CS270637B1 - Analytický prostředek ke stanoveni diagnosticky významných součástí biologických kapalin - Google Patents

Analytický prostředek ke stanoveni diagnosticky významných součástí biologických kapalin Download PDF

Info

Publication number
CS270637B1
CS270637B1 CS89329A CS32989A CS270637B1 CS 270637 B1 CS270637 B1 CS 270637B1 CS 89329 A CS89329 A CS 89329A CS 32989 A CS32989 A CS 32989A CS 270637 B1 CS270637 B1 CS 270637B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
solution
important components
determination
reagent
diagnostically important
Prior art date
Application number
CS89329A
Other languages
English (en)
Other versions
CS32989A1 (en
Inventor
Eva Rndr Hrboticka
Original Assignee
Hrboticka Eva
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hrboticka Eva filed Critical Hrboticka Eva
Priority to CS89329A priority Critical patent/CS270637B1/cs
Publication of CS32989A1 publication Critical patent/CS32989A1/cs
Publication of CS270637B1 publication Critical patent/CS270637B1/cs

Links

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

Řešení se týká analytického prostředku ke stanovení diagnosticky významných součástí biologických kapalin na bázi enzymových reakcí. Prostředek podle řešení obsahuje jako stabilizační a/nebo seperační činidlo propylenglykoléter methylcelulozy obecné struktury I, kde R je H, CH^ nebo CH3CH(OH)CH2-radikál, přičemž methoxyskupiny jsou*substituovány s výhodou v 19 až 32 % a hydroxypropoxyskupiny ve 4 až 15 %. Proti současnému stavu techniky zvyšuje prostředek podle řešení podstatně životnost i kvalitativní parametry

Description

rr-cduičLuui vynálezu jo nnulytlcký prostředek ke stunovoní dlugnoirtlcky významných součástí biologických kapalin na bázi enzymových reakcí. Proti současnému, známému stavu techniky obsohuje tento analytický prostředek nové stabilizační u Bcpnroční činidlo, zvyšující podstatně životnost prostředku i jeho kvalitativní parametry.
V klinicko-biochemické laboratorní diagnostice je v současné době převážná většina testů založena na enzymových metodách. Je tomu tak například, při stanovení glukosy, kyseliny močové, cholesterolu nebo tzv. triglyceridů, kdy příslušné analyty jsou převáděny pomocí specifických enzymů - oxidoreduktas (glukosaoxidásy,· urikasy, cholesteroloxidasy nebo glycerofosfatoxidasy) - na své oxidaxní produkty. Analyticky velmi obtížné stanovení primárních složitých analytů se tímto způsobem-převádí na stanovení nesrovnatelně jednodušší látky - peroxidu vodíku, k jehož stanovení se využívá jeho poměrně silných oxidačních vlastností. Nejvíce užívaným postupem je oxidace vhodné leukobáze redoxindikátoru nebo chromogenního systému na bázi oxidativní kopulace za přítomnosti specifického enzymu peroxidasy na barevné oxidační produkty, jejichž množství je ekvivalentní množství primárního analytu. Speciální progresivní oblast diagnostiky zaujímají v poslední době zejména diagnostické prostředky v suché fázi, jako jsóu práškové směsi, tablety, lyofilizáty a především reagenční proužky, v nichž veškerá činidla potřebná pro průběh pomocných reakcí i koncové barevné reakce chromogenu jsou'obsažena ve vhodném nosiči v pevné, resp. suché fázi. U těchto systémů je nezbytná dokonalá separace jednotlivých inkompatibilních složek, stabilizace labilních součástí a chránění před sorbcí vzdušné vlhkosti, která rekonstituuje reakční systém a startuje nežádoucí reakce, vedoucí k rozložení systému. K separaci a stabilizaci enzymů jsou používány převážně hydrofilní polymerní látky přírodního nebo syntetického původu, jako želatina, agar, arabská guma, dextran, albumin, alginát, polyvinylpyrrolidon nebo polyvinylalkohol, popsané např. v US-patentu č. 3 814 668, US-patentu č. 4 066 403 nebo kopolymer methylvinyléter/maleinanhydrid (US-patent č. 3 453 180). Chránění systémů na bázi tzv. suché chemie před vzdušnou vlhkostí je dosahováno důkladným vysoušením a hermeticky těsnými obaly, příp. opatřenými navíc vysoušedly (silikagel, molek. síta). U reagenčních proužků je popsán rovněž způsob chránění reakčního systému před účinkem vzdušné vlhkosti, spočívající v zatavení reagenčního papíru mezi syntetické fólie takovým způsobem, že vyšetřovaná kapalina může proniknout do reagenční zóny pouze bočními nekrytými okraji (DOS δ. 1 546 307), nebo skrze jemnou polymerní síťku z polyamidu, polyesteru, polyethylenu, polyvinylchloridu nebo polyakrylonitrilu, jak je popaáno v US-patentu č. 3 802 842. US-patent č. 4 046 513 popisuje diagnostický prostředek, kde jednotlivá činidla jsou nanesena (natištěna) ve formě separátních, navzájem se nepřekrývajících teček. Ke vzájemnému promísení reagencií dochází až po namočení proužku do vyšetřované kapaliny. Tento způsob je však technologicky obtížný a v praxi nebyl uplatněn.
Uvedené způsoby chránění systémů vykazují řadu nevýhod, jako je nestejnoměrné vybarvení zón v důsledku difúze kapaliny, nežádoucí tzv. okrajové efekty, nedostatečná stabilizace systému, složitá technologie apod. Při použití klasických ochranných koloidů, např. želatina, agar, zůstává při sušení v matrici vázaná zbytková vlhkost, která snižuje stabilitu reakčního systému a poskytuje rovněž vhodné médium pro nežádoucí růst mikroorganismů. Poněkud výhodnější z tohoto hlediska se jeví použití syntetických hydrofilních polymerů, napr. polyvinylpyrrolidonu nebo polyvinylalkoholu, které vykazují stabilizační účinky enzymů a separují jednotlivé složky reakčního systému. Uvedené polymery však mají i řadu nevýhod, např. obsahují zbytky iniciátorů radikálových polymerací na bázi peroxidů (např. dibenzoylperoxid, kumylhydroperoxid), které mají nepříznivý vliv na stabilitu reakčního systému a rovněž vykazují dost vysokou sorbci vzdušné vlhkosti.
CS 270637 Bl
Uvedené nedostatky odstraňuje předložené řešení, jehož předmětem je analytický prostředek na bázi enzymových reakcí. Jeho podstata spočívá v tom, že jako stabilizační a/nebo separační činidlo obsahuje propylenglykoléter methyleelulózy obecné struktury I
(I), kde R je H-, CH^- nebo CH}CH(OH)CH2-radikál, přičemž methoxyskupiny jsou substituovány s výhodou v 19 až 32 % a hydroxypropoxyskupiny ve 4 až 15 %. Tento polymer je výborným ochranným koloidem a stabilizačním činidlem s dalšími příznivými vlastnostmi adheziva, plniva a tabletovacího média. Je vysoce-^resistentní vůči bakteriální kontaminaci a inertní vzhledem k enzymům i běžně používaným reagenciím. Vykazuje výbornou a rychlou rozpustnost ve vodě i za normální teploty i v organických rozpouštědlech a poskytuje čiré roztoky. Sorbce vzdušné vlhkosti v závislosti na relativní vlhkosti je 3 až 4krát nižší než vykazuje např. nejčastěji používaný polyvinylpyrrolidon (viz obr. 1)
relativní vlhkost /%/
Při aplikaci u reagenčních proužků dochází rovněž k afinici vzniklého barevného produktu ke gelu za zvýšení brilantnosti, homogenity a stability vzniklého zbarvení indikační zóny, což je významné jak u proužků vizuálních, tak zejména u proužků vyhodnocovaných reflektometricky. Propylenglykoléter methylcelulózy se tedy jeví význačným ochranným a stabilizačním činidlem reakčních systémů, zejména na progresivní bázi tzv. suché chemie, jehož aplikace odstraňuje výše uvedené nevýhody stávajících prostředků, převážně na principu citlivých enzymových reakcí. Prostředek
CS 270637 Bl podle tohoto vynálezu obsahuje vedle chromogenního systému, enzymů a výše uvedeného stabilizátoru další o sobě známé a pro obdobné účely běžně užívané látky, jako jaou tlumiče, akcelerátory, tenzidy a další pomocné látky.
Příklad 1
Reagenční proužky ke stanovení glukosy v moči
Impregnační roztok:
Citrátový tlumič, pH = 6,2 100 ml
Ethanol ' 60 ml
Aceton 45 ml
Propylenglykoléter methylcelulosy (Klucel) 4,3 g
Glukosaoxidasa 100 kU
Peroxidasa 15 kU
Želatina 0,2 g
Tartrazin, 1%-ní vodný roztok 6 ml
l-(4-sulfofenyl)-3-methyl-5-pyrazolon 2,5 5
4-aninofenazon 1,6 g
Benzyldimethylhexadecylamonium chlorid 0,8 g
Filtrační papír o plošné hmotnosti 180 g/m se naimpregnuje· roztokem do nasycení, vysuší proudem teplého vzduchu a takto připravený reagenční papír se rozřeže na čtverečky o rozměru 6x6 mm, které se nalepí na podložku z plastické hmoty, V močích obsahujících různé koncentrace glukosy tyto proužky poskytují po namočení barevnou gradaci v rozsahu 0 až 170 mmol/1 glukosy. Na rozdíl od proužků obsahujících např. polyvinylpyrrolidon vykazují proužky cca dvojnásobně vyšší stabilitu při stejných skladovacích podmínkách.
Příklad 2
Diagnostický prostředek ke stanovení glukosy v plazmě Činidlo I: 4-aminoantipyrin 45 mmol
Peroxidasa 25 kU
Glukosaoxidasa 300 kU
Propylenglykoléter methyleelulózy (Pharmacoat 603) 3 g
Reagencie se rozpustí ve 400 ml destilované vody a vzniklý roztok se vysuší lyofilizací. Směs je stabilní min. po dobu 24 měs.
Činidlo II: Citrátový tlumič (pH = 6) 0,2mol
Primachin difosfát 0,01 mol
Laurylsulfát sodný 0,7mmol
Dest. voda 300ml
Při aplikaci se smísí 1 díl rekonstituovaného činidla I se 100 díly činidla II a tato směs činidel se smísí se vzorkem v poměru 100 : 1. Vzniklé zbarvení je přímo úměrné koncentraci glukosy ve vzorku.
CS 270637 Bl
Příklad 3
Diagnostický proužek ke stanovení kyše Impregnační roztok I: Fosfátový tlumič (pH = 7) Urikasa Methylhydroxypropylcelulóza (Metolose) Peroxidasa Methanol Destilovaná voda Impregnační roztok II: Methanol Dest. voda 3-methyl-2-benzthiazolinon hydrazon hydrochlorid 1-(4-sulfofeny1)-3-karboxy-5-pyrazolon benzyldimethyl-n-hexadexylamonium chlorid
Indikační zóny proužku se připraví postupným nanesením a vysušením obou impregnačnich roztoků na filtrační papír o gramáži 120 g/m . Při kontaktu zóny se vzorkem biologické kapaliny obsahujícím kys. močovou vzniká zbarvení úměrné koncentraci analytu ve vzorku.
močové v séru ml
U
1,5 g
V ml ml ml ml
0,35 g
1,2 g
0,2 g
Příklad 4
Reagenční proužky ke stanovení glukosy v krvi
Impregnační roztok I:
3,5,5,5-tetramethylbenzidin dihydrochlorid 12g
Dioktylsulfojantaran sodný 1g
Propylenglykoléter methylcelulózy (Klucel) 23g
Aceton 600ml
Ethanol 450ml
Destilovaná voda 200ml
Impregnační roztok II:
Citrátový pufr (pH = 5,3) 300ml
Glukosaoxidasa 105kU
Peroxidasa 200kU
Propylenglykoléter methyleelulóza (Pharmacoat 606) 25g
Impregnační roztok III.
Ethylcelulóza 7,g
Toluen 200ml
CS 270637 Bl ' 5
Impregnační roztoky I, II a III se postupně nanesou na filtrační papír o plošné hmotnosti 180 g/m s následným vysušením. Potom se reagenční papír rozřeže na čtverečky 6 x 6 mm a nalepí na podložku z umělé hmoty. Stanovení glukosy pomocí těchto proužků se provede tak, že na indikační zónu proužku se nanese kapka krve, která se po uplynutí inkuhační doby odstraní opláchnutím vodou. Vzniklé zbarvení proužku se vyhodnotí buď semikvantitativně srovnáním s barevnou kalibrační stupnicí, nebo reflektometricky. Proužky, uchovávané v dobře těsnicích obalech, jsou stabilní minimálně po dobu tří let. ·

Claims (1)

  1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU
    Analytický prostředek ke stanovení diagnosticky významných součástí biologických kapalin, které se pomocí specifických enzymových reakcí převádějí na své oxidační produkty, vyznačený tím, že jako stabilizační a/nebo separační činidlo obsahuje propylenglykoléter methyleelulózy obecné struktury I
    (i), kde R je H, CH^ nebo CHjCH(OH)CH2, radikál, přičemž methoxyskupiny jsou substituovány s výhodou v 19 až 32 % a hydroxypropoxyskupiny ve 4 až 15 %.
CS89329A 1989-01-18 1989-01-18 Analytický prostředek ke stanoveni diagnosticky významných součástí biologických kapalin CS270637B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS89329A CS270637B1 (cs) 1989-01-18 1989-01-18 Analytický prostředek ke stanoveni diagnosticky významných součástí biologických kapalin

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS89329A CS270637B1 (cs) 1989-01-18 1989-01-18 Analytický prostředek ke stanoveni diagnosticky významných součástí biologických kapalin

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS32989A1 CS32989A1 (en) 1989-11-14
CS270637B1 true CS270637B1 (cs) 1990-07-12

Family

ID=5335215

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS89329A CS270637B1 (cs) 1989-01-18 1989-01-18 Analytický prostředek ke stanoveni diagnosticky významných součástí biologických kapalin

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS270637B1 (cs)

Also Published As

Publication number Publication date
CS32989A1 (en) 1989-11-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5081040A (en) Composition and kit for testing for occult blood in human and animal excretions, fluids, or tissue matrixes
CA1137397A (en) Precursor indicator compositions
RU2288273C2 (ru) Композиция реагентов, реагентная тест-полоска, система, способ и набор для обнаружения или определения присутствия аналита в физиологическом образце
EP0071934B1 (en) Method for preparing a color stable chromogenic analytical element
US4278439A (en) Sensitizers for peroxidative activity tests
US5192501A (en) Method of formulating a test ink for a fecal occult blood test product
US5217874A (en) Fecal occult blood test product with positive and negative controls
CA1131107A (en) Color stable glucose test
DK158645B (da) Fremgangsmaade til fremstilling af et analytisk materiale til bestemmelse af glucose i helblod samt fremgangsmaade og system til bestemmelse af glucoseindholdet i helblod.
EP0222700B1 (en) Composition and method for determining peroxidase-like activity of hemoglobin
HK82686A (en) Process and diagnostic agents for detecting redox reactions
US3235337A (en) Diagnostic compositions and test indicators
JPS61122568A (ja) 水性試験試料中に含まれる高濃度領域のグルコースを半定量的に測定するための試験組成物、試験具および試験具の作製方法
CA1216215A (en) Peroxidase activity detection composition
US4251223A (en) Sensitizers for peroxidative activity tests
EP0029104A1 (en) A composition, test device and method of making it, and method for the determination of an analyte in a liquid
JPH0653074B2 (ja) 体液検査体
US3350278A (en) Enzymatic glucose test composition and device
CA1044582A (en) Diagnostic agent for cholesterol and cholesterol esters
EP0036563A1 (en) Bilirubin-resistant composition for the determination of cholesterol, test device containing the composition and method of making the test device
AU754237B2 (en) Uric acid assay device with stabilized uricase reagent composition
US4439527A (en) Composition and method for the detection of hydrogen peroxide
EP0137521B1 (en) Integral multilayer element for chemical analysis
US3233974A (en) Diagnostic compositions
CS270637B1 (cs) Analytický prostředek ke stanoveni diagnosticky významných součástí biologických kapalin