CS265648B1 - Kmen mikroorganismu Corynebacterium glutamicum CCM 4024 (VKPM B-3494), produkující L-lysin - Google Patents

Abstract

Je popsán způsob přípravy prototrofního kmene Corynebacterium glutamicum na bázi hybridizace s použitím protoplastové techniky pro konstrukci nového kmene, který se vyznačuje produkcí L-lysinu na jednoduchých kultivačních médiích s vysokou konverzí uhlíkatého zdroje.

Description

Vynález se týká nového produkčního kmene Corynebaoterium glutamioum CCM 4024, který produkuje L-lysin na syntetických a semisyntetických fermentačních médiích. Kultivace probíhá v tekutých živných médiích, které obsahuji jako hlavni zdroj uhlíku sacharózu nebo jiné sacharidy, jako zdroj dusíku amonné soli, kukuřičný extrakt, vitamíny, např. biotin a minerální soli. Fermentační média neobsahují komplexní zdroje dusíku, jako jsou hydrolyzáty bílkovinných substrátů, např. arašídové mouky apod.

Podstatou vynálezu je nový produkční kmen Corynebaoterium glutamicum CCM 4024 vyznačující se produkcí L-lysinu s vysokou konverzí uhlíkatého zdroje na syntetických a semisyntetických fermentačních médiích. Kmen je uložen v Československé sbírce mikroorganismů Univerzity J. E. Purkyně, Tř. Obránců míru 10, Brno.

Výhodou výše uvedeného produkčního kmene je dále vysoká koverze uhlíkatého zdroje, která se pohybuje mezi 32 až 38 %. Produkční kmen Corynebaoterium glutamicum CCM 4024 produkuje L-lysin na jednoduchých fermantačních médiích bez komplexních zdrojů dusíku; tím se zlevňuje a ekonomizuje proces přípravy L-lyzinu. Nový kmen byl získán mutagenezi a selekcí z původního kmene Corynebaoterium glutamicum ATCC 13 032 a vyznačuje se rezistencí na analogy aminokyselin, některá antibiotika a analogy biologicky aktivních látek. Ke šlechtění nového produkčního kmene bylo použito hybridizačni techniky fuse protoplastů mutantnich kmenů Corynebacterium glutamicum, jak ukazuje následující schéma:

1020-60^·

1.

ATCC 13 032

AEC _4JAEC^rHXL^r

100AEC AHV str _t9AEC^rHXL^rrif^r fuse /

_CCM 4024 (VKPM B-3494)

AEC^rHXL^rAHV^rri f^rstr^r

Genetické znaky nového produkčního kmene Corynebaoterium glutamicum CCM 4024 jsou:

AEC^rHXL^rAHV^rrif^rstr^r. Použité zkratky: AEC = 2-S-aminoethyl-L-oystein, HXL = L-lysinhydroxamát, AHV = 2-aminohydroxyvalerová kyselina, rif = rifamycin, str = streptomycin, r= rezistence.

Morfologické a kultivační vlastnosti produkčního kmene Corynebaoterium glutamicum CCM 4024 jsou charakterizovány takto: bakteriální buňky jsou oválné s rozměry 0,1 až 1,0 pm x 1,2 až 1,5 jim, nesporulující, nepohyblivé grampozitívni bakterie. Při kultivaci při 30 °C na masopeptonovém agaru mají kolonie průměr 3 až 4 mm, kolonie jsou vypouklé s rovným okrajem, krémové barvy s těstovitou konzistencí. Kmen roste optimálně za aerobních podmínek při pH 7,0 a teplotě 30 °C.

Kmen Corynebaoterium glutamicum CCM 4024 dobře utilisuje glukózu, sacharózu, maltózu, manózu, fruktózu a rhamnózu; dále sorbit a kyselinu octovou. Slabě roste na arabinóze, xylóze

I a etanolu. Z dusíkatých zdrojů jsou dobře utilizovány amonné soli a močovina; želatina není hydrolyzována. Podle vynálezu se L-lysin připravuje s kmenem Corynebaoterium glutamicum CCM 4024 následujícím způsobem.

Přikladl

Kmenem Corynebaoterium glutamioum CCM 4024 (VKPM B-3494) se zaočkují 500 ml varné baňky, které obsahují 50 ml inokulačního média o tomto složení: sacharóza těch. 30 g, octan sodný kryst. 20 g, kukuřičný extrakt (60 % hmot.) 30 g, voda dest. ad 1 000 ml; pH média 6,8 až 7,0. Baňky se dále kultivují na rotační třepačce (frekvence 220 ot.min ^χ) při teplotě 28 až 30 °C po dobu 18 až 24 hodin. Vyrostlou kulturou se v množství 10 % obj. zaočkují 500 ml varné baňky, které obsahují 20 ml fermentačního média o tomto složení: sacharóza těch,

100 g, biotin 50 yg/1, síran amonný kryst. 25 g, hydrogenfosforečnan draselný 1 g, síran hořečnatý kryst. 0,1 g, uhličitan vápenatý mletý 35 g, voda dest. ad 1 000 ml; pH média 6,8 až 7,0; kultivace dále probíhá za aerobních podmínek na rotační třepačce při teplotě 28 až 30° Celsia a pH média se udržuje v rozmez! 6,8 až 7,0 pomocí 10 % obj. roztoku hydroxidu amonného. Po 96 hodinách kultivace je u kmene Corynebacterium glutamicum CCM 4024 dosahováno produkce 38 g L-lysinu/l média.

P ř í k 1 a d 2

Kmenem Corynebacterium glutamicum CCM 4024 se zaočkuje ínokulační médium jak je uvedeno v přikladu 1. Jako fermentačního média se použije tekutá půda jak popisuje příklad 1 s tím, že biotin je v médiu nahrazen kukuřičným extraktem (60 % hmot. sušiny) v množství 5 g/1 média Kultivace dále probíhá jak popisuje příklad 1. Po 96 hodinách kultivace je u kmene Corynebacterium glutamicum CCM 4024 dosahováno produkce 32 g L-lysinu/l média.

Claims (1)

1. Kmen mikroorganismu Corynebacterium glutamicum CCM 4024 produkující L-lysin s vysokou konverzí uhlíkatého zdroje na syntetických a semisyntetických fermentačních médiích.