CZ1199A3 - Způsob vyhodnocování rizika kardiovaskulárních chorob a jiných poruch a prostředek založený na fytosterolu, vhodný pro prevenci a léčení kardiovaskulárních chorob a jiných poruch - Google Patents

Abstract

Způsob stanovení potměni koncentrace kampesterolu ke koncentraci beta-sitosteroluv plazmě u živočichů, zahrnuje kroky odebráni vzorku sera, stanovení koncentrace kairpesterolu v torrto vzorku,stanovení koncentrace beta-sitosterolu vtorto , vzorku, vydělení koncentrace kampesterolu koncentrací betasitosterolu, čímž vznikne poměr kampesterol/beta-sitosttaol, a ‘ porovnání tohoto poměru s normální kontrolní hodnotou Zlepšení > spočívá v defirwvónípcm&ukanpesterol/beta-sitostaoljako indikátoru a porovnání tohoto poměru s ohroženímŽivočichů, kteří mají zvýšené riziko kardiovaskulárních ajimpodobných chorob.

Description

Způsob vyhodnocování rizika kardiovaskulárních chorob a jiných poruch a prostředek založeny* fytosterolů, vhodný pro prevenci a léčení kardiovaskulárních chorob a jiných poruch

Oblast techniky

Tento vynález se týká fyziologické homeostázy cholesterolu za použití fytosterolů a zvláště použiti fytosterolu jako nezávislých markérů nebo indikátorů kardiovaskulární choroby a jiných příbuzných poruch. Vynález se rovněž zabývá nápravou nedostatků indikovaných výsledky těchto markérů za použití prostředků na bázi fytosterolů.

Dosavadní stav techniky

Přestože pokrok ve vědě a technologii pomáhá zlepšit kvalitu a délku—Hdského života, není prevence atheroslderozy, základní příčiny kardiovaskulární choroby (CVD), dostatečně vyřešena a zůstává hlavním důvodem nemohoucnosti a smrti u lidí středního věku. Kardiovaskulární choroba je jedním z hlavních důvodů spirálovitě rostoucích nákladů na lékařskou péči, které se v Kanadě odhadují na 17 milionů dolarů, a zůstává nejčastějším důvodem úmrtí jak u mužů, tak u žen. Každý rok je jen ve Spojených státech amerických provedeno více než 1 000 000 koronárních angiografií, přibližně 400 000 angioplastik a 400 000 bypassů věnčitých tepen. Podle statistiky za rok 1992 ve státě Washington dosahuje počet úmrtí na CVD 40 % všech úmrtí a CVD je mírné častější příčinou smrti u mužů, než u žen. Do věku 60 let zažije v USA koronární » ··· příhodu jeden muž z pěti, ale jen jedna žena ze sedmnácti. Ve věku nad 60 let je nemoc srdečních věnčitých tepen příčinou smrti u jednoho ze čtyř u mužů i u žen.

Výzkumy naznačují, že hlavní roli při atheroskleroze hraje cholesterol vytvářející atherosklerotické plaky v krevním řečišti, které v krajním případě přeruší dodávku krve do srdečního svalu nebo případně do mozku či končetin, což závisí na umístění piaku v arteriálním větvení. (Law M.R., Wald N.J., Wu T. Hackshaw A., Bailey A.: Systemic uderestimation of association between sérum cholesterol concentration and ischemic heart disease in observational studies: Data from BUPA Study, Br. Med. J., 1994, 308: 363 - 366), (Law M.R., Wald N.J., Thompson S. G.: By how much and how quickly does reduction in sérum cholesterol concentration lower risk of ischemic heart disease?, Br. Med. J., 1994, 308: 367 - 373). Nedávné přehledy ukazují, že snížení celkové koncentrace sérového cholesterolu u osob o 1 % vede ke snížení nebezpečí nemoci věnčitých tepen o 2 až 3 %. (La Rosa J.C., Hunntnghake D., Bush D., et al.: The cholesterol facts: a summary of the evidence realting dietary fats. sérum cholesterol and coronary heart disease: joint statement by the American Heart Association and the National Heart, Lung and Blood Institute. Circulation 1990, 812, 1721 - 33). Statisticky může 10% snížení průměru sérového cholesterolu (tzn. z 6,0 mmol/l na 5,4 mmol/l) vést k prevenci 100 000 úmrtí ročně jen v USA. (Havel R.J., Rapaport E.: Drug Therapy: Management of Primary Hyperlipidemia. Nex England Journal of Medicine, 1995, 332, 1491 - 1498).

Steroly jsou důležité cyklické triterpenoidy, které zajišťují v buňkách mnoho kriticky významných funkcí. Fytosteroly, jako jsou

9999 ·« · · ··

9« 9f*9 • 999 9 9 · 9

9 99·· * 99· 9··

9 9 9 9

9 9· ·9 kampesterol, stigmasterol a beta-sitosterol u rostlin, ergosterol u hub a cholesterol u živočichů, jsou primárními součástmi buněčných a sub-buněčných membrán v příslušných typech buněk. U lidí je zdrojem fytosterolů zelenina a rostlinné oleje. Denní dávka fytosterolů v běžné západní stravě je přibližně 250 miligramů na rozdíl od vegetariánské stravy, kde může být tato dávka až dvojnásobná.

Ačkoliv není u člověka známa jejich nutriční dávka, fytosterolům byla v minulosti vždy věnována velká pozornost pro jejich pravděpodobné protirakovinné účinky a jejich schopnost snižovat koncentraci cholesterolů při podávání různým druhům savců, včetně člověka. Fytosteroly pomáhají při omezování absorbci cholesterolu {Gould R.G., Jones R. J., LeRoyu G. V., Wissler R. W., Taylor C. B.: AbsorbabiIity of Beta-sitosterol in humans: Metabolism, (August) 1969: 18 (8): 652 - 662), zvyšují vyměšování biliárního cholesterolu (Tabata T., Tanaka M., Lio T., Hypocholesterolemic activity of phytosterol. II (překlad autorů): Yakugaku Zasshi, 1980: 100(5)t 546-552), a uvolňují cholesterol z — atherosklerotických plaků (Heptinstall R.H., Parter K. AS.: Effect beta-sitosterolu on cholesterol-induced atheroma in rabbits with high blood pressure: Br. J. Experimental Pathology,1957, 38. 4954).

Ačkoliv mnoho mechanismů zůstává neznámo, vztah mezi cholesterolem a fytosteroly je zjevný. Není proto překvapující, že fytosteroly mají chemickou strukturu velmi podobnou cholesterolu. Hlavními fytosteroly jsou beta-sitosterol, kampesterol a stigmasterol. Ostatní fytosteroly zahrnují stigmastanol (betasitostanol), sitostanol, desmosterol, chalinasterol, poriferasterol, kliosterol a brasikasterol.

Jak naznačuji data, jedním z hlavních rizikových faktorů atherosklerozy nebo CVD je koncentrace krevního cholesterolu. Tento rizikový faktor nemusí být považován za rozhodující. Bylo zjištěno, že lidé, u nichž je koncentrace sérového cholesterolu na normální přijatelné úrovni, jsou stále ohroženi rozvojem atherosklerozy a CVD. Z tohoto důvodu existuje potřeba hodnověrnějšího rizikového faktoru nebo indikátoru.

Cílem tohoto vynálezu je odstranit nebo zmírnit shora uvedené nevýhody a omezení týkající se vyhodnocení rizika CVD, dále léčení a monitorování stravy u jedinců s rizikem CVD.

Podstata vynálezu

Tento vynález poskytuje soubor proměnných pro vyhodnoceni rizika kardiovaskulárních chorob (CVD), lipidových poruch, poruch— štítné žlázy a diabetů u živočichů, přičemž tento soubor je nezávislý na koncentraci cholesterolu u živočichů. Dále vynález popisuje fytosterolový prostředek vhodný pro úpravu fyziologické nerovnováhy v cholesterolové homeostáze, která je indikována hodnotami zmíněných proměnných.

Vynález se zvláště týká způsobu stanovení koncentrace celkového kampesterolu v plasmě a stanovení poměru koncentrace kampesterolu ku koncentraci beta-sitosterolu v séru, který zahrnuje odebrání vzorku séra, stanovení koncentrace kampesterolu ve vzorku, stanovení koncentrace beta-sitosterolu, vyděleni hodnoty ♦ · · · · «·«· 9 · · · · ·· · • · · · · ·φ<· * ♦·· ··· « · · · · * ·« · * t · »· * * · ·* pro kampesterol hodnotou pro beta-sitosterol za účelem získání poměru kampesterol/beta-sitosterol a porovnání koncentrace kampesterolu a poměru kampesterol/beta-sitosterol s normální koncentrací, při kterém se jako indikátoru nebo markéru stupně ohrožení živočichů, kteří mají zvýšené riziko kardiovaskulárních a podobných chorob, volí podle vynálezu koncentrace kampesterolu a poměr kampesterol/beta-sitosterol a stanovuje se závislost uvedené koncentrace a uvedeného poměru k ohrožení živočichů.

Vynález dále definuje způsoby vyhodnocování rizika CVD, poruch lipidů a štítné žlázy a diabetů u zvířat, které zahrnují stanovení poměru kampesterolu k beta-sitosterolu, určení úrovně celkového sérového fytosterolu u zvířat, určení úrovně celkového sérového cholesterolu u zvířat a porovnání poměru a dvou takto získaných hodnot odpovídajícím hodnotám a poměru u kontrolních živočichů.

Vynález dále řeší způsob zvýšení inhíbičního vlivu fytosterolů na absorbci cholesterolu v enterocytech u živočichů, který zahrnuje podávání prostředku obsahujícího jeden nebo více fytosterolů živočichům, přičemž prostředek inhibuje především absorbci cholesterolu a beta-sitosterolu.

Vynález, široce definovaný shora, má dva podstatné znaky. První zahrnuje různé markéry rizika CVD, které společně představují proměnné. V druhém je zahrnuto zvyšování modulačního vlivu fytosterolů na koncentraci plasmového cholesterolu u živočichů, tento vliv je výhodně využit pro úpravu nerovnováhy cholesterolové homeostáze za použití prostředků s obsahem fytosterolů.

• 4··

Klíčovým bodem prvního znaku je, že proměnné a markéry užité podle tohoto vynálezu mohou být nahlíženy jako nezávislé na koncentraci cholesterolů u živočichů. To je v příkrém kontrastu se současným stavem techniky týkajícím se vyhodnocování CVD. Podle tohoto vynálezu podává poměr sérového kampesterolu/beta-sitosterolu u jedince samostatně nebo v kombinaci s jedním nebo všemi body z následujícího výčtu

1) celková koncentrace sérového fytosterolu

2) poměr celkového fytosterol/cholesterol

3) poměr kampesterol/Apo-protein B cholesterol významnou informaci o zdraví jedince. Jak bude dále vysvětleno, mohou být tyto indikátory nebo markéry užity v personální medicíně pro vyhodnocení rizika CVD, lipidových poruch, poruch štítné žlázy a diabetů. Obecně bylo zjištěno, že existuje kladná korelace mezi koncentrací sérového kampesterolu (a poměr kampesterol/betasitosterol je 1,0 nebo vyšší) a příznivým profilem cholesterolu (celkové snížení a vysoká měrná hmotnost lipoproteinového cholesterolu) a existuje kladná korelace mezi úrovní sérového beta-sitosterolu (a poměr je pod 1,0) a špatným profilem cholesterolu (celkové zvýšení a nízká měrná hmotnost lipoproteinového cholesterolu).

Stejně významné je, že markéry podle vynálezu mohou být použity pro zhodnocení vhodnosti speciální diety pro jedince, například stravy s nízkým obsahem cholesterolu nebo se zvýšeným obsahem fytosterolů.

• · · · · · · · · * · · • a * · · ·«·· · *·· ··· • a a · » · · aaaata a a · · ·*

S výjimkou případného vyhodnocení poměru celkového fytosterolu/cholesterolu je každý zde popsaný indikátor nezávislý na úrovni sérového cholesterolu, který, jak je popsáno shora, je nehodnověrný rizikový faktor CVD. Na základě těchto zjištění podle vynálezu, zvláště využití poměru sérového kampesterolu/beta-sitosterolu, může být odhalena predispozice pro CVD nebo jiné poruchy a jedinec může být odpovídajícím způsobem léčen bez ohledu na to, že u něj byla zjištěna normální nebo přijatelná koncentrace sérového cholesterolu.

Popis vyobrazení

Vynález je ilustrován prostřednictvím následujících vyobrazení, které však nejsou zamýšlena jako limitující:

Obr. 1 je graf, kde je ukázána koncentrace plazmových lipidů u celkového cholesterolu, lipoproteinovélio_cholesterolu s vysokou měrnou hmotností, triglyceridů a lipoproteinového cholesterolu s nízkou měrnou hmotností u zdravých jedinců ženského a mužského pohlaví, kteří konzumují prostředek podle vynálezu nebo má jinou srovnatelnou dietu,

Obr. 2 je graf, kde je ukázána koncentrace plazmových lipidů u celkového cholesterolu, lipoproteinového cholesterolu s vysokou měrnou hmotností, triglyceridů a lipoproteinového cholesterolu s nízkou měrnou hmotností u zdravých jedinců mužského pohlaví, kteří konzumují prostředek podle vynálezu nebo má srovnatelnou dietu, «

♦ ·»· ·« · 9 9 9 ··*« • «99 · 9 9 9 · · · · « 9 9 9 9 99«9 9 999 «99 • « 9 9 9 · · «99 «99 99 · ·· ·*

Obr. 3 je graf, kde je ukázána koncentrace plazmových lipidů u celkového cholesterolu, lipoproteinového cholesterolu s vysokou měrnou hmotností, triglyceridů a lipoproteinového cholesterolu s nízkou měrnou hmotností u zdravých jedinců ženského pohlaví, kteří konzumují prostředek podle vynálezu nebo jinou srovnatelnou dietu,

Obr. 4 je graf, kde je ukázáno snížení koncentrace plazmových lipidů u celkového cholesterolu, lipoproteinového cholesterolu s vysokou měrnou hmotností, triglyceridů a lipoproteinového cholesterolu s nízkou měrnou hmotností u zdravých jedinců ženského a mužského pohlaví, kteří konzumují prostředek podle vynálezu nebo jinou srovnatelnou dietu,

Obr. 5 je graf, kde je ukázáno snížení koncentrace plazmových lipidů u celkového cholesterolu, lipoproteinového cholesterolu s vysokou měrnou hmotností, triglyceridů a lipoproteinového cholesterolu s nízkou měrnou hmotností u zdravých jedinců mužského pohlaví, kteří konzumují prostředek podle vynálezu nebo jinou srovnatelnou dietu,

Obr. 6 je graf, kde je ukázáno snížení koncentrace plazmových lipidů u celkového cholesterolu, lipoproteinového cholesterolu s vysokou měrnou hmotností, triglyceridů a lipoproteinového cholesterolu s nízkou měrnou hmotností u zdravých jedinců ženského pohlaví, kteří konzumují prostředek podle vynálezu nebo jinou srovnatelnou dietu, • ·««> ·· · ·» » · · · • ·«· · ·· · • t · ♦ 9 999

9 9 9 9

999 999 99 9

99

9 9 ·

9 9 9

9 99 99 9

9

99

Obr. 7 je graf, kde je ukázána koncentrace fytosterolu v krevním řečišti při použití různých skupin léčiv, včetně skupiny zahrnující podávání prostředku podle vynálezu, dále graf zvláště ukazuje relativní koncentrace kampesterolu, sitosterolu a sitostanolu,

Obr. 8 je graf reprezentující rozdílné hladiny enzymové aktivity LCAT u různých testovaných skupin,

Obr. 9 je graf reprezentující hodnoty F.E.R. pro každou ze skupin léčiv,

Obr. 10 je graf reprezentující hodnoty M.E.R. pro každou ze skupin léčiv,

Obr. 11 je schematické vyobrazení mechanismu přenosu u enterocytů, zde popsaného

Obr. 12 je schematické vyobrazení proměnných podle vynálezu po jednotlivých krocích

Obr. 13 je schematické vyobrazení vlivu estrogenu a androgenu na přenos cholesterolu.

Výhodná provedeni podle vynálezu

Tento vynález se týká analýzy poměru sérového ·· · • « · · · · * • ··· · · · · * · · · • a a a ···· · ··» a·· • a · a · · »aa a·· ·· * ·· ·· kampesterolu/beta-sitosterolu u jedince samostatně nebo v kombinaci s jedním nebo všemi body z následujícího výčtu

1) celková koncentrace sérového fytosterolu

2) poměr celkového fytosterol/cholesterol

3) poměr kamposterol/Apo-protein B cholesterol

Abychom porozuměli podstatě těchto poměrů a koncentrací a ocenili hodnotu informace, kterou poskytují lékařskému personálu, je nezbytné osvětlit některé aspekty vzájemného ovlivňování cholesterolových a fytosterolových transportních mechanismů, absorbce, vylučování a distribuce v tkáních.

Hlavními orgány, které udržuji homeostázu cholesterolu a kde probíhá absorbce cholesterolu z potravy, syntéza a vylučování cholesterolu, jsou zažívací trakt a játra.

Absorbce cholesterolu z potravy začíná u absorbce lipidů ve střevech. Cholesterol a mastné kyseliny jsou zde esterifikovány v mukosálních buňkách za vzniku nepolárních produktů a spojují se s apoproteiny za vzniku chylomikronů. Chylomikrony vstupují do centrálního oběhu prostřednictvím lymfatického systému a jsou hydrolyzovány plazmatickou lipoproteinovou lipázou na volné mastné kyseliny a monoglyceridy. Cholesterol z potravy je v chylomikronech přenášen prakticky všechen do jater jako součást zbytků chylomikronů, které jsou pak prostřednictvím cholesterol-7alfa-hydrolylázy v hepatocytech přeměněny na žlučové kyseliny nebo vyloučeny jako nemetabolizované. Na druhé straně fytosteroly nejsou endogenně synstetizovány v těle, takže jsou získávány pouze z potravy (pocházejí z rostlin a jedlých olejů) a • ·♦·· ·· · ·· ·· • · · · e · · · · «··· · ··· · ·· · • » · v »··♦ · ··· ··· • · · · · 4 * ·« ··· ·· · ·· ·· vstupují do těla absorbcí ve střevech. U savců je ve střevech přednostně absorbován cholesterol před fytosterolem. U zdravých lidí se absorbuje obvykle méně než 5 % fytosterolů, obsažených v potravě, což je znatelně méně, než u cholesterolů, kterých se absorbuje více než 40 % (G. Salen et al., J. Lipid Res. 30, 13191330, 1989, C. Sylven, Biochim. Biophys.Acta, 203, 365-375, 1970). Z tohoto důvodu více než 95 % fytosterolů z potravy vstupuje do tračníku a v lidském séru se za normálních podmínek nachází jen 0,3 až 1,7 mg/dl fytosterolů, zatímco denní příjem potravou dosahuje 160 až 360 mg/den. Koncentrace v plasmě se však mohou zvýšit až na dvojnásobek úpravou stravy. (G. Salen et al., J. Lipid Res. 30, 1319-1330, 1989, C. Sylven, Biochim. Biophys. Acta, 203, 365-375, 1970, G. Salen et al, J. Clin. Invest, 49, 952-967, 1970). Shrnuto: koncentrace fytosterolů v séru je nízká vlivem špatné absorbce fytosterolů a jejich rychlého vylučování ve střevech. Přesný mechanismus, který je odpovědný za pomalou absorbcí fytosterolů ve střevech, není znám. Je však dobře známo a dokumentováno, že fytosteroly pomáhají při omezování absorbce —cholesterolu (Gould R.G., Jones R. J.,-LeRoyu G. V., Wissler R. W., Taylor C. B.: Absorbability of Beta-sitosterol in humans: Metabolism, (August) 1969: 18 (8): 652 - 662), zvyšují vyměšování biliárního cholesterolu (Tabata T., Tanaka M., Lio T., Hypocholesterolemic activity of phytosterol. II (překlad autorů): Yakugaku Zasshi, 1980: 100(5): 546-552), uvolňují cholesterol z atherosklerotických piaků (Heptinstall R.H., Parter K. AS.: Effect beta-sitosterolu on cholesterol-induced atheroma in rabbits with high blood pressure: Br. J. Experimental Pathology, 1957, 38. 4954) a pomáhají při prevenci steanosy jater (Jones P.J.H., Ling W.H.: Enhanced efficacy of sitostanoí-containing versus sitostanolfree phytosterol mixtures in altering lipoprotein cholesterol levels and synthesis in rats: Atherosclerosis. Leden 1996 (přijato k

99*9 · ·* ·· «9 9 999 999*

99· · 999 * · 9 ·

9 9 9 9 9999 9 999 999

9 9 9 9 9 9 «99 999 99 9 99 9* publikování). Celková koncentrace cholesterolu v séru je výsledkem protichůdných metabolických procesů, které zahrnují syntézu, absorbci, vylučování a distribuci v tkáních, doprovázených některými omezujícími vlivy při absorbci cholesterolu a fytosterolů.

Zde popsaný externí účinek” se vztahuje k úloze fytosterolů při inhibici absorbce cholesterolu enterocyty. Jeden z aspektů mechanismu popsaného ve vynálezu se týká existence nezávislého externího účinku, podle něhož jednotlivé fytosteroly soutěží mezi sebou navzájem a cholesterolem o přepravu enterocyty zevnitř střeva do lymfy. Jinými slovy, každý rostlinný sterol má jiný vliv na absorbci cholesterolu. Při absorbci cholesterolu ve střevech je nutno brát v úvahu několik aspektů, zvláště jsou to biologická dostupnost, membránový transport a přenos enterocyty uvnitř buněk. Podle tohoto vynálezu bylo zjištěno, že inhibice přenosu cholesterolů enterocyty prostřednictvím fytosterolů je založena na předpokladu, že přenos cholesterolu buňkami zevnitř střeva do lymfy nebo plasmy vyžaduje opakované seskupování na cholesterol bohatých komplexů s Apoproteinem B ve formě mikročásteček uvnitř buněk, jak je ukázáno na obr. 11. V enterocytech fytosteroly soutěží s cholesterolem o Apoprotein B, který dává vznik více lipofilním, nepolárním komplexům Apoproteinu B, což je příčinou inhibice přenosu a snížení obsahu cholesterolu v lymfě. V závislosti na typu fytosterolů a rozpustnosti, jak je ukázáno dále, může být inhibice přenosu přechodná a reverzibilní (kampesterol, beta-sitosterol) nebo trvalá a nevratná (sitostanol). Předpokládaný vliv fytosterolů na přenos lipoproteinů enterocyty je ukázán v obr.

11.

·· ·»«« «a « • · · · · * · · · ··· · · · · • · · · ···♦ · ··« ·♦· · » a · · ««· «« a ·· ··

Molekulární struktury fytosterolů jsou obecně podobné cholesterolu a fytosterol může významně zastoupit absorbci cholesterolu, což závisí na jeho složení a příznivosti poměru fytosteroly/cholesterol v potravě. V některých případech má koncentrace jak fytosterolů tak cholesterolu v séru nízkou hodnotu v důsledku snížení nebo úplné absence syntézy Apoproteinu B (diabetes typu II, abetalipoproteinemie a hypothyroidismus). Změny v selektivitě přenosu enterocyty pravděpodobně vlivem mutace Apo-B, mohou vést k vysokým koncentracím fytosterolů a cholesterolu v séru se snižováním absorbce kampesterolu ve střevě, což způsobuje snížení poměru kampesterol/beta-sitosterol (primární dědičná hypercholesterolemie a sitosterolemie).

Soutěž mezi jednotlivými fytosteroly, jako jsou kampesterol, beta-sitosterol a sitostanol, a cholesterolem o absorbci ve střevech je významná tím, že je definována závislost mezi vysokou koncentrací cholesterolu v séru a rizikem onemocnění a úmrtí na kardiovaskulární choroby. Absorbce cholesterolu ve střevech se pohybuje mezi 35—až 57 % a pro konkrétní steroly jscnr hodnoty absorbce následující: kampestanol - 12,5 %, kampesterol - 9,6 %, beta-sitosterol - 4,2 % a 0 % pro sitostanol. Bylo zjištěno, že přenos enterocyty závisí na Apoproteinu-B, který má vysokou afinitu k cholesterolu, ale není specifický. Na základě toho může při absorbci u jednotlivce fytosterol významně zastoupit cholesterol, což závisí na konkrétním složení fytosterolů (externí účinek). Tento efekt je závislý na selektivitě a specifičnosti přenosu cholesterolu enterocyty a mění se podle genetických a hormonálních vlivů. Například pacienti s abetalipoproteinemií neabsorbují cholesterol, mají nízkou koncentraci cholesterolu v plazmě a nedostanou atherosklerozu. Na druhé straně při • 4 * • «444 • •4 4 • ··· 9 ·4· • ·4 • 44 444 44

44

I « « 4 > · · 4 · · 4 4 sitosterolemiii, vzácné genetické poruše, vede vysoká koncentrace fytosterolů a Apoproteinu-B v plazmě k předčasné atheroskleroze.

Víme-li, že mechanismus absorbce enterocyty je závislý na přenosu Apoproteinu-B a že fytosteroly soutěží mezi sebou a cholesterolem o Apoprotein-B, je možné připravit přesný prostředek s obsahem fytosterolů pro podávání jednotlivci s cílem dosáhnout žádané soutěže v přenosu a ovlivňovat tak absorbci cholesterolu. Fyziologický prostředek podle vynálezu tím, že modifikuje poměr kampesterolu/beta-sitosterofu z potravy, upravuje poruchy metabolismu lipidů a kompenzuje vysoce rizikovou stravu.

Ačkoliv sitostanol vykazuje velký blokovací vliv, není fyziologicky výhodné podávat čistý vysoce hydrofobní sitostanol, neboť pro tento konkrétní fytosterol je vazba přenosu enterocyty trvalá a nevratná. Naproti tomu jak kampesterol (který je hydrofilní), tak beta-sitosterol (který je více neutrální) se k Apoproteinu-B váží reverzibilně a konkurují v přenosu enterocyty, jak již bylo popsáno.

Navíc bylo zjištěno, že stanovení koncentrace kampesterolu a Apoproteinu-B v séru poskytuje významné klinické informace o fungování přenosu enterocyty u jedince.

Zjišťování koncentrace Apoproteinu-B ve shodě s tímto vynálezem pomáhá při diagnóze lipidových chorob a chorob štítné žlázy, stejné jako diabetů. Například v důsledku snížení syntézy Apoporteinu-B v buňkách nebo její úplně nepřítomnosti, jsou koncentrace fytosterolů, i cholesterolu v séru nízké a tato • ···« «· * ·· ·· ·· · · · · · · · • ··· · · · * · * · · • a · » · ···· · ··· ·· • a · a a a a aa »·* *a · *· <· skutečnost indikuje diabetes typu II, abetalipidoproteinemii nebo hypothyroidismus. Jakékoliv změny v selektivitě přenosu, jejichž předpokládanou příčinou jsou mutace Apoproteinu-B, mohou vést k vysokým koncentracím fytosterolů a cholesterolu v séru, s klesající absorbcí kampesterolu ve střevě v důsledku snížení poměru kampesterol/beta-sitosterol. To může indikovat primární dědičnou hypocholestorolemii nebo sitosterolemii.

Jak je zde dále popsáno, interní účinek zahrnuje vliv fytosterolů na syntézu cholesterolu a žlučových kyselin, vyměšování enterocytů a biliárního cholesterolu, vyměšování žlučových kyselin, změny v kinetice enzymů a přenos cholesterolu mezi různými oblastmi:

(i) primární oblasti:

(a) játra, enterocyty (b) tělesný tuk (lípocyty), {metabolická přeměna __ cholesterolu, ukládání energie) — (ii) sekundární oblasti:

(a) tělesné orgány, tkáně, buňky (aktivní příjemci cholesterolu) (iíi) terciární oblasti:

(a) endotheliálnl buňky, monocyty, atherosklerotický plak (přebytek, pasivní příjemci cholesterolu)

Stejně jako při přenosu enterocyty, soutěží v jaterních buňkách fytosteroly s cholesterolem o to, aby byl vyloučeny. Na « *··« »· * »· »· ** * · · · · »· · • ·*· « »* · · · · · • « * · ♦ ···» * »·· ··· • « » · * · · •i* »«· ·· » ♦· ·· rozdíl od přenosu enterocyty však je vylučování fytosterolů prostřednictvím žluči rychlejší než u cholesterolu, přičemž je obsah sitosterolu ve žluči ve srovnání s cholesterolem třikrát vyšší. (Salen G., Ahrens Jr. E. H., Grundy S. M.,: The metabolism of betasitosterol in man, J. Clin. Invest, 1970, 49, 952-967). Tomu odpovídá, že endogenní zásoba fytosterolů je malá ve srovnání s cholesterolem v důsledku kombinace dvou faktorů: špatné absorbce fytosterolů ve střevech a rychlého vylučování žlučí.

V rámci vynálezu bylo zjištěno, že poměr kampesterolu/betasitosterolu v séru u jedince je kladné korelaci s tímto interním fytosterolovým účinkem. Prakticky to znamená, že CVD a ostatní choroby mohou být detekovány za použití uvedené koncentrace a poměru, bez ohledu na koncentraci cholesterolu v séru. Jedinec může mít přijatelnou koncentraci cholesterolu v séru, ale má nízkou koncentraci kampesterolu nebo je beta-sitosterol v séru v přebytku vůči koncentraci kampesterolu v séru (nízký poměr), což indikuje, že u jedince existuje riziko CVD a bylo by vhodné provést další testy nebo terapeutický zásah.

Vysoká koncentrace kampesterolu a vysoký poměr kampesterolu k beta-sitosterolu u jedince indikují, že enterocytový přenos funguje dobře. Fytosteroly se rychle vylučují žlučovými cestami a jsou proto rychle k dispozici ve vysokých koncentracích , aby mohly konkurovat cholesterolu na úrovni enterocytů ve střevech. Bylo zjištěno, že koncentrace fytosterolů v séru, především hydrofilních, a zvláště kampesterolu nejlépe ukazuje účinnost tohoto efektu. Podle jednoho provedení podle tohoto

44·4 · 44 ·· • α 4 « 4 · 4 4 ··« 4 4 4 * 4 44 4

444 4 4444 * 444 444

4 4 4 4 4 • 444 44 4 ·4 ·4 vynálezu se poměr koncentrace kampesterolu v séru a koncentrace beta-sitosterolu v séru u jedince porovnává s normálním kontrolním vzorkem s cílem zjištění závislosti mezi těmito hodnotami a rizikem CVD a jiných chorob u jedince. Poměr u kontrolního pokusu výhodně není nižší než 0,75 a výhodněji se pohybuje mezi hodnotami 1,0 a 1,5. Poměr v tomto rozmezí, kdy kampesterol je blízko hodnotě nebo v přebytku vůči beta-sitosterolu naznačuje efektivně pracující přenos enterocyty. Poměry pod hodnotou 0,75 naznačují abnormality nebo nerovnováhu v přenosu enterocyty. Zdá se, že fytosteroly ochraňuji přenos před přebytkem cholesterolu kumulativním efektem enterohepatické cirkulace fytosterolu (kampesterolový efekt”).

Ačkoliv koncentrace kampesterolu v séru a poměr kampesterolu/beta-sitosterolu u jedince ve srovnání s normální kontrolní hodnotou poskytuje hodnotnou informace o zdraví a výživě testovaného jednotlivce, tuto informaci je možné také uvést do souvislosti s ostatními biologickými proměnnými ve srovnání s normálními kontrolními koncentracemi nebo poměry, čímž se vytvoří sada proměnných pro vyhodnocení rizika. Tyto proměnné mohou zahrnovat jednu z následujících hodnot:

(1) koncentrace celkového fytosterolu v séru (2) koncentrace celkového cholesterolu v séru (3) poměr celkových fytosterolů/cholesterolu, a (4) poměr kampesterol/Apoprotein-B cholesterol • **·· β · · • *♦· • v t * ····· «· · *· ·* « · * · · · · • » · · · · · • · ·«·« · ·*· ··· • · * · · ·· * ·* ··

Tato analýza séra zahrnuje vyhodnocení jak interního, tak externího” biologického účinku:

Analýza fytosterolu v séru

Proměnná poměr kampesterol/beta-sitosterol

Účinek Dieta vegetar. s masem externí vysoký nízký poměr celkový fytosterol /celkový cholesterol koefekt vysoký nízký

poměr kampesterol
/Apo-B cholesterol	externí	vysoký	nízký
koncentrace kampesterolu v séru	interní	vysoký	nízký
celková koncentrace rostlinných sterolů v séru	koefekt	vysoký	nízký

V tabulce je rovněž uvedeno porovnání těchto proměnných ve vegetariánské dietě (vysoký obsah fytosterolu) a dietě s podílem masa (obecně nízký obsah fytosterolů).

* 9

Μ*· • «9»

9· 9 99 99 · 9 9 9 9

9 9 · 9 9 9

999999 999 999

9 9 9 9

99 9·

Koncentrace celkového cholesterolu v séru v normálním kontrolním vzorku nepřesahuje hodnotu 5,2 mM/l. Koncentrace celkových fytosterolů v séru v normálním kontrolním vzorku se pohybují od 2,0 do 6,0 mikroM/l. Poměr kampesterolu/Apoprotein-B cholesterolu je v normálním kontrolním vzorku výhodně vyšší než 0,5.

Tento vynález umožňuje lékařům vyšetřit ty jedince, kteří mohou být ohroženi CVD nebo jinými chorobami, za pomoci modifikovatelných proměnných. Například může být ukázáno, že :

(i) změny v selektivitě přenosu fytosterolů mohou vést ke snížení poměru kampesteroi/beta-sitosterol nebo k převrácení tohoto poměru, (ii) nízké koncentrace jednotlivých fytosterolů v séru mohou být způsobeny nízkým obsahem fytosterolů v potravě nebo negativním regulačním vlivem fytosterolového přenosu, a (iii) pozitivní regulační vliv přenosu enterocyty vede k vysokému obsahu cholesterolu a jednotlivých fytosterolů v plazmě a/nebo k převrácení poměru kampesterol/beta-sitosterol.

Tyto proměnné podávají hodnotnou informaci o výživě, vztahu diety a podávaných léčiv a o existenci neprojevených lipidových a thyroidových poruch a diabetů, což představuje metodu pro monitorování a vyjasnění způsobu léčení CVD.

• ·♦· • · · ·· ·· ·· ««« ·«»« Β ·* · « · · · « · * · · ··»· · ··· ··· « · * · · · ·« Β ·«» «Β · ·* ··

V nejvýhodnějším provedení vynálezu mohou být proměnné použity pro vyhodnocení rizika CVD a dalších chorob následujícím způsobem (s ohledem na obr. 12):

Krok 1 zahrnuje vstupní vyšetření, což je stanovení celkových fytosterolů v séru (TRS) a celkového cholesterolu v séru (TC) u jedince a porovnání těchto koncentrací s normálními kontrolními hodnotami. Obecně řečeno, u jedince, který má v porovnání s normální kontrolní hodnotou vysokou hodnotu TPS a nízkou TC, není třeba žádné úpravy diety ani terapeutický zásah. Je pravděpodobné, že tento jedinec se stravuje vegetariánsky. Jedinec, který má vysokou hodnotu TPS a vysokou hodnotu TC, by měl být dále vyšetřen na poruchy metabolismu lipidů, jako je sitosterolemie. V kroku 2 jsou rozhodující výsledky stanovení poměru kampesterolu/beta-sitosterolu v séru (CSR). Jedinec, který má ve srovnání s normálním kontrolním vzorkem vysokou hodnotu TPS a vysokou hodnotu CSR, bez ohledu na hodnotu TC, je zdravý a přizpůsobil se doporučovaným omezením v potravě. Skutečnost, že hodnota CSR zastoupila hodnotu koncentrace TC v séru jako rozhodujícího indikátoru choroby je základem pro ocenění hodnoty vynálezu a jeho použití v lékařské diagnostice a samotném léčení.

Jedinec, který má vysokou hodnotu TPS, vysokou hodnotu TC a hodnota CSR je nízká nebo převrácená k tomuto poměru, je ohrození CVD a musí být odpovídajícím způsobem léčen. Toto léčení může zahrnovat zásah do složení potravy s použitím prostředku s obsahem fytosterolů podle vynálezu samostatně nebo v kombinaci s jinými terapeutickými zásahy. Cílem léčení je zvýšit hodnotu TPS, snížit TC (čímž se zvýši poměr TPS/TC na hodnotu

4 4 · 4 ·· 4 ♦ · »* *44 4 4 4 »444 • 444 4·4· 4 4 4 4 t 4444 4444 4 *44 ···

4 4 4 4 4 4

444 444 44 · 4« 44

1,0 nebo vyšší) a zvýšení CSR. Mnoho z těchto cílů může být dosaženo podáváním prostředku s obsahem fytosterolů, jak je popsán dále.

Jedinec, který má nízkou hodnotu TPS, nízkou hodnotu CST (nebo převrácenou) a nízký poměr TPS/TC (nižší než 1,0 nebo převrácený) jen v ohrožení nebo již onemocněl thyroidovou poruchou nebo diabetem vyžadujícím terapeutický zásah. Tento typ výsledků také případně naznačuje chyby v dietě, tzn. že koncentrace rostlinných sterolů v potravě není dostatečná, aby udržela požadovanou homeostázu fytosterolů/cholesterol.

Tento vynález umožňuje stanovení a využití proměnných při vyhodnocování rizika CVD a příbuzných metabolických a lipidových chorob. Jádrem všech těchto proměnných je poměr kampesterol/beta.sitosterol neboli CSR, u něhož bylo zjištěno, že reflektuje jak selektivitu, tak účinnost” přenosu fytosterolů. Poměry vyšší než 1,0 a nejvýhodněji na hodnotě 1,5 nebo poblíž této hodnoty indikují zdravou homeostázu fytosterol/cholesterol. Jinými slovy vylučování fytosterolů skrze systém žlučových cest může na optimální úrovni konkurovat cholesterolu v přenosu enterocyty, jak bylo popsáno dříve. Rovnováha této soutěže je reflektována v žádoucím CSR. Na druhé straně CSR pod hodnotou 1,0 a zvláště pod hodnotou 0,75 (CSR převrácený) je jasným indikátorem CVD a jiných chorob (diabetes, hypothyroidismus), bez ohledu na koncentraci celkového cholesterolu v séru u testovaného jedince.

Na základě výsledků těchto proměnných, které ukazují modulující vlivy fytosterolů na metabolismus cholesterolu, je zde dále uvedena nová kvalifikace chorob metabolismu cholesterolu:

• ·99 ·

• 9 ·

9999

9· ·· » 9 « * » · * 9 •99 999

9 • 9 · (i) poruchy - externí účinek (a) snížení absorbce cholesterolu strava s vysokým obsahem zeleniny strava s vysokým obsahem rostlinných tuků hypothyroidismus diabetes mellitus typu II abetalipoproteinemie (b) zvýšeni absorbce cholesterolu strava s vysokým obsahem tuku/cholesterolu primární dědičná hypercholesterolemie sitosterolemie (ii) poruchy - interní účinek diabetes melfture typu II hypothyroidismus dědičná kombinovaná hyperlipidemie nefrotický syndrom

Sitosterolemie je vzácná dědičná porucha ukládání tuků, která se chemicky projevuje zvýšenou koncentrací fytosterolu v plazmě, normální koncentrací cholesterolu a zvýšením lipoproteinového cholesterolu s nízkou měrnou hmotností a Apoproteinu-B (Bhattacharyya A., Connor W.E., Beta-Sitosterolemia and xanthomasii. A newly described lipid storage disease in two sisters: J. Clin. Invest, 1974, 53, 1033-1043). Tato choroba je spojena ···· ee * ·· ♦· • · · · · · · · ··· 9 · · · · · · « « · · »··* »♦· ♦·· « · · · · · • ··· «· a ·· aa s rychle se rozvíjející atherosklerozou. Jako primární porucha je jeví zvýšená absorbce fytosterolu spolu s oslabením vylučování cholesterolu a fytosterolu žlučí. Jelikož se zvýšená absorbce cholesterolu objevuje navzdory vysoké koncentraci fytosterolu v plazmě, zdá se, že je zde chyba v negativní regulaci vlivu přenosu fytosterolů enterocyty. Podle vynálezu bylo zjištěno, že indikátorem sitosterolemie je převrácený poměr kampesterol/betasitosterol. To naznačuje ztrátu diskriminace při přenosu fytosterolů a současně hromadění fytosterolů a alfa-stanolu v séru nebo plazmě. Za normálních okolností vysoké koncentrace fytosterolu v séru mají pozitivní regulační vliv na cholesterolovou syntézu, u jedinců se sitosterolemií je však syntéza cholesterolu nízká a přeměna lipoproteinu-C s nízkou měrnou hmotností se zvyšuje. Předpokládá se, že dědičný defekt v sitosterolemii je způsoben abnormalitou v genu HMG-CoA reduktázy. Může ale být způsoben také inhibičním vlivem vysoké koncentrace sitostanolu v séru na vylučování rostlinných sterolů a cholesterolu játry.

U pacientů s diabetem typu II je koncentrace fytosterolů v plazmě nízká a je nepřímo závislá na koncentraci insulinu v plazmě a dále bylo zjištěno podle vynálezu zjištěno průměrný poměr kampesterol/beta-sitosterol je podobný u skupiny pacientů s diabetem a kontrolní skupny s přebytkem kampesterolu.

Prostředek s obsahem fytosterolu

Fytosterolu jsou široce dostupné v rostlinných olejích, avšak, s výjimkou oleje z rýžových otrub, obsah fytosterolu v rostlinných olejích není dostatečné vysoký, aby významně zastoupil absorbci cholesterolu ve střevech, v důsledku nízkého poměru **·· ·· *

99

9 9 9 9 9 9 9 9 9

999 9 9 9 9 9 9 9 · • · · · · ··♦· 1 »·· ··· • ft · · « · · «·« «·* ·· « ·· ·· fytosterol/cholesterol v potravě. Navíc v rostlinných olejích jsou liší obsah fytosterolů a jejich složeni. Hlavní součást fytosterolů v potravě, beta-sitosterol, snižuje jak obsah celkového lipoproteinuC, tak obsah lipoproteinu-C s nízkou měrnou hmotností (LDL-C), ale samotný není příliš účinný při ovlivňování homestáze cholesterolu. Rostlinné oleje s nízkým obsahem fytosterolů, jako jsou kokosový olej, olivový olej a saflorový olej, jsou dostatečné pro udržení cholesterolové homeostázy u jedinců s vysokým příjmem zeleniny v potravě tj. u čistých vegetariánů, ale nejsou dostatečné bez doplňováni fytosterolů pro udržení rovnováhy u většiny populace.

V rozsahu těchto aspektů vynálezu je příprava prostředku s obsahem e fytosterolů, který může být přidáván přímo do doplňků jídla, olejů a vitamínů a léčivých prostředků pro léčení CVD a pro úpravu dietních a jiných nedostatků indikovaných dříve uvedenými proměnnými podle vynálezu. Dá se uvažovat o tom, že by se prostředek podle vynálezu přidával jako standardní doplněk potravy (např. do rostlinných olejů) pro populaci ”s vysokou mírou rizika’’ nebo prostřednictvím přístupu celé populace k výživě. Prostředek je možno případně podávat v primárních, sekundárních a terciárních programech prevence.

Prostředek v obsahem fytosterolů podle vynálezu projevuje znatelnou schopnost dosáhnout terapeutických cílů indikovaných jako výsledky proměnných. Prostředek podle vynálezu zvláště zvyšuje TPS, snižuje sérový TC a LDL-C a současně zvyšuje obsah lipoproteinu -C s vysokou měrnou hmotností (HDL-C) a poměr HDL-C/LDL-C.

Prostředek podle vynálezu zahrnuje Beta-sitosterol, kampesterol, stigmastanol (beta-sitostanol) a případné kampestanol. tyto prostředky a relativní koncentrace těchto

9999

9 99 99 • 9 9 9 9 9 9

99· 9 99 · • 9 ··!· 9 999 999 • 9 · 9 9

9 9999 rostlinných sterolů se odlišují od známých prostředků s obsahem fytosterolů v mnoha směrech. Obecně je v prostředku podle vynálezu relativní koncentrace beta-sitosterolu nižší, než u známých prostředků. Relativní koncentrace sitostanolu je v prostředku podle vynálezu vyšší. Pro dosažení požadovaných terapeutických cílů je však tak úspěšná kombinace relativních koncentrací a určitých typů rostlinných sterolů. Zvláště když je koncentrace sitostanolu v prostředku nedostatečná, jeho účinnost jako terapeutického prostředku se sníží.

V jednom z provedení obsahuje prostředek podle vynálezu alespoň 10 % kampesterolu a ne víc než 75 % beta-sitosterolu. Ve výhodnějším provedení prostředek obsahuje 10 - 25 % kampesterolu, 1% - 25 % stigmastanolu a od 45 - 75 % betasitosterolu. Prostředek také obsahuje případně 2 - 6 % kampestanolu, nejvýhodněji 3 %.

Je jasné, že do prostředku podle vynálezu přidávány jiné fytosteroly za—účelem zvýšení účinnosti.

mohou být terapeutické

V dalším výhodném provedení obsahuje prostředek podle vynálezu následující poměry fytosterolů: beta-sitosterol (+), kampesterol (0,2 - 0,4) a stigmastanol (0,2 - 0,5). Výhodněji kampesterol a stigmasterol společně představují nejméně 50 % celkové koncentrace beta-sitosterolu. V nejvýhodnější formě obsahuje prostředek podle vynálezu následující pomět fytosterolů, srovnání s fytosteroly odvozené ze sóji.

«·

9 4 · · · 4 · 4 4 « ·44 · 9 4 4 9 · 9 9 • ♦ · 9 · »·»· 9 ··· ·*4 * · · · 9 · ·

494 944 ·· 4 ·· 49

Poměr známých fytosterolu

	Přibližná beta-Sitosterol čistota (%}	Kampesterol	Stigmastero
Soj.boby	-	1	0,640	0,005
Forbes-1	91,0	1	0,354	0,414
Forbes-2	77,0	1	0,330	0,203
Forbes-3	90,0	1	0,268	0,299

Složení a čistota dvou dalších extraktů v rozsahu tohoto vynálezu jsou následující:

Prostředek (%)

Přibližná beta-Sitosterol Kampesterol Stigmasteroi čistota (%)

Forbes-4 99,0 62,6 16,6 23,2

Forbes-Jj 98,3 64,7 16,4 17,2

V nejvýhodnéjším provedení podle vynálezu prostředek podle vynálezu obsahuje následující frakce (založeno na separaci v koloně, oddělení jednotlivých frakcí a jejich analýze tenkovrstvou chromatografií, plynovou chromatografií a hmotovou spektrometriíplynovou chromatografií:

Sloučeniny

Fytosteroly

Kampesterol

Kampestanol beta-Sitosterol

13,6 %

3.4 %

60.4 % • aaaa • · · • aaa • · * a · aaaaaa a« * a a a a a a a • a aaaa a a · • a a *a • a a a a a a a • aaa aaa a a aa aa

Stigmastanol 16,3 %

	Celkem		93,7 %
Neznámé fytosteroly	2 sloučeniny		0,9 %
Mastné alkoholy	C 22	0,32 %
	C 23	0,02 %
	C 24	0,46 %
	C 26	0,02 %
	Celkem		0,8 %
Polární nečistoty	3 - 4 sloučeniny		4,0 %

Celkem

99,4 %

Při přípravě prostředku s obsahem fytosterolu podle vynálezu bylo in vivo hlavním cílem zvýšeni účinnosti fytosterolu z hlediska vnějšího i vnitřního. Koefektem této zvýšené účinnosti bylo snížení koncentrace cholesterolu.

S ohledem na externí účinek je známo, že absorbce fytosterolu ve střevě je selektivní s nepřímou úměrností mezi absorbcí fytosterolů a účinnosti snižováni cholesterolu (vysoce hydrofobní a nejméně absorbovatelný sitostanol je při snižování cholesterolu nejúčinnější). Relativně hydrofilní kampesterol je všeobecně absorbován lépe, než beta-sitosterol se stigmasterolem, • ··» 99 9 ·· *·

9*9 · · · 9 9 · «99 9 9 9 9 9 9··

99999999 9 999 99«

9 9 9 « 99

999 991 99 9 99 99 který je absorbován minimálně. Podle jednoho provedení vynálezu je připravován prostředek, v němž se příznivé účinky kampesterolu (vnější i vnitřní) projevují u jedince, jemuž je tento prostředek podáván. Ve výhodném provedení tento prostředek obsahuje jeden nebo více fytosterolů, které inhibují především absorbci cholesterolu a beta-sitosterolu. Tento prostředek blokuje nebo snižuje absorbci beta-sitosterolu. V nejvýhodnějším provedení prostředek zahrnuje kampesterol i sitostanol.

V dalším provedení prostředek podle vynálezu obsahuje navíc jednu nebo více sloučenin, které inhibují syntézu cholesterolu. Tyto sloučeniny zahrnují (aniž by byl výčet limitující) inhibitory reduktázy 3-hydroxy-3-methylglutarylkoenzymu-A (HMG-CoA). Kombinace těchto sloučenin, které limitují syntézu cholesterolu, a prostředku s obsahem fytosterolů podle vynálezu je synergická a iniciuje a podporuje externí ” a interní” účinek. Jak se snižuje syntéza cholesterolu a vylučování cholesterolu žlučí, zvyšuje se poměr fytosterol/cholesterol ve střevech, což dále snižuje absorbci cholesterolu a zvyšuje přetřás^- fytosterolů prostřednictví entrocytového přenosového mechanismu. Dopad těchto vlivů na homeostázu cholesterolu indikují hodnoty absolutní koncentrace kampesterolu v plazmě a relativní koncentrace kampesterolu v séru vztažené k hodnotě koncentrace beta-sitosterolu v plazmě (CSR). Koncentrace kampesterolu v séru vztažená k hodnotě ApoproteinuB/cholesterolu v séru indikuje vliv fytosterolového externího účinku na homeostázu cholesterolu. Nalezeni těchto synergických společných vlivů mezi prostředky s obsahem fytosterolů podle vynálezu a sloučeninami, které omezují syntézu cholesterolu, jako jsou statiny, je velmi významná, neboť díky ní může být dávkování sloučenin, které inhibují syntézu, význačné sníženo, když jsou • 44 *·*

4* · • 4 · * 4 ♦ · • · 4 44»»

4» ·♦ 4 • 4 4 · • * · * • »4· ·«« • 4 *· <4 podávány v souladu s prostředky podle vynálezu. Nedávno bylo zjištěno, že podávání statinů, jako je Lovostatin, má významné vedlejší účinky, takže snížená dávky díky synergii se zde uvedenými prostředky je poměrně žádoucí.

Ačkoliv vliv sitostanolu na absorbci cholesterolu enterocyty, tj. externí účinek, je ve srovnání s jinými fytosteroly významný, není fyziologicky výhodné podávat prostředek obsahující samostatný sitostanol, neboť vazba v přenosu enterocyty je u sitostanolu nevratná. V ideálním případě prostředek podle vynálezu udržuje homeostázu cholesterolu a fytosterolů, aniž by ohrožoval enterohepatický systém přenosu.

Prostředky s obsahem fytosterolů podle vynálezu by mohly být zapracovávány přímo do potravinových nebo dietních doplňků. Ve výhodném provedení se prostředek zamíchá do rostlinného oleje, vybraného ze skupiny zahrnující saflorový olej, sesamový olej, olej kukuřičných klíčků, olej z rýžových otrub, olivový olej a řepkový olej. Nejvýhodnější je doplňování olivového olej, neboť tento olej se široce využívá a má nízký obsah fytosterolů a polynenasycených mastných kyselin. Prostředek může být případné zapracován do nasycených tukových produktů na bázi sádla nebo tuků jako je máslo a margarín.

Jak bylo dále zjištěno, existuje významný společný vliv nebo synergie mezi zde popsaným prostředkem a polynenasyceným tukem. Oleje (jako je olej z kukuřičných klíčků) a další potraviny s vysokým obsahem polynenasycených tuků jsou podle tohoto zjištěni výhodnými vehikuly nebo nosiči prostředku ke spotřebiteli. Podobný společný vliv byl navíc nalezen i u nasycených mastných

444

4 4 4 • · · 4 · 4 V * · 4 4 4*44 4

4 4 »

44· 44 i • 4

4

4

4 4 4 ¢4

444 kyselin. Podle tohoto zjištění jsou potraviny s vysokým obsahem nasycených mastných kyselin klíčovým cílem pro doplňováni prostředkem podle vynálezu.

Dávkování prostředku podle vynálezu může být různé v závislostí na způsobu podávání. Nejvýhodněji by mělo být podáváno 1,0 až 3 g denně.

Profil mužský a ženský

Na základě použití proměnných nebo markérů podle vynálezu a zde popsaného prostředku s obsahem fytosterolu byly vytvořeny strategie nebo modely pro omezení účinnosti absorbce cholesterolu bez jakýchkoliv vedlejších účinků. Bylo zjištěno, že přenos enterocyty vykazuje odlišnosti, závislé na pohlaví a tyto odlišnosti vykazují aspekty kvantitativní (kapacita absorbce rostlinných sterolů v daném__čase) a kvalitativní (složení a selektivita absorbce rostlinných sterolů). U mužů se zvyšuje kapacita přenosu cholesterolu, přičemž se při přenosu dává přednost hydrofobním rostlinným sterolům a cholesterolu, zatímco u žen se přenosová kapacita obrací spiše na relativně více hydrofilní (méně hydrofobní) sterolové složky potravy. U pacientů trpících poruchami metabolismu lipidů (jako je primární dědičná hyperlipidemie atd.) je kapacita přenosu cholesterolu a hydrofobnost relativně vyšší, než u mužů se zvýšenou absorbci cholesterolu, a dochází u nich k převráceni poměru obsahu rostlinných sterolů v plazmě od přebytku kampesterolu v plazmě v normálním vzorku k přebytku beta-sitosterolu.

• 4 • · · »« » * 4 » >

·· 4»

4 4 « • · · 4 •44 ··>

»

4 ··

Prakticky to znamená, že zvýšená absorbce cholesterolu u mužů a zvýšení obsahu triglyceridů u žen je výsledkem stravy bohaté na nasycený tuk. Kvalitativní aspekty kapacity přenosu cholesterolů, které jsou zde vyjádřeny slovy méně nebo více hydrofobní”, jsou výsledkem modifikujícího vlivu estrogenu a androgenu na přenos cholesterolu , kde estrogen převádí přenosový mechanismus na méně hydrofobní látky a posunuje absorbci sterolů více doleva, a androgeny a poruchy metabolismu lipidů jej posunují více vpravo k rozpustnějším rostlinným sterolům, jak je ukázáno na obr. 13.

Podávání prostředku podle kompozice se u žen nejprve projevuje ve znatelném snížení beta-sitosterolu v plazmě a zvýšení obsahu kampesterolu, doprovázené vysokým poměrem kampesterol/beta-sitosterol, což odpovídá snížení absorbce více hydrofobních sterolů ve střevě. Zvýšeni poměru kampesterol/betasitosterol u mužů je menším indikátorem posunu mužského typu absorbce sterolů ve střevě směrem k více hydrofobním sterolům. Ačkoliv je poměr kampesterol/beta-sitosterol proměnnou s velkou vypovídací schopnosti jak u mužů, tak u žen, je třeba říci, že klíčovým markérem stravy u ženského typu absorbce je kampesterol a v mužském typu je to beta-sitosterol. U pacientů s poruchami metabolismu lipidů je absorbce určitých rostlinných sterolů posunuta k více hydrofobním rostlinným sterolům, čímž se beta-sitosterol stává klíčovým markérem rostlinných sterolů.

Shrnutí: ženský typ je spojen s relativně nízkým obsahem TC a LDL-C a vysokým obsahem HDL-C a vysokým obsahem triglyceridů. Mužský typ je spojen s vysokým obsahem TC a LDL32 • 4

4 • 444 • 4

4 4 * 44 4 4 • 4 4 • · 4 »·4 444 • 4 * 44

C, nízkým obsahem HDL-C spolu s nízkým obsahem TC. Poměr kampesterol/beta-sitosterol je všeobecně vyšší v ženském typu, než v mužském. Pacienti s poruchami metabolismu lipidů mají charakteristiky velmi nízký poměr kampesterol/beta-sitosterol.

Jak již bylo uvedeno, existuje jasný společný vliv mezi součástmi potravy, jako jsou polynenasycené mastné kyseliny a nasycené mastné kyseliny a účinnosti prostředku podle vynálezu, tento společný vliv prochází napříč oběma typy absorbce (mužským i ženským) a zahrnuje je. S ohledem na vliv polynenasycených mastných kyselin u žen se zde projevuje zlepšení v profilu cholesterolu, které naznačuje, že koefekt mastných kyselin z potravy a kampesterolu s estrogenem na přenos cholesterolu enterocyty. U mužů se vliv androgenu na absorbci cholesterolu enterocyty probíhá prostřednictvím snížení obsahu beta-sitosterolu a cholesterolu a zvýšením absorbce kampesterolu.

Geografické typy stravování

Metabolické studie stravování podle tohoto vynálezu ukazují, že existují dva hlavní typy stravování:

Typ I (jižní nebo středozemský typ)

U tohoto typu stravy nalézáme vysoký obsah mononenasycených mastných kyselin a nasycených mastných kyselin a nízký obsah rostlinných sterolů polynenasycených mastných kyselin a nízký obsah cholesterolu. Převážně cholesterolový mechanismus této stravy směřuje k ochraně endogenních (vnitřních zdrojů cholesterolu tím, že jsou limitovány enterohepatické ztráty cholesterolu. Tato část populace má vysoký HDL-C, což odpovídá zvýšené potřebě cholesterolu v tkáních a nižší koncentraci TC a LDL-C. Riziko vzniku kardiovaskulárních chorob v důsledku stravy je nízké, ale za nepříznivého stavu metabolismu potravy může být tato strava atherogenní.

Typ II (severní nebo západní typ)

Tento typ stravy má vysoký obsah polynenasycených mastných kyselin, vysoký obsah rostlinných sterolů a vysoký obsah cholesterolu. Převážně cholesterolový metabolismus vede k odstranění přebytku cholesterolu tím, že se zvyšují ztráty v enterohepatických zásobách cholesterolu. Populace má obecně nižší HDL-C, vysoký TC a vysoký LDL-C, což odpovídá snížení potřeby cholesterolu v tkáních. Riziko kardiovaskulárních chorob*pv12X Pop důsledku stravy je vyšší než u jižního a středozemního typu stravy, ale může se měnit v důsledku různých podmínek metabolismu potravy.

Úvahy o geografických typech stravování by měly být začleněny do epidemiologických studií (prevence chorob), srovnávacích studií reprodukce a výzkumu rakoviny a terapeutických pozorování. Jak zde bylo pospáno, nízký obsah CSR v plazmě lze nejlépe chápat jako nezávislý modifikovatelný primární rizikový faktor kardiovaskulárních chorob.

···♦ • · · · ♦· fc *· * ♦ « · ····* • · · « •·* ·« s ·· » ♦ ♦ · · • ♦ · » • ·· · « • » · ··

Příklady provedeni

Přiklad 1: Experiment s lidským stravováním

Cílem studie je zjistit, jak rostlinné steroly obohacené o sitostanol, přidané do potravy, ovlivňují v těle koncentraci a rychlost vzniku obíhajícího cholesterolu. Před začátkem studie bylo 10 jedinců s normálním metabolismem lipidů ve věku 18 - 45 let prohlédnuto lékaři, aby byl potvrzen jejich dobrý zdravotní stav. Bylo vybráno 5 mužů a 5 žen. Byl jim odebrán vzorek krve (20 ml) pro laboratorní potvrzení, že se u nich nevyskytují žádné zdravotní abnormality, a pro stanovení koncentrace lipidů v krvi. Testované osoby pak po dobu 9 dnů pojídaly stravu připravovanou Metabolickou kuchyní v rámci Laboratoře klinických studií. Tato strava obsahovala normální jídlo a byla podávaná ve třech jídlech denně po dobu 9 dnů. Do stravy byla přidávána v koncentraci 1,5 g/den jedna z následujících složek: samotný olivový olej (Olivy), olivový olej v kombinaci s prostředkem podle vynálezu, zahrnující sitostanol (Forbes), olivový olej v kombinaci s prostředkem s obsahem sójových rostlinných sterolů (Nulife), nebo samostatným olejem z kukuřičných klíčků (Klíčky). Tyto složky byly přidávány přímo do stravy po smíchání s malým množství potravinářského oleje. Tato studie umožňuje srovnání dat získaných ze separátních výzkumného projektu podporovaného společností Heart and Stroke. V uvedeném projektu byla položena otázka, zda vyšší koncentrace rostlinných sterolů v oleji z kukuřičných klíčků je zodpovědná za zvyšující se syntézu cholesterolu, kterou jsme zjistili, když zkoumané subjekty pojídaly stravu s tímto olejem. S tímto ohledem byly jíž studovány tři typy stravy: s olejem z kukuřičných klíčků (vysoký obsah cholesterolu), s olivovým olejem (I I (velmi nízký obsah fytosterolů) a olivový olej s přidáním 1,5 g sójových fytosterolů. Cílem předkládané studie je použití olivového olej s přídavkem 1,5 Forbes fytosterolů (jeden z prostředků podle vynálezu) jako potravního oleje, z využitím předchozích studii jako kontrolních. Strava byla připravována v našich zařízeních pro testování metabolismu, s konzumací potravy pod dohledem výzkumného týmu, Bylo vytvořeno dvoudenní obměňující se menu, rozdělené do tří jídel denně. Množství jídla podávaného každému jedinci bylo stanoveno tak, by byla zachována u každého jedince rovnováha jeho tělesné hmotnosti, za použití závislostí založených na hmotnosti, výšce, věku a pohlaví jednotlivce. Všechny změny v tělesné hmotnosti byly zaznamenány a bylo jim přizpůsobeno množství potravy. Během trvání studie měly testované osoby k dispozici telefonní číslo lékaře, na kterého se mohly obrátit kdykoliv by cítily nějaké nepohodlí v souvislosti s podávanou stravou.

Po devíti dnech tohoto stravování byly testované osoby požádány, aby vypily 25 ml vody označkované stabilním isotopem oxidu deuteria. V testovacích dnech č. 9 a 10 odevzdaly testované osoby vzorek krve (20ml) pro vyhodnocení obsahu cholesterolu a rychlosti jeho syntézy. Tyto analýzy byly prováděny standardními postupy. V krátkosti: krevní plazma odebraná v každém vzorku během studie byla separována a analyzována na celkový obsah lipoproteinu s nízkou měrnou hmotností (LDL), celkový obsah lipoproteinu s vysokou měrnou hmotností (HDL), koncentraci cholesterolu a celkových triglyceridú. Pro dokumentaci byly také stanoveny koncentrace rostlinných sterolů v krevním řečišti . Byly stanoveny koncentrace sitostanolu, sitosterolu a kampesterolu. Navíc byla provedena analýza syntézy cholesterolu s využitím rychlosti přenosu značkované vody z těla do obíhajícího volného *· a ··· a a • · • a · ·· a ·* a a a a a • aa « » «* aa • · « · * · a a a ··· ··· • · · « «· v· cholesterolu. Analytické postupy jsou popsány v příslušné literatuře. Na konci studie byly testované osoby znovu prohlédnuty lékařem pro zjištění jejích zdravotního stavu. V desátém dnu byl znovu odebrán vzorek krve pro potvrzení, že se neobjevily žádné abnormality v zdravotním stavu.

Testované osoby byly rozděleny do dvou skupin po pěti osobách. Každá skupin byla testována 10 dnů. Jednotlivé běhy byly odděleny mezerou v délce 4 - 10 dnů. Všechny procedury proběhly v zařízení pro zkoumání metabolismu v Macdonaldově kampusu McGillovy university pod vedením Dr. Petera Jonese, ředitele oddělení Dietetiky a lidské výživy.

Analýza fytosterolů

Fytosteroly z plazmy byly extrahovány a analyzovány plynovou kapalinovou chromatografií (GLC). Jako vnitrní standart byl použit 5-alfa-cholestan. Standard byl přidán do 1,0 ml plazmy a zmýdalněn 50% KOH a metanolem (6:94 hm/hm) po dobu 24 hodin při 100°C. Plazma pak byla třikrát extrahována petroletherem. Steroly byly injekčně vpraveny do GLC (HP 5890 Serie II) vybavené plamenovým ionizačním detektorem. Separace byla provedena na Rtx-1, kapilární koloně délky 30 metrů, 0,25 ID, tloušťka filmu 0,25μιτ> (Restek Corp. Bellefont, PA). Vzorky byly injektovány při 80 °C. Zahřívání trvalo 20 minut. Teplota zahřívání byla zvýšena na 320 °C (20 °C/min) alespoň 5 minut před následnou analýzou. Injektor a detektor byly nastaveny na 1,2 ml/min se vstupním oddělovacím poměrem nastaveným na 10:1. Piky fytosterolů (kampesterol, sitosterol, sitostanol) byly identifikovány porovnáním se standardy.

Stanovení rychlosti syntézy frakcí

Obohacení deuteriem bylo měřeno ve volném cholesterolu v červené krvince (RBC) a v plazmě. Koncentrace lipidů v RBC byl měřena dvakrát. Do plazmy byl přidán methanol, hexan/chloroform (4:1 hm/hm) a dvakrát destilovaná voda. Směs byla mechanicky protřepána, centrifugována při 1500 ot/min. a tím byl získán supernatant. Extrakce byla opakována podruhé a podíly s rozpouštědlem byly spojeny. Supernatant byl vysušen pod dusíkem a zbytek byl pak rozpuštěn ve chloroformu a chomatografován na křemičitách plotnách. Plotny byly vyvinuty ve směsi hexan/diethylether/kyselina octová (70:30:1) a vazba cholesterolu byla identifikována na základě chromatografie cholesterolevého standardu. Skvrny s cholesterolem byly seškrábány z ploten a potom extrahovány třikrát protřepáváním oxidu křemičitého v chloroformu po dobu 125 minut s následným odstředěním.

Vysušené vzorky cholesterolu byly přeneseny do 18 cm dlouhých spalovacích patron. Do patrony bylo přidáno 0,5 oxidu měďnatého a stříbrného drátku délky 2 cm a potom byl v patronách pod vakuem snížen tlak na méně než 20 mtorr, Vzorky cholesterolu byly spojovány po dobu 4 hodin při 520 °C a unikající voda byla potom vakuově destilována v 10 cm spalovací patroně obsahující 60 mg zinkového reakčniho činidla. Tyto vzorky byly pak redukovány na oxid zinečnatý plynný vodík při 520 °C po dobu 30 minut.

Vzorky plazmy byly rozředěny 20 x vodou , čímž se snížilo obohacení deuteriem na normální analytickou úroveň. Kontrolní vzorky nebyly ředěny. Duplikátni vzorky byly vakuově destilovány v spalovací patroně s obsahem zinku. Vzorky plazmy byly rovněž »*· 9 ·· 9

9 9 9 *·* · 9 · 9 «9 9·

9 9 • 99 «9« redukovány na oxid zinečnatý a plynný vodík při 520 °C po dobu 30 minut.

Obohacení vzorků cholesterolu a plazmy deuteriem bylo měřeno poměrnou hmotovou spektrometrií za použití systému s trojitým vstupem a elektrickou kompenzací H3. Hodnoty rychlosti syntézy frakcí (FSR) u červených krvinek byly vypočítány jako obohacení cholesterolu deuteriem lomeno analogickou hodnotou obohacení pro vodu v plazmě při adjustaci podle vodíků cholesterolu, pocházejícího ze značeného substrátu. Hodnota hepatické FSR byla stanovena za použití následující rovnice;

obohacení cholesterolu (100 %o)x 24/čas(h) FSR (za den) =_ obohacení vody v plazmě (100%o) x 0,478

Hodnoty obohacení cholesterolu pokrývá periodu od prvního podání vody obohacené deuteriem ráno devátého dne až po odebrání krve ráno dne desátého. Faktor 0,478 vyčísluje podíl atomů deuteria získaných z vody v těle během cholesterogeneze.

Popisky obrázků

Obr. 1 Koncentrace lipidů v plazmě u celkového cholesterolu (CELK.-C), lipoproteínů cholesterolu s vysokou ' » » « « « ♦··· « *♦ · · • ··· » • * · « * · « t ··· ··« Bt » • · fc · • · · ♦ *·· ··· * » «» ·· měrnou hmotností (HDL-C), triglycerídů (TG) a lipoproteinů cholesterolu s nízkou měrnou hmotností (LDL-C) zdravých jedinců ženského a mužského pohlaví (počet=11), kteří konzumovali buď Forbes fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Forbes), Nulife fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Nulife), pouze stravu s olivovým olejem (označeni Olivy) nebo stravu založenou na oleji z kukuřičných klíčků (označení Klíčky) po dobu 9 dnů. Výsledky jsou vyjádřeny jako střední hodnoty ±SEM. Střední hodnoty pro jednotlivé skupiny s různou stravou, které v rámci každého parametru mají různé indexy, se znatelně liší (p<0.05 za použití Tukeyova testu post hoc).

Obr. 2 Koncentrace lipidů v plazmě u celkového cholesterolu (CELK.-C), lipoproteinů cholesterolu s vysokou měrnou hmotností (HDL-C), triglycerídů (TG) a lipoproteinů cholesterolu s nízkou měrnou hmotností (LDL-C) zdravých jedinců ženského a mužského pohlaví (počet=6), kteří konzumovali buď Forbes fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Forbes), Nulife fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Nulife); pouze stravu s olivovým olejem (označeni Olivy) nebo stravu založenou na oleji z kukuřičných klíčků (označení Klíčky) po dobu 9 dnů. Výsledky jsou vyjádřeny jako střední hodnoty ±SEM. Střední hodnoty pro jednotlivé skupiny s různou stravou, které v rámci každého parametru mají různé indexy, se znatelně liší (p<0.05 za použití Tukeyova testu post hoc).

Obr. 3 Koncentrace lipidů v plazmě u celkového cholesterolu (CELK.-C), lipoproteinů cholesterolu s vysokou měrnou hmotností (HDL-C), triglycerídů (TG) a lipoproteinů cholesterolu s nízkou měrnou hmotností (LDL-C) zdravých jedinců ženského a mužského • · · · · ·*· * ··* * · · · *··· • · · · · ··** · ··* • · · · · · « ······ Μ < «, ι, pohlaví (počet=5), kteří konzumovali bucř Forbes fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Forbes), Nulife fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Nulife), pouze stravu s olivovým olejem (označení Olivy) nebo stravu založenou na na oleji z kukuřičných klíčků (označení Klíčky) po dobu 9 dnů. Výsledky jsou vyjádřeny jako střední hodnoty ±SEM. Střední hodnoty pro jednotlivé skupiny s různou stravou, které v rámci každého parametru mají různé indexy, se znatelně liší (p<0.05 za použití Tukeyova testu post hoc).

Obr. 4 Snížení koncentrace lipidů v plazmě u celkového cholesterolu (CELK.-C), lipoproteinů cholesterolu s vysokou měrnou hmotností (HDL-C), triglyceridů (TG) a lipoproteinů cholesterolu s nízkou měrnou hmotností (LDL-C) zdravých jedinců ženského a mužského pohlaví (počet=11), kteří konzumovali bud Forbes fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Forbes), Nulife fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Nulife), pouze stravu s olivovým olejem (označení Olivy) nebo stravu založenou na na oleji z kukuřičných klíčků (označení Klíčky) po dobu 9 dnů ve srovnání s koncentrací lipidů v plazmě před ovlivňováním stravou. Výsledky jsou vyjádřeny jako střední hodnoty ±SEM. Střední hodnoty pro jednotlivé skupiny s různou stravou, které v rámci každého parametru mají různé indexy, se znatelně liší (p<0.05 za použití Tukeyova testu post hoc).

Obr. 5 Snížení koncentrace lipidů v plazmě u celkového cholesterolu (CELK.-C), lipoproteinů cholesterolu s vysokou měrnou hmotností (HDL-C), triglyceridů (TG) a lipoproteinů cholesterolu s nízkou měrnou hmotností (LDL-C) zdravých jedinců ··*· ·· » ·· ·· • · · * ·«·· ··· · · · · ···· • · · · ···· * ··· ··· • · · · · * ··· ·· · ·· «* ženského a mužského pohlaví (počet=6), kteří konzumovali buď Forbes fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Forbes), Nulife fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Nulife), pouze stravu s olivovým olejem (označení Olivy) nebo stravu založenou na oleji z kukuřičných klíčků (označení Klíčky) po dobu 9 dnů ve srovnání s koncentrací lipidů v plazmě před ovlivňováním stravou. Výsledky jsou vyjádřeny jako střední hodnoty ±SEM. Střední hodnoty pro jednotlivé skupiny s různou stravou, které v rámci každého parametru mají různé indexy, se znatelné liší (p<0.05 za použití Tukeyova testu post hoc).

Obr. 6 Sníženi koncentrace lipidů v plazmě u celkového cholesterolu (CELK.-C), lipoproteínů cholesterolu s vysokou měrnou hmotností (HDL-C), triglyceridů (TG) a lipoproteínů cholesterolu s nízkou měrnou hmotností (LDL-C) zdravých jedinců ženského a mužského pohlaví (počet=5), kteří konzumovali buď Forbes fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Forbes), Nulife fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Nulife), pouze stravu s olivovým olejem Jožnačení Olivy) nebo stravu založenou na oleji z kukuřičných klíčků (označení Klíčky) po dobu 9 dnů ve srovnání s koncentrací lipidů v plazmě před ovlivňováním stravou. Výsledky jsou vyjádřeny jako střední hodnoty ±SEM. Střední hodnoty pro jednotlivé skupiny s různou stravou, které v rámci každého parametru mají různé indexy, se znatelně liší (p<0.05 za použití Tukeyova testu post hoc).

Obr. 7 ukazuje koncentraci samostatných fytosterolů v plazmě u jedinců, kteří konzumovali buď Forbes (podle vynálezu) a stravu založenou na olivovém oleji, Nulife fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji, stravu založenou na olivovém oleji samostatně ·«· (Olivy) nebo stravu s kukuřičným olejem (Klíčky).

Výsledky

Výsledky těchto klinických zkoušek na lidech byly vyjádřeny v tabulkách 1 - 20 a potom shrnuty v obr. 1 - 7.

Střední koncentrace celkového cholesterolu v plazmě byla u skupiny, která dostávala Forbes fytosteroly výrazně nižší, než stejné hodnoty u skupiny s olivovým olejem. Byly rovněž nižší, i když ne výrazně, než u skupiny, která dostávala Nulife fytosteroly (Tabulka 1, Obr. 1).

Střední hodnota koncentrace HDL Cholesterolu byla nejvyšší u skupiny, která dostávala Forbes fytosteroly. Tato změna však nebyla výrazná při porovnání s ostatními skupinami vlivem mnoha -změn ve jednotlivců skupinách (Tab. 2, Obr. 1).

Střední koncentrace triglyceridů byly nižší ve skupině , která dostávala olej z kukuřičných klíčků oproti skupině, která dostávala Nulife fytosteroly (Tab. 3, Obr. 1).

Střední koncentrace LDL cholesterolu ve skupině, která dostávala Forbes fytosteroly, byla znatelně nižší než u skupin , ktreé dostávaly jak Nulife, tak olej (Tab. 4, Obr. 1).

U v podskupině jedinců mužského pohlaví se koncentrace celkového cholesterolu významně lišily mezi skupinami, které • i ·”’ • ··· · • · · · • · · · ··♦ ··· ·» * · ft · · • ···· ·· • « · » « » ·· ·· ·· ··« ·· dostávaly Forbes fytosteroly a olivový olej a mezi skupinami, které dostávaly olej z kukuřičných klíčků a Nulife fytosteroly. Koncentrace LDL cholesterolů se významné lišily u skupin, které dostávaly Forbes a Nulife, Forbes a olivový olej, a skupin, které dostávaly olivový olej a olej z kukuřičných klíčků. Žádný statisticky významný rozdíl nebyl nalezen u podskupiny jedinců ženského pohlaví. (Obr. 2, 3).

Hodnoty FSR byly nevyšší u skupiny Forbes fytosterolů. Tento rozdíl je zvláště významný s ohledem na skupinu s olivovým olejem. Střední hodnota FSR u Nulife je podstatně nižší než střední hodnota FSR pro Forbes. Tyto rozdíly však nejsou signifikantní vlivem velkých změn ve skupině s Nulife (Obr. 4).

Střední hodnoty pro olej z kukuřičných klíčků pro všechny parametry byly ve všech případech minimální nebo se jen neznatelně lišily od středních hodnot pro Forbes.

Výsledky GLC analýzy naznačují, že absorbce fytosterolů (kampesterolu a sitosterolu) ze střev do krevního řečiště je nejnižší u skupiny, která dostávala Forbes fytosteroly. Skupina s kukuřičným olejem vykazuje vysoké koncentrace fytosterolů v plazmě a tedy největší absorbci fytosterolů do krevního řečiště. Skupiny s Nulife a olivovým olejem vykazují podobnou koncentraci fytosterolů v plazmě (Obr. 5). Koncentrace kampesterolu v plazmě po podávání Forbes fytosterolů se znatelně lišila od této koncentrace po podávání stravy s Nulife a kukuřičným olejem. Koncentrace sitosterolu u skupiny, která dostávala Forbes se znatelné liší od hodnot pro skupiny s jinými typy stravování.

····

Byla provedena korelační analýza pro vyhodnocení vztahů mezi koncentrací fytosterolů v řečišti a hodnotami koncentrace lipidů a jejich syntézy (Tab. 9 - 13). Bylo zjištěno význačné spojení mezi koncentrací kampesterolu a HDL cholesterolu u skupiny FCP, mezi sitosterolem a LDL cholesterolem a mezi kampesterolem a celkovým a LDL cholesterolem u skupiny s olivovým olejem. U jedinců, kteří dostávali olej z kukuřičných kličků byl sitostanol také v korelaci s koncentrací HDL cholesterolu.

V tabulkách 1 - 20 jsou uvedena data pro všechny jedince, porovnání jedinců ženského a mužského pohlaví pro kampesterol, sitosterol, poměr kampesterol/sitosterol, celkový cholesterol, HDL cholesterol a LDL cholesterol, stejně jako FSR, pro každý typ stravy.

Tabulka 1

Koncentrace cholesterolu v plasmě (mg/dl) v závislosti na ovlivňování stravou

Č. Pohlaví

Forbes

M 143,6

M 112,6

M 116,4

M 136,5

M 104,9

M 108,4 mezivýsledek střed

120,4*

Ovlivňování Nulife

154,2

115,1

119,4

138,8

124,7

110,0

127,0 stravou

Olivy

153.6 126,2

116.7 142,0

116.8 122,7

129,7_b

Klíčky

126.3

110.4 107,3 136.0 115,7 103,1

116,5 • · · · · >·<« » ·*» ··· ϊ · · · · * .

··· ··· ·· « ·· ··

±SEM	±6,5	±6,8	±6,1	±5,1
7	Ž	144,9	163,9	114,8	119,8
8	Ž	94,6	117,9	177,2	106,9
9	Ž	146,1	154,4	137,4	135,3
10	Ž	146,0	146,9	133,4	136,3
11	ž	120,4	126,9	140,7	116,1
				±13,1
mezivýsledek
střed		130,4	142,0	134,1b	122,9
±SEM		±10,2	±8,6	±6,2	±5,7
CELKEM
střed		124,98	133,8b		119,42
±SEM		±5,7	±5,6	±3,	,7
	Celková	koncentrace cholesterolu u	zdravých jedinců
ženského	a mužského pohlaví	(počet	= 11), kteří	konzumovali bud
Forbes fytosteroly	a stravu za	loženou	na olivovém oleji (označení

Forbes), Nulife fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Nulife), pouze stravu s olivovým olejem (označeni Olivy) nebo stravu založenou na oleji z kukuřičných klíčků (označení Klíčky) po dobu 9 dnů. Střední hodnoty pro jednotlivé skupiny s různou stravou, které v rámci každého parametru mají různé indexy, se znatelně liší (p<0.05 za použití Tukeyova srovnání post hoc).

·· · ♦ · · • ··· 4 4 4 4 • 4 4 4 4 4444

4 4 4 4 •·· 44« 44 4 »· 44 « « 4 • 4 · 4 ·44 444

4

44

Tabulka 2

Koncentrace lipoproteinového cholesterolu s vysokou měrnou hmotností v plasmě (mg/dl) v závislosti ovlivňování stravou

č.	Pohlaví	Ovlivňování stravou Forbes Nulife Olivy	Klíčky
1	M	49,1	41,4 32,7	28,6
2	M	35,0	37,5 33,7	32,5
3	M	40,5	29,1 34,8	33,6
4	M	33,0	36,5 40,7	35,0
S	M	40,0	41,1 39,2	42,1
6	M	50,5	46,0 47,0	46,0

mezivýsledek

střed		41,3	38,6	38,0	36,3
±SEM		±2,9	±2,3	±2,2	±2,6
7	Ž	49,3	50,1		36,7
$	Ž	36,3	44,1	44,5	44,8
9	ž	39,1	39,1	42,7	34,4
I0	ž	65,2	58,5	50,9	57,6
11	ž	49,1	48,3	47,0	49,7

mezivýsledek

střed	47,8	48,0	46,3	44,6
±SEM	±5,1	±3,2	±1,8	±4,3
CELKEM
střed	44,2a	42,8	41,3	40,1b
±SEM	±2,8	±2,4	±2.6	±2,6

• · · · « « ··· ··· ·· * · ·

Koncentrace lipoproteinového cholesterolu s vysokou měrnou hmotností v plasmě u zdravých jedinců ženského a mužského pohlaví (počet=11), kteří konzumovali buď Forbes fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Forbes), Nulife fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Nulife), pouze stravu s olivovým olejem (označení Olivy) nebo stravu založenou na oleji z kukuřičných klíčků (označení Klíčky) po dobu 9 dnů. Střední hodnoty pro jednotlivé skupiny s různou stravou, které v rámci každého parametru mají různé indexy, se znatelně liší (p<0.05 za použití Tukeyova srovnání post hoc).

»··· •4 » · ·*

4 4

4

4«·44·

4 • 4 4

4 4 4 « «444 4 •4» «

4 4 4 •·4 *44

4

44

Tabulka 3

Koncentrace triglyceridů v plasmě (mg/dl) ovlivňování stravou

Č. Pohlaví Ovlivňování stravou v závislosti na

Forbes	Nulife	Olivy	Klíčky
I	M	48,0	59,7	69,2	60,4
2	M	55,3	56,4	43,7	46,2
3	M	67,5	95,4	58,7	81,8
4	M	91,5	70,5	60,1	76,4
5	M	77,5	59,6	62,6	41,7
6	M	74,7	82,7	97,4	86,0

mezivýsledek

střed	69,1	70,7	65,3	65,4
±SEM		±6,4	±6,3	±7,3	±7,7
7	Ž	62,5	59,8		44,7
8	ž	99,6	130,1	85,5	83,1
9		57,8	105,3	135,9	-84,9
10	ž	65,3	60,9	62,7	50,6
11	ž	55,2	78,0	83,8	52,8

mezivýsledek

střed	68, 1	86,8	92,0	63,2
±SEM	±8,1	±13,6	±15,5	±8,6
CELKEM
střed	68,6	78,02	75,0	64,4b
±SEM	±4,8	±7,1	±8,3	±5,4

Koncentrace triglyceridů v plazmě u zdravých jedinců ženského a mužského pohlaví (počet=11), kteří konzumovali bud Forbes fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení

44 4

Μ 4 44 44

4ν · ♦ · · 4444 *44 4 4 · 4 * *4 4 • 44*4 *444 » 4*4 44* • 4 * 4 4 4 4

444 444 44 4 44 44

Forbes), Nulife fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Nulife), pouze stravu s olivovým olejem (označení Olivy) nebo stravu založenou na oleji z kukuřičných klíčků (označení Klíčky) po dobu 9 dnů. Střední hodnoty pro jednotlivé skupiny s různou stravou, které v rámci každého parametru mají různé indexy, se znatelně liší (p<0.05 za použití Tukeyova srovnání post hoc).

Tabulka 4

Koncentrace lípoproteinového cholesterolu s nízkou měrnou hmotností v plazmě v závislosti na ovlivňování stravou

č.	Pohlaví	Ovlivňováni Forbes Nulife	stravou Olivy	Klíčky
1	M	84,8	100,8	107,1	85,5
2	M	66,5	66,3	83,7	68,7
3	M	62,4	71,2	70,2	57,4
4	M	85,2	— 88,2	89,3	85,8
5	M	49,8	71,8	65,1	65,3
6	M	42,9	47,4	56,3	39,8

mezivýsledek

střed	65,33	74,3bc	78,66	67,1bc
±SEM		±7,1	±7,5	±7,5	±7,2
7	Ž	83,1	101,9		74,1
8	Ž	38,4	47,8	53,2	45,5
9	Ž	95,4	94,3	107,3	84,0
I0	ž	66,3	75,8	74,0	97,4
11	ž	60,3	63,0	69,6	55,8
mezivýsledek
střed		68,7	76,5	76,0	71,3

	50	* *·«« «4 · « « « « · * * · ·· · · · · » · » · · ··· • · » · ·
±SEM	±9,8	±9,9	±11,3	±9,4
CELKEM
střed	68,8a	75,3b	77,6b	69,0ac
±SEM	±5,6	±5,8	±6,0	±5,5

• 9 9 < »···

9 · 9 9 9 • 9 99 · k 9 · • 9 .) 9 9999 • 9 9 9 »

999 999 «9 »

9

9·· • 9

Koncentrace lipoproteinového cholesterolu s nízkou měrnou hmotností v plazmě u zdravých jedinců ženského a mužského pohlaví (počet=11), kteří konzumovali buď Forbes fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Forbes), Nulife fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Nulife), pouze stravu s olivovým olejem (označení Olivy) nebo stravu založenou na oleji z kukuřičných klíčků (označení Klíčky) po dobu 9 dnů. Střední hodnoty pro jednotlivé skupiny s různou stravou, které v rámci každého parametru mají různé indexy, se znatelně liší (p<0.05 za použití Tukeyova srovnání post hoc).

Tabulka 5

Snížení koncentrace cholesterolu v plazmě (mg/dl) v závislosti na ovlivňování stravou.

Srovnání se základní koncentrací

e.	----- Pohlaví	Ovlivňováni stravou
Forbes	Nulife	Olivy	Klíčky
1	M	18,4	7,8	8,4	35,7
2	M	27,7	25,2	14,1	29,9
3	M	18,0	15,0	17,6	27,0
4	M	22,5	20,3	17,1	23,1
5	M	9,6	-10,2	-2,3	-1,2
6	M	19,6	17,9	5,2	24,9

mezivýsledek

střed		1 9,3ac	12,7ab	10,0b	23,2
±SEM		±2,4	±5,2	±3,2	±5,2
7	Ž	0,1	-18,9		25,3
8	Ž	53,9	30,6	33,8	41,7

Β Β · Β »♦ · « · · Β • · · » Β « « *

ΒΒΒ « » · Β Β Β» ·

Β Β Β · ···* * ΒΒ· ···

Β V · Β Β Β

9	Ž	32,0	23,7	1,0	42,8
10	Ž	4,6	3,7	13,2	14,4
11	Ž	49,8	43,3	36,7	54,0
mezivýsledek
střed		28,1	16,5ab	21,2	35,6
±SEM		±11,1	±10,9	±8,5	±7,0
Celkem
střed		23,3a	14,4b	14,4b	28,8
±SEM		±5,1	±5,4	±4,0	±4,5

Snížení koncentrace cholesterolu v plazmě u zdravých jedinců ženského a mužského pohlaví (počet=11), kteří konzumovali buď Forbes fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Forbes), Nulife fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Nulife), pouze stravu s olivovým olejem (označení Olivy) nebo stravu založenou na oleji z kukuřičných klíčků (označení Klíčky) po dobu 9 dnů. Hodnoty jsou porovnány s koncentrací lipidů v—plazmě před počátkem ovlivňování -stravou. Střední hodnoty pro jednotlivé skupiny s různou stravou, které v rámci každého parametru mají různé indexy, se znatelně liší (p<0.05 za použití Tukeyova srovnání post hoc).

99·9 • · 9«··

99 • · * 9

9 9 9

999 999 • ·

9· ·«

Tabulka 6

Snížení	koncentrace	lipoproteinového c	holesterolu	s vysokou
měrnou	hmotností v	plazmě v	závislosti	na ovlivňování stravou
(mg/dl)
Srovnání	se základní	koncentrací
Č.	Pohlaví	Ovlivňování	stravou
		Forbes	Nulife	Olivy	Klíčky
1	M	-13,5	-5,8	2,94	7,0
2	M	16,9	14,4	18,1	19,4
3	M	26,5	37,9	32,2	33,4
4	M	15,5	12,0	7,9	13,5
5	M	13,1	11,7	13,5	10,6
6	M	0,4	4,9	4,0	4,9

mezivýsledek

střed	9,8	12,5	13,1	14,8
±SEM		±5,8	±5,9	±4,5	±4,3
7	Ž	16,6	—15,8		29,3
8	Ž	45,8	38,0	37,6	37,3
9	ž	13,5	13,5	9,9	18,2
10	ž	5,11	1,6	9,2	2,5
11	ž	6,6	7,3	8,6	5,9

mezivýsledek

střed	15,5	15,3	16,3	18,6
±SEM	±8,4	±6,2	±7,1	±3,7
CELKEM
střed	12,4a	13,8	14,4	16,5a
±SEM	±4,8	±4,1	±3,7	±3,7

Sníženi koncentrace lipoproteinového cholesterolu • ···♦ ·· 4 44 «4

4·· 44* * 4 · 4 ··· 4 4 · 4 € 4 · 4

4444 4444 4 444 444

4 4 4 « 44

4·4 444 44 « «4 44 vysokou měrnou hmotností v plazmě u zdravých jedinců ženského a mužského pohlaví (počet=11), kteří konzumovali buď Forbes fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Forbes), Nulife fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Nulife), pouze stravu s olivovým olejem (označení Olivy) nebo stravu založenou na oleji z kukuřičných klíčků (označení Klíčky) po dobu 9 dnů. Hodnoty jsou porovnány s koncentrací lipidů v plazmě před počátkem ovlivňování stravou. Střední hodnoty pro jednotlivé skupiny s různou stravou, které v rámci každého parametru mají různé indexy, se znatelně liší (p<0.05 za použití Tukeyova srovnání post hoc).

·«·· • ·· ··· 4

·> 4« • · 4 4

4 · 4 ·44 ··· · · ·· 44

Tabulka 7

Snížení koncentrace triglyceridů v plasmě ovlivňování stravou	(mg/dl) v	závislostí
Č.	Pohlaví	Ovlivňování	stravou
		Forbes	Nulife	Olivy	Klíčky
1	M	-9,9	-21,5	-31,0	-22,3
2	M	-26,5	-27, 6	-14,9	-17,4
3	M	5,5	-22,4	14,3	-8,8
4	M	-26,6	-5,5	4,8	-11,4
5	M	-34,3	-12,4	-15,5	5,5
6	M	-13,0	-21,1	-35,7	-24,4

mezivýsledek

střed	-16,8	-18,4	-13,0	-13,1
±SEM		±5,6	±3,3	±8,0	±4,5
7	Ž	0,7	3,4		18,5
8	Ž	-6,3	-36,8	7,8	10,2
9	Ž	42,8	-4,6	-35,3	H-5,7
10	ž	3,0	7,4	5,5	17,7
11	ž	25,7	2,9	-2,9	28,1

mezivýsledek

střed	13,2	-5,6	-6,2	18,0
±SEM	±9,1	±8,0	±10,0	±2,9
CELKEM
střed	-3,173	-12,6a	-10,3	1,0b
±SEM	±6,8	±4,3	±6,0	±5,6

Snižování koncentrace triglyceridů v plasmě (mg/dl) v závislosti na ovlivňování stravou u zdravých jedinců ženského a ř r < . i / f 4

I i I i r f r i i r '

I I . I , * Λ Λ <* i <» · 4 r- .

mužského pohlaví (počet=11), kteří konzumovali bud Forbes fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Forbes), Nulife fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Nulife), pouze stravu s olivovým olejem (označení Olivy) nebo stravu založenou na oleji z kukuřičných klíčků (označení Klíčky) po dobu 9 dnů. Hodnoty jsou porovnány s koncentrací lipidů v plazmě před počátkem ovlivňování stravou. Střední hodnoty pro jednotlivé skupiny s různou stravou, které v rámci každého parametru mají různé indexy, se znatelně liší (p<0.05 za použití Tukeyova srovnání post hoc).

Tabulka 8

Snížení	koncentrace	ϊ lipoproteinového	cholesterolu	s nízkou
měrnou	hmotnosti v	plazmě v	závislosti	na ovlivňování stravou
(mg/dl)
Srovnání	se základní	koncentrací
Č.	Pohlaví	Ovlivňování	stravou
		Forbes	Nulife	Olivy	Klíčky
1	M	33,9	17,9	11,6	33,2
2	M	16,1	16,3	-1.1	13,9
3	M	•9,7	-18,5	-17,5	-4,6
4	M	12,4	9,3	8,3	11,8
5	M	2,5	-19,4	-12,7	-12,9
b	M	21,7	17,2	8,4	24,8

mezivýsledek

střed	12,8a	3,8bc	-0,5b	11,0ac
±SEM	±6,2	±7,3	±5,0	±7,1

·«·· *· « ·· ·· • · · · · * * · « * • ··* · « * * · · · · · ♦ · ···· < ·»« *·· • · · · · ·

7	Ž	-16,6	-35,4	-7,7
8	1	9,4	0,4	-5,4	2,3
9	Ž	10,0	11,1	-1,9	-20,5
10	Ž	10,6	1,1	2,9	-20,5
11	Ž	38,0	35,3	28,7	42,5
mezivýsledek
střed		10,3	2,4	6,1	7,6
±SEM		±8,6	±11,4	±7,2	±11,1
CELKEM
střed		11,7a	3,2bc	2,1b	9,5ac
±SEM		±4,9	±6,2	±4,2	±6,0
	Snížení	koncentrace	lipoproteinového	cholesterolu s
nízkou	měrnou	hmotností v plazmě v	závislosti	na ovlivňování
stravou	u zdravých jedinců	ženského	a mužského pohlaví

(počet=11), kteří konzumovali buď Forbes fytosteroly a stravu založenou na olivovém oleji (označení Forbes), Nulife fytosteroly a sUavu založenou na olivovém oleji (označení Nulife), pouze stravu s olivovým olejem (označení Olivy) nebo stravu založenou na oleji z kukuřičných kličku (označení Klíčky) po dobu 9 dnů. Hodnoty jsou porovnány s koncentrací lipidů v plazmě před počátkem ovlivňování stravou. Střední hodnoty pro jednotlivé skupiny s různou stravou, které v rámci každého parametru mají různé indexy, se znatelné liší (p<0.05 za použití Tukeyova srovnání post hoc).

··♦· ·· · · · · * · · · » ·· · · · » t · » · * · « * · ···· · «·· ··· « · · · ♦ · ♦ ··· ♦·· ·» · ·· ··

Tabulka 9

Forbes fytosteroly

Vzorky......	campest	sitoste	FSR	LDL	HDL	Celk.chol camp/sit
Jméno	mg/dl	mg/dl	zás./d	mg/dl	mg/dl	mg/dl
Alan	0,30	0,13	5,30	66,5	35.00	112,60	2,34
Dave .	1.11	0,68	6,3 ·	42,9	50,50	108,40	1.54
Elizabeth	1.16	0,59	4,00	60,3	49,10	120,40	1,94
Grant	3,46	1,63	2,60	84,8	49,10	143,60	2,12
Johan	1,35	1,33	5,30	85,2	33,00	136,50	1,02
John	0,28	0,23	5,20	49,8	40,0	104,90	2,92
Manon	0,37	0,13	4,70	83,1	49,30	144,90
Mary			5,90	66,3	65,20	146,00
Paula			3,20	95,4	39,10	146,10
Patrice			5,00	62,4	40,50	116,40
Stephanie	0,52	0,12	7,60	38,4	36,30	94,60	4,46
STŘED	1.07	0,60	5,01	66,83	44,28	124,95	2,21
STD	0,99	0,55	1,33	17,77	8,97	18,12	1,03

oy * «»»· «· · »« *» ♦ * · » · · · · » v » ··· e · · » * ·· · • · · * · ···· « ··« ··· « · · · · t · ··· *«· >· · ·· «»

Tabulka 10

Olivy

Vzorky.........	......campest	sitoste	FSR	LDL	HDL Celk. chol	camp/sit
Jméno	mg/dl	mg/dl	zás./d	mg/dl	mg/dl	mg/dl
Dave	6,20	7,80		56,3	47,00	122,70	0,79
Elizabeth	♦ 8.30	9.40		69,6	47,00	133,40	0,88
Johan	3,60	7,60		89,3	40,70	142,00	0,47
John	6,90	15,60		65,1	39,20	116,80	0,44
Mary	4,30	9,80		74	50,90	137,40	0,44
Paula				107,3	42,70	114,80
Patrice	4,80	5,40		70,2	34,80	116,70	0,89
Stephanie	14,40	14,10		53,2	44,50	114,80	1,02
Grant	3,13	3,23	1,30	107,10	32,70	153,50	0,97
Střed	6,45	9,12	1,30	76,90	42,17	128,02	0,74
STD	3,42	3,87	0,00	18,92	5,61	13,33	0,23

Tabulka 11

Rostlinné steroly

Vzorky..........	.....campest	sitoste	FSR	LDL	HDL Celk. chol	camp/sit
Jméno	' mg/dl	mg/dl	zás./d	mg/dl	mg/dl	mg/dl
Dave	6,0	7,50		47,4	46,00	110,00	0,88
Elizabeth	5 , 70	5,90		63	48,30	126,90	0,97
Johan	4,70	10,20		88,2	36,50	138,80	0,46
John	10,34	12,60		71,8	41,10	124,70	0,82
Mary	11.0	13,20		75,8	58,50	146,90	0,83
Paula	12,00	14,50		94,3	39,10	135,30	0.83
Patrice	4,20	4,80		71,2	29,10	119,40	0,88
Stephanie	12,90	14,40		47,8	44,10	117,90	0,90
Alan			1,60	66,30	37,50	115,10
Grant	2,48	4,54	0,60	100,80	41,40	154,20	0,55
STŘED	7,76	9,74	1,10	72,66	42,16	128,92	0,79
ST D	3 .60	3,89	0,50	17,04	7,47	13,72	0,16

• 9

9 9 9 9

999 9 9

9 9 9 9

9 9 9 • 99 *99 ·· ·

9999

9 9 9 • 9 9 9 • 999 999

9

99 99

Tabulka 12

Klíčky

Vzorky	campest	sitoste	FSR	LDL	HDL Celk. chol	camp/sit
Jméno	mg/dl	mg/dl	zás./d	mg/dl	mg/dl	mg/dl
Dave	9,70	10,50		39,8	46,00	103,10	0,92
Elizabeth	9,30	11,50		55,8	49,70	116,10	0,81
Johan	13,90	7,00		85,8	35,00	136,00	1,99
John	12,30	13,90		65,3	42.10	116,70	0,88
Mary	18,40	21,50		97,4	57,60	136,3	0,86
Paula	6,70	7,00		84	34,40	135,30	0,96
Patrice	5,50	5,60		57,4	33,60	107,30	0,98
Stephanie	4,40	10,00		45,5	44,80	106,90	0.44
Alan			7,10	68,70	32,50	110,40
Grant	10,96	9,91	2,10	85,50	28,60	126,30	1,11
Střed	10,13	10,77	4,60	68,52	40,43	119,34	1,00
STD	4,15	4,50	2,50	18,20	8,65	12,39	0,41

Tabulka 13

Forbes fytosteroly: muži

Vzorky........	.......campest	sitoste	FSR	LDL	HDL Celk. chol	camp/sit
Jméno	mg/dl	mg/dl	zás./d	mg/dl	mg/dl	mg/dl
Alan	- 0,30	0,13	5,30	66,5	35,00	112,60	2,34
Dave	1,11	0,68	6,3	42,9	50,50	108,40	1,64'
Grant	3,46	1,63	2,60	84,8	49,10	143,60	2,12
Johan	1,35	1,33	5,30	85,2	33,00	136,50	1,02
John	0,28	0,23	5,20	49,8	40,00	104,90	1,22
Patrice			5,00	62,4	40,50	116,40
STŘED	1,30	0,80	4,95	65,27	41,35	120,40	1,67
STD	1,16	0,59	1,13	15,96	6,54	14,48	0,51

• v * « ···· • ·»» • · • · • a··* a · · • * · • · · · • « ·« » * φ·* » • a a · * • •a aaa • a a« ··

Tabulka 14

Forbes fytosteroly: ženy

Vzorky..........	.....campest	sitoste	FSR	LDL	HDL Celk. chol	camp/sit
Jméno	mg/dl	mg/dl	zás./d	mg/dl	mg/dl	mg/dl
Elizabeth	,1.16	0,59	4,00	60,3	49,10	120,44	1,94
Manon	0,37	0,13	4,70	83,1	49,30	144,90	2,92
Mary			5,90	66,3	65,20	146,00
Paula			3,20	95,4	39,10	146,10
Stephanie	0,52	0,12	7,60	38,4	36,30	94,60	4,46
STŘED	0,68	0,28	5,08	68,70	47,80	130.40	3,11
STD	0, 34	0, 22	1,54	19,57	10,15	20,40	1,04

Tabulka 15

Olivy: muži

Vzorky........	.......campest	sitoste	FSR	LDL	HDL Celk. chol	camp/sit
Jméno	mg/dl	mg/dl	zás./d	mg/dl	mg/dl	mg/dl
Dave	6,20	7,80		56,3	47,00	122,70	0,79
Johan	3,60	7,60		89,3	40,70	142,00	0,47
John	6,90	15,60		55,1	39,20	116,70	0,44
Patrice	4,80	5,40		70,2	34,80	116,70	0,89
Alex	3,43	1,21	2,60	91,90	42,30	148,15 .	2,82
Grant	3,13	3,23	1,30	107,10	32,70	153,60	0,97
Jean	3,02	1,19	1,30	96,80	40,80	148,50	2,53
STŘED	4,44	6,00	1.73	82,39	39,64	135,49	1,27
STD	1,45	4,66	0,61	17,26	4,40	14,96	0,91

···* • ··

• · ···· ·· ·· * · » · • · · · * »»· ·· t « · • ·« ··

Tabulka 16

Olivy: ženy

Elizabeth	8,30	9,40	69,5	47,00	133,40	0,88
Mary
Paula				107,3	42,70	114,80
Stephanie	14,40	14,10		53,2	44.50	114,80	1,02
Lucy	0,81	0,60	3,70	89,40	68,70	174,00	1,35
STŘED	7,84	8,03	3,70	79,88	50,73	134,25	1,08
STD	5,56	5,60	0,00	20,37	10,49	24,17	0,20

Tabulka./! 7

Rostliny: muži

Vzorky........	.......campest	sitoste	FSR	LDL	HDL Celk. chol	camp/sit
Jméno	mg/dl	mg/dl	zás./d	mg/dl	mg/dl	mg/dl
Dave	6, 60	~50		47,4	46,00	110,00	0,88
Johan	4,70	10,20		88,2	36,50	138,80	0,46
John	10,30	12,60		71,8	41,10	124,70	0,82
Patrice	4,20	4,80		71,2	29,10	119,40	0,88
Alan			1,60	66,30	37,50	115,10
Grant	2,48	4,54	0,60	100,80	41,40	154,20	0,55
Jean			0,50	87,90	41,90	139,20
STŘED	5,66	7,93	0,90	76,23	39,07	128,77	0,72
STD	2,67	3,11	0,50	16,29	4,99	14,84	0,18

4444

Z 4 · « · 4444 4 444 444 * « 4 4 4 4 4 • 44 II* ·· * ·· **

Tabulka. 18

Rostliny: ženy
Vzorky.............. Jméno	. campest mg/dl	sitoste mg/dl	FSR zás./d	LDL mg/dl	HDL Celk. chol	camp/sit
mg/dl	mg/dl
4	Elizabeth	5,70	5,90		63	48,30	126,90	0,97
►	Mary	11,00	13,20		75,8	68,50	146,90	0,83
	Paula	12,00	14,50		94,3	39,10	135,30	0,83
•	Stephanie	12,90	14,40		47,6	44,10	117,90	0,90
	Lucy			5,60	91,80	42,80	147,20
	STŘED	10,40	12,00	5,60	74,54	46,56	134,84	0,88
	STD	2,80	3,56	0,00	17,54	6,65	11,39	0,08

	Tabulka	L2
	Klíčky: muži
	Vzorky.............	.. campest	sitoste	FSR	LDL	HDL Celk. chol	camp/sit
	Jméno	mg/dl	mg/dl	zás./d	mg/dl	mg/dl	mg/dl
	Dave	9,70	10,50		39,8	46,00	103,10	0,92
	Johan	13,90	7,00		85,8	35,00	136,00	1,99
	John	12,30	13,90		65,3	42,10	115,70	0,88
	Patrice	5.50	5,60		57,4	33,60	107,30	0,98
	Alan	6,32	2,33	7,10	68,70	32,50	110,40	2,71
	Grant	10,96	9,91	2.10	85,50	28,60	128,30	1.11
•	Jean	11,21	7,30	4,40	82,40	40,20	132,80	1,54
*	Simon			6,10	96,20	45,30	155,50
-	STŘED	9,98	8,08	4,93	72,64	37,91	123,39	1,45
4	STD	2,85	3,46	1,90	17,21	5,98	16,53	0,63

Tabulka 20

Klíčky: ženy
Vzorky......	... campest
Jméno	nrtg/dl
Elizabeth	‘ 9,30
Mary	18,40
Paula	6,70
Stephanie	4,40
Manon
STŘED	9,70
STD	5,31

sitoste	FSR	LDL
mg/dl	zás./d	mg/dl
11,50		55,8
21,50		97,4
7,00		84
10,00		45,5
	8,50	74,10
12,50	8,50	71,36
5,44	0,00	18,74

• ♦·*♦ «· · • ·*· * ♦ • * »·* ··· ·· · • · · « · · · • · «·»· • * · «« · • 9 ·· • · · · • · · » ··· ··· • · ·< ··

HDL Celk. chol	camp/sit
mg/dl	mg/dl
49,70	116,10	0,81
57.60	136,30	0,88
34,40	135,30	0,96
44,80	106,90	0,44
36.70	119,80
44,54	122,88	0,77
8,50	11,36	0,20

Diskuse

U fidí jsou známy dva obecné typy lipoproteinového cholesterolu a triglyceridů. Ženský typ překlenuje produktivní věk a vyznačuje se relativné nízkým TC* a LDL-Ch (špatný cholesterol) a vysokým HDL-Ch*** (dobrý cholesterol”) s vysokým TG****. Typický mužský typ má relativně vyšší TC a LDL-Ch a nižší HDL-Ch a TG. Prostředek Forbes nejen převrací mužský typ a posiluje ženské cholesterolové typy (TC, LDL-Ch, HDL-Ch), ale také snižuje ženský přebytek TG, který je rizikovým faktorem pro atherosklerozu, a upravuje nežádoucí vlivy stravy s olivovým olejem na cholesterol v krvi, To jsou velmi významné a neočekávané výsledky.

Výsledky pokusů jsou shrnuty v tabulce 21.

Tabulka 21 • » 9

9

999

9 « · ·»· ··· ♦ · · 9 * 9 9

9 9 9 9 9 9 9 ♦ ··♦· · ··· ··· • · · · · ·· · ·· ··

Jedinci s normálním obsahem cholesterolu na průměrné západní stravě s přidaným olivovým olejem, olivovým olejem a prostředkem Forbes FCP-3P1, olivovým olejem a prostředkem s obsahem sójových rostlinných sterolů (Nulife)

Relativní změny v % vůči stravě s obsahem olivového oleje vyjádřené jako 100%

Muži Ženy

Strava	TC	LDL-C	HDL-C	TG	TC	LDL-C	HDL-C	TG
Olivový olej	100%	100%	100%	100%	100%	100%	100%	100%
Oliv.olej + Forbes	92,8%	83,0%	108,3%	105,8%	92,6%	90,9%	103,2%	74%
Oliv. olej + NuIife	97,9%	94,5%	101,5%	108,2%	100,9%	100,6%	103,6%	94,3%

(Vyjádřeno jako průměrná—odchylka v % od základní hodnoty pra stravu s olivovým olejem.

TC* - celkový cholesterol

LDL-Ch**-lipoproteinový cholesterol s nízkou měrnou hmotností HDL-Ch***- lipoproteinový cholesterol s vysokou měrnou hmotností TG****, triglyceridy

Diskuse

Výsledky této studie ukazují, že požíváni směsi fytosterolů Forbes významně snižuje koncentraci celkového cholesterolu a LDL cholesterolu v plazmě s porovnání s těmito hodnotami pro stravu s • «·· ·· · • 999 • · · • · • 99999 ·· 9

9 9

9 9 9

9 9999 9 «99

9

99 * · 9 9

9 9 9 •99 999

9

99 olivovým olejem. Koncentrace cholesterolu LDL jsou rovněž výrazně sníženy ve skupině s požíváním prostředku Forbes ve srovnání s skupinou přijímající fytosteroly Nulife. Ve skupině s fytosteroly Forbes bylo zjištěno kompenzační zvýšení trakční rychlosti syntézy cholesterolu. Toto zvýšení biosyntézy cholesterolu pravděpodobně následuje po snížení koncentrace cholesterolu v plazmě prostřednictví ztrát cholesterolu ve střevech. Ve skupině s fytosterolem Forbes se rovněž projevuje znatelně nižší absorbci fytosterolů do krevního řečiště v porovnání s ostatními skupinami. Sitostanol byl navíc v plazmě jedinců nedetekovatelný, bez ohledu na to, jakou směs fytosterolů jedinec přijímal.

Předpokládá se, že sitostanol inhibuje absorbci fytosterolů stejně jako cholesterolu do krevního řečiště. Skupina s olivovým olejem slouží jako kontrolní pro skupiny s Forbes a Nulife prostředky, v nichž byly všechny proměnné konstantní kromě těch, které se vztahují ke konkrétním směsím fytosterolů. Skutečnost, že koncentrace celkového cholesterolu i LDL cholesterolu se ve skupině Forbes (na rozdíl do skupiny Nulife) značně snížily napovídá, že sitostanol inhibuje cholesterol a jeho absorbci více, než jakýkoliv fytosterol obsažený v prostředku Nulife. Stále zde přetrvává možnost, že jde o interaktivní vliv různých fytosterolů smíchaných dohromady v jedné směsi spíše, než o vliv jedné složky, ovlivňující metabolismus cholesterolu. Tato možnost se však zdá nepravděpodobná, protože vliv čistého sitostanolu ve srovnání se směsí fytosterolů Forbes byla testována na morčatech a koncentrace celkového cholesterolu a LDL cholesterolu byla nižší u skupiny se sitostanolem (nepublikované výsledky). Překvapivě byly koncentrace HDL cholesterolu ve skupině se sitostanolem • ··· ·· · ·· ·· • . · » ·*«· • «»· ·..« · ·· · • · · · · ·*·« · ··· ··· * » · · · · · »·· ··· ·* · »· ·· nižší, než u skupiny s prostředek Forbes. Sitostanol je pravděpodobně více aktivní složkou v oblasti změn metabolismu cholesterolu, ale jeho aktivita se zvyšuje v přítomnosti ostatních fytosterolů ve směsi Forbes.

Je zajímavé poznamenat, že ačkoliv beta-sitosterol je hlavní složkou směsi fytosterolů Forbes, v plazmě je vyšší koncentrace kampesterolu. Je pravděpodobné, že přítomnost sitostanolu selektivně inhibuje absorbci nebo podporuje vylučování sitosterolu na rozdíl od kampesterolu. Uvažuje se o tom, že by tato činnost mohla působit jako sekundární efekt, konkurujíc! inhibicí absorbce cholesterolu.

Zatímco výsledky ukazují, že sitostanol je při změnách absorbce cholesterolu do krevního řečiště účinnější, než kampesterol a sitosterol, toto zvýšení je v souhlasu se zvýšením frakčnf rychlosti syntézy. Hypocholesterolemický efekt fytosterolů je zřejmě výsledkemjjihibice absorbce cholesterolu nebo zastoupení cholesterolu v syntéze a vylučování. Fytosterolu tedy mohou zastoupit cholesterol ve smíšených micelách při absorbci tuků, což má za následek snížení rychlosti absorbce cholesterolu ve střevě. Zatím není známo, zda fytosteroly realizují tento svůj vliv uvnitř střeva tím, že zadržují cholesterol, nebo v mukóze střeva tím, že zabraňují shlukování a přechodu chylomikronů do krve.

U testovaných žen a mužů byla demonstrována napřič celému profilu lipidů a lipoproteinů žádoucí odezva na podávání prostředku Forbes.

• ΒΒΒ» Β· · ·· ·· «Β » Β « · · Β · Β • ΒΒΒ · ··· · ♦· · • « · · Β «ΒΒΒ Β «I» ΒΒ·

Β ΒΒΒ* Β Β

ΒΒΒ ΒΒΒ Β· * ·· ·♦

Nízká koncentrace HDL-Ch za kardiovaskulární rizikový faktor jak u mužů, tak u žen. Jedinci s vysokým HDL-Ch mají nižší riziko nemoci věnčitých tepen než jedinci s nízkým HDL-Ch, zvláště v přítomnosti dalších rizikových faktorů, jako je vysoká koncentrace LDL-Ch. Z toho plyne, že vysoký poměr HDL-Ch:LDL-Ch se považuje za negativní” rizikový faktor kardiovaskulárních chorob.

Tabulka 22 zaznamenává znatelné zvýšení 30,3% poměru HDL-Ch:LDL-Ch u mužů u stravy obohacené olivovým olejem s prostředkem Forbes ve srovnání s tímto poměrem u žen.

Tabulka .22

Poměr HDL/LDL*

Strava	Oliv. olej	Oliv. olej+Forbes	Oliv. olej + Nulife
Muži	0,483	0,632	0,519
Ženy	0,609	0,695	0,627

* člm vyšší poměr, tím nižší riziko atherosklerozy

Příklad 2: Studie lidi - profily v závislosti na pohlaví

Metabolické studie v příklady 1 ukazují, že u mužů má nasycený tuk vztah k atheroskleroze tím, že se zvyšuje absorbce ·«·· • · · 9 9 1 · 9 9 f • ··· * · * 9 9 · · «

9 « · 9 9999 « 999 9·» · 9 · 9 «

999 ·99 ·9 9 · 99 více hydrofobních sterolů ve střevech (cholesterol a beta-sitosterol) pomocí zvýšeni biologické dostupnosti (rozpustnosti). Oleje s nízkým obsahem rostlinných sterolů (olivový olej) zvyšují absorbci beta-sitosterolu a cholesterolu tím, že mají vysoký obsah nasycených a mononenasycených mastných kyselin (tabulka 23). Rostlinné oleje s vysokým obsahem rostlinných sterolů a polynenasycených mastných kyselin (olej z kukuřičných klíčků) mění absorbci rostlinných sterolů tím, že se zvyšuje malou absorbci hydrofobních sterolů (kampesterolu) ve střevech.

Tabulka 23

	beta-sitosterol	kampesterol	sitostanol	poměr kampesterol/ beta-sitosterol
Nulife	54,5 %	33,2 %	-	1,64
FCP-3P1 (Forbes)	51,7 %	18,3 %	21,4 %	2,8
Olivový olej	49,7 %	-	-	-

- nedekovatelné pomocí analýzy GLC

Vliv olejů rostlinných sterolů v potravě se liší podle pohlaví a lze jej měnit složením rostlinných sterolů mastných kyselin v potravě . Důsledkem stravy s vysokým obsahem nasycených tuků je u mužů zvýšení cholesterolu v plazmě, u žen je to zvýšení triglyceridů v plazmě. Tento vliv je významně modifikován u obou pohlaví prostředkem podle vynálezu (FCP-3P1 nebo Forbes) a /,1 · «·»· ·* » ·· ··

Iv ··· » · í * · · · ♦ ··· · · · · · · · » * * * * · ···· · ··· «·♦ • ··♦· ·.· ·», ,,, *« * ·» *· kukuřičným olejem s vysokým obsahem polynenasycených mastných kyselin, v důsledku toho, strava s vysokým obsahem nasycených tuků nepředstavuje riziko kardiovaskulárních chorob a atherogenicita této stravy je závislá na dalších složkách potravy a pohlaví jedince. Komerčně dostupné extrakty rostlinných sterolů neupravuji vliv nasycených mastných kyselin, indikujících koefekt mezi rostlinnými sterolu a polynenasycenými mastnými kyselinami. Tento vliv nacházíme u experimentální stravy s olejem z kukuřičných klíčků, pro niž je charakteristická vysoká koncentrace rostlinných sterolů v plazmě.

Efekt FCP-3P1 u žen se nejprve projevuje znatelným snížením beta-sitosterolu v plazmě a zvýšením kampesterolu s vysokým poměrem kampesterol/beta-sitosterol, což odpovídá sníženi absorbce hydrofobnějších sterolů ve střevě.

U mužů zvýšení poměru kampesterol/beta-sitosterol indikuje přesun absorbce sterolů ve střevech směrem hydrofobnějším sterolům. V experimentech se jedinci mužského pohlaví vykazoval kampesterol pozitivní korelaci s HDL-cholesterolem a syntézou cholesterolu a negativní korelaci s celkovým cholesterolem a LDLcholesterolem (Tab II. a III.)

Tabulka 24 • «9«9 ·· · ·· »· ·· · 0 · » ··«· • «·· φ · · ♦ ··«· • · Ο « « ·»·· 9 ·· ·«» « · 9 · * · · «*· ·>» 9* 9 ·· ··

Syntéza volného cholesterolu j v červené krvince

Forbes Nulife Olivy Kličky

Testovaná skupina

Tabulka 25

HDL/LDL, korelace kampesterol/beta-sitosterol *

Muži	Že	ny
Oliv. olej	Forbes FCP-3P1	Nulife	Kl. olej	Oliv. olej	Forbes FGP- 3P1	Nulife	Kl. olej
Ull·	nnn	V	a	v	fí	0

fl - pozitivní korelace

U - negativní korelace * vztaženo k Forbes FCP-3P1

U mužů je poměr kampesterol/beta-sitosterol nezávislým negativním markérem rizika kardiovaskulárních chorob a může být použit pro monitorování shody FCP-3P1 a jeho účinnosti nezávisle • ··» ♦

t * ··· »e * • fc • e t • · · ft • » e ·· * · ·· • · * t • » * · • · · ··· » · ·» »· na cholesterolu (tabulka 26). Nízký poměr kampesterol/betasitosterol indikuje vysoké riziko kardiovaskulárních chorob. Tabulka 25 ukazuje pozitivní korelaci mezi HDL/LDL a poměry kampesterol/beta-sitosterol jak u mužů, tak u žen, kteří přijímají stravu obohacenou FCP-3P1.

Tabulka 26

Rostlinné steroly jako markéry rizika kardiovaskulárních chorob

Strava	Kampestero I v plazmě (mg/dl)	beta- Sitosterol v plazmě (mg/dl)	Poměr kampesterol/ beta-sitosterol	Poměr rošt. sterolů muži/ženy
	Muži	Ženy	Muži	Ženy	Muži	Ženy	Kampe sterol	β-Sito sterol
Oliv. olej	4,4	7,8	6,0	8,0	0,73	0,97	0,56	0,75
Forbes FCP-3P1	1,3	2,2	0,8	0,2	1,62	10,0	0,59	4,00
Rošt. steroly	5,0	10,4	6,6	12,0	0,76	0,86	0,48	0,55
Kukuř. olej	9,9	9,7	7,0	12,5	1,4	0,78	1,02	0,56

Znatelné kompenzační zvýšení hepatické cholesterolové syntézy FCP-3P1 může být inhibováno statiny. Tento klinicky • ·♦*» *4 · 4 4 · • ·4· » · 4 4 • 4 4 « 4 ·♦· • 4 *i ·

4·« ·· «4 «

4· * ·

4 4 ·* «

• 4 *

• • 4 · 4

4* významný společný účinek může být sledován měřením změn v poměru kampesterol/beta-sitosterol a může vést k úplné odstranění cholesterolu z těla.

Koncentrace rostlinných sterolů a poměr kampesterol/betasitosterol jsou významnými indikátory potravních návyků a mohou sloužit jako důležitý nástroj fyziologické diagnostiky pro sledování účinnosti různých léčebných postupů, vhodnosti diety a pro pomoc praktickým lékařům při vyhodnocování rizika kardiovaskulárních chorob více, než cholesterol. Zvýšení koncentrace kampesterolu v plazmě indikuje posun k normálním hodnotám celkového cholesterolu, LDL- cholesterolu, HDL-cholesterolu a triglyceridů, zatímco zvýšení beta-sitosterolu a/nebo obrácený poměr kampesterol/beta-sitosterol indikují vysoké riziko kardiovaskulárních chorob při stravě s vysokým obsahem nasycených tuků a u chorob s poruchami metabolismu lipidů. {Tabulky 26 a 27).

Tabulka 27

Kolerace mezi lipoproteiny v plazmě a rostlinnými steroly

Strava

TC

LDLHDL-C

TG

Kampe beta74

444« «4« 4 · · 4 4 4

444 »444 444 » • · 4 4 4 4444 4 444 444 » 4 4 « 4 · 4

444 444 «4 * 44*4

			c			sterol	Sitoste rol
Oliv.	F2	ft			fífítt	n	ft
olej	M3	UU	no		u =>	íl	nu
Rošt.	F	UU	ÍIU			n	nu
steroly	M	UU			nu	n	nu
FCP-3P1	F	II	II	n	uuu	nu	uuu
+ Ol.olej	M	II	Ulili			nu	uu
Kukuř.	F	uu	uu	II =>	uu	nu	nnn
olej	M	IIII	IIII	uu	u^	nnn	nu

2. Ženy

3. Muži

Olivový olej: Pozitivní korelace se zvýšením cholesterolu a beta-sitosterolem (F&M)

Rostlinné steroly: Pozitivní korelace se zvýšením cholesterolu a rostlinnými steroly (F&M)

FCP-3P1: Pozitivní korelace s HDL/kampesterolem (F&M) a syntézou cholesterolu olej z kukuřičných klíčků: Negativní korelace s cholesterolem, triglyceridy a kampesterolem u mužů a s beta-sitosterolem u žen.

Plazmový kampesterol představuje méně vydatné, více hydrofilní rostlinné steroly v potravě a u mužů je negativně spojen s absorbci cholesterolu a rizikem kardiovaskulárních chorob. Vydatnější beta-sitosterol v plazmě představuje hydrofobnější ♦·»» *· « ·· ♦* »* · · « » A»·· • ··· » « 9 · · · · φ • · « * · ··· « ··· ··· » a « · · · ♦ ·· «·· ét 4 ·· rostlinné steroly a je pozitivně spojen s absorbci cholesterolu. Mastné kyseliny mají s rostlinnými steroly významný koefekt. Strava s olivovým olejem s nízkým obsahem rostlinných sterolů v potravě způsobuje relativně vysoké koncentrace sterolů v plazmě. Poměr kampesterol/beta-sitosterol v plazmě je relativně stálý navzdory nízkému obsahu kampesterolu v olivovém oleji. Zvýšeni obsahu rostlinných sterolů v potravě vede k vyšší koncentraci rostlinných sterolů v plazmě, ale poměr kampesterol/beta-sitosterol zůstává relativně stálý s malým vlivem na profil lipidů. Mononenasycené a nasycené mastné kyseliny zvyšují absorbci hydrofobnějších sterolů ve střevě a mají koefekt s beta-sitosterolem a cholesterolem. U mužů mají oleje bohaté na rostlinné steroly a polynasycené mastné kyseliny koefekt s kampesterolem. Oleje bohaté na polynenasycené mastné kyseliny u žen snižují obsah triglyceridů, stejně jako směs FCP-3P1. Tato zjištění mají závažné důsledky pro atherogenicitu západní stravy.

Výzkumy s prostředkem Forbes ukazují, že strava má významný vliv na metabolismus cholesterolů, který vede k kvalitativním a kvantitativním změnám v profilu lipidů u obou pohlaví.

FCP-3P1 zlepšuje u mužů i žen profily lipidů z hlediska kvantitativního i kvalitativního a tento vliv je nezávislý na složení potravy , což umožňuje volné použití nasycených tuků. (Tabulka 28)

Tabulka 28

Jedinci s normálním obsahem cholesterolu na průměrné západní stravě s přidaným olivovým olejem, olivovým olejem a prostředkem

4 • · · 4 4 · 4 4 ··· 4«·· · 4 · 4 • 4 4 4 »444 4 «44 44«

Forbes FCP-3P1, olivovým olejem a prostředkem s obsahem sójových rostlinných sterolů (Nulife)

Relativní změny v % vůči stravě s obsahem olivového oleje vyjádřené jako 100 %

Muži Ženy

Strava	TC	LDL-C	HDL-C	TG	TC	LDL-C	HDL-C	TG
Olivový olej	100%	100%	100%	100%	100%	100%	100%	100%
Oliv.olej + Forb	92,8%	83,0%	108,3%	105,8%	92,6%	90,9%	103,2%	74%
Oliv, olej + Nulife	97,9%	94,5%	101,5%	108,2%	100,9%	100,6%	103,6%	94,3%

(Vyjádřeno jako průměrná odchylka v % od základní hodnoty pro stravu s olivovým olejem.

Cholesterol v potravě 350 mg -400mg TC - celkový cholesterol

LDL-Ch - lipoproteinový cholesterol s nízkou měrnou hmotností HDL-Ch - lipoproteinový cholesterol s vysokou měrnou hmotností TG - triglyceridy

U lidí jsou známy dva obecné typy lípoproteinového cholesterolu a triglyceridú. Ženský typ překlenuje produktivní věk a vyznačuje se relativně nízkým TC* a LDL-Ch (špatný cholesterol”) a vysokým HDL-Ch*** (dobrý” cholesterol) s vysokým TG****. Typický mužský typ má relativně vyšší TC a LDL-Ch a nižší HDL-Ch a TG, Prostředek Forbes nejen převrací mužský typ a posiluje ženské cholesterolové typy (TC, LDL-Ch, HDL-Ch), ale také snižuje ženský přebytek TG, který je rizikovým faktorem pro atherosklerozu, a upravuje nežádoucí vlivy stravy s olivovým olejem na cholesterol •*·· ·· · 4 4 *4 • *44 4 4 4 «

444 4 4 4 4 4 4 4 *

4 4 4 4444 · *»· «44 • · 4 ft 4 4 * ··» 4» * «4 4« v krvi.

U testovaných žen a mužů byla demostrována napříč celému profilu lipidů a lipoproteinů žádoucí odezva na podávání prostředku FCP-3P1 Forbes.

Nízká koncentrace HDL-Ch za kardiovaskulární rizikový faktor jak u mužů, tak u žen. Jedinci s vysokým HDL-Ch mají nižší riziko nemoci věnčitých tepen než jedinci s nízkým HDL-Ch, zvláště v přítomnosti dalších rizikových faktorů, jako je vysoká koncentrace LDL-Ch. Z toho plyne, že vysoký poměr HDL-Ch:LDL-Ch se považuje za negativní” rizikový faktor kardiovaskulárních chorob.

Tabulka 22 (nahoře) zaznamenává znatelné zvýšení 30,3% poměru HDL-Ch:LDL-Ch u mužů u stravy obohacené olivovým olejem s prostředkem Forbes ve srovnání s tímto poměrem u žen.

Byla provedena krátkodobá studie s nízkými dávkami. Testy na lidských subjektech obvykle vyžadují plný terapeutický efekt, aby probíhaly několik měsíců. Běžné rostlinné steroly, kterých je mnoho ve vegetariánské stravě, vykazuji po dobu 50 let, kdy jsou v experimentálním i klinickém používání, solidní účinnost.

V běžné západní stravě s vysokým obsahem nasycených tuků a cholesterolu inhibuje FCP-3P1 absorbci jak cholesterolu, tak beta-sitosterolu tím, že demaskuje rozdíly v metabolismu kampestanolu u různých pohlaví, přičemž koncentrace kampesterolu v plazmě jsou u žen vyšší zřejmě vlivem rychlejšího enterohepatického kampesterolového cyklu, což je způsobeno • ««99 9« * ·* »* *· ta ·«« * 9 · · • ·♦· A 9 + 9 ta * · · »99* ···· « ··· 9·* inhibici vylučování beta-sitosterolu hepatocyty do plazmy. U mužů není tento posun tak patrný, díky tomu, že absorbce sterolů ve střevech je více posunuto směrem k více hydrofobnímu betasitosterolu. Tento posun v mužském typu absorbce sterolů je opačný k ženskému typu absorbce FCP-3P1.

Metabolické studie potravy s prostředky Forbes definují dva typy stravováni:

Typ I - (jižní nebo středozemní typ)

Vykazuje vysoký obsah mononenasycených mastných kyselin a nasycených mastných kyselin a nízký obsah rostlinných sterolů polynenasycených mastných kyselin a nízký obsah cholesterolu. Převážně cholesterolový mechanismus této stravy směřuje k ochraně endogenních (vnitřních) zdrojů cholesterolu tím, že jsou limitovány enterohepatické ztráty cholesterolu. Tato část populace má vysoký HDL-C, což odpovídá zvýšené potřebě cholesterolu v tkáních a nižší TC a LDL-C. Riziko vzniku kardiovaskulárních chorob v důsledku stravy je nízké, ale za nepříznivého stavu metabolismu potravy může být tato strava atherogenní.

Typ II (severní nebo západní typ)

Tento typ stravy má vysoký obsah polynenasycených mastných kyselin, vysoký obsah rostlinných sterolů a vysoký obsah • ΒΒΒ • Β · ΒΒ ·Β ♦ Β · · · Β ΒΒΒΒ

Β ·ΒΒ Β · Β Β Β Β Β *

Β * * Β Β Β·Β· · ··· Β<Β

Β Β Β » Β Β Β

Ο· «ΒΒ «Β Β ΒΒ ΒΒ cholesterolu. Převážně cholesterolový metabolismus vede k odstranění přebytku cholesterolu tím, že zvyšují ztráty v enterohepatických zásobách cholesterolu . Populace má obecně nižší HDL-C, vysoký TC a vysoký LDL-C, což odpovídá snížení potřeby cholesterolu v tkáních. Riziko kardiovaskulárních chorob v důsledku stravy je vyšší než u jižního a středozemního typu stravy, ale může se měnit v důsledku různých podmínek metabolismu potravy.

Studie vlivu prostředku s FCP 3P1 rostlinnými steroly na metabolismus cholesterolu u jedinců s normálním obsahem cholesterolu konzumujících běžnou západní stravu za řízených laboratorních podmínek vedla k odhalení dvou specifických metabolických typů závislých na pohlaví.

A. Ženský typ

Spojen s relativně nízkou koncentrací TC a LDL-cholesterolu a vysokou koncentrací HDL-cholesterolu a vysokou koncentrací triglyceridů. Potravním markérem u ženského typu je kampesteroi. Poměr kampesterol/beta-sitosterol je vysoký.

B. Mužský typ

Spojen s vysokou koncentrací TC a LDL-cholesterolu a nízkou koncentrací TG. Potravním markérem u mužského typu je ου • «»·· ·« » ·« ·· ·*· · » fc · · · · • ♦♦· » · » · »·»» t ♦ « » * «*«« * *«· ··* * * » 9 9 9 9

999 ··» »♦ » ** ·» beta-sitosterol. Poměr kampesterol/beta-sitosterol je nízký.

Poruchy metabolismu lipidů

Pacienti mají velmi nízký poměr kampesterol/beta-sitosterol.

U potravního typu I. i typu II. i u obou pohlaví se vyskytuje významný společný účinek složek potravy.

I. Koefekt mezi nasycenými mastnými kyselinami a absorbci cholesterolu ze zásob cholesterolu u stravy typu I jak u mužů, tak u žen.

II, Koefekt mezi rostlinnými steroly a polymerními polynenasycenými mastnými kyselinami jak u mužů, tak u žen.

a) koefekt u žen:

Zlepšení v profilu cholesterolu indikující společný účinek mastných kyselin v potravě a kampesterolu s estrogenem na přenos cholesterolu enterocyty.

b) koefekt u mužů:

Inhibice vlivu mužských hormonů na absorbci cholesterolu enterocyty prostřednictvím snížení beta-sitosterolu a cholesterolu a zvýšenou absorbci kampesterolu.

» ··>·. *« * ·· ·» » · · « * * ♦ · » » ·#· »«·* »·«» • ♦ « * ♦ ···· » ··· ··· * « * » · · » ♦ ♦ ·«· «· · ·« ··

Příklad 3: Testy na králících

V následujícím příkladu se zjišťuje vliv rostlinných sterolů, odvozených od sójových bobů, prostředku podle vynálezu (Forbes) nebo čistého sitostanolu na aktivitu lecitincholesterolacetyltransferázy (LCAT) v plazmě a na rychlost esterifikace volného cholesterolu novozélandských bílých králíků (NZW) mužského pohlaví, krmených po dobu 65 dnů 0,5 % cholesterolu.

Metody

Dvacet čtyři NZW králíků o hmotnosti 1,6 až 1,8 kg bylo rozděleno do čtyř skupin (n=6). Byli umístěni po dobu dvou týdnů v zařízení pro zvířata McGillovy university, poté byli po dobu 65 dnů krmeni středně čištěnou stravou. Všechny skupiny dostávaly ve stravě 0,5 % cholesterolu. Tři skupiny navíc dostávaly jednu ze tří směsí rostlinných sterolů: sójová směs (65 % beta-sitosterolu, 20 % kampesterolu a 15 % dihydrobrasikasterolu), směs Forbes jako jedno z provedení tohoto vynálezu (65 % beta-sitosterolu, 16 % kampesterolu a 17 % sitostanolu) a sitostanolová směs (89 % čistý sitostanol se stopami acylů mastných kyselin s dlouhým řetězcem a kampestanotu). Příjem potravy byl měřen každé tři dny, tělesná hmotnost byla měřena jednou za týden.

Aktivita LCAT a rychlost esterifikace cholesterolu v plazmě byly změřeny v Nemocnici St. Paul ve Vancouveru (laboratoř Dr, Frholicha). Detailní postupy stanovení poskytne ředitel ASL, Dr.

··*·

4« 4 ·· ·· • 4 4 4 «444

4·4 4 444 4 4« 4 « 4 4 4·4· 4 ·· 444 • 4 4 4 4 4

44* *4 4 44 ·♦

Pritchard.

Stručný popis stanoveni: Bylo smícháno 30 pl cholesterolu značkovaného H³ v ethanolosomu s 10 pl apo-A a 85 pl pufru, směs byla inkubována po dobu 30 minut při 37 °C. Potom byla směs přidána do 15 pl vzorku plazmy ve skleněné kultivační zkumavce, do níž bylo přidáno 60 pl BSA/beta-merkaptoethanolu. Směs se vzorkem byla inkubována po dobu 30 minut při 37 °C. Enzymatická reakce byla zastavena přídavkem 1 ml 99 % ethanolu. Vzorky byly poté inkubovány po dobu 1 hodiny při 60 °C, centrifugovány po dobu 10 minut při 3000 ot/min (1710x g), potom převedeny do čistých skleněných zkumavek a vysušeny pod dusíkem při 60 °C. Do každého vzorku ve zkumavce byl přidán vnitřní standard volného cholesterolu a esteru cholesterolu. Extrakty lipidů byly resuspendovány v 50 pl choloroformu a naneseny na předem upravenou plastikovou plotnu pro TLC krytou silikagelem 60 F₂₅₄ (E. Merck). Plotny byly vyvinuty v skleněném tanku, který obsahoval a byl nasycen petroletherem, diethyletherem a kyselinou octovou {105:18:1,5 obj.) po dobu 8 - 10 minut.“Neesterifikovaný cholesterol a esterové vazby cholesteroly byly vizualizovány jódem po převedení do scintilační nádobky o obsahu 5 ml. Do každé nádobky byl přidán toluen s obsahem omnifluoru (4 g/l) a před měření směs jednu hodinu stála. Rychlost esterifikace cholesterolu (FER) byla změřena po ustavení rovnováhy a značkování vnitřního volného cholesterolu po dobu 24 hodin pomocí ³H-cholesterolu. Postupy při stanoveni esterifikovaného cholesterolu jsou podobné postupům zde popsaným.

* *··· »· · »· ·· ·» * » · * » · · » ··· » · · · * ♦ · » » · « * » »»·· » »»· ··» • · · · » · · **· ··« ** * »* ·»

Výsledky

Příjem potravy u jednotlivých skupiny nevykazoval významnější rozdíly. Králíci denně přijímali od 54,6 do 87,6 g potravy. Denní příjem potravy u králíků během období před započetí pokusů bylo kolem 100 g za den.

Aktivita LCAT a rychlost esterífikace cholesterolu

Získané výsledku ukazují snížení aktivity LCAT o 31,1 % u skupiny krmené prostředek Forbes ve srovnání s kontrolní skupinou, střední hodnoty jsou 11,58 ± 2,06, resp. 16,81 ± 5,34 nmol/h/ml. Střední hodnota však nebyla signifikantní, P = 0,16 (Obr. 8). Aktivita LCAT u lidí vykazovala hodnotu 28,86 nmol/h/ml, zatímco aktivita LCAT u králíků měla hodnotu 49,44 nmol/h/ml. Obě tyto hodnoty jsou v souhlasu s předpokládanou normální hodnotou. Hodnoty FER byly nejnižší u skupiny sójového a talového oleje: středníi hod noty byly 0,496 ± 0,2, resp. 0,82 U_0,19 %/h. Střední hodnota aktivity byla význačně rozdílná ve srovnání s hodnotou pro skupinu sitostanolu, P = 0,014 (Obr. 9). Střední rychlost esterífikace cholesterolu byla nejvyšší u skupiny ovlivňované sitostanolem, zatímco u skupiny se sójou byla nejnižší: obě skupiny se významně lišily, P< 0,05 (Obr. 10). Poměr neesterifikovaného k esterifikovanému cholesterolu se pohyboval od 24 do 42 %. U různých skupin nebyly zjištěny rozdíly ve středních hodnotách.

Aktivita LCAT byla nejnižší u skupiny ovlivňované prostředkem Forbes. Aktivita LCAT u normálních králíků (králíci nekrmení cholesterolem ani fytosterolem) byla o více než 168 % vyšší, než u ··*· ·« · ·· ·· ··» « ·« ···» • »·· k ·· * ·· * t · a » * »·♦» · ··· ··* * * · · » * · ··· ·· ·· * ·· ·· kterékoliv skupiny krmené cholesterolem. Prvním vysvětlením tohoto jevu je, že limitujícím faktorem ve vzorku byl obsah enzymu. To znamená, že u králíků s extrémně vysokým obsahem lipidů {200 až 577 mg/dl neesterifikovaného cholesterolu (UC)), může LCAT esterifikovat určitou koncentraci endogenního a exogenního UC (30wg), ale ne všechen dostupný UC. LCAT je vyčerpán dřív, než esterifikuje všechen endogenní a exogenní UC. Jiným možným vysvětlením je, že při vysoké koncentraci cholesterolu v plazmě jsou lipoproteiny agregovány ve větších částicích, které jsou pro LCAT enzym hůře dostupné. Tento faktor by mohl vysvětlit zjištěnou nízkou aktivitu, ale nevysvětluje, proč má skupina s prostředkem Forbes nižší aktivitu než ostatní tři skupiny. Skupina ovlivňovaná sitostanolem vykazuje aktivitu LCAT podobnou , jako kontrolní skupina, zatímco skupina se sójou ji má nižší a skupina s prostředkem Forbes nejnižší. Skupina se sitostanolem má nejnižší rychlost absorbce ve srovnání s ostatními dvěma skupinami ovlivňovanými rostlinnými steroly, což napovídá, že sitostanol nevykazuje žádný interní účinek vliv na enzymy LCAT, kdežto absorbovatelnější-fytosteroly jistý vliv vykazují. Hodnoty -FÉR byly nejvyšší u skupiny se sitostanolem, která měl nejnižší koncentraci cholesterolu. To koreluje s vysokou aktivitou LCAT ve stejné skupině, což ukazuje, že při této celkové koncentraci cholesterolu (635 mg/dl), není LCAT negativné regulována cholesterolem .

Shrnutí: esterifikace cholesterolu v krvi vede ke zvýšení atherogenicity cholesterolu. Při testech na králících se podávání prostředku podle vynálezu projevilo snížení aktivity LCAT o 31,1 %. Poměr celkového fytosterolu/cholesterolu v plazmě byl 2:1, což indikuje interní účinek a potvrzuje zde popsaný dvojitý vliv fytosterolů.

Claims (29)

1. Patentové nároky

   1. Způsob stanovení poměru kampesterolu k beta-sitosterolu v plazmě u živočichů, zahrnující následující kroky:

   pořízení vzorku plazmy určení koncentrace kampesterolu ve vzorku určení koncentrace beta-sitosterolu ve vzorku vydělení koncentrace kampesterolu koncentrací betasitosterolu, čímž se získá poměr kampesterol/beta-sitosterol, a _ porovnání poměru kampesterol/beta-sitosterol s normálním kontrolním vzorkem, vyznačující se tím, že jako indikátor rizika kardiovaskulárních chorob u živočichů se volí poměr kampesterol/beta-sitosterol, a stanoví se korelace tohoto poměru k uvedenému ohrožení.
2. 2. Způsob podle nároku 1 vyznačující se tím, že poměr kampesterol/beta-sitosterol v normálním kontrolním vzorku není nižší než 0,75.
3. 3. Způsob podle nároku 1 vyznačující se tím, že poměr • ··· «· ♦· »· ·* * ··* · ·» · • ··· * ··* · ·· · • · * · *·»· · ··· ··· • · » · * · · *·· ··» ·· · »· ·· kampesterol/beta-sitosterol v normálním kontrolním vzorku je mezi 1,0 až 1,5.
4. 4. Způsob podle nároku 1 vyznačující se tím, že uvedeným živočichem je člověk.
5. 5. Způsob vyhodnocování rizika kardiovaskulárních chorob a poruch metabolismu lipidů u živočichů, vyznačující se tím, že zahrnuje stanovení poměru kampesterol k beta-sitosterol v plazmě u živočichů, stanovení koncentrace celkového fytosterolu v plazmě u živočichů, stanovení celkové koncentrace cholesterolu v plazmě u živočichů, vypočítání poměru a takto získaných dvou koncentrací s odpovídajícími .
6. 6. Způsob podle nároku 5 vyznačující se tím, že poměr kampesterol k beta-sitosterolu u normálního kontrolního živočicha není nižší než 0,75.
7. 7. Způsob podle nároku 5 vyznačující se tím, že poměr kampesterol k beta-sitosterolu v plazmě u normálního kontrolního ·*· ··· »··» • ··· « · · * · · · · • · · · · ···· · ··· ··· • · · · · · · ·« «·» »· · ·· ·* živočicha je mezi 1,0 až 1,5.
8. 8. Způsob podle nároku 5 vyznačující se tím, koncentrace celkového cholesterolu v plazmě u normálního kontrolního živočicha není vyšší než 5,2 mmol/l.
9. 9. Způsob podle nároku 5 vyznačující se tím, koncentrace celkového fytosterolu v plazmě u normálního kontrolního živočicha není vyšší než 2,0 až 6,0 μπιοΙ/Ι.
10. 10. Způsob podle nároku 5 vyznačující se tím, že uvedeným živočichem je člověk.
11. 11. Způsob zvyšování inhibičního vlivu fytosterolů na absorbci cholesterolu enterocyty u živočichů vyznačující se tím, že zahrnuje podávání prostředku živočichům, který obsahuje jeden nebo více fytosterolů, přičemž tento prostředek inhibuje absorbci cholesterolu nebo absorbci cholesterolu a beta-sitosterolu.
12. 12. Způsob podle nároku 11 vyznačující se tím, že fytosterol je v podstatě hydrofobní.
13. 13. Způsob podle nároku 11 vyznačující se tím, že fytosterol je vybrán ze skupiny zahrnující kampesterol a sitostanol.
14. 14. Způsob podle nároku 11 vyznačující se tím, že prostředek se používá jako doplněk rostlinných olejů.

    • ·*·· »· · * ·♦· • * • · ·· · ee ·· » · » • e · · · · · • * * t ··»· • * ···· · ·♦· ··· • · ♦ · · ·· · »· ·
15. 15. Způsob podle nároku 11 vyznačující se tím, že prostředek je používán jako doplněk olejů, vybraných ze skupiny zahrnující saflorový olej, sesamový olej, olej z kukuřičných klíčků, olej z rýžových otrub, olivový olej, řepkový olej, lněný olej a kokosový olej.
16. 16. Prostředek pro zvyšování inhibičního vlivu fytosterolů na absorbcí cholesterolu enterocyty u živočichů vyznačující se tím, že zahrnuje podávání prostředku živočichům, který obsahuje jeden nebo více fytosterolů, přičemž tento prostředek inhibuje absorbcí cholesterolu nebo absorbcí cholesterolu a beta-sitosterolu.
17. 17. Prostředek podle nároku 16 vyznačující se tím, že fytosterol je v podstatě hydrofobní.
18. 18. Prostředek podle nároku 16 vyznačující se tím, že fytosterol je vybrán ze skupiny zahrnující kampesterol a sitostanol.
19. 19. Prostředek podle nároku 16 vyznačující se tím, že navíc obsahuje jednu nebo více sloučenin, které omezují syntézu cholesterolu.
20. 20. Prostředek podle nároku 16 vyznačující se tím, že navíc obsahuje jednu nebo více sloučenin, které omezují syntézu cholesterolu, přičemž je tato sloučeniny vybrána mezi inhibitory reduktázy 3-hydroxy-3methylglutarylkoenzymu-A (HMG-CoA).
21. 21. Prostředek podle nároku 16 vyznačující se tím, že navíc zahrnuje jednu nebo vlče nasycených mastných kyselin, ο» • •44 ·· * « · 4 ·

    4 44 4 · 4 ·

    4 4 4 4 ···

    4 4 4 4 ·» ·

    4 4 4 4 4 4 4 4

    444 444

    4 4

    44 44 polynenasycených a mononenasycených mastných kyselin.
22. 22. Prostředek podle nároku 16 vyznačující se tím, že je smíchán s rostlinným olejem.
23. 23. Prostředek podle nároku 16 vyznačující se tím, že prostředek je smíchán s olejem, vybraným ze skupiny zahrnující saflorový olej, sesamový olej, olej z kukuřičných klíčků, olej z rýžových otrub, olivový olej, řepkový olej, lněný olej a kokosový olej.
24. 24. Prostředek pro snižování koncentrace cholesterolu vyznačující se tím, že zahrnuje beta-sitosterol, kampesterol a stigmastanol, kde koncentrace beta-sitosterolu je od 45 % do 75 %, koncentrace kampesterolu je od 10 = do 25 % a koncentrace stigmastanolu je od 10 % do 25 %.
25. 25. Prostředek podle nároku 24 vyznačující se tím, že navíc obsahuje od 2%_do 6 % kampestanolu. -
26. 26. Způsob detekování rizika kardiovaskulárních chorob a podobných poruch u živočichů vyznačující se tím, že se stanoví koncentrace celkového fytosterolů v séru a koncentrace celkového cholesterolu a porovná se s normální kontrolní hodnotou, přičemž:

    vysoká koncentrace celkového fytosterolů a nízká koncentrace celkového cholesterolu ukazuje, že živočich nepotřebuje další léčebný zásah, vysoká koncentrace celkového fytosterolů a vysoká • 444 «44 «444

    4 ··« «4*4 · 4 4 4 « β · · ···· · ··· ··· • * · · · · · *»* ··· ·· · ·· ·· koncentrace celkového cholesterolu ukazuje, že u živočicha existuje riziko poruch metabolismu lipidů, nízká koncentrace celkového fytosterolů a nízká koncentrace celkového cholesterolu indikují u živočicha jeden z typů diabetů a hypothroidismus, nízká vysoká koncentrace celkového fytosterolů a vysoká koncentrace celkového cholesterolu indikují, že u živočicha existuje riziko kardiovaskulárních chorob.
27. 27. Způsob podle nároku 26 vyznačujíc! se tím, že zahrnuje další krok pro stanovení vhodného postupu pro vyhodnocení poměru kampesterolu k beta-sitosterolu v séru u živočichů, porovnání tohoto poměru s normální kontrolní hodnotou, kde normální kontrolní poměr není nižší než 1,0, přičemž:

    vysoký poměr zároveň s vysokou koncentrací celkového fytosterolů a nízkou koncentrací celkového cholesterolu ukazuje, že živočich nepotřebuje další léčebný zásah, nízký poměr zároveň s vysokou koncentrací celkového fytosterolů a vysoká koncentrace celkového cholesterolu ukazuje, že živočich potřebuje léčeni, které zvýší koncentraci celkového fytosterolů v séru a které zvýší uvedený poměr, nízký poměr zároveň s nízkou koncentrací celkového fytosterolů a nizkým indexem celkový fytosterol/celkový cholesterol ukazují, že živočich potřebuje léčeni jednoho z typů diabetů, nemocí štítné žlázy nebo potřebuje úpravu stravy s cílem zvýšení koncentrace celkového fytosterolu v séru a zvýšení uvedeného poměru.
28. 28. Způsob podle nároku 26 vyznačující se tím, že koncentrace celkového fytosterolu v séru u živočichů se zvyšuje podáváním prostředku zahrnujícího jeden nebo více fytosterolů, které inhibují absorbci cholesterolu nebo absorbci cholesterolu a beta-sitosterolu.
29. 29. Způsob podle nároku 1 vyznačující se tím, že zlepšení zahrnuje u jedince stanovení koncentrace kampesterolu v séru jako indikátoru, porovnání této koncentrace s rychlostí syntézy cholesterolu a stanovení lipoproteinového cholesterolu s vysokou měrnou hmotností v séru.