CS269245B1

CS269245B1 - Způsob stanoveni obsahu ergoklavlnových alkaloidů ve směsi

Info

Publication number: CS269245B1
Application number: CS882053A
Authority: CS
Inventors: Jiri Pharmdr Zapletal; Ladislav Ing Cvak
Original assignee: Jiri Pharmdr Zapletal; Cvak Ladislav
Priority date: 1988-03-28
Filing date: 1988-03-28
Publication date: 1990-04-11
Also published as: CS205388A1

Abstract

Ergoklavinové alkaloidy obsažené ve směsi ss stanoví metodou plynové chromatografie na náplňové nebo kapilární koloně obsahující jeko zakotvenou fázi silikonový polymer e fenylovými a methylovými skupinami v proudu nosného plynu za plamenolonizačni detekce a kvantitativního vyhodnoceni metodou vnitřního standardu.

Description

Vynález se týká způsobu stanovení obsahu jednotlivých ergoklavinových alkaloidů ve směsi těchto látek, získaných zejména fermentačními a chemickými izolačními pochody, metodou plynové chromatografie*

Doposud jsou známy neselektivní metody stanovení obsahu ergoklavinových alkaloidů založené na tvorbě barevného produktu po reakci s p-aminobenzaldehydam v příslušném prostředí nebo vycházející ze skutečnosti, že roztoky těchto látek absorbují světlo v ultrafialové oblasti· Obě tyto metody jsou využívány pro sumární stanovení obsahu ergoklavinových alkaloidů v předloze spektrofotometrickou metodou.

Známé eeparační metody, tenkovrstevná e kapalinová chromatografie, vykazují také některé nevýhody, které budou dále rozebrány* Tenkovrstevná chromatografie neumožňuje kvantitativní vyhodnoceni chromatogramu, nanejvýš, za použití Skály standardů různých koncentrací, je možný semikvantitativní odhad obsahu sledovaných látek* Kapalinová chromatografie, má-li umožnit separaci čtyř hlavních komponent, elymoklavinu, chanoklavinu, agroklavinu a festuklavinu, je časově náročná. Doba jedné analýzy činí 20 až 30 minut. Navíc tato metoda vyžaduje alkálie v mobilní fázi, například roztok amoniaku nebo triethylamln. Tyto látky zvyšují rozpustnost sillkagelové náplně, a tim podstatně zkracují životnost kolony použité pro kapalinovou chromatografii«

Uvedené nevýhody odstaňuje způsob stanovení obsahu srgoklavinových alkaloidů podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že k separaci jednotlivých ergoklavinových alkaloidů ze směsi se použije plynová chromatografie, vyznačující se tím, že jednotlivé látky se rozdělí na náplňové koloně na sorbentu silikagelového typu pokrytém silikonovým polymerem s fenylovými a methylovými skupinami, v 50% zastoupení každé, nebo na kapilární koloně uvnitř pokryté silikonovým polymerem se 7% fenylových, 7% kyanopropylových a 86% methylových skupin, při teplotě termostatu 260 °C, nástřiku a detektoru 290 °C v proudu inertního plynu, například dusíku, helia nebo vodíku jako nosného plynu a po detekci plamenoionizačním detektorem se kvantifikují metodou vnitřního standardu, přičemž jako vnitřní standard se použije festuklavin.

Způsob stanovení obsahu ergoklavinových alkaloidů podle vynálezu metodou plynové chromatografie vychází z experimentálního poznatku, že tyto látky je možno definovaným způsobem převést do plynné fáze a takto, podrobit separaci na náplňové nebo kapilární koloně v proudu inertního plynu* Metoda je v tomto provedeni jednoduchá, spolehlivá, selektivní a časově nenáročná.

Způsob stanoveni obsahu ergoklavinových alkaloidů podle vynálezu byl proveden na plynovém chromatografu, spojeném s počítacím integrátorem* Kolona náplňová o rozměrech 1 200 x 3 mm byla naplněna sorbentem na bázi silikagelu o zrnění 0,080 až 0,100 mm pokrytým silikonovým polymerem s 50% methylovými a 50% fenylovými skupinami v množství 3% hmot* Kolona kapilární o rozměrech 10 m x 0,32 mm z čistého křemene byla pokryta na vnitřních stěnách filmem zakotvené fáze typu silikonového polymeru se 7% fenylovými, 7% kyanopropylovými a 86% methylovými skupinami o sile filmu 0,18/um* Jako nosný plyn byl pro kolonu náplňovou 1 kapilární použit dusík a pro kolonu kapilární vodík* Detekce separovaných látek byle pro oba druhy kolon a oba typy noených plynů provedena plamenoionizačním detektorem s přívodem vodíku a vzduchu* Pro kvantitativní vyhodnocení byla použita metoda vnitřního standardu, kterým byl feetuklevin v koncentraci cca 1,0 mg / ml, koncentrace sledovaných látek se pohybovala v rozmezí 0,1 až 10 mg / ml* Plochy píků byly měřeny elektronickým integrátorem*

Následující příkledy ilustrují způsob stanovení obsehu ergoklavinových alkaloidů metodou plynové chromatografie podle vynálezu, nikterek ho všek neomezují* Příklad 1

Kalibrační roztok se připreví rozpuštěním asi 25 mg každé z těchto látek: elymoklavinu, chanoklavinu, agroklavinu a featuklavinu ve 25 ml methanolu, přičemž rozpouštěni se s výhodou urychli v ultrazvukové lázní* Vzhledem ke skutečnosti, Že festuklavin

CS 269 245 Bl není zpravidla zastoupen v přírodních zdrojích ergoklavinových alkaloidů, bude tato látka zvolena jako vnitřní standard pro kvantitativní vyhodnocení analýzy.

Roztok vzorku se připraví rozpuštěním předlohy v množství odpovídajícím výsledné koncentraci 0,1 až 10 mg každé obsažené složky v 1 ml methanolického roztoku. Do roztoku vzorku se přidá roztok festuklavinu v množství odpovídajícím výsledné koncentraci 1 mg v 1 ml. Rozpuštění předlohy se s výhodou urychlí v altrazvukové lázni.

Plynový chromatograf, skleněná kolona o rozměrech 1 200 x 3 mm, naplněné nosičem sllikagelového typu o zrnění 0,080 až 0,100 mm, smočeným 3 % hmot, silikonového polymeru s fenylovými 50% a methylovými 50% skupinami. Teplota nástřiku a detektoru 290 °C a teplota termostatu 260 °C. 3ako nosný plyn se použije dusík o průtoku 40 ml / min, vodík o průtoku 30 ml / min. a vzduch o průtoku 400 ml / min. Za uvedených podmínek se do plynového chromatogrefu nestříkne a analyzuje kalibrační roztok a posléze roztok vzorku.

Korekční faktory sledovaných látek se vypočtou podle vzorce: Cone, * Area-KF ------2----------iž--Area^. M Conc_IS kde Conc^ je koncentrace sledované látky v miligramech

Conc_IS je koncentrace vnitřního standardu v miligramech

Area! Je plocha plku sledované látky

Area_IS je plocha piku vnitřního standardu (festuklavin)

Obsah v procentech jednotlivých složek směsí se vypočte podle vzorce:

Conc__ x Area. x KF, x 100 Conc! = -----=--------------------=-----------Area_IS x Conc_v2 kde GonCjg je koncentrace vnitřního standardu v miligramech

Conc_v2 je koncentrace vzorku v miligramech

Area! je plocha plku sledované látky

Area-- je plocha plku vnitřního standardu /festuklavin/

Kp! je korekční faktor sledované látky

Příklad 2

Příprava kalibračního roztoku a roztoku vzorku se provede podle přikladu 1.

Plynový chromatograf, kapilární křemenná kolona o rozměrech 10 m x 0,32 mm pokrytá na vnitřní stěně silikonovým polymerem e fenylovými 7%, kyanopropylovými 7% a methylovými 86% skupinami o sile filmu O, iB/im. Teplota nástřiku a detektoru 290 °C a teplota termostatu 260 °C. Oako nosný plyn se použije vodík o vstupním průtoku 75 ml /min. a tlaku na kolonu 30 kPa. Pro plamenoionizační detektor se použije vodík o průtoku 30 ml / min. a vzduch o průtoku 400 ml / min.

Za uvedených podmínek ee analyzuje kalibrační roztok a roztok vzorku. K výpočtům se použijí vzorce uvedené v příkladu 1.

předmět vynálezu

Claims

Způsob stanoveni obsahu ergoklavinových alkaloidů ve směsi plynovou chromatografli, vyznačující se tím, že jednotlivé látky se rozdělí na náplňové koloně na sorbentu silikagelového typu pokrytém silikonovým polymerem s fenylovými a methylovými skupinami.

v 50% zastoupení ksždé nebo na kapilární koloně uvnitř pokryté silikonovým polymerem se 7% fenylových, 7% kyanopropylových a 86% methylových skupin, při teplotě termostatu

CS 269 245 Bl

260 °C, nástřiku a detektoru 290 °C v proudu inertního plynu, nebo vodíku jako nosného plynu a po detekci plamenoionizačním metodou vnitřního standardu, přičemž jako vnitřní standard se nepříklad dusíku, helia detektorem se kvantifikují použije festuklevln.