CS276073B6

CS276073B6 - Process for preparing biomass containing psilocybin and psilocin from a fungus

Info

Publication number: CS276073B6
Application number: CS903987A
Authority: CS
Inventors: Marta Rndr Csc Semerdzieva; Roman Rndr Csc Kysilka
Original assignee: Mikrobiologicky Ustav Csav
Priority date: 1990-08-14
Filing date: 1990-08-14
Publication date: 1992-03-18
Also published as: CS398790A3

Abstract

Řeší ee příprava paychotropnlch látek peilocybinu a peilociau kultivací houby Psilocybe bohemiea Šebek, jejíž mycelium produkuje v podmínkách hloubkové kultivace aa tekutém komplexním médiu podstatně vyšší koncentrace těchto látek. Účelem je umožnit fermentační výrobu peychotropního peilocybinu a peilociau využitelných v paycho- * diagnostice a psychoterapii. Produkční kmen podle vynálezu je uložen ve sbírce CCBAS Mikrobiologického ústavu ČSAV v Praze pod číslem 672.It solves ee preparation of paychotrophic substances peilocybine and peilociau by cultivating the Psilocybe fungus bohemiea Šebek, whose mycelium produces under deep cultivation conditions and a liquid complex medium concentration of these substances. The purpose is to allow fermentation production of peychotropic peilocybin and peilociau usable in paycho- * diagnosis and psychotherapy. Production strain according to the invention is stored in the CCBAS collection Institute of Microbiology of the Czechoslovak Academy of Sciences under number 672.

Description

Vynález se týká způsobu přípravy biomasy s obsahem psilocybinu a psilocinu ze stopkovýtrusé houby.The invention relates to a process for the preparation of biomass containing psilocybin and psilocin from a stem spore fungus.

Psilocybin a pailocin jsou účinné složky některých druhů halucinogenních hub. Tyto látky jsou vzhledem k nízké toxicitě vhodnějším prostředkem v psychoterapii a psychodiagnostice než toxičtější a návykový diethylamid lysergové kyseliny (Leuner H., Schlichting Μ.: Ueber den derzeitigen Stand der Forschung auf dem Gebiet der peychoaktíven Substanzen, 153—173 (1986)). Zavedení psilocybinu a psilocinu do praxe brání především jejich nedostupnost - chemická syntéza je obtížná (Speeter Μ. E., Anthony W. C«: J. Am. Chem. Soc. 76, 6209 (1954), Hofmann A. et all.: Experientia 14, 397 (1958) a ekonomicky neschůdná a biochemická příprava je dosud málo efektivní (Pat. CH 215 055 Sandoz A. G., Basel, 1967: Production of Psilocybin and Psilocin) - myceliální kultury Psilocybe mexicana použité k izolaci látek obsahují velmi nízké koncentrace látek.Psilocybin and pailocin are active ingredients in some species of hallucinogenic mushrooms. Due to their low toxicity, these substances are a more suitable agent in psychotherapy and psychodiagnostics than the more toxic and addictive diethylamide lysergic acid (Leuner H., Schlichting et al. The introduction of psilocybin and psilocin into practice is hindered mainly by their unavailability - chemical synthesis is difficult (Speeter E.. E., Anthony W. C «: J. Am. Chem. Soc. 76, 6209 (1954), Hofmann A. et al .: Experientia 14, 397 (1958) and economically unfeasible and biochemical preparation is still ineffective (Pat. CH 215 055 Sandoz AG, Basel, 1967: Production of Psilocybin and Psilocin) - mycelial cultures of Psilocybe mexicana used to isolate substances contain very low concentrations of substances .

Podstatou způsobu přípravy biomasy s obsahem psilocybinu a psilocinu podle vynálezu je, že se myceliální kultura kloboukaté stopkovýtrusé houby Psilocybe bohemica Šebek, kmen uložený ve sbírce kultur basidiomycetů CCBAS 672, kultivuje za submersních podmínek při teplotě 24+1 °C po dobu 17 až 25 dnů na komplexní tekuté živné půdě obsahující monosacharxdy, zdroje asimilovatelného dusíku, minerální a růstové látky, načež se odfiltruje mycelium, které obsahuje konečné produkty.The essence of the method for the preparation of biomass containing psilocybin and psilocin according to the invention is that the mycelial culture of the capsule stem spore fungus Psilocybe bohemica Šebek, a strain stored in the CCBAS 672 basidiomycet culture collection, is cultured under submerged conditions at 24 + 1 ° C for 17-25 days. on a complex liquid broth containing monosaccharides, sources of assimilable nitrogen, minerals and growth substances, after which the mycelium containing the final products is filtered off.

Pro produkci psychotropních látek je inokulum kultury pěstováno stacionárně v Petriho miskách na SEKYKO-agaru, na kterém mycelium roste rychlostí kolem 5 mm za 7 dnů.For the production of psychotropic substances, the culture inoculum is grown stationary in petri dishes on SEKYKO-agar, on which the mycelium grows at a speed of about 5 mm in 7 days.

Živná půda musí obsahovat zdroj uhlíku a dusíku, minerální soli, stopové prvky a růstové látky. Mycelium na tekuté sladinové půdě o koncentraci 4 až 8 °Ball. roste bohatěji, avšak produkuje podstatně méně psilocybinu a psilocinu než na tekuté komplexní půdě SEKYKO (glukosa 20 g, fruktosa 20 g, glycin 9 g, jantaran amonný 1 g, tryptofan 0,2 g, kvasničný extrakt 1 g, heptahydrát síranu hořečnatého 0,50 g, dihydrogenfosforečnan draselný 0,10 g, heptahydrát síranu železnatého 5 mg, heptahydrát síranu zinečnatého 2,5 mg, destilovaná voda 1000 ml, pH 5,5). .The nutrient medium must contain a source of carbon and nitrogen, mineral salts, trace elements and growth substances. Mycelium on liquid wort medium with a concentration of 4 to 8 ° Ball. grows richer but produces significantly less psilocybin and psilocin than on SEKYKO liquid complex medium (glucose 20 g, fructose 20 g, glycine 9 g, ammonium succinate 1 g, tryptophan 0.2 g, yeast extract 1 g, magnesium sulphate heptahydrate 0, 50 g, potassium dihydrogen phosphate 0.10 g, ferrous sulphate heptahydrate 5 mg, zinc sulphate heptahydrate 2.5 mg, distilled water 1000 ml, pH 5.5). .

Psychotropní látky psilocybin a psilocin jsou houbou produkovány intracelulárně. Kultivací houby za uvedených podmínek se získá mycelium s obsahem psilocybinu a psilocinu významně vyšším, než je dosud známo z literatury (Pat. sw 215 055).The psychotropic substances psilocybin and psilocin are produced intracellularly by the fungus. By culturing the fungus under the indicated conditions, a mycelium with a content of psilocybin and psilocin significantly higher than is hitherto known from the literature is obtained (Pat. Sw 215 055).

Dále jsou uvedeny příklady způsobu přípravy podle vynálezu.The following are examples of the preparation process according to the invention.

Příklad 1 denní kultivace za účelem získání psilocinuExample 1 Daily cultivation to obtain psilocin

Inokulum se připraví zaočkováním myceliální kultury Psilocybe bohemica CCBAS 672 ze šikmého agaru ve zkumavce na Petriho misky s komplexní živnou půdou (složení je uvedeno dříve) s přídavkem 2 % (m/V) agaru. K další inokulaci se použije 35 denní kultura.The inoculum is prepared by inoculating a mycelial culture of Psilocybe bohemica CCBAS 672 from slant agar in a tube onto a complex nutrient broth (composition given earlier) with the addition of 2% (w / v) agar. A 35 day culture is used for further inoculation.

Hloubková kultivace se provádí na rotačním třepacím stroji v Erlenmayerových baňkách obsahujících 100 ml tekutého kompexního média. Baňky se inokulují větším počtem výřezů myp celiální kolonie velkých kolem 10 mm z Petriho misek. Po 17 dnech třepání ve tmě se filtrací oddělí mycelium, promyje se destilovanou vodou a usuší se za laboratorní teploty. Metodou vysokoúčinné kapalinové chromatogr £le byla po extrakci v suchém myceliu stanovena koncentrace 0,30 % (m/m) psilocinu a 0,40 % (m/m) psilocybinu. Suchá hmotnost mycelia byla ve stacionární fázi růstu 6,5 mg/ml.Deep cultivation is performed on a rotary shaker in Erlenmeyer flasks containing 100 ml of liquid complex medium. The flasks are inoculated with a plurality of cut-outs of cello colony mumps about 10 mm in size from petri dishes. After shaking in the dark for 17 days, the mycelium is filtered off, washed with distilled water and dried at room temperature. After extraction in dry mycelium, the concentrations of 0.30% (w / w) psilocin and 0.40% (w / w) psilocybin were determined by high performance liquid chromatography. The dry weight of mycelia in the stationary growth phase was 6.5 mg / ml.

Příklad 2 denní kultivace za účelem získání psilocybinuExample 2 Daily cultivation to obtain psilocybin

Kultivace se provede za stejných podmínek jako v příkladě 1. Ukončí se však v 25. dni po zaočkování. Mycelium po stacionární fázi růstu vykazovalo suchou hmotnost 6 mg/ml. Koncentrace psilocybinu v suchém myeeliu byla 0,95 Ž (m/m), psilocinu 0,05 % (m/m).The cultivation is carried out under the same conditions as in Example 1. However, it is terminated on the 25th day after inoculation. The mycelium after a stationary growth phase had a dry weight of 6 mg / ml. The concentration of psilocybin in dry myelium was 0.95 g (w / w), psilocin 0.05% (w / w).

Změny koncentrací psilocybinu a psilocinu a hmotnosti mycelia v průběhu hloubkovéChanges in psilocybin and psilocin concentrations and mycelial mass during deep

CS 276 073 B6 kultivace na optimalizované komplexní půdě jsou znázorněny na grafu na přiloženém obrázku Z obrázku je například patrno, že maximální koncentrace psilocybinu je dosaženo na konci kultivace, zatímco psilocin vykazuje koncentrační maximum kolem 17- dne kultivace. Logaritmická fáze růstu kultury přechází do stacionární kolem ’5. dne.CS 276 073 B6 cultures on optimized complex soil are shown in the graph in the accompanying figure. The logarithmic phase of culture growth transitions to a stationary round of ’5. on.

Claims

A process for the preparation of biomass containing psilocybin and psilocin from the stem spore fungus Psilocybe bohemiea Šebek, characterized in that the myeelial culture of this fungus, strain CCBAS 672, is cultured under submerged conditions at a temperature of 24 + 1 ° C for 17 to 25 days for complex liquid broth containing monosaccharides, sources of assimilable nitrogen, minerals and growth substances, after which the mycelium containing the final products is filtered off.