CS275658B6 - Myší lymfocytárny hybridám Bra FB6/a - Google Patents

Description

1 CS 275658 B6 h

Vynález sa týká myšieho lymfocytárneho hybridómu Bra FB6/a t.j. hybridnej kultu-ry buniek jednobunkového (monoklonálneho) povodu, získanej buňkovou fúziou mySej mye-lómovej bunkovej linie Sp2/0 a slezinových lymfoidných buniek syngénnych experimen-tálnych zvierat, imunizovaných íudskou non-T, non-B ALL leukemickou buňkovou líniou.Hybridóm produkuje in vitro aj in vivo myšiu monoklonálnu protilátku triedy IgG2b, roz-poznávajúcu íudský HLA antigén II. triedy (DP).

Povodně sa protilátky proti antigénom buňkového povrchu získávali konvenčnou imu-nizáciou pokusných zvierat, při čom vznikala heterogénna zmes protilátok rozných trieda podtried ako aj imunoehemických špecificít. Skrížené reaktivity takýchto preparátovspravidla nie je možné odstránií vysýtením in vitro, ktoré je přitom neštandardným po-stupom, vyžadujúcim veíké množstvá vysycujúcich buniek.

Uvedené nevýhody, pokiaí sa jedná o protilátky proti HLA antigénu II. triedy, od-straňuje riešenie podía vynálezu, ktorého podstata spočívá v tom, že bol získaný myšílymfocytárny hybridóm Bra FB6/a, prodkujúci monoklonálnu protilátku triedy IgG2b, pro-ti HLA antigénu II. triedy DP podtypu. Tento hybridóm podlá vynálezu je uložený v zbier-ke hybridómov a buňkových kultúr Oddelenia molekulárnej imunologie Ústavu experimentál-nej onkológie SAV, ul. Čsl. armády 21, 812 32 Bratislava, pod označením Bra FB6/a.

Uvedený hybridóm bol získaný spósobom známým z odbornej literatúry (Kohler,G.,Milstein,C.: Nátuře 256 /1975/, 495), klonováním buniek získaných somatickou hybridi- záciou myšej myelómovej bunkovej linie Sp2/0 a slezinových lymfoidných buniek syngén-neho zvierata (inbredný chov BALB/c), imunizovarého opakovanými intraperitoneálnymidávkami (2.10 buniek/dávka) bunkovej suspenzie humánnej non-T, non-B ALL leukemickejbunkovej linie; subklon Bra FB6/a s vysokou produkciou protilátky bol získaný opakova-ným klonováním limitujúcim riedením. Výhoda získaného hybridómu Bra FB6/a podía vynálezu spočívá predovšetkým v tom,že produkuje monoklonálne protilátky, rozpoznávajúce HLA antigén DP II..triedy a Spe-cificky imunoprecipituje glykopeptidické retazce gp (29,34), čo má experimentálně vy-užitie v laboratóriách pře transplantačnú imunológiu a onkológiu. Příklad 8 10 slezinových buniek imunizovanej myšky inbredného chovu BALB/c sa fázuje s6.10 Sp2/0 myelómových buniek v přítomnosti 45%ného polyetylénglykolu (PEG), klonuje sa limitujúcim riedením na vrstvě syngénnych myších thymocytov (2.105 buniek/mikrokul-túra) v selekčnom médiu hypoxantín-aminopterín-tymidín (HAT).

Subklon Bra FB6/a s vysokou produkciou monoklonálnych protilátok, selektovanýchna základe špecifickej reaktivity s panelom íudských leukemických/lymfómových buňko-vých linii a hematopoetickými buňkami zdravých darcov, sa získal opakovaným klonovánímtechnikou limitujúceho riedenia v mikroplatniach, v kultivačnom médiu s obsahom 10?ó fe-tálneho teíacieho séra, až po vznik stabilnej monoklonálnej bunkovej kultúry, produku-júcej monoklonálnu protilátku danej špecificity.

Produkcia monoklonálnej protilátky vo vysokej koncentrácii sa uskutečni tak, že

Claims (1)

1. 4 CS 275758 B6 2 sa inokuluje 5.10^ hybridómových buniek do peritoneálnej dutiny syngénnych myší, preme- dikovaných intraperitoneálnym podáním tetrametylpentadekánu. Monoklonálna protilátka, přítomná v supernatante bunkovej kultúry resp. v ascitickej tekutině získanej z inoku- lovaných myšiek, Specificky rozpoznává HLA antigén IX. triedy DP podtypu a Specificky imunoprecipituje glykopeptidické retazce gp (29,34). Buňky hybridómu rastů ako suspenzná kultúra buniek s morfológiou myších myelómo-vých buniek. Základným kultivačným médiom je RPMI 1640 s 10% fetálnym telacím sérom.Hybridóm je kultivovaný při teplote 37 °C v 0,5 % oxide uhličitom, Zo zmrazených ampu-lovaných vzoriek povodného hybridómu (v tekutom dusíku) je možné nové kultivovaniehybridómu s produkciou monoklonálnej protilátky s povadnou Specificitou. Myší lymfocytárny hybridóm Bra FB6/a s ním produkovaná monoklonálna protilátkamožu byt technologicky připravované a komerčně využívané v diagnostickom imunofenoty-povaní nádorových buniek, v imunocytochemickej spresnenej diagnostike niektorých ty-pov nádorov, vo vyhodnocovaní metastatického potenciálu buniek niektorých novotvarov,při študiu indukcie expresie membránových antigénov lymfokínmi a imunomodulátormi, vtechnikách transplantačnej imunologie, v biochemickej izolácii HLA antigénu (DP) II.triedy. PATENTOVÉ NÁROKY Myší lymfocytárny hybridóm Bra FB6/a, produkujúci mdnoklonálnu protilátku podtrie-dy proti HLA antigénu II. triedy DP podtypu. $ .1 •JÍ <? •t