CS273053B1 - Secondary external standard for a vitamine's acetate content determination - Google Patents

Description

1 CS 273053 B1

Vynález sa týká použitia 2,6-ditercbutyl-4-metylfenolu pre stanoveni© obsahuoctanu vitaminu A vzorcov I. a II. zobíadňujúce biologická účinnost’ jednotlivých izo-mérov metodou kvapalinovej chromatografie na silikagóli s chemicky viazanými oktade-cylovými skupinami.

Na stanovenie obsahu octanu vitamínu A sa doteraz používá spektrofotometrickámetoda, ktorá nie je dostatočne selektívna. Přítomnost balastných látok absorbujúcichv oblasti- 320 až 330 nm ruší přesnost’ a správnost* výsledkov /Knobloch E., Fyzikálněchemické metody stanovení vitamínů, 1956/. Oddelenie týchto balastných látok čiastočnerieši CS AO 246254 sorbciou na stípci AlgO^.

Viacerí autoři sa zaoberali plynovo-chromatografickou metodou stanovenie obsahuvitamínu A. Vecchi M. a spol. /J. Chrom. 83. 1973, 447-453/ zjistili, že metoda nie jeuspokojivá. Nepodařilo sa úplné separovat’ jednotlivé izomóry, vzorku třeba před nástre-kom upravovat zmydelnením a následnou silyláciou, v injekčnotn priestore chromatografunastáva Siastočná reizomerizácia vzorky,

Vecchi a spol. analyzovali octan vitamínu A bez predchádzajúcej úpravy vzorkyzmydelnením metodou kvapalinovej chromatografie v systéme s normálnymi fázami s použi-tím naftalénu a etylbenzoátu ako interného standardu. lukačovičová a Karabin osová analy-zovali octan itamínu A v systéme s reverznými fázami 8 použitím kryštalického vitamínuA scetátu ako standardu (CS AO 260286). Nebrala sa však do úvahy biologická účinnost’jednotlivých izomérov a přesnost' stanovenia je ovplyvnená nestabilitou použitého Stan-dardu.

Nevýhodou týchto postupov je zložitá úprava vzorky. Sálej hlavně nepřesnost’ stano-venia sposobená pri spektrofotometrických postupoch prítomnostou balastných látoka pri použití chromatografického delenia nestabilitou externého standardu a nezohlad-ňovaní biologlckej účinnosti jednotlivých Izomérov.

Uvedené nedostatky odstraňuje použitie 2,6-ditercbutyl-4-metylfenolu ako sekundár-ného externého standardu, ktorý je bežne dostupný a používá sa hlavně ako antioxidačnýstabilizátor (M. Mandák a kol., Liekové formy, 1985).

Pri hťadaní vhodného sekundárného externého standardu na stanovenie obsahu octanuvitaminu A eme s překvapením zistili, že 2,6-ditercbutyl-4-metyIfenol má v danom chro-matografickom systéme podobnú,pohyblivost ako octan vitamínu A, pričom má velmi dobrérozlíšenie od všetkých zložiek a v použitej koncentrácii je spektrálné detegovatelný.

Navrhovaná metoda stanovenia octanu vitamínu A chromatografiou na stípci se sili-kagélom s chemicky viazanými oktadecylovými skupinami a použitím sekundárného externé-bo Standardu 2,6-ditercbutyl-4-metylfenolu, zohťadňujúca biologická účinnost’jednotli-vých izomérov dává dosial’ najpresnejší obraz o biologickej účinnosti vitamínu A vo CS 273053 B1 2 formě koncentrátu octěnu vitamínu A i v sypkých formách octěnu vitamínu A, Vynálezsa výhodné využije pri stanovení vitamínu A v chemicko-farmaceutickora priemysle.

Postup podťa vynálezu je objasněný na príkladoch prevedenia bez toho, že by tietoobmedzovali predmet vynálezu. Příklad 1

Stanovenie responzného faktora

Roztok sekundárného externého Standardu:

Do odmernej banky na 25 ml sa naváži 0,12 g bezfarebného krystalického 2,6-ditercbu-tyl-4-metylfenolu, rozpustí sa v izopropanole a doplní sa izopropanolom po značku,používá sa vždy čerstvo připravený.

Roztok krystalického vitamínu A:

Do 25 ml odmernej banky sa naváži asi 0,025 g krystalického octanu vitamínu A, roz-pustí sa pretrepaním v izopropanole a doplní sa Izopropanolom po značku, Z tohotoroztoku sa odpipetuje 1 ml do 50 ml odmernej banky a doplní sa po značku izopropano-lom.

Postup: Do kvapalinového chromatografu sa nastrekne po 3x roztok Bekundárneho externé-ho Standardu a roztok krystalického octanu vitamínu A, Z priemerných hodnot ploch savypočítá responzný faktor: P · ns+ H = _S-SÍ PSf na

P plocha píku krystalického octanu vitamínu A pSt » plocha piku sekundárného externého Standardu nfl b návažok krystalického octanu vitamínu A v g nšt ~ návažok sekundárného externého Standardu v g

Roztok vzorky:

Do 100 ml odmernej banky sa naváži asi 0,150 g vzorky octanu vitamínu A vo formě syp-kej hmoty, přidá sa 2 ml vody a nechá sa rozpustil? v ultrazvukovom kúpeli. Banka sa poochladení doplní izopropanolom, pretrepe. Roztok sa přefiltruje cez filtračný papiera z filtrátu sa pipetuje 2,0 ml do 25 ml odmernej banky a doplní sa izopropanolom poznačku.

Vlastnó stanovenie: Do kvapalinového chromatografu sa nastrekne po 2x roztok vzorkya roztok sekundárného externého Standardu. x „ pvz-nst-qpSt*nvz*Kf

Obsah 13-cis izoméru v m.j./g sa vypočítá: P„„ y a Z?—g*- . 1,089 . 0,819 PSt,avz’Rf

Celkový obsah octanu vitamínu A v m.j./g sa vypočítá: z = x + ypvz a Plocha pito v2orky Pšt “ Plocba pito sekundárného externého Standardu nyz » návažok vzorky v g

Claims (2)

1. .»Ί fit C3 273053 B1 n = návažok sekundárného externého standardu v g q = obsah krystalického octanu vitamínu A v m.j./g, stanovený podťa ČsL Rf a responzný faktor 1,089 a prepočítavací faktor na 13-cis izomér /Stenerle H., J.Cbrom., 206. 1981, 2,319-326/ 0,819 = účinnost 13-cis izoméru vzhladom na all-trans izomér /Knobloch E., Pokroky vefarmacii 2, 1980, 242/ Podmienky chromatografického stanovenia: Kolona: Lichrosorb RP - 18,7 ^um Mobilní fáza: acetonitril - voda : 83-17 Prietok: 1,80 ml/min Detekcia: 300 nm /sekundárný externý Standard,/ 325 nm / Octan vitaminu A/ Citlivost1 detektore: 0,32 AUFSNástrek: Rheodyne naivě 20 f«-lRetenčný čas all-trans izoméru : cca 12 min. Retenčný čae 13-cis izoméru : cca 11 min. Retenčný Sas externého standardu : cca 4 min. Příklad
2. 2 Stanovenie responzného faktora ako v příklade 1. Příprava vzorky: Do 100 ml od-mernej banky sa naváži asi 0,030 g vzorky vo formě koncentrátu octanu vitamínu A, při-dá sa izopropanol a vzorka sa rozpustí pretrepaním. Banka sa doplní po značku izopro-panolom. Roztok sa přefiltruje cez filtračný papier a z filtrátu sa pipetuje 2 ml do25 ml odmeraej banky a doplní sa po značku izopropanolom. Z tohoto roztoku sa nastre—'kuje 2x do kvapalinovébo chromatografu a Jalej sa postupuje ako v příklade 1. PREDMET VYNÁLEZU Použitie 2,6-ditercbutyl-4-metylfenolu ako sekundárného externého Standardu prestanovenie obsahu octanu vitamínu A vzorcov I. a II.

   metodou kvapalinovej chromátografie na silikageli s chemicky viazanými oktadecylovýmiskupinami.