CS263954B1 - Způsob výroby 9-(S)- nebo 9X(RS)-(3-hydroxy-2-íosfonylmethoxypropyl)- adeninu - Google Patents
Způsob výroby 9-(S)- nebo 9X(RS)-(3-hydroxy-2-íosfonylmethoxypropyl)- adeninu Download PDFInfo
- Publication number
- CS263954B1 CS263954B1 CS865468A CS546886A CS263954B1 CS 263954 B1 CS263954 B1 CS 263954B1 CS 865468 A CS865468 A CS 865468A CS 546886 A CS546886 A CS 546886A CS 263954 B1 CS263954 B1 CS 263954B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- formula
- labeled
- radionuclide
- adenine
- treated
- Prior art date
Links
Abstract
Řeší se způsob výroby protivirového preparátu 9-(S)- nebo 9-(RS)-(3-hydroxy-2- -fosfonylmethoxypropyl jadeninu značeného radionuklidem uhlíku 14C. Postup je založen na reakci chráněného 9-JS)- nebo 9-(RS)- - (2,3-dihydroxypropylJadeninu značeného radionuklidem uhlíku s chlormethanfosfonyldichloridem, isomerizaci vzniklé směsi v kyselém prostředí a působení vodných alkálií na získaný 3‘-0-chlormethanfosfonylester 9-(S)- nebo 9-(RS)-(2,3-dihydroxypropyljadeninu značený radionuklidem uhlíku. Předmětný produkt je zapotřebí pro farmakólogické a biologické studie nového léčiva.
Description
Předmětem vynálezu je způsob výroby 9-(S]- nebo 9-(RS)-(3-hydroxy-2-fosfonylmethoxypropyl) adeninu značeného radionuklidem uhlíku 14C.
9- (S) - (3-hydroxy-2-fosf onylmethoxypropyljadenin (HPMPA) je analog nukleotidu, který má význačný protivirový účinek proti DNA virům (herpesviry, adenoviry, poxviry) (čs. autorské osvědčení č. 263 952). Téměř stejný účinek má i racemát této látky. Pro farmakoldglcké zkoušky tohoto preparátu je nezbytně zapotřebí výroba HPMPA značeného řádionuklidy, který umožňuje sledování jeho proměn v organismu i jeho hladiny ve tkáních. Takový preparát dosud nebyl znám.
Příprava značených sloučenin vychází z malé hmotnosti reakčních komponent, vyžaduje malý počet jednoduchých operací, dává vysoký výtěžek postupu a umožňuje snadné čištění produktu. Tyto podmínky, jakož i přístupnost výchozích sloučenin značených řádionuklidy, značně omezují volbu možných syntetických postupů. Jejich splnění je nejblíže postup podle čs. autorského osvědčení č. 233 665, který využívá jako výchozí suroviny 9-(S)- nebo 9-(RS)-(2,3-dihydroxypropyl)adeninu; reakcí této látky s hydrolyzovaným chlormethylfosfonylchloridem a následující alkalickou cyklizací se získá HPMPA spolu s jeho isomerem.
Použití tohoto principu pro látky značené řádionuklidy tvoří podstatu předmětného vynálezu způsobu výroby 9-(S)- nebo 9- (RS) - (3-hydr oxy-2-fosf onylmethoxypr opyl) adeninu vzorce I
(!) značeného radionuklidem uhlíku 14C, spočívající v tom, že se 9-(S)- nebo 9-(RS)-(2,3-dihydroxypropyl)adenin vzorce II
ch2ch<h2oh
OH (II) značený radionuklidem uhlíku 14C uvede do reakce s dimethoxymethyldimethylamlnem vzorce III (CH3)2N—CH(OCH3)2 (III) v dimethylformamidu při teplotě 20 až 50 stupňů Celsia, po odpaření ve vakuu se zpracuje neutrálním pufrem, s výhodou směsí pyridinu a vody, vysuší a uvede do reakce s roztokem pěti až čtyřiceti molárních ekvivalentů, vztaženo na látku vzorce V, chlormethanfosfonyldichloridu vzorce IV
CICH2POCI2 (IV) rozpuštěného v pyridinu, obsahujícím množství vody ekvivalentní látce IV,a to při teplotách 0 až 50 °C. Směs se zpracuje vodným pufrem, odpaří ve vakuu a ponechá reagovat s vodným roztokem amoniaku o obsahu 5 až 25 % hmot., při teplotách 0 až 40 0,C. Po· odpaření se směs rozpustí v 1 až 10 molů . V-1 kyselině chlorovodíkové, udržuje při teplotě 40 až 80 C,C, neutralizuje hydroxidem alkalickým a vzniklý 3‘-0-chlormethylfosfonyl-9-(S)- nebo -9-(RS)-(2,3-dihydroxypropyljadenin vzorce V
fV) značený radionuklidem uhlíku 14C se izoluje chromatografií na hydrofobizovaném silikagelu, zahřívá ve vodných roztocích hydroxidů alkalických o výsledné koncentraci 1 mol. I-1 až 6 molů . 1_1 při teplotě 40 až 80 ’C a produkt vzorce I se po neutralizaci izoluje chromatografií na hydrofobizovaném silikagelu nebo papírovou chromatografií.
Příprava látky vzorce I je založena na principu vynálezu podle čs. autorského osvědčení č. 233 665. Výchozí látka vzorce II značená radionuklidem 14C může obsahovat radionuklid v adeninovém kruhu, alifatickém řetězci nebo obou částech molekuly současně. Látka vzorce II značená v· adeninovém kruhu může být s výhodou připravena podle čs. autorské osvědčení č. 191 689. Pro zjednodušení průběhu reakce se aminoskupina v látce vzorce II nejprve chrání tvorbou amidinu, reakcí s dimethylacetalem dimethylformamidu vzorce III. Získaný meziprodukt se bez izolace podrobí reakci s chlormethanfosfonyldichloridem vzorce IV, který byl předem hydrolyzován ekvimolárním množstvím vody (I. Rosenberg, A. Holý: Collect. Czechoslov. Chem. Commun. 50, 1 507 /1985/).
Ke zvýšení výtěžku je zapotřebí užít většího přebytku tohoto činidla (viz tabulka 1). Po neutralizaci směsi těkavým pufrem a odpaření ve vakuu se získá směs chlormethanfosfonylesterů látky vzorce II, z nichž je žádaný 3‘-isomer vzorce V zastoupen v menší míře. Tato směs se bez dalšího čištění zahřívá v roztocích minerální kyseliny, nejlépe kyseliny chlorovodíkové, přičemž dochází podle principu popsaného v čs. autorském osvědčení c. 263 953 k isomerizaci, která poskytne rovnovážnou směs s vysokým (až 80·%) obsahem látky vzorce V. V tomto stadiu se provede první izolace, přičemž se látka vzorce V značená radionuklidem 14C, s výhodou získá preparativní kapalinovou chromatografií na hydrofobizovaném (např. oktadecyl-j silikagelu. 2‘-isomer látky vzorce V se snadno oddělí a může být odpařen a znovu isomerizován kyselinou chlorovodíkovou.
Zahříváním izolované látky vzorce V s roztoky alkalických hydroxidů (sodného·, lithného, draselného] ve vodě vznikne podle principu uvedeného· v čs. autorském osvědčení č. 233 665 látka vzorce I jako jediný produkt. K její izolaci může být použita buď opět preparativní kapalinová chromatografie, nebo chromatografie papírová. Získaná látka vzorce I má vysokou radiochemickou čistotu.
Postup podle vynálezu je efektivní vzhledem k využití výchozí značené suroviny vzorce II, lze ho snadno provést v malém měřítku a s jedinou izolací meziproduktu, což je zvláště výhodné pro práci s radioaktivním materiálem. Není omezen na práci s radionuklidem 14C; podle stejného po-stupu je možné provést i výrobu látky vzorce I značené např. radionuklidem 3H.
V dalším je způsob výroby látky vzorce I značené radionuklidem 14C osvětlen na příkladech provedení, aniž se tím jakkoliv omezuje.
Příklad 1
V zábrusové zkumavce s ku’atým dnem se odpaří roztok 30 MiBq 5 μΐηοΐύ) [U-14C-adenin] -9- (S)- (2,3-dihydroxypropyl) adeninu a vysuší odpařením se suchým pyridinem (3 X 0,5 ml) při 30 0C/13 Pa. K odparku se přidá 0,2 ml dimethylformamidu a 0,1 ml dimethylacetalu dimethylformamidu, směs se ponechá stát 16 h v uzavřené zkumavce, odpaří při 30 °C/13 Pa a kodestiluje s 0,2 ml dimethylformamidu za· týchž podmínek. Přidá se 0,5 ml 50% vodného pyridinu, předem nasyceného oxidem uhličitým a po 20 min se znovu odpaří ve vakuu. Odparek se vysuší kodestilací s pyridinem (3 X 0,5 ml) a přidá se 150 μ\ supernatantu získaného odstředěním směsi 200 μΐ pyridinu, 20 μΐ (200 ,«molů) chlormethanfosfonyldichloridu •a 200 μ\ 1 mol. I-1 roztoku vody v pyridinu, která byla třepána 20 min při 0 °C.
Směs se ponechá stát v uzavřené zkumavce 2 h při 24 °C, přidá se 150 μΐ 2 moly. I“1 triethylamoniumhydrogenkartonátu, po 30 minutách se odpaří při 30 °C/15 Pa a odparek v 0,5 ml 5% vodného· amoniaku se ponechá stát přes noc při teplotě místnosti. Odpaří se ve vakuu a vnese do 0,2 ml 1 mol. h1 kyseliny chlorovodíkové. Tento roztok se zahřívá 24 h na 37 °C, přidá se 50 μΐ triethylaminu a 100 μΐ 2 moly. h'1 triethyl•amoniumhydrogenkarbonátu. Tento roztok se aplikuje na kolonu 8 X 500 mm oktadecyl-silikagelu (10 μ) promyje se 75 ml 0,05 molu. I“1 triethylamoniumhydrogenkarbonátu a látka vzorce V se postupně eluuje 10% methanolem v základním pufru (eluční objem 124 až 134 ml) a odpaří se dosucha ve vakuu.
Odparek v 0,2 ml 1 mol. to1 hydroxidu sodného se zahřívá 11 h na 60 °C, přidá se 50 ,«1 5,5 molu . I1 kyseliny chlorovodíkové, 100 μΐ 2 moly. 1_1 triethylamoniumhydrogenkaribonátu, pH 7,5, a směs se znovu aplikuje na kolonu oktadecyl-silikagelu (viz výše). Elucí základním pufrem se vymyjí nečistoty a soli, další elucí 2,5% methanolem v základním pufru se získá produkt vzorce I, jehož eluát se odpaří při 30 QC/13 Pa a kodestiluje 2 X 0,5 ml vody za týchž podmínek. Získá se 15,0 MBq (50·%) látky (Sj-I s radiochemickou čistotou > 99 %.
Frakce isomeru látky V, který se eluoval objemem 117 až 124 ml, se zpracují obdobně. Získá se 9,0 MBq (30%) 3‘-isomeru látky vzorce I o radtochemické čistotě > 99·%. Příklad 2
Reakce se provede s 10,5 MBq (5 μπιοίύ) [ l‘,3‘-14C ] -9- [ RS) - (2,3-dihydroxypropyl) adeninu za podmínek uvedených v příkladu 1. Preparativní kapalinovou chromatografií se získá 5,8-8 MBq (56%) látky (RS)-I (a 2,42 MBq (23%) jejího isomeru j o radiochemické čistotě převyšující 99 %.
Tabulka 1
Vliv přebytku činidla vzorce IV na výtěžek látky vzorce V a jejího 2‘-iso.meru po 2 h reakce při 24 °C
| Koncentrace látky II (mmol. I-1 j | Poměr látek IV : II | Výtěžek % |
| 100 | 4,9 | 10,7 |
| 67 | 7,1 | 33,5 |
| 50 | 8,5 | 91,0 |
| 33 | 14,3 | 94,9 |
VYNALEZU
Claims (1)
- PŘEDMĚT1. Způsob výroby 9-(Sj- nebo· 9-(RS)-(3-hydroxy-2-fosfoinylmethoxypropyl)adeninu vzorce I dl značeného radionuklidem uhlíku 14C, vyznačující se tím, že se 9-(Sj- nebo 9-(RS]-(2,3-dihydroxypropyljadenin vzorce II pyridinu a vody, vysuší a uvede do reakce s roztokem pěti- až čtyřiceti molárních ekvivalentů, vztaženo na látku vzorce V, chlormethanfosfonyldichlorldu vzorce IVCICH2POCI2 (IVj rozpuštěného' v pyridinu, obsahujícím množství vody ekvivalentní látce IV,a to při teplotách 0 až 50 °C, směs se zpracuje vodným pufrem, odpaří ve vakuu a ponechá reagovat s vodným roztokem amoniaku o obsahu 5 až 25 % hmot., při teplotách 0 až 40 °C, po odpaření se směs rozpustí v 1 až 10 mlů . I-1 kyselině chlorovodíkové, udržuje při teplotě 40 až 80 °C, neutralizuje hydroxidem alkalickým a vzniklý 3‘-0-Chlormethýlfošfonyl-9-(Sj- nebo -9-(RSj-(2,3-dihydroxypropyljadenin vzorce V značený radionuklidem uhlíku 14C uvede do reakce s dimethoxymethyldimethylaminem vzorce III (CH3)2N—CH(OCH3)2 (III) v dimethylformamidu při teplotě 20 až 50 stupňů Celsia, po Ďdpaření ve vakuu se zpracuje neutrálním pufrem, s výhodou směsí značený radionuklidem uhlíku 14C se izoluje chromatografií ,na hydrofobizovaném silikagelu, zahřívá ve vodných roztocích hydroxidů alkalických o výsledné koncentraci 1 až 6 molů . 1_1 při teplotě 40 až 80 °C a produkt vzorce I se po neutralizaci izoluje chromatografií na hydrofobizovaném silikagelu nebo papírovou chromatografií.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS865468A CS263954B1 (cs) | 1986-07-18 | 1986-07-18 | Způsob výroby 9-(S)- nebo 9X(RS)-(3-hydroxy-2-íosfonylmethoxypropyl)- adeninu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS865468A CS263954B1 (cs) | 1986-07-18 | 1986-07-18 | Způsob výroby 9-(S)- nebo 9X(RS)-(3-hydroxy-2-íosfonylmethoxypropyl)- adeninu |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS546886A1 CS546886A1 (en) | 1988-04-15 |
| CS263954B1 true CS263954B1 (cs) | 1989-05-12 |
Family
ID=5399625
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS865468A CS263954B1 (cs) | 1986-07-18 | 1986-07-18 | Způsob výroby 9-(S)- nebo 9X(RS)-(3-hydroxy-2-íosfonylmethoxypropyl)- adeninu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS263954B1 (cs) |
-
1986
- 1986-07-18 CS CS865468A patent/CS263954B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS546886A1 (en) | 1988-04-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lijinsky et al. | Mechanism of alkylation of nucleic acids by nitrosodimethylamine | |
| Smith et al. | Cyclic Phosphates. IV. 1 Ribonucleoside-3', 5'Cyclic Phosphates. A General Method of Synthesis and Some Properties | |
| Kasai et al. | Structure of wye (Yt base) and wyosine (Yt) from Torulopsis utilis phenylalanine transfer ribonucleic acid | |
| CS263951B1 (en) | 9-(phosponylmethoxyalkyl)adenines and method of their preparation | |
| Holý et al. | Synthesis of isomeric and enantiomeric O-phosphonylmethyl derivatives of 9-(2, 3-dihydroxypropyl) adenine | |
| CS233665B1 (en) | Processing of isomere o-phosphonylmethylderivative of anantiomere racemic vicinal diene | |
| Coward et al. | Analogs of S-adenosylhomocysteine as potential inhibitors of biological transmethylation. Inhibition of several methylases by S-tubercidinylhomocysteine | |
| Jenny et al. | Synthesis and physical characterization of bis 3′→ 5′ cyclic dinucleotides (NpNp): RNA polymerase inhibitors | |
| Meyer et al. | Synthesis and biological activity of several 6-substituted 9-β-D-ribofuranosylpurine 3', 5'-cyclic phosphates | |
| Chladek et al. | Nucleophilic reactions of some nucleoside phosphorothioates | |
| Ikehara et al. | Studies of Nucleosides and Nucleotides. XXIV. 1 Purine Cyclonucleosides. I. 8, 2'-Cyclonucleoside Derived from 2-Chloro-8-mercapto-9-β-D-xylofuranosyladenine2 | |
| Delia et al. | Cytosine 3-N-Oxide and Its Rearrangement on Acetylation1 | |
| Forrest et al. | 642. Nucleotides. Part V. Riboflavin-5′ phosphate | |
| Lepage et al. | The Plant Sulfolipid. II. Isolation and Properties of Sulfoglycosyl Glycerol1 | |
| LePage | The metabolism of α-2′-deoxythioguanosine in murine tumor cells | |
| Brown et al. | 12. Nucleotides. Part IX. The synthesis of adenylic acids a and b from 5′-trityl adenosine | |
| Ikehara et al. | Studies of Nucleosides and Nucleotides. XXIII. A Versatile Method for Replacement of 6-Hydroxyl Group of Purine Nucleoside. | |
| Butkus et al. | Synthesis and physical characterization of DNA fragments containing N4-methylcytosine and 5-methylcytosine | |
| CS263954B1 (cs) | Způsob výroby 9-(S)- nebo 9X(RS)-(3-hydroxy-2-íosfonylmethoxypropyl)- adeninu | |
| Baddiley et al. | 879. Cytidine diphosphate ribitol from Lactobacillus arabinosus | |
| US2970139A (en) | 5-fluorouracil nucleotides and preparation thereof | |
| Liboska et al. | Carbocyclic phosphonate-based nucleotide analogs related to PMEA. I. Racemic trans-configured derivatives | |
| Chheda | Isolation and characterization of N6-succinyladenosine from human urine | |
| Kenner et al. | Nucleotides. Part XXVIII. A synthesis of uridine-5′ triphosphate (UTP) | |
| Kenner et al. | Nucleotides. Part XXIX. Synthetic uridine-diphosphate-glucose (UDPG) |