a R³¹ jsou nezávisle vodík, halogen, aryl, heteroaryl, Ci-6-alkyl nebo Ci-6-alkoxy V dalším provedení jsou R²⁷, R2²⁸, R³⁰ a R³¹ jsou vodík a R²⁹ je aryl. Ještě v dalším provedení je R²⁹ fenyl. Ve sloučenině shora uvedeného vzorce I je G výhodně bifenyl-4-yl.

V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I je G skupina -O-(CH2)k-R²⁷, kde R²⁷ je vodík, halogen, aryl, heteroaryl, Cve-alkyl nebo Ci-6-alkoxy; k je 0, 1 nebo 2. Ještě v dalším provedení je R²⁷ aryl. V dalším provedení k je 1. Ve sloučenině shora uvedeného obecného vzorce I je G výhodně benzyloxy.

Ještě v dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I je G

• 0 0 0 »0 · ·

0 0 0 «00 0 0 000 0 00 0

00 0·0 00 0

00 0 0 00 0

00 00 0« kde R²⁷ a R²⁸ znamenají nezávisle vodík, halogen, aryl, heteroaryl, Ci.₆-alkyl nebo Ci-6-alkoxy. V dalším provedení jsou obě R²⁷ a R²⁸ vodík. Ještě v dalším provedení G je 1 H-indol-3-y I.

V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I je J

kde R³², R³³, R³⁴, R³⁵ a R³⁶ jsou nezávisle vodík, halogen, aryl, heteroaryl, C-i-6-alkyl nebo Cí-6-alkoxy. V jednom provedení jsou R³², R³³, R³⁴, R³⁵ a R³⁶ všechny vodík. J je výhodně fenyl.

Ještě v dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I je J

R³²

S kde R³² a R³³ jsou nezávisle vodík, halogen, aryl, heteroaryl, Ci.₆-alkyl nebo Ci_₆alkoxy. V dalším provedení jsou R³² a R³³ oba vodík. J je výhodně 2-thienyl

V dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I je D

R⁷-NH-(CR⁸R⁹)p-(CH2)m-M-(CHR¹⁰)o-(CH₂)nkde R⁷, R⁸, R⁹ a R¹⁰ jsou nezávisle vodík nebo Ci-e-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více halo, amino, hydroxy, arylem nebo heteroarylem; n a m jsou nezávisle 0, 1, 2 nebo 3;

o a p jsou nezávisle 0 nebo 1;

M je -CR¹¹=CR^11a-, arylen, -O- nebo -S-;

♦ · »· 99 99

9 9 · · «φ Φ

9 99 9 9 9 9

ΦΦ φφφ Φφ Λ • ΦΦΦ ΦΦΦΦ » * ΦΦ ΦΦ ΦΦ r11 θ pila j_{SQU nez}ávisle vodík nebo Ci-₆-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více arylem nebo heteroarylem. V jednom provedení je R⁷ vodík. V druhém provedení je R⁷ Cve-alkyl, zejména methyl. V třetím provedení je R⁸ vodík. V dalším provedení je R⁸ C-i-e-alkyI, zejména methyl. Ještě v dalším provedení je R⁹ vodík. Ještě v dalším provedení R⁹ je Ci-6-alkyl, zejména methyl.

V dalším provedení R⁸ a R⁹ tvoří —(CH₂)i-U-(CH₂)j-, kde i a j jsou nezávisle 1 nebo 2 a U je -0-, -S- nebo valenční vazba. Ještě v dalším provedení je U valenční vazba. Ještě v dalším provedení je součet i+j rovný 3.

V dalším provedení n je 0. Ještě v dalším provedení m je 0. V dalším provedení m je 1. V dalším provedení o je 0. Ještě v dalším provedení p je 0. V dalším provedení p je 1. Ještě v dalším provedení M je -CR¹¹=CR^11a- aryl, -O- nebo -S-. V dalším provedení M je -CH=CH-. Ještě v dalším provedení M je fenylen.

Ještě v dalším provedení sloučeniny obecného vzorce I je D

R⁷-NH-(CR⁸R⁹)p-(CH2)rn-M-(CHR¹⁰)o-(CH2)nkde R⁷, R⁸, R⁹ a R¹⁰ jsou nezávisle vodík nebo Ci-6-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více halo, amino, hydroxy, arylem nebo heteroarylem; n a m jsou nezávisle 0, 1, 2 nebo 3;

o a p jsou nezávisle 0 nebo 1;

M je valenční vazba;

R¹¹ a R^11a jsou nezávisle vodík nebo Ci^-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více arylem nebo heteroarylem. V jednom provedení je R⁷ vodík. V druhém provedení je R⁷ methyl. V třetím provedení je R⁸ vodík. V dalším provedení R⁸je Ci6-alkyl, zejména methyl. Ještě v dalším provedení je R® vodík. Ještě v dalším provedení R⁹ je Ci.₆-alkyl, zejména methyl. V dalším provedení n je 0. Ještě v dalším provedení m je 0. Ještě v dalším provedení m je 1. Ještě v dalším provedení o je 0. Ještě v dalším provedení p je 0. V dalším provedení p je 1.

• 9 • · >·· 999

9« 99

9 · • 99

9 »

9· * • 9 99 *9

9 9

9 1) • 9 Μ • · 9 • 9

Ve sloučenině shora uvedeného obecného vzorce I je D výhodně 3aminomethylfenyl, 4-amino-4-methylpent-(1E)-enyl, N-methyl-3-aminomethylfenyl, 3 (1-aminocyklobutyl)-1-propenyl nebo 1-amino-1-methylethyl.

Výhodné sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu jsou:

N-((1 R)-1 -{N-[( 1 R)-2-(N '-Acetylhydrazino)-1 -benzyl-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl} 2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny

N-((1 R)-1 -{N-[(1 R)-2-(N'-Acetyl-N-methylhydrazino)-1 -benzyl-2-oxoethyl]-Nmethylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2enové kyseliny

N-((1R)-1-{N-[(1R)-2-(N-Acetyl-N'-methylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-Nmethylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2enové kyseliny

N-methyl-N-((1R)-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5 methylhex-2-enové kyseliny

3-Aminomethyl-N-methyl-N-((1R)-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)benzamid

H₂N

A

CH,

N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(NýN'-Dimethylhydrazinokarbonyl)-2-fenylethyl]-Nmethylkarbamoyl-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny

N-((1 R)-1 -(N-[( 1 R)-1 -(N', N '-Dimethylhydrazinokarbonyl)-2-(2-thienyl)ethyl]-Nmethylkarbamoyl-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny

CH, i ³ •ⁿ'ch.

N-( (1 R)-1 -(N-[(1 R)-1 -(N ',N '-Dimethylhydrazinokarbonyl)-2-fenylethyl]-Nmethylkarbamoyl-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methyl-3-(N-methylaminomethyl)benzamid

o o

• fc ·· fc· ··

N-((1R)-2-(Bifenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5methylhex-2-enové kyseliny

N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-4-(1-aminocyklobutyl)but-2-enové kyseliny

N-((1 R)-2-(Bifenyl-4-yl)-1 -(N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1 -((p i peridi n-1 yl)karbamoyl)ethyl]karbamoyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2enové kyseliny

N-Methyl-N-((1 R)-1 -(N-methyl-N-[(1 R)-2-(2-thienyl)-1 -(Ν, Ν', N trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5methylhex-2-enové kyseliny

N-((1 R)-2-(1 H-lndol-3-yl)-1 -(N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5-methylhex-2 enové kyseliny

2-Amino-N-((1 R)-2-(1 H-indol-3-yl)-1-(N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyll)ethyl)-2-methylpropionamid

N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N~[(1R)-1-(N-methyl-N-(piperidin-1-yl)karbamoyl)-2fenylethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny

N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-(piperidin-1-yl)karbamoyl)-2-(2 thienyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny

N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-Benzyl-2-oxo-2-(3-oxopyrazolidin-1-yl)ethyl]-Nmethylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny

CH, ^H=^N CH.

O

N-Methyl-N-((1 R)-1 -{N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1 -((piperidin-1 yl)karbamoyl)ethyl]karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5-methylhex-2enové kyseliny

N-Methyl-N-((1 R)-1-{N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1-((pyrrolidin-1yl)karbamoyl)ethyl]karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5-methylhex-2enové kyseliny

N-((1R)-2-(Bifenyl-4-yl)-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-((pyrrolidin-1yl)karbamoyl)ethyl]karbamoyl}ethyl-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2enové kyseliny

CH, ^H+ CH,

O

• · 0 0 0 0 0 00

0 0000 000 • 00 000 00 *0 0«

2-Amino-N-(2-benzyloxy-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl}ethyl-2-methylpropionamid

2-Amino-N-(2-benzyloxy-1 -{N-[(1 R)-1 -(Ν', N '-dimethylhydrazinokarbonyl)-3fenylpropyl]-N-methylkarbamoyl}ethyl-2-methylpropionamid

2-Amino-N-{2-benzyloxy-1 -[N -((1 R)-1 -(Ν', N '-dimethylhydrazinokarbonyl)-3fenylpropyl)karbamoyl]ethyl}-2-methylpropionamid

2-Amino-N-[( 1 R)-1 -[(1 R)-1 -(Ν', N '-dimethylhydrazinokarbonyl)-3fenylpropylkarbamoyl]-2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-2-methylpropionamid

2-Amino-N-[(1R)-1-{N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazinokarbonyl)-3-fenylpropyl]-Nmethylkarbamoyl}-2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-2-methylpropionamid

Nejvýhodnější sloučeninou ze shora uvedených výhodných sloučenin je

N-methyl-N-((1R)-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5methylhex-2-enové kyseliny ·· 99 » 9 9 9

I 9 9 9 » · · 9 » · 9 9

99

Obecný způsob přípravy

R^4a i

HN^/NxR^5a

Ř^3a

O

Chránící skupina

OH (CH₂)_b kopulační činidlo

4a (CH₂)

2'a

Protection group—Ν γ Ř¹ O

OH kopulační činidlo

kopulační činidlo

OH

->4a

-N.

< ^XR^5aR

3a

Sloučeniny obecného vzorce I se mohou připravit z mono- nebo di- nebo trisubstituovaných hydrazinů nebo hydrazonů a vhodných chráněných aminokyselin s vhodnými kopulačními činidly, jako hydrochlorid 1-ethyl-3-(3dimethylaminopropylkarbodiimidu a 1-hydroxybenzotriazol nebo ostatními kopulačními činidly známými v oboru peptidového kopulování ve vhodném rozpouštědle, jako dimethylformamid nebo dichlormethan. Příslušné aminokyseliny mohou být chráněny a chránící skupina u nich může být odstraněna metodami známými ve stavu techniky, jak popsal například T.W. Green (Protective Groups in Organic Synthesis, 2. vyd., John Wiley and Sons, New York 1991).

• 4 44 4« 44

44 4 4 <· <

• 4 44 4 4 4 4

44 444 44 4

44 4 4 44 4

44 44 44 44

Má se za to, že sloučeniny obecného vzorce I vykazují zvýšenou odolnost k proteolytické degradaci enzymy, protože jsou umělého původu, a zvláště pak proto že přirozené amidické vazby jsou nahrazeny nepřírodními vazbami napodobující přirozené amidické vazby. Očekává se, že zvýšená odolnost proti proteolytické degradaci v kombinaci se sníženou velikostí sloučenin podle tohoto vynálezu ve srovnání se známými peptidy uvolňující hormony, zvýší jejich biodostupnost ve srovnání s peptidy navrženými v původní literatuře.

Ve výše uvedených strukturních vzorcích a v dalším textu jsou používány následující termíny s naznačeným významem:

Ci_6-alkyl, Ci-6-alkylen, Ci-4-alkyl nebo Ci-4-alkylen specifikované shora jsou zamýšleny tak, že zahrnují alkylové skupiny označené délky a to jak v lineárním, tak rozvětveném uspořádání nebo v cyklické konfiguraci. Příklady lineárních alkylových skupin zahrnují methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl a hexyl a jejich dvojmocné části, jako je ethylen. Příklady rozvětvených alkylových skupin jsou isopropyl, sek. butyl, terc.butyl, isopentyl a isohexyl a jejich odpovídající dvojmocné části, jako isopropylen. Příklady cyklických alkylových skupin jsou C3-6-cykloalkyl, jako cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl a cyklohexyl a jejich odpovídající dvojmocné části, jako cyklopropylen.

Ci-6-alkoxylové skupiny specifikované shora jsou zamýšleny tak, že obsahují alkoxyskupiny označené délky a to jak v lineární, tak i rozvětvené nebo cyklické konfiguraci. Příklady lineárních alkoxyskupin jsou methoxy, ethoxy, propoxy, butoxy, pentoxy nebo hexoxy. Příklady rozvětvených alkoxyskupin jsou isopropoxy, sek.butoxy, terč. butoxy, isopentoxy a isohexoxy. Příklady cyklických alkoxyskupin jsou cyklopropoxy, cyklobutyloxy, cyklopentyloxy a cyklohexyloxy.

Ci-₇-acylové skupiny specifikované shora jsou zamýšleny tak, že obsahují acylové skupiny označené délky a to jak v lineární, tak rozvětvené nebo cyklické konfiguraci. Příklady lineární acylové skupiny jsou formyl, acetyl, propionyl, butyryl, valeryl, atd. Příklady rozvětvené acylové skupiny jsou isobutyryl, isovaleryl, pivaloyl, atd. Příklady cyklické acylové skupiny jsou cyklopentylkarbonyl, cyklohexylkarbonyl, atd.

·· 99 99

99 9 9 99 9 • 9 99 9 9 9 9

99 999 9· 9 • 99 9 9 99 9

99 99 99 99

V tomto kontextu označuje termín „aryl“ monovalentní karbocyklické aromatické cyklické části, které jsou monocyklické, bicyklické nebo poylcyklické, a které jsou vybrány ze skupiny zahrnující například fenyl a naftyl, případně substituované jedním nebo více Ci-6-alkylem, Ci^-alkoxy, halo, amino nebo arylem.

V tomto kontextu označuje termín „arylen“ divalentní karbocyklické aromatické cyklické části, které jsou monocyklické, bicyklické nebo poylcyklické, a které jsou vybrány ze skupiny zahrnující například fenylen a naftylen, případně substituované jedním nebo více Ci-e-alkylem, Ci_6-alkoxy, halo, amino nebo arylem.

V tomto kontextu označuje termín „heteroaryl“ monovalentní heterocyklické aromatické cyklické části, které jsou monocyklické, bicyklické nebo poylcyklické, a které jsou vybrány ze skupiny zahrnující například pyridyl, 1-H-tetrazol-5-yl, thiazolyl, imidazolyl, indolyl, pyrimidinyl, thiadiazolyl, pyrazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, oxadiazolyl, thienyl, chinolinyl, pyrazinyl nebo isothiazolyl, případně substituované jedním nebo více Ci-6-alkylem, Ci_6-alkoxy, halo, amino nebo arylem.

V tomto kontextu označuje termín „heteroarylen“ divalentní heterocyklické aromatické cyklické části, které jsou monocyklické, bicyklické nebo poylcyklické, a které jsou vybrány ze skupiny zahrnující například pyridindiyl, 1-H-tetrazoldiyl, thiazoldiyl, imidazoldiyl, indoldiyl, pyrimidindiyl, thiadiazoldiyl, pyrazoldiyl, oxazoldiyl, isoxazoldiyl, oxadiazoldiyl, thiofendiyl, chinolindiyl, pyrazindiyl nebo isothiazoldiyl, případně substituované jedním nebo více Ci-6-alkylem, Ci-6-alkoxy, halo, amino nebo arylem.

V tomto kontextu označuje termín „heterocyklický systém“ aromatické a nearomatické kruhové části, které mohou být monocyklické, bicyklické nebo polycyklické a obsahují ve své kruhové struktuře alespoň jeden, jako jeden, dva nebo tři atomy dusíku a případně jeden nebo více, jako jeden nebo dva jiné heteroatomy, například atomy síry nebo kyslíku. Heterocyklický systém je výhodně vybrán z pyrazolu, pyridazinu, triazinu, indazolu, ftalazinu, cinnolinu, pyrazolidinu, pyrazolinu, aziridinu, dithiazinu, pyrrolu, imidazolu, pyrazolu, isoindolu, indolu, indazolu, purinu, pyrrolidinu, pyrrolinu, imidazolidinu, imidazolinu, pyrazolidinu, oxopyrazolidinu, pyrazolinu, piperazinu, indolinu, isoindolinu nebo morfolinu.

44 • 4 4 4

4 4 4

44

4

4 4 4

44

Termín „halogen“ označuje chlor (Cl), fluor (F), brom (Br) a jod (I).

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou mít jedno nebo více asymetrických center (chirální atomy uhlíku) a jsou zamýšleny tak, že všechny stereoizomery, separované, čisté nebo částečně přečištěné stereoizomery nebo jejich racemické směsi jsou zahrnuty do rozsahu tohoto vynálezu.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu být případně ve formě farmaceuticky přijatelných adičních solí sloučenin obecného vzorce I, které zahrnují ty, jež se připraví reakcí sloučeniny obecného vzorce I s anorganickou nebo organickou kyselinou, jako je kyselina chlorovodíková, bromovodíková, sírová, octová, fosforečná, mléčná, maleinová, mandlová, ftalová, citrónová, glutarová, glukonová, methansulfonová, salicylová, jantarová, vinná, toluensulfonová, trifluoroctová, sulfamová nebo fumarová a/nebo voda.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou být podány ve formě farmaceuticky přijatelné kyselé adiční soli nebo kde to je vhodné ve formě soli s alkalickým kovem, kovem alkalických zemin nebo ve formě nižší alkylamoniové soli. Má se za to, že takové soli vykazují přibližně stejnou aktivitu jako volné bázové formy.

V dalším aspektu tohoto vynálezu jsou popsány farmaceutické přípravky, které jako aktivní složku zahrnují sloučeniny obecného vzorce I nebo farmaceuticky přijatelné soli těchto sloučenin, společně s farmaceuticky akceptovatelným nosičem nebo ředidlem.

Farmaceutické přípravky obsahující sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být připravovány konvenčními technikami, například popsanými v Remington's Pharmaceutical Sciences, 1985 nebo v Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19. vydání (1995). Přípravky mohou mít konvenční formu, například kapsle, tablety, aerosoly, roztoky, suspenze nebo místní přípravky.

Použitý farmaceutický nosič nebo ředidlo může být konvenční tuhý nebo kapalný nosič. Příklady tuhých nosičů jsou laktóza, terra alba, sacharóza, cyklodextrin, talek,

99

9 9 9

99

9 9 9

99 želatina, agar, pektin, acacia, stearát hořečnatý, kyselina stearová nebo nižší alkylethery celulózy. Příklady kapalných nosičů jsou sirup, kokosový olej, olivový olej, fosfolipidy, mastné kyseliny, aminy mastných kyselin, polyoxyethylen nebo voda.

Podobně, nosič nebo ředidlo může obsahovat jakoukoliv látku řídící rychlost uvolňování známou v oboru, jako je například glyceryl monostearát nebo glyceryl distearát, samotný nebo ve směsi s voskem.

Je-li tuhý nosič použit pro orální podávání, přípravek může být tabletován, umístěn v tuhé želatinové kapsli, ve formě prachu nebo pilulek, nebo může být ve formě pastilek. Množství pevného nosiče se bude široce měnit, ovšem obvykle bude kolem 25 mg až 1 g. Je-li použit kapalný nosič, přípravek může být ve formě sirupu, emulze, měkké želatinové kapsle nebo sterilní injektovatelné kapaliny, jako jsou například nevodné kapalné suspenze nebo roztoky.

Typická tableta, kterou lze připravit konvenční tabletovací technikou může obsahovat:

Jádro:

Aktivní sloučenina (jako volná sloučenina nebo její sůl) 100 mg

Koloidní oxid křemičitý (Aerosil) 1,5 mg

Celulóza, mikrokrystalická (Avicel) 70 mg

Modifikovaná celulózová guma (Ac-Di-Sol) 7,5 mg

Stearát hořečnatý

Povlak:

HPMC přibliž. 9 mg *Mywacett 9-40 T přibliž. 0,9 mg

Acylovaný monoglycerid použitý jako plastifikátor pro vrstvu potahu

Pro nasální podávání mohou přípravky obsahovat sloučeniny obecného vzorce I rozpuštěné nebo suspendované v kapalném nosiči, zejména ve vodném nosiči pro aerosolové aplikace. Nosiče mohou obsahovat aditiva, jako jsou činidla podporující * · · » * ·· · ·· <· ·« «« rozpouštění, například propylenglykol, surfaktanty, látky podporující absorpci, jako jsou lecitin (fosfatidylcholin) nebo cyklodextrin nebo preservativa, jako jsou parabeny.

Obecně jsou sloučeniny podle tohoto vynálezu dispergovány ve formě dávkové jednotky v množství 50 až 200 mg aktivní složky společně s farmaceuticky akceptovatelným nosičem na jednotkovou dávku.

Dávky sloučenin podle tohoto vynálezu jsou vhodně 0,1 až 500 mg/den, například od 5 do 50 mg, jako třeba 10 mg na dávku, jsou-li podávány pacientům (lidem) jako léčivo.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu vykazují zajímavé farmakologické vlastnosti a bylo prokázáno, že sloučeniny obecného vzorce I vykazují schopnost uvolňovat in vivo endogenní růstový hormon. Sloučeniny mohou být tedy použity při léčení stavů, které vyžadují zvýšenou úroveň růstového hormonu v plazmě, jako třeba nedostatek lidské deficience růstového hormonu u starších lidí nebo dobytka.

Vjednom konkrétním aspektu se tento vynález vztahuje k farmaceutickým přípravkům pro stimulaci uvolňování růstového hormonu z hypofýzy, přičemž přípravky obsahují jako aktivní složku sloučeniny obecného vzorce I nebo jejich farmaceuticky akceptovatelné soli společně s farmaceuticky akceptovatelným * nosičem nebo ředidlem.

V dalším aspektu se tento vynález zabývá způsoby stimulace uvolňování růstového hormonu z hypofýzy, přičemž způsob zahrnuje podávání účinného množství sloučeniny obecného vzorce I nebo jejich farmaceuticky akceptovatelných solí potřebným subjektům.

V dalším aspektu se tento vynález vztahuje k použití sloučenin obecného vzorce I nebo jejich farmaceuticky akceptovatelných solí pro přípravu léků stimulujících uvolňování růstového hormonu z hypofýzy.

Odborníkům v oboru je dobře známo, že současné i potenciální použití růstového hormonu u lidí je různé a rozsáhlé. Sloučeniny vzorce I mohou být podávány pro • ti • ti ti* * ti ti • titi* * ti · • ti ti· ♦ ti ti* ti titi ti • titi · • ti * ti • titi ti • ti titi účely stimulace uvolňování růstového hormonu z hypofýzy a měly by tedy podobný účinek nebo použití jako růstový hormon samotný. Použití růstového hormonu může být shrnuto následovně: stimulace uvolňování růstového hormonu ve stáří, prevence katabolických vedlejších efektů glukokortikoidů, prevence a léčení osteoporózy, léčba syndromu chronické únavy (CFS), léčba syndromu akutní únavy a ztráty svalové hmoty po chirurgickém zákroku, stimulace imunitního systému, urychlení léčby poranění, urychlení srůstu zlomených kostí, urychlení srůstu komplikovaných fraktur, například distrakce osteogenézy, léčení v důsledku ochablost v důsledku fraktur, léčení růstové retardace, léčení růstové retardace v důsledku selhání ledvin nebo nedostatečnosti, léčení kardiomyopatie, léčení chronické nemoci jater, léčení trombocytopenie, léčení Crohnovy nemoci, léčení syndromu krátkého střeva, léčení obstruktivní pulmonární nemoci (COPD), léčení komplikací spojených s transplantací, léčení fyziologických poruch růstu včetně dětské deficience růstového hormonu nebo nízké postavy spojené s chronickým onemocněním, léčení obezity a růstové retardace spojené s obezitou, léčení růstové retardace spojené s Prader-Willi syndromem nebo s Tunerovým syndromem, zvýšení rychlosti růstu u pacientů s částečnou necitlivostí k růstovému hormonu, zrychlení léčby a zkrácení hospitalizace u popálenin, léčení intrauterinní růstové retardace, skeletální dysplazie, hyperkortisolismu a Cushingova syndromu, indukci pulsatilního uvolňování růstového hormonu, nahrazení růstového hormonu u stresovaných pacientů, léčení osteochondrodysplazie, Noonanova syndromu, schyzofrenie, deprese, Alzheimrovy choroby, zdlouhavé léčby zranění a psychosociálních deprivací, léčení pulmonární dysfunkce a dýchací závislosti, léčení srdečního selhání nebo příbuzné vaskulární dysfunkce, léčení oslabené srdeční funkce, léčení nebo prevence infarktu myokardu, snížení krevního tlaku, ochrana proti ventrikulární dysfunkci nebo prevence reperfuzních příhod, léčení dospělých při chronické dialýze, ztlumení proteinové katabolické odezvy po velkém chirurgickém zákroku, redukci kachexie a ztráty proteinů při chronickém onemocnění, jako jsou rakovina nebo AIDS, léčení hyperinsulinemie včetně nesidoblastózy, léčení adjuvanty při indukci ovulace, stymulování rozvoje thymu a prevence poklesu funkce thymu vyvolané věkem, léčení pacientů s poruchou imunity, léčení sarkopenie, léčení ochablosti ve spojení s AIDS, úprava svalové síly, mobility, udržení síly pokožky, metabolické homeostázy, reneální homeostázy v pozdním věku, stimulace osteoblastů, znovumodelování kostí a chrupavek, regulace příjmu potravy, stimulace imunitního systému u zvířat ·· provázejících člověka a léčení poruch u stárnoucích domácích zvířat, růstový promotér u dobytka a stimulace růstu vlny u ovcí a léčby metabolického syndromu (syndrom X). Navíc mohou být sloučeniny obecného vzorce I použity k léčbě odolnosti vůči inzulínu, včetně NIDDM u savců, anpříklad lidí. Dále se má za to, že sloučeniny obecného vzorce I mohou zlepšovat kvalitu spánku a upravovat relativní hyposomatotropismus v důsledku zvýšení REM fáze spánku a snížení REM latence.

Pro výše uvedené indikace se bude dávka lišit v závislosti na použité sloučenině obecného vzorce I, na způsobu podávání a na požadované terapii. Ovšem, obecně budou podávány denně pacientům a zvířatům dávky v rozsahu 0,0001 až 100 mg/kg hmotnosti, výhodně 0,001 až 50 mg/kg hmotnosti za účelem efektivního uvolnění endogenního růstového hormonu. Dále, sloučeniny obecného vzorce I nemají žádné, nebo v podstatě žádné vedlejší účinky, jako je uvolňování LH, FSH, TSH, ACTH, vasopresiinu, oxytocinu, kortisolu a/nebo prolaktinu. Dávkové formy obvyklé pro orální, nasální, pulmonální nebo transdermální podávání obsahují od okolo 0,0001 mg do okolo 100 mg, výhodně od okolo 0,001 mg do okolo 50 mg sloučenin obecného vzorce I smíchané s farmaceuticky akceptovatelným nosičem nebo ředidlem.

Farmaceutické přípravky podle tohoto vynálezu mohou případně obsahovat sloučeniny obecného vzorce I s jednou nebo více sloučeninami vykazujícími jinou aktivitu, například antibiotiky nebo jinými farmaceuticky aktivními materiály.

Způsob podávání může být libovolný, musí zajišťovat efektivní transport aktivní látky k odpovídajícímu nebo požadovanému místu působení, jako je třeba orální, nasální, pulmonární, transdermální nebo parenterální, přičemž orální cesta je preferována.

Kromě farmaceutického užití, mohou být sloučeniny vzorce I užitečné jako in vitro prostředky pro výzkum regulace uvolňování růstového hormonu.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou být také užitečné in vivo prostředky pro vyhodnocování schopnosti uvolňovat růstový hormon z hypofýzy. Například vzorky séra odebrané před a po podání těchto sloučenin pacientovi, mohou být vyhodnoceny na přítomnost růstového hormonu. Porovnání růstového hormonu • · ·· ·· v každém vzorku séra by přímo určilo schopnost hypofýzy pacienta uvolňovat růstový hormon.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou být podávány komerčně důležitým zvířatům za účelem zvýšení jejich růstu a zvýšení produkce mléka a vlny nebo za účelem ošetření potravy.

Další využití látek podporujících uvolňování růstového hormonu podle vzorce I spočívá v jejich kombinaci s dalšími podobnými látkami, jako jsou GHRP (2 nebo 6), GHRH a jejich analogů, růstový hormon a jeho analoga nebo somatomediny, včetně IGF-1 a IGF-2.

Farmakologické metody

Sloučeniny obecného vzorce I mohou být vyhodnoceny in vitro na jejich efektivnost a schopnost uvolňovat růstový hormon u hypofýzy primárních kultur krys.

Izolace buněk krysí hypofýzy je modifikací O. Sartor a kol., Endocrinology 116,1985, str. 952-957. Samci Sprague-Dawley krysích albínů (250+/- 25 gramů) byly získány od Mollegaard, Lilie, Skensved, Dánsko. Krysy byly chovány ve společných klecích (čtyři zvířata na klec) a umístěny v místnosti s 12 hodinovým cyklem světla. Teplota místnosti se pohybovala mezi 19 až 24 °C a vzdušná vlhkost od 30 do 60 %.

Krysám byly useknuty hlavy a hypofýzy byly vyříznuty. Neurointermediátní laloky byly odstraněny a zbývající tkáně byly ihned ponořeny do izolačního ledem chlazeného pufru (Geyevo médium (Gibco 041-04030) doplněného 0,25 % D-glukózy, 2 % neesenciálních aminokyselin (Gibco 043-01140) a 1 % albuminu telecího séra (BSA) (Sigma A-4503)). Tkáně byly nařezány na malé kousky a převedeny do izolačního pufru doplněného 3,8 mg/ml trypsinu (Worthington #3707 TRL-3) a 330 mg/ml DNase (Sigma D-4527). Tato směs byla inkubována při 70 otáčkách za minutu po dobu 35 minut při 37 °C v atmosféře O2/CO2 (95/5 %). Tkáň byla poté promyta třikrát výše uvedeným pufrem. S využitím standardní Pasteurovy pipety pak byla tkáň rozdělena na jednotlivé buňky. Po dispergaci byly buňky zfiltrovány přes nylonový filtr (160 mm), aby byly odstraněny nestrávené tkáně. Suspenze buněk byla promyta třikrát izolačním pufrem doplněným trypsinovým inhibitorem (0,75 mg/ml, Worthington #2829) a nakonec suspendovány v kultivačním médiu; DMEM (Gibco 041-0165) doplněném s 25 mM HEPES (Sigma H-3375) 4 mM glutaminu (Gibco 043-05030H), 0,075% hydrogenuhličitan sodný (Sigma S-8875), 0,1% neesenciální aminokyseliny, 2,5% séra hovězího plodu (FCS, Gibco 011-06290), 3% koňského sera (Gibco 03406050). 10% čerstvého krysího séra, 1 nM T₃ (Sigma T-2752) a 40 mg/ml dexamethasonu (Sigma D-4902) pH 7,3 na hustotu 2x10⁵ buněk/ml. Buňky byly očkovány v mikrotitračních plotnách (Nunc, Dánsko), 200 ml/jamku a kultivovány 3 dny při teplotě 37 °C a 8% CO2.

Testování sloučenin

Po kultivaci byly buňky promyty dvakrát stimulačním roztokem (Hanks Balanced Salt Solution (Gibco 041-04020) doplněného 1% BSA (Sigma-A-4503), 0,25% D-glukózy (Sigma G-5250) a 25 mM HEPES (Sigma H-3375) pH 7,3) a předinkubovány 1 hodinu při 37 °C. Pufr byl vyměněn s 90 ml stimulačního pufru (37 °C). bylo přidáno 10 ml roztoku testované látky a plotny byly inkubovány 15 minut při 37 °C a 5% CO2. Médium bylo dekantováno a analyzován obsah GH v rGH SPA testovacím systému.

Všechny sloučeniny byly testovány v dávkách pohybujících se od 10 pM do 100 mM. Závislost odezvy na dávce byla konstruována s využitím Hillovy rovnice (obrázek P. Biosoft). Efektivnost (maximální uvolněný GH, E_max) byla vyjádřena v % E_max GHRP6. Síla (EC50) byla určena jako koncentrace indukující polovinu maximální stimulace uvolňování GH.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou být vyhodnoceny na jejich metabolickou stabilitu za použití postupu popsaném dále:

Sloučeniny byly rozpuštěny ve vodě na koncentraci 1 mg/ml. 25 ml tohoto roztoku bylo přidáno do 175 ml odpovídajícího enzymového roztoku (při poměru enzymu:substrátu (hmotn.) přibližně 1:5). Roztok se nechá stát přes noc při 37 °C. 10 ml různých degradačních roztoků je analyzováno proti odpovídajícímu nulovému vzorku s využitím hmotnostního spektrometru s elektrospray nástřikem (ESMS)

.......... ·· ·* s vybraným monitorováním molekulárního iontu. Je-li signál snížen více než o 20% v porovnání s nulovým vzorkem, zbytek roztoku je analyzován pomocí HPLC a hmotové spektrometrie, aby byl přesně identifikován rozsah a místo degradace.

Několik standardních peptidů (ACTH 4-10, Angiotensin 1-14 a Glukagon) bylo zahrnuto do testů stability, aby se ověřila schopnost různých roztoků degradovat peptidy.

Standardní peptidy (angiotensin 1-14, ACTH 4-10 a glukagon) byly získány od Sigma, MO, USA).

Enzymy (trypsin, chymotrypsin, elastáza aminopeptidáza M a karboxypeptidázy Y a B) byly získány od Boehringer Mannheim GmbH (Mannheim, Germany).

Pankreatická enzymová směs: trypsiny, chymotrypsin a elastáza v 100 mM amoniumbikarbonátu pH 8,0 (všechny koncentrace 0,025 mg/ml).

Karboxypeptidázová směs: karboxypeptidázy Y a B v 50 mM octanu amonného pH 4,5 (všechny koncentrace 0,025 mg/ml).

Aminopeptidázový M roztok: aminopeptidáza M (0,025 mg/ml) ve 100 mM hydrogenuhličitanu amonného pH 8,0

Hmotová spektrometrická analýza byla prováděna s využitím dvou různých hmotových spektrometrů. LC-MS přístroj Sciex API III s trojnásobným kvadrupólem (Sciex Instruments, Thornhill, Ontario), vybavený elektrosprayem coby zdrojem iontů a přístroj Bio-lon 20 time-of-flight Plasma Desorption (Bio-lon Nordic AB, Uppsala, Švédsko).

Kvantifikace sloučenin (před a po degradaci) byla provedena na přístroji API III s využitím monitorování jednotlivých iontů dané látky s příslušným nástřikem analyzované látky. Proud kapaliny (MeOH.voda 1:1) o velikosti 100 ml/min byl řízen jednotkou ABI140B HPLC (Perkin-Elmer Applied Biosystems Divisions, Foster City, CA). Parametry přístroje byly nastaveny na standardní operační podmínky a SIM monitoring byl prováděn pomocí nejintenzivnějšího molekulárního iontu (ve většině případů to odpovídá dvojnásobně nabitému molekulárnímu iontu).

Identifikace degradačních produktů dále zahrnovala hmotovou spektrometrii s plazmovou desorpcí (PDMS) s aplikací vzorku na sondu potaženou nitrocelulózou a se standardním nastavením přístroje. Přesnost takto určených hmot je obecně lepší než 0,1 %.

Separace a izolace degradačních produktů byla provedena s využitím HY-TACH HPLC kolony s C-18 reverzní fází 4,6x105 mm (Hewlett-Packard Company, Palo Alto, CA) se standardním separačním gradientem acetonitril.TFA. byl použit HPLC systém HP 1090M (Hewlett-Packard Company, Palo Alto, CA).

Peptidový derivát	MW/SIM iont (amu)	Karboxypetidázová směs	Pan. enzymová směs
Standardy
ACTH 4-10	1124,5/562,8	+	-
Glukagon	3483/871,8	-	-
Inzulín (B23-29)	859,1/430,6
Angiotensin 1-14	1760,1/881,0	-	-
GHRP-2	817,4/409,6	-	-
GHRP-6	872,6/437,4	-	-

+: Stabilní (méně než 20% snížení SIM signálu po 24 hodinách v degradačním roztoku)

Nestabilní (více než 20% snížení SIM signálu po 24 hodinách v degradačním roztoku)

Jakýkoliv nový rys nebo jejich kombinace popsaná v tomto patentu se považují za podstatný pro tento vynález.

Příklady provedení vynálezu

Způsob přípravy sloučenin obecného vzorce I a preparátů obsahujících tyto sloučeniny jsou ilustrovány následujícími příklady. Tyto příklady mají pouze ilustrativní povahu a v žádném případu neomezují rozsah vynálezu.

Struktury sloučenin byly potvrzeny vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC), nukleární magnetickou resonancí (NMR, Bruker400 MHz) nebo kapalinovou chromatografií-hmotovou spektroskopií (LC-MS). NMR posuny (δ) jsou udány v částicích na milion (ppm) a jsou udány pouze některé píky. t.t. je teplota tání a je udána ve °C. Sloupcová chromatografie byla provedena s použitím techniky, kterou popsal W.C. Still a kol., J. Or. Chem. 1978, 43, 2923-2925 na silikagelu Merck 60 (Druh 9385). Sloučeniny používané jako výchozí látky jsou buď známé sloučeniny nebo sloučeniny, které lze snadno připravit metodami známými v oboru. Roztok methanol/amoniak který se používá je 10% roztok amoniaku v metahanolu.

HPLC (Metod A1): RP-HPLC analýza byla provedena s využitím UV detekce při 214 nm a kolonou Hibar LiChrosorb RP-18 (5uM) 250-4 (Merck), která byla eluována rychlostí 1 ml/minutu. Byl použit dvousložkový rozpouštědlový systém: Rozpouštědlový systém I: 0,1% kyselina trifluoroctové v acetonitrilu. Rozpouštědlový systém II: 0,1% kyselina trifluoroctové ve vodě. Kolona byla ekvilibrována směsí složenou z 20% rozpouštědlového systému I a 95% rozpouštědlového systému II. Po nástřiku vzorku byl gradient 20% až 80% rozpouštědlového sytému I v rozpouštědlovém systému II provozován 30 minut. Gradient byl potom rozšířen na 100% rozpouštědlového systému I během 5 minut, následován izokratickou elucí se 100% tohoto systému po dobu 5 minut. RP analýza byla prováděna s využitím UV detekce při 214, 254, 276 a 301 nm na silikagelové koloně 218TP54 4,6 mm x 250 mm 5 m C-18 (The Separations Group, Hesperia), která byla eluována rychlostí 1 ml/min při 42 °C. Kolona byla ekvilibrována 5% acetonitrilem v pufru obsahujícím 0,1

4 • · · • · 4 · *<*

M síranu amonného, který byl adjustován na pH 2,5 se 4 M kyselinou sírovou. Po nástřiku byl vzorek eluován gradientem 5% až 60% acetonitrilu v tomtéž pufru během 50 minut.

HPLC (Metod B1): RP-HPLC analýza byla provedena s využitím UV detekce při 214 nm a kolonou Hibar LiChrosorb RP-18 (5uM) 250-4 (Merck), která byla eluována rychlostí 1 ml/minutu. Byl použit dvousložkový rozpouštědlový systém: Rozpouštědlový systém I: 0,1% kyselina trifluoroctová v acetonitrilu. Rozpouštědlový systém II: 0,1% kyselina trifluoroctová ve vodě. Kolona byla ekvilibrována směsí složenou z 20% rozpouštědlového systému I a 95% rozpouštědlového systému II. Po nástřiku vzorku byl gradient 20% až 80% rozpouštědlového sytému I v rozpouštědlovém systému II provozován 30 minut. Gradient byl potom rozšířen na 100% rozpouštědlového systému I během 5 minut, následován izokratickou elucí se 100% tohoto systému po dobu 5 minut. RP analýza byla prováděna s využitím UV detekce při 214, 254, 276 a 301 nm na silikagelové koloně 218TP54 4,6 mm x 250 mm 5 m C-18 (The Separations Group, Hesperia), která byla eluována rychlostí 1 ml/min při 42 °C. Kolona byla ekvilibrována 5% (acetonitril + 0,1 TFA) ve vodném roztoku TFA ve vodě (0,1 %). Po nástřiku byl vzorek eluován gradientem 5% až 60% (acetonitril + TFA) v tomtéž pufru během 50 minut.

HPLC (Metoda H-8): HPLC analýza se prováděla za použití Waters® milénium systém použitím symetrické kolony Water® 3 mm x 150 mm 3,5 m C-18. Kolona byla vyhřívána na 42 °C a eluována s lineárním gradientem 5-90% acetonitril, 85-0% vody a 10% kyseliny trifluoroctové (0,5%) ve vodě v průběhu 15 minut a rychlosti průtoku 1 ml/min.

LC-MS analýza se prováděla na PE Sciex API 100 LC/MS System použitím symetrické kolony Water® 3 mm x 150 mm 3,5 m C-18 a pozitivního iontového sprejování s průtokovou rychlostí 20 ml/min. Kolona byla eluována s lineárním gradientem 5-90% acetonitril, 85-0% vody a 10% kyseliny trifluoroctové (0,5%) ve vodě v průběhu 15 minut a rychlosti průtoku 1 ml/min.

Příklad 1 « · 4* ♦· • 4 » · · · • * · · 4 < · « ·· · 4 * · · ·♦ 4· • · · « • »4 « • 4 · 4 « 4 · · · · ·

N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-Acetylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl) 2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny

terc.Butylester N'-acetylhydrazinkarboxylové kyseliny h-V»

CH, O

K roztoku terc.butylkarbazátu (1,0 g, 7,6 mmol) v pyridinu (3,1 ml) v methylenchloridu (5 ml) se pomalu přidá anhydrid kyseliny octové (1,5 ml) a směs se míchá přes noc. Směs se přidá k methylenchloridu (50 ml) a promyje se vodou (2 x 10 ml) a solankou (10 ml) a suší se (MgSCU), filtruje a koncentruje ve vakuu a získá se 0,95 g terč.butylesteru N'-acetylhydrazinkarboxylové kyseliny jako žlutý olej.

LC-MS: Ri = 5,39, m/z = 349,6 (m+1) ¹H NMR (CDCI₃) vybrané píky δ 1,5 (s, 9H, (CH₃)₃C-O); 2,05 (s, 3H), CH₃CO) terc.Butylester N-[(1 R)-2-(N'-acetylhydrazino)-1 -benzyl-2-oxoethyl]-Nmethylkarbamové kyseliny ch₃ o

ÝY o

• « ♦ · »» «· · ♦ · ·< « φ φ φφφ» φ · φφφ· •ΦΦ φφφ ·· *· terc.Butylester N'-acetylhydrazinkarboxylové kyseliny (0,95 g, 5,45 mmol) se rozpustí v methylenchloridu (10 ml) a přidá se kyselina trifluoroctová (10 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny. Směs se koncentruje ve vakuu a stripuje se třikrát s methylenchloridem a získá se 1,0 g hydrazidu kyseliny octové. Potom se rozpustí (2R)-2-(terc.butoxykarbonylmethylamino)-3-fenylpropionová kyselina (0,76 g, 2,73 mmol) ve směsi dimethylformamidu (3 ml) a methylenchloridu (6 ml) a přidá se směs 1-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,45 g, 3,28 mmol) a hydrochloridu 1 -ethyl-3(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu (0,62 g, 3,28 mmol) a směs se míchá po dobu 20 minut. Přidá se směs hydrazidu kyseliny octové (1,0 g, 5,45 mmol) a diisopropylethylaminu (1,87 ml) a směs se míchá přes noc. Přidá se acetát (50 ml) a směs se promývá vodou (50 ml). Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (3 x 50 ml) a spojené organické vrstvy se promyjí vodou (2 x 50 ml) a solankou (50 ml) a suší se (MgSO4), filtrují, koncentrují se na olej a chromatografuje se na silikagelu (40 g) směsí heptanu a ethylacetátu (1:1) a získá se 0,81 g terc.butylesteru N-[(1R)2-(N'-acetylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylkarbamové kyseliny jako žlutý olej.

LC-MS Ri = 9,34, m/z = 336,4 (m+1)

HPLC: R, = 10,17 min. (H8) ¹H NMR (CDCb) vybrané píky: δ 1,32 + 1,40 (2 s, 9H, (CHa^C-O, rotamer); 2,05 (s, 3H, COCH3); 2,78 (s, 3H, N-CH₃) terc.Butylester N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-Nmethylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamové kyseliny

terc.Butylester N-[(1R)-2-(N'-acetylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-Nmethylkarbamové kyseliny (0,81 g, 2,42 mmol) se rozpustí v methylenchloridu (5 ml)

9« ·9

9 * · · · · • 9 99 9 9 9

9 9 9 9

99 99 99 a přidá se kyselina trifluoroctová (5 ml) a směs se míchá 30 minut při teplotě místnosti. Směs se koncentruje ve vakuu a stripuje se třikrát s methylenchloridem a zbývající olej se chromatografuje na silikagelu (40 g) směsí methylenchlorid:(methanol/amoniak)(9:1) a získá se 0,41 g N'-((2R)-2(methylamino)-3-fenylpropionyl)hydrazidu kyseliny octové jako amorfní prášek. Potom se rozpustí (2R)-2-(N-terc.butoxykarbonyl-N-methylamino)-3-(2naftyl)propionová kyselina (0,63 g, 1,92 mmol) v methylenchloridu (10 ml) a přidá se směs 1-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,26 g, 1,92 mmol) a hydrochloridu 1-ethyl-3-(3dimethylaminopropyl)karbodiimidu (0,37 g, 1,92 mmol) a směs se míchá 30 minut. Přidá se směs N'-((2R)-2-(methylamino)-3-fenylpropionyl)hydrazidu kyseliny octové (0,41 g, 1,74 mmol) a DIEA (0,39 ml) a směs se míchá přes noc.

Přidá se methylenchlorid (50 ml) a směs se promyje vodou (50 ml). Organická vrstva se prmyje vodným hydrogenuhličitanem sodným (10 ml) a solankou (50 ml) a suší se (MgSOzO, filtruje, koncentruje se na olej a chromatografuje se na silikagelu (40 g) směsí heptan:ethylacetát (1:4) a získá se terc.butylester N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'acetylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-Nmethylkarbamové kyseliny jako olej.

LC-MS R_t = 13,68 min., m/z = 547,2 (m+1)

HPLC: R_t= 13,53 min. (H8)

N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-Acetylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl)2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny

K roztoku terc.butylester N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetylhydrazino)-1-benzyl-2oxoethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamové kyseliny (0,59 g, 1,08 mmol) v methylenchloridu (5 ml) se přidá kyselina trifluoroctová (5 ml) při teplotě • « * · ftft ·· ftft ftftftft » ♦ · ·· · ft ft · · · 9 ftftftft ftftft ftftft ·· ·· ·» ·♦

O °C a směs se míchá 90 minut. Směs se koncentruje ve vakuu a stripuje se třikrát s methylenchloridem. Získaný olej se rozpustí ve směsi methanol/amoniak (2 ml) a přidá se methylenchlorid (20 ml) a silikagel (5 g) a koncentruje se ve vakuu. Získaný prášek se extrahuje methylenchloridem (100 ml) a směsí methylenchlorid:(methanol/amoniak) (9:1) a spojené extrakty se koncentrují ve vakuu a získá se 0,41 g surového produktu jako pěna.

Potom se rozpustí (2E)-5-(terc.butylkarbonylamino)-5-methylhex-2-enová kyselina (0,21 g, 0,89 mmol) v methylenchloridu (10 ml) a přidá se směs 1-hydroxy-7azabenzotriazolu (0,13 g, 0,98 mmol) a hydrochloridu 1 -ethyl-3-(3dimethylaminopropyl)karbodiimidu (0,17 g, 0,89 mmol) a směs se míchá 30 minut. Potom se přidá směs shora uvedeného surového produktu (0,40 g, 0,89 mmol) a diisopropylethylaminu (0,20 ml) a směs se míchá přes noc.

Přidá se methylenchlorid (50 ml) a směs se promyje vodou (10 ml). Organická vrstva se promyje vodným hydrogenuhličitanem sodným (10 ml) a solankou (50 ml), suší se (MgSO4), filtruje a koncentruje se a získá se 0,42 g světle hnědé pěny. Pěna se rozpustí v methylenchloridu (5 ml), ochladí se na 0 °C a přidá se kyselina trifluoroctové (5 ml) a směs se míchá 45 minut. Reakční směs se ochladí methylenchloridem (50 ml) a vodou (10 ml) a trituruje se na pH cca 7 s pevným hydrogenuhličitanem sodným. Organická vrstva se oddělí a promyje se vodou (10 ml), suší se (MgSO4), filtruje a koncentruje se ve vakuu.

Získaný produkt se rozpustí ve směsi actonitril/voda 1:20 (10 ml) a aplikuje se na patronu C-18. Sep-Pak Clasic© (2,0 g, dodávána od Waters™), která se předtím promyje acetonitrilem (100 ml) a vodou. Potom se gradient eluentu skládající se ze směsi voda/acetonitril/kyselina trifluoroctové (10, 15, 20 a 25% acetonitrilu ve směsi voda/0,1% kyselina trifluoroctové) přehání přes Sep-Pak© (2 g). Relevantní frakce se spojí a lyofilizují se na 0,19 g soli kyseliny trifluoroctové N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'acetylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-Nmethylamidu (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny jako bílý amorfní prášek. LC-MS: Rt = 9,21 min., m/z = 572,4 (m+1)

HPLC: R_t = 26,45 min. (A1), R_t = 28,40 (B1)

99

9 9 9 ♦ 9 99

9 9 9

9 9 9 »» »9

Příklad 2

N-(( 1 R)-1 -(N-[(1 R)-2-(N'-Acetyl-N-methylhydrazino)-1 -benzyl-2-oxoethyl]-Nmethylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2enové kyseliny

terc.Butylester N'-acetyl-N-methylhydrazinkarboxylové kyseliny

H.&S

CH,

CH₃

CH, O

K roztoku terc.butylesteru N-methylhydrazihkarboxylové kyseliny (0,62 g, 4,20 mmol) v methylenchloridu (10 ml) se přidá anhydrid kyseliny octové (0,79 ml, 8,40 mmol) a pyridin (1,36 ml, 16,80 mmol) a směs se míchá přes noc. Přidá se methylenchlorid (50 ml) a směs se promyje vodou (3x10 ml), suší se (MgSO4), filtruje a koncentruje se ve vakuu a získá s 0,32 g (41 %) terc.butylesteru N'-acetyl-Nmethylhydrazinkarboxylové kyseliny jako olej.

¹H NMR (CDCI3) vybrané píky: δ 1,45 + 1,48 (2 s, 9H, (CH₃)₃C-O, rotamer); 1,98 (s, 3H, COCH₃); 3,14+3,17 (2 s, 3H, N-CH₃), rotamer)

N'-Methylhydrazid kyseliny octové

CH, O

HN. X N H

CH₃

K roztoku terc.butylesteru N'-acetyl-N-methylhydrazinkarboxylové kyseliny (0,3 g, 1,59 mmol) v methylenchloridu (2 ml) se přidá kyselina trif luoroctová (2 ml) a směs se míchá 60 minut. Směs se koncentruje ve vakuu a stripuje se třikrát s methylenchloridem a získá se 0,32 g (100 %) N'-methylhydrazidu kyseliny trifluoroctové jako řídký olej.

¹H NMR (CDCb): δ 2,13 (s, 3H, COCH₃); 2,98 (s, 3H, N-CH₃) terc.Butylester N-[(1 R)-2-(N'-acetyl~N-methylhydrazino)-1 -benzyl-2-oxoethyl]-Nmethylkarbamové kyseliny

H.

K roztoku (2R)-2-(N-terc.butoxykarbonyl-N-methylamino)-3-fenylpropionové kyseliny (0,27 g, 0,96 mmol) v methylenchloridu (10 ml) se přidá 1-hydroxy-7-azabenzotriazol (0,13 g, 0,96 mmol) a hydrochlorid 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu (0,18 g, 0,96 mmol) a směs se ochladí na 0 °C. Potom se přidá N'-methylhydrazid kyseliny octové (0,19 g, 0,96 mmol) a diisopropylethylamin (0,41 ml, 2,40 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Přidá se methylenchlorid (50 ml) a směs se promyje vodou (10 ml), nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (10 ml), solankou (10 ml), suší se (MgSO₄), filtruje se a koncentruje se ve vakuu a získá se 0,35 g (125 %) surového terc.butylesteru N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N-methylhydrazino)-1benzyl-2-oxoethyl]-N-methylkarbamové kyseliny jako bezbarvý olej.

LC-MS: Rt = 10,29 min, m/z = 350,4 (m+1)

HPLC: R_t= 10,77 min (H8)

N'-Methyl-N '-((2R)-2-(methylamino)-3-fenylpropionyl)hydrazid kyseliny octové

CH, O I 3

HN

0· 00 • » 0 0 • 0 0 ·

0 0 0 • 0 0 0 «0 00

00 0 0 · 0 • 0 «0 • 0 0 0 00 »0

Κ roztoku terc.butylesteru N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N-methylhydrazino)-1-benzyl-2oxoethyl]-N-methylkarbamové kyseliny (0,35 g, 1,00 mmol) v methylenchloridu (2 ml) se přidá kyselina trifluoroctová (2 ml) a směs se míchá 30 minut. Směs se koncentruje ve vakuu a stripuje se třikrát methylenchloridem a chromatografuje se na silikagelu (40 g) směsí methylenchlorid:(methanol/amoniak) (9:1) a získá se 110 mg (44 %) N'-methyl-N'-((2R)-2-(methylamino)-3-fenylpropionyl)hydrazidu jako olej.

¹H NMR (ČDCfe): δ 1,85 (s, 3H, COCH₃); 2,25 (s, 3H, N-CH₃); 3,05 (s, 3H, N-CH₃) (2R)-N-[(1R)-2-(N'-Acetyl-N-methylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methyl-2(methylamino)-3-(2-naftyl)propionamid

K roztoku 2(R)-(N-terc.butoxykarbonyl-N-methylamino)-3-(2-naftyl)propionové kyseliny (0,18 g, 0,53 mmol) v methylenchloridu (5 ml) se přidá 1-hydroxy-7azabenzotriazol (0,072 g, 0,53 mmol) a hydrochlorid 1-ethyl-3-(3dimethylaminopropyl)karbodiimidu (0,10 g, 0,53 mmol) a směs se ochladí na 0 °C. Potom se přidá N'-methyl-N'-((2R)-2-(methylamino)-3-fenylpropionyl)hydrazid (0,11 g, 0,44 mmol) a diisopropylethylamin (0,098 ml, 0,57 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Přidá se methylenchlorid (50 ml) a směs se promyje vodou (10 ml), nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (10 ml), solankou (10 ml), suší se (MgSO₄), filtruje, koncentruje se ve vakuu a chromatografuje se na silikagelu (40 g) ethylacetátem a získá se 0,14 g (57 %) terc.butylesteru N-((1R)-1-(N-[(1R)-2(N'-acetyl-N-methylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2naftyl)ethyl)-N-methylkarbamové kyseliny jako bezbarvý olej.

K roztoku terc.butylesteru N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N-methylhydrazino)-1benzyl-2-oxoethyi]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamové

99

9 9 9

9 9 ♦ kyseliny (0,14 g, 0,25 mmol) v methylenchloridu (2 ml) se při 0 °C přidá kyselina trifluoroctová (2 ml) a směs se míchá 90 hodin. Potom se přidá methylenchlorid (50 ml) a nasycený hydrogenuhličitan sodný (5 ml) a směs se titruje s pevným hydrogenuhličitanem sodným do pH = 7. Vodná vrstva se oddělí a extarhuje se methylenchloridem (20 ml) a spojené organické vrstvy se promyjí solankou (10 ml), suší se (MgSCU), filtrují se a koncentrací ve vakuu se získá 0,10 g (87 %) (2R)-N[(1R)-2-(N'-acetyl-N-methylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methyl-2(methylamino)-3-(2-naftyl)propionamidu jako olej.

¹H NMR (CDCb) vybrané píky: δ 1,68 (s, 3H, N-CH₃); 1,98 (s, 3H, COCH₃)

N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-Acetyl-N-methylhydrazino)-1 -benzy l-2-oxoethyl]-Nmethylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2enové kyseliny

K roztoku (2E)-5-(terc.butylhydroxykarbonylamino)-5-methylhex-2-enové kyseliny (0,066 g, 0,27 mmol) v methylenchloridu (5 ml) se přidá 1-hydroxy-7-azabenzotriazol (0,037 g, 0,27 mmol) a hydrochlorid 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu (0,052 g, 0,27 mmol) a směs se ochladí na 0 °C. Potom se přidá (2R)-N-[(1R)-2-(N'acetyl-N-methylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2naftyl)propionamid (0,10 g, 0,22 mmol) a diisopropylethylamin (0,049 ml, 0,29 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Přidá se methylenchlorid (50 ml) a směs se promyje vodou (10 ml), nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (10 ml), solankou (10 ml), suší se (MgSC>4), filtruje se a koncentruje ve vakuu. Zbytek se chromatografuje na silikagelu (40 g) směsí heptan:ethylacetát (1:1) a získá se 0,10 g (66 %) terc.buty testeru ((3E)-4-[N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N-methylhydrazino)4» • * ·· 4* • · » · 4 · * * »4 4« 9 4 4 ·

9 4 4 · 4 · 4 4 « • 9 4 · · 9 4 4 ♦ 49 49 9· 44

-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamoyl]-1,1 dimethylbut-3-enyl)karbamové kyseliny jako bezbarvý olej.

Roztok terc.butylesteru ((3E)-4-[N-((1 R)-1 -(N-[( 1 R)-2-(N'-acetyl-N-methylhydrazino)1 -benzyl-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamoyl]-1,1 dimethylbut-3-enyl)karbamové kyseliny (0,1 g, 0,46 mmol) v methylenchloridu (2 ml) se ochladí na 0 °C a přidá se kyselina trifluoroctová (2 ml) a směs se míchá 30 minut. Potom se přidá methylenchlorid (50 ml) a nasycený hydrogenuhličitan sodný (5 ml) a směs se titruje pevným hydrogenuhličitanem sodným do pH = 7. Vodná vrstva se oddělí a extrahuje se methylenchloridem (20 ml) a spojené organické vrstvy se promyjí solankou (10 ml), suší se (MgSO₄), filtrují a koncentrují se ve vakuu. Získaný produkt se rozpustí ve směsi acetonitril/voda 1:20 (10 ml) a aplikuje se na patronu C-18 Sep-Pak Classic © (2,0 g, dodávaná Waters™), která byla předem promyta acetonitrilem (100 ml) a vodou (100 ml). Gradient eluentu, skládající se ze směsi voda/acetonitril/kyselina trifluoroctová (10, 50 a 70% acetonitril ve vodě/0,1% kyselina trifluoroctová) se nechá projít přes Sep-Pak© (2 g). Relevantní frakce se spojí, lyofilizují se na 0,054 g (53 %) trifluoroctové soli N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'acetyl-N-methylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2naftyl)ethyl)-N-methylamidu (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny jako bílý amorfní prášek

LC-MS: R_t = 8,74 min., m/z = 586,4 (m+1)

HPLC: R_t = 29,53 (A1); R_t = 31,35 (B1) ¹H NMR (DMSO) vybrané píky: δ 1,05 (s, 6H, C-(CH₃)₂); 1,77 (s, 3H, COCH₃); 6,2 (d, 1H, C=CH-CO); 6,3 (m, 1H, CH₂-CH=C)

Příklad 3

N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-Acetyl-N'-methylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-Nmethylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2enové kyseliny ·· · ··♦* 0 0«

0 000* 000

000 000 ·· ** ·♦

terc.Butylester N'-benzylidenhydrazinkarboxylové kyseliny ^CH3 9

K roztoku terc.butylkarbazátu (10,0 g, 75,64 mmol) v 99% ethanolu (100 ml) se přidá benzaldehyd (7,64 ml, 75,64 mmol) a směs se míchá 60 minut. Směs se ochladí na 0 °C, filtruje se a sraženina se promyje studeným ethanolem a získá se 13,47 g (81 %) terc.butylesteru N'-benzylidenhydrazinkarboxylové kyseliny jako bílé krystaly.

Teplota tání 184 až 186 °C ¹H NMR (CDCI₃): δ 1,52 (s, 9H, (CH₃)C); 7,34-7,92 (m, 7H, arom) terč. Butylester N '-benzyliden-N-methylhydrazinkarboxylové kyseliny

CH₃

K roztoku terč.butylester N'-benzylidenhydrazinkarboxylové kyseliny (2,0 g, 9,07 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (20 ml) se přidá methyljodid (4,54 ml, 72,6 mmol) a roztok se ochladí na 0 °C. Pomalu se přidá hydrid sodný (60%, disperze v minerálním oleji, 1,09 g, 27,2 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 3 dnů. Přidá se tetrahydrofuran (50 ml) a směs se filtruje. Filtrát se koncentruje ve

• fc	fcfc	fcfc	fcfc	··
··	• ·	•	fc	• fc	•	•	•	•
•	•	•	fc	fcfc	fc	•	•	fc
•								fc
•	•	•	•	• fc	fc	•	•	•
• fcfc	♦ fcfc	fcfc		fcfc	fcfc		• ·

vakuu a chromatografuje se na silikagelu (100 g) směsí heptanu a ethylacetátu (1:1) a získá se 1,97 g (93 %) terc.butylesteru N'-benzyliden-N-methylhydrazinkarboxylové kyseliny jako žlutý olej.

¹H NMR (CDCb) vybrané píky: δ 1,58 (s, 9H, (CH₃)₃C); 3,34 (s, 3H, N-CH₃) terč.Butylester N-methylhydrazinkarboxylové kyseliny

CH₃

-ch₃ ch₃

K roztoku 'terc.butylesteru N'-benzyliden-N-methylhydrazinkarboxylové kyseliny (1,97 g, 8,41 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (50 ml) se přidá palladium na uhlíku (10%, 0,2 g) a směs se vystaví účinku vodíku. Po spotřebě 260 ml vodíku se směs filtruje přes celit a koncentruje se na1,25 g (100 %) terc.butylesteru Nmethylhydrazinkarboxylové kyseliny ¹H NMR (CDCb) vybrané píky: δ 1,5 (s, 9H, (CH₃)₃C-O) 3,05 (s, 3H, N-CH₃) terč. Butylester N-methyl-N '-((2R)-2-(methylamino)-3fenylpropionyl)hydrazinkarboxylové kyseliny

K roztoku (2R)-2-(N-(((9H-fluoren-9-yl)methoxy)karbonyl)-N-methylamino)-3fenylpropionové kyseliny (0,6 g, 1,5 mmol) v methylenchloridu (100 ml) se přidá 1hydroxy-7-azobenzotriazol (0,22 g, 1,65 mmol) a hydrochlorid 1 -ethyl-3-(3dimethylaminopropyl)karbodimidu (0,29 g, 1,50 mmol) a směs se ochladí na 0 °C. Potom se přidá terč.butylester N-methylhydrazinkarboxylové kyseliny (0,22 g, 1,50 mmol) a diisopropylethylamin (0,33 ml, 1,95 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Potom se přidá methylenchlorid (20 ml) a směs se promyje vodou (20 ml), nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (20 ml), solankou (20 ml), suší se (MgSCU), filtruje se a koncentruje se ve vakuu. Produkt se chromatogrfafuje na silikagelu (40 g) směsí heptan:ethylacetátu (1:1) a získá se 0,65 g (82 %) terc.butylesterů N'-((2R)-2-[N-(((9H-fluoren-9-yl)methoxy)karbonyl)-N-methylamino] 3-fenylpropionyl)-N-methylhydrazinkarboxylové kyseliny jako bílá pěna.

K roztoku terc.butylesterů N'-((2R)-2-[N-(((9H-fluoren-9-yl)methoxy)karbonyl)-Nmethylamino]-3-fenylpropionyl)-N-methylhydrazinkarboxylové kyseliny (0,65 g, 1,23 mmol) v methylenchloridu (4 ml) se přidá tris(2-aminoethyí)amin (4 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 60 minut. Potom se přidá methylenchlorid (50 ml) a směs se promyje solankou (2 x 20 ml), fosfátovým pufrem (pH=8, 2 x 20 ml), vodou (20 ml), solankou (10 ml), suší se (MgSCU), filtruje se a koncentruje ve vakuu a získá se 0,34 g (90 %) terc.butylesterů N-methyl-N'-((2R)-2-(methylamino)-3fenylpropionyl)hydrazinkarboxylové kyseliny jako žlutý olej.

¹H NMR (CDCh) vybrané píky: δ 1,35 + 1,4 (s, 9H, (CHabC-O, rotamer), 2,2 (s, 3H, N-CH3) 2,5 (s, 3H, N-CH₃) terč. Butylester N '-[(2R)-2-(N-((2R)-2-[N-(((9H-fluoren-9-yl)methoxy)karbonyl)-Nmethylamino]-3-(2-naftyl)propionyl)-N-methylamino)-3-fenylpropionyl]-Nmethylhydrazinkarboxylové kyseliny

K roztoku (2R)-2-[N-(9H-fluoren-9-yl)methoxykarbonyl)-N-methylamino]-3-naftalen-2 ylpropionové kyseliny (0,6 g, 1,33 mmol) v methylenchloridu (10 ml) se přidá 1hydroxy-7-azabenzotriazol (0,18 g, 1,33 mmol) a hydrochlorid 1 -ethyl-3-(3dimethylaminopropyl)karbodiimidu (0,25 g, 1,33 mmol) a směs se ochladí na 0 °C. Potom se přidá terč.butylester N-methyl-N'-((2R)-2-(methylamino)-3fenylpropionyl)hydrazinkarboxylové kyseliny (0,34 g, 1,11 mmol) a diisopropylethylamin (0,25 ml, 1,44 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Přidá se methylenchlorid (50 ml) a směs se promyje vodou (10 ml), nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (10 ml), solankou (10 ml), suší se (MgSCXi), filtruje a koncentruje se ve vakuu. Produkt se chromatografuje na silikagelu (40 g) směsí heptanu:ethylacetátu (2:1) a získá se 0,53 g (64 %) terc.butylesteru N'-[(2R)-2-(N((2R)-2-[N-(((9H-fluoren-9-yl)methoxy)karbonyl)-N-methylamino]-3-(2naftyl)propionyl)-N-methylamino)-3-fenylpropionyl]-N-methylhydrazinkarboxylové kyseliny jako bezbarvý olej.

¹H NMR (DMSO) vybrané píky: δ 1,25 + 1,55 (2 s, 9H, (CH₃)₃C-O, rotamer), 2,3 + 2,35 (2 s, 3H, N-CHs, rotamer), 2,65 + 2,68 (2 s, 3H, N-CH₃, rotamer) 2,95 + 3,0 (2 s, 3H, N-CH₃, rotamer) ((9H-Fluoren-9-yl)methyl)ester N-methyl-N-((1 R)-1 -(N-methyl-N-[(1 R)-1 -(N methylhydrazinokarbonyl)-2-fenylethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)karbamové kyseliny

K roztoku terc.butylesteru N'-[(2R)-2-(N-((2R)-2-[N-(((9H-fluoren-9yl)methoxy)karbonyl)-N-methylamino]-3-(2-naftyl)propionyl)-N-methylamino)-3fenylpropionyl]-N-methylhydrazinkarboxylové kyseliny (0,27 g, 0,36 mmol) v methylenchloridu (2 ml) se přidá při teplotě 0 °C kyselina trif luoroctová (2 ml) a směs se míchá 90 minut. Potom se přidá methylenchlorid (50 ml) a nasycený hydrogenuhličitan sodný (5 ml) a směs se titruje pevným hydrogenuhličitanem sodným na pH = 7. Vodná vrstva se oddělí a extrahuje se methylenchloridem (20 ml) a spojené organické vrstvy se promyjí solankou (10 ml), suší se (MgSCU), filtrují a • 4 • * ·

9 • · « * # 9 • « ·· koncentrací ve vakuu se získá 0,18 g (78 %) ((9H-fluoren-9-yl)methyl)esteru Nmethyl-N-((1 R)-1 -(N-methyl-N-[(1 R)-1 -(N '-methy Ihydrazinokarbony l)-2fenylethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)karbamové kyseliny jako amorfní bílý prášek. LC-MS: Rf= 14,03 min., m/z = 641,4 (m+1)

HPLC: Rf= 13,80 min. (H8) ((9H-Fluoren-9-yl)methyl)ester N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N'-methylhydrazino)1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamové kyseliny

K roztoku ((9H-fluoren-9-yl)methyl)esteru N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-1(N'-methylhydrazinokarbonyl)-2-fenylethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)karbamové kyseliny (0,18 g, 0,28 mmol) v methylenchloridu (2 ml) se přidá anhydrid kyseliny octové (0,053 ml) a pyridin (0,027 ml) a směs se míchá přes noc. Směs se koncentruje ve vakuu a stripuje se třikrát s methylenchloridem a získá se 0,21 g (110 %) ((9H-fluoren-9-yl)methyl)esteru N-(( 1 R)-1 -(N-[(1 R)-2-(N'-acetyl-N'methylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-Nmethylkarbamové kyseliny jako bezbarvý olej.

LC-MS: Rf = 16,48 min., m/z = 683,0 (m+1)

HPLC: Rf= 15,81 min. (H8) (2R)-N-[(1R)-2-(N'-Acetyl-N'-methylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methyl-2(methylamino)-3-(2-naftyl)propionamid «· ··

K roztoku ((9H-fluoren-9-yl)methyl)esteru N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N'methylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-Nmethylkarbamové kyseliny (0,21 g, 0,31 mmol) v methylenchloridu (4 ml) se přidá tris(2-aminoethyl)amin (4 ml) a směs se míchá 60 minut. Potom se přidá methylenchlorid (50 ml) a směs se promyje solankou (2 x 20 ml), fosfátovým pufrem (pH=6, 2 x 20 ml), vodou (20 ml), solankou (10 ml), suší se (MgSO4), filtruje a koncentrací ve vakuu se získá 0,13 g (92 %) (2R)-N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N'methylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2naftyl)propionamidu jako bezbarvý olej.

LC-MS: R_t = 8,57, m/z = 461,2 (m+1)

N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-Acetyl-N'-methylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-Nmethylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2enové kyseliny

H₂N

'3

CH,

I 3

N. .CH.

K roztoku (2E)-5-(terc.butyloxykarbonylamino)-5-methylhex-2-enové kyseliny (0,1 g,

0,42 mmol) v methylenchloridu (5 ml) se přidá 1-hydroxy-7-azabenzotriazol (0,06 g,

0,42 mmol) a hydrochlorid 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu (0,08 g, β

•	• 00	«0	00	··
00	··	0 0	• ·	0		•	0
•		• 0	»·	0		•	0
• •	0	• 0	0 0	•		0	0
000	000		*0		• 0		00

0,42 mmol)a směs se ochladí na 0 °C. Potom se přidá (2R)-N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N'methylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2naftyl)propionamid (0,13 g, 0,28 mmol) a diisopropylethylamin (0,062 ml, 0,36 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Potom se přidá methylenchlorid (50 ml) a směs se promyje vodou (10 ml), nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (10 ml), solankou (10 ml), suší se (MgSCU), filtruje a koncentruje se ve vakuu. Produkt se chromatografuje na silikagelu (40 g) směsí heptan:ethylacetát (1:1) a získá se 0,12 g (63 %) terc.butylesteru ((3E)-4-[N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N'-methylhydrazino)1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamkarbamoyl]1,1-dimethylbut-3-enyl)karbamové kyseliny jako bezbarvý olej.

Roztok terc.butylesteru ((3E)-4-[N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N'-methylhydrazino)1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamkarbamoyl]1,1-dimethylbut-3-enyl)karbamové kyseliny (0,1 g, 0,146 mmol) v methylenchloridu (2 ml) se ochladí na 0 °C a přidá se kyselina trifluoroctová (2 ml) a směs se míchá 30 minut. Potom se přidá methylenchlorid (50 ml) a nasycený hydrogenuhličitan sodný (5 ml) a směs se titruje s pevným hydrogenuhličitanem sodným na pH = 7. Vodná vrstva se oddělí a extrahuje se metyhlenchloridm (20 ml) a spojené organické vrstvy se promyjí solankou (10 ml), suší se (MgSCU), filtrují a koncentrují se ve vakuu. Získaný produkt se rozpustí ve směsi acetonitril/voda 1:20 (10 ml) a aplikuje se na patronu C-18 Sep-Pak Classic© (2,0 g, dodávaná Waters™), která byla předem promyta acetonitrilem (100 ml) a vodou (100 ml). Gradient eluentu, skládající se ze směsi voda/acetonitril/kyselina trifluoroctová (10, 50 a 70% acetonitril ve vodě/0,1% kyselina trifluoroctová) se nechá projít přes Sep-Pak©. Relevantní frakce se spojí, lyofilizují se na 0,086 g (84 %) trifluoroctové soli N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetyl-N'methylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-Nmethylamidu (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny jako bílý amorfní prášek. LC-MS: Rt = 9,255 min., m/z = 586,4 (m+1)

HPLC: R_t = 31,47 min. (A1), R_t = 33,30 (B1) ¹H NMR (DMSO) vybrané píky: δ 5,3 (dd, 1H, C=CH-CO) 5,7 (t, 1H, CH-CH₂C₆H₅)

6,15 (d, 1H, CH₂-CH=C) 6,4 (m, 1H, CH-CH₂C₁₀H₇)

Příklad 4 • · · · • · · • ·· ·« o ·· • · · • · ··

N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5methylhex-2-enové kyseliny

terc.Butylester Ν,Ν',Ν'-trimethylhydrazinkarboxylové kyseliny

K roztoku terc.butylkarbazátu (1,0 g, 7,56 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (40 ml) se při 0 °C přidá hydrid sodný (60% disperze v oleji, 2,73 g, 68 mmol) a methyljodid (11,3 ml, 181 mmol) a směs se míchá 3 dny. Potom se přidá tetrahydrofuran (100 ml) a suspenze se filtruje a filtrát se koncentruje ve vakuu. Získaný produkt se rozpustí v ethylacetátu a chromatografuje se na silikagelu (40 g) směsí heptan:ethylacetát (1:1) a koncentrací se získá 0,53 g (40 %) terc.butylesteru Ν,Ν',Ν'-trimethylhydrazinkarboxylové kyseliny jako řídký olej.

¹H NMR (CDCb): δ 1,48 (s, 9H, (CH₃)₃C-O) 2,6 (s, 6H, 2 N-CH₃), 2,9 (s, 3H, N-CH₃) terč. Butylester N-methyl-N-[( 1 R)-2-fenyl-1 -(N, N', N trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamové kyseliny

CH, i ³O. /N^

CH₃ O

O

K roztoku terc.butylesteru Ν,Ν',Ν'-tirmethylhydrazinkarboxylové kyseliny (0,52 g, 2,99 mmol) v methylenchloridu (4 ml) se přidá kyselina trifluoroctová (4 ml) a směs se míchá 60 minut. Směs se koncentruje ve vakuu a stripuje se třikrát methylenchloridem a získá se 0,61 g Ν,Ν,Ν'-trimethylhydrazin trifluoracetátu jako řídký olej.

Potom se rozpustí (2R)-2-(terc.butoxykarbonylmethylamino)-3-fenylpropionová kyselina (1,0 g, 3,58 mmol) v methylenchloridu (5 ml) a přidá se hydrochlorid 1-ethyl,3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu (0,34 g, 1,79 mmol) a směs se míchá 30 minut. Potom se přidá směs Ν,Ν,Ν'-trimethylhydrazintrifluoracetátu (0,37 g, 1,96 mmol) a diisopropylethylaminu (0,92 ml, 5,34 mmol) a směs se míchá 2 dny. Přidá se methylenchlorid (50 ml) a směs se promyje vodou (50 ml). Organická vrstva se promyje nasyceným vodným hydrogenuhličitanem sodným (2 x 10 ml) a vodou (50 ml), suší se (MgSOzO, filtruje, koncentruje se ve vakuu a získá se 0,30 g terč.butylesteru N-methyI-N-[( 1 R)-2-fenyl-1 -(N, N',N trimethylhydrazinkarbonyl)ethyl]karbamové kyseliny jako amorfní prášek.

HPLC. R_t = 13,03 min. (H8) ¹H NMR (CDCb) vybrané píky δ 1,23 + 1,35 (2 s, 9H, (CH₃)₃C-O, rotamer 2,25 + 2,42 + 2,45 (3 s, 6H, N-N(CH₃)₂, rotamer) terč.Butylester N-methyl-N-((1 R)-1 -(N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1 -(N, N', N trimethylhydrazinkarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)karbamové kyseliny

K roztoku terc.butylesteru N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinkarbonyl)ethyl]karbamové kyseliny (0,3 g, 0,89 mmol) v methylenchloridu (1 ml) se přidá kyselina trifluoroctová (1 ml) a směs se míchá 30 • · minut. Směs se koncentruje ve vakuu, stripuje se třikrát methylenchloridem a suspenduje se ve směsi metyhlenchlorid:(methanol/amoniak) (1:1) (2 ml) a trifluoramoniumacetát se vysráží. Přidá se diethylether (10 ml) a směs se filtruje a filtrát se koncentruje ve vakuu a získá se 0,31 g trimethyihydrazidu (2R)-2methylamino-3-fenylpropionové kyseliny jako olej.

Potom se rozpustí (2R)-2-(N-terc.butoxykarbonyl-N-methylamino)-3-(2naftyl)propionová kyselina (0,35 g, 1,07 mmol) v methylenchloridu (20 ml) a přidá se směs 1-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,15 g, 1,07 mmol) a hydrochloridu 1 -ethyl-3-(3dimethylaminopropyl)karbodiimidu (0,21 g, 1,07 mmol) a směs se míchá 30 minut. Potom se přidá směs trimethyihydrazidu (2R)-2-methylamino-3-fenylpropionové kyseliny (0,21 g, 0,89 mmol) a diisopropylethylminu (0,20 ml) a směs se míchá přes noc. Přidá se methylenchlorid (30 ml) a směs se promyje vodou (10 ml). Organická vrstva se promyje vodným hydrogenuhličitanem sodným (10 ml) a solankou (50 ml), suší se (MgSCU), filtruje a koncentruje se na olej a chromatografuje se na silikagelu (40 g) směsí heptan:ethylacetát (3:7) a získá se 0,43 g terc.butylesteru N-methyl-N((1 R)-1 -(N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1 -(Ν,Ν',Ν'trimethylhydrazinkarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)karbamové kyseliny jako olej.

¹H NMR (CDCI₃) vybrané píky: δ 0,92 + 1,22 (2 s, 9H, (CH₃)₃C-O, rotamer) 5,0 + 5,3 (2 t, 1H, CH-CH₂C₆H₅, rotamer) 6,3 + 6,45 (2 t, 1H, CH-CH2C10H7, rotamer)

N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinkarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5methylhex-2-enové kyseliny

H.

CH₃ O

• ·

K roztoku terc.butylesteru N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinkarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)karbamové kyseliny (0,43 g, 0,79 mmol) v methylenchloridu (2 ml) se přidá kyselina trifluoroctová (2 ml) při 0 °C a směs se míchá 30 minut. Směs se koncentruje ve vakuu a stripuje se třikrát methylenchloridem. Získaný olej se rozpustí ve směsi methanol/amoniak (2 ml) a přidá se methylenchlorid (20 ml) a silikagel (5 g) a koncentruje se ve vakuu. Získaný prášek se extrahuje filtrací s methylenchloridem (50 ml) a směsí methylenchlorid:(methanol/amoniak) (9:1) a spojené extrakty se koncentrují ve vakuu a získá se 0,36 g surového produktu jako pěna.

Potom se rozpustí (2E)-5-(terc.butoxykarbonylamino)-5-methylhex-2-enová kyselina (0,12 g, 0,48 mmol) v methylenchloridu (5 ml) a přidá se směs 1-hydroxy-7azabenzotriazolu (0,065 g, 0,48 mmol) a hydrochloridu 1-ethyl-3-(3dimethylaminopropyl)karbodiimidu (0,092 g, 0,48 mmol) a směs se míchá 30 minut. Potom se přidá směs získaného surového produktu (0,18 g, 0,40 mmol) a diisopropylethylaminu (0,09 ml, 0,53 mmol) a směs se míchá přes noc.

Přidá se methylenchlorid (50 ml) a směs se promyje vodou (10 ml). Organická vrstva se promyje vodným hydrogenuhličitanem sodným (10 ml) a solankou (50 ml), suší se (MgSO4), filtruje, koncentruje a získá se 0,14 g bezbarvého oleje. Olej se rozpustí v methylenchloridu (2 ml), ochladí se na 0 °C a přidá se kyselina trifluoroctová (2 ml) a směs se míchá 30 minut. Reakční směs se ochladí methylenchloridem (50 ml) a vodou (10 ml) a titruje se na pH cca 7 s pevným hydrogenuhličitanem sodným. Organická vrstva se oddělí a promyje se vodou (10 ml), suší se (MgS04), filtruje a koncentruje se ve vakuu.

Získaný produkt se rozpustí ve směsi acetonitril/voda 1:20 (10 ml) a aplikuje se na patronu C-18 Sep-Pak Classic© (2,0 g, dodávaná Waters™), která byla předem promyta acetonitrilem (100 ml) a vodou (100 ml). Gradient eluentu, skládající se ze směsi voda/acetonitril/kyselina trifluoroctová (10, 15, 20 a 25% acetonitril ve vodě/0,1% kyselina trifluoroctová) se nechá projít přes Sep-Pak©. Relevantní frakce se spojí a lyofilizují se na 0,072 g trifluoroctové soli N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'-trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2naftyl)ethyl)amidu (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny jako bílý amorfní prášek.

• · * • ·· • fc ⁴ • · « • ··

LC-MS: Rt = 9,96 min., m/z = 572,4 (m+1)

HPLC: R_t = 35,23 min. (A1), R_t = 37,45 (B1) ¹H NMR (DMSO) vybrané píky: δ 5,1 (t, 1H, CH-CH₂C₆H₅) 6,1 (t, 1H, CH₂-CH=C) 6,2 (d, 1H, C=CH-CO)6,4 (t, 1H, CH-CH₂Ci₀H₇)

Příklad 5

3-Aminomethyl- N-methyl-N-((1 R)-1-(N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amidu

K roztoku 3-[(9H-fluoren-9-ylmethoxykarbonylamino)methyl]benzoové kyseliny (0,18 g, 0,48 mmol) v methylenchloridu (10 ml) se přidá 1-hydroxy-7-azabenzotriazol (0,065 g, 0,48 mmol) a hydrochlorid 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyI)karbodiimidu (0,092 g, 0,48 mmol) a směs se ochladí na 0 °C. Potom se přidá (2R)-N-methyl-2(methylamino)-3-(2-naftyl)-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]propionamid (0,18 g, 0,40 mmol) a diisopropylethylamin (0,089 ml, 0,52 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Potom se přidá methylenchlorid (50 ml) a směs se promyje vodou (10 ml), nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (10 ml), solankou (10 ml), suší se (MgSOJ, filtruje a koncentruje ve vakuu. Produkt se chromatografuje na silikagelu (40 g) směsí heptan:ethylacetát (1:1) a získá se 0,12 g (37 %) ((9H-fluoren-9yl)methyl)esteru (3-[N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)karbamoyl]karbamové kyseliny jako bezbarvý olej.

• 9

K roztoku ((9H-fluoren-9-yl)methyl)esteru (3-[N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)2-fenyl-1 -(Ν, Ν', N '-trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2naftyl)ethyl)karbamoyl]karbamové kyseliny (0,12 g, 0,15 mmol) v methylenchloridu (4 ml) se přidá tris(2-aminoethyl)amin (4 ml) a směs se míchá 90 minut. Potom se přidá methylenchlorid (50 ml) a směs se promyje solankou (2 x 20 ml), fosfátovým pufrem (pH=6, 2 x 20 ml), vodou (20 ml), solankou (10 ml), suší se (MgSCU), filtruje se a koncentruje se ve vakuu.

Získaný produkt se rozpustí ve směsi acetonitril/voda 1:20 (10 ml) a aplikuje se na patronu C-18 Sep-Pak Classic© (2,0 g, dodávaná Waters™), která byla předem promyta acetonitrilem (10 ml) a vodou (10 ml). Gradient eluentu, skládající se ze směsi voda/acetonitril/kyselina trifluoroctová (10, 30 a 70% acetonitril ve vodě/ kyselina trifluoroctová) se nechá projít přes Sep-Pak© (2 g). Relevantní frakce se spojí a lyofilizují se na 0,08 g trifluoroctové soli 3-aminomethyl-N-methyl-N-((1R)-1(N-methyl-N-[( 1 R)-2-fenyl-1 -(Ν, Ν', N '-trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2(2-naftyl)ethyl)benzamidu jako bílý amorfní prášek.

LC-MS: R_t = 9,87 min., m/z = 580,2 (m+1)

HPLC: R_t = 35,28 min. (A1), R_t = 37,43 (B1) ¹H NMR (DMSO) vybrané píky: δ 5,7 (t, 1H, CH-CH₂C₆H₅) 6,2 (t, 1H, CH-CH₂Ci₀H₇) 6,8 - 7,9 (m, 16H, arom)

Příklad 6

N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazinokarbonyl)-2-fenylethyl]-Nmethylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2enové kyseliny

• 4 • 4 terc.Butylester N-(1-N',N'-dimethylhydrazinokarbonyl)-2-fenylethyl)-Nmethylkarbamové kyseliny

CH₃ O ch₃

Roztok (2R)-2-(terc.butoxykarbonylmethylamino)-3-fenylpropionové kyseliny (3,0 g, 10,74 mmol), hydrochloridu 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu (2,06 g, 10,74 mmol) a 1-hydroxy-7-azabenzotriazolu (1,46 g, 10,74 mmol) v methylenchloridu se míchá 30 minut. Potom se přidá směs Ν',Ν'-dimethylhydrazinu (1,23 ml, 16,11 mmol) a diisopropylethylaminu (2,39 ml, 13,96 mmol) a směs se míchá přes noc.

Přidá se ethylacetát (100 ml) a směs se promývá vodou (20 ml). Organická vrstva se promyje nasyceným vodným hydrogenuhličitanem sodným (2 x 10 ml) a vodou (50 ml), suší se (MgSOZ filtruje se, koncentruje se ve vakuu a chromatografuje se na silikagelu (100 g) směsí heptan:ethylacetát (2:3) a získá se 2,19 g terc.butylesteru N*methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1 -(N',N'-dimethylhydrazinkarbonyl)ethyl]karbamové kyseliny jako amorfní prášek.

HPLC: R_f= 10,81 min. (H8) ¹H NMR (CDCfe) vybrané píky: δ 1,25 + 1,30 + 1,45 + 1,50 (4 s, 9H, (CH₃)₃C-O, rotamer)

Ν',Ν'-Dimethylhydrazid (2R)-2-methylamino-3-fenylpropionové kyseliny

CH₃ O CH₃

K roztoku terc.butylesteru N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N',N'dimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamové kyseliny (2,19 g, 6,81 mmol) v methylenchloridu (5 ml) se přidá kyselina trifluoroctová (5 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 90 minut. Směs se koncentruje ve vakuu a stripuje se třikrát s methylenchloridem (3x2 ml) a získá se sůl kyseliny trifluoroctové N',Ndimethylhydrazidu (2R)-2-methylamino-3-fenylpropionové kyseliny v kvantitativním výtěžku.

¹H NMR (CDCb) vybrané píky: δ 2,30 (s, 3H, HN-CH₃) 2,45 + 2,50 (2 s, 6H, NN(CH3)2, rotamer) terc.Butylester N-((1R)-1-(N-((1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazinokarbonyl)-2-fenylethyl) N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamové kyseliny

K roztoku 2(R)-(N-terc.butoxykarbonyl-N-methylamino)-3-(naft-2-yl)propionové kyseliny (1,77 g, 5,37 mmol) v methylenchloridu (20 ml) se přidá 1-hydroxy-7azabenzotriazol (0,73 g, 5,37 mmol) a hydrochlorid 1 -ethyl-3-(3dimethylaminopropyl)karbodiimidu (1,03 g, 5,37 mmol) a směs se míchá 30 minut. Potom se přidá Ν',Ν'-dimethylhydrazid (2R)-2-methylamino-3- fenylpropionové kyseliny (2,41 g, 5,37 mmol) a diisopropylethylamin (3,7 ml, 21,5 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Směs se koncentruje ve vakuu a chroamtografuje se na silikagelu (100 g) směsí methylenchlorid (90):methanol/amoniak (10/1) a získá se 2,52 g terc.butylesteru N-((1R)-1-(N-((1R)-1 (N',N'-dimethylhydrazinokarbonyl)-2-fenylethyl)-N-methylkarbamoyl)-2-(2naftyl)ethyl)-N-methylkarbamové kyseliny jako žlutý olej.

LC-MS: R_t =13,18 min., m/z = 533,2 (m+1)

0

0 • 0

00 0 0 • 0

HPLC: Rt = 14,12 min. (H8) ¹H NMR (CDCL₃) vybrané píky: δ 1,15 + 1,25 + 1,30 + 1,45 (4 s, 9H, (CH₃)₃-C, rotamer) (2R)-N-[(1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazinokarbonyl)-2-fenylethyl]-N-methyl-2(methylamino)-3-(2-naftyl)propionamid

K roztoku terc.butylesteru N-((1R)-1-(N-((1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazinokarbonyl)-2 fenylethyl)-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamové kyseliny (2,52 g, 4,73 mmol) v methylenchloridu (5 ml) se přidá kyselina trifluoroctová (5 ml) při teplotě 0 °C a směs se míchá 60 minut. Reakční směs se koncentruje ve vakuu a stripuje se třikrát s methylenchloridem a získá se trifluoroctová sůl (2R)-N-[(1R)-1(N',N'-dimethylhydrazinokarbonyl)-2-fenylethyl]-N-methyl-2-(methylamino)-3-(2naftyl)propionamidu v kvantitativním výtěžku ajko žlutý olej.

HPLC: R_t = 7,61 min. (H8)

LC-MS: R_t = 7,72 min., m/z = 433,2 (M+1) terc.Butylester ((3E)-4-[N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazinokarbonyl)-2fenylethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamoyl]-1,1 dimethylbut-3-enyl)karbamové kyseliny

• ·

4 • 4 • 4

CH, i ³

H,C

CH.

K roztoku (2E)-5-(terc.butoxykarbonylamino)-5-methylhex-2-enové kyseliny (0,35 g, 1,42 mmol) v methylenchloridu (5 ml) se přidá směs 1-hydroxy-7-azabenzotriazolu (0,193 g, 1,42 mmol) a hydrochloridu 1-ethyl-3-(dimethylaminopropyl)-karbodiimidu (0,272 g, 1,42 mmol) a směs se míchá 30 minut. Potom se přidá směs získaného surového (2R)-N-[( 1 R)-1 -(Ν', N '-dimethylhydrazinokarbonyl)-2-fenylethyl]-N-methyl-2(methylamino)-3-(2-naftyl)propionamidu a diisopropylethylaminu (0,61 ml, 3,55 mmol) a směs se míchá přes noc. Směs se koncentruuje ve vakuu a chromatografuje se na silikagelu (40 g) směsí ethylacetát (95):methanol/10% amoniak (5) a získá se 0,37 g terc.butylesteru ((3E)-4-[N-((1 R)-1-(N-[(1 R)-1-(N',N'-dimethylhydrazinokarbonyl)-2fenylethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamoyl]-1,1 dimethylbut-3-enyl)karbamové kyseliny jako olej.

HPLC: R_t= 14,51 min. (H8)

LC-MS: Rt = 13,39 min., m/z 658,4 (m+1)

K roztoku terc.butylesteru ((3E)-4-[N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'dimethylhydrazinokarbonyl)-2-fenylethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-Nmethylkarbamoyl]-1,1-dimethylbut-3-enyl)karbamové kyseliny (0,36 g, 0,55 mmol) v methylenchloridu (3 ml) se při 0 °C přidá kyselina trifluoroctová (3 ml) a směs se míchá 30 minut. Přidá se methylenchlorid (50 ml) a voda (10 ml) a roztok se titruje pevným hydrogenuhličitanem sodným na pH>7. Vodná vrstva se extarhuje methylenchloridem (25 ml) a spojená organická vrstva se suší (MgSCht), filtruje a koncentruje se ve vakuu.

Získaný produkt se rozpustí ve směsi acetonitril/voda 1:20 (10 ml) a aplikuje se na patronu C-18 Sep-Pak Classic© (0,25 g g, dodávaná Waters™), která byla předem promyta acetonitrilem (10 ml) a vodou (10 ml). Gradient eluentu, skládající se ze ·· ·· ··♦ · · * • · ··.

♦ · · · • · · ♦ ·· ♦· • · · • · · • · · • 9 9 *

směsi voda/acetonitril/kyselina trifluoroctové (10, 30 a 70% acetonitril ve vodě/ kyselina trifluoroctové) se nechá projít přes Sep-Pak© (2 g). Relevantní frakce se spojí a lyofilizují se na 196 mg trifluoroctové soli N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'dimethylhydrazinokarbonyl)-2-fenylethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-Nmethylamidu (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny jako bílý amorfní prášek. LC-MS: Rt = 8,99 min., m/z = 558,4

HPLC: R_t = 30,42 min: (A1), R_t = 30,38 (B1), R_t = 8,40 min (H8)

Příklad 7 [N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazinokarbonyl)-2-(2-thienyl)ethyl]-Nmethylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-methylhex-2-enové kyseliny

Připraví se analogicky jako N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazinokarbonyl)2-fenylethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5methylhex-2-enové kyseliny (příklad 6) za použití (2R)-2-(N-(terc.butoxykarbonyl)-Nmethylamino)-3-(thiofen-2-yl)propionové kyseliny místo (2R)-2(terc.butoxykarbonylmethylamino)-3-fenylpropionové kyseliny.

terč. Butylester (N-[( 1 R)-1 -(N', N '-dimethylhydrazinokarbonyl)-2-(2-thienyl)ethyl]-Nmethylkarbamové kyseliny

ch₃ o ch₃ • ·

LC-MS: R_t = 8,92 min., m/z = 328,4 (m+1) ¹H NMR (CDCI₃) vybrané píky: δ 1,35 + 1,40 + 1,42 + 1,45 (4 s, 9H, C-(CH₃)₃, rotamer) 2,45 + 2,55 + 2,60 (3 s, 6H, (CH₃)₂N-N, rotamer) 2,80 + 2,85 (2 s, 3H, NCH₃) terč. Butylester N-((1 R)-1-(N-[(1 R)-1-(N',N'-dimethylhydrazinokarbonyl)-2-(2thienyl)ethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamové kyseliny

HPLC: R_t = 13,96 min. (H8)

LC-MS: Rt = 13,11 min., m/z = 539,4 (m+1) (2R)-N-[(1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazinokarbonyl)-2-(2-thienyl)ethyl]-N-methyl-2(methylamino)-3-(naftyl)propionamid

HPLC: R_t = 7,41 min. (H8)

LC-MS: R_t = 7,74 min., m/z = 439,2 (m+1) terč. Butylester ((3E)-4-[N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazinokarbonyl)-2-(2 thienyl)ethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamoyl]-1,1 dimethylbut-3-enyl)karbamové kyseliny

ΦΦ ·· » · · · » φ ♦· » · · * • φ · · φ· ♦· • φ φ φ φ φ • φ c%h2 ^chhcAAn ^H3^{C υ} h ch₃

HPLC: R_t= 14,43 min. (Η8)

LC-MS: R_t = 13,31 min., m/z = 664,4 (m+1)

N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazinokarbonyl)-2-(2-thienyl)ethyl]-Nmethylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methy|amid (2E)-5-amino-5-methylhex-2enové kyseliny

HPLC: R_t = 30,03 min. (A1), R_t = 29,88 min. (B1)

LC-MS: R_t = 8,97 min., m/z = 564,4 (m+1)

Příklad 8

N-(( 1 R)-1 -(N-[(1 R)-1 -(N ',N'-Dimethylhydrazinokarbonyl)-2-fenylethyl]-Nmethylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methyl-3-(N-methylaminomethyl)benzamid

• · • 9

9

9 ♦·

Připraví se analogicky jako N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazinokarbonyl) 2-fenylethyl]-N-měthylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5methylhex-2-enové kyseliny (příklad 6) za použití 3[terc.butoxykarbonylmethylamino)methyl]benzoové kyseliny místo (2E)-5(terc.butyloxykarbonylamino)-5-methylhex-2-enové kyseliny.

terc.Butylester N-(3-[N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N\N'-dimethylhydrazinokarbonyl)-2fenylethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamoyl]benzyl)-Nmethylkarbamové kyseliny

HPLC: Rf= 14,63 min. (H8)

LC-MS: R_t = 13,68 min., m/z = 680,2 (m+1)

N-((1 R)-1 -(N-[( 1 R)-1 -(N', N '-Dimethylhydrazinokarbonyl)-2-fenylethyl]-Nmethylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methyl-3-(N-methylaminomethyl)benzamid • * • 44 4 ·· • ♦ · • 44 • · 4 · · ·· •

·4

HPLC: R_t = 31,17 min. (A1), R_t = 30,58 min. (B1)

LC-MS: Rt = 8,92 min., m/z = 580,2 (m+1)

Příklad 9

Připraví se analogicky jako N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)-2-fenylethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-Nmethylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny (příklad 4) za použití (2R)-N terc.butoxykarbonylamino-N-methyl-D-4,4'-bifenylalaninu místo 2(R)-(Nterc.butoxykarbonyl-N-methylamino)-3-(naft-2-yl)propionové kyseliny.

« 0

0

0 • t

0« ·»

0» • · • ·

0 * • * terč. Butylester N-(( 1 R)-2-(bifenyl-4-yl)-1 -(N-methyl-N-[( 1 R)-2-fenyl-1 -(Ν, Ν', N 'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)ethyl)-N-methylkarbamové kyseliny

HPLC: R_t= 16,70 min. (H8)

LC-MS: R_t = 17,29 min., m/z = 574,4 (m+1) (2R)-3-(Bifenyl-4-yl)-1 -(N-methyl-2-(methylamino)-N-[( 1 R)-2-fenyl-1 -(Ν, Ν', N trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]propionamid

HPLC: R_t = 8,56 min. (H8)

LC-MS: Rt = 10,51 min., m/z = 473,2 (m+1) terč.Butylester ((3E)-4-[N-((1 R)-2-(bifenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1(N,N',N'-trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)ethyl)-N-methylkarbamoyl]-1,1 dimethylbut-3-enyl)karbamové kyseliny

9

9 ·

« ·

9* « 9 • *

9 • 9 «I*

9«

HPLC: R_t = 16,22 min. (H8)

LC-MS: Rt = 17,16 min., m/z = 698,6 (m+1)

N-(( 1 R)-2-( B ifeny l-4-y I)-1 -(N-methyl-N-[( 1 R)-2-fenyl-1 -(N, N', N 'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5 methylhex-2-enové kyseliny

HPLC: R_t = 37,23 min. (A1), R_t = 38,88 min. (B1), R_t = 10,88 min. (H8) LC-MS: R_t = 11,14 min., m/z = 598,4 (m+1)

Příklad 10

N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-4-(1aminocyklobutyl)but-2-enové kyseliny

H₂ř

Připraví se analogicky jako N-((1 R)-1-(N-[(1R)-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)-2-fenylethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-Nmethylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny (pnklad 4) za použití (2E)-4 (1-(terc.butoxykarbonylamino)cyklobutyl)but-2-enové kyseliny místo 2(E)-5(terc.butyloxykarbonylamino)-5-methylhex-2-enové kyseliny.

terc.Butylester (1-((2E)-3-[N-methyl-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2naftyl)ethyl)karbamoyl]allyl)cyklobutyl)karbamové kyseliny

H

HPLC: R_t= 15,75 min. (H8)

LC-MS: Rt = 16,63 min., m/z = 684,2 (m+1)

• ·

HPLC: R_t = 35,28 min. (A1), R_t = 36,92 min (B1), R_t = 10,48 min (H8)

LC-MS: Rt = 10,57 min., m/z = 584,4 (m+1)

Příklad 11

N-((1R)-2-(Bifenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-((piperidin-1yl)karbamoyl)ethyl]karbamoyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2onové kyseliny

Připraví se analogicky jako N-((1R)-2-(bifenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1(N,N',N'-trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5amino-5-methylhex-2-enové kyseliny (příklad 9) za použití N-aminopiperidinu místo Ν, Ν', N '-trimethylhydrazinu.

terč. Butylester N-methyl-N-[( 1 R)-2-fenyl-1 -((piperidin-1 yl)karbamoyl)ethyl]karbamové kyseliny

• ·

LC-MS: R_t = 13,68 min., m/z = 362,0 (m+1) (2R)-2-(Methylamino)-3-fenyl-N-piperidin-1-yl)propionamid

HPLC: R_t = 5,55 min. (H8)

LC-MS: R_t = 6,87 min., m/z = 262,4 (m+1) terc.Butylester N-((1R)-2-(bifenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1 -((piperidin-1 yl)karbamoyl)ethyl]karbamoyl)ethyl)-N-methylkarbamové kyseliny

HPLC: Rt = 16,22 min. (H8)

LC-MS: R_t = 15,41 min., m/z = 599,2 (m+1) • · (2R)-3-(Bifenyl-4-yl)-N-methyl-2-(methylamino)-N-[(1 R)-2-fenyl-1 -((piperidin-1 yl)karbamoyl)ethyl]propionamid

HPLC: R_t = 9,11 min. (H8)

LC-MS: R_t = 9,71 min., m/z = 499,2 (m+1) terč. Butylester ((3E)-4-[N-((1 R)-2-bifenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1((piperidin-1 -yl)karbamoyl)ethyl]karbamoyl)ethyl)-N-methylkarbamoyl]-1,1 dimethylbut-3-enyl)karbamové kyseliny

HPLC: R_t = 16,25 min. (H8)

LC-MS: R_t = 15,13 min., m/z = 724,6 (m+1)

N-((1R)-2-(Bifenyl-4-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-((piperidin-1yl)karbamoyl)ethyl]karbamoyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2enové kyseliny

HPLC: R_t = 37,03 min (A1), R_t = 35,93 min. (B1), R_t = 10,45 min. (H8)

LC-MS: R_t = 10,24 min., m/z = 624,4 (m+1)

Příklad 12

N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-(2-thienyl)-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5 methylhex-2-enové kyseliny

Připraví s analogicky jako N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5methylhex-2-enové kyseliny (příklad 4) za použití (2R)-2-(N-terc.butoxykarbonyl)-N methylamino)-3-(thiofen-2-yl)propionové kyseliny místo (2R)-2(terc.butoxykarbonylamino)-3-fenyipropionové kyseliny.

terc.Butylester N-methyl-N-[(1 R)-2-(2-thienyl)-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamové kyseliny • ·

HPLC: Rt = 12,88 min. (H8)

LC-MS: R_t = 13,29 min., m/z = 342,2 (m+1)

Trimethylhydrazid (2R)-2-(methylamino)-3-(2-thienyl)propionové kyseliny

CH₃ O ch₃

HPLC: Rt = 5,26 min. (H8)

LC-MS: R_t = 6,67 min., m/z = 242,6 (m+1) terč.Butylester N-methyl-N-((1 R)-1 -(N-methyl-N-[( 1 R)-2-(2-thienyl)-1 -(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)karbamové kyseliny

HPLC: R_t = 15,85 min. (H8) • ♦ · (2R)-N-Methyl-2-(methylamino)-3-(2-naftyl)-N-[(1R)-2-(2-thienyl)-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]propionamid

HPLC: R_t = 8,79 min. (H8)

LC-MS: R_t = 9,72 min., m/z = 453,2 (m+1) terc.Butylester ((3E)-1,1-dimethyl-4-[N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-(2thienyI)-1 -(Ν, Ν', N '-trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2naftyl)ethyl)karbamoyl]but-3-enyl)karbamové kyseliny

HPLC: R_t= 15,83 min. (H8)

LC-MS: R_t = 16,19 min., m/z = 678,2 (m+1)

N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-(2-thienyl)-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5methylhex-2-enové kyseliny

HPLC: R_t = 33,85 min (A), R_t = 35,38 min. (B1) LC-MS: R_t = 10,02 min., m/z = 578,2 (m+1)

Příklad 13

N-((1R)-2-(1H-lndol-3-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5-methylhex-2 enové kyseliny

Připraví se analogicky jako N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N' trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5methylhex-2-enové kyseliny (příklad 4) za použití 2-terc.butoxykarbonylamino-3-(1-H indol-3-yl)propionové kyseliny místo 2(R)-(N-terc.butoxykarbonyl-N-methylamino)-3(naft-2-yl)propionové kyseliny.

terč. Butylester ((1 R)-2-( 1 H-indol-3-yI)-1 -(N-methyl-N-[( 1 R)-2-fenyi-1 -(Ν, Ν', N 'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)ethyl)karbamové kyseliny ·♦

9

HPLC: R_t = 13,85 min. (H8)

LC-MS: Rt = 14,24 min., m/z = 522,2 (m+1) (2R)-2-Amino-3-(1H-indol-3-yl)-N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]propionamid

HPLC: R_t = 9,02 min. (H8)

LC-MS: R_t = 9,06 min., m/z = 422,2 (m+1) terc.Butylester [(3E)-4-((1R)-2-(1H-indol-3-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)ethylkarbamoyl)-1,1 -dimethylbut-3enyl]karbamové kyseliny

CH₃ O cft H ^CH

O

O *· 00 • * 0 <

• 9 9 1 • 0 0 0 « • 0 0 «

0 00

HPLC: R_t= 13,98 min. (H8)

LC-MS: Rt = 15,24 min., m/z = 647,4 (m+1)

HPLC: R_t = 30,56 min. (A1), R_t = 32,10 (B1)

LC-MS: R_t = 9,24 min., m/z = 547,4 (m+1)

Příklad 14

2-Amino-N-((1 R)-2-(1 H-i ndol-3-y I)-1 -(N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1 -(Ν, Ν', N 'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)ethyl)-2-methylpropionamid

Připraví se analogicky jako N-((1R)-2-(1H-indol-3-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1(N,N',N'-trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5methylhex-2-enové kyseliny (příklad 13) za použití 2-terc.butoxykarbonylamino-2·· titi « ti • ti • ti • ·· ·· titi • * · ti ti ti titi ♦ ti ti ti ti • titi • ti • ti • ti 9 ti • ti ti· methylpropionové kyseliny místo (2E)-5-(terc.butyloxykarbonylamino)-5-methylhex-2 enové kyseliny terč. Butylester [(1 R)-1 -((1 R)-2-(1 H-indol-3-yl)-1 -(N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1 (Ν, N j N '-trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)ethylkarbamoyl)-1 methylethyljkarbamové kyseliny

HPLC: R_t = 13,51 min. (H8)

LC-MS: R_t = 13,68 min., m/z = 607,4 (m+1)

2-Amino-N-((1R)-2-(1H-indol-3-yl)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)ethyl)-2-methylpropionamid

Příklad 15

HPLC: R_t = 29,8 min. (A1), R_t = 31,29 (B1)

LC-MS: R_t = 9,21 min., m/z = 507,6 (m+1)

Φ· φφ Φ· φ φ ί φ φφ φ φ «

N-Methyl-N-((1 R)-1-(N-methyl-N-[(1 R)-1-(N-methyl-N-(piperidin-1 -yl)karbamoyl)-2fenylethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny

Připraví s analogicky jako N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5methylhex-2-enové kyseliny (příklad 4) za použití N-methyl-N-(piperidin-1-yl)aminu místo Ν,Ν',Ν'-trimehylhydrazinu.

N-(P iperid i n-1 -yl)formamid

N'

H

O

-N

Roztok N-aminopiperidinu (2,0 ml, 18,5 mmol) a methylformiátu (2,3 ml, 37 mmol) se míchá po 4 dny v utěsněné zkumavce při 40 °C. Směs se koncentruje ve vakuu, suspenduje se v etheru (100 ml) a filtrací se získá 1,84 g N-(piperidin-1-yl)formamidu jako bílý prášek.

¹H NMR (CDCb): δ 1,40 (m, 6H, -CH₂CH₂CH2CH₂CH2-), 2,75 (m, 4H, -CH₂CH₂-NCH₂CH₂-) 6,80 (d, 1H, NH), 7,90 + 8,30 + 8,35 (3 s, 1H, CHO-N, rotamer)

N-Methyl-N-(piperidin-1 -yl)amin

« ♦ • «

Κ suspenzi lithiumaluminiumhydridu (0,66 g, 17,4 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (20 ml) se při 0 °C pomalu přidá roztok N-(piperidin-1-yl)formamidu (1,86 g, 14,5 mmol) v tetrahydrofuranu (20 ml) a směs se míchá 3 hodiny. Potom se přidá ethylacetát (20 ml) a 6 N chlorovodík (30 ml) a tetrahydrofuran se odstraní za sníženého tlaku. Směs se titruje s 30% hydroxidem sodným na pH 11 a vodná vrstva se extrahuje methylenchloridem (3 x 100 ml) a spojené organické vrstvy se suší (MgSOzt), filtrují a koncentrují se ve vakuu. Vzniklý olej se chromatografuje na silikagelu (40 g) methylenchloridem (9):methanolu (1) a získá se 1,76 g N-methyl-N(piperidin-1 -yl)aminu jako řídký olej.

¹H NMR (CDCI₃): δ 1,65 + 1,90 (2 m, 6H, -CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂- rotamer) 2,75 (s,

3H, N-Chb) 3,25 (m, 4H, -CH₂CH₂-N-CH₂CH₂-) terc.Butylester N-methyl-N-[(1 R)-1 -(N-methyl-N-(piperidin-1-yl)karbamoyl)-2fenylethyljkarbamové kyseliny

H (2R)-N-Methyl-2-(methylamino)-3-fenyl-N-(piperidin-1-yl)propionamid

HPLC: Rt = 15,12 min. (H8)

LC-MS: R_t = 15,74 min., m/z = 376,4 (m+1)

·· · ··· · ·· • · *· • · • · ·* ·· • · 9 9 • 999 • 9 9 9 • · · ·

99

HPLC; Rt = 7,15 min. (H8)

LC-MS: R_t = 8,56 min., m/z = 276,4 (m+1) terč. Butylester N-methyl-N-((1 R)-1 -(N-methyl-N-[( 1 R)-1 -(N-methyl-N-(piperidin-1 yl)karbamoyl)-2-fenylethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)karbamové kyseliny

HPLC: R_t= 17,53 min. (H8)

LC-MS: Rt = 18,20 min., m/z = 587,4 (m+1) (2R)-N-Methyl-2-(methylamino)-N-[(1 R)-1 -(N-methyl-N-(piperidin-1 -yl)karbamoyl)-2 fenylethyl]-3-(2-naftyl)propionamid

HPLC: R_t = 9,61 min. (H8) • 9 »9 9

9 9

LC-MS: Rt = 10,76 min, m/z = 487,4 (m+1)

999 • 9 9 · • 9 • ·9 9 9

9 9 ·

99 terc.Butylester ((3E)-1,1 -dimethyl-4-[N-methyl-N-((1 R)-1 -(N-methyl-N-[(1 R)-1 -(Nmethyl-N-(piperidin-1-yl)karbamoyl)-2-fenylethyl]karbamoyl)-2-(2naftyl)ethyl)karbamoyl]but-3-enyl)karbamové kyseliny

N-Methyl-N-((1 R)-1 -(N-methyl-N-[(1 R)-1 -(N-methyl-N-(piperidin-1 -yl)karbamoyl)-2fenylethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny

Příklad 16

HPLC: R_t = 38,85 min. (A1), R_t = 40,19 min. (B1), R_t =11,42 min. (H8)

LC-MS: R_t = 12,11 min., m/z = 612,4 (m+1) fcfc

N-Methyl-N-((1 R)-1 -(N-methyl-N-[(1 R)-1 -(N-methyl-N-(piperidin-1 -yl)karbamoyl)-2-(2 thienyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny

Připraví se analogicky jako N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N(piperidin-1-yl)karbamoyl)-2-fenylethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5amino-5-methylhex-2-enové kyseliny (příklad 15) za použití (2R)-2-(Nterc.butoxykarbonyl)-N-methylamino)-3-(thiofen-2-yl)propionové kyseliny místo (2R)2-(terc.butoxykarbonylmethylamino)-3-fenylpropionové kyseliny.

terč.Butylester N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-(piperidin-1-yl)karbamoyl)-2-(2thienyl)ethyl]karbamové kyseliny

(2R)-N-Methyl-2-(methylamino)-N-(piperidin-1-yl)-3-(2-thienyl)propionamid

HPLC: R_t= 14,85 min (H8)

LC-MS: Rt = 15,39 min., m/z = 382,2 (m+1)

4 «4

4 4 44 • 4

4 4 ·· 44 ·* 44 • 4 4 * • · » 4

O 4 · * • 4 4 «

4«

HPLC: R_t = 6,83 min. (H8)

LC-MS: R_t = 8,34 min., m/z = 282,2 (m+1) terc.Butylester N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-(piperidin-1yl)karbamoyl)-2-(2-thienyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)karbamové kyseliny

HPLC: R_t = 17,53 min. (H8)

LC-MS: R_t = 17,83 min., m/z = 593,4 (m+1) (2R)-N-Methyl-2-(methylamino)-N-[(1 R)-1 -(N-methyl-N-(piperidin-1 -yl)karbamoyl)-2 (2-thienyl)ethyl]-3-(2-naftyl)propionamid

HPLC: R_t = 9,48 min. (H8) ·· ·· • · «

• · • · 9 • · • 9 9 · • ·

LC-MS: Rt = 10,62 min., m/z = 493,4 (m+1) terc.Butylester ((3E)-1,1 -dimethyl-4-[N-methyl-N-((1 R)-1 -(N-methyl-N-[(1 R)-1 -(Nmethyl-N-(piperidin-1-yl)karbamoyl)-2-(2-thienyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2naftyI )ethyl )karbamoyI] but-3-enyI )karbamové kyše I i ny

HPLC: R_t = 17,19 min. (H8)

N-Methyl-N-((1 R)-1 -(N-methyl-N-[(1 R)-1 -(N-methyl-N-(piperidin-1 -yl)karbamoyl)-2-(2 thienyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové

HPLC: R_t = 39,47 min. (A1), R_t = 41,43 min. (B1), Rt = 11,30 min. (H8)

LC-MS: R_t = 12,17 min., m/z = 618,4 (m+1)

Příklad 17

N-((1 R)-1 -(N-[( 1 R)-1 -Benzyl-2-oxo-2-(3-oxopyrazolidin-1 -y l)ethyl]-Nmethylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2enové kyseliny

L·/ °

H

N

Připraví se analogicky jako N-((1R)-1-(N-[(1R)-2-(N'-acetylhydrazino)-1-benzyl-2oxoethyl]-N-methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5méthylhex-2-enové kyseliny (příklad 1) za použití 3-pyrazolidinonu místo hydrazidu kyseliny octové terč. Butylester N-[( 1 R)-1 -benzyl-2-oxo-2-(3-oxopyrazolidin-1 -y I )ethy I]-Nmethylkarbamové kyseliny

H.

HPLC: R_t= 10,70 min. (H8)

LC-MS: R_t = 10,34 min., m/z = 348,4 (m+1) terc.Butylester N-((1 R)-1-(N-[(1 R)-1-benzyl-2-oxo-2-(3-oxopyrazolidin-1-yl)ethyl]-N methylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylkarbamové kyseliny

O

HPLC: R_t = 14,22 min. (H8)

LC-MS: R_t = 14,84 min., m/z = 559,4 (m+1) (2R)-N-[(1R)-1-Benzyl-2-oxo-2-(3-oxopyrazolidin-1-yl)ethyl]-N-methyl-2(methylamino)-3-(2-naftyl)propionamid

N-((1 R)-1 -(N-[( 1 R)-1 -Benzyl-2-oxo-2-(3-oxopyrazolidin-1 -y I )ethy l]-Nmethylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-

HPLC: R, = 29,21 min. (A1), R_t = 8,43 min. (H8) LC-MS: Rt = 9,24 min., m/z = 584,4 (m+1)

Příklad 18

N-Methyl-N-((1 R)-1 -{N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1 -((piperidin-1 yl)karbamoyl)ethyl]karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5-methylhex-2 enové kyseliny • ·

Připraví se analogicky jako N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5methylhex-2-enové kyseliny (příklad 4) za použití N-aminopiperidinu místo trimethylhydrazinu.

HPLC: R_t = 34,78 min. (A1), R_t = 33,74 min. (B1)

LC-MS: Rt = 9,81 min., m/z = 598,4 (m+1)

Příklad 19

N-Methyl-N-((1R)-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-((pyrrolidin-1yl)karbamoyl)ethyl]karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5-methylhex-2enové kyseliny

Připraví se analogicky jako N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-588 • · · · · · · · · · ··· ··· ·· ·· ·· ·· methylhex-2-enové kyseliny (příklad 4) za použití N-aminopyrrolidinu místo trimethylhydrazinu.

HPLC: R_t = 31,78 min. (A1), R, = 30,78 min. (B1)

LC-MS: Rt = 8,92 min., m/z = 584,4 (m+1)

Příklad 20

N-((1 R)-2-( Bifeny l-4-y I)-1 -{N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1 -((pyrrol idi n-1 yl)karbamoyl)ethyl]karbamoyl}-ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2enové kyseliny

Připraví se analogicky jako N-methyl-N-((1R)-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1((pyrrolidin-1-yl)karbamoyl)ethyl]karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5methylhex-2-enové kyseliny (příklad 19) za použití (2R)-N-terc.butoxykarbonylamino N-methyl-D-4,4'-bifenylalaninu místo 2(R)-(N-terc.butoxykarbonyl-N-methylamino)-3 (naft-2-yl)propionové kyseliny.

HPLC: R_t = 34,80 min. (A1), R_t = 34,04 min. (B1)

LC-MS: Rt = 9,46 min., m/z = 610,4 (m+1)

Příklad 21

2-Amino-N-(2-benzyloxy-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl}ethyl)-2-methylprópionamid

Připraví se analogicky jako N-methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5methylhex-2-enové kyseliny (příklad 4) za použití 3-benzyloxy-2terc.butoxykarbonylaminopropionové kyselinymísto 2(R)-(N-terc.butoxykarbonyl-Nmethylamino)-3-(nafty-2-yl)propionové kyseliny a N-terc.butyloxykarbonyl-aaminoisobutanové kyseliny místo (2E)-5-(terc.butyloxykarbonylamino)-5-methylhex2-enové kyseliny.

Izolují se dva diastereoizomery:

Sloučenina 1.

HPLC: R_t = 32,20 min. (A1), R_t = 33,78 min. (B1)

LC-MS: R_t = 9,64 min., m/z = 498,2 (m+1)

Sloučenina 2.

HPLC: R_t = 31,05 min. (A1), R_t = 32,56 min. (B1)

LC-MS: R_t = 9,42 min., m/z = 498,2 (m+1)

Příklad 22

2-Amino-N-(2-benzyloxy-1 -{N-[(1 R)-1 -(N', N '-dimethylhydrazinokarbonyl)-3fenylpropyl]-N-methylkarbamoyl}ethyl)-2-methylpropionamid • · ·· ·· ·· ·· • · · · · · · · · · · · • · · · · · ···· • · · · · · ··· ·· · • · ···· ···· ··· ··· ·· ·· ·· ··

Připraví se analogicky jako 2-amino-N-(2-benzyloxy-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1(N,N',N'-trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl}ethyl)-2-methylpropionamid (příklad 21) za použití Ν,Ν-dimethylhydrazinu (2R)-2-methylamino-4-fenylbutanové kyseliny místo Ν',Ν'-dimethylhydrazinu (2R)-2-methylamino-3-fenylpropionové kyseliny

Izolují se dva diastereoizomery:

Sloučenina 1.

HPLC: R_t = 28,44 min. (A1), R_t = 28,73 min. (B1)

LC-MS: Rt = 8,21 min., m/z = 498,4 (m+1)

Sloučenina 2.

HPLC: R_t = 30,50 min. (A1), R_t = 30,50 min. (B1)

LC-MS: R_t = 8,61 min., m/z = 498,4 (m+1)

Příklad 23

2-Amino-N-{2-benzyloxy-1-[N-((1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazinokarbonyl)-3fenylpropyl)karbamoyl]ethyl}-2-methylpropionamid • 4 ·» ·· · · · 4 a · · · · · » · · · · · • 4 4444 44·«

Připraví se analogicky jako 2-amino-N-(2-benzyloxy-1-{N-[(1R)-1-(N',N'dimethylhydrazinokarbonyl)-3-fenylpropyl]-N-methylkarbamoyl}ethyl)-2methylpropionamid (příklad 22) za použití Ν,Ν-dimethylhydrazinu (2R)-2-amino-4 fenylbutanové kyseliny místo Ν',Ν'-dimethylhydrazinu (2R)-2-methylamino-3fenylbutanové kyseliny

Izolují se dva diastereoizomery:

Sloučenina 1.

HPLC: R_t = 27,82 min. (A1), R_t = 27,78 min. (B1)

LC-MS: Rt = 8,41 min., m/z = 484,4 (m+1)

Sloučenina 2.

HPLC: Rt = 29,48 min. (A1), R_t = 29,58 min. (B1)

LC-MS: Rt = 8,67 min., m/z = 498,4 (m+1)

Příklad 24

2-Amino-N-[(1 R)-1 -[(1 R)-1 -(N ',N '-dimethylhydrazinokarbonyl)-3fenylpropylkarbamoyl]-2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-2-methylpropionamid

Připraví se analogicky jako 2-amino-N-{2-benzyloxy-1-[N-((1R)-1-(N',N'~ dimethylhydrazinokarbonyl)-3-fenylpropyl)karbamoyl]ethyl}-2-methylpropionamid (příklad 23) za použití (2R)-2-terc.butoxykarbonylamino-3-(1H-indol-3-yl)propionové kyseliny místo 3-benzyloxy-2-terc.butoxykarbonylaminopropionové kyseliny.

HPLC: R_t = 25,65 min. (A1), R_t = 27,71 min. (B1)

LC-MS: Rt = 8,11 min., m/z = 493,4 (m+1)

Příklad 25

2-Amino-N-[(1R)-1-{N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazinokarbonyl)-3-fenylpropyl]-Nmethylkarbamoyl}-2-(1 H-indol-3-yl)ethyl]-2-methylpropionamid

Připraví se analogicky jako 2-amino-N-[(1R)-1-[(1R)-1-(N',N'dimethylhydrazinokarbonyl)-3-fenylpropylkarbamoyl]-2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-2methylpropionamid (příklad 24) za použití Ν,Ν-dimethylhydrazinu (2R)-2methylamino-4-fenylbutanové kyseliny místo Ν',Ν'-dimethylhydrazinu (2R)-2-amino3-fenylbutanové kyseliny.

HPLC: R_t = 27,02 min. (A1), R_t = 27,31 min. (B1)

LC-MS: Rt = 8,07 min., m/z = 507,4 (m+1)

0«

7/ ta%>- ífí/ • 0 0 9 • 0 00

Claims

PATENTOVÉ

NÁROKY

1. Sloučenina obecného vzorce I

Vzorec I kde

R¹ a R² jsou nezávisle vodík nebo Ci-6-alkyl případně substituovaný jedním nebo více arylem nebo heteroarylem;

R^3aje vodík, Ci-6-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více arylem nebo heteroarylem, nebo aryl, nebo heteroaryl případně substituovaný jedním nebo více Ci-6-alkylem;

R⁴³ je Ci-6-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více arylem nebo heteroarylem nebo Ci-7-acyl;

R^5a je vodík, Ci-6-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více arylem nebo heteroarylem nebo aryl nebo heteroaryl, případně substituovaný jedním nebo více Ci-6-alkylem; nebo

R^3aa R⁴³ společně s atomy dusíku ke kterým jsou vázány mohou tvořit heterocyklický systém, případně substituovaný jedním nebo více Ci.₆-alkylem, halogenem, amino, hydroxylem, arylem nebo heteroarylem; nebo

R^3aa R^5a společně s atomy dusíku ke kterým jsou vázány mohou tvořit heterocyklický systém, případně substituovaný jedním nebo více Ci-6-alkylem, halogenem, amino, hydroxylem, arylem nebo heteroarylem; nebo

R⁴³ a R^5a společně s atomy dusíku ke kterým jsou vázány mohou tvořit heterocyklický systém, případně substituovaný jedním nebo více Ci-e-alkylem, halogenem, amino, hydroxylem, arylem nebo heteroarylem;

a a b jsou nezávisle 0, 1 nebo 2;

Gje vodík, -O-(CH₂)_k-R²⁷,

J je vodík, -O-(CH₂),-R³², kde R²⁷, R²⁸, R²⁹, R³⁰, R³¹, R³², R³³, R³⁴, R³⁵ a R³⁶ jsou nezávisle vodík, halogen, aryl, heteroaryl, Ci-e-alkyl nebo Ci-6-alkoxy; k a I jsou nezávisle 0, 1 nebo 2;

• 4 ·· 44 ·· 44

44 44 4444 4 4 4 4

4 4 4 4 * 4 4444

4 4 44 44 444 44 4

4 4 4444 4444

444 444 44 ·4 44 44

D je kde R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸ a R⁹ jsou nezávisle vodík nebo Ci.₆-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více halogenem, amino, hydroxylem, arylem nebo heteroarylem;

n, m a q jsou nezávisle 0, 1, 2 nebo 3;

p je 0 nebo 1;

M je -CR¹¹=CR^11a-, arylen, heteroarylen, -0-, -S- nebo valenční vazba;

R¹¹ a R^11a jsou nezávisle vodík nebo Ci-6-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více arylem nebo heteroarylem; nebo

D je

R⁷-NH-(CR⁸R⁹)p-(CH2)m-M-(CHR¹⁰)o-(CH2)nkde R⁷, R⁸, R⁹ a R¹⁰ jsou nezávisle vodík nebo Ci_6-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více halo, amino, hydroxy, arylem nebo heteroarylem nebo R⁷ a R⁸ nebo R⁷ a R⁹ nebo R⁸ a R⁹ mohou případně tvořit -(CH₂)j-U-(CH₂)j-, kde i a j jsou nezávisle 1 nebo 2 a U je -0-, -S- nebo valenční vazba; n a m jsou nezávisle 0, 1, 2 nebo 3;

o a p jsou nezávisle 0 nebo 1;

M je -CR¹¹=CR^11a-, arylen, heteroarylen, -0-, -S- nebo valenční vazba;

R¹¹ a R¹² jsou nezávisle vodík nebo Ci_6-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více arylem nebo heteroarylem; nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

:·· ·· ·· fc*

9 9 9 9 9 9 9 9 • 9 9 9 99 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 · • · 9 9 9 9 9 9 9 9

999 999 99 . 99 99 ··
2. Sloučenina podle nároku 1, kde R¹je Ci-6-alkyl.
3. Sloučenina podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde je R² vodík nebo C1-6alkyl.
4. Sloučenina podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde je R^3a vodík nebo C1-6alkyl.
5. Sloučenina podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde R⁴³ je Cve-alkyl, nebo Ci-7-acyl.
6. Sloučenina podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde R^5a je vodík Ci_₆-alkyl.
7. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1-3 nebo 6, kde R^3aa R⁴³ tvoří společně s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány heterocyklický systém.
8. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1-4, kde R^a R⁵³ tvoří společně s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány heterocyklický systém.
9. Sloučenina podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde a a b jsou nezávisle 1 nebo 2.
10. Sloučenina podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde Gje ¹¹
11. Sloučenina podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde J je kde R²⁷ a R²⁸ znamenají nezávisle vodík, halogen, aryl, heteroaryl, Cve-alkyl nebo

Ci-6-alkoxy.

kde R³², R³³, R³⁴, R³⁵ a R³⁶ jsou nezávisle vodík, halogen, aryl, heteroaryl, Ci-6-alkyl nebo Ci-6-alkoxy.
12. Sloučenina podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde D je

R⁷-NH-(CR⁸R⁹)p-(CH2)m-M-(CHR¹⁰)o-(CH2)nkde R⁷, R⁸, R⁹ a R¹⁰ jsou nezávisle vodík nebo Ci_6-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více halo, amino, hydroxy, arylem nebo heteroarylem; n a m jsou nezávisle 0, 1,2 nebo 3;

o a p jsou nezávisle 0 nebo 1;

M je -CR¹¹=CR^11a-, arylen, -O- nebo -S-;

R¹¹ a R^11a jsou nezávisle vodík nebo Ci-6-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více arylem nebo heteroarylem.
13. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1-11, kde D je

R⁷-NH-(CR⁸R⁹)p-(CH2)m-M-(CHR¹⁰)o-(CH₂)_nkde R⁷, R⁸, R⁹ a R¹⁰ jsou nezávisle vodík nebo Ci-6-alkyl, případně substituovaný jedním nebo více halo, amino, hydroxy, arylem nebo heteroarylem; n a m jsou nezávisle 0, 1, 2 nebo 3;

o a p jsou nezávisle 0 nebo 1;

M je valenční vazba.

• · ·· : í ft ft • · ft · »

» • ft «

.: .:

• * •

• · ··· ·>· ft <» <

• ·

J ft ft • ft
14. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 12-13, kde R⁸ a R⁹ tvoří -(CH₂)i-U-(CH2)j, kde i a j jsou nezávisle 1 nebo 2 a U je -0-, -S- nebo valenční vazba.
15. Sloučenina podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kterou je

N-((1R)-1-{N-[(1R)-2-(N'-Acetylhydrazino)-1-benzyl-2-oxoethyl]-N-methylkarbamoyl}2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny

N-((1 R)-1 -{N-[(1 R)-2-(N'-Acetyl-N-methylhydrazino)-1 -benzyl-2-oxoethyl]-Nmethylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-

N-((1 R)-1 -{N-[( 1 R)-2-(N-Acetyl-N'-methylhydrazino)-1 -benzyl-2-oxoethyl]-Nmethylkarbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2enové kyseliny

CH h₂n

CH,

O

9 9 9

9 9 9

9 9 9

9 9 * »* • · *· ·· ··

99 99 9 9 9 · 9

9 9 9 9 99 9

9 9 * · » · Í*Í

999 999 99 ·9 99

N-methyl-N-((1 R)-1 -{N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1 -(N,N ',N trimethylhydrazinokarbonyl)ethy!]karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5methylhex-2-enové kyseliny

3-Aminomethyl-N-methyl-N-((1R)-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)benzamid

N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazinokarbonyl)-2-fenylethyl]-Nmethylkarbamoyl-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny

00 0

100

000 000

00 00 0 0 0 0

0 ·00

0 0 0 0 00 99

00 «0 • 0 0 0 é 0 · ♦

0 0 0 0

0 0 0 0

00 00

N-((1R)-1-(N-[(1R)-1-(N',N'-Dimethylhydrazinokarbonyl)-2-(2-thienyl)ethyl]-Nmethylkarbamoyl-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny

CH. i ³

CH,

N-((1 R)-1 -(N-[(1 R)-1 -(Ν', N '-Dimethylhydrazinokarbonyl)-2-fenylethyl]-Nmethylkarbamoyl-2-(2-naftyl)ethyl)-N-methyl-3-(N-methylaminomethyl)benzamid

N-((1 R)-2-(BifenyI-4-yI)-1 -(N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1 -(Ν, Ν', N trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5methylhex-2-enové kyseliny

99 99

99 9

101

999 999 »· 9· • >9 · • 9 99 • 9 9 9

99 99 • 99 • · «

9 9 9

N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)annid (2Ε)-4-(1-amino cyklobutyl)but-2-enové kyseliny

N-((1 R)-2-(Bifenyl-4-yl)-1 -(N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1 -((piperid i n-1 yl)karbamoyl)ethyl]karbamoyl)ethyl)-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2enové kyseliny

0 0 « • 00

102

N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-2-(2-thienyl)-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5methylhex-2-enové kyseliny

N-((1 R)-2-(1 H-lndol-3-yl)-1-(N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1 -(Ν,Ν',Ν'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5-methylhex-2 enové kyseliny

2-Amino-N-((1 R)-2-(1 H-indol-3-yI)-1 -(N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1 -(Ν, ΝN 'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyll)ethyl)-2-methylpropionamid

103 ··· ··· ·* ·♦ *· • *· · · ♦ · · • · ·« · · t * • ·· · ·» 9 9 9 • 9 9 9 9 9 9 9

99 99 99 99

N-Methy Ι-Ν-(( 1 R)-1 -(N-methyl-N-[(1 R)-1 -(N-methyl-N-(piperidin-1 -yl)karbamoyl)-2fenylethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové

N-Methyl-N-((1R)-1-(N-methyl-N-[(1R)-1-(N-methyl-N-(piperidin-1-yl)karbamoyl)-2-(2 thienyl)ethyl]karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny

N-((1 R)-1 -(N-[( 1 R)-1 -Benzyl-2-oxo-2-(3-oxopyrazolidin-1 -yl )ethy l]-Nmethylkarbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl-N-methylannid (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny

CH, ^H’^N CH

CH, O

O

O

104

• • 0 0 0 00 00 • 0 00 0 0 0« * 0 • • • 0 * 0 0 0 0 0 0 0 0 000 000 • 0 00 0 0 • 0 0 • 0 0 0 0 0 0

N-Methyl-N-((1 R)-1 -{N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1 -((piperid in-1 yl)karbamoyl)ethyl]karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5-methylhex-2 enové kyseliny

N-Methyl-N-((1 R)-1 -{N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1 -((pyrrolidin-1 yl)karbamoyl)ethyl]karbamoyl}-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E)-5-amino-5-methylhex-2 enové kyseliny

N-((1 R)-2-(Bifenyl-4-yl)-1 -{N-methyl-N-[(1 R)-2-fenyl-1 -((pyrrolidin-1 yl)karbamoyl)ethyl]karbamoyl}ethyl-N-methylamid (2E)-5-amino-5-methylhex-2enové kyseliny

99 99 * 9 » 9

9 9 99

99 «9

9 9· ·

9 9 · 9 • 9 9 9

9 9 9 9

99 99

105

2-Amino-N-(2-benzyloxy-1-{N-methyl-N-[(1R)-2-fenyl-1-(N,N',N'trimethylhydrazinokarbonyl)ethyl]karbamoyl}ethyl-2-methylpropionamid

2-Amino-N-(2-benzyloxy-1-{N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazinokarbonyl)-3fenylpropyl]-N-methylkarbamoyl}ethyl-2-methylpropionamid

2-Amino-N-{2-benzyloxy-1-[N-((1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazinokarbonyl)-3fenylpropyl)karbamoyl]ethyl}-2-methylpropionamid

106

4 4 44 • 4 44 44 4· 4 4 4 • « 4 4 4 • 4 • 4 4 • 4 4 4 * 4 » • « • 4 4 tr • 4 4 4 • • • 4» 4·· »4 • 4 44 4 4

2-Amino-N-[( 1 R)-1 -[(1 R)-1 -(Ν', N '-dimethylhydrazinokarbonyl)-3fenylpropylkarbamoyl]-2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-2-methylpropionamid

2-Amino-N-[(1R)-1-{N-[(1R)-1-(N',N'-dimethylhydrazinokarbonyI)-3-fenylpropyl]-Nmethylkarbamoyl}-2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-2-methylpropionamid
16. Farmaceutický prostředek, vyznačuj ícíse tím, že obsahuje jako aktivní složku sloučeninu podle kteréhokoliv z předchozích nároků nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl společně s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.
17. Způsob stimulace uvolnění růstového hormonu z hypofýzy savců φφ vyznačující se t í m, že způsob zahrnuje podání savci účinného množství sloučeniny podle kteréhokoliv z předchozích nároků, které se týkají sloučeniny podle vynálezu, nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo prostředku podle kteréhokoliv z předchozích nároků týkajících se prostředku.
18. Použití sloučeniny podle kteréhokoliv z předchozích nároků, které se týkají sloučeniny podle vynálezu nebo její farmaceuticky přijatelné soli pro přípravu léčiva pro stimulaci uvolnění růstového hormonu z hypofýzy savců.