CS276929B6 - Imunomodulačné prostriedky - Google Patents

Description

1 CS 276929 B6

Vynález sa týká prostriedkov s imunomodulačnými účinkami,ktorých aktívnou látkou sú amfifilné zlúčeniny zo skupiny amíno-xidov všeobecného vzorca CH-

I CH-

kde R znamená lineárny alebo rozvětvený alkylový retazec s počtomatómov uhlíka 11 až 14, a X = (CH2)n kde n =4, 5, 6 alebo(ch2ch2) 0.

Amínoxidy obsahujúce vo svojej molekule najmenej jeden dlhýalkylový retazec predstavujú amfifilné zlúčeniny, ktoré sa uždlhšie používájú v rozličných odvetviach íudskej činnosti. Jeo nich známe, okrem detergenčného účinku majú i výzamné biologic-ké aktivity. Nedávno sa zistilo (Ashman R. B., Blanden R. V.,Ninham B. W., Evan D. F., Immunol. Today 7, 278 (1986)), že niek-toré strukturálně analogy amínoxidov, 'ako sú napr. jednoduchéamóniové soli obsahujúce vo svojej molekule jeden alebo dva dlhéalkylové retazce interagujú s buňkami imunitného systému. Ichsledovaná aktivita bola vyššia ako cyklosporínu A, najúčinnéjšie-ho imunosupresívneho liečiva používaného v súčasnosti. Dioktade-cyldimetylamóniumbromid má zasa imunostimulačné vlastnosti (Hil-gers L. A. T., Snippe H. , Jansze M., Willers J. Μ. N., Cell. Im-munol. 90, 14 (1985)). U amfifilných zlúčenín obsahujúcich vosvojej molekule amínoxidovú skupinu však nie je v súčasnosti zná-my žiaden poznatok o tom či a ako ovplyvňujú imunitný systém.

Imunomodulačné látky móžu zvyšovat (imunostimulátory) aleboznižovat (imunospuresíva) aktivitu imunitného systému alebo niek-torých jeho funkcií. Mnohé imunomodulátory majú zvyčajne obe tie-to vlastnosti. To, ktorá z nich sa prejaví, závisí od koncentrá-cie imunomodulátora, podmienok a spósobu jeho aplikácie, experi-mentálneho modelu a testovacej funkcie imunitného systému (DeanJ. H., Luster Μ. I., Munson A. E., Amos H. A. eds.: Immunotoxico-logy and Immunopharmacology. New York, Raven Press 1983, p. 511).

Jedným z najdóležitejších mechanizmov prirodzenej imunity jefagocytóza. Jej úlohou je vychytat, inaktivovat a rozložit cudzo-rodé částice, vrátane patogénnych mikroorganizmov, cudzorodýcha vlastných antigénovo i funkčně pozměněných buniek (Ferenčík M.,Folia Fac. Med. Univ. Comenianae Bratisl. 24, 9 (1986). Fagocytó-zu uskutočňujú profesionálně fagocyty (neutrofily, eozinofily,monocyty a tkaninové makrofágy). Tieto buňky sa preto výhodnépoužívajú na testovanie účinku rázných imunomodulátorov. U aktívnych zlúčenín, ktoré sú predmetom vynálezu, sa zisti-li doteraz neznám imunosupresívne a imunostimulačné účinky na me-tabolické aktivity neutrofilov izolovaných z periférnej íudskejkrvi. Zistilo sa, že testované látky v koncentrá-ciách > 10“4 mol/dm3 mali inhibičný vplyv na INT-reduktázov akti-vitu ludských periférnych neutrofilov, kým nižšie koncentrácienemalí preukazný vplyv. Koncentrácie > 10“7 mol/dm3 testovanýchlátok významné stimulovali tvorbu superoxidu. Sledované látky CS 276929 B6 2 J* v koncentráciách > 10”4 mol/dm3 mali labilizujúci účinok na lyzo-zómové membrány, čo sa prejavilo zvýšenou extracelulárnou sekré-ciou lyzozómových enzýmov z neutrofilov. Z uvedeného vyplývá, že sledované látky svojim účinkom zasa-hujú do metabolickej aktivácie fagocytov, dynamickéj rovnováhyv produkcii superoxidu a vo vysokých koncentráciách aj do funkcielyzozómov v neutrofiloch. Majů preto preukazný imunomodulačnýúčinok na fagocytárnu funkciu. Příklady ilustrujú ale neobmedzujú rozsah typov imunomodulá-torov podlá vynálezu. Příklad 1

Od zdravých dobrovolníkov sa odobrala periférna krv do hepa-rínu (20 j/cm3) a z nej sa izolovali granulocyty sedimentácious Dextranom T-500 (Boyum A., Scand. J. Imunol. 5, Suppl. 5, 9(1976)). Použila sa len taká suspenzia granulocytov, ktorá obsa-hovala najmenej 90 % neutrofilov. Čisté granulocyty sa resuspen-dovali vo fyziologickom roztoku tlmenom fosfátom (PBS) a obsahu-júcom 5 j heparínu na cm3 a 0.1 % glukózu (PBSHG). IchINT-reduktázová aktivita, ako aj produkcia superoxidu sa určovalamikrometódou na mikrotitračných doštičkách (Ferenčík M., KotulováD., Masler L., Šandula J., Pružinec P., Bratisl. lek. listy 89,424 (1988)). Tieto aktivity sa zistovali v nestimulovaných granu-locytoch i v granulocytoch stimulovaných opsonizovaným zymozánom(ZO) a forbolmyristátacetátom (PMA) a to v nepřítomnosti (kontro-ly) a v přítomnosti testovaných látok. Všetky skúmané látky vovysokých koncentráciách (>10“4 mol/dm3) znižovali schopnost nes-timulovaných i stimulovaných granulocytov redukovat INT (supre-sívny účinok) v priemere o 30 až 90 %. například(1-metyldodecyl)dimetylamínoxid inhiboval imunologickú odpovedgranulocytov pri c = 10”4 mol/dm3 na 47 % pri c = 10“3 mol/dm3 na85 %. Příklad 2

Pracovný postup bol ten istý ako v příklade 1 s tým rozdie-lom, že sa sledovala produkcia superoxidu. V případe nestimulova-ných granulocytov sa v koncentráciách 10“4 až 10“' mol/dm3 pozo-roval stimulačný účinok: například (1-metyldodecyl)dimetylamínoxid pri σ = 10“7 mol/dm3stimulácia o 231 %, pri c = 10”4 mol/dm3 stimulácia o 50 %;Koncentrácia c = 10”3 mol/dm3 u všetkých látok inhibovala tvorbusuperoxidu. Příklad 3

Granulocyty sa izolovali od klinicky zdravých dobrovolníkovtak, ako je to uvedné v příklade 1. Upravili sa na koncentráciu107/cm3 v PBSHG a inkubovali sa 10 min pri 37° v čistom PBSHGalebo spolu so stimulačnými látkami (ZO, PMA) a to v nepřítomnos-ti (kontroly) a v přítomnosti testovaných látok. Po inkubácii sacentrifugáciou oddělili supernatanty od sedimentu granulocytova zistovalo sa v nich percento extracelulárne uvolněných lyzozó-mových enzýmov - β-D-glukuronidázy (BDG), myeloperoxidázy (MPO)

Claims (1)

1. / / 3 CS 276929 B6 «. a lyzozýmu (L) (Ferenčík M., Beláň J., Bratisl. lek. listy 71, 53 (1979)), Testované zlúčeniny v koncentráciách 10"3 až10"7 mol/dm3 výrazné zvyšovali množstvo enzýmových aktivit uvol-něných z granulocytov do inkubačného média. Zlúčenina C o [mol/dmJ] Zvýšenie enzýmových aktivit BDG [%] MPO L kontrola 4 7 5 (1-metyldodecyl)di-metýlamínoxida lxlO"3 28 44 50 lxlO“7 25 11 31 4-tridecylmorfolín N-oxid ixio"; 88 60 86 2xl0”7 6 12 . 12 1-dodecylpyrolidín N-oxid 5xio": 49 60 70 2xl0"7 6 13 9 1-tridecylpiperidín N-oxid íxio"; 90 57 61 2xl0"7 14 19 14 1-tridecylperhydroa- zepín N-oxid 2x10"' 31 36 35 4x10"° 5 13 8 ainkubácia 60 min, kontrola 16% (BDG), 13% (MPO), 13% (L) PATENTOVÉ NÁROKY Imunomodulačné prostriedky, vyznačené tým, že ako účinnézlúčeniny obsahujú amfifilné látky všeobecného vzorca

   I ch3 "o kda R znamená lineárny alebo rozvětvený alkylový retazec s počtomatómov uhlíka 11 až 14, a X = (CH2)n kde n = 4 až 6 a (CH2CH2)2O. Konec dokumentu