CS270107B1 - Spáaob určovania celulolytickej aktivity bachorových baktérii - Google Patents

Description

C3 270107 B1 1

Vynález sa týká nového spósobu určovanla celulolytickej aktivity bachorovýchbaktérii* V súčasnosti používaný klasický spósob určovánla celulolytickej aktivity bachoro-vých baktérii, podstatou ktorého je odčltavanié zón utiltzovanej amorfnej celulózyje poměrně náročný na Sas a je praoný. Okre» toho vyžaduje velké mikrobiologické skú-senostl prl ódčítavanl reakoll. Velký pokrok znamenajú systémy, v kterých na amorfnúcelulózu je navlazané farbivo, například Blely a kol. 1985, Anal. Blochem. 144, 142-145 bolo vyvinuté nové médium pre detekelu celulóžovéJ aktivity podstatou ktorého jena hydroxyetyloelulózu navlazané farbivo trojsodňá sol 2-ohlór-4-N-etyl-N-fenylamlno)--e-/‘4-metyl-2-sulfobenžén-l-azo-2-(l-hydroxy-3,5-biesulfonaft-i-yl)amino/-l, 3, 5--trlazin(Ostazln Briliant Red). Toto velmi progresivně médium dá víak. prl diagnostikocelulolytlckých bachorových baktérii nevýhodu v tom, že Jeho farebnosl sa kryjes indikátorem redox potenciálu resezurlnom. prl jeho používaní nie je možná kontrolaredox potenciálu prlpravenej žlvnej pódy. Podobná nevýhodu vo farebnosti majú ajpriesvltné gély z hydroxyetyloelulózy, podstatou ktorýoh .je ioh rozpúilanie sa póso-benim celulóz, Gély sú víak prl diagnostika celulolytickej aktivity bachorových bak-térii v tmavo sfarbenej pfide lažlie viditelné. Slabo' pozitivna reakcla sa nedá odčí-tal bez otvorenia skúmavky. Kvantitativné, eelulolytlckú aktivitu bachorových bakté-rii je možné stanovil metódou redukujúcich cukrov uvolňovaných z rozpuetnej celulózy,například pomocou kyseliny 3,5-dlnltrosalloylovej. Táto metóda je víak prl velkompočte kmeňov bachorových baktérii poměrně próona.

Vyiile uvedené nedostatky sú odstránené spósobom určovanla celulolytickej akti-vity bachorových baktérii podlá vynálezu, ktorého podstata spočívá v tom, že riedkygél z rozpustnej celulózy s nevlezeným grafitom alebo žlvočlínym uhlím sa přidá doanaeróbneho bujónu obsahujúoeho celoblózu v množstvo 0,01 až 0,05 dlelov hmotnostných,bachorovú tekutinu v množstvo 5 až 30 dlelov hmotnostných a mlnerálle najma hydrogen-fosforečnan draselný, chlorid sodný, síran amónny, dihydrogenfosforečnan draselný,chlorid vápenatý, síran horečnatý v množstvo 1 až 15 dlelov hmotnostných, naočkujesa testovaný kmeň a po 24 až 48 hodinové] lnkubáoll prl teplota 35 °c až 45 °C pozl-tlvnou celulolytickou aktivitu Indikuje do médie uvolněný grafit alebo žlvo$line uhlie.

Hlavnou výhodou tohoto nového spósobu Je jednoznačné určovanle pozitivně] alebonegatlvnej reakcie prl diagnostiko celulolytlckých baohorovýoh baktérii prl zachovanípodmienky kontroly redox potenoiálu žlvnej pódy. Balílmi výhodami sú malá pracnostako aj malá náročnost, na laboratórne vybavenle. Přiklad 1

Rozpustná celulóza sa rozpustí v minimálnom množstvo vody a k 10 ml tohto roz-toku sa přidá 5 ml 5 N hydroxidu sodného. Po vytemperovanl na 50 °C sa přidá 500 mggrafitu a za stálého pretrepávania sa přidá 5 ml eplchlórhydrinu. Po vychladnuti sagél premyje a rozstřihá na malé kúsky a nadávkuje do penlolllniok s modifikovanýmanaeróbnym bujónom obsahujúoim 0,05 dlelov hmot. celobiózy, Balej 20 dlelov hmot.bachorověj" tekutiny a 15 dlelov hmot. minerálll. po naočkovaní testovaného celuloly-tlckéhó kmeňa Bacteroldes* succlnogenes a napledovnaj 35 hodinovej inkubácil prl 37 °Cpozitivnu reekciu indikuje do média uvolněný grafit. Příklad 2

Premytý a rozstřihaný gél připravený ako v přiklade i, sa přidá do peniclllnlek• modifikovaným anaeróbnym bujónom obsahujúoim 0,01 dlelov hmot. celobiózy, 10 dlelovhmot. bachorovej tekutiny a 7,5 dlelov hmot. minerálll. Po naočkovaní kmeňa Rumino-coccus albus a nesledovnej 48 hodinovej lnkubáoll pňi 37 °C, eelulolytlckú aktivituIndikoval do média uvolněný grafit.

Claims (1)

1. 2 CS 270107 B1 DO bujónu použitá zimes minerálii má napr. ; eloženlet hydrogenfosforečnan draselný K2HP04 0,6 dielov hmot. chlorid sodný Naci 1,2 dielov hmot. síran amónny /NH4/2S04 1,2 dielov hmot. dlhydrogenfosforečnan draselný KH2PO4 0,6 dielov hmot. chlorid vápenatý CaCl2 0,12 dielov hmot. síran horečnatý heptahydrét 0,25 dielov hmot. Mgso4 . 7H^0 P R E D Μ E T V Y N Á L E 2 U Spóeob určovánia celulolytickej aktivity bachorových baktérii, vyznačujúci satým, Se ea riedky gél z rozpustné] celulózy e naviazaným grafitom alebo živočíánymuhlím přidá do anaeróbneho bujónu obeahujúceho celobiózu v množetve o,01 až 0,05dielov hmotnostných, bachorovú tekutinu v množetve 5 až 30 dielov hmotnostných a mi-nerálie, najma hydrogenfosforečhan draselný, chlorid aodný, síran amonný, dihydro-genfosforečnan draselný, chlorid vápenatý, síran horečnatý, v množstvo l až 15 dielovhmotnoetných, testovaný kmen sa naočkuje a po 24 až 45 hodinovéj inkubácii, pri tep-lete 35 °C až 45 °C, pozitivnu eelulolytlekú aktivitu Indikuje do média uvolněnýgrafit alebo žlvočíáne uhlie.