CS269245B1

CS269245B1 - A method for determining the content of ergoclavine alkaloids in a mixture

Info

Publication number: CS269245B1
Application number: CS882053A
Authority: CS
Inventors: Jiri Pharmdr Zapletal; Ladislav Ing Cvak
Original assignee: Jiri Pharmdr Zapletal; Cvak Ladislav
Priority date: 1988-03-28
Filing date: 1988-03-28
Publication date: 1990-04-11
Also published as: CS205388A1

Abstract

Ergoklavinové alkaloidy obsažené ve směsi ss stanoví metodou plynové chromatografie na náplňové nebo kapilární koloně obsahující jeko zakotvenou fázi silikonový polymer e fenylovými a methylovými skupinami v proudu nosného plynu za plamenolonizačni detekce a kvantitativního vyhodnoceni metodou vnitřního standardu.Ergoclavine alkaloids contained in the mixture are determined by gas chromatography on a packed or capillary column containing a silicone polymer with phenyl and methyl groups as the anchored phase in a carrier gas stream with flame detection and quantitative evaluation by the internal standard method.

Description

Vynález se týká způsobu stanovení obsahu jednotlivých ergoklavinových alkaloidů ve směsi těchto látek, získaných zejména fermentačními a chemickými izolačními pochody, metodou plynové chromatografie*The invention relates to a method for determining the content of individual ergoclavine alkaloids in a mixture of these substances, obtained mainly by fermentation and chemical isolation processes, by the gas chromatography method*

Doposud jsou známy neselektivní metody stanovení obsahu ergoklavinových alkaloidů založené na tvorbě barevného produktu po reakci s p-aminobenzaldehydam v příslušném prostředí nebo vycházející ze skutečnosti, že roztoky těchto látek absorbují světlo v ultrafialové oblasti· Obě tyto metody jsou využívány pro sumární stanovení obsahu ergoklavinových alkaloidů v předloze spektrofotometrickou metodou.So far, non-selective methods for determining the content of ergoclavine alkaloids are known, based on the formation of a colored product after reaction with p-aminobenzaldehyde in the appropriate environment or based on the fact that solutions of these substances absorb light in the ultraviolet region. Both of these methods are used for the summary determination of the content of ergoclavine alkaloids in a sample by the spectrophotometric method.

Známé eeparační metody, tenkovrstevná e kapalinová chromatografie, vykazují také některé nevýhody, které budou dále rozebrány* Tenkovrstevná chromatografie neumožňuje kvantitativní vyhodnoceni chromatogramu, nanejvýš, za použití Skály standardů různých koncentrací, je možný semikvantitativní odhad obsahu sledovaných látek* Kapalinová chromatografie, má-li umožnit separaci čtyř hlavních komponent, elymoklavinu, chanoklavinu, agroklavinu a festuklavinu, je časově náročná. Doba jedné analýzy činí 20 až 30 minut. Navíc tato metoda vyžaduje alkálie v mobilní fázi, například roztok amoniaku nebo triethylamln. Tyto látky zvyšují rozpustnost sillkagelové náplně, a tim podstatně zkracují životnost kolony použité pro kapalinovou chromatografii«Known separation methods, thin-layer and liquid chromatography, also have some disadvantages, which will be discussed further. Thin-layer chromatography does not allow for quantitative evaluation of the chromatogram; at most, using a scale of standards of different concentrations, a semi-quantitative estimate of the content of the substances under investigation is possible. Liquid chromatography, if it is to allow for the separation of the four main components, elymoclavin, chanoclavin, agroclavin and festuclavin, is time-consuming. The time for one analysis is 20 to 30 minutes. In addition, this method requires alkalis in the mobile phase, for example, ammonia solution or triethylamine. These substances increase the solubility of the silica gel filling, and thus significantly shorten the life of the column used for liquid chromatography.

Uvedené nevýhody odstaňuje způsob stanovení obsahu srgoklavinových alkaloidů podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že k separaci jednotlivých ergoklavinových alkaloidů ze směsi se použije plynová chromatografie, vyznačující se tím, že jednotlivé látky se rozdělí na náplňové koloně na sorbentu silikagelového typu pokrytém silikonovým polymerem s fenylovými a methylovými skupinami, v 50% zastoupení každé, nebo na kapilární koloně uvnitř pokryté silikonovým polymerem se 7% fenylových, 7% kyanopropylových a 86% methylových skupin, při teplotě termostatu 260 °C, nástřiku a detektoru 290 °C v proudu inertního plynu, například dusíku, helia nebo vodíku jako nosného plynu a po detekci plamenoionizačním detektorem se kvantifikují metodou vnitřního standardu, přičemž jako vnitřní standard se použije festuklavin.The above disadvantages are eliminated by the method for determining the content of ergoclavine alkaloids according to the invention, the essence of which consists in using gas chromatography to separate individual ergoclavine alkaloids from the mixture, characterized in that the individual substances are separated on a packed column on a silica gel-type sorbent covered with a silicone polymer with phenyl and methyl groups, in a 50% representation of each, or on a capillary column covered inside with a silicone polymer with 7% phenyl, 7% cyanopropyl and 86% methyl groups, at a thermostat temperature of 260 °C, an injection and detector temperature of 290 °C in a stream of inert gas, for example nitrogen, helium or hydrogen as a carrier gas, and after detection with a flame ionization detector, they are quantified by the internal standard method, with festuclavine being used as the internal standard.

Způsob stanovení obsahu ergoklavinových alkaloidů podle vynálezu metodou plynové chromatografie vychází z experimentálního poznatku, že tyto látky je možno definovaným způsobem převést do plynné fáze a takto, podrobit separaci na náplňové nebo kapilární koloně v proudu inertního plynu* Metoda je v tomto provedeni jednoduchá, spolehlivá, selektivní a časově nenáročná.The method for determining the content of ergoclavine alkaloids according to the invention by gas chromatography is based on the experimental finding that these substances can be converted into the gas phase in a defined manner and thus subjected to separation on a packed or capillary column in a stream of inert gas. The method is simple, reliable, selective and time-saving in this embodiment.

Způsob stanoveni obsahu ergoklavinových alkaloidů podle vynálezu byl proveden na plynovém chromatografu, spojeném s počítacím integrátorem* Kolona náplňová o rozměrech 1 200 x 3 mm byla naplněna sorbentem na bázi silikagelu o zrnění 0,080 až 0,100 mm pokrytým silikonovým polymerem s 50% methylovými a 50% fenylovými skupinami v množství 3% hmot* Kolona kapilární o rozměrech 10 m x 0,32 mm z čistého křemene byla pokryta na vnitřních stěnách filmem zakotvené fáze typu silikonového polymeru se 7% fenylovými, 7% kyanopropylovými a 86% methylovými skupinami o sile filmu 0,18/um* Jako nosný plyn byl pro kolonu náplňovou 1 kapilární použit dusík a pro kolonu kapilární vodík* Detekce separovaných látek byle pro oba druhy kolon a oba typy noených plynů provedena plamenoionizačním detektorem s přívodem vodíku a vzduchu* Pro kvantitativní vyhodnocení byla použita metoda vnitřního standardu, kterým byl feetuklevin v koncentraci cca 1,0 mg / ml, koncentrace sledovaných látek se pohybovala v rozmezí 0,1 až 10 mg / ml* Plochy píků byly měřeny elektronickým integrátorem*The method for determining the content of ergoclavine alkaloids according to the invention was carried out on a gas chromatograph connected to a counting integrator.* A packed column measuring 1,200 x 3 mm was filled with a silica gel-based sorbent with a grain size of 0.080 to 0.100 mm covered with a silicone polymer with 50% methyl and 50% phenyl groups in an amount of 3% by weight.* A capillary column measuring 10 m x 0.32 mm made of pure quartz was covered on the inner walls with a film of an anchored phase of the silicone polymer type with 7% phenyl, 7% cyanopropyl and 86% methyl groups with a film thickness of 0.18 µm.* Nitrogen was used as the carrier gas for the packed capillary column and hydrogen for the capillary column.* Detection of the separated substances was carried out for both types of columns and both types of noble gases by a flame ionization detector with by hydrogen and air supply* For quantitative evaluation, the internal standard method was used, which was fetuklevin at a concentration of approximately 1.0 mg / ml, the concentration of the monitored substances ranged from 0.1 to 10 mg / ml* The peak areas were measured with an electronic integrator*

Následující příkledy ilustrují způsob stanovení obsehu ergoklavinových alkaloidů metodou plynové chromatografie podle vynálezu, nikterek ho všek neomezují* Příklad 1The following examples illustrate the method of determining the content of ergoclavine alkaloids by the gas chromatography method according to the invention, but are not intended to limit it. Example 1

Kalibrační roztok se připreví rozpuštěním asi 25 mg každé z těchto látek: elymoklavinu, chanoklavinu, agroklavinu a featuklavinu ve 25 ml methanolu, přičemž rozpouštěni se s výhodou urychli v ultrazvukové lázní* Vzhledem ke skutečnosti, Že festuklavinThe calibration solution is prepared by dissolving about 25 mg of each of the following substances: elymoclavine, chanoclavine, agroclavine and fetuclavine in 25 ml of methanol, the dissolution being preferably accelerated in an ultrasonic bath.* In view of the fact that festuclavine

CS 269 245 Bl není zpravidla zastoupen v přírodních zdrojích ergoklavinových alkaloidů, bude tato látka zvolena jako vnitřní standard pro kvantitativní vyhodnocení analýzy.CS 269 245 Bl is not usually present in natural sources of ergoclavine alkaloids, this substance will be chosen as an internal standard for quantitative evaluation of the analysis.

Roztok vzorku se připraví rozpuštěním předlohy v množství odpovídajícím výsledné koncentraci 0,1 až 10 mg každé obsažené složky v 1 ml methanolického roztoku. Do roztoku vzorku se přidá roztok festuklavinu v množství odpovídajícím výsledné koncentraci 1 mg v 1 ml. Rozpuštění předlohy se s výhodou urychlí v altrazvukové lázni.The sample solution is prepared by dissolving the template in an amount corresponding to a final concentration of 0.1 to 10 mg of each component contained in 1 ml of methanolic solution. Festuclavin solution is added to the sample solution in an amount corresponding to a final concentration of 1 mg in 1 ml. The dissolution of the template is preferably accelerated in an ultrasonic bath.

Plynový chromatograf, skleněná kolona o rozměrech 1 200 x 3 mm, naplněné nosičem sllikagelového typu o zrnění 0,080 až 0,100 mm, smočeným 3 % hmot, silikonového polymeru s fenylovými 50% a methylovými 50% skupinami. Teplota nástřiku a detektoru 290 °C a teplota termostatu 260 °C. 3ako nosný plyn se použije dusík o průtoku 40 ml / min, vodík o průtoku 30 ml / min. a vzduch o průtoku 400 ml / min. Za uvedených podmínek se do plynového chromatogrefu nestříkne a analyzuje kalibrační roztok a posléze roztok vzorku.Gas chromatograph, glass column with dimensions 1,200 x 3 mm, filled with silica gel type support with grain size 0.080 to 0.100 mm, wetted with 3% by weight of silicone polymer with 50% phenyl and 50% methyl groups. Injection and detector temperature 290 °C and thermostat temperature 260 °C. 3As carrier gas, nitrogen with a flow rate of 40 ml / min, hydrogen with a flow rate of 30 ml / min. and air with a flow rate of 400 ml / min. Under the specified conditions, the calibration solution and then the sample solution are injected into the gas chromatograph and analyzed.

Korekční faktory sledovaných látek se vypočtou podle vzorce: Cone, * Area-KF ------2----------iž--Area^. M Conc_IS kde Conc^ je koncentrace sledované látky v miligramechCorrection factors of the monitored substances are calculated according to the formula: Cone, * Area-KF ------2---------Area^. M Conc _IS where Conc^ is the concentration of the monitored substance in milligrams

Conc_IS je koncentrace vnitřního standardu v miligramechConc _IS is the concentration of the internal standard in milligrams

Area! Je plocha plku sledované látkyArea! Is the surface area of the observed substance

Area_IS je plocha piku vnitřního standardu (festuklavin)Area _IS is the peak area of the internal standard (festuklavin)

Obsah v procentech jednotlivých složek směsí se vypočte podle vzorce:The percentage content of individual components of mixtures is calculated according to the formula:

Conc__ x Area. x KF, x 100 Conc! = -----=--------------------=-----------Area_IS x Conc_v2 kde GonCjg je koncentrace vnitřního standardu v miligramechConc__ x Area. x KF, x 100 Conc! = -----=--------------------=-----------Area _IS x Conc _v2 where GonCjg is the concentration of the internal standard in milligrams

Conc_v2 je koncentrace vzorku v miligramechConc _v2 is the sample concentration in milligrams

Area! je plocha plku sledované látkyArea! is the area of the mass of the monitored substance

Area-- je plocha plku vnitřního standardu /festuklavin/Area-- is the area of the internal standard /festuklavin/

Kp! je korekční faktor sledované látkyKp! is the correction factor of the substance of interest

Příklad 2Example 2

Příprava kalibračního roztoku a roztoku vzorku se provede podle přikladu 1.The preparation of the calibration solution and sample solution is carried out according to example 1.

Plynový chromatograf, kapilární křemenná kolona o rozměrech 10 m x 0,32 mm pokrytá na vnitřní stěně silikonovým polymerem e fenylovými 7%, kyanopropylovými 7% a methylovými 86% skupinami o sile filmu O, iB/im. Teplota nástřiku a detektoru 290 °C a teplota termostatu 260 °C. Oako nosný plyn se použije vodík o vstupním průtoku 75 ml /min. a tlaku na kolonu 30 kPa. Pro plamenoionizační detektor se použije vodík o průtoku 30 ml / min. a vzduch o průtoku 400 ml / min.Gas chromatograph, capillary quartz column with dimensions 10 m x 0.32 mm coated on the inner wall with silicone polymer with phenyl 7%, cyanopropyl 7% and methyl 86% groups with a film thickness of 0.1 µm/µm. Injection and detector temperature 290 °C and thermostat temperature 260 °C. Hydrogen with an inlet flow rate of 75 ml/min. and a column pressure of 30 kPa is used as the carrier gas. Hydrogen with a flow rate of 30 ml/min. and air with a flow rate of 400 ml/min. are used for the flame ionization detector.

Za uvedených podmínek ee analyzuje kalibrační roztok a roztok vzorku. K výpočtům se použijí vzorce uvedené v příkladu 1.Under the specified conditions, the ee analyzes the calibration solution and the sample solution. The formulas given in example 1 are used for calculations.

předmět vynálezusubject matter of the invention

Claims

A method for determining the content of ergoclavine alkaloids in a mixture by gas chromatography, characterized in that the individual substances are separated on a packed column on a silica gel-type sorbent covered with a silicone polymer with phenyl and methyl groups.

in 50% of each or on a capillary column coated internally with a silicone polymer with 7% phenyl, 7% cyanopropyl and 86% methyl groups, at thermostat temperature

CS 269 245 Bl

260 °C, injection and detector 290 °C in a stream of inert gas, or hydrogen as a carrier gas and after detection by the flame ionization method of an internal standard, where festuklevin is used as the internal standard. For example, nitrogen, helium are quantified by the detector.