Vynález sa týká nového aySieho hybridómu HRP 16—1 produkujúceho monoklonálnu protilátku iauaoglobulíaovej podtriedy 02a voči chrenovej peroxidáze.The present invention relates to a novel human hybridoma HRP 16-1 producing a monoclonal antibody iauaoglobulin subclass 02a against horseradish peroxidase.
Do objevenia hybridómovej technológie přípravy aonoklonálnych protilátok sa protilátky (antiséra) proti chrenovej peroxidáze připravovali imunizáciou pokusných zvierat, najčastejšie oviec a králikov. Sérum takto imunizovaných zvierat odobrané po viacerých dávkách antigénu slúžíle ako zdroj Specifických protilátok. Tieto sa používali pri tvorbě komplexov peroxidáza - anti-peroxidáza, ktoré umožňujú vysoko citlivé a Specifické imunochemické stanovenia. Keňže takto připravené anti-peroxidázové protilátky boli neštandartné a titer Specifických protilátok bol hízky, začali sa používat ako zdroj protilátok hybridómy produkujúce monoklonálne protilátky proti chrenovej peroxidáze. Hybridómy sa získavajú známým sposobom opísáným v literatúre [G. Kóhler, C. Milstein.: Nátuře, 256 (1975)]. Hybridóm HRP 16-1 nebol eSte piripravený.Until the discovery of the hybridoma technology for the preparation of the aero-clonal antibodies, horseradish peroxidase (antiserum) antibodies were prepared by immunizing experimental animals, most commonly sheep and rabbits. The serum of the immunized animals collected after multiple doses of antigen is used as a source of specific antibodies. These have been used in the formation of peroxidase-anti-peroxidase complexes that allow highly sensitive and specific immunochemical assays. Since the anti-peroxidase antibodies thus prepared were unstandard and the specific antibody titer was a lice, hybridomas producing monoclonal antibodies against horseradish peroxidase were used as the source of antibodies. Hybridomas are obtained by a known method described in the literature [G. Köhler, C. Milstein .: Nature, 256 (1975)]. The HRP 16-1 hybridoma was not prepared.
Nevýhody konvenčně připravených antiaér voči chrenovej peroxidáze v podstatnej miere odstraňuje vynález, ktorého podstatou je mySí hybridóm HRP 16-1, produkujúci monoklonálnu protilátku imunoglobulínovéj podtriedy G2a, ktorá má schopnost Specificky reagovat s chrenovou peroxidázou. Hybridóm HRP 16-1 je uložený vo Virologickom ústave SAV, Dúbravaká cesta 9t 842 46 Bratislava. Výhodou tohto hybridómu je, že produkuje homogénnu protilátku, ktorá je schopná špecificky reagovat s chrenovou peroxidázou a po rozmražení buňky HRP 16-1 pokračujú v produkcii protilátky i bez ňalšej imunizácie chrenovou peroxidázou. PříkladThe drawbacks of conventionally prepared horseradish peroxidase anteraers are substantially eliminated by the invention, which is based on the mouse hybridoma HRP 16-1, producing a monoclonal antibody of the immunoglobulin G2a subclass having the ability to specifically react with horseradish peroxidase. The HRP 16-1 hybridoma is stored in the Virological Institute of SAS, Dúbravaká cesta 9t 842 46 Bratislava. The advantage of this hybridoma is that it produces a homogeneous antibody that is capable of specifically reacting with horseradish peroxidase and, after thawing the HRP 16-1 cell, continue to produce the antibody without further horseradish peroxidase immunization. Example
Hybridóm HRP 16-1 sa získá fúziou myších myelómových buniek NSO a buniek získaných zo sleziny myší kmeňa BALB/c imunizovaných chrenovou peroxidázou (Horše radish peroxidase, Grád I, Boehringer GmbH, Mannheim, SRN). Hybridóm HRP 16-1 sa peatuje in vitro v kultivačných médiach alebo in vivo v peritoneálnej dutině myši kmeňa BALB/c. Buňky sa zmrazujú a uchovávajú v kvapalnom dusíku a po rozmražení pokračujú v produkci! protilátky bez ňalšej imunizácie chrenovou peroxidázou. Buňky hybridómu HRP 16-1 rastů in vitro ako suspenzná kultúra a produkujú do kultivačného média přibližné 1 ^ug/ml špecifickej protilátky. Kultivačným médiom je Dulbeccova modifikácia Eagleovho minimálneho esenciálneho média [R. Dulbecco, G. Vreeman, Virology 8, 396 (1959)]. Toto médium je pre kultiváciu hybridómov doplněné inaktivovaným koňským sérom (ELÁN CLONĚ). Za účelom získania váčšieho množstva monoklonálnej protilátky proti chrenovej peroxidáze sa buňky HRP 16-1 aplikovali v množstve 5.106 do peritoneálnej dutiny myši BALB/e. Myš bola deaat dní před touto aplikáciou premedikovaná parafínovým olejom (0,5 al intraperitoneálne na myš). Po 10 až 15 dňoch od injekcie buniek HRP 16-1 bola myši odobratá ascitická tekutina, ktorá obsahuje požadovanú monoklonálnu protilátku v koncentrácii přibližné 1 mg/ml.The HRP 16-1 hybridoma is obtained by fusing mouse NS0 myeloma cells and spleen cells from BALB / c mice immunized with horseradish peroxidase (Horse radish peroxidase, Gar I, Boehringer GmbH, Mannheim, Germany). HRP 16-1 hybridizes in vitro in culture media or in vivo in the peritoneal cavity of BALB / c mice. Cells are frozen and stored in liquid nitrogen and continue to thaw after thawing! antibodies without further horseradish peroxidase immunization. Growth in vitro HRP 16-1 hybridoma cells as a suspension culture and produce approximately 1 µg / ml of specific antibody into the culture medium. The culture medium is Dulbecco's modification of Eagle's minimal essential medium [R. Dulbecco, G. Vreeman, Virology 8, 396 (1959)]. This medium is supplemented with inactivated horse serum for the cultivation of hybridomas (ELAN CLONA). In order to obtain a higher amount of monoclonal antibody against horseradish peroxidase, HRP 16-1 cells were applied at 5 x 10 6 to the peritoneal cavity of BALB / e mice. The mouse was deaat days prior to this treatment with paraffin oil (0.5 µl intraperitoneally per mouse). 10-15 days after injection of HRP 16-1 cells, an ascitic fluid was collected from the mouse containing the desired monoclonal antibody at a concentration of approximately 1 mg / ml.
Myši hybridóm HRP 16-1 sa používá ako zdroj homogénnej protilátky imunoglobulínovéj podtriedy G2a voči chrenovej peroxidáze. Připravená protilátka sa používá v komplexe peroxidáza - anti-peroxidáza pri ELISA teste, imunoblote a imunohistochémii. fialej má hybridóm HRP 16-1 použitie pri príprave bišpecifických monoklonálnych protilátok, ktoré zvyšujú citlivost imunodetekčných testov.The hybridoma HRP 16-1 mouse is used as a source of homogeneous antibody of the immunoglobulin G2a subclass against horseradish peroxidase. The prepared antibody is used in peroxidase-anti-peroxidase complex in ELISA, immunoblot and immunohistochemistry. Purple has the hybridoma HRP 16-1 used in the preparation of bispecific monoclonal antibodies that increase the sensitivity of immunodetection assays.