CS272510B1 - Centrifugační cytosedimentáto - Google Patents

Abstract

Řešení se týká centrifugačního cytosedimentátoru určeného pro přípravu a další zpracování cytologických a jiných preparátů, jednoduchého zařízení, které sestává z nádobky, opatřené uzávěrem s plnicím otvorem, z vodicí zátky s vodicím otvorem a těsnicím okrajem, ve které je vsazena sedimentační trubice, opírající se o těsnění ve středové poloze polohovacího kroužku, jenž je uložen na mikroskopovém krycím sklu. Centrifugační cytosedimentátor se může výhodně uplatnit v mnoha oborech lékařské i jiné praxe, například v cytologii, hematologii, mikrobiologii apod.

Description

Vynález se týká centrifugačního cytosedimentátoru, určeného pro přípravu a další zpracování cytologických preparátů.

Jak je známo, užívají se tato zařízení především pro přípravu buněčných preparátů z buněčných suspenzí, které jsou předmětem experimentálního studia a diagnostiky v různých oborech, například v humánní a veterinární medicíně (cytologie, cytochemie, patologie, imunologie, mikrobiologie) a jiných vědních a průmyslových odvětvích. K tomuto účelu existují komerčně dostupné speciální cytocentrifugy různých typů, ale vždy s poměrně komplikovaným doplňkovým příslušenstvím pro sedimentaci buněk, které ovšem není použitelné v centrifuze jiné konstrukce. Hlavní funkční součástí je tzv. sedimentační komůrka, ve které se sedimentující materiál zachycuje na mikroskopovém podložním skle; další případné zpracování, například fixace, barvení, promývání a podobně je možné až po rozmontování sedimentační komůrky a vyjmutí skla. To představuje nevýhodu z hlediska možných ztrát buněk, vyšší spotřeby drahých chemikálií, protilátek atd. Vzhledem k vysokým cenám, včetně dalšího nezbytného příslušenství a složité a časově náročné manipulaci, nejsou tyto přístroje pro běžnou laboratorní praxi ekonomicky únosné. Jiná popsaná cytosedimentační zařízení (M. Šuta, Čs. neurol., 29, 101, 1966; Č. L. Hrazdíra, Čs. neurol., 29, 107, 1966) mají také některé nevýhody: sedimentace při 1 až 8g_„ na podložení sklo, zpracování preparátu až po rozmontování sedimentača v ního zařízení. Použití filtračního papíru k odsátí tekutého média podobně jako u výše zmíněných cytocentrifug způsobuje nerovnoměrnou distribuci buněk na sedimentační plochu.

Úkolem vynálezu tedy bylo odstranit uvedené technické a ekonomické nedostatky, a to řešením takového centrifugačního cytosedimentátoru,’který by umožňoval použití běžně dostupné centrifugy s výkyvným rotorem, sedimentaci buněk na mikroskopové krycí sklo a následné zpracování, popřípadě přímo v cytosedimentátoru, pokud možno bez demontáže.

To se podařilo sestavením centrifugačního cytosedimentátoru, určeného pro přípravu a další zpracování cytologických a jiných preparátů, podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že sestává z nádobky, opatřené uzávěrem s plnicím otvorem, dále z vodicí zátky s vodicím otvorem a těsnicím okrajem, ve které je vsazena sedimentační trubice, opírající se o těsnění ve středové poloze polohovacího kroužku, který je uložen na mikroskopovém krycím sklu.

Pro snazší manipulaci, zejména při vkládání centrifugačního cytosedimentátoru do výkyvného rotoru centrifugy je účelné, když je uzávěr opatřen manipulačními elementy, například jedním, nebo více otvory a/nebo výstupky a/nebo očky.

Příklad provedení centrifugačního cytosedimentátoru podle vynálezu je schematicky znázorněn na připojeném výkresu v řezu, aniž by však byl jakkoliv omezen jen na zobrazené provedení. Jak je z výkresu patrno, tvoří základní část centrifugačního cytosedimentátoru nádobka 1, shora uzavíratelná uzávěrem 2_r v jehož středu je plnicí otvor 3 a který je opatřen výše zmíněnými, ale na výkresu neznázorněnými manipulačními elementy. Pod uzávěrem 2 je do nádobky 1 vsazena vodicí zátka 4, opatřená vodicím otvorem 5, jejíž těsnicí okraj 6 slouží jednak jako těsnění, především však brání nežádoucímu posunu do nitra nádobky 1. Vodicím otvorem 5 prochází sedimentační trubice 7, která se opírá svým spodním koncem o těsnění 9,'umístěné ve středové poloze polohovacího kroužku 8, který je položen na mikroskopovém krycím skle 10. Podložka 11 s vybráním 12 umožňuje sestavení a použití centrifugačního cytosedimentátoru i v tom případě, že na dně nádobky 1 je nálitek nebo jiná nerovnost. Je-li ovšem dno nádobky 1 dostatečně silné a rovné, není použití podložky 12 nutné a mikroskopové krycí sklo 10 spolu s polohovacím kroužkem 8 a těsněním 9 je možno pokládat přímo na dno nádobky 1 (tato eventualita není na výkresu znázorněna).

CS 272510 Bl

Centrifugační cytosedimentátor podle vynálezu je sestaven ze součástí, které jsou snadno dostupné a které lze popřípadě jednoduchými zásahy upravit nebo přizpůsobit požadovanému účelu. Všechny součásti mohou být vyrobeny z vhodných plastických hmot (některé popřípadě ze skla), které jsou pevné a alespoň omezeně pružné, pokud možno průhledné nebo‘průsvitné; u některých součástí to ale není nutné. Použitý materiál musí být samozřejmě chemicky stálý, nesmí se měnit samovolně, ani stykem s používanými činidly a musí být sterilizovatelný vhodnými způsoby, například zářením nebo plynnými prostředky.

Centrifugační cytosedimentátor podle vynálezu může být k dispozici v několika velikostech podle účelu použití a také zpravidla podle velikosti centrifugy, se kterou se obvykle pracuje. Poměr šířky k výšce nádobky 1 není nijak kritický, zpravidla se volí poměr například 1 : 2 až 1 : 3. Tomu je přizpůsoben i průměr sedimentační trubice 7, zhruba asi 1/3 průměru nádobky 1. Běžná velikost nádobky 1 se tedy může pohybovat asi okolo 25 až 30 mm (šířka) a 70 až 80 mm (výška), průměr sedimentační trubice 7 asi 8 až 12 mm. Pokud to okolnosti vyžadují, mohou se jim rozměry samozřejmě přizpůsobit.

Uzávěr 2 slouží především k přitlačení sedimentační trubice 7 na těsnění 9 v polohovacím kroužku 8 na mikroskopovém krycím skle 10. Nejvýhodnější je upevnění uzávěru 2 k nádobce 1 pomocí závitu, který umožňuje citlivé dotažení a přiměřené přitlačení sedimentační trubice 7 bez deformace nebo poškození kterékoliv součásti centrifugačního cytosedimentátoru. Nejsou samozřejmě vyloučena ani jiná řešení, pokud se jimi dosáhne spolehlivě stejného účinku.

V běžné praxi se počítá s jednorázovým použitím součástí, které přicházejí do styku se sledovanou buněčnou suspenzí; možnosti opakovaného použití celé soupravy nebo jen některých jejích součástí nejsou samozřejmě vyloučeny a jsou dány povahou a/nebo četností prováděných vyšetření.

Manipulace s centrifugačním cytosedimentátorem podle vynálezu je velmi jednoduchá: Po sestavení se plnicím otvorem J3, v uzávěru 2 naplní do sedimentační trubice 7 (podle její velikosti) zkoumaná buněčná suspenze o objemu.od 0,1 až 5 ml, potom se cytosedimentátor vloží do centrifugy s výkyvným rotorem a odstřeluje se potřebnou dobu při zvoleném počtu otáček. Při centrifugaci se sedimentující buňky přichytí na mikroskopovém krycím skle 10. Po centrifugaci lze supernatant dekantovat, popřípadě odsát a potom lze v centrifugačním cytosedimentátoru provádět další operace, například promývání, fixaci, barvení i dobarvování buněk a v případě, že se používají drahá a/nebo obtížně dostupná činidla, stačí k překrytí sedimenteváných buněk právě potřebný objem takového činidla. Připravený buněčný sediment je možno podle potřeby zpracovat po vyjmutí z cytosedimentátoru nejen mikroskopickými technikami, ale i technikami buněčných kultur, kvantitativní densitometrie a podobně.

Všechny popsané operace, včetně případných cytochemických reakcí, lze provádět při zvolené konstantní teplotě, kdy se centrifugační cytosedimentátor inkubuje ve vhodném termostatu. S centrifugačním cytosedimentátorem podle vynálezu lze spolehlivě pracovat v rozsahu teplot od 0 do 40 °C. .

Výhody centrifugačního cytosedimentátoru podle vynálezu spočívají především v jednoduché konstrukci, používající běžných součástek z levného a dostupného materiálu a ve snadné manipulaci, dále ve vedení sedimentace buněk pouze silou kolmou k sedimentační ploše, na rozdíl od cytosedimentátorů používajících i odsávání media ze sedimentační plochy laterálně, což vede k nerovnoměrné distribuci i ke ztrátám buněk, možnost zpracování buněk přímo v centrifugačním cytosedimentátoru, což brání ztrátám buněk a šetří činidla a konečně možnost široké aplikace v mnoha oborech lékařské i jiné praxe.

Claims (3)

1. Centrifugační cytosedimentátor pro přípravu a další zpracování cytologických a jirjjch prepráta.vybačující se tím, že sestává z nádobky (1), opatřené uzávěrem (2) s plnicím otvorem (3), dále z vodicí zátky (4) s vodicím otvorem (5) a těsnicím okrajem (6), ve kterém je vsazena sedimentační trubice (7), opírající se o těsnění (9) ve středové poloze polohovacího kroužku (8), který je uložen na mikroskopovém krycím sklu (10).

2. Cytosedimentátor podle bodu 1, vyznačující se tím, že uzávěr (2) je opatřen manipulačními elementy, například jedním nebo více otvory a/nebo výstupky a/nebo očky.

3. Cytosedimentátor podle bodu 1, vyznačující se tím, že mezi mikroskopovým krycím sklem (10) a dnem nádobky (1) je umístěna podložka (11) s vybráním (12).