CS272185B1 - Immobilized biocatalyst for transformation of nicotinamidadenindinucleotide in nicotinamidadenindinucleotide phosphate and method of its preparation - Google Patents
Immobilized biocatalyst for transformation of nicotinamidadenindinucleotide in nicotinamidadenindinucleotide phosphate and method of its preparation Download PDFInfo
- Publication number
- CS272185B1 CS272185B1 CS873917A CS391787A CS272185B1 CS 272185 B1 CS272185 B1 CS 272185B1 CS 873917 A CS873917 A CS 873917A CS 391787 A CS391787 A CS 391787A CS 272185 B1 CS272185 B1 CS 272185B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- adenine dinucleotide
- nicotinamide adenine
- biocatalyst
- carrageenan
- immobilized
- Prior art date
Links
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 33
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 33
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 title claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 230000009466 transformation Effects 0.000 title claims abstract description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 8
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 title description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 title description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 title description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 claims abstract description 19
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 claims abstract description 18
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 claims abstract description 11
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 claims abstract description 11
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 8
- 125000005341 metaphosphate group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 239000007863 gel particle Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims abstract description 3
- XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-N NADP zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims abstract 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract 2
- PUZPDOWCWNUUKD-UHFFFAOYSA-M sodium fluoride Chemical compound [F-].[Na+] PUZPDOWCWNUUKD-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 4
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 claims description 3
- NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N hexane-1,6-diamine Chemical compound NCCCCCCN NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000013024 sodium fluoride Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011775 sodium fluoride Substances 0.000 claims description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 241000186063 Arthrobacter Species 0.000 claims 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 claims 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- XLROVYAPLOFLNU-UHFFFAOYSA-N protactinium atom Chemical compound [Pa] XLROVYAPLOFLNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims 1
- 241000186074 Arthrobacter globiformis Species 0.000 abstract description 4
- 241000186308 Corynebacterium stationis Species 0.000 abstract description 3
- 229940055012 brevibacterium stationis Drugs 0.000 abstract description 3
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 14
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 8
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 8
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 7
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 description 5
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 210000001822 immobilized cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 241001432959 Chernes Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 2
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186145 Corynebacterium ammoniagenes Species 0.000 description 2
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 2
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- ZNOZWUKQPJXOIG-XSBHQQIPSA-L [(2r,3s,4r,5r,6s)-6-[[(1r,3s,4r,5r,8s)-3,4-dihydroxy-2,6-dioxabicyclo[3.2.1]octan-8-yl]oxy]-4-[[(1r,3r,4r,5r,8s)-8-[(2s,3r,4r,5r,6r)-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-5-sulfonatooxyoxan-2-yl]oxy-4-hydroxy-2,6-dioxabicyclo[3.2.1]octan-3-yl]oxy]-5-hydroxy-2-( Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](OS([O-])(=O)=O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H]2OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]3[C@@H]4OC[C@H]3O[C@H](O)[C@@H]4O)[C@@H]1O)OS([O-])(=O)=O)[C@@H]2O ZNOZWUKQPJXOIG-XSBHQQIPSA-L 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- KJTLQQUUPVSXIM-ZCFIWIBFSA-N (R)-mevalonic acid Chemical compound OCC[C@](O)(C)CC(O)=O KJTLQQUUPVSXIM-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WZYRMLAWNVOIEX-BGPJRJDNSA-N 3,6-anhydro-D-galactose Chemical compound O=C[C@H](O)[C@H]1OC[C@@H](O)[C@@H]1O WZYRMLAWNVOIEX-BGPJRJDNSA-N 0.000 description 1
- 108010092060 Acetate kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000590020 Achromobacter Species 0.000 description 1
- 241001474374 Blennius Species 0.000 description 1
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 description 1
- 241000206575 Chondrus crispus Species 0.000 description 1
- KJTLQQUUPVSXIM-UHFFFAOYSA-N DL-mevalonic acid Natural products OCCC(O)(C)CC(O)=O KJTLQQUUPVSXIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001147462 Gigartinaceae Species 0.000 description 1
- 239000011837 N,N-methylenebisacrylamide Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 241000588767 Proteus vulgaris Species 0.000 description 1
- 241001428151 Solieriaceae Species 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- WZYRMLAWNVOIEX-UHFFFAOYSA-N cinnamtannin B-2 Natural products O=CC(O)C1OCC(O)C1O WZYRMLAWNVOIEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010580 coupled enzyme reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol dimethacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCOC(=O)C(C)=C STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MATYBIXNDNXYMI-UHFFFAOYSA-N n-(2-oxopropyl)-n-prop-2-enylnitrous amide Chemical compound CC(=O)CN(N=O)CC=C MATYBIXNDNXYMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 description 1
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 1
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- OQZCJRJRGMMSGK-UHFFFAOYSA-M potassium metaphosphate Chemical compound [K+].[O-]P(=O)=O OQZCJRJRGMMSGK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940099402 potassium metaphosphate Drugs 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 229940007042 proteus vulgaris Drugs 0.000 description 1
- 238000010526 radical polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])[O-] QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002344 surface layer Substances 0.000 description 1
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 1
- POSZUTFLHGNLHX-KSBRXOFISA-N tris maleate Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OCC(N)(CO)CO.OC(=O)\C=C/C(O)=O POSZUTFLHGNLHX-KSBRXOFISA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 1
Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Imobilizovaný biokatalyzátor pro transformaci nikotinamidadenindinukleotidu v nikotinamidadenindlnukleotidfosfát obsahuje 10 až 30 % hmot. vlhkých permeabilizovaných mikrobiálních buněk 3 metafosfátdependentni nikotinamidadenindinukleotid-kinasovou aktivitou, s výhodou Arthrobacter globiformis nebo Bravibacterium ammoniagenes nebo Brevibacterium stationis, v 1,5 až 4 % hmot. gelu genu-carrageenanu. Způsob ■ přípravy spočívá v tom, že se vlhké promyté, odstředěná bakteriální .buňky imobilizují do gelu genu-carrageenanu, načež se na vzniklé částice gelu působí organickým rozpouštědlem, například acetonem, nebo povrchově aktivními látkami, například dodecylsulfátem.Immobilized biocatalyst for transformation of nicotinamide adenine dinucleotide in nicotinamide adenine dinucleotide phosphate 10 to 30 wt. wet permeabilized microbial cells 3 metaphosphate-dependent nicotinamide adenine dinucleotide kinase activity preferably Arthrobacter globiformis or Bravibacterium ammoniagenes or Brevibacterium stationis, in 1.5 to 4% wt. gel-carrageenan gel. The method of preparation is that it is moist washed, centrifuged bacterial cells immobilize the gene-carrageenan into the gel whereupon the resulting gel particles act an organic solvent, for example acetone, or surfactants, for example dodecyl sulfate.
Description
Vynález se týká imobilizovaného biokatalyzátoru pro transformaci nikotinamidadenindinukleotidu (NAD+) v nikotinamidadanindinukleotidfostát (NADP+) a způsobu jeho přípravy, Nikotinamidadenindinukleotidfosfát js důležitým koenzymem řady oxidoreduktas, dříve oziačovaných dehydrogenasy. Osho funkce spočívá v reversibilní vazbě vodíku:The present invention relates to an immobilized biocatalyst for the transformation of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NAD + ) into nicotinamide adanine dinucleotide phosphate (NADP + ) and to a process for its preparation. The osho function is based on the reversible hydrogen bond:
NAOP+ + 2 H NADP + H+ NAOP + + 2 H NADP + H +
V redukované formě se NADPH účastní synthesy řady sloučenin v živých buňkách - sacharidů mastných kyselin, kyseliny mevalonové při syntéze isoprenoidů atd. V chemických a biologických laboratořích se používá především při enzymovém stanoveni D-glukosy a při mctabolické aktivaci chemických sloučenin testovaných z hlediska jejich mutagenních a kancerogenních účinků.In reduced form, NADPH is involved in the synthesis of a number of compounds in living cells - fatty acid carbohydrates, mevalonic acid in the synthesis of isoprenoids, etc. In chemical and biological laboratories, it is used primarily in the enzymatic determination of D-glucose and metabolic activation of chemical compounds tested carcinogenic effects.
Původně se nikotinamidadenindinukleotidfosfát získával z mikrobiálních buněk (Hoda Y. a ap., Oaponský patent 76-151318, 1976). V těchto buňkách se věak vyskytuje v mnohem nižších koncentracích než nikotinamidadenindinukleotid (Murata K. a sp., Biotechnol. Bioeng. 21, 887, 1979), z něhož lze připravit fosforylací. Fosforylaci katalyzují specifické nikotinamidadenindinuklotid-kinasy dvojího druhu: kinasy vyžadující jako donor fosfátu adenosintrifosfát a kinasy, které k tomuto účelu využívají metafosfát (Murata K. a sp*. Agric. Biol. Chern. 44; 61, 1980). Izolaci a charakterizaci obou druhů byla věnována náležitá pozornost (Appa O. K., Eur. O. Biochem. 55, 475, 1975, Blomquist Ch. H*, Methods Enzymol. 66, 101, 1980, Hayashi T. a sp., Biotechnol. Bioeng. 21, 1019, 1979, Murata K. a sp., Agric Biol. Chern. 44, 1165, 1980) včetně možnosti přípravy heterogenního biokatalyzátoru imobilizací na různé typy nosičů (Sundaram P. V. a Apps D. K., Biochem 3. 161, 441, 1977).Initially, nicotinamide adenine dinucleotide phosphate was obtained from microbial cells (Hoda Y. et al., Japanese Patent 76-151318, 1976). In these cells, age occurs at much lower concentrations than nicotinamide adenine dinucleotide (Murata K. et al., Biotechnol. Bioeng. 21, 887, 1979), from which it can be prepared by phosphorylation. Phosphorylation is catalyzed by specific nicotinamide adenine dinucleotide kinases of two kinds: kinases requiring adenosine triphosphate as a phosphate donor and kinases that use metaphosphate for this purpose (Murata K. et al., Agric. Biol. Chern. 44; 61, 1980). Due attention has been paid to the isolation and characterization of both species (Appa OK, Eur. O. Biochem. 55, 475, 1975, Blomquist Ch. H *, Methods Enzymol. 66, 101, 1980, Hayashi T. et al., Biotechnol. Bioeng. 21, 1019, 1979, Murata K. et al., Agric Biol. Chern. 44, 1165, 1980) including the possibility of preparing a heterogeneous biocatalyst by immobilization on different types of supports (Sundaram PV and Apps DK, Biochem 3. 161, 441, 1977). ).
Aplikace adenosintrifosfát-dependentní nikotinamidadenindinukleotid-kinasy pro přípravu nikotinamidadenindinukleotidfosfát vyžaduje jako donor fosfátu přítomnost adenosintrifosfát v reakční směsi. Pokud je biotransformace prováděna imobilizováním enzymem, je výhodné adenosintrifosfát regenerovat v reakční směsi vhodnou spřaženou enzymovou reakci. K této regeneraci byl např. použit koimobilizovaný enzym acetát-kinasa (Miyawaki O. a sp., Agric. Biol. Chern, 46,' 2725, 1982). Přes všechny tyto možnosti je však pro přípravu nikotinamidadenindinukleotidfosfát jako výhodnější použití metafosfátdependentní NAO-kinasy, případně imobilizace celých mikrobiálních buněk ji obsahujících.The application of adenosine triphosphate-dependent nicotinamide adenine dinucleotide kinase for the preparation of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate requires the presence of adenosine triphosphate in the reaction mixture as a phosphate donor. If the biotransformation is performed by immobilization with an enzyme, it is advantageous to regenerate the adenosine triphosphate in the reaction mixture by a suitable coupled enzyme reaction. For example, the co-immobilized enzyme acetate kinase was used for this regeneration (Miyawaki O. et al., Agric. Biol. Chern, 46, 2725, 1982). Despite all these possibilities, however, the use of metaphosphate-dependent NAO-kinase or the immobilization of whole microbial cells containing it is more advantageous for the preparation of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate.
Příprava a použití heterogenních biokatalyzátorů na bázi imobilizovaných buněk je ve srovnání s imobilizovanými enzymy výhodnější nejenom z hlediska možnosti regenerace adenosintrifosfát či některých kofaktorů, ale i tím, že odpadá mnohdy technicky i ekonomicky náročná izolace enzymů, přičemž se tyto enzymy obsažené přímo v imobilizovaných buňkách nacházejí ve fyziologickém prostředí, lokalizované často na subcelulárních částicích, v důsledku čehož je i jejich stabilita velmi často výrazně vyšší než v izolovaném stavu. Z tohoto důvodu je i stabilita heterogenních biokatalyzátorů připravených imobilizací celých buněk většinou vyšší ve srovnání s biokatalyzátory na ba'zi imobilizovaných enzymů. Ve shodě s těmito zobecněnými zkušenostmi byla i pro biotransformači nikotinamidadenindinukleotid v nikotinamidadenindínukleotidfosfát věnována nejvyšší pozornost přípravě heterogenních biokatalyzátorů obsahujících imobilizované buňky s nikotinamidadenindinukleotid-kinasovou aktivitou.The preparation and use of heterogeneous biocatalysts based on immobilized cells is more advantageous compared to immobilized enzymes not only in terms of the possibility of regeneration of adenosine triphosphate or some cofactors, but also by eliminating the often technically and economically demanding isolation of enzymes. in a physiological environment, often localized on subcellular particles, as a result of which their stability is very often significantly higher than in the isolated state. For this reason, the stability of heterogeneous biocatalysts prepared by immobilization of whole cells is usually higher compared to biocatalysts based on immobilized enzymes. Consistent with this general experience, the biotransformation of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate has also received the utmost attention to the preparation of heterogeneous biocatalysts containing immobilized cells with nicotinamide adenine dinucleotide kinase activity.
Z mnoha druhů mikroorganismů, u nichž byla prokázána nikotinamidadenindinukleotid-kinasová aktivita, byly pro přípravu heterogenních biokatalyzátorů používány především Achromobacter aceris (Uchida I. a sp., Biotechnol. Bioeng. 20, 255, 1978), Proteus vulgaris (Watanabe T. a sp., Oaponský patent 78-115891 a Japonský patent 78-115892, 1978) a Brevibacterium ammoniaganes (Hayashi T. a sp., Biotechnol. Bioeng. 21, 1019, 1979, Watanabe T. a sp., Oaponský patent 78-88385, 78-99386, 78-115891,· 78-115892, 1978 a Murata K. a sp., Biotechnol. Bioeng. .21, 887, 1979). Vedle nejčastěji používané imobilizace do polyakrylamidového gelu, případně koimobilizace s kvasinkami do tohoto gelu (Ado Y, a Kimura Κ·, Enzyme Eng. 5, 295, 1980, Watanabe T, a sp., Oaponský patent 78, 142596 aOf the many species of microorganisms in which nicotinamide adenine dinucleotide kinase activity has been demonstrated, Achromobacter aceris (Uchida I. et al., Biotechnol. Bioeng. 20, 255, 1978), Proteus vulgaris (Watanabe T. et al. ., Japanese Patent 78-115891 and Japanese Patent 78-115892, 1978) and Brevibacterium ammoniaganes (Hayashi T. et al., Biotechnol. Bioeng. 21, 1019, 1979; Watanabe T. et al., Japanese Patent 78-88385, 78-99386, 78-115891, · 78-115892, 1978 and Murata K. et al., Biotechnol. Bioeng. 21, 887, 1979). In addition to the most commonly used immobilization in a polyacrylamide gel, or co-immobilization with yeast in this gel (Ado Y, and Kimura®, Enzyme Eng. 5, 295, 1980, Watanabe T, et al., Japanese Patent 78, 142596 and
CS 272 185 81 ώ CS 272 185 81 ώ
78-142597, 1978) byl např. použit též polymer vytvořený z polyethylenglykoldimethakrylátu (Tanaka Y. a sp., Biotechnol. Bioeng. 24, 857, 1982). U mikroorganismu Brevibacterium ammoniagenes imobilizovaného do polyakrylamidového gelu bylo využito též jeho metafosfátdependsntní nikotinamidadenindinukleotid-kinasové aktivity (Murata K. a sp., Biotechnol. Bioeng. £1, 887, 1979).78-142597, 1978), for example, a polymer formed from polyethylene glycol dimethacrylate was also used (Tanaka Y. et al., Biotechnol. Bioeng. 24, 857, 1982). Its metaphosphate-dependent nicotinamide adenine dinucleotide kinase activity has also been used in the microorganism Brevibacterium ammoniagenes immobilized on a polyacrylamide gel (Murata K. et al., Biotechnol. Bioeng. £ 1, 887, 1979).
Příprava heterogenních biokatalyzátorů zabudováním enzymové aktivního biologického materiálu do synthetického gslu vytvořeného radikálovou polymsrací akrylamidu s N/N*-methylen-bis-akrylamidem má však řadu nevýhod. Dosud není znám způsob provedení polymeracs, podle kterého by bylo možno připravit částice gelu sférického tvaru a alespoň přibližně shodné velikosti, které by zaručovaly optimální hydrodynamické vlastnosti biokatalyzátoru. Největším nedostatkem uvedeného postupu je však skutečnost, že by? i krátkodobým stykem buněčného materiálu s monomery akrylamidem a N,N/-methylen-bis-akrylamidem dochází často ks snížení příslušné enzymové aktivity. Ke ztrátám enzymové aktivity buněčného materiálu dochází též pod vlivem tepla, které se uvolňuje během polymerace.However, the preparation of heterogeneous biocatalysts by incorporating enzymatically active biological material into a synthetic glycol formed by radical polymerization of acrylamide with N / N * -methylene-bis-acrylamide has a number of disadvantages. It is not yet known to carry out polymeracs according to which it is possible to prepare gel particles of spherical shape and at least approximately of the same size, which would guarantee optimal hydrodynamic properties of the biocatalyst. However, the biggest drawback of this procedure is the fact that? even short-term contact of the cellular material with the monomers acrylamide and N, N - methylene-bis-acrylamide often results in a decrease in the respective enzyme activity. Loss of enzymatic activity of cellular material also occurs under the influence of heat released during polymerization.
Uvedený nedostatek je možno odstranit využitím imobilizovaného biokatalyzátoru podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje mikrobiální buňky s metafosfátdspendantní nikotinamidadenindinukleotid-kinasovou aktivitou v gelu genu-carrageenanu, popřípadě dále mechanicky zpevněného a stabilizovaného. Imobilizovaný biokatalyzátor podle vynálezu obsahuje s výhodou mikrobiální buňky Brevibacterium ammoniagenes nebo Brevibacterium stationis nebo Arthrobacter globiformis, zabudované v 1,5 až 4% (hmot.) gelu genu-carrageenanu v množství 10 až 30 % hmot, vlhkých buněk. Při přípravě biokatalyzátoru se vlhké nakultivované buňky suspendují v 3 až 5% sólu genu-carrageenu 30 až 50 °C teplého. Po důkladném promíchání se směs nakape do vychlazeného roztoku 0,3 M chloridu draselného přes vrstvu parafínového oleje. Vzniklé kuličky gelu s imobilizovanými buňkami se po 24 h stání v 0,3 M roztoku chloridu draselného a následné permeabilizaci používají pro biotransformace nikotinamidadenindinukleotid na nikotinamidadenindinukleotidfosfát, případně se s výhodou dále zpevní zesítěním jejich povrchové vrstvy přídavkem 1,6-diaminohexanu a glutaraldehydu. Buňky se s výhodou permeabilizuji acetonem nebo povrchově aktivními látkami, například dodecylsulfátem až po jejich imobilizaci. Pro potlačení rozvoje mikrobiální kontaminace je výhodné použiti inhibitorů, například 0,01 až 0,3 mol/1 fluoridu sodného a/nebo 0,1 až 3 mM/1 azidu eodného.This disadvantage can be eliminated by using the immobilized biocatalyst according to the invention, the essence of which consists in that it contains microbial cells with metaphosphate-dispersant nicotinamide adenine dinucleotide kinase activity in a gene of gene-carrageenan, optionally further mechanically strengthened and stabilized. The immobilized biocatalyst according to the invention preferably contains microbial cells of Brevibacterium ammoniagenes or Brevibacterium stationis or Arthrobacter globiformis, incorporated in a 1.5 to 4% (w / w) gel-carrageenan gel in an amount of 10 to 30% by weight of wet cells. In preparing the biocatalyst, the wet cultured cells are suspended in 3 to 5% of the gene-carrageenan salt 30 to 50 ° C warm. After thorough mixing, the mixture was added dropwise to a cooled solution of 0.3 M potassium chloride through a layer of paraffin oil. The resulting gel beads with immobilized cells are used for biotransformation of nicotinamide adenine dinucleotide to nicotinamide adenine dinucleotide phosphate after standing for 24 hours in a 0.3 M potassium chloride solution and optionally further solidified by crosslinking their surface layer by adding 1,6-diaminohexane and glutaraldehyde. The cells are preferably permeabilized with acetone or surfactants, for example dodecyl sulfate, only after immobilization. To suppress the development of microbial contamination, it is advantageous to use inhibitors, for example 0.01 to 0.3 mol / l sodium fluoride and / or 0.1 to 3 mM / l eodium azide.
Připravený imobilizovaný biokatalyzátor použije k biotransformaci nikotinamidadenindinukleotid na nikotinamidadenindinukleotidfosfát v prostředí obsahujícím 2 až 20 mM nikotinamidadenindinukleotid, 2 až 60 mM Mg , 0,05 až 3 % hmot, metafosfátu a případně i 0,01 až 0,2 M D-glukosu. Všechny složky se rozpustí ve vhodném pufru o pH 5,5 až 9,0, Biotransformace se provádí v rozmezí 20 až 55 °C. Izolace nikotinamidadenindinukleotidfosfát se provádí po proběhnutí reakce některých ze známých postupů, například ionexovou chromatografií. Nezreagovaný nikotinamidadenindinukleotid se vrací do reakce.The prepared immobilized biocatalyst uses nicotinamide adenine dinucleotide to biotransform into nicotinamide adenine dinucleotide phosphate in a medium containing 2 to 20 mM nicotinamide adenine dinucleotide, 2 to 60 mM Mg, 0.05 to 3% by weight, metaphosphate and optionally 0.01 to 0.2 M D-glucose. All components are dissolved in a suitable buffer of pH 5.5 to 9.0. The biotransformation is performed in the range of 20 to 55 ° C. Isolation of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate is carried out after reaction of some of the known methods, for example by ion exchange chromatography. Unreacted nicotinamide adenine dinucleotide is returned to the reaction.
Hlavni výhodou imobilizovaného biokatalyzátoru je použiti genu-carregeenanu k imobilizaci buněk. Genu-carrageenan je druh carrageenanu izolovaný z řas rodů Gigartinaceae a Solieriaceae obsahující ve své molekule D-galaktosu, 3,6-anhydro-D-galaktoeu a 20 až 30 % hmot, sulfátových skupin. Gsnu-carrageenan může být použit k imobilizaci přímo po izolaci z mořských řas, na rozdíl od kappa-carrageenanu běžně izolovaného z řas Chondrus crispus; který musí být oddělen ze eměei od lambda-carrageenanu,' nebo? tento nevytváří za přítomnosti draselných lontů rigidní gely. Z tohoto důvodu je genu-carrageenan ve srovnání s kappa-carrageenanem technicky i ekonomicky daleko snáze ziskatelný.The main advantage of an immobilized biocatalyst is the use of gene-carregeenan to immobilize cells. Genu-carrageenan is a type of carrageenan isolated from algae of the genera Gigartinaceae and Solieriaceae containing in its molecule D-galactose, 3,6-anhydro-D-galactose and 20 to 30% by weight of sulphate groups. Gsnu-carrageenan can be used for immobilization directly after isolation from seaweed, unlike kappa-carrageenan commonly isolated from Chondrus crispus algae; which must be separated from eměei from lambda-carrageenan, 'or? it does not form rigid gels in the presence of potassium ions. For this reason, gene-carrageenan is much easier to obtain technically and economically in comparison with kappa-carrageenan.
Vytvořený imobilizovaný biokatalyzátor má velmi dobré hydrodynamické vlastnosti a dostatečnou rigiditu částic s malým rozpětím distribuce jejich velikosti. Jeho hlavní předností je va srovnáni s dříve používanými imobilízaČními postupy velmi dobrá stabilita umožňující dlouhodobé použití, zvláště pokud jsou imobilizovány buňky Brevibacterium stationis nebo Arthrobacter globiformis; které vykazuji po imobilizaci dlouhodobou nikoIThe formed immobilized biocatalyst has very good hydrodynamic properties and sufficient rigidity of particles with a small range of their size distribution. Its main advantage is, in comparison with previously used immobilization procedures, very good stability allowing long-term use, especially when Brevibacterium stationis or Arthrobacter globiformis cells are immobilized; which show long-term nikoI after immobilization
CS 272 185 Bl tinamidadenindinukleotid-kinasovou aktivitu, i za přítomnosti azidu sodného, tj. substance potlačující rozvoj bakteriální kontaminace.CS 272 185 B1 tinamidadenine dinucleotide kinase activity, even in the presence of sodium azide, i.e. a substance that suppresses the development of bacterial contamination.
Vynález je dále blíže objesněn v příkladech provedení, aniž by se jimi omezoval.The invention is further elucidated in the exemplary embodiments without being limited thereto.
Příklad 1Example 1
K 1 hmot, dílu nakultivovaných, vodou promytých a odstředěných buněk Bravibacterium ammoniagenes CCM 317 se přidají 4 obj. díly 4% (hmot.) sólu genu-carrageenanu 37 °C teplého. Směs se po důkladném promíchání nakape do vychlazeného 0,3 M roztoku chloridu draselného přes vrstvu parafínového oleje. Buňky imobilizované ve vytvořených kuličkách gelu se po 16 h stáni v 0,3 M KC1 podrobí permeabilizaci vychlazeným acetonem po dobu 15 minut. Po odstranění acetonu se připravený imobilizovaný biokatalyzátor přidá do reakční směsi obsahující 5 mM nikotinamidadenindinukleotid, 20 mM MgClg a 1% (hmot.) metafosfát draselný v tris-HCl pufru o pH 6/8. Směs se inkubuje za míchání 4 h při 37 °C. Po odfiltrování biokatalyzátoru se z filtrátu izoluje některým ze známých postupů nikotinamidadenindinukleotidfosfát, Konverze činí 38 %.To 1 part by weight of cultured, water-washed and centrifuged Bravibacterium ammoniagenes CCM 317 cells are added 4 parts by volume of 4% (w / w) of the 37 ° C warm gene-carrageenan salt. After thorough mixing, the mixture was added dropwise to a cooled 0.3 M potassium chloride solution through a layer of paraffin oil. Cells immobilized in the formed gel beads were subjected to permeabilization with chilled acetone for 15 minutes after standing in 0.3 M KCl for 16 h. After removal of acetone, the prepared immobilized biocatalyst was added to a reaction mixture containing 5 mM nicotinamide adenine dinucleotide, 20 mM MgCl 2 and 1% (w / w) potassium metaphosphate in Tris-HCl buffer pH 6/8. The mixture was incubated with stirring at 37 ° C for 4 h. After filtering off the biocatalyst, nicotinamide adenine dinucleotide phosphate is isolated from the filtrate by one of the known methods. The conversion is 38%.
Příklad 2 'Example 2 '
Buňky Brevibacterium stationis OBM 1073 se po kultivaci při 30 °C v prostředí o pH 7,5 obsahujícím v 1 litru: 20 g D-glukosy, 1 g /NH^/gSO^,’ 0,1 g MgClg.7 HgO, 8,7 g KgHPO^ a 10 g kvasničného autolyzátu odstředí a potom promyjí vodou. K 1 hmot, dílu Vlhkých buněk se přidají čtyři obj. díly 3% (hmot.) sólu genu-carrageenanu 37 °C teplého. Směs se po důkladném promíchání nakape přes vrstvu parafínového oleje do vychlazeného roztoku 0,3 M KC1, Po 12 h stání v tomto roztoku se k sférickým částicím biokatalyzátoru přidá v poměru 1 : 1 (obj.) vychlazený roztok obsahující 0,5 M fosfátový pufr pH 7,0, 0,3 M KC1 a 0,085 M 1,6-diaminohexan. Po 5 minutách stání ee biokatalyzátor odsaje a potom se převrství roztokem obsahujícím 0,5 M fosfátový pufr pH 7,0/ 0,3 M KC1 a 0,085 M glutaraldehyd. Po 30 minutách míchání při 5 °C se biokatalyzátor promyje 0,3 M roztokem KC1 a potom se imobilizované buňky permeabilizují acetonem. Po odstraněni acetonu se 2,5 hmot, dílu imobilizovaného biokatalyzátoru přidá k reakční směsi obsahující 3 obj. díly 0,1 M tris-maleinanového pufru pH 7,0, 0,2 obj. dílu 1,2 M MgClg, 0,8 obj. dílu 0,75 M NaF, 1,2 obj. dílu metafosfátu obsahujícího 6,25 g metafosfátu ve 20 ml roztoku, 0,2 obj. dílu 30% roztoku D-glukosy, 0,6 obj. dílu 250 mM NAD+ a 0/03 obj. dílu 100 mM NaNg. Po 4 h míchání při 37 °C ee biokatalyzátor odsaje a opětně použije k dalěi biotranaformaci. Konverze transformací nikotinamidadenindinukleotid v nikotinamidadenindinukleotidfosfát se pohybuje kolem 40 %,After culturing at 30 ° C in a pH 7.5 medium containing in 1 liter: , 7 g of KgHPO3 and 10 g of yeast autolysate are centrifuged and then washed with water. To 1 part by weight of wet cells, four volumes of 3% (w / w) of the 37 ° C warm gene-carrageenan salt are added. After thorough mixing, the mixture is added dropwise through a layer of paraffin oil to a cooled solution of 0.3 M KCl. After standing in this solution for 12 h, a cooled solution containing 0.5 M phosphate buffer is added to the spherical biocatalyst particles in a ratio of 1: 1 (v / v). pH 7.0, 0.3 M KCl and 0.085 M 1,6-diaminohexane. After standing for 5 minutes, the biocatalyst is filtered off with suction and then overlaid with a solution containing 0.5 M phosphate buffer pH 7.0 / 0.3 M KCl and 0.085 M glutaraldehyde. After stirring at 5 ° C for 30 minutes, the biocatalyst was washed with 0.3 M KCl solution and then the immobilized cells were permeabilized with acetone. After removal of acetone, 2.5 parts by weight of immobilized biocatalyst are added to a reaction mixture containing 3 parts by volume of 0.1 M Tris-maleate buffer pH 7.0, 0.2 parts by volume of 1.2 M MgCl 2, 0.8 vol. 0.75 M NaF, 1.2 volumes of metaphosphate containing 6.25 g of metaphosphate in 20 ml of solution, 0.2 volumes of 30% D-glucose solution, 0.6 volumes of 250 mM NAD + and 0/03 part by volume 100 mM NaNg. After stirring for 4 hours at 37 [deg.] C., the biocatalyst is filtered off with suction and reused for further biotransformation. The conversion by transformation of nicotinamide adenine dinucleotide to nicotinamide adenine dinucleotide phosphate is around 40%,
Přiklad 3Example 3
Imobilizovaný biokatalyzátor připravený z nakultivovaných buněk Arthrobacter globiformis postupem popsaným v příkladu 2 se vloží do kolony, kterou se nechá poté protékat reakční eněa shodného složení jako v příkladu 2. Rychlost průtoku se volí tak, aby se celkový objem reakční směsi v koloně vyměnil za 3 až 4 h, Z eluátu se izoluje nikotinamidadenindinukleotidfostát s výtěžkem biotransformace kolem 40 %.An immobilized biocatalyst prepared from cultured Arthrobacter globiformis cells as described in Example 2 was loaded onto a column which was then passed through a reaction mixture of the same composition as in Example 2. The flow rate was chosen so that the total volume of the reaction mixture in the column was exchanged for 3 to 4 h. Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate is isolated from the eluate in a biotransformation yield of about 40%.
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS873917A CS272185B1 (en) | 1987-05-28 | 1987-05-28 | Immobilized biocatalyst for transformation of nicotinamidadenindinucleotide in nicotinamidadenindinucleotide phosphate and method of its preparation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS873917A CS272185B1 (en) | 1987-05-28 | 1987-05-28 | Immobilized biocatalyst for transformation of nicotinamidadenindinucleotide in nicotinamidadenindinucleotide phosphate and method of its preparation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS391787A1 CS391787A1 (en) | 1990-05-14 |
| CS272185B1 true CS272185B1 (en) | 1991-01-15 |
Family
ID=5380634
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS873917A CS272185B1 (en) | 1987-05-28 | 1987-05-28 | Immobilized biocatalyst for transformation of nicotinamidadenindinucleotide in nicotinamidadenindinucleotide phosphate and method of its preparation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS272185B1 (en) |
-
1987
- 1987-05-28 CS CS873917A patent/CS272185B1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS391787A1 (en) | 1990-05-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105647996B (en) | The method that immobilized enzyme method prepares atriphos | |
| US3868304A (en) | Method of making fructose with immobilized glucose isomerase | |
| Campbell et al. | Enzymatic recycling of coenzymes by a multi-enzyme system immobilized within semipermeable collodion microcapsules | |
| Martin et al. | Conversion of l‐sorbose to l‐sorbosone by immobilized cells of Gluconobacter melanogenus IFO 3293 | |
| Cousineau et al. | Formation of amino acid from urea and ammonia by sequential enzyme reaction using a microencapsulated multi-enzyme system | |
| Chibata et al. | Immobilized living microbial cells | |
| CHIBATA et al. | Use of immobilized cell systems to prepare fine chemicals | |
| JP3098591B2 (en) | Method for producing 3'-phosphoadenosine-5'-phosphosulfate | |
| US4675292A (en) | Stabilization of glucose isomerase | |
| CS272185B1 (en) | Immobilized biocatalyst for transformation of nicotinamidadenindinucleotide in nicotinamidadenindinucleotide phosphate and method of its preparation | |
| EP0056111B1 (en) | Immobilized enzymatic active substance and method for preparing the same | |
| Bihari et al. | Studies on immobilized fungal spores for microbial transformation of steroids: 11 α‐Hydroxylation of progesterone with immobilized spores of Aspergillus ochraceus G8 on polyacrylamide gel and other matrices | |
| Oguntimein et al. | Properties of soluble and immobilized Aspergillus niger β‐xylosidase | |
| EP0032987B1 (en) | Thermophilic aspartase, processes for producing, culture used, and l-aspartic acid preparation process using the same | |
| JPS61187798A (en) | Regeneration of coenzyme | |
| JP3080771B2 (en) | Method for producing dinucleoside polyphosphate or derivative thereof | |
| Boyd et al. | Manipulating the activity of immobilized enzymes with different organo-smectite complexes | |
| Chibata et al. | New method for immobilization of microbial cells and its industrial application | |
| Langrene et al. | Entrapment of l-tryptophan producing Escherichia coli in different matrices: activity of immobilized cells | |
| PL109707B1 (en) | Method of producing 6-aminopenicillanic acid | |
| CA2003767A1 (en) | Biocatalysts and processes for the manufacture thereof | |
| Dias et al. | Immobilization of yeasts on titanium activated inorganic supports | |
| Konecny | Enzymes as Industrial Catalysts | |
| JPS6336755B2 (en) | ||
| Mosbach | Immobilized enzymes in organic synthesis |