CS276912B6 - Stabilized reagent for determining proteins in biological fluids - Google Patents
Stabilized reagent for determining proteins in biological fluids Download PDFInfo
- Publication number
- CS276912B6 CS276912B6 CS891844A CS184489A CS276912B6 CS 276912 B6 CS276912 B6 CS 276912B6 CS 891844 A CS891844 A CS 891844A CS 184489 A CS184489 A CS 184489A CS 276912 B6 CS276912 B6 CS 276912B6
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- methyl
- dye
- mol
- ethyl
- biological fluids
- Prior art date
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 21
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 title claims description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title abstract description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- -1 methylene-2,5 cyclohexadiene-1-ylidene Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims abstract description 5
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims abstract 2
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 3
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 claims description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 12
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 abstract description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 abstract description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 abstract description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 2
- KRZCOLNOCZKSDF-UHFFFAOYSA-N 4-fluoroaniline Chemical compound NC1=CC=C(F)C=C1 KRZCOLNOCZKSDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- QTWZICCBKBYHDM-UHFFFAOYSA-N leucomethylene blue Chemical compound C1=C(N(C)C)C=C2SC3=CC(N(C)C)=CC=C3NC2=C1 QTWZICCBKBYHDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- ZMCHBSMFKQYNKA-UHFFFAOYSA-N 2-aminobenzenesulfonic acid Chemical compound NC1=CC=CC=C1S(O)(=O)=O ZMCHBSMFKQYNKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N octafluoropropane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000000164 protein isolation Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- RWVGQQGBQSJDQV-UHFFFAOYSA-M sodium;3-[[4-[(e)-[4-(4-ethoxyanilino)phenyl]-[4-[ethyl-[(3-sulfonatophenyl)methyl]azaniumylidene]-2-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]methyl]-n-ethyl-3-methylanilino]methyl]benzenesulfonate Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C(=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C)C=2C(=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C)C=C1 RWVGQQGBQSJDQV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
1 CS 276912 B6
Vynález sa týká stabibizovanej reagencie na stanoveniekoncentrácie proteinov v biologických tekutinách
Laboratórna prax pri purifikácii a izolácii proteinov akodiagnostické potřeby klinickéj praxe často vyžadujú rýchle apřesné stanovenie koncentrácie proteinov vo vodných roztokoch ato s poměrně vysokou citlivostou a pokial možno s použitímminimálneho objemu analyzovanéj vzorky. Uvedené priame kritériá vposledných rokoch splňuje metoda založená na tvorbě farebnéhokomplexu proteinu s vhodným farbivom. Takýmto farbivom je napr.3-[ [N-etyl-N-/3-metyl-4-/4-/4-etoxyanilino/fenyl]-<2-metyl-4-{N~-etyl-N-[3-/sódium sulfonato/fenyl metyl]} aminobenzén sulfonátCoomasie* briliant blue G-250 /Color Index č. 42655/, u ktorejpozoroval ako prvý A.H.Reisner a spol /Reisner A.H., Nemes P. aBucholz G.: Anal. Biochoem. 64/1975/ 509/, že existuje v dvou farebných formách. Oxidová leukoforma v kyslom prostředí červená,ktorá se mění na modru adsorbciou proteinu v rovnakom prostředí.Tento poznatok využil M.M.Bradford a vypracoval metodu nastanovenie bielkovín vo vodných roztokoch kyseliny fosforečnej sprídavkom ethanolu. /Bradford M.M.: Anal. Biochem. 72, /1976/ 248/. Zistilo sa však /Spector Z.: Anal. Biochem. 86/1978 142/,žereakčný roztok farbiva je pri skladovaní nestály a preto ho třebav dvojtýždenných intervaloch korigovat, čo je pre rutinnúprevádzku nevítané. Taktiež sa zistilo, že závislost absorbancieje pri použitéj metóde lineárnaAnal. Biochem. 79 /1977/ 544/, čo na koncentrácii proteinu nie/Sedmak H.J. a Grossbery S.E.: pri analytickéj metóde nevítaným momentom.
Uvádzané nedostatky rieši stabilizovaná regencia podlá při-hlášky vynálezu, ktorá má podstatné vyššiu stabilitu pri sklado-vání a závislost adsrobancie na koncentrácii meraného proteinu jepřísné lineárna v rozsahu do 2,0 g..
Podstata vynálezu spočívá v tom, že reagencia na stanoveniekoncentrácie proteinov v biologických tekutinách obsahuje0,000285 až 0,000342 molu farbiva 3-[[N-etyl-N-/3-metyl-4-/-4-/4-etoxyanilino/fenyl]-<2-metyl-4{N-etyl-N-[3-/sódium sulfonáto /fenyl metyl]}aminofenyl>metylén-2,5-cyklohexydién-l-ylidén/]]imó-niobenzén sulfonát, 0,85 až 0,95 molu kyseliny chlorovodíkovéj,0,15 až 0,2 molu chloridu sodného a 0,15 až 0,2 moluetylénglykolu alebo glycerínu v litri vodného roztoku.
Zistilo sa, že najvhodnéjšia kyselina v ktorej sa najrých-le jšie rozpúšta uvedené farbivo a vytvára oxidovaná leuko-formučervenej farby je kyselina chlorovodíková. Rovnako sa zistilo, ženajvyššia citlivost zafarbenia do modra prídavkom proteinu sa do-sahuje vo velmi úzkom rozsahu koncentrá.cie kyseliny chlorovodíko-vé j pri optimálněj koncentrácii farbiva. So stúpajúcou koncentra-ciou kyseliny pri konštanej koncentrácii farbiva citlivost fareb-nej reakcie na proteiny klesá a maximálna citlivost sa dosahujev koncentračnej oblasti kyseliny 1,175 až 0,195 mól.l“1, čo jenižšia ako v doteraz publikovaných prácach. V uvedenom koncent-račnom rozsahu podlá postupu stanovenia přítomnost 10 mg proteinupósobí změnu absorbancie až 0,65 až 0,75.
Prídavok viacsýtnych alkoholov a chloridu sodného do reak- čného roztoku urýchluje ustalovanie rovnováhy tvorby farebného CS 276912 B6 2 komplexu farbiva s proteinom. Rovnováha sa podlá navrhovanéhopostupu ustaluje do 5 minut. Okrem toho přítomné alkoholy a chlo-rid sodný zvyšuje atabilitu reakčného zásobného roztoku, takženie je potřebné citlivost roztoku tak často kontrolovat. Zistilosa, že zásobný roztok podlá vynálezu i po 3 mesiacoch skladovaniapri 15 až 30 ĎC mal rovnakú citlivost ako roztok čerstvo připra-vený. Rovnako sa zistilo, že pri príprave reakčného roztoku jedóležitý spósob rozpúštania farbiva. Od spósobu rozpúštania závi-sí podstatné rýchlost jeho rozpúštania a ustalovania rovnováhyleuko-formy farbiva. Příklad 1 250 mg farbiva zloženia 3-[[N-etyl-N-/3-metyl-4-4-/4-etoxy-anilino/fenyl]-2<-metyl-4-{N-etyl-N-[3-/sódium sulfonato/fenyl-metyl]} aminofenyl>/metylén-2,5 cyklohexadién 1-ylidén/] amonio-benzén sulfonát Coomasie briliant blue G-250 sa rpzpustilo vroztoku pozostávajúceho z 80 ml koncentrovanej kyseliny chlorovo-díkovej /36 až 37% /, 160 ml destilovanej vody, 10 g chloridusodného a 10 ml ethylénglykolu. Po rozpuštění farbiva sa reakčnýroztok doplnil destilovanou vodou na celkový objem 1 liter a pře-filtroval sa cez filtračný papier, aby sa odstránili nerozpustnézbytky farbiva, resp. nerospustné nečistoty. Takto připravenýroztok, ktorý je zásobný roztok, ktorý sa před použitím na stano-venie proteinov riedi destilovanou vodou v pomere 1 objemový dielzásobného roztoku a 4 diely destilovanej vody. Po zamiešaní jeroztok pracovný, možno hned použit na meranie koncentrácie prote-inov v roztokoch. Absorbancia pracovného roztoku oproti vodě privlnovej dlžke 595 nm bola 0,370. Pri meraní koncentrácie protei-nov v kontrolných vzorkách napr. ludského krvného proteinu s de-klarovanou koncentráciou 66,7 g/1 /100 nl séra sa zriedi s 3,2 mldestilovanej vody/. Potom sa do suchéj kolorimetrickéj kyvetymikropipetou nadávkuje 2x1 ml pracovního roztoku na stanovenieproteinov, čím sa reakčný roztok súčasne dostatočne premieša.
Reakčný roztok sa okamžité zafarbí na modro a zmeria sa ab-sorbancia v intervale od 2 do 5 minút, kedy je absorbancia maxi-málna. V tomto případe bola absorbancia oproti vodě 1,115, t.j.po odpočítaní pozadia 0,745. Kalibračná křivka absorbancie v zá-vislosti od koncentrácie proteinu je lineárně v celom rozsahu od0,2 do 2,0 g/ proteinu.
Obdobné výsledky sa získali pri použití séra hovádzieho al-buminu, namerané hodnoty boli v rámci reprodukovatelnosti metody. Příklad 2
Postup ako v příklade 1 s tým rozdielom, že 300 mg farbivasa rozpúšfa v roztoku pozostávajúceho z 85 ml koncentrovanej ky-seliny chlorovodíkovéj a 170 ml destilovanej vody, 15 g chloridusodného a 15 ml glycerínu. Hotový zásobný roztok po zriedení napracovný roztok mal absorbanciu 0,420. Kontrolně séra dávali prirovnakých koncentráciach bielkovín zrovnatelné absorbancie akov příklade 1.
Vynález má použitie všade tam, kde sa pracuje s roztokamiproteinov a to tak vo výskume i priemyslovej aplikácii v róznychodvetviach biotechnologie ako klinickéj diagnostike.
Claims (1)
- 3 CS 276912 B6 PATENTOVÉ NÁROKY Stabilizovaná regencia na stanovenie koncentrácie proteinovv biologických tekutinách s obsahom farbiva 3-[[N-etyl-N-/3-me~tyl-4-4-/4-etoxyanilino/fenylJ-<2-metyl-4{-etyl-N-[3-/sódium sul-fonato/fenylmetyl]} aminofenyl>/metylén-2.,5cyklohexadiénl-ylidén/]]amoniobenzém sulfonát, vyznačujúci sa tým, že v 1 litrivodného roztoku obsahuje 0,000285 až 0,000342 molu farbiva, 0,85až 0,95 molu kyseliny chlorovodíkovej 0,15 až 0,20 molu chloridusodného a 0,15 až 0,20 molu viacsytného alkoholu, napříkladmonoethylénglykolu alebo glycerínu. Konec dokumentu
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS891844A CS276912B6 (en) | 1989-03-24 | 1989-03-24 | Stabilized reagent for determining proteins in biological fluids |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS891844A CS276912B6 (en) | 1989-03-24 | 1989-03-24 | Stabilized reagent for determining proteins in biological fluids |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS184489A3 CS184489A3 (en) | 1992-02-19 |
| CS276912B6 true CS276912B6 (en) | 1992-09-16 |
Family
ID=5353825
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS891844A CS276912B6 (en) | 1989-03-24 | 1989-03-24 | Stabilized reagent for determining proteins in biological fluids |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS276912B6 (cs) |
-
1989
- 1989-03-24 CS CS891844A patent/CS276912B6/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS184489A3 (en) | 1992-02-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Walters et al. | An ultramicromethod for the determination of conjugated and total bilirubin in serum or plasma | |
| US4960710A (en) | Device and method of assaying for trace mounts of proteins | |
| US5028542A (en) | Glucose measurement control reagent and method of making the same | |
| US4239495A (en) | Determination of protein | |
| US5326707A (en) | Composition and device for urinary protein assay and method of using the same | |
| US5055407A (en) | Composition and method of assaying aqueous liquids for specific gravity | |
| US3533749A (en) | Method for the determination of total albumin | |
| US5087575A (en) | Composition for determining trace amount of protein | |
| JP3045761B2 (ja) | 補正用紙片を有する呈色試験紙 | |
| US3938954A (en) | Determination of calcium | |
| CS276912B6 (en) | Stabilized reagent for determining proteins in biological fluids | |
| Barber et al. | Bromcresol green assay is nonspecific for rat plasma albumin | |
| JPH06103309B2 (ja) | 血中のヘモグロビン測定のための試薬および方法 | |
| SU416969A3 (cs) | ||
| GB2068541A (en) | Determination of chloride in serum | |
| US4030885A (en) | Bilirubin determination | |
| CN112129949A (zh) | 一种视黄醇结合蛋白检测试剂盒、其制备方法和使用方法 | |
| US5955374A (en) | Method of detection of bilirubin in urine on an automated analyzer | |
| RU2268476C2 (ru) | Способ количественного определения белка в биологических жидкостях | |
| CN108226147A (zh) | 一种尿微量白蛋白检测试剂条及其制备方法 | |
| Zhao et al. | Determination of proteins using the p-acetylchlorophosphonazo-barium (II) complex as a spectroprobe | |
| RU2727879C1 (ru) | Способ определения нитрит-ионов | |
| JP4733596B2 (ja) | 液体試料の総蛋白質を測定するための液状試薬 | |
| RU2069352C1 (ru) | Способ определения гидрохинона и диоксимпарахинона в растворах | |
| SU1141318A1 (ru) | Способ фотометрического определени содержани водорастворимых производных лигнина |