CS269008B1 - Sposob přípravy 4-dehy d row 1t ha f e r I nu A - Google Patents

Abstract

Sposob příprsvy 4-dehydrow!thafer1 nu A tik, le sa do tekutého aédla obsahujůceho zdroj uhlíka s organického duslks naočkuj· kuttůrs Arthrobactervs1aplex /ATCC 6946/, potoa ss přídi 10 ai 50 ag wlthaferlnu A na 100 »1 pody a nechi sa prj teplote 28 ai 30 °C kultivovat 30 ai 48 hodin. liskaný flltrét vyŤeraentovanej pody sa extrahuje ésteral kyseliny octovej, extrakt sa odpaří do sucha, získaný odparok sa přečíst! na štipci »1l1kagélu, získaný eluit sa odpař! do sucha a produkt sa kryitallzuje zo zaesl etanol: chloroform pr! 4 °C. Flltrét feraentovanej pody sa mole extrahovat aj chlorovanými uhlovodík*! s počtom 1 ai 5 uhtlkov s výhodou d1chlóraetinoa

Description

CS 269008 81 1

Vynález sa týká sposobu přípravy «etabolltu 4-dehydrow1thaferinu A Inhlbujúeehobuňky laukéaia P388, který sa připraví transforaác1ou wlthaferlnu A a1kroorganlzaoaArthrobactar slaptex /ATCC 6946/, W1thafar1n A Je stcroldný laktón, ktorý 1nh1buje rast vlaeerých nádorov /Shohatat.al., Cancer Chaaothar. Rap,, JI,271,1977; fuška et al., Neoplasaa 31 ,31,1984/. Lát-ka bola Izolovaná z roznych druhov rastlln. Ml kroorganlzaus Cunn1nghaaalla alagans /NRRL1393/ transforauje vlthaferln A na 15/3-hydroxywithaferln A /Rosazza at al., Sterolds31 ,676,1978/ a na 12 Λ-hydroxyw1thafar1n A /Fuška at al., Sterolds 35,157,1982/. Sel-ila aetabolity z wlthaferlnu A bolí připravené z wlthaferlnu A pomocou Arthrobactar s1a-plex aviak 1ch itruktúra nahota dotaraz vyrleianá /Fuška at al.. Folia alcroblol., 30,427,1985/. V pradkladanoa rleienl uvádzaae sposob přípravy 4-dehydrow1thaferinu A, ktorý aávyiilu prot1nádorovú aktivitu ako dotaraz připravená deriváty wlthaferlnu A 1 saaotnývlthaferln A. Podstatou náiho rlaienla je, že sa do ilvnej pody obsahujúcej zdroj uh-I1ka a organického duslka, naoíkovanej kultúrou Arthrobacter simplex /ATCC 6946/ při-dá vlthaferln A /10- 50 ag.lOOml ^/ rozpuštěný v polárnoa rozpúitadle, s výhodou v dl- etytforaaatde a kultivuje sa 30 - 48 hodin pr1 teplote 28 - 30 °C za neustálého a1e-ianla a prevzduinovanla. Filtrát feraentovanej pody, ktorý obsahuje nový aetabollt saextrahuje ésteral kyseliny oetovaj, s výhodou octanoa etylnatýa a získaný extrakt sapo vysuienl odpaří do sucha, preílstl na štipci slllkagtlu a získaný eluát po zahuště-ni prl teplote do 40 °C sa ponechá pr1 4 °C, č1a sa získá čistý 4-dehydrow1thafer1n A.

Na extrakclu látky z filtrátu aožno taktlež použit rožne chlorovaná uhlovodíky s poč-toa uhllkov 1 - 5 s výhodou dlchlóraetánu. Na rekryital1záe1u aetabolltu je -výhodnázaes rozpúitadlel octan atylnatý: n-heptán alebo octan etylnatý: etanol.

4-dehydrow1 thaf edn A /1/ je blala kryitaHcká látka, t.t. 276 - 277 °C, susárneho vzor- ca C28H3ý®ý· V sústave chloroform: aceton /4do· jednu ikvrnu hnedej farby s hodnotou R^ 0ferinu A /1/ a wlthaferlnu A /2/, na základeděné v nasledujueej tabulke: : 2/ dává látka po detekdl p-an1zaldehy-,61. Hodnoty ^H-NMR spektler 4-dehydrow1tha ktorých bola látka Identifikovaná sú uve- Proton Mult1pl1c1ta 1 2 2 d 6,21 6,87 3 . dd 6,94 d 3,77 — 6 s.br. 3,23 3,43 18 s 0,71 0,74

Claims (2)

1. 2 CS 269008 81 19 a 1,41 1,40 21 d 1,01 1,02 22 ddd 4,43 4,4S 23a dd 2,50 2/52 23b dd 2,20 2,20 27 A8q 4,36 4,30 28a a 2,04 2,04 l2z3 = 10Hz> JJz4 6Hz> J20,21 “ 6,SHz; J2Q,22 3Hz; J22,23a = 13Hz' J22,23b = = 3Hz; J, = 23a,23b 4-dehydrow1thafer 1n Afunkele a rast bunlek 18Hz> Inhiboval v koněentráe1 aeh nlžžieh ako lO^Aig.al-^ biochemickéleukémie P388 výraznejile ako povodný wlthaferin A a 1né z něhodoteraz připravené deriváty. Naa1 použitý a 1kroorgan1z«u> transformuje velal selektiv-ně a za kritku dobu kultlváde wlthaferin A na 4-dehydrow1thafer1n A. V na aledujúc1eh příkladech je uvedený tpoaob traniforaácle wlthaferlnu A na 4-de-hydrowithafer 1 n A a jeho Izoláda. Přiklad 1 Do 20 varných banlek a plochýa dnoa o objeae S00 al aa připravilo 100 al pody,ktorá aala nasledujúce zloženle: glukóza 2 g, kukurlíný výluh /50 X lužiny/ 3 g, kvaa-ničný extrakt 5 g, vodovodní voda do 1000 al, pH 6,5 -7,0. Podá aa sterilizovala 20 al-nůt pr1 120 °C a po ochladtnl aa očkovala 15 al vegttat1vneho inokula Arthrobacter aia-plex /ATCC 6946/ a kultivovala aa na rotainej třepačka 220 ot.aln \ prl teplota 28 °C .Po 24 hodinách aa do každej banky přidalo 30 ag wlthaferlnu A rozpuateného v 0,3 al'd1-etylforaaaidu. Kultlváde aa ukončila v 32 hodině kultlváde, ktdy bol přidaný aubatrátúplné tranaforaovaný. Přiklad 2 2000 al aédla, ktoré aa ziakalo po ukončeni tranaforaác1e aa centr1fugovanla a ná-alednou flltráclou zbavilo bakterlálnej bloaaay. Získaný filtrát 1600 al, pH 8,8 po ů-prave pH na 6,5 extrahoval třikrát po.tebe 800 al octanu etylnatého, za neustálého aie-Sanla, prl teplote 20 - 24 °c po dobu 15 - 20 minut. Získané extrakty sa spojili, pr1-davkoa bezvodného síranu sodného vytužili a za znlženého tlaku při teplote do 40 °C zba-vili rozpúitadla’. Získalo ta 190 ag surového produktu, který aa přečistil na ttlpcl li-li kage lu /60/120 aeth, kolona 4x35 ca/, elučné činidlo zaes octanu etylnatého a acetonu/2 : 1/. Frakde, ktoré obsahovali 4-dehydrow1thafer1n A ta spojili, zbavili rozpúlta-diel a pevný zbytok aa rekryi ta11zoval zo zaeal etanol : oetan etylnatý. Získalo ta 120ag Slátej kryitaUckej látky, ktorá bola Identifikovaná ako 4-dehydrow1thafer1n A. Přiklad 3 Postup biotransforaácle bol rovnaký ako je uvedený v přiklade 1, ale na extrakduaetabolltu ta použil dlchtóraetán. PREDMET VYNÁLEZU

   1. Spoiob přípravy 4-dehydrow11hafer1 nu A vyznačujύό1' .aa tým, že sa do tekutého aédla obaahujúceho zdroj uhllka a organického dusika naočkuje kultúra Arthrobacter alaplex CS 269008 81 3 ZATCC 6946/ t přídi n 10 - 50 mg wlthaferlnu A na 100 ml pody, rozputteného v polir-nom rozpůitadle, i výhodou v dlaetylforma1de a podá sa nechá kultivovat za ttálehomiešanla a vzdušnenla. 30-48 hodin, potom sa filtrát vyfermentovanej pody extrahujeéstermi kyseliny octovej, s výhodou octanom etylnatým, extrakt sa odpaří do sucha priteplote do 40 °C, pevný surový produkt sa přečisti na štipci silikagelu a po odapare-ni rozpúštadiel sa látka krystalizuje zo zmesi etanol : chloroform atebo etanol : octanetylnatý.
2. 2. Sposob pripravy podta bodu 1 vyznačujúcl ta tým, že ta filtrát fermentovaneJ podyextrahuje chlorovanými uhlovodlkml s počtoa uhltkov 1 - 5, t výhodou d1ehlórmetánom.