CS269879B1 - Přípravek k enzymovému stanoveni koncentrace alkoholu v biologických tekutinách - Google Patents
Přípravek k enzymovému stanoveni koncentrace alkoholu v biologických tekutinách Download PDFInfo
- Publication number
- CS269879B1 CS269879B1 CS875032A CS503287A CS269879B1 CS 269879 B1 CS269879 B1 CS 269879B1 CS 875032 A CS875032 A CS 875032A CS 503287 A CS503287 A CS 503287A CS 269879 B1 CS269879 B1 CS 269879B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- alcohol
- nitroso
- alkyl
- hydrogen
- substituted
- Prior art date
Links
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 36
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title abstract description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 11
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 claims abstract description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 3
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims abstract description 3
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 claims abstract 2
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 8
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 5
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 4
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 4
- 125000000020 sulfo group Chemical group O=S(=O)([*])O[H] 0.000 claims description 4
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 3
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 3
- ZRHUHDUEXWHZMA-UHFFFAOYSA-N 1,4-dihydropyrazol-5-one Chemical class O=C1CC=NN1 ZRHUHDUEXWHZMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 claims description 2
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 2
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 2
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 2
- 125000004181 carboxyalkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 2
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000000951 phenoxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(O*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 2
- 125000003944 tolyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000001637 1-naphthyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C(*)=C([H])C([H])=C([H])C2=C1[H] 0.000 claims 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 claims 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 6
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 6
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 6
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- CMEWLCATCRTSGF-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethyl-4-nitrosoaniline Chemical compound CN(C)C1=CC=C(N=O)C=C1 CMEWLCATCRTSGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- -1 for example Substances 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 3
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 3
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 229940101270 nicotinamide adenine dinucleotide (nad) Drugs 0.000 description 2
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 229920006316 polyvinylpyrrolidine Polymers 0.000 description 2
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- SJJCQDRGABAVBB-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-2-naphthoic acid Chemical compound C1=CC=CC2=C(O)C(C(=O)O)=CC=C21 SJJCQDRGABAVBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004782 1-naphthols Chemical class 0.000 description 1
- QKNCXJBBBPCOHP-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-3-(octadecylcarbamoyl)naphthalene-1-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=CC2=C(O)C(C(=O)NCCCCCCCCCCCCCCCCCC)=CC(S(O)(=O)=O)=C21 QKNCXJBBBPCOHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SALQMMXSINGXMI-UHFFFAOYSA-N 4-nitrosoaniline Chemical class NC1=CC=C(N=O)C=C1 SALQMMXSINGXMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010006326 Breath odour Diseases 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 108010020056 Hydrogenase Proteins 0.000 description 1
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 1
- KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N alpha-naphthol Natural products C1=CC=C2C(O)=CC=CC2=C1 KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229910052788 barium Inorganic materials 0.000 description 1
- DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N barium atom Chemical compound [Ba] DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000007813 chromatographic assay Methods 0.000 description 1
- 235000019504 cigarettes Nutrition 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 230000036461 convulsion Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 150000002466 imines Chemical class 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 150000004780 naphthols Chemical class 0.000 description 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 1
- 235000011837 pasties Nutrition 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000012521 purified sample Substances 0.000 description 1
- 238000010405 reoxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000000779 smoke Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Řešení se týká přípravku k enzymovému
stanovení koncentrace alkoholu v biologických
tekutinách obsahující alkoholdehydrogenasu,
nikotinamidadenindinukleotid
a tlumič o pH 4,5 až 10,5, který dále obsahuje
chromogenní systém určitého složení se
čtyřmi substituenty až osmi substituenty.
Jako stabilizátor obsahuje přípravek monosacharid
nebo oligosacharid a/nebo přirozenou
nebo syntetickou polymerní látku.
Tento přípravek lze provést jako soupravu
činidel, tabletový nebo proužkový test
k detekci alkoholu v dechu, slinách nebo
krevním séru.
Description
CS 269 879 B1 1
Stanovení relativně nízkých koncentrací alkoholu v biologických tekutinách, zejménav krvi, patří mezi velmi časté operace v biochemické* zvláště forenznl analyse.Tradičněee pro tento účel užívá takzvaná Wldraarkova zkouška, založená na vydestilování těkavého al-koholu z vyěetřovanáho vzorku do oxidační směsi a stanoveni úbytku oxldačn-lho činidla,který je úměrný množství alkoholu (viz E.M.Widmark, Biochem. Ž. 131, 473-483/1922). I když tato me-toda je prozatím v řadě zemí uznávána jako jediná platná pro forenzní účely, byly v prů-běhu let vypracovány a zvěděny do praxe modernější, jednodušší a mnohdy i specifičtějšípostupy. Nejjednodušší a zcela spolehlivé je například stanovení plynově chromatografic-ké, které bylo také v některých zemích připuštěno pro soudní analyzy. Vedle toho se všakv poslední době stále více prosazují metody enzymového stanovení alkoholu, jejichž ne-sporná výhoda tkví v prvé řadě v jednoduchosti, citlivosti a značné specifičnosti. Tytometody jsou vesměs založeny na oxidaci alkoholu za přítomnosti enzymu alkoholdehydroge-nasy (E.C. 1.1.1.1.) za současné redukce koenzymu nikotinamidadenindinukleotidu (NAD) najeho redukovanou formu (NAOH). Přírůstek NADH, úměrný, obsahu alkoholu se při tom stanovízměřením charakteristické absorbagce při 340 nm (viz. T. Buchner, H. Redetzki, Kliň.
Wschr. 29, 615/1951). Tato metoda se také stala základem některých průmyslově vyrábě-ných souprav pro stanovení alkoholu V krvi. Významného zvýšení citlivosti uvedené enzymové metody bylo dosaženo spřažením tvorbyNADH s jeho reoxidací pomocí p-nitrosodimethylanilinu, který se redukuje na produkt -pravděpodobně chinondiiminový kation-, reagující s fenoly nebo naftoly za vzniku inten-zivně zbarvených indanilinových barviv. Intenzita vzniklého zbarvení je potom míroualkoholu ve vyšetřovaném materiálu (viz. 0. Kovář, a kol. Anal. Biochem. 137. 74-79/1984).
Tato modifikace enzymového stanovení je oproti dříve vyvinutým postupům výhodnějšítím, že k jejímu provedení je zapotřebí podstatně méně drahých preparátů, jako je enzymalkoholdehydrogenasa a NAD. 3ejí nevýhodou je však opět skutečnost, že při aplikaci nastanovení alkoholu v biologických kapalinách a materiálech, jako je například krev, jenutné tyto materiály derpoteinovat, což ovšem celý postup značněškomplikuje a prodlužu-je.
Tento problém řeší předložený vynález, jeho podstata spočívá v tom, že přípravekdále obsahuje chromogenní systém sestávající ze substituovaného p-nitrosoanilinu jakonapříklad p-nitroso-N-alkyl- nebo p-nitrosa-N,N-dialkylanilin v němž alkyl může obsaho-vat 1 až 4 atomy uhlíků nebo p-nitroso-N-aryl- nebo nitroso-N,N-diarylanilin, ve kterémaryl znamená fenyl nebo tolyl a pasivní kopulačnl komponenty,například substituovaný 1-naftol obecného vzorce I,
ve kterém R.^ je vodík nebo halogen nebo sulfoskupina nebo alkoxyl o počtu uhlíků 1 až 12nebo popřípadědále substituovaná fenoxyskupina a R2 je karboxyl nebo skupina -CONRjR^,ve které substituenty R^a R^jsou stejné nebo rozdílné atomy nebo skupiny jako vodík,alkyl o počtu atomů uhlíku 1 až 18 nebo karboxyalkyl o počtu uhlíku 1 až 5 nebo substi-tuovaný 5-pyrazolon obecného vzorce II 2 CS 269 879 B1
ve kterém je vodík nebo alkyl o počtu uhlíku 1 až 4 nebo oxoskupina a substituentyRg až Rg představují nezávisle na sobě vodík nebo halogen nebo sulfoskupinu a který dáleobsahuje tlumič o pH 4,5 až 10,5 a jako stabilizátor mono- nebo oligosacharid, jako na-příklad glukosu, fruktosu, rhamnosu nebo šacharosu a/nebo přirozenou nebo syntetickoupolymerní látku jako například želatinu, albumin, Škrob, karboxymethylcelulosu, methyl-hydroxy-propylcelulosu, polyvinylpyrrolidon nebo polyvinylalkohol. Přípravek pro stanovení alkoholu podle tohoto vynálezu může být proveden buá ve for-mě soupravy činidel, sloužící k spektrofotometričkému určení koncentrace alkoholu v roz-toku podle absorbance vzniklého chinoniminového barviva, nebo může být koncipován jakotabletový nebo proužkový test, to je v provedení, ve kterém všechna činidla potřebnák průběhu barevné analytické reakce jsou v prostředku obsažena v pevné fázi, popřípadězakotvena na vhodném nasákavém nosiči. Stanovení alkoholu pomocí takovýchto přípravkůse potom provede velmi jednoduše tak, že se kapka například krevního séra nebo slin na-nese na proužek nebo tabletu a· po určité době se vzniklé zbarvení porovná se zkusmo zho-tovenou barevnou stupnicí, jejíž jednotlivá barevná pole odpovídají určitým koncentracímalkoholu. Dalším možným způsobem aplikace tohoto vynálezu může být detekční trubička kestanovení\obsahu par alkoholu v dechu. Reakční soustava je v tomto případě nanesena navhodný nosič', kterým je naplněna skleněná trubička. Po průchodu vydechnutého vzduchudojde k barevné změně náplně trubičky. Tato změna se vyhodnotí porovnáním se zkusmo zho-tovenou barevnou stupnicí.
Tyto různé možnosti provedení přípravku k enzymovému stanovení koncentrace alkoho-lu podle vynálezu ilustrují blíže následující příklady. Příklad 1
Souprava činidel pro spektrofotometrické stanovení alkoholuČinidlo č. 1
Alkohold.ehydrogenasa (z koňských jater)
Nikotinamidadenindinukleotid (NAD)
Polyvinylalkohol
Pyrofosfátový tlumič o pH 8,5, .0,1 M roztok Činidlo č. 2 p-Nitroso-N-fenylanilin l-(4-sulfofenyl)-3-methyl-5-pyrazolon
Pyrofosfátový tlumič o pH 8,5, 0,1 M roztok 2,0, yUkat 50,0 mg500,0 mg 50,0 ml 25 mg14,0 mg50,0 ml CS 269 879 81 3 Při stanovení alkoholu se smíchá 0,5 ml. činidla č. 1 a 0,5 ml činidla č. 2, přidá se5,0 yul vySetřovaného séra a po 5 minutách se změří absorbáncé při vlnové délce 530 nmproti slepému pokusu, ke kterému místo vzorku séra bylo přidáno 5,0 ^ul vody. Podle zjiš-těné absorbance se obsah alkoholu v séru odvodí například pomocí zkusmo zhotovené kalib-rační křivky. Touto metodou lze stanovit látkové množství alkoholu v rozmezí 0,01 až0,1 /umolu s 5¾ přesností. Při vyšší koncentraci je nutno analyzovaný vzorek ředit. Příklad 2
Diagnostické proužky ke stanovení alkoholu ve slinách
Impregnační roztok I
Alkoholdeydrogenasa (z koňských jeter) 200 í Nikotinamidadenosindinukleotid (NAD) 0,40 g Želatina 5,0 9 Polyvinylpyrolidon K 90 3,0 9 Polyvinylalkohol 5,0 9 Albumin (hovězí) ' 5>° 9 Sacharosa 10,0 9 Pyrofosfátový tlumič pH 8,5, 0,1 M 1 000,0 ml
Impregnační roztok II N-Methyl-N-karboxymethylsmid kyseliny l-hydroxy-2-naftooové 1,0 g p-Nitroso-N,N-dimethylanilin . 2,0 g
Toluen 1 000,0 ml
Impregnační roztoky se připraví postupným rozpouštěním jednotlivých komponent v uvedeném
O pořadí. Na filtrační papír o plošné hmotnosti 1B0 g/m se potom nanese impregnační roztokč. I do nasycení papíru a papír se vysuší proudem vzduchu zahřátého na 40° C, nebo ve va-kuové sušárně nebo lyofilizací. Potom se na tento papír nanese obdobným způsobem impreg-nační roztok II a opět se papír vysuší. Takto naimpregnovaný papír se potom rozřeže načtverečky 6x6 mm, které se nalepí například pomocí oboustranné samolepicí pásky na je-den konec podložky z bílé plastické hmoty o rozměrech 6 x 80 mm. Takto se získají testač-ní proužka nesoucí na svém konci indikační zónu, která se po namočení do kapaliny obsahu-jící alkohol, jako jsou například sliny nebo sérum barví zeleně až modře, přičemž odstína intenzita tohoto zbarvení jsou přímo úměrné koncentraci alkoholu ve vyšetřované kapali-ně. Tato koncentrace se určí porovnáním vzniklého zbarvení se zkusmo zhotovenou ba-revnou stupnicí, jejíž jednotlivá barevná pole odpovídají určitým koncentracím alkoholu.Touto metodou lze rychle, bez přístrojových nároků stanovit koncentraci 0,1 až 1,0 promilealkoholu s přesností 0,2 promile ve zkoumaném vzorku. Finanční náklady na jedno stanove-ní jsou nižší, než u jiných přípravků, přičemž citlivost jiných přípravků je až od 0,5 až0,6 promile a stanovení ruší například cigaretový kouř. Příklad 3
Detekční tablety ke stanovení alkoholu
Tabletovací směs č. I
Alkoholdehydrogenasa (z koňských jater) ' 37,0 yukat
Nikotinamidadenindinukleoid 1,0 g
Sacharosa 1,0 9 škrob bramborový 7,5 g
Talek 1,0 g 4 CS 269 879 B1
Pyrofosfátový tlumič □ pH 8,5, 0,2 M roztok 10,0 ml
Tabletovací směs č. II p-Nitroso-N,N-dimethylanilin 22,0 mg N-Oktadecylamid kyseliny l-hydroxy-4-sulfo-2-naftoové 20,0 mg
Talek 1,0 g Škrob bramborový . . 9,0 g
Tabletovací směs č. I se připraví tak, že se v pyrofosfátovém tlumiči rozpustí alkohol-debydrogenasa, nikotinamidadenindinukleotid a sacharosa a roztokem se stejnoměrně zkro- i pí zhomogenizovaná navážka škrobu a talku. Vzniklá pastovitá hmota se potom dokonale zhomogenizuje a potom se v tenké vrstvě dokonale vysuší ve vakuu při teplotě do 30° C.
Tabletovací směs č. II se připraví smícháním a důkladnou homogenizací všech tří komponent,předem jemně pomletých. Obě tabletovací směsi se potom smíchají a dokonale zhomogenizu-jí a vzniklá směs se ihned ztabletuje na tablety o hmotnosti 100 až 200 mg.
Stanovení alkoholu pomocí těchto tablet se provádí tak, že se vyšetřovaný vzorek, jakosliny nebo sérum nanese v množství 50 /Ul na povrch tablety a po 3 minutách se vizuálněvyhodnotí vzniklé zelené až modré zbarvení taBlfeťý sřdVriáriím éé zkusmo zhotovenou barev-nou srovnávací stupnicí.
Touto metodou lze rychle bez přístrojovýbh nároků stanovit koncentraci alkoholu v rozsa-hu 0,1 až 1,0 promile s přesností 0,25 promile ve zkoumaném vzorku. Příklad 4
Detekční trubička ke stanoveni alkoholu v dechuImpregnační roztok I
Alkoholdehydrogenasa (z koňských jater) -200 yukat
Nikotinamideadenindinukleotid 0,40 g
Polyvinylpyrolidon K 90 0,1 g
Polyvinylalkohol 1,0 g
Albumin hovězí 0,1 g
Pyrofosfátový tlumič pH 8,5, 0,1 Μ 1 000,0 ml
Impregnační roztok II N-Methyl-N-karboxymethylamid kyseliny l-hydroxy-2-naftoové 1.0 9 p-Nitroso-N,N-dimethylanilin 2,0 g
Toluen 1 000,0 ml
Impregnační roztoky se připraví postupným rozpouštěním jednotlivých komponent v uvede-ném pořadí.
Na nosič Chromaton N zrnění 0,4Ů až 0,63 mm se rovnoměrně nanese impregnační roztok I,čímž se získá hustá kašovitá hmota. Po důkladné homogenisaci se tato hmota v tenkévrstvě vysuší ve vakuu při teplotě do 30° C.
Po’ usúšení se produkt rozmělní na výchozí zrnění a stejným způsobem jako impregnačníroztok I se nanese a vysuší na tomto produktu i impregnační roztok II.
Takto připravenou sypkou hmotou plníme skleněné trubičky, na jednom konci zatavené,o vnitřním průměru 5 mm sloupcem hmoty v 'délce 30 mm. Polohu sloupce v trubičce fi-xujeme porézními vložkami a potom se trubička ve vzdálenosti 50 mm od okraje sloupcehmoty zataví. Takto se získá detekční trubička v délce asi 10 cm.
Detekce alkoholu v dechu se provádí po odlomení obou konců detekční trubičky profouk- nutím známého objemu výdechu obsahujícího páry alkoholu. Tím dojde ke změně zbarvení náplně trubičky z intenzivně žluté barvy přes zelenou až na sytě modé zbarvení, po- dle koncentrace par alkoholu v dechu. Vyhodnocení koncentrace alkoholu se provede po-
Claims (2)
- CS 269 879 81 5 rovnáním dosaženého zbarvení se zkusmo zhotovenou stupnicí barevných políček. Touto metodou lze rychle bez nároků na měřící přístroje detekovat alkohol v dechu, přičemžlze stanovit již koncentraci odpovídající 0,1 promile alkoholu v krvi vyšetřovaného. Tutocitlivost a rozsah detekce lze korigovat změnami v průměru trubičky, délkou sloupce náplněa zrnitostí nosiče. P R E.P M Ě T V.Y NÁLEZU1. Přípravek k enzymovému stanovení koncentrace alkoholu v biologických tekutinách, obsa-hující alkoholdehydrogenasu, nikotinamidadenindinukleotid a tlumič o pH 4,5 až 10,5, vy-značující se tím, že obsahuje dále chromogenní systém, sestávající ze substituovanéhop-nitrosoanilinu jako například p-nitroso-N-alkyl- nebo p-nitroso-N,N-dialkylanilin, vekterém alkyl může obsahovat 1 až 4 atomy uhlíku nebo p-nitroso-N-aryl - nebo p-nitroso- I -Ν,Ν-diarylanilin, ve kterém aryl znamená fenyl nebo tolyl a pasivní kopulační komponen-ty, například substituovaný 1-naítol obecného vzorce Ive kterém Rj je vodík nebo halogen nebo sulfoskupina nebo alkoxyl o počtu uhlíků 1 až 12nebo popřípadě dálé Substituovaná fenoxyskupina a Rj je karboxyl nebo skupina - CONRjR^,ve které substituenty Rj a R^ jsou stejné nebo rozdílné atomy nebo skupiny jako vodík,alkyl o počtu atomů uhlíku 1 až 18 nebo karboxyalkyl o počtu atomů uhlíku 1 až 5 nebosubstituovaný 5-pyrazolon obecného vzorce IIve kterém R^je vodík nebo alkyl o počtu atomů uhlíku 1 až 4 nebo oxoskupina a substituen-ty Rg až Rfl představují nezávisle na sobě vodík nebo halogen nebo sulfoskupinu.
- 2. Přípravek podle bodu 1, vyznačující se tím, že obsahuje jako stabilizátor monosacharid nebo oligosachárid, jako například glukosu, fruktosu, rhamnosu nebo sacharosu a/nebo při- rozenou nebo syntetickou polymernl látku, jako například želatinu, albumin, škrob, dex- tran, karboxymethylcelulosu, methyl-hydroxypropylcelulosu, polyvinylpyrolidon nebo poly- vinylalkohol.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS875032A CS269879B1 (cs) | 1987-07-03 | 1987-07-03 | Přípravek k enzymovému stanoveni koncentrace alkoholu v biologických tekutinách |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS875032A CS269879B1 (cs) | 1987-07-03 | 1987-07-03 | Přípravek k enzymovému stanoveni koncentrace alkoholu v biologických tekutinách |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS503287A1 CS503287A1 (en) | 1989-10-13 |
| CS269879B1 true CS269879B1 (cs) | 1990-05-14 |
Family
ID=5394397
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS875032A CS269879B1 (cs) | 1987-07-03 | 1987-07-03 | Přípravek k enzymovému stanoveni koncentrace alkoholu v biologických tekutinách |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS269879B1 (cs) |
-
1987
- 1987-07-03 CS CS875032A patent/CS269879B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS503287A1 (en) | 1989-10-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6121050A (en) | Analyte detection systems | |
| CA1060906A (en) | 3,3',5,5'-tetraalkylbenzidines and their use as indicators in diagnostic agents | |
| US3298789A (en) | Test article for the detection of glucose | |
| CA2088652C (en) | Improved oxidative coupling dye for spectrophotometric quantitative analysis of analytes | |
| US4604264A (en) | Test strips | |
| EP0230229B1 (en) | Stable composition for the determination of peroxidatively active substances | |
| US3668076A (en) | Diagnostic agent | |
| US3979262A (en) | Compositions and methods for the determination of oxidizing agents | |
| US3627698A (en) | Hydroperoxide diagnostic agents containing a chromogen indicator | |
| CN1162981A (zh) | 用于分光光度法测定分析物的染料偶合对 | |
| US3630847A (en) | Diagnostic agent for use in the determination of hydroperoxides and of peroxidate-active substances | |
| US4753890A (en) | Analytical element and method for determination of magnesium ions | |
| EP0036563B1 (en) | Bilirubin-resistant composition for the determination of cholesterol, test device containing the composition and method of making the test device | |
| JPS61138163A (ja) | 発色性カップラー及び過酸化水素又は他の被分析物の測定へのその使用 | |
| JPH0332360B2 (cs) | ||
| US4803158A (en) | Composition used for the determination of beta-hydroxybutyric acid and a method for preparing the said composition | |
| US4552849A (en) | Method for determination of formaldehyde | |
| US4716110A (en) | Composition for assaying hydrogen peroxide | |
| CA1134247A (en) | Bilirubin-resistant determination of uric acid | |
| US4548905A (en) | Reagent composition, dry element and method for determination of total bilirubin | |
| CS269879B1 (cs) | Přípravek k enzymovému stanoveni koncentrace alkoholu v biologických tekutinách | |
| SU416969A3 (cs) | ||
| CA1289443C (en) | Test aids and method for the preparation thereof | |
| US4894472A (en) | Dicyanoethylaryl derivatives and process for their preparation | |
| EP0247845A1 (en) | Use of methine dyes for the determination of hydrogen peroxide or analytes producing same |