CS263655B1

CS263655B1 - NNcttatickks established a diagnostic of important aouMctfMaloiicfcých

Info

Publication number: CS263655B1
Application number: CS867654A
Authority: CS
Inventors: Eva Rndr Hrboticka; Vlastimil Ing Svoboda
Original assignee: Hrboticka Eva; Svoboda Vlastimil
Priority date: 1986-10-22
Filing date: 1986-10-22
Publication date: 1989-04-14
Also published as: CS765486A1

Abstract

Řešením je diagnostický prostředek ke stanoveni součásti biologických kapalin, které v průběhu pomocných reakci generují peroxid vodíku. Prostředek podle vynálezu se proti známému stavu techniky vyznačuje tím, že obsahuje jako akcelerátor oxidačně kopulačnl reakce povrchově aktivní látku kationaktivního typu, například cetyltrimethylamonium chlorid, cetylpyridinium bromid, benzyldimethylhexadecylamonium chlorid nebo p-terc-oktylfenoxyethoxyethyl-dimethylbenzylamonium chlorid.The solution is a diagnostic agent for determining the components of biological fluids that generate hydrogen peroxide during auxiliary reactions. The agent according to the invention is characterized by containing, as an accelerator of the oxidative coupling reaction, a cationic surfactant, for example cetyltrimethylammonium chloride, cetylpyridinium bromide, benzyldimethylhexadecylammonium chloride or p-tert-octylphenoxyethoxyethyl-dimethylbenzylammonium chloride.

Description

Předmětem vynálezu je diagnostický prostředek ke stanoveni diagnostických součástí biologických kapalin, které v průběhu vhodných pomocných reakcí generují peroxid vodíku a jejichž stanovení je založeno na principu barvotvorné oxidační kopulace.The subject of the invention is a diagnostic agent for determining diagnostic components of biological fluids which generate hydrogen peroxide during suitable auxiliary reactions and whose determination is based on the principle of color-forming oxidative coupling.

Při stanovení řady diagnosticky významných součástí biologických kapalin, jako je např. krev, sérum nebo moč, se v klinické biochemii používá specifických enzymových reakcí, pomocí nichž se stanovovaná látka - analyt oxiduje vzduěným kyslíkem za současného vzniku peroxidu vodíku. Typickým příkladem je stanovení glukosy, která se za přítomnosti enzymu glukosaoxidasy oxiduje na kyselinu glukonovou případně glukoňolakton a ekvivalentní množství peroxidu vodíku. Obdobně lze však stanovit i kyselinu močovou, cholesterol nebo tzv. triglyceridy, použijí-li se specifické oxidoreduktasy, urikasa, cholesteroloxldasa nebo glycerofosfátoxidasa. Analyticky velmi obtížné stanovení původních složitých analytů se tak převádí na stanovení poměrně velmi jednoduché látky - peroxidu vodíku, k jehož stanovení se využívá jeho poměrně silných oxidačních vlastností. Nejvhodnější a také k tomuto stanovení nejvíce užívaný princip je oxidace vhodného bezbarvého redox-indikátoru na barevné oxidační produkty, jejichž množství je ekvivalentní množství peroxidu vodíku a tím i množství původního analytu. Po desítky let se k tomuto účelu užívaly prakticky výlučně redox-indikátory benzidinového typu, jako například o-tolidin, o-dlanlsidin nebo 3,3,5,5-tetramethylbenzidin. Nověji byly tyto Indikátory nahrazeny systémy, sestávajícími z nukleofilní dusíkaté sloučeniny, jako například primárního aromatického nebo heterocyklického aminu nebo heterocyklického hydrazonu a kopulace schopné sloučeniny, jako jsou například fenoly, naftoly, sekundární aromatické aminy nebo látky s aktivní methylenovou skupinou. Tyto bezbarvé složky chromogennlho systému vstupují působením peroxidu vodíku za přítomnosti specifického enzymu peroxidasy do oxidačně-kopulační reakce za vzniku intenzívně zbarvených chinoniminových nebo diazamerocyaninových barviv.When determining a number of diagnostically important components of biological fluids, such as blood, serum or urine, specific enzyme reactions are used in clinical biochemistry, by means of which the substance to be determined - the analyte - is oxidized by atmospheric oxygen with the simultaneous formation of hydrogen peroxide. A typical example is the determination of glucose, which in the presence of the enzyme glucose oxidase is oxidized to gluconic acid or gluconolactone and an equivalent amount of hydrogen peroxide. However, uric acid, cholesterol or so-called triglycerides can be determined similarly if specific oxidoreductases, uricase, cholesterol oxidase or glycerophosphate oxidase are used. The analytically very difficult determination of the original complex analytes is thus converted to the determination of a relatively very simple substance - hydrogen peroxide, for the determination of which its relatively strong oxidizing properties are used. The most suitable and also the most widely used principle for this determination is the oxidation of a suitable colorless redox indicator to colored oxidation products, the amount of which is equivalent to the amount of hydrogen peroxide and thus the amount of the original analyte. For decades, redox indicators of the benzidine type, such as o-tolidine, o-dlanlsidine or 3,3,5,5-tetramethylbenzidine, were used for this purpose practically exclusively. More recently, these indicators have been replaced by systems consisting of a nucleophilic nitrogen compound, such as a primary aromatic or heterocyclic amine or heterocyclic hydrazone, and a coupling-capable compound, such as phenols, naphthols, secondary aromatic amines or substances with an active methylene group. These colorless components of the chromogenic system enter into an oxidation-coupling reaction under the action of hydrogen peroxide in the presence of a specific peroxidase enzyme to form intensely colored quinoneimine or diazamerocyanine dyes.

Uvedené oxidačně-kopulační reakce jsou v klinické biochemii užívány ke stanovení výše uvedených, diagnosticky významných součástí tělních kapalin jak v roztoku, kde se intenzita vzniklého zbarvení měří absorpciometricky, tak i na tzv. diagnostických proužcích, u nichž se vyhodnocování vybarvení vzniklého na porézním nosiči provádí bud vizuálně nebo změřením reflektance. V obou těchto případech má však uvedený chromogenní systém, jakkoliv výhodný proti dříve užívaným jednoduchým redox-indikátorům, nedostatek v tom, že oxidační kopulace probíhá i za katalytického působeni enzymu peroxidasy poměrně pomalu, neboř ke kvantitativnímu proběhnutí reakce a tím i ke vzniku maximálního zbarvení dojde teprve za delší dobu.The mentioned oxidation-coupling reactions are used in clinical biochemistry to determine the above-mentioned diagnostically significant components of body fluids both in solution, where the intensity of the resulting color is measured absorptiometrically, and on so-called diagnostic strips, where the evaluation of the color formed on a porous carrier is carried out either visually or by measuring reflectance. In both of these cases, however, the mentioned chromogenic system, although advantageous compared to the previously used simple redox indicators, has the disadvantage that the oxidative coupling occurs relatively slowly even under the catalytic action of the peroxidase enzyme, or the quantitative course of the reaction and thus the formation of maximum color only occurs after a longer period of time.

Tento nedostatek se zvlášř výrazně projevuje u zmíněných diagnostických proužků, u nichž všechna činidla potřebná pro žádoucí průběh stanovení jsou inkorpořována do porézního nosiče, například filtračního papíru. U těchto diagnostických prostředků je pak průběh oxidačně-kopulační reakce zpomalen zvláště tehdy, je-li nosič opatřen na svém povrchu semipermeabilní membránou, sloužící k zadržení krevních elementů na povrchu nosiče.This deficiency is particularly pronounced in the aforementioned diagnostic strips, in which all the reagents required for the desired course of the determination are incorporated into a porous carrier, for example filter paper. In these diagnostic devices, the course of the oxidation-coupling reaction is slowed down, especially if the carrier is provided on its surface with a semipermeable membrane, which serves to retain blood elements on the surface of the carrier.

Uvedený nedostatek odstraňuje předložené řešení prostředku ke stanoveni diagnosticky významných součástí tělních kapalin, které se pomoci specifických enzymových reakcí převádějí na oxidační rpodukty za současného vzniku ekvivalentního množství peroxidu vodíku, jehož stanovení je založeno na principu oxidační kopulace. Jeho podstata spočívá v tom, že obsahuje jako akcelerátor oxidačně-kopulační reakce povrchově aktivní látku kationaktivního typu, jako například eetyltrimethylamonium chlorid nebo p-terc-oktylfenoxyethoxyethyl-dimethylbenzylamonium chlorid.The above-mentioned deficiency is eliminated by the presented solution of a means for determining diagnostically significant components of body fluids, which are converted into oxidation products by specific enzyme reactions with the simultaneous formation of an equivalent amount of hydrogen peroxide, the determination of which is based on the principle of oxidative coupling. Its essence lies in the fact that it contains a cationic surfactant, such as ethyltrimethylammonium chloride or p-tert-octylphenoxyethoxyethyl-dimethylbenzylammonium chloride, as an accelerator of the oxidative-coupling reaction.

Prostředek dle tohoto vynálezu obsahuje vedle chromogennlho systému a výše uvedené povrchově aktivní látky kationaktivniho typu další o sobě známé a pro obdobné účely běžně užívané látky, jako jsou specifické oxidoreduktasy, peroxidasa, tlumič a popřípadě i vhodné stabilizátory.The composition according to this invention contains, in addition to the chromogenic system and the above-mentioned cationic surfactants, other substances known per se and commonly used for similar purposes, such as specific oxidoreductases, peroxidase, a buffer and, optionally, suitable stabilizers.

Specifické oxidoreduktasy slouží, jak bylo uvedeno již výše, k enzymovému převedení původního analytu nebo jeho transformovaného produktu na oxidační produkt a ekvivalentní množství peroxidu vodíku. U prostředků pro stanovení glukosy je to enzym glukosaoxidasa (EC 1.1.3.4), pro stanovení kyseliny močové pak enzym urikasa (EC 1.7.3,3). V prostředcích pro stanovení cholesterolu a triglyceridů pak enzymy cholesteroloxidasa (EC 1.1.3.6), případně L-glycerofosfát-oxidasa (EC 1.1.3). Prostředky pro stanovení cholesterolu a triglyceridů však obsahují i další pomocné enzymy, jako je cholesterolesterasa (EC 3.1.1.13), v prostředku pro stanovení triglyceridů pak celá řada specifických enzymů, katalýzujících převedení původního analytu, triglyceridů, na glycerol-3-fosfát, přístupný kopulační oxidasové reakci. Tyto složitější enzymové systémy jsou o sobě známé a v klasické biochemii používané již po řadu let.Specific oxidoreductases serve, as mentioned above, for the enzymatic conversion of the original analyte or its transformed product into an oxidation product and an equivalent amount of hydrogen peroxide. In the case of glucose determination agents, this is the enzyme glucose oxidase (EC 1.1.3.4), and for uric acid determination, the enzyme uricase (EC 1.7.3.3). In the case of cholesterol and triglyceride determination agents, this is the enzyme cholesterol oxidase (EC 1.1.3.6), or L-glycerophosphate oxidase (EC 1.1.3). However, the agents for cholesterol and triglyceride determination agents also contain other auxiliary enzymes, such as cholesterol esterase (EC 3.1.1.13), and in the case of triglyceride determination agents, a number of specific enzymes catalyzing the conversion of the original analyte, triglycerides, into glycerol-3-phosphate, which is accessible to the coupling oxidase reaction. These more complex enzyme systems are known in themselves and have been used in classical biochemistry for many years.

Jak bylo uvedeno již výše, peroxid vodíku vzniklý v průběhu popsané oxidasové reakce, oxiduje bezbarvý chromogenní systém za vzniku intenzívně zbarvených kopulačních produktů.As mentioned above, hydrogen peroxide formed during the described oxidase reaction oxidizes the colorless chromogenic system to form intensely colored coupling products.

Tato reakce však rpobíhá velmi zvolna; běžnou součásti všech obdobných prostředků ke stanoveni výše uvedených analytů - a tudíž i prostředků dle vynálezu - proto je enzym peroxidasa (EC 1.11.1.7), která je katalyzátorem oxidačního účinku peroxidu vodíku.However, this reaction proceeds very slowly; a common component of all similar means for determining the above-mentioned analytes - and therefore also of the means according to the invention - is therefore the enzyme peroxidase (EC 1.11.1.7), which is a catalyst for the oxidative effect of hydrogen peroxide.

Další nezbytnou složkou prostředku dle vynálezu je chromogenní systém, sestávající z bezbarvých komponent, schopných působením peroxidu vodíku vstoupit do oxidačně-kopulační reakce, jejímž výsledkem je intenzívně zbarvené chinoniminové nebo diazamerocyaninové barvivo Jako tzv. aktivní komponenty jsou k tomu nejčastěji užívány aromatické nebo heterocyklické aminy, zejména 4-aminoantipyrin a/nebo heterocyklické hydrazony, jako například N-methyl-2-benzthiazolinonhydrazon. Jako pasivní komponenty je pak možné použít různé fenoly nebo naftoly, sekundární nebo terciární aromatické nebo heterocyklické aminy a konečně i některé sloučeniny s aktivní methylenovou skupinou.Another necessary component of the composition according to the invention is a chromogenic system consisting of colorless components capable of entering into an oxidation-coupling reaction under the action of hydrogen peroxide, the result of which is an intensely colored quinonimine or diazamerocyanine dye. As so-called active components, aromatic or heterocyclic amines are most often used, especially 4-aminoantipyrine and/or heterocyclic hydrazones, such as N-methyl-2-benzthiazolinonehydrazone. As passive components, it is then possible to use various phenols or naphthols, secondary or tertiary aromatic or heterocyclic amines and finally some compounds with an active methylene group.

Prostředek dle vynálezu obsahuje dále tlumič, jehož úkolem je vytvářet nejen optimální pH pro konečnou oxidačně-kopulační reakci, ale i pro všechny výše popsané enzymové reakce, potřebné pro transformaci původního analytu na jeho oxidační produkt a peroxid vodíku. Pro tento účel může prostředek dle vynálezu obsahovat jakýkoliv z obecně známých a běžně užívaných tlumičů o pH 4,0 až 9,0, jako jsou například tlumiče citrátové, fosfátové, tlumiče na bázi tris-(hydroxymethyl)-aminomethanu a podobně.The composition according to the invention further comprises a buffer, the task of which is to create not only the optimal pH for the final oxidation-coupling reaction, but also for all the above-described enzymatic reactions required for the transformation of the original analyte into its oxidation product and hydrogen peroxide. For this purpose, the composition according to the invention may comprise any of the generally known and commonly used buffers with a pH of 4.0 to 9.0, such as citrate buffers, phosphate buffers, buffers based on tris-(hydroxymethyl)-aminomethane and the like.

Další účinnou složkou prostředku dle vynálezu mohou být tzv. zahuštovadla, což jsou přirozené nebo syntetické polymerní látky, jako například želatina, karaginan, alginát, polyvinylpyrrolidon, polyvinylalkohol aj. Tato zahuštovadla celý reakční systém prostředku stabilizují a mají i pozitivní vliv na zvýraznění vzniklého zabarvení.Another active ingredient of the composition according to the invention may be so-called thickeners, which are natural or synthetic polymeric substances, such as gelatin, carrageenan, alginate, polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol, etc. These thickeners stabilize the entire reaction system of the composition and also have a positive effect on enhancing the resulting color.

Další nezbytnou a hlavní součástí prostředku, přinášející vlastní technický účinek vynálezu, je kationaktivní povrchově účinná látka, jako jsou například chloridy nebo bromidy cetyltrimethylamonia, cetylpyridinia, benzyldimethyl-hexadecylamonia, dimethyloktyl-benzylamonia apod. Použití povrchově aktivních látek v analogických prostředcích jako aktivátorů konečné barvotvorné reakce je sice principielně známé již řadu let, dosud se však pro tento účel vždy používaly výlučně látky neionogenního nebo anionaktivního typu. O povrchově aktivních látkách kationaktivního typu se dosud naopak soudilo, že jsou buč zcela bez účinku nebo naopak průběh oxidačně-kopulační reakce dokonce mírně zpomalují. Důvodem pro tento závěr byla skutečnost, že kationaktivní látky kvantitativně srážejí bílkoviny vyšetřovaných biologických kapalin a tím by mohly průběh všech potřebných reakcí negativně ovlivňovat. Zjištění, že kationaktivní látky naopak průběh oxidačně-kopulační reakce značně urychlují, je proto překvapivé a je také uplatněno v prostředku dle tohoto vynálezu. Tento nový a neočekávaný účinek se zvláště silně uplatňuje u dg. proužků, jejichž povrch je pokryt semipermeabilní membránou k oddělení krevních elementů, je možné reakční dobu zkrátit až na polovinu, obsahuje-li reakční systém vhodný kationaktivní tensid, jak je zřejmé z obr. 1, na němž je ukázán rozdíl v rychlosti vývoje zbarvení u proužků pro stanovení glukosy v krvi, obsahujících dosud užívaný neionogenní nebo anionaktivní tensid (křivky A, B) a tensid kationaktivního typu dle vynálezu (křivka C).Another necessary and main component of the composition, bringing about the technical effect of the invention, is a cationic surfactant, such as chlorides or bromides of cetyltrimethylammonium, cetylpyridinium, benzyldimethylhexadecylammonium, dimethyloctylbenzylammonium, etc. The use of surfactants in analogous compositions as activators of the final color-forming reaction has been known in principle for many years, but so far exclusively substances of the non-ionic or anionic type have always been used for this purpose. On the contrary, cationic surfactants have so far been considered to be either completely ineffective or, on the contrary, to even slightly slow down the course of the oxidation-coupling reaction. The reason for this conclusion was the fact that cationic substances quantitatively precipitate proteins of the examined biological fluids and could thus negatively influence the course of all necessary reactions. The finding that cationic substances, on the contrary, significantly accelerate the course of the oxidation-coupling reaction is therefore surprising and is also applied in the composition according to the present invention. This new and unexpected effect is particularly strongly applied in dg. strips, the surface of which is covered with a semipermeable membrane for separating blood elements, it is possible to shorten the reaction time by up to half if the reaction system contains a suitable cationic surfactant, as is evident from Fig. 1, which shows the difference in the speed of color development in strips for determining glucose in blood, containing the non-ionic or anionic surfactant used so far (curves A, B) and the cationic surfactant according to the invention (curve C).

Význam tohoto vynálezu spočívá tedy v tom, že u všech dosud vyráběných proužků je nutné po odstranění krevních elementů s povrchu proužků, což je obvykle 30 až 60 s po nanesení krve, vyčkat ještě další 1 až 2 min, než může být vzniklé zabarvení vyhodnoceno. Tuto dobu je nutné velmi přesně dodržet, neboř jinak dochází ke zkresleným nálezům obsahu glukosy, lišícím se od správné hodnoty až o - 50 % relat. Naproti tomu u prostředku, obsahujícího dle vynálezu kationaktivní povrchově účinnou látku je možné výsledek vyhodnotit bu3 ihned, nebo nejdéle do 30 s po odstranění krevních elementů; navíc vzniklé zbarvení je přítomností kationativní povrchově účinné látky stabilizováno do té míry, že se dále již nemění po dobu až několika hodin nebo i dnů.The significance of this invention lies in the fact that in all strips produced so far, after removing the blood elements from the surface of the strips, which is usually 30 to 60 s after applying the blood, it is necessary to wait another 1 to 2 minutes before the resulting color can be evaluated. This time must be observed very precisely, otherwise distorted findings of the glucose content occur, differing from the correct value by up to - 50% relative. In contrast, in the case of a composition containing a cationic surfactant according to the invention, the result can be evaluated either immediately or at most within 30 s after removing the blood elements; in addition, the resulting color is stabilized by the presence of the cationic surfactant to the extent that it does not change further for a period of up to several hours or even days.

Přiklad lExample 1

Diagnostické proužky ke stanovení glukosy v kapilární krviDiagnostic strips for glucose determination in capillary blood

Filtrační papír o plošné hmotnosti 180 g/m se naimpregnuje postupně roztoky o níže uvedeném složení do nasycení tak, že se mezi každou impregnací důkladně vysuší proudem vzduchu o teplotě 50 až 55 °C. Takto připravený papír se pak rozřeže na čtverečky o rozměru 6x6 mm, které se nalepí nakonec podložky z plstické hmoty o rozměrech 6x85 mm.Filter paper with a basis weight of 180 g/m is impregnated successively with solutions of the composition given below until saturation, drying it thoroughly between each impregnation with a stream of air at a temperature of 50 to 55 °C. The paper prepared in this way is then cut into squares measuring 6x6 mm, which are finally glued to plastic pads measuring 6x85 mm.

Impregnační roztok I;Impregnation solution I;

Fosfátový tlumič o koncentraciPhosphate buffer concentration

0,2 mol/1, pH = 6,0 0.2 mol/l, pH = 6.0 30,0 30.0 ml ml želatina; 1,5% vodný roztok gelatin; 1.5% aqueous solution 20,0 20.0 ml ml glukosaoxidasa glucose oxidase 40 40 ku to peroxidasa peroxidase 5 5 kU to Impregnační roztok II: Impregnation solution II: methanol methanol 25 25 ml ml voda destilovaná distilled water 12 12 ml ml

l-(4'-sulfofenyl)-3-methyl-5-pyrazolon 1,10 g 4-aminoantipyrin 0,31 g benzyl-dimethyl-hexadecyl-amonium chlorid, 2% ethanolový roztok 17,0 ml1-(4'-sulfophenyl)-3-methyl-5-pyrazolone 1.10 g 4-aminoantipyrine 0.31 g benzyl-dimethyl-hexadecyl-ammonium chloride, 2% ethanol solution 17.0 ml

Impregnační roztok III:Impregnation solution III:

methylhydroxymethylcelulosa, 3% roztok ve směsi methanol-dichlormethan 1:1 20,0 ml ethylcelulosa, 4% roztok v toluenu 15,0 ml polyvinylacetát B 20 H, 5% roztok v ethanolu 17,5 mlmethylhydroxymethylcellulose, 3% solution in methanol-dichloromethane mixture 1:1 20.0 ml ethylcellulose, 4% solution in toluene 15.0 ml polyvinyl acetate B 20 H, 5% solution in ethanol 17.5 ml

Stanovení glukosy pomocí těchto proužků se provede tak, že se na indikační zónu proužku nanese kapka kapilární krve. Po 1 min se kapka 8 povrchu odstraní opláchnutím vodou nebo setřením pomocí navlhčené buničité vaty. Vzniklé červené zbarvení proužku se semikvantitativně vyhodnotí vizuálním porovnáním se zkusmo zhotovenou barevnou srovnávací stupnicí. Tyto. proužky, které indikují spolehlivě a přes ně obsah glukosy v kapilární krvi v koncentračním rozmezí 6 až 44 mmol/1 glukosy, je možné použít bu3 jako takové nebo v kombinaci uvedené indikační zóny sé zónou, obsahující jako chromogen například 3,3',5,5'-tetramethylbenzidin a která je vhodná ke stanovení koncentrací glukosy v rozmezí 2 až 10 mmol/1; výhodnou kombinaci obou těchto zón na jednom proužku popisuje například US patent č. 4 427 770.Glucose determination using these strips is carried out by applying a drop of capillary blood to the indicator zone of the strip. After 1 min, the drop 8 of the surface is removed by rinsing with water or wiping with a moistened cellulose cotton wool. The resulting red color of the strip is semi-quantitatively evaluated by visual comparison with a trial-made color comparison scale. These strips, which indicate reliably and through them the glucose content in capillary blood in the concentration range of 6 to 44 mmol/l of glucose, can be used either as such or in combination of the indicated indicator zone with a zone containing, for example, 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine as a chromogen and which is suitable for determining glucose concentrations in the range of 2 to 10 mmol/l; an advantageous combination of both of these zones on one strip is described, for example, in US Patent No. 4,427,770.

Příklad 2Example 2

Proužky ke stanovení kyseliny močové v séruSerum uric acid test strips

Proužky se připraví způsobem uvedeným ΐ impregnačních roztoků:The strips are prepared as indicated for impregnation solutions:

Impregnační roztok I:Impregnation solution I:

methanol voda destilovanámethanol distilled water

4-aminoantipyrin primachin-difosfát p-terc-oktylfenoxy-ethoxy-ethyl-dimethyl-benzylamonium chlorid4-aminoantipyrine primaquine diphosphate p-tert-octylphenoxy-ethoxy-ethyl-dimethyl-benzylammonium chloride

Impregnační roztok II:Impregnation solution II:

fosfátový tlumič o konc. 0,2 mol/1 a pH 7,0 urikasa hydroxypropylcelulosa, 28 vodný roztok peroxidasaphosphate buffer by conc. 0.2 mol/1 and pH 7.0 uricase hydroxypropyl cellulose, 28 aqueous solution of peroxidase

Příklad 3Example 3

Proužky ke stanovení glukosy v močiUrine glucose test strips

Proužky se připraví způsobem uvedeným v nich roztoků:The strips are prepared using the solutions indicated in them:

Impregnační roztok I:Impregnation solution I:

fosfátový tlumič pH 6,3 o konc. 0,2 mol/1 želatina; 1% vodný roztok tlukosaoxidasa peroxidasaphosphate buffer pH 6.3 by conc. 0.2 mol/1 gelatin; 1% aqueous solution of glucose oxidase peroxidase

Impregnační roztok II:Impregnation solution II:

methanol voda destilovaná l-fenyl-3-methyl-5-pyryzolonmethanol distilled water l-phenyl-3-methyl-5-pyrizolone

4-aminoantipyrin tartrazin o-dianisidin4-aminoantipyrine tartrazine o-dianisidine

1-(4'-sulfofenyl)3,4-dimethyl-5-pyrazolon cetyltrimethylamonium bromid příkladu 1, avšak s použitím následujících1-(4'-sulfophenyl)3,4-dimethyl-5-pyrazolone cetyltrimethylammonium bromide of Example 1, but using the following

10,0 ml 10,0 ml 0,6 g 1,3 g10.0 ml 10.0 ml 0.6 g 1.3 g

0,15 g0.15g

20,0 ml 1,6 U 10,0 ml 3,0 0 příkladu 1, avšak s použitím těchto impregnač36,0 ml 20,0 ml 39,6 kU20.0 ml 1.6 U 10.0 ml 3.0 0 of example 1, but using these impregnations 36.0 ml 20.0 ml 39.6 kU

6,0 kU6.0 kU

30,0 ml 16,0 ml 0,9 g 0,2 g30.0 ml 16.0 ml 0.9 g 0.2 g

0,02 g 0,80 g0.02g 0.80g

0,40 g 0,40 g0.40g 0.40g

Tyto proužky indikuji vznikem světle červeného až temně červenohnědého zbarvení přitom nost glukosy v moči v rozmezí 2 až 170 mmol/1, přičemž koncentraci glukosy ve vyšetřovaném vzorku lze s poměrně vysokou spolehlivostí stanovit vizuálním porovnáním zbarvení proužku se zkusmo zhotovenou srovnávací stupnicí.These strips indicate the presence of glucose in the urine in the range of 2 to 170 mmol/l by developing a light red to dark red-brown color, while the glucose concentration in the examined sample can be determined with relatively high reliability by visually comparing the color of the strip with a trial-made comparison scale.

Claims

P ft E D Μ 6 T OF THE INVENTION

Means for the determination of diagnostically important components of biological fluids which are converted to their oxidation products by specific enzymatic reactions, producing an equivalent amount of hydrogen peroxide, the determination of which is based on the oxidation-coupling reaction principle, characterized in that it contains an oxidation-coupling reaction a cationic type surfactant such as cetyltrimethylammonium chloride, cetylpyridinium bromide, benzyldimethylhexadecylammonium chloride or p-tert-octylphenoxyethoxyethyl-dimethylbenzylammonium chloride.