CS270751B1 - Rekombinované plaamidy pSA2o a pXT2, kódující syntézu škrob ztekucující alfa amylázy ve streptomycetách - Google Patents
Rekombinované plaamidy pSA2o a pXT2, kódující syntézu škrob ztekucující alfa amylázy ve streptomycetách Download PDFInfo
- Publication number
- CS270751B1 CS270751B1 CS878302A CS830287A CS270751B1 CS 270751 B1 CS270751 B1 CS 270751B1 CS 878302 A CS878302 A CS 878302A CS 830287 A CS830287 A CS 830287A CS 270751 B1 CS270751 B1 CS 270751B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- psa2o
- pxt2
- plasmid
- streptomycetes
- synthesis
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Řešení se týká překombinovaných plasmidů pSA2o a pXT2 kódujících syntézu škrob ztekucující alfa amylázy ve streptomycetách, které jsou charakterizovány přítomností restrikčního fragmentu o velikosti 3,2 kb ve Streptomyces limosus pro plasmid pSA2o a přítomností jediného zásahového místa pro restrikční endonukleázu EcoRI vzniklého na základŠ vyštšpení EcoRI restrikčního fragmentu o velikosti 2 kb z plasmldu pSA2o a restrikčními mapami. Oba plasmidy byly připraveny technikou genové manipulace in vitro. Kromě produkce alfa amylázy kódují rekombinované plaamidy pSA2o a pXT2 resistenci streptomycetové buňky k antibiotiku thiostreptonu. Na základe restrikčních map těchto plasmidů je možné genetickou informaci pro syntézu alfa amylázy z rekombinovaných plasmidů vydělit a přenést i na jiné streptomycetové replikony. Plasmid pSA2o je uchováván v kmenu Streptomyces lividans AS2o, který je uložen v Československé sbírce mikroorganismů University J. E. Purkyně v Brně pod číslem CCM 4oo9. Plasmid pXT2, který je uchováván v kmenu Streptomyces lividans AS2, je uložen v Československé sbírce mikroorganismů University J. E, Purkyně v Brně pod číslem CCM 4ol2.
Description
Vynález ee týká rekombinovaných plasmidů pSA2o a pXT2, kódujících syntézu škrob ztekucující α-anylázy ve streptonycetové buňce.
Streptomycety produkují řadu exoenzymů do okolního média. Je proto výhodné jich využít jako hoetitelských buněk při klonování genetické informace kódující syntézu α-anylázy, která je průmyslově významným enzymem. Zdrojem genetické informace pro klonování funkčního α-awylázového genu ve streptomycetách byl, v doposud jediné úspěšné práci, chromosom kmene Streptomyces hygroscopicus. Klonování bylo provedeno v plasmidů pIJ7o2 (McKillop et al. FEMS Microbiol. Lett. 36:3, 1986). Vzniklý plasmid kódující syntézu d-amylázy, má velikost 8,6 kb a samotná velikost chromosomového insertu nesoucího α-amylázový gen je 2,8 kb.
Řešení podle vynálezu se týká rekombinovaných plasmidů pSA2o a pXT2 kódujících syntézu škrob ztekucující alfa amylázy ve streptomycetách charakterizovaných přítomností restrikčního fragmentu o velikosti 3,2 kb ze Streptomyces limosus pro plasmid pSA2o a přítomností jediného zásahového místa pro restrikční endonukleázu EcoRI vzniklého na základě vyštěpení EcoRI restrikěního fragmentu o velikosti 2 kb z plasmidů pSA2o.
Kontrukoe rekombinovaných plasmidů pSA2o a pXT2 kódujících syntézu a-amylázy
Pro konstrukci nové genetické informace kódující syntézu α-amylázy ve streptomycetové buňce bylo použito fragmentů chromosomu α-amylázu produkujícího kmene Streptomyces limosus a plasmidového vektoru pIJ622. Vzniklé rekombinované plasmidy pSA2o a pXT2 kódující syntézu škrob ztekucující α-amylázy mají velikost 9,o kb a 7,o kb. U obou popsaných včlenění α-amylázového genu do plasmidového vektoru vedlo ke zvýšení produkce a-amylázy na základě zvýšeného počtu α-amylázového genu v důsledku vysokého počtu kopií rekombinovaných plasmidů pSA2o a pXT2 ve streptomycetovém hostiteli.
Vlastní konstrukce rekombinovaných plasmidů pSA2ó a pXT2
Sau3AI fragment o velikosti 3,2 kb, kódující syntézu α-amylázy, byl vligován do mnohokopiového plasmidového vektoru pIJ622 v jeho jediném BglII místě. Vzniklý plasmid pSA2o transformovaný do streptomycetového hostitele, kmene Streptomyces lividans TK24, kóduje eyntézu α-amylázy, která vede k nadprodukci α-amylázy tímto kmenem v důsledku zvýšeného počtu kopií (4o - 6o) amylázového genu. pSA2o má s dříve konstruovaným plasmidem pSA28 shodnou restrikční mapu mezi restrikčními místy PvuII a KpnI situovanými v insertované chromosomové DNA, liší se však v koncových oblastech insertu.
Protože bylo zjištěno, že inserce do EcoRI místa situovaného v klonovaném fragmentu chromosomové DNA v rekombinovaném plasmidů pSA2o neovlivňuje syntézu α-amylázy kódované plasmidem, bylo provedeno zkrácení plasmidů pSA2o o 2,o kb vyštěpením restrikčního fragmentu EcoRI-EcoRI a znovuzavřením zmenšeného plasmidů T4-DNA ligázou. Nově vzniklý plasmid pXT2 má velikost 7 kb a dosahuje v průměru počtu kopií v jedné streptomycetové buňce (měřeno na 1 chromosomový ekvivalent). Plasmid pXT2 vpravený do recipientních protoplastů Streptomyces lividans TK24 kóduje intenzivní syntézu α-amylázy streptomycetovým hostitelem. Stabilita plasmidů pXT2 v hostitelské buňce je shodná se stabilitou výchozího plasmidů pSA2o a dosahuje hodnoty -99 % v kultivacích bez selekčního tlaku.
Plasmidy pSA2o,a pXT2 kódovaná α-amyláza má molekulovou hmotnost 48 kb a konečnými produkty štěpení škrobu tímto enzymem jsou oligosacharidy.
Znázornění konstrukce rekombinovaných plasmidů pSA2o a pXT2 jsou na obr. 1 a 2, kde je silně vyznačen insert chromosomové DNA kmene S. limosus, kódující produkci a-amylázy a slabě DNA plasmidového vektoru.
Po vnesení plasmidů pSA2o do hostitelského kmene Streptomyces lividans TK24 byl vytvořen nový kmen Streptomyces lividans AS2o, vykazující jako nové vlastnosti přítomnost molekul DNA plasmidů pSA2o, schopnost syntézy alfa amylázy a resistenci buněk k thiostreptonu.
CS 27o751 Bl
Kmen lividane AS2 vznikl přenesením plasmidu pXT2 do hostitelského kmene Streptomyces lividane TK24. Buňky kmene S. lividane AS2 obsahují plasmid pXT2, který má charakteristickou molekulovou hmotnost a kóduje v buňce hostitelského kmene syntézu alfa amylázy a rezistenci buňky k thiostreptonu.
Oba plasmidy pSA2o a pXT2 jsou uchovávány v kmenech Streptomyces lividane AS2o a AS2 uložených v československé sbírce mikroorganismů Univerzity J. E. Purkyně v Brně pod čísly CCM 4oo9 a CCM 4ol2.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZURekombinované plasmidy pSA2o a pXT2, kódující syntézu škrob ztekucující alfa amylázy ve streptomycetách, charakterizované přítomností restrikěního fragmentu o velikosti 3,2 ktí ze Streptomyces limosua pro plasmid pSA2o a přítomností jediného zásahového místa pro restrikční endonukleázu EcoRI, vzniklého na základě vyštěpení EcoRI restrikěního fragmentu o velikosti 2 kb z plasmidu pSA2o a restrikčními mapami a uchovávané v kmenech Streptomyces lividans AS2o CCM 4oo9 a Streptomyces lividane CCM 4ol2.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS878302A CS270751B1 (cs) | 1987-11-19 | 1987-11-19 | Rekombinované plaamidy pSA2o a pXT2, kódující syntézu škrob ztekucující alfa amylázy ve streptomycetách |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS878302A CS270751B1 (cs) | 1987-11-19 | 1987-11-19 | Rekombinované plaamidy pSA2o a pXT2, kódující syntézu škrob ztekucující alfa amylázy ve streptomycetách |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS830287A1 CS830287A1 (en) | 1989-12-13 |
| CS270751B1 true CS270751B1 (cs) | 1990-07-12 |
Family
ID=5433384
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS878302A CS270751B1 (cs) | 1987-11-19 | 1987-11-19 | Rekombinované plaamidy pSA2o a pXT2, kódující syntézu škrob ztekucující alfa amylázy ve streptomycetách |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS270751B1 (cs) |
-
1987
- 1987-11-19 CS CS878302A patent/CS270751B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS830287A1 (en) | 1989-12-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Behnke et al. | Location of antibiotic resistance determinants, copy control, and replication functions on the double-selective streptococcal cloning vector pGB301 | |
| STASsI et al. | Cloning of chromosomal genes in Streptococcus pneumoniae. | |
| Podbielski et al. | Novel series of plasmid vectors for gene inactivation and expression analysis in group A streptococci (GAS) | |
| Chen et al. | A new type IV secretion system promotes conjugal transfer in Agrobacterium tumefaciens | |
| Davison et al. | Vectors with restriction site banks V. pJRD215, a wide-host-range cosmid vector with multiple cloning sites | |
| AU643741B2 (en) | Stable integration of DNA in bacterial genomes | |
| Miranda et al. | Agrobacterium tumefaciens transfers extremely long T-DNAs by a unidirectional mechanism | |
| Chauvat et al. | A host-vector system for gene cloning in the cyanobacterium Synechocystis PCC 6803 | |
| Hamilton et al. | Insertion-duplication mutagenesis of Neisseria: use in characterization of DNA transfer genes in the gonococcal genetic island | |
| Keil et al. | Evolutionary conservation of genes coding for meta pathway enzymes within TOL plasmids pWW0 and pWW53 | |
| Waters et al. | Mutational analysis of essential IncP alpha plasmid transfer genes traF and traG and involvement of traF in phage sensitivity | |
| JPS6070081A (ja) | 双子葉植物の染色体への外来性遺伝子の導入方法 | |
| Tolun et al. | Separation of the minimal replication region of the F plasmid into a replication origin segment and a trans-acting segment | |
| Collins | [20] Escherichia coli plasmids packageable in Vitro in λ bacteriophage particles | |
| Depicker et al. | IS-like element IS8 in RP4 plasmid and its involvement in cointegration | |
| JPH04346787A (ja) | Ｄｎａ、組換えベクター、微生物、ｄｎａの取得法、組換え蛋白質の取得法及び組換え蛋白質 | |
| Ramírez‐Romero et al. | RepA negatively autoregulates the transcription of the repABC operon of the Rhizobium etli symbiotic plasmid basic replicon | |
| Wayne et al. | Identification of a thermophilic plasmid origin and its cloning within a new Thermus-E. coli shuttle vector | |
| Chai et al. | RepB protein of an Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid binds to two adjacent sites between repA and repB for plasmid partitioning and autorepression | |
| Goebel et al. | Transposition and insertion of intact, deleted and enlarged ampicillin transposon Tn3 from mini-R1 (Rsc) plasmids into transfer factors | |
| US6100063A (en) | Procaryotic cell comprising at least two copies of a gene | |
| CS270751B1 (cs) | Rekombinované plaamidy pSA2o a pXT2, kódující syntézu škrob ztekucující alfa amylázy ve streptomycetách | |
| EP0228726B1 (en) | Method for preparing proteins using transformed lactic acid bacteria | |
| Yamamoto et al. | Construction of a physical map of a kanamycin (Km) transposon, Tn5, and a comparison to another Km transposon, Tn903 | |
| Connell et al. | A new mobilizable cosmid vector for use in Vibrio cholerae and other gram-bacteria |